Submitted by Gabriela Torres Rebech (gtr.torres@hotmail.com) on 2018-05-11T23:25:50Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Gabriela.pdf: 515150 bytes, checksum: 8dcf7e5ca4b514e5c7c8ada92438306b (MD5) / Approved for entry into archive by Ederson Vasconcelos Pereira null (edersonpereira@fmva.unesp.br) on 2018-05-14T17:16:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rebech_gt_me_araca_int.pdf: 515150 bytes, checksum: 8dcf7e5ca4b514e5c7c8ada92438306b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-14T17:16:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rebech_gt_me_araca_int.pdf: 515150 bytes, checksum: 8dcf7e5ca4b514e5c7c8ada92438306b (MD5) Previous issue date: 2018-04-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A leishmaniose é uma doença imunossupressora causada por protozoários do gênero Leishmania, tendo os cães como reservatório doméstico. A molécula Programmed Cell Death 1 (PD-1) é altamente expressa em células leucocitárias de cães com leishmaniose visceral e promove a exaustão dos linfócitos T e a supressão da secreção de citocinas. Como o PD-1 tem função supressiva em relação à imunidade celular, avaliamos o efeito de anticorpos bloqueadores de PD-1 na produção de NO, ROS, interleucina 17 (IL-17) e na carga parasitária em cultura de leucócitos esplênicos de cães naturalmente infectados. In vitro, o bloqueio de PD-1 promoveu aumento dos níveis de NO intracelular e reduziu os de IL-17 no sobrenadante da cultura, além de reduzir a carga parasitária, más não alterou os níveis de ROS. Concluímos que a PD-1 participa na regulação da resposta imune e que o anticorpo bloqueador é efetivo na restauração da atividade microbicida do hospedeiro. Isso pode ser investigado em estudos imuno-terapêuticos no futuro. / Leishmaniasis is an immunosuppressive disease caused by protozoa of the genus Leishmania for which dogs are the domestic reservoir. The programmed cell death 1 molecule (PD-1) is highly expressed in leukocyte cells of dogs with visceral leishmaniasis, and it promotes T lymphocyte exhaustion and suppression of cytokine secretion. Because PD-1 has a suppressive function regarding cell immunity, we evaluated the effect of PD-1 blocking antibodies on NO, ROS and interleukin 17 (IL-17) production and on parasite load in spleen leukocyte cultures from naturally infected dogs. In vitro, PD-1 blocking promoted increased levels of intracellular NO and reduced the levels of IL-17 in the culture supernatant, in addition to reducing the parasite load, but do not change ROS levels. We conclude that PD-1 participates in regulation of the immune response and that the blocking antibody is effective in restoring host microbicidal activity. This can be investigated in an immuno-therapeutic study in the future.

A leishmaniose visceral é uma zoonose de grande importância para a saúde pública, com ampla distribuição geográfica e epidemiologia complexa. Apesar de diversas estratégias de controle, a doença continua se expandindo, tendo o cão como principal reservatório. Levando em consideração que análises espaciais são úteis para compreender melhor a dinâmica da doença, avaliar fatores de risco e complementar os programas de prevenção e controle, o presente estudo teve como objetivo caracterizar a distribuição da leishmaniose visceral canina e relacionar sua dinâmica com características ou feições espaciais no município de Panorama (SP). A partir de dados secundários coletados em um inquérito sorológico entre agosto de 2012 e janeiro de 2013, 986 cães foram classificados como positivos e negativos de acordo com o protocolo oficial do Ministério da Saúde. Posteriormente uma análise espacial foi conduzida, compreendendo desde a visualização dos dados até a elaboração de um mapa de risco relativo, passando por análises de cluster global (função K) e local (varredura espacial). Para avaliar uma possível relação entre o cluster detectado com a vegetação na área de estudo, calculou-se o Índice de Vegetação por Diferença Normalizada (NDVI). A prevalência da doença encontrada na população de cães estudada foi de 20,3% (200/986). A visualização espacial demonstrou que tanto animais positivos quanto negativos estavam distribuídos por toda a área de estudo. O mapa de intensidade dos animais positivos apontou duas localidades de possíveis clusters, quando comparado ao mapa de intensidade dos animais negativos. As análises de cluster confirmaram a presença de um aglomerado e um cluster foi detectado na região central do município, com um risco relativo de 2,63 (p=0,01). A variação espacial do risco relativo na área de estudo foi mapeada e também identificou a mesma região como área significativa de alto risco (p<0,05). Não foram observadas diferenças no padrão de vegetação comparando as áreas interna e externa ao cluster. Sendo assim, novos estudos devem ser realizados com o intuito de compreender outros fatores de risco que possam ter levado à ocorrência do cluster descrito. A prevalência, a localização do cluster espacial e o mapa de risco relativo fornecem subsídios para direcionamento de esforços do Setor de Vigilância Epidemiológica de Panorama para áreas de alto risco, o que pode poupar recursos e aperfeiçoar o controle da leishmaniose visceral no município. / Visceral leishmaniasis is a zoonosis of great importance for public health, having worldwide distribution and complex epidemiology. Despite several control strategies, the disease continues to expand, being dogs its main reservoir. Considering that spatial analysis is useful to better understand the disease dynamics, to evaluate risk factors and to complement prevention and control programs, this study aimed to characterize the distribution of canine visceral leishmaniasis and relate it to spatial features in Panorama, an endemic city of São Paulo State, Brazil. Using secondary data collected in a serological survey between August 2012 and January 2013, 986 dogs were classified as positive and negative for leishmaniasis. Later, a spatial analysis was conducted comprising from data visualization to the elaboration of a relative risk map, undergoing global (K function) and local cluster analysis (spatial scan). To evaluate a possible relation between the detected cluster and vegetation in the study area, the Normalized Difference Vegetation Index (NDVI) was calculated. The prevalence in the studied dog population was 20.3% (200/986). Spatial visualization showed that both positive and negative animals were distributed throughout the study area. Intensity map of positive animals showed two sites of possible clusters compared to the intensity map of negative animals. A cluster was detected in a central region of the city, with a relative risk of 2.63 (p=0,01). The spatial variation of the relative risk in the study area was mapped and the same region was identified as a significant high risk area (p<0.05). No differences were observed in the vegetation pattern comparing the cluster internal and external areas. Therefore, further studies should be conducted in order to understand other risk factors that may have led to the occurrence of the described cluster. The prevalence data, the cluster location and the relative risk map provide subsidies for the efforts of the city epidemiological surveillance department towards high risk areas. This can save resources and improve control of visceral leishmaniasis in the study area.

A leishmaniose visceral é uma zoonose de grande importância para a saúde pública, com ampla distribuição geográfica e epidemiologia complexa. Apesar de diversas estratégias de controle, a doença continua se expandindo, tendo o cão como principal reservatório. Levando em consideração que análises espaciais são úteis para compreender melhor a dinâmica da doença, avaliar fatores de risco e complementar os programas de prevenção e controle, o presente estudo teve como objetivo caracterizar a distribuição da leishmaniose visceral canina e relacionar sua dinâmica com características ou feições espaciais no município de Panorama (SP). A partir de dados secundários coletados em um inquérito sorológico entre agosto de 2012 e janeiro de 2013, 986 cães foram classificados como positivos e negativos de acordo com o protocolo oficial do Ministério da Saúde. Posteriormente uma análise espacial foi conduzida, compreendendo desde a visualização dos dados até a elaboração de um mapa de risco relativo, passando por análises de cluster global (função K) e local (varredura espacial). Para avaliar uma possível relação entre o cluster detectado com a vegetação na área de estudo, calculou-se o Índice de Vegetação por Diferença Normalizada (NDVI). A prevalência da doença encontrada na população de cães estudada foi de 20,3% (200/986). A visualização espacial demonstrou que tanto animais positivos quanto negativos estavam distribuídos por toda a área de estudo. O mapa de intensidade dos animais positivos apontou duas localidades de possíveis clusters, quando comparado ao mapa de intensidade dos animais negativos. As análises de cluster confirmaram a presença de um aglomerado e um cluster foi detectado na região central do município, com um risco relativo de 2,63 (p=0,01). A variação espacial do risco relativo na área de estudo foi mapeada e também identificou a mesma região como área significativa de alto risco (p<0,05). Não foram observadas diferenças no padrão de vegetação comparando as áreas interna e externa ao cluster. Sendo assim, novos estudos devem ser realizados com o intuito de compreender outros fatores de risco que possam ter levado à ocorrência do cluster descrito. A prevalência, a localização do cluster espacial e o mapa de risco relativo fornecem subsídios para direcionamento de esforços do Setor de Vigilância Epidemiológica de Panorama para áreas de alto risco, o que pode poupar recursos e aperfeiçoar o controle da leishmaniose visceral no município. / Visceral leishmaniasis is a zoonosis of great importance for public health, having worldwide distribution and complex epidemiology. Despite several control strategies, the disease continues to expand, being dogs its main reservoir. Considering that spatial analysis is useful to better understand the disease dynamics, to evaluate risk factors and to complement prevention and control programs, this study aimed to characterize the distribution of canine visceral leishmaniasis and relate it to spatial features in Panorama, an endemic city of São Paulo State, Brazil. Using secondary data collected in a serological survey between August 2012 and January 2013, 986 dogs were classified as positive and negative for leishmaniasis. Later, a spatial analysis was conducted comprising from data visualization to the elaboration of a relative risk map, undergoing global (K function) and local cluster analysis (spatial scan). To evaluate a possible relation between the detected cluster and vegetation in the study area, the Normalized Difference Vegetation Index (NDVI) was calculated. The prevalence in the studied dog population was 20.3% (200/986). Spatial visualization showed that both positive and negative animals were distributed throughout the study area. Intensity map of positive animals showed two sites of possible clusters compared to the intensity map of negative animals. A cluster was detected in a central region of the city, with a relative risk of 2.63 (p=0,01). The spatial variation of the relative risk in the study area was mapped and the same region was identified as a significant high risk area (p<0.05). No differences were observed in the vegetation pattern comparing the cluster internal and external areas. Therefore, further studies should be conducted in order to understand other risk factors that may have led to the occurrence of the described cluster. The prevalence data, the cluster location and the relative risk map provide subsidies for the efforts of the city epidemiological surveillance department towards high risk areas. This can save resources and improve control of visceral leishmaniasis in the study area.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-05-18T10:58:40Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese - Lourival de Almeida Silva - 2015.pdf: 2573495 bytes, checksum: 0eee1e3d91463a3f757ecdc4fe7126ce (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-05-18T11:02:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese - Lourival de Almeida Silva - 2015.pdf: 2573495 bytes, checksum: 0eee1e3d91463a3f757ecdc4fe7126ce (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-18T11:02:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese - Lourival de Almeida Silva - 2015.pdf: 2573495 bytes, checksum: 0eee1e3d91463a3f757ecdc4fe7126ce (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Leishmaniasis is a neglected tropical disease responsible for physical, economic and social damages. Even though malaria is not classified as a neglected tropical disease, is responsible for high morbidity and mortality, especially in African countries. Current treatments for both diseases face several drawbacks, including the evolution of drugresistant parasites, the high cost of major drugs and the high toxicity of others. For these reasons, there is an urgent need to develop new drugs that minimize these downsides and, consequently, help eradicate these diseases. To overcome these difficulties, both academics and pharmaceutical companies are increasingly employing the so-called “drug repositioning strategy”. Drug repositioning aims to find new applications for drugs approved for other indications, and has proven valuable for decreasing research costs as well as to decrease the time required to market the "new" drug. In the present study, we used bioinformatics to identify and analyze molecular targets of the energy metabolism of Leishmania spp and of the P. falciparum apicoplast. The energy metabolism of Leishmania and the apicoplast metabolism have various enzymes that can be targeted by specific drugs, leading to lower toxicity and more promising therapies for humans. Using the TDR Targets database, we were able to identify 94 genes and 93 Leishmania energy metabolism targets. We identified 44 positive targets in these databases, and for 11 of these targets we found drugs already approved for use in humans. We used a similar strategy to identify antimalarial drugs that acted specifically against the apicoplast metabolism. The GeneDB database of the P. falciparum genome was used to compile a list of 600 proteins with apicoplast signal peptides. Each of these proteins was treated as a potential drug target and its predicted sequence was used to interrogate three different open access databases (DB TTD, DrugBank and STITCH ). We identified many drugs with the potential to interact with 47 peptides allegedly involved in apicoplast biology in P. falciparum. Fifteen of these hypothetical targets are predicted to interact with drugs are already approved for clinical use, but were never evaluated against malaria parasites. Our results suggest that the drugs identified here show potential activity against leishmania parasite and malaria, but need experimental validation to confirm their effectiveness. / As leishmanioses são parasitoses negligenciadas responsáveis por prejuízos físicos, econômicos e sociais. A malária, embora não seja classificada como negligenciada, é responsável por altos índices de morbidade e mortalidade, principalmente nos países africanos. Ao longo dos anos, o tratamento dos infectados tem sido a forma mais eficaz de controle dessas endemias. Entretanto, os efeitos tóxicos, o alto custo dos fármacos e a resistência dos parasitos têm sido os maiores desafios enfrentados pela terapêutica das leishmanioses e da malária. Sendo assim, é urgente a necessidade de desenvolver novos fármacos que minimizem esses transtornos e contribuam para erradicação dessas parasitoses. Diante disso, laboratórios acadêmicos, governos e organizações não governamentais têm apoiado projetos voltados para o reposicionamento de fármacos aprovados com vistas a reduzir custos e tempo de produção de novos antiparasitários. No presente trabalho, utilizamos a bioinformática para identificar, buscar e analisar alvos moleculares do metabolismo energético de Leishmania spp e do apicoplasto de P. falciparum, visando o reposicionamento in silico de fármacos. Utilizando a base de dados TDR Targets, identificamos 94 genes e 93 alvos do metabolismo energético de Leishmania. Em seguida, utilizando a sequência peptídica de cada alvo, interrogamos as bases de dados Drug Bank e TTD na busca de fármacos. Nossa busca resultou em 44 alvos positivos, dos quais 11 interagiam com 15 fármacos aprovados para uso em humanos. Utilizamos estratégia semelhante para identificar fármacos antimaláricos que atuassem especificamente contra o metabolismo do apicoplasto. A base de dados GeneDB do genoma de P. falciparum foi usada para compilar uma lista de cerca de 600 proteínas com peptídeos sinais do apicoplasto. Cada uma dessas proteínas foi tratada como potencial alvo de fármaco e sua sequência prevista foi usada para interrogar três diferentes bases de dados de acesso livre (TT DB, DrugBank e STITCH ) Identificamos fármacos com potencial de interagir com 47 peptídeos supostamente envolvidos na biologia do apicoplasto do P. falciparum. Quinze desses alvos hipotéticos são previstos interagir com fármacos já aprovados para uso clínico, mas que nunca foram avaliados contra os parasitos da malária. Os nossos resultados sugerem que os fármacos aqui identificados apresentam potencial para tratamentos das leishmanioses e da malária, mas que necessitam de validação experimental para confirmar sua eficácia.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:26:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tatiane Luiza da Costa.pdf: 1394288 bytes, checksum: cde5d3e8ab1f315e5e9ac6dd8d167bd0 (MD5) Previous issue date: 2011-09-16 / Leishmaniasis is a disease of the endothelial reticulum system and is caused by protozoans form the Leishmania genus. The promastigote forms of Leishmania sp degradate carbohydrates through the glycolityc pathway and its first reaction occurs inside the glicosome. As they use as energy source glucose, aminoacids and lipids from the culture media the excreted/secreted (E/S) products may be useful as indicative of the energetic and metabolis profile of the parasite and of its biological disturbances. The biochemical analysis of Leishmania metabolism is important to upgrade the parasitological studies with techniques which are adequate to the evaluation of the biochemical profile of the host-parasite relationship towards a better understanding of how these organisms are able to survive in such diverse environments such as the digestory tract of the insect or inside vertebrate hosts tissues. The aim of this study was to perform a study of the energetic metabolism of species and isolates of Leishmania spp. Therefore the in vitro analysis of E/S metabolic products from the parasite within the culture media during logarithmic and stationary growth phases was performed through chromatographic (HPLC) methods. The spectrophometry was used to glucose measurement and the nuclear magnetic resonance (NMR) was implanted aiming the study of the parasite&#8223;s metabolism. Through HPLC it was possible to verify a significant difference in the E/S of organic acids from the carbohydrates metabolism (pyruvate and lactate), intermediary metabolism (citrate, &#945;-ketoglutarate, succinate, fumarate, malate and oxaloacetate) and from the fatty acids oxidation (&#946;-hydroxibutyrate) between differents species and isolates of Leishmania spp. Through the enzymatic spectrophotometric analysis we verified the different concentrations of glucose. The NMR through 13C and 1H detected the following metabolites in pellet and supernatant: alanine, lactate, acetate, oxalate, pyruvate, succinate, glicerol, CO2, ureia and aminoacids (glutamine, valine and arginine). Therefore, through the several methods it was possible to observe that there is difference of E/S metabolites between the isolates and strains of Leishmania spp that utilize several biochemical pathways to energy production and the identification of these pathways may be used to identify each isolate and also establish metabolic differences in the host-parasite relationship. / A leishmaniose é uma doença do sistema mononuclear fagocitáio causada por protozoários do gênero Leishmania. As formas promastigotas de Leishmania sp degradam carboidratos pela via glicolítica e a primeira reação ocorre dentro do glicossomo. Utilizando como fonte de energia a glicose, aminoácidos e lipídeos presentes no meio de cultura, os produtos excretados/secretados (E/S) podem ser indicadores do perfil metabólico energético parasitário e de distúrbios biológicos. A análise bioquímica do metabolismo de Leishmania vem atualizar os estudos parasitológicos com técnicas adequadas à avaliação do perfil bioquímico na relação parasito-hospedeiro, levando ao melhor entendimento da maneira como esses organismos conseguem sobreviver em ambientes diversos como o trato digestório do hospedeiro invertebrado ou nos tecidos do hospedeiro vertebrado. O objetivo deste trabalho foi o estudo do metabolismo energético de diferentes espécies de Leishmania. Para tanto, foi realizada a análise in vitro de metabólitos E/S pelo parasito em meio de cultura durante as fases logarítmicas e estacionárias do crescimento, e quantificados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A espectrofotometria foi utilizada para a dosagem de glicose. O método de ressonância magnética nuclear foi implantado para o estudo do metabolismo parasitário. Pela CLAE verificou-se diferença nos produtos E/S dos ácidos orgânicos do metabolismo de carboidratos (piruvato e lactato), do metabolismo intermediário (citrato, &#945;-cetoglutarato, succinato, fumarato, malato e oxaloacetato) e do metabolismo dos ácidos graxos (&#946;-hidroxibutirato) entre diferentes espécies e isolados de Leishmania. Pela análise espectrofotométrica enzimática verificou-se diferença na concentração de glicose na cepa M2903 de L.(V.) braziliensis. Pela RMN de 13C e 1H detectaram-se os seguintes metabólitos no sedimento e sobrenante: alanina, lactato, acetato, oxalato, piruvato, succinato, glicerol, CO2, uréia e aminoácidos (glutamina, valina e arginina). Entretanto, através de vários métodos, foi possível observar que há diferenças na E/S de metabólitos entre diferentes cepas e isolados de Leishmania spp que utilizam diversas vias bioquímicas para a obtenção de energia e a identificação dessas vias poderá ser utilizada para investigar a atuação de fármacos anti-parasitários. Mudanças bioquímicas no metabolismo podem indicar possíveis adaptações do parasito às diferentes condições ambientais e fisiológicas durante o ciclo de vida e essas características bioquímicas individuais poderão ser utilizadas na identificação de cada isolado, além de estabelecer diferenças metabólicas na relação parasito-hospedeiro.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2014-10-02T20:53:47Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sueli Meira da Silva Dias - 2006.pdf: 822890 bytes, checksum: 1982b1c5fbad1e0a077fcf7876d69f21 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-02T21:07:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sueli Meira da Silva Dias - 2006.pdf: 822890 bytes, checksum: 1982b1c5fbad1e0a077fcf7876d69f21 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-02T21:07:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sueli Meira da Silva Dias - 2006.pdf: 822890 bytes, checksum: 1982b1c5fbad1e0a077fcf7876d69f21 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2006-06-28 / Thirty cronic chagasic pacients were submitted to specific treatment against Chaga’s disease. The drug of choice was Benznidazole. After treatment laboratorial exams such as parasitological and imunological aiming terapheutic validation were performed. The parasitological analysis is represented by post-treatment hemoculture of 30 cronic chagasic pacients and demonstrated the presence of promastigotes and epimastigotes in 10% (3/30) of pacients, probably characterizing a mixed infection. These hemocultures were named 371, 437 and 438. From these three pacients two were from Goias (GO) and one from Minas Gerais (MG) which are endemic regions to Chaga’s disease as well as to Leishmaniasis which justified the study of this probable co-infection. The work was developed in two phases: in the first phase it was made the biological experimental study of the mixed sotck and in the second phase it was made the confirmation of the Leishmania spp gender through PCR technique. In the experimental biological study the model used was Balb/c isogenic mice and we made an intraperitoneal inoculation of the stocks and we analysed the following parameters: parasitism, hemoculture, sorology by IFI and histopathology. The parasitism observation occured between 48 hours periods through 90 days, and the hemoculture observations occured weekly through 120 days and resulted positive only in mice innoculated with stock 371. The sorology showed anti-T. cruzi antibodies titers in mice innoculated with stocks 371 and 437. The histopathology revealed the presence of amastigotes in tissues cardiac slides from mice innoculated with stock 438, showing that only the epimastigotes forms are present in the mixed stocks and are viable to infect the experimental model used in this work. The confirmation of the Leishmania subgenus envolved in this co-infection was possible through molecular biology techniques. In PCRRFLP, after digestion of PCR products by Hae III restriction enzymes which has specific clivage sites for L. (Viannia) subgender. The samples represented by 371, 437 and 438 stocks and the controls of L. (L.) amazonensis and L. (L.) chagasi did not suffer clivage of its amplified segments in PCR. Only the control constituted by L. (V.) braziliensis suffered clivage resulting in fragments of aproximately 40 and 80 bp confirming undoubtfully that the samples represented by the mixed stocks 371, 437 and 438 isolated from cronic chagasic pacients cantained L. (Leishmania) spp. / Trinta pacientes chagásicos crônicos foram submetidos ao tratamento específico para a doença de Chagas. A droga utilizada foi o Benznidazol. Após o tratamento foram realizados exames laboratoriais compreendendo análises parasitológicas e imunológicas, com a finalidade de validação terapêutica. A análise parasitológica representada pela hemocultura evidenciou a presença concomitante de promastigotas e epimastigotas em 10% (3/30) delas, caracterizando uma provável infecção mista. Essas hemoculturas foram denominadas 371, 437 e 438. Dos três pacientes, dois são procedentes do estado de Goiás (GO) e um do estado de Minas Gerais (MG), regiões endêmicas tanto para a doença de Chagas como para a leishmaniose, o que justificou o estudo desta provável co-infecção. O presente trabalho foi desenvolvido em duas etapas. Na primeira etapa, foi realizado o estudo biológico experimental dos estoques mistos e na segunda, a confirmação do gênero Leishmania spp nos estoques mistos, através da técnica de PCR. No estudo biológico experimental, foram utilizados como modelos camundongos Balb/c isogênicos, realizando-se inoculação intraperitoneal dos estoques. Posteriormente foi analisada a parasitemia, hemocultura, sorologia por IFI e histopatologia. A observação da parasitemia ocorreu a cada 48 horas pelo período de 90 dias, e a hemocultura foi analisada semanalmente por 120 dias, resultando positiva apenas nos camundongos inoculados com o estoque 371. A IFI detectou apenas anticorpos anti-T. cruzi, nos camundongos inoculados com os estoques 371 e 437. A análise histopatológica revelou presença de ninhos de amastigotas nos cortes cardíacos dos camundongos inoculados com o estoque 437, demonstrando no conjunto dessas análises, que apenas as formas epimastigotas presentes nos estoques mistos se mostraram viáveis em infectar o modelo experimental utilizado. A presença de protozoários do gênero Leishmania nos estoques foi confirmada mediante realização de PCR. Na PCR-RFLP, o produto da amplificação foi tratado com a enzima de restrição Hae III que tem sítios específicos de clivagem para o subgênero L. (Viannia). As amostras representadas pelos estoques 371, 437 e 438 e os controles de L. (L.) amazonensis e L. (L.) chagasi não sofreram clivagem de seus segmentos amplificados na PCR. Apenas o controle constituído de L. (V.) braziliensis sofreu clivagem, resultando fragmentos de aproximadamente 40 e 80 pb, confirmando inequivocamente que as amostras representadas pelos estoques mistos 371, 437 e 438 isoladas de pacientes chagásicos crônicos realmente continham L. (Leishmania) spp.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-01-15T14:10:30Z No. of bitstreams: 2 Tese - Sebastiana Adriana Pereira Sousa - 2017.pdf: 2254573 bytes, checksum: 327247b65479f90fd22918a43838da07 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-01-15T14:10:50Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Sebastiana Adriana Pereira Sousa - 2017.pdf: 2254573 bytes, checksum: 327247b65479f90fd22918a43838da07 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-15T14:10:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Sebastiana Adriana Pereira Sousa - 2017.pdf: 2254573 bytes, checksum: 327247b65479f90fd22918a43838da07 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-12-15 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Outro / Considering that Tocantins is one of the main brazilian states with the greatest number of cases of human and canine visceral leishmaniasis and that the cat can act as a possible reservoir for the disease, it was aimed to detect the presence of Leishmania spp. in domestic cats of the endemic municipality of Araguaína, state of Tocantins, approaching the possible associations with the infection (individual characteristics of the animals, presence of clinical signs and co-infections). For this, blood, bone marrow, lymph node, liver, spleen and skin samples were analyzed by direct examination, Immunofluorescence Antibody Test (IFAT) and Polymerase Chain Reaction (PCR). Serum samples were also tested for Feline immunodeficiency Virus (FIV) and Feline Leukemia Virus (FeLV) using the SNAPshot Dx, IDEXX® test. Anti-Leishmania spp. antibodies were detected in 26.2% (22/84) (IC: 172% - 36.9%) of the animals. Of these, 22.7% (5/22) (CI: 0.74% - 10.12%) were reactive for FeLV, one of which also showed positivity for FIV. There was no association between these infections and leishmaniasis (p = 0.1189). Variables such as sex, hair length, coat color, body condition, age and race had no association with seropositivity (p> 0.05). The frequency of L. (L.) infantum chagasi obtained by PCR was 4.4% (5/113) (CI: 1.5% - 10%) and the result obtained through direct parasitological examination was 5.3% (3/57) (CI: 1.1% - 14.6%). Among the positive animals in the molecular diagnosis (5/113), 75% (3/4) of the spleen, submandibular lymph nodes and skin samples, 60% (3/5) of the blood samples and 33.33% (1/3) of the bone marrow samples showed positivity. Of the animals that presented amastigote forms in the direct examination (3/57), all tested tissues were positive (3/3). The agreement between PCR and parasitological examination was considered moderate (Kappa = 0.544, CI: 0.2874 - 0.8006). There was an association between positivity and animals presenting at least one clinical sign (p = 0.0231). Among these signs, splenomegaly (p =0.0069) and hepatomegaly (p = 0.0008) were statistically significant. The results obtained here represent a considerable impact from the point of view of public health, since the leishmaniasis is serious a zoonosis present mainly undeveloped regions and in the process of urbanization, as is the case of Tocantins. Thus, it is recommended the development and intensification of control measures directed to the feline species, such as the awareness of organs and health professionals, the orientation of the population regarding the importance of responsible care, veterinary assistance and environmental care, and training of veterinary professionals in order to act in the precise diagnosis of the infection. / Tendo em vista que o Tocantins mostra-se um dos principais estados brasileiros com maior número de casos de leishmaniose visceral humana e canina e que o gato pode atuar como possível reservatório da doença, objetivou-se detectar a presença de Leishmania spp. em felinos domésticos do município endêmico de Araguaína, estado do Tocantins, abordando as possíveis associações com a infecção (características individuais dos animais, presença de sinais clínicos e co-infecções). Para tal, amostras de sangue, medula óssea, linfonodo, fígado, baço e pele foram analisadas por meio do exame direto, Reação de Imunofluorescência indireta (RIFI) e Reação em cadeia pela Polimerase (PCR). Amostras de soro também foram testadas para o Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV) e Vírus da Leucemia Felina (FeLV) utilizando o teste SNAPshot Dx, IDEXX®. Anticorpos anti- Leishmania spp. foram detectados em 26,2% (22/84) (IC: 17,2% - 36,9%) dos animais. Desses, 22,7% (5/22) (IC: 0,74% - 10, 12%) foram reativos para FeLV, sendo que um deles também mostrou positividade para FIV. Não houve associação entre essas infecções e a leishmaniose (p=0,1189). Variáveis como sexo, comprimento do pelo, cor da pelagem, estado corporal, idade e raça não tiveram associação com a soropositividade (p>0,05). A frequência de L. (L.) infantum chagasi obtida pela PCR foi de 4,4% (5/113) (IC: 1,5% - 10%) e o resultado obtido por meio do exame parasitológico direto, foi de 5,3% (3/57) (IC: 1,1% - 14,6%). Dentre os animais positivos no diagnóstico molecular (5/113), 75% (3/4) das amostras de baço, linfonodo submandibular e pele, 60% (3/5) das amostras de sangue e 33,33% (1/3) da amostras de medula mostraram positividade. Dos animais que apresentaram formas amastigotas no exame direto (3/57), todos os tecidos testados foram positivos (3/3). A concordância entre PCR e exame parasitológico foi considerada moderada (valor de Kappa = 0,544, IC: 0,2874 – 0,8006). Houve associação entre positividade e animais que apresentaram pelo menos um sinal clínico (p=0,0231). Dentre estes sinais, esplenomegalia (p=0,0069) e hepatomegalia (p=0,0008) foram estatisticamente significativos. Os resultados obtidos aqui representam considerável impacto do ponto de vista de saúde pública, uma vez que a leishmaniose é grave uma zoonose presente principalmente regiões subdesenvolvidas e em processo de urbanização, como é o caso do Tocantins. Assim, recomenda-se o desenvolvimento e a intensificação de medidas de controle direcionadas à espécie felina, tais como conscientização de órgãos e profissionais de saúde, orientação da população quanto à importância da guarda responsável, assistência veterinária e cuidados ambientais, e capacitação dos profissionais veterinários de forma a atuarem no diagnóstico preciso da infecção.

Resumo: A leishmaniose é uma zoonose, causada por protozoários do gênero Leishmania e transmitida por vetores flebotomíneos. O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de Leishmania spp. em cães e gatos provenientes de área endêmica e não endêmica para esta doença, através da associação de três técnicas diagnósticas: hemocultura em meio LIT (Liver Infusion Tryptose), Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para Leishmania spp. Foram coletadas aleatoriamente 50 amostras de sangue de cães e 50 amostras de sangue de gatos, procedentes do Centro de Controle de Zoonoses de Campo Grande - MS, onde a leishmaniose visceral canina (LVC) é endêmica, e aleatoriamente de 50 cães e 50 gatos do Canil Municipal e Associação de Proteção aos Animais (APA) de Botucatu - SP, considerada, até o momento, área não endêmica, silenciosa para esta enfermidade. Das 50 hemoculturas de cães procedentes de Botucatu, três (6%) foram positivas e das 50 hemoculturas dos gatos, duas (4%) foram positivas. Em Campo Grande, 29 hemoculturas (58%) de cães foram positivas e as dos gatos apresentaram 100% de negatividade. Quanto à PCR, 100% das amostras de cães e de gatos procedentes de Botucatu, assim como as dos gatos de Campo Grande foram negativas. Das 50 amostras de cães deste município, 36 foram positivas (72%) à PCR. À RIFI obteve-se 100% de negatividade nas amostras dos cães e gatos de Botucatu e 32 cães (64%) e 15 gatos (30%) de Campo Grande foram reagentes. Pelos resultados apresentados, podemos concluir que a contínua vigilância epidemiológica é importante em áreas não endêmicas para leishmaniose, bem como a busca de um diagnóstico seguro em áreas endêmicas, além de maiores estudos sobre o papel dos felinos no ciclo epidemiológico da doença. / Abstract: Leishmaniosis is a zoonosis caused by protozoans of Leishmania genus and is transmitted by phlebotomine vectors. This study was aimed to evaluate the occurrence of Leishmania spp. in dogs and cats from endemic and nonendemic areas by three diagnostic tests: hemoculture in LIT (Liver Infusion Tryptose) media, Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) and Polymerase Chain Reaction (PCR). Fifty blood samples of dogs and fifty of cats from Zoonosis Control Center from Campo Grande, MS, an endemic area for canine visceral leishmaniasis (CVL), were collected randomly, as well as blood samples of dogs and cats from Municipal Kennel and Animal Protection Association (APA) from Botucatu, SP, considered by the moment as freetransmission, non-endemic area for the disease. From 50 hemocultures of the dogs from Botucatu, three (6%) were positive and of the blood of 50 cats, two (4%) were positive. In Campo Grande, 29 hemocultures (58%) were positive for dogs and 100% of the cats were negative for this test. For the PCR detection of Leishmania spp., 100% of the samples from dogs and cats from Botucatu and all the cats from Campo Grande were negative. On the other hand, 36 dogs from Campo Grande were positive (72%) for the PCR. From Botucatu, by the IFAT, 100% of the dogs and cats were non reagent and 32 dogs (64%) and 15 cats (30%) from Campo Grande (MS) were positive for this test. The presented results show that a continuous epidemiological vigilance is important in non-endemic areas for leishmaniasis, as well as the research for an accurate diagnosis in endemic areas, and other studies based on the role of felines in epidemiological life cycle of this disease. / Orientador: Simone Baldini Lucheis / Coorientador: Hélio Langoni / Banca: Ana Luiza Alves Rosa Osório / Banca: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Mestre

Orientador: Caris Maroni Nunes / Banca: Gisele Fabrino Machado / Banca: Rafael Silva Cipriano / Resumo: A leishmaniose visceral (LV), doença que acomete o cão e o homem, é causada por um protozoário intracelular do gênero Leishmania. Esta zoonose ocorre em mais de 88 países, ocasionando aproximadamente 300 mil novos casos anualmente no mundo todo. O Brasil ainda encontra dificuldades para que o controle da LV seja alcançado de forma eficiente de forma a evitar que esta enfermidade amplie sua distribuição. Transmitida por flebótomos, essa zoonose dissemina-se com mais facilidade em locais propícios à manutenção do vetor, sendo o Lutzomiya longipalpis o mais frequente no Brasil. O cão é o principal reservatório urbano da LV, sendo também acometido por esta doença. Além da presença de cães infectados muitos fatores estão relacionados à ocorrência de LV em áreas urbanas, como acúmulo de lixo, saneamento básico precário e presença de matéria orgânica no peridomicílio, que assim contribuem para a manutenção do vetor. Dessa forma, o controle da leishmaniose visceral em cães se faz necessário, seja por meio de medidas individuais ou coletivas, diminuindo assim sua participação no ciclo epidemiológico da LV. A identificação de fatores de risco que possam estar ligados à ocorrência de LV nos cães é fundamental para um controle mais efetivo desta zoonose / Abstract: Visceral leishmaniasis (VL), a disease that affects the dog and the man is caused by an intracellular protozoan of the Leishmania genus. This zoonosis occurs in more than 88 countries, resulting in approximately 300,000 new cases annually worldwide. Brazil still finds difficulties on controlling VL in an efficient way to avoid the disease spread. Transmitted by sandflies, this zoonosis is disseminated in areas suitable to maintain the vector, with Lutzomiya longipalpis being the most frequent vector in Brazil. The dog is its main urban reservoir, which is also affected by this disease. Besides the presence of the infected dogs many factors are related to the occurrence of VL in urban areas such as litter accumulation, precarious basic sanitation and the presence of organic matter in the peridomicile, thus contributing to the maintenance of the vector. The control of visceral leishmaniasis in dogs is necessary, either by individual or by collective measures, in order to reduce their participation in the VL epidemiological cycle. / Orientador: Cáris Maroni Nunes / Banca: RAfael Silva Cipriano / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-26Bitstream added on 2014-06-13T20:35:28Z : No. of bitstreams: 1 braga_arc_me_botfmvz.pdf: 1750631 bytes, checksum: b95977e138bb7661fe4ad8f78d46422b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose é uma zoonose, causada por protozoários do gênero Leishmania e transmitida por vetores flebotomíneos. O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de Leishmania spp. em cães e gatos provenientes de área endêmica e não endêmica para esta doença, através da associação de três técnicas diagnósticas: hemocultura em meio LIT (Liver Infusion Tryptose), Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para Leishmania spp. Foram coletadas aleatoriamente 50 amostras de sangue de cães e 50 amostras de sangue de gatos, procedentes do Centro de Controle de Zoonoses de Campo Grande - MS, onde a leishmaniose visceral canina (LVC) é endêmica, e aleatoriamente de 50 cães e 50 gatos do Canil Municipal e Associação de Proteção aos Animais (APA) de Botucatu - SP, considerada, até o momento, área não endêmica, silenciosa para esta enfermidade. Das 50 hemoculturas de cães procedentes de Botucatu, três (6%) foram positivas e das 50 hemoculturas dos gatos, duas (4%) foram positivas. Em Campo Grande, 29 hemoculturas (58%) de cães foram positivas e as dos gatos apresentaram 100% de negatividade. Quanto à PCR, 100% das amostras de cães e de gatos procedentes de Botucatu, assim como as dos gatos de Campo Grande foram negativas. Das 50 amostras de cães deste município, 36 foram positivas (72%) à PCR. À RIFI obteve-se 100% de negatividade nas amostras dos cães e gatos de Botucatu e 32 cães (64%) e 15 gatos (30%) de Campo Grande foram reagentes. Pelos resultados apresentados, podemos concluir que a contínua vigilância epidemiológica é importante em áreas não endêmicas para leishmaniose, bem como a busca de um diagnóstico seguro em áreas endêmicas, além de maiores estudos sobre o papel dos felinos no ciclo epidemiológico da doença. / Leishmaniosis is a zoonosis caused by protozoans of Leishmania genus and is transmitted by phlebotomine vectors. This study was aimed to evaluate the occurrence of Leishmania spp. in dogs and cats from endemic and nonendemic areas by three diagnostic tests: hemoculture in LIT (Liver Infusion Tryptose) media, Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) and Polymerase Chain Reaction (PCR). Fifty blood samples of dogs and fifty of cats from Zoonosis Control Center from Campo Grande, MS, an endemic area for canine visceral leishmaniasis (CVL), were collected randomly, as well as blood samples of dogs and cats from Municipal Kennel and Animal Protection Association (APA) from Botucatu, SP, considered by the moment as freetransmission, non-endemic area for the disease. From 50 hemocultures of the dogs from Botucatu, three (6%) were positive and of the blood of 50 cats, two (4%) were positive. In Campo Grande, 29 hemocultures (58%) were positive for dogs and 100% of the cats were negative for this test. For the PCR detection of Leishmania spp., 100% of the samples from dogs and cats from Botucatu and all the cats from Campo Grande were negative. On the other hand, 36 dogs from Campo Grande were positive (72%) for the PCR. From Botucatu, by the IFAT, 100% of the dogs and cats were non reagent and 32 dogs (64%) and 15 cats (30%) from Campo Grande (MS) were positive for this test. The presented results show that a continuous epidemiological vigilance is important in non-endemic areas for leishmaniasis, as well as the research for an accurate diagnosis in endemic areas, and other studies based on the role of felines in epidemiological life cycle of this disease.