Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-19. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:25:30Z : No. of bitstreams: 1 000834841.pdf: 1067389 bytes, checksum: 7e8cce7866a293f952884030f830b2f2 (MD5) / A Leishmaniose visceral (LV) no Brasil representa um grave problema de saúde pública; portanto, é importante estudar novas alternativas para o tratamento de cães infectados. O imunomodulador agregado de magnésio-amônio fosfolinoleato-palmitoleato anidrido proteína (P-MAPA) melhora a imunocompetência quando o sistema imunológico está comprometido, mas sua dependência de receptores Toll-like (TLRs) e os mecanismos envolvidos na resposta imune ainda não estão claros. Estudou-se a ação in vitro de P-MAPA sobre a expressão de TLR2 e TLR4, espécies reativas de oxigénio (ROS), óxido nítrico (NO) e p38 ativada por mitógeno proteína quinase (p38MAPK) e fosforilação de IKK em células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e macrófagos de cães saudáveis e infectados. O PBMC ou macrófagos foram isolados e cultivados com diferentes concentrações de P-MAPA (20,100 e 200 μg/mL) em uma atmosfera húmida, a 37°C com 5% de CO2. A observação revelou que nos macrófagos de cães infectados com Leishmania sp. mostraram uma diminuição em TLR2 em comparação com cães saudáveis e em indução com P-MAPA. ROS foram aumentados em PBMC de cães infectados com Leishmania sp. em comparação com cães saudáveis e P-MAPA melhorou a produção de ROS. A produção de NO foi aumentada no sobrenadante da cultura a partir de macrófagos estimulados por P-MAPA em ambos os grupos de cães saudáveis e infectados com Leishmania sp. O tratamento de macrófagos de cães saudáveis com imunomodulador P-MAPA induziu p38 MAPK e fosforilação de IKK, sugerindo a transdução de sinal por esta via. Estas descobertas sugerem que a P-MAPA tem potencial como uma droga terapêutica no tratamento de leishmaniose visceral canina / Visceral leishmaniasis (VL) in Brazil represents a serious public health problem; therefore, it is important to study new alternatives to treat infected dogs. The immunomodulator protein aggregate magnesium-ammonium phospholinoleate-palmitoleate anhydride (P-MAPA) improves immunocompetence when the immune system is impaired, but its dependence on Toll-like receptors (TLRs) and the mechanisms involved in the immune response remain unclear. The in vitro action of P-MAPA on the expression of TLR2 and TLR4, reactive oxygen species (ROS), nitric oxide (NO) and p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK) and IKK phosphorylation were studied in mononuclear cells from peripheral blood and macrophages from healthy and Leishmania-infected dogs. The PBMC or macrophages were isolated and cultured with different concentrations of P-MAPA (20,100 and 200 μg/mL) in a humid environment at 37°C with 5% CO2. Observation revealed that Leishmania-infected dogs showed a decrease in TLR2 in macrophages compared with healthy dogs and in induction with P-MAPA. ROS were increased in PBMCs from Leishmania sp.-infected dogs compared with healthy dogs and P-MAPA improved ROS production. NO production was increased in culture supernatant from macrophages stimulated by P-MAPA in both healthy and Leishmania-infected dogs. Treatment of macrophages from healthy dogs with immunomodulatory P-MAPA induced p38 MAPK and IKK phosphorylation, suggesting signal transduction by this pathway. These findings suggest that P-MAPA has potential as a therapeutic drug in the treatment of canine visceral leishmaniasis

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-20. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:24:11Z : No. of bitstreams: 1 000836316.pdf: 1042031 bytes, checksum: 4a8a8f1f380a58dcfe20921854b03eae (MD5) / Leishmaniose visceral é uma doença grave que tem no cão seu principal reservatório doméstico. Algumas lacunas no conhecimento dificultam ainda mais o controle da doença. Com relação ao reservatório canino, a possibilidade de se estabelecer indicadores de infectividade ao vetor, como a carga parasitária, poderia resultar em melhor caracterização de seu papel como fonte de infecção na cadeia epidemiológica. Foram realizados xenodiagnósticos em cães acometidos de leishmaniose visceral, com subsequente avaliação da carga parasitária no hospedeiro e no vetor, utilizando-se flebotomíneos da área urbana de Araçatuba,SP. Após cinco dias do repasto, as fêmeas foram dissecadas e submetidas à avaliação parasitológica por meio da demonstração direta do parasito (DDP) e da contagem em câmara de Neubauer (NC). Fragmento de DNA de cinetoplasto (kDNA) de Leishmania spp. foi amplificado por meio da PCR convencional e em tempo real (qPCR), para quantificação da carga parasitária. Os cães foram avaliados para a presença de sinais clínicos e amostras de sangue, swab conjuntival e de pele foram colhidas e processadas por PCR e qPCR. Os resultados dos métodos diagnósticos utilizados foram correlacionados em modelo de regressão linear e a positividade de felbotomíneos foi corrigida pela positividade natural. Tanto a PCR convencional quanto a qPCR mostraram-se adequadas para a avaliação da infectividade canina. Houve correlação entre a carga de parasitos presentes na pele e no swab conjuntival do cão bem como com a cargas de parasitos dos flebotomíneos. Alguns sinais clínicos dos cães, pela análise de componentes principais (PCA), estiveram relacionados com a maior taxa de infecção dos vetores. / Visceral leishmaniasis is a severe disease that has the dog as its main domestic reservoir. Gaps in the knowledge difficult even more the control of this disease. Regarding the canine reservoir, the possibility of establishing infectivity indicators, like the dogs parasite load, could result in better characterization of its role as source of infection in the transmission chain. Xenodiagnosis in dogs with visceral leishmaniasis were performed with subsequent parasite load evaluation of the host and the vectors, using sandflies captured in the urban area of Araçatuba,SP. After five days, the female sand flies were dissected, subjected to parasitological evaluation by the direct demonstration of the parasite (DDP) and by counting in a Neubauer chamber (NC). A kinetoplast DNA fragment of Leishmania spp. was amplified by conventional PCR and by qPCR to check the presence and quantification of Leishmania kDNA. Dogs were assessed for clinical signs and blood, skin and conjunctival swab samples were taken and tested for parasite load. The diagnostic methods tested (NC, PCR and qPCR) were correlated by linear regression and positivity results were corrected by the natural infection rate. Conventional PCR and qPCR proved to be appropriate for evaluating canine infectivity. There was a correlation between the parasite load present in the dog' skin and the conjunctive swab, as well as with the sandflies parasite loads. Principal component analysis revealed that some of the clinical signs shown by the dogs were related to a highest sandfly infection rate.

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:27:09Z : No. of bitstreams: 1 000840958.pdf: 626379 bytes, checksum: cdcf4314b4ef6a4265388d09c2020f3f (MD5) / tentativa de compreender a resposta imune de gatos com leishmaniose visceral, o presente estudo teve como objetivo avaliar a expressão gênica das interleucinas IL-4, IL-10, IL-12 e de IFN-γ por reação em cadeia da polimerase em tempo real em amostras de baço de felinos naturalmente acometidos pela doença. Para tanto foram avaliados três grupos de animais; o primeiro e o segundo grupos compostos por seis gatos infectados por Leishmania cada, sintomáticos e assintomáticos, respectivamente; e o terceiro por seis gatos clinicamente hígidos e não infectados. Nos gatos sintomáticos, as expressões de mRNA das citocinas IL-4, IL-10, IL-12 e IFN-γ estavam reduzidas em 2,52; 2,4; 2,3 e 0,57 vezes em relação ao grupo controle, respectivamente. Nos animais assintomáticos, as expressões de IL-4, IL-10, IL-12 e de IFN-γ foram, respectivamente, de 2,22; 2,15; 2,52 e 1,15 vezes menores quando comparadas ao grupo controle. Ainda, uma forte correlação foi observada entre as expressões de IL-4 e de IL-10 nos gatos sintomáticos, e entre IFN-γ e IL-10, IL-12 e IL-4 e entre IL-12 e IL-10 nos gatos assintomáticos. A redução na expressão das quatro citocinas analisadas evidencia pequena participação dos linfócitos Th1 e Th2 na resposta frente à infecção por Leishmania spp. em gatos, independente do estado clínico dos animais / TIn an attempt to understand the immune response of cats with visceral leishmaniasis, the present study aimed to evaluate the gene expression of interleukins IL- 4, IL-10, IL-12 and IFN-γ by real-time polymerase chain reaction in samples of spleen from cats naturally affected by the disease. For this, three groups of cats were evaluated; the first and second groups composed of six Leishmania-infected cats each, symptomatic and asymptomatic, respectively; and the third composed of six clinically healthy and uninfected cats. In symptomatic cats the mRNA expressions of IL- 4, IL -10, IL - 12 and IFN- γ were respectively supressed 2.52, 2.4, 2.3 and 0.57 times compared to the control group. In asymptomatic animals the expression of IL- 4, IL -10, IL -12 and IFN- γ were, respectively, 2.22, 2.15, 2.52 and 1.15 times lower when compared to the control group. Also, a strong correlation was observed between the expressions of IL4 and IL-10 in symptomatic cats; between IFN-γ and IL-10, IL-12 and IL-4 and between IL-12 and IL-10 in asymptomatic cats. The reducion of expression the four cytokines analyzed evidences a small involvement of Th1 and Th2 lymphocytes in the response to infection by Leishmania spp. in cats, regardless of the clinical status of animals

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2014-08-13T17:59:53Z : No. of bitstreams: 1 000770940.pdf: 1289436 bytes, checksum: 33abe6c9a7b830d30b60ef7e021fa7c2 (MD5) / A leishmaniose visceral canina (LVC), conhecida como leishmaniose visceral americana (LVA) ou calazar é uma antropozoonose, causada pelo protozoário flagelado do gênero Leishmania, com ampla distribuição mundial. No Brasil, o agente responsável pela doença é a Leishmania (Leishmania) chagasi, transmitida pela picada da fêmea do flebotomínio da espécie Lutzomyia longipalpis, e o principal reservatório doméstico é o cão. É uma doença sistêmica grave, de curso lento e crônico, de diagnóstico complexo. Entre as estratégias de controle da LVC está o inquérito sorológico canino, com a eliminação dos cães reagentes, sendo que diferentes técnicas podem ser utilizadas para o diagnóstico desta enfermidade. Muitos avanços têm ocorrido nos últimos anos, mas a respeito dos testes disponíveis para o seu diagnóstico, nenhum apresenta 100% de sensibilidade e especificidade. Neste contexto, o presente projeto teve como objetivos determinar a prevalência de anticorpos para L. chagasi, em 164 cães capturados pelo CCZ de Bauru, SP, área epidêmica para LVC, comparar as técnicas de imunofluorescência indireta, ensaio imunoenzimático (ELISA) e aglutinação direta (DAT); determinar a carga parasitária pela técnica de PCR em tempo real, a partir da punção de linfonodo poplíteo e de medula óssea; e identificar possíveis variantes genotípicas de Leishmania. spp a partir do sequenciamento e genotipagem, a fim de contribuir para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina, a partir da análise obtida nos diferentes testes, bem como pela avaliação dos sintomas apresentados pelos animais. A sensibilidade apresentada pelas provas DAT e ELISA tendo a RIFI como padrão-ouro foi respectivamente, de 94% e 87%, enquanto a especificidade foi de 28% e 93%. Do total de amostras de sangue, linfonodo e medula óssea submetidas a PCR gênero e espécie- específica, 20 foram positivas somente para gênero, e estas foram sequenciadas ... / The canine visceral leishmaniasis (LCV), known as American visceral leishmaniasis (LVA) or kala-azar is a anthropozoonosis caused by the flagellate protozoan of the genus Leishmania, with worldwide distribution. In Brazil, the agent responsible for the disease is Leishmania (Leishmania) chagasi, transmitted by the bite of the female of the species Lutzomyia longipalpis, and the main reservoir is the domestic dog. It is a severe systemic disease, with chronic and slow course and complex diagnostic. Among the strategies for control of LVC are the canine serological survey, with the elimination of reagents dogs and different techniques can be used to diagnose this disease. Many advances have occurred in recent years, but about the tests available for diagnosis, none had 100% sensitivity and specificity. In this context, this project aimed to determine the prevalence of antibodies to L. chagasi in 164 dogs captured by the CCZ, Bauru, SP, epidemic area for LVC, to compare the techniques of indirect immunofluorescence, enzyme immunoassay (ELISA) and direct agglutination (DAT) to determine the parasite burden by PCR in real time from peripheral blood puncture, popliteal lymph node and bone marrow of animals serologically positive, and identify potential genotypic variants of Leishmania. spp. from the sequencing in order to contribute to the diagnosis of canine visceral leishmaniasis, from the analysis obtained for the different tests as well as for assessment of symptoms presented by the animals. The sensitivity shown by DAT and ELISA with IFA as the gold standard were respectively, 94% and 87%, while specificity was 28% and 93%. Of the total sample of blood, lymph node and bone marrow subjected to PCR genus and species-specific, 20 were positive only for gender, and these were sequenced and characterized, yielding cleavage bands profile and common sequences belonging to the species L.donovani complex

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2015-01-26T13:30:40Z : No. of bitstreams: 1 000793388.pdf: 1066055 bytes, checksum: 044f31f69403fcf74fb56af93e6c86b7 (MD5) / A leishmaniose visceral americana, causada pelo parasita intracelular Leishmania (L) infantum chagasi, é transmitida pela picada do mosquito Lutzomyia longipalpis. O tratamento é realizado à base de quimioterápicos clássicos, que desenvolvem importantes efeitos colaterais no hospedeiro. A prospecção de novas drogas é o grande desafio mundial do momento. Assim, este estudo realizado in vitro teve por objetivos avaliar o efeito anti-leishmania de frações do veneno de Crotalus durissus terrificus sobre as formas promastigotas e amastigotas de Leishmania (L) infantum chagasi. Do veneno total foram extraídas e purificadas duas frações denominadas respectivamente de fosfolipase A2 (PLA2) e peptídica. Além disso, formas promastigotas e macrófagos infectados por amastigotas foram expostos a uma diluição seriada de PLA2 e da fração peptídica em intervalos que variaram entre 1,5625 μg/mL e 200 μg/mL. Ambas demonstraram atividade contra as formas promastigotas de Leishmania (L.) infantum chagasi variando de acordo com as doses testadas e o tempo de incubação. O ensaio MTT (3- (4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil brometo de tetrazolina) das frações contra as formas promastigotas mostrou IC50 de 52,07 μg /mL para a PLA2, e uma IC50 de 16,98 μg/mL para a fração peptídica. O ensaio MTT para se avaliar a citotoxicidade nos macrófagos peritoneais mostrou uma IC50 de 98 μg/mL para PLA2 e uma IC50 16,98 μg/mL para a fração peptídica. Nos macrófagos peritoneais infectados pelas formas amastigotas de Leishmania (L) infantum chagasi a PLA2 estimulou o crescimento dos parasitas; em doses mais elevadas foi capaz de controlar em 23% o seu crescimento. A fração peptídica controlou 43% do crescimento do parasita intracelular na dose de 16,98 μg/mL., mostrando-se tóxica acima desta doe para os macrófagos. Ambas as frações estimularam a produção de H2O2 pelos macrófagos, mas apenas PLA2 foi capaz de estimular a produção ... / American visceral leishmaniasis is caused by the intracellular parasite Leishmania ( L ) infantum chagasi , and transmitted by sand fly Lutzomyia longipalpis. Treatment is based on classical chemotherapeutics with significant side effects and the search for new drugs is the greatest global challenge. Thus , this in vitro study aimed to evaluate the anti - leishmanicidal effect of Crotalus durissus terrificus venom’s fractions on promastigotes and amastigotes of Leishmania (L) infantum chagasi. The whole venom were purified two fractions called respectively phospholipase A2 (PLA2) and peptide. Furthermore, promastigotes and macrophage infected per amastigotes were exposed to serial dilutions of the peptide fraction and PLA2 at intervals varying between 1.5625 μg/mL and 200 μg/mL. Both showed activity against promastigotes and varies according to the tested doses and the time of incubation. The MTT assay (3-(4,5-Dimethyl-1,3- thiazol-2-yl)-3,5-diphenyl-2H-tetrazol-3-ium bromide) against promastigotes showed IC50 of 52.07 μg/mL to PLA2, and 16.98 μg/mL for peptide venom’s fraction. The MTT assay to evaluate the cytotoxicity in peritoneal macrophages showed an IC50 of 98 μg/mL for PLA2 and 16.98 μg/ml for peptide. In peritoneal macrophages infected by Leishmania (L) infantum chagasi amastigotes the PLA2 stimulated growth of parasites, at higher doses was able to control 23 % growth. The peptide fraction controlled 43 % of the intracellular parasite growth at a dose of 16.98 μg/mL, showing up this dose toxic to macrophages . Both fractions stimulated H2O2 production by macrophages but only PLA2 was able to stimulate NO production . The results encourage further studies to describe the metabolic pathways involved in cell death , as well as the prospect of molecules with antiparasitic activity present in the peptide fraction of Crotalus durissus terrificus

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Pós-Graduação em Ciências Médicas da Faculdade de Medicina da Universidade de Brasília. 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2016-07-26T15:23:17Z No. of bitstreams: 1 2016_VivianeFragosodeMouraLane.pdf: 1949901 bytes, checksum: f80753bb17ef36abbe6db644e4af4156 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-09-08T18:10:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_VivianeFragosodeMouraLane.pdf: 1949901 bytes, checksum: f80753bb17ef36abbe6db644e4af4156 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-08T18:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_VivianeFragosodeMouraLane.pdf: 1949901 bytes, checksum: f80753bb17ef36abbe6db644e4af4156 (MD5) / Esta tese tem como objetivo contribuir para o entendimento dos aspectos determinantes da Leishmaniose visceral como problema de saúde pública no Brasil. Para este fim, foram delineados quatro estudos: o primeiro se propôs a descrever a judicialização das ações direcionadas ao reservatório canino, um dos pilares de controle da LV no Brasil. Analisou-se Termos de Ajustamento de Conduta e de Ações Judiciais relativas à LV. Constatou-se um comportamento hiperendêmico da LV nas capitais de Belo Horizonte, Campo Grande, Fortaleza e Palmas. Além disso, verificou-se que a interferência do Ministério Público direcionadas ao reservatório doméstico, colabora para a descontinuidade das ações de controle da doença. No segundo estudo, analisou-se o conhecimento e práticas profissionais no âmbito da atenção primária e a atenção aos casos diagnosticados em um território endêmico do Distrito Federal. Realizou-se um descritivo exploratório e quantitativo. Aplicou-se um questionário estruturado aos profissionais de saúde pertencentes às unidades de atenção básica. Apesar dos participantes revelarem a importância epidemiológica da LVH na região, demonstrou-se que essas regiões apresentam dificuldades operacionais, as quais dificultam a execução de ações direcionadas aos casos de LV. No terceiro estudo realizou-se uma série de casos, entre 2011 a 2014, em um território endêmico do Distrito Federal, cuja finalidade foi acompanhar a evolução da doença em pacientes com teste Montenegro positivo, além de analisar a dinâmica de transmissão no local. Conclui-se, portanto, que o entendimento acerca da progressão de indivíduos assintomáticos, em áreas endêmicas, não depende apenas da confirmação de casos por meio de testes diagnósticos, mas também da dinâmica de transmissão no local. Por fim, o último estudo teve o intuito de compreender o processo que consolidou a urbanização da LV no Brasil, criou-se uma narrativa histórica da epidemiologia da doença agregando informações que possam criar hipóteses para o entendimento da LV urbana e também medidas de controle mais efetivas. O advento da industrialização no país motivou o êxodo rural permitindo mudanças demográficas com o crescimento populacional. O fenômeno atual deveu-se a criação de condições ideais para a manutenção do ciclo de transmissão nas cidades brasileiras. Além deste fato, a descontinuidade das ações de controle foi relevante para a determinação de epidemias urbanas. Ao considerar o cenário epidemiológico atual da LV, é necessário que seja considerado um planejamento urbano nas cidades e não apenas estratégias centradas na dinâmica de transmissão da doença para que se tenha um impacto positivo na epidemiologia da LV. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This thesis aims to contribute to the understanding of the determinants of the Visceral leishmaniasis as a public health problem in Brazil. To this end, four studies were outlined: the first proposed to describe the legalization of actions directed to the canine reservoir, one of the LV control pillars in Brazil. It analyzed Terms of Conduct Adjustment and lawsuits related to LV. It found a hyperendemic behavior of LV in the cities of Belo Horizonte, Campo Grande, Fortaleza and Palmas. Moreover, it was found that the interference of the prosecution aimed at the domestic reservoir, contributes to the discontinuance of the disease control measures. In the second study, we analyzed the professional knowledge and practice within primary care and attention to cases diagnosed in an endemic area of the Federal District. We conducted an exploratory and quantitative descriptive. Applied a structured questionnaire for health professionals belonging to the primary care units. Although the participants reveal the epidemiological importance of LVH in the region, it was shown that these regions present operational difficulties, which hinder the implementation of actions directed to cases of VL. In the third study a number of cases took place between 2011 to 2014 in an endemic area of the Federal District, whose purpose was to monitor the evolution of the disease in patients with positive Montenegro test, and analyze the dynamics of transmission in place. It follows therefore that the understanding of the progression of asymptomatic individuals in endemic areas, not only dependent on the confirmation of cases by diagnostic tests, but also the dynamic transmission on site. Finally, the latest study aimed to understand the process that consolidated the urbanization of VL in Brazil, created a historical narrative of the epidemiology of the disease adding information that can create hypotheses for understanding the urban LV and also control measures more effective. The advent of industrialization in the country motivated the rural exodus allowing demographic changes with population growth. The current phenomenon was due to the creation of ideal conditions for maintaining the transmission cycle in Brazilian cities. In addition to this fact, the discontinuity of control actions was relevant to the determination of urban epidemics. When considering the current epidemiological situation of the LV, it must be considered an urban planning in cities and not just centered strategies in the transmission dynamics of the disease in order to have a positive impact on the epidemiology of VL.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Zoologia, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-10-18T14:25:32Z No. of bitstreams: 1 2016_BárbaraGiordaniFagundes.pdf: 2191571 bytes, checksum: 1c29ac487f4e08ccc5b45265ef48d500 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-11-24T15:00:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_BárbaraGiordaniFagundes.pdf: 2191571 bytes, checksum: 1c29ac487f4e08ccc5b45265ef48d500 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-24T15:00:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_BárbaraGiordaniFagundes.pdf: 2191571 bytes, checksum: 1c29ac487f4e08ccc5b45265ef48d500 (MD5) / Phlebotominae (Dipetra: Psychodidae) é uma subfamília de insetos de grande importância em Saúde Pública por serem transmissores de espécies de Leishmania. O subgênero Lutzomyia merece uma atenção especial por conter a principal espécie vetora de Leishmania infantum, causadora de Leishmaniose Visceral nas Américas: Lutzomyia longipalpis. Esse subgênero possui um grupo de espécies crípticas que não podem ser diferenciadas por morfologia. No entanto, a identificação correta dessas espécies tem relevantes implicações epidemiológicas. Logo, a busca de mais caracteres taxonômicos e métodos para identificação torna-se fundamental e, nesse sentido, a morfometria geométrica de asas poderia auxiliar como uma técnica importante. O objetivo do presente estudo foi analisar as variações de forma e tamanho de asas das espécies do subgênero Lutzomyia que ocorrem no Brasil e avaliar se essas análises poderiam ser úteis para a separação dessas espécies. Foram analisadas asas de 18 espécies de flebotomíneos depositadas na Coleção da Faculdade de Saúde Pública da Universidade de São Paulo e na Coleção do Centro de Pesquisas René Rachou, FIOCRUZ, Minas Gerais, pertencentes ao subgênero Lutzomyia. Outros gêneros e subgêneros foram utilizados como grupo externo. As asas foram fotografadas e seis marcos anatômicos foram digitalizados para obtenção das coordenadas cartesianas. Por meio da Análise Generalizada de Procrustes foi possível obter as variáveis de tamanho e forma. Análises de Componentes Principais, de Funções Discriminantes e de Análise de Variância foram realizadas para analisar as modificações na forma e tamanho das asas. Ainda foi utilizada uma análise baseada nas distâncias de Mahalanobis para verificar os agrupamentos formados por geometria alar. Os resultados obtidos mostraram significativa variação de tamanho e forma das asas de Lutzomyia (Lutzomyia) em comparação com outros subgêneros e gêneros de flebotomíneos. Considerando somente o subgênero Lutzomyia a morfometria alar diferenciou dois grupos. Um deles formado por Lu. ischnacantha, Lu. cavernicola, Lu. almerioi, Lu. forattinii, Lu. renei e Lu. battistinii no qual os valores de reclassificação correta das espécies foram muito altos (Kappa = 0,91) e o outro incluindo Lu. alencari, Lu. ischyracantha, Lu. cruzi, Lu. longipalpis, Lu. gaminarai e Lu. lichyi em que esses valores foram baixos (Kappa = 0,42), mesmo utilizando 10 marcos anatômicos das asas. Os agrupamentos gerados pela geometria das asas reforçaram a proposta de classificação de Galati (2003). A morfometria geométrica de asas foi útil para identificar padrões morfológicos de gêneros e subgêneros e auxiliar na identificação de algumas espécies de flebotomíneos do subgênero Lutzomyia, mas não permitiu a identificação de espécies crípticas como L. longipalpis and L.cruzi. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Phlebotominae (Diptera: Phlebotominae) is a subfamily of insects with great importance for Public Health as transmitters of Leishmania species. The Lutzomyia subgenus deserves special attention because contains the main vector species of Leishmania infantum, responsible for Visceral Leishmaniasis in the Americas: Lutzomyia longipalpis. This subgenus includes a group of sibling species that are not differentiated by morphology. However, the correct identification of these species has important epidemiological implications. Thus, the search for more taxonomic characters and methods for identification is fundamental and, in this sense, the wing geometry can help as an important tool. The objective of this study was to analyze the variations in size and shape of wings of Lutzomyia subgenus species occurring in Brazil and assess whether these analyzes can be useful to identify these species. Wings of 18 sand fly species from two Brazilian collections (Collection of the School of Public Health - University of São Paulo and Collection of the Research Center René Rachou - FIOCRUZ, MG) were analyzed. Other genera and subgenera were used as outgroups. The wings were photographed and six landmarks were scanned to obtain the cartesian coordinates. A Generalized Procrustes Analysis was performed to obtain variables of size and shape. Principal Component Analysis, Discriminant Functions and Variance Analysis were performed to analyze the changes in the shape and size of the wings. An analysis with the Mahalanobis distances was also performed to check the groups formed by wing geometry. The results showed significant variation in size and shape of species of Lutzomyia (Lutzomyia) wings when compared to other sandflies subgenera and genera. Considering only the Lutzomyia subgenus, the wing morphometry distinguished two groups. In the group 1 (Lu. ischnacantha, Lu. cavernicola, Lu. almerioi, Lu. forattinii, Lu. renei and Lu. battistinii) correct reclassification scores were very high (Kappa = 0.91), but in the group 2 (Lu. alencari, Lu. ischyracantha, Lu. cruzi, Lu. longipalpis, Lu. gaminarai and Lu. lichyi) lower reclassification scores were observed (Kappa = 0.42) even in analyses using ten wing landmarks. The clusters generated by wing morphometry were similar of those proposed by Galati (2003).The wing geometry proved to be useful to identify morphological patterns of Phlebotominae genera and subgenera and assist in the identification of some species of the Lutzomyia subgenus but the technique did not allow identification of sibling species such as L. longipalpis and L.cruzi.

Resumo: tentativa de compreender a resposta imune de gatos com leishmaniose visceral, o presente estudo teve como objetivo avaliar a expressão gênica das interleucinas IL-4, IL-10, IL-12 e de IFN-γ por reação em cadeia da polimerase em tempo real em amostras de baço de felinos naturalmente acometidos pela doença. Para tanto foram avaliados três grupos de animais; o primeiro e o segundo grupos compostos por seis gatos infectados por Leishmania cada, sintomáticos e assintomáticos, respectivamente; e o terceiro por seis gatos clinicamente hígidos e não infectados. Nos gatos sintomáticos, as expressões de mRNA das citocinas IL-4, IL-10, IL-12 e IFN-γ estavam reduzidas em 2,52; 2,4; 2,3 e 0,57 vezes em relação ao grupo controle, respectivamente. Nos animais assintomáticos, as expressões de IL-4, IL-10, IL-12 e de IFN-γ foram, respectivamente, de 2,22; 2,15; 2,52 e 1,15 vezes menores quando comparadas ao grupo controle. Ainda, uma forte correlação foi observada entre as expressões de IL-4 e de IL-10 nos gatos sintomáticos, e entre IFN-γ e IL-10, IL-12 e IL-4 e entre IL-12 e IL-10 nos gatos assintomáticos. A redução na expressão das quatro citocinas analisadas evidencia pequena participação dos linfócitos Th1 e Th2 na resposta frente à infecção por Leishmania spp. em gatos, independente do estado clínico dos animais / Abstract: TIn an attempt to understand the immune response of cats with visceral leishmaniasis, the present study aimed to evaluate the gene expression of interleukins IL- 4, IL-10, IL-12 and IFN-γ by real-time polymerase chain reaction in samples of spleen from cats naturally affected by the disease. For this, three groups of cats were evaluated; the first and second groups composed of six Leishmania-infected cats each, symptomatic and asymptomatic, respectively; and the third composed of six clinically healthy and uninfected cats. In symptomatic cats the mRNA expressions of IL- 4, IL -10, IL - 12 and IFN- γ were respectively supressed 2.52, 2.4, 2.3 and 0.57 times compared to the control group. In asymptomatic animals the expression of IL- 4, IL -10, IL -12 and IFN- γ were, respectively, 2.22, 2.15, 2.52 and 1.15 times lower when compared to the control group. Also, a strong correlation was observed between the expressions of IL4 and IL-10 in symptomatic cats; between IFN-γ and IL-10, IL-12 and IL-4 and between IL-12 and IL-10 in asymptomatic cats. The reducion of expression the four cytokines analyzed evidences a small involvement of Th1 and Th2 lymphocytes in the response to infection by Leishmania spp. in cats, regardless of the clinical status of animals / Orientador: Mary Marcondes / Banca: Wagner Luis Ferreira / Banca: Maria cecília Rui Luvizotto / Banca: Márcia Dalastra Laurenti / Banca: Raimundo Souza Lopes / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-15Bitstream added on 2014-06-13T18:55:46Z : No. of bitstreams: 1 bichuette_ma_me_jabo.pdf: 713275 bytes, checksum: da5fda57eb8e30e69990f683adf48e2a (MD5) / Dentre as zoonoses que têm a participação de cães na sua transmissão, merecem destaque a leptospirose e a leishmaniose visceral, presentes em todas as regiões do Brasil. No Estado de São Paulo a leptospirose é endêmica e a ocorrência de leishmaniose visceral vem apresentando aumento significativo. No Distrito de Córrego Rico, Jaboticabal/SP, é grande o número de cães soltos nas ruas e de roedores que invadem as residências. Há relato, na literatura, de um cão reagente à leishmaniose visceral. Recentemente, em 2011, um jovem veio a óbito por leptospirose. Diante desses fatos, o presente estudo teve como objetivo realizar uma avaliação sorológica das duas enfermidades em cães de Córrego Rico e identificar fatores predisponentes ou relacionados à sua ocorrência. Para tanto, as residências que abrigam cães foram visitadas, aplicou-se um questionário semi-estruturado para levantamento de informações que permitissem avaliar as condições gerais de posse e saúde de cada animal, com entrega de panfleto educativo. Amostras de sangue foram obtidas de 274 cães para serem submetidas à prova de soroaglutinação microscópica (SAM) frente a 24 sorovares de Leptospira spp. Vinte e duas amostras mostraram-se reagentes com títulos 1:100, sendo os sorovar butembo, seguido pelo autumnalis, bratislava e pyrogenes os mais frequentemente encontrados. As mesmas amostras passaram por avaliação de anticorpos contra Leishmania chagasi, por meio das técnicas de imunofluorescência indireta (RIFI) e ensaio imunoenzimático indireto (ELISA). Pela imunofluorescência, duas amostras mostraram-se positivas. Já no teste ELISA, todas as amostras testadas foram negativas. A Análise Multivariada permitiu identificar fatores locais que podem estar relacionados com a ocorrência de leptospirose. Embora não tenha sido detectado... / Among the zoonosis transmitted by dogs in Brasil, leptospirosis and visceral leishmaniosis can be found throughout the country. In São Paulo state, leptospirosis is endemic and the occurrence of visceral leishmaniosis is significantly increasing. In the district of Córrego Rico, Jaboticabal/SP, there is a large number of free roaming dogs and homes that are invaded by rodents, and according to the literature, dogs have also tested positive for leishmaniosis in that region. Recently, in 2011, a fatal human case of leptospirosis was reported. This study was conducted to evaluate the serological response of both diseases in the above mentioned district and to identify predisposing factors that could be related to their occurrence. The households with dogs were visited and a questionnaire was filled to compile the information and evaluate the general conditions of dog health and ownership. An educational folder was also distributed to each participant. Blood samples of 274 dogs were submitted to microscopic serum agglutination (SAM) to 24 serotypes de Leptospira spp. Twenty tow samples were positive with titers 1:100. The serotypes butembo, followed by autumnalis, bratislava and pyrogenes were the most commonly found. The blood samples were also evaluated against Leishmania chagasi antibodies using indirect immunoflourescence (IFI) and ELISA. Two samples were positive based on IFI and all tested negative by the ELISA. The multivariate statistical analysis was able to identified local factors related to the incidence of leptospirosis. There were no findings on positive seroconversion of leishmaniosis and the reagents to leptospirosis were 8,0%. However, this study clearly shows the importance of the population control of dogs and... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-05Bitstream added on 2014-06-13T20:35:36Z : No. of bitstreams: 1 quintal_apn_me_araca.pdf: 401169 bytes, checksum: c4d85e9662eaed7da449d96a3642f06c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As leishmanioses são mantidas na natureza com a participação de várias espécies animais. Este trabalho avaliou a presença de Leishmania spp. em amostras de pele de marsupiais de vida livre Micoureus paraguayanus (n=95) e Didelphis albiventris (n=191) capturados no Parque Estadual Morro do Diabo, e em fragmentos de mata do seu entorno, na região do Pontal do Paranapanema-SP, Brasil. As amostras foram avaliadas para a presença de DNA de Leishmania spp. por meio da reação em cadeia pela polimerase (PCR) convencional e em tempo real (qPCR). Todas as amostras de D. albiventris avaliadas por PCR convencional foram negativas para a presença de kDNA de Leishmania spp., entretanto, quando avaliadas por qPCR, a positividade foi de 1,6%. Para M. paraguayanus, foi observada positividade de 7,4% e 11,6% por PCR convencional e qPCR, respectivamente. A maioria dos animais positivos estava restrita ao mesmo fragmento de mata. Apesar de D. albiventris ser a espécie marsupial mais estudada por seus hábitos mais urbanos, outras espécies marsupiais como M. paraguayanus podem ser potenciais reservatórios das leishmanioses e devem ser estudados / Leishmaniasis is maintained in nature with the participation of several animal species. This research evaluated the presence of Leishmania spp. in skin samples of free-living marsupials Micoureus paraguayanus (n=95) and Didelphis albiventris (n=191) captured at the Parque Estadual Morro do Diabo and forest fragments of its surroundings, in the region of “Pontal do Paranapanema”, São Paulo, Brazil. Skin samples were evaluated for the presence of Leishmania spp. DNA by conventional polymerase chain reaction (PCR) and real-time PCR (qPCR). All samples of D. albiventris evaluated by conventional PCR were negatives for the presence of Leishmania spp. kDNA however, when assessed by qPCR, the positivity was 1.6%. For M. paraguayanus positivity was observed in 7.4% and 11.6% by conventional PCR and qPCR, respectively. Most of the positive animals were restricted to the same forest fragment. Although D. albiventris is the most studied marsupial specie, others species as M. paraguayanus can be potential leishmaniasis reservoirs and should be studied