Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-09-04T17:28:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2871487 bytes, checksum: 93ead2c58375b69782a5d7277b06e620 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-04T17:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2871487 bytes, checksum: 93ead2c58375b69782a5d7277b06e620 (MD5) Previous issue date: 2017-06-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leishmania infantum chagasi é um protozoário intracelular responsável por causar uma doença fatal em humanos, a leishmaniose visceral. Identificar moléculas que estejam envolvidas no processo de infecção da célula do hospedeiro pelo parasito é importante para a concepção de estratégias para o controle da doença. Dentre estas moléculas estão as Proteínas Ligantes de Heparina (PLH’s), cuja característica principal é a capacidade de se ligar a carboidratos presentes em glicoproteínas ou glicolipídios. Há evidências de que PLH’s presentes na superfície de Leishmania participam dos processos de adesão e penetração dos parasitos nos tecidos e células, tanto dos hospedeiros vertebrados quanto dos invertebrados. Portanto, compreender as interações entre a PLH de L. chagasi (PLHLc) e o açúcar ao qual ela se liga, a heparina, bem como demonstrar propriedades da proteína, é importante para desenvolver mecanismos que interrompam a progressão da infecção. Este trabalho foi dividido em dois manuscritos onde foi proposto para o primeiro identificar e realizar análises estruturais in silico e análises funcionais da PLHLc. A proteína foi sequenciada e identificada como sendo a proteína LPG3 de L. infantum chagasi, que foi então sintetizada, clonada e a composição da sua estrutura foi determinada. Cromatografia de gel filtração, eletroforese em gel não desnaturante e ensaio de cross- linking sugerem que a rPLHLc/LPG3 está organizada como um tetrâmero. Calorimetria de titulação isotérmica confirma a capacidade da proteína em se ligar a heparina com afinidade micromolar. A inibição da atividade ATPásica pela presença da heparina, juntamente com as análises in silico, sugerem que o sítio de ligação a heparina sobrepõe ao sitio de ligação ao ATP. No segundo trabalho a proteína recombinante produzida foi avaliada para o imunodiagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina apresentando sensibilidade de 79-87% e especificidade de 63-83%, indicando o potencial da rPLHLc/LPG3 recombinante no diagnóstico imunológico da LVC. / Leishmania infantum chagasi is an intracellular protozoan parasite responsible for causing a fatal disease in humans, visceral leishmaniasis. Identification of molecules from the parasites involved in the host cell infection process is important for designing strategies to control this disease. Among these molecules is Heparin Binding Protein (HBP), whose main characteristic is the ability to bind to carbohydrates present in glycoproteins or glycolipids. Evidence suggests that HBP's present on Leishmania surface participate in the adhesion of parasites to tissues of both vertebrate and invertebrate hosts as well as in cell invasion. Therefore, understanding the interactions between L. chagasi HBP (HBPLc) and the sugar to which it binds, heparin, as well as demonstrating protein properties, is important to develop mechanisms that interrupt the infection progression. This work was divided into two manuscripts where it was proposed to first identify and perform in silico structural and functional PLHLc analyzes. The protein was sequenced and identified as the L. infantum chagasi LPG3 protein, which was then synthesized, cloned and the composition of its structure determined. Gel filtration chromatography, non-denaturing gel electrophoresis and cross-linking assay suggest that rPLHLc/LPG3 is organized as a tetramer. Isothermal titration calorimetry confirms the ability of the protein to bind heparin with micromolar affinity. Inhibition of ATPase activity by the presence of heparin, together with in silico analyzes, suggests that the heparin binding site overlaps the ATP binding site. In the second study, the recombinant protein was evaluated for the Canine Visceral Leishmaniasis immunodiagnosis presenting a sensitivity of 79-87% and specificity of 63-83%, indicating the potential of recombinant rPLHLc/LPG3 in the immunological LVC diagnosis.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Introdução: O transplante renal e a terapia mais efetiva em restaurar a qualidade de vida e produtiva dos pacientes portadores de Doenca Renal Cronica (DRC). O Brasil tem o maior programa publico de transplante renal do mundo, utilizando em mais de 70% dos procedimentos, rim de doador falecido. Imunossupressao mais seletiva tem reduzido episodios de rejeicao e aumentado a sobrevida do enxerto e receptor de rim. Entretanto as equipes transplantadoras e os receptores de orgaos enfrentam um novo desafio: as infeccoes emergentes causadas por agentes oportunistas que podem comprometer este sucesso terapeutico. A Leishmaniose Visceral (LV) e uma zoonose causada por protozoario do genero Leishmania. Ocorre de forma endemica nos 5 continentes e ao acometer receptores de transplante renal, causa uma sindrome sistemica com caracteristicas clinicas atipicas. Tem seu diagnostico laboratorial, fatores de risco e tratamento ainda nao consensualidados. A LV em receptores de transplante renal, na grande maioria das vezes, tem evolucao desfavoravel com obito do paciente e/ou perda do enxerto. OBJETIVOS: Identificar fatores de risco para Leishmaniose Visceral (LV) em transplantados renais e analisar o impacto da doenca sobre enxertos e receptores de rim. MATERIAL E METODO: E um estudo tipo caso-controle, retrospectivo. Estudou-se 120 pacientes submetidos a transplante renal em area endemica para LV. O grupo de tratamento incluiu pacientes (n=20) que tiveram LV no pos-transplante. O grupo controle (n=100) foi composto por receptores de transplante renal sem LV no pos-transplante. O estudo investigou variaveis socioeconomicas, demograficas e clinicas, bem como dados de laboratorio. Analise Bivariada e Regressao Logistica Multipla foram realizadas para identificar fatores de risco para LV. RESULTADOS: O tempo medio entre o transplante e infeccao por Leishmania foi de 29,4 meses. A maioria (85%) dos casos foi curada. Em 95% dos casos o mielograma foi utilizado na identificacao das formas de Leishmania. Os Potenciais fatores de risco identificados nos pacientes transplantados renais incluiram: infeccao bacteriana apos o transplante (odds ratio [OR] = 3,00; intervalo de confianca de 95% [IC] = 0,96-9,37), infeccao por Citomegalovirus (CMV) apos o transplante (OR=5,29; IC 95% =1,27-21,97), convivio com gatos (OR= 5,74; IC 95% = 1,15-28,76) e ausencia de ruas pavimentadas no bairro (OR= 2,14; IC 95% = 0,71-6,43). Fator Rh negativo foi um fator protetor para LV (OR = 0,26; IC 95% = 0,06-1,02). CONCLUSAO: Infeccao por CMV no pos-transplante e o convivio com gatos elevaram significativamente o risco para LV em transplantados renais, enquanto o fator Rh negativo foi um fator protetor. O mielograma foi o exame mais utilizado na identificacao de Leishmania. No presente estudo, a LV apresentou-se na sua forma clinica classica, e apesar da gravidade, houve baixos indices de mortalidade dos receptores e perda dos enxertos renais / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-08-01T18:43:17Z No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Imunização de camundongos com fragmentos....pdf: 902012 bytes, checksum: 1ec320ac38a55ad96f41e4c20bcf883d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-01T18:43:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Imunização de camundongos com fragmentos....pdf: 902012 bytes, checksum: 1ec320ac38a55ad96f41e4c20bcf883d (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Leishmaniose visceral zoonótica (LV) é uma doença que afeta homens e cães e é causada por protozoários das espécies Leishmania infantum e Leishmania chagasi. O cão doméstico é o principal reservatório do agente causal. Uma vacina efetiva contra a LV canina poderá contribuir para o controle da infecção e/ou doença humana e canina. A resposta imune protetora contra a LV canina é do tipo celular (Th1). Em nosso laboratório, dentre um grupo de cinco antígenos recombinantes selecionados de uma biblioteca de cDNA de L. chagasi, usando-se uma mistura de soro de cães naturalmente infectados e que exibiam resposta imune humoral e celular específica, um fragmento da extremidade carboxila de uma cinesina com cauda de 6 histidinas (rLci2B-NH6), para permitir a purificação, foi escolhido para a avaliação do seu potencial como candidato a componente de uma vacina contra LV canina. No presente trabalho foi avaliada a imunização de camundongos BALB/c com rLci2BNH6/ saponina em associação com os plasmídeos pcDNA3.1-scmu-IL-12 e/ou pcDNA3.1- mu-IL-2. Os animais imunizados com rLci2B-NH6/saponina em associação com a IL-12 e/ou IL-2 produziram anticorpos IgG, IgG2a e IgG1 específicos. Esplenócitos desses animais exibiram proliferação, mas não produziram IFN-γ ou IL-5 após estimulação in vitro com rLci2B-NH6. Esses resultados sugerem que a adição de pcDNA3.1-mu-IL-2 no protocolo de imunização não é capaz de promover uma resposta imune predominantemente Th1. Também foi avaliada a imunização de camundongos com proteína recombinante quimérica (rLci2-NTCT- NH6) formada pelos domínios não repetitivos presentes nas extremidades amina e carboxila codificadas pelo gene da cinesina. Camundongos BALB/c imunizados com rLci2- NT-CT-NH6 ou uma proteína recombinante químerica controle, contendo 5 domínios repetitivos presentes em rLci2B-NH6 entre os domínios não repetitivos de rLci2-NT-CTNH6, apresentaram produção de IgG, IgG2a e IgG1. Esplenócitos desses animais exibiram proliferação, mas não produziram IFN-γ e apenas esplenócitos dos camundongos imunizados com rLci2-NT-5R-CT-NH6 sintetizaram IL-5, após estimulação in vitro com as respectivas proteínas. Contudo, durante a purificação de rLci2-NT-CT-NH6 e rLci2-NT-5R-CT-NH6 ocorreu intensa proteólise que pode ter resultado na destruição de epítopos capazes de induzir resposta Th1. Previamente, em nosso laboratório, foi observada a morte de alguns camundongos injetados com 100 μg saponina/dose, por isso, doses menores de saponina (50 ou 25 μg) foram avaliadas como adjuvante na indução de resposta imune a rLci2B-NH6. Os resultados da mensuração dos anticorpos foram semelhantes nos três grupos. Curiosamente, somente esplenócitos do grupo injetado com 25 μg/dose exibiram proliferação específica. O grupo injetado com 100 μg/dose produziu IFN-γ e IL-5 e o grupo injetado com 50 μg/dose sintetizou IFN-γ, mas não produziu IL-5, após estimulação in vitro com rLci2B-NH6. / Zoonotic visceral leishmaniasis (VL) is a disease that affects humans and dogs and is caused by protozoan species Leishmania infantum and Leishmania chagasi. There is evidence to suggest that the domestic dog is the main reservoir of the causative agent. An effective vaccine against canine VL may contribute to infection control and/or human and canine disease. The protective immune response against canine VL is cellular (Th1 type). In our laboratory, among a group of five recombinant antigens selected from a cDNA library of L. chagasi, using a mixture of sera from naturally infected dogs that showed humoral and cellular specific responses, one fragment of the carboxyl terminus of a kinesin with a 6 His- Tag (rLci2B-NH6) was chosen to evaluate its potential as a candidate component of a vaccine against canine VL. In the present study, we evaluated the immune response of BALB/c immunized with rLci2B-NH6/saponin in combination with pcDNA3.1-scmu-IL-12 and pcDNA3.1-mu-IL-2. The animals immunized with rLci2B-NH6 associated IL-12 and/or IL-2 produced IgG, IgG2a and IgG1 reactive to rLci2B-NH6. Splenocytes of these animals exhibited proliferation but failed to produce IFN-γ and IL-5 after in vitro stimulation with rLci2B-NH6. These results suggest that adding IL-2 was not enough to induce a predominantly Th1 immune response. We also analyzed the immunization of mice with recombinant chimeric (rLci2-NT-CT-NH6) formed by non-repetitive domains present in the amine and carboxyl ends encoded by the gene for kinesin. BALB/c mice immunized with rLci2-NT-CT-NH6 or a control chimeric recombinant protein containing 5 repeated domains present in rLci2B-NH6 between the domains of non-repetitive rLci2-NT-CT-NH6 showed production of IgG, IgG2a and IgG1. Splenocytes of these animals exhibited proliferation, but failed to produce IFN-γ and only splenocytes from mice immunized with rLci2-NT-5R-CTNH6 synthesized IL-5 after in vitro stimulation with the respective proteins. However, during the purification rLci2-NT-CT-NH6 and rLci2-NT-5R-CT-NH6 occurred intense proteolysis that may have resulted in the destruction of epitopes capable of inducing Th1. Previously, in our laboratory, it was observed the death of some mice injected with 100 μg saponin/dose, therefore, lower doses of saponin (50 or 25 μg) were evaluated as an adjuvant to induce an immune response to rLci2B-NH6. The results of measuring the antibodies were similar in the three groups. Interestingly, only splenocytes from the group injected with 25 μg/dose exhibited specific proliferation. The group injected with 100 μg/dose produced IFN-γ and IL- 5 and the group injected with 50 μg /dose synthesized IFN-γ, but did not produce IL-5 after in vitro stimulation with rLci2B-NH6.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-08-02T21:29:09Z No. of bitstreams: 1 Pricila Brito Magalhães. Ocorrencia de Leishmaniose visceral humana num ecossistema de manguezal.pdf: 2019963 bytes, checksum: 4cd382e434745709deb814ea88bad0c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-02T21:29:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pricila Brito Magalhães. Ocorrencia de Leishmaniose visceral humana num ecossistema de manguezal.pdf: 2019963 bytes, checksum: 4cd382e434745709deb814ea88bad0c0 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A leishmaniose visceral humana (LVH) é reconhecida como uma importante doença infecciosa emergente em muitas áreas do mundo. Recentemente, a ocorrência de LVH na periferia de grandes centros urbanos tem causado preocupação à saúde pública. É uma doença insidiosa, com espectro amplo, variando desde a infecção assintomática a casos com doença grave. Já foi descrita em diversos tipos de ambientes e climas, dentre eles não há referências sobre o encontro de casos em manguezal. Assim, o objetivo deste trabalho é Investigar um surto de Leishmaniose Visceral Humana em ecossistema de manguezal, descrevendo as características dos casos confirmados da doença, avaliando a prevalência de infecção por Leishmania em outros moradores dos domicílios com caso, identificando a presença do Lutzomyia longipalpis no domicílio e peridomicílio e, avaliando a prevalência de casos de leishmaniose canina na região. O surto ocorreu no município de Salinas da Margarida, cidade situada no nordeste do Brasil, em 2004. Todos os outros moradores do domicílio (controles) foram avaliados quanto à evidência de infecção prévia por Leishmania sp. usando o teste de Intradermo Reação de Montenegro (IDRM). A presença de pápula/ nódulo, ≥5 mm ou ulceração foi considerada como IDRM positiva. Os fatores de risco foram investigados através de questionário testado e validado. No total, 26 casos foram relatados em 2004. Cerca de 54% eram homens e 46% eram mulheres; 50% tinham menos de 10 anos e a maioria dos casos (69,2%) ocorreram no Distrito de Encarnação, seguido de Pirajuía (11,5%). Todos os pacientes foram diagnosticados pela demonstração parasitológica de Leishmania sp. ou pela apresentação clínica (febre, hepatoesplenomegalia e pancitopenia) com ou sem resposta à terapia antimonial. Foram capturados flebótomos (Lutzomyia longipalpis) em metade das casas (13/26) onde os casos moravam. Foram avaliados 145 moradores (26 casos e 119 controles). Em cerca de 35% dos domicílios 100% dos moradores não-caso apresentavam evidência de infecção. E em 81% das residências (21 de 26) metade ou mais dos moradores nãocaso tinham evidência de infecção. Cerca de 60% dos domicílios tinham cão e em metade das residências foi encontrado flebótomo (Lutzomyia longipalpis) numa única tentativa de captura. Dentre os fatores de risco investigados para LVH, o consumo/ abuso de bebida alcoólica foi significativamente associado à maior chance de desenvolver doença aparente (OR= 10,6). Nosso estudo indica, pela primeira vez, a ocorrência da LVH em um ecossistema de manguezal, inusitado para a adaptação do flebótomo. Os dados indicam também que a maioria dos moradores de domicílios onde ocorreu caso de LVH tem evidência de infecção por Leishmania sp., embora a maioria não desenvolva doença aparente. As implicações destes achados devem ser mais estudadas. / The Human Visceral Leishmaniasis (LVH) is recognized as an important emerging infectious disease in many areas of the world. Recently, the occurrence of LVH in the outskirts of large urban centers have caused concern to public health. It is an insidious disease, with broad spectrum, ranging from asymptomatic infection to cases of serious illness. It has been described in many types of environments and climates, among them there are no references about the meeting where mangroves. The objective of this study is to investigate an outbreak of Kala-azar in mangrove ecosystem, describing the characteristics of confirmed cases of the disease, assessing the prevalence of Leishmania infection in other residents of the homes with the case, identifying the presence of Lutzomyia longipalpis in domiciliary areas and assessing the prevalence of cases of canine leishmaniasis in the region. The outbreak occurred in the city of Salinas da Margarida, a city in northeastern Brazil, in 2004. All other household members (controls) were evaluated for evidence of prior infection with Leishmania sp. using the test “IntradermoReação de Montenegro (IDRM)”. The presence of papule / nodule ≥ 5 mm or ulceration was seen as positive IDRM. The risk factors were investigated through a questionnaire and tested. In total, 26 cases were reported in 2004. About 54% were men and 46% were women, 50% had less than 10 years and most cases (69.2%) occurred in the district of Incarnation, followed by Pirajuía (11.5%). All patients were diagnosed by parasitological demonstration of Leishmania sp. or by clinical presentation (fever, hepatosplenomegaly and pancytopenia) with or without response to antimonial therapy. Were captured sandflies (Lutzomyia longipalpis) in half of the homes (13/26) where the cases lived. We assessed 145 residents (26 cases and 119 controls). In about 35% of households 100% non-residents' case had evidence of infection. And in 81% of households (21 of 26) half or more of non-residents if they had evidence of infection. About 60% of households had dogs and half of the homes was found sandfly (Lutzomyia longipalpis) in a single attempt to capture. Among the investigated risk factors for LVH, the use / abuse of alcohol was significantly associated with greater chance to develop apparent disease (OR = 10.6). Our study indicates for the first time, the occurrence of LVH in a mangrove ecosystem, unusual for the adaptation of the sandfly. The data also indicate that most residents of households where there was case of LVH has evidence of infection by Leishmania sp., Although most do not develop apparent disease. The implications of these findings should be further investigated.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-08-21T18:19:33Z No. of bitstreams: 1 Tese_versao_final_Tália.pdf: 1946064 bytes, checksum: 3f43e249b71311bf82e36d76fdcdf61d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-21T18:19:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_versao_final_Tália.pdf: 1946064 bytes, checksum: 3f43e249b71311bf82e36d76fdcdf61d (MD5) / A leishmaniose visceral (LV) e uma doenca parasitaria grave que afeta anualmente 500.000 pessoas em 65 paises. No Brasil, mais de 15.000 casos de LV foram registrados entre os anos de 2007 e 2010, com 880 mortes. Esta elevada taxa de letalidade esta, em parte, relacionada a ineficiencia dos servicos de saude em diagnosticar e tratar precocemente os pacientes. O diagnostico da LV exige suspeicao clinica e confirmacao laboratorial eficientes. Assim, uma reestruturacao do algoritmo e do arsenal de metodos diagnosticos disponiveis nos servicos de saude pode ajudar a melhorar este cenario, aumentando o acesso e a disponibilizacao de testes nos municipios. O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho de diferentes abordagens para o diagnostico da LV humana no Brasil, atraves da avaliacao do desempenho do teste de aglutinacao direta (DAT) e do teste rapido IT-LEISH; do desenvolvimento e validacao de modelos preditivos clinico-laboratoriais e da avaliacao de metodos diagnosticos pela analise de classes latentes (ACL). O grupo de estudo compreendeu 404 pacientes, residentes no Piaui, Maranhao, Bahia e Minas Gerais, com suspeita de LV, submetidos ao exame do aspirado de medula ossea e a coleta de sangue para a realizacao dos testes sorologicos. Para a avaliacao do desempenho do DAT e do IT-LEISHR foi utilizada a analise de validacao classica (AVC) utilizando como padrao de referencia o exame do aspirado de medula ossea. Para o desenvolvimento e a validacao dos modelos preditivos foram utilizados dados epidemiologicos, clinicos e laboratoriais dos pacientes avaliados. Os modelos preditivos utilizando regressao logistica multipla (RLM) foram desenvolvidos no software STATAR e aqueles utilizando arvore de classificacao e regressao (CART) foram desenvolvidos no software SPLUSR. Para a avaliacao da aplicabilidade da ACL foram utilizados dados do estudo de validacao do IT-LEISHR e do DAT e a analise foi realizada no software R. O DAT e o IT-LEISH apresentaram, pela AVC, sensibilidades e especificidades de 90 e 93%; 93 e 97%, respectivamente. O modelo preditivo composto pelas variaveis clinicas e laboratoriais associadas ao teste rapido foi o que apresentou melhor desempenho, tanto pela RLM, quanto por CART (sensibilidade de 90,1% e especificidade de 97,2-97,4%). A ACL mostrou-se util na validacao de testes diagnosticos para LV no Brasil, estimando para o DAT e o IT-LEISH sensibilidades de 88,5 e 94% e especificidades de 95,4 e 100%, respectivamente. Diante do elevado desempenho apresentado, o DAT e o teste rapido IT-LEISH estao indicados para o diagnostico da LV humana no Brasil. Os modelos preditivos desenvolvidos sao uteis e poderiam ser utilizados em centros de referencia para a doenca no pais. A ACL esta indicada para validacao de testes diagnosticos no pais e quando possivel deve ser utilizada. / Visceral leishmaniasis (VL) is a severe parasitic disease that affects 500 000 people yearly in approximately 65 countries. In Brazil, more than 15.000 VL cases were reported between 2007 and 2010, with 880 deaths. This high fatality rate is partly related to the inefficiency of health services to diagnose and treat early patients. The diagnosis of VL requires effective clinical suspicion and laboratory confirmation. Thus, a restructuring of the algorithm and the arsenal of available diagnostic methods in health services can help improve this scenario, by increasing the access and availability of tests in the municipalities. The objective of this study was to evaluate the performance of several approaches for the diagnosis of human VL in Brazil, through of evaluation of performance of DAT and rapid test IT-LEISH; of developing and validating of predictive models and of evaluation of diagnostic methods by the latent class analysis (LCA). The study group was composed by 404 patients, from the states of Piaui, Maranhao, Bahia and Minas Gerais, with suggestive clinical of VL, submitted to the examination of bone marrow aspirate and blood collection for the performance of serological tests. To evaluate the performance of the DAT and the rapid test IT-LEISHR was used the classic validation analysis, using as reference standard the examination of bone marrow aspirate. To develop and validate the predictive models were used epidemiological, clinical and laboratory data of the patients. The predictive models using logistic regression were developed in STATAR software and those using classification and regression tree (CART) were developed in the software SPLUSR. To evaluate the applicability of the LCA were used data from the validation study of the rapid test IT-LEISHR and the DAT and the analysis was performed in software R. The DAT and the rapid test IT-LEISHR showed, by the classic validation analysis, sensitivities and specificities of 90 and 93%, 93 and 97% respectively. The predictive model composed of clinical-laboratory variables and rapid test IT-LEISHR developed using both logistic regression and the model CART showed the best performance (sensitivity 90.1% and a specificity of 97.2 to 97.4%). The LCA proved to be a useful tool for the validation of diagnostic methods for human VL in Brazil, estimating for the DAT and the rapid test IT-LEISHR sensitivities of 88.5 and 94% and specificities of 95.4 and 100% respectively. The DAT and the rapid test IT-LEISHR showed high performance and are indicated for the diagnosis of VL in Brazil. The predictive models developed are useful and could be used in reference centers for VL in the country. The LCA is indicated for validation of diagnostic tests in Brazil and when possible should be used.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-02-10T16:59:24Z No. of bitstreams: 1 Marcelo Bordoni Gonçalves. Prevalencia...2014...pdf: 1866831 bytes, checksum: 9966b538a1365afe227abbd317237298 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-02-10T16:59:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Marcelo Bordoni Gonçalves. Prevalencia...2014...pdf: 1866831 bytes, checksum: 9966b538a1365afe227abbd317237298 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-02-10T17:00:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Marcelo Bordoni Gonçalves. Prevalencia...2014...pdf: 1866831 bytes, checksum: 9966b538a1365afe227abbd317237298 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-10T17:00:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcelo Bordoni Gonçalves. Prevalencia...2014...pdf: 1866831 bytes, checksum: 9966b538a1365afe227abbd317237298 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A leishmaniose visceral é considerada um sério problema de saúde pública, encontrando‐se disseminada por todo o Brasil. Em áreas urbanas, o cão é considerado a principal fonte de infecção para o agente etiológico Leishmania infantum. A identificação de áreas e fatores de risco associados com a infecção por L. infantum, é primordial para o planejamento de medidas efetivas de prevenção e controle. O presente trabalho tem como objetivo identificar a prevalência, distribuição e prováveis fatores de risco para leishmaniose visceral canina (LVC) em Camaçari-BA. Foi realizado um estudo de corte transversal compreendendo 36 bairros do município. O cálculo do tamanho da amostra de cada bairro incluido no estudo, foi baseado no censo da campanha antirrábica canina,considerando-se 20% como prevalência esperada para LVC, 5% de erro esperado e nível de confiança de 95%, totalizando 800 cães a serem avaliados. As residências incluídas no estudo foram selecionadas aleatoriamente. Os proprietários dos animais foram submetidos a um questionário contendo variáveis epidemiológicas relevantes para LVC. Os animais foram avaliados clinicamente e foram coletadas amostras sanguíneas e esplênicas.O diagnóstico de LVC foi determinado por sorologia (ELISA) ou cultura de aspirado esplênico.Foi calculada a prevalência da LVC para as zonas orla e sede do município e para cada bairro avaliado.A razão de prevalência (RP) da LVC foi determinada em relação às variáveis epidemiológicas avaliadas nos questionários e aos sinais clínicos encontrados nos animais.Foram coletados dados referentes a 800 cães residentes em 530 domicílios. A infecção por L. infantumfoi detectada em 21,8% dos animais avaliados. Foi observada uma prevalência média de 32,9% na zona orla do município, com maior ocorrência nos bairros de Pé de areia (51,7%), Barra de Jacuípe (51,3%) e Monte Gordo (50,0%). A zona sede apresentou uma prevalência menor, com média de 11,9%, destacando-se os bairros Montenegro, Jardim Limoeiro e FICAM onde foram detectadas ocorrências mais elevadas, 37,5%, 31,8% e 29,4% respectivamente. As principais características associadas a um aumento da prevalência de LVC, foram localização na zona orla de Camaçari (RP 2,57; IC95% 1,90-3,47); ocorrência prévia de casos humanos de LV nas residências (RP 2,32; IC95% 1,47-3,77); ocorrência prévia de LVC na residência (RP 2,22; IC95% 1,64-3,00).Dentre ossinais clínicos avaliados, as maiores prevalências para LVC foram observadas nos animais que apresentavam onicogrifose (RP 2,43; IC95% 1,87-3,16) e sinais referentes à pina de orelha como úlcera (RP 2,35; IC95% 1,82-3,04) e crosta (RP 2,23; IC95% 1,69-2,93). Os resultados confirmam a endemicidade daLVC em Camaçari de uma forma mais representativa, além de apontar fatores e sinais clínicos relacionados com a alta prevalência da doença. Esses achados podem ser úteis no direcionamento de medidas efetivas para controle da leishmaniose na população canina e humana. / Visceral leishmaniasis is considered a serious harm to public health and it is spread throughout Brazil. In urban areas, dogs are considered the main source of infection for the etiologic agent Leishmania infantum. The identification of areas and risk factors associated with L. infantum infection is essential for planning effective measures to prevent and control this disease. This study aims to identify the prevalence, distribution and probable risk factors for canine visceral leishmaniasis (CVL) in Camaçari, Bahia. A cross-sectional study was conducted encompassing 36 districts of the municipality. Sample size was calculatedusing the census of canine anti rabies campaign, and the residences included in the study were randomly selected. The owners of the animals were submitted to a questionnaire containing relevant epidemiological variables for CVL. The animals were clinically assessed and blood and splenic aspirate samples were collected. The CVL diagnosis was determined by serology (ELISA) or splenic aspirate culture. The CVL prevalence was rated in the coast and urban areas. It was also rated in each evaluated neighborhoods of the study. The prevalence ratio (PR) of CVL was determined in relation to epidemiological variables assessed in the questionnaires and the clinical signs found in the animals. Data from 800 dogs living in 530 households were listed. L. infantum infection was found in 21,8% of animals evaluated. Was observed an average prevalence of 32,9% in the waterfront area of the city, mostly occurring in the neighborhoods of Pé de Areia (51,7%), Barra Jacuípe (51,3%) and Monte Gordo (50,0%). The seat of the municipality had a lower prevalence, with an average of 11,9%, while someneighborhoods: Montenegro, Jardim Limoeiro and FICAM stand out with higher occurrences, 37,5%, 31,8% and 29,4% respectively.The key features associated with an increased prevalence of CVL, location on the waterfront area of Camaçari(RP 2,57; IC95% 1,90-3,47),prior occurrence of human cases of VL at homes(RP 2,32; IC95% 1,47-3,77); previous occurrence of CVL in the residence (RP 2,22; IC95% 1,64-3,00). Among the evaluated clinical signs, the highest prevalence for CVL was observed in animals that had onychogryphosis(RP 2,43; IC95% 1,87-3,16) and signs related to pina ear as ulcer(RP 2,35; IC95% 1,82-3,04), and crust(RP 2,23; IC95% 1,69-2,93). The results confirm the endemicity of CVL in Camaçari in a representative way, while identifying factors and clinical signs associated with the high prevalence of the disease, as well. These findings may be useful in targeting effective measures for control of leishmaniasis in human and canine population.

Made available in DSpace on 2015-11-11T12:07:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 joanna_oliveira_ioc_dout_2012.pdf: 15696220 bytes, checksum: 6efb10fddae91e99a98db7885605ee11 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-05-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A coinfecção Leishmania/HIV vem sendo considerada uma associação em várias regiões do mundo e a evolução da doença é agravada pelo comprometimento imune causado por ambos os patógenos. A ativação crônica é um dos principais substratos imunopatogênicos decorrentes da infecção pelo HIV-1 e também pela Leishmania infatum. Neste contexto, este estudo teve por objetivo avaliar a influência da infecção por Leishmania no grau de comprometimento quantitativo e qualitativo dos linfócitos T e na ativação do sistema imune de pacientes coinfectados. Além disso, foram avaliados fatores microbianos associados à ativação celular na leishmaniose visceral (LV) e na coinfecção LV/HIV-1, bem como, o impacto da reconstituição imune pós-terapia antiretroviral (TARV) e do tratamento anti-Leishmania na recuperação da resposta imune celular na LV. Para isso, foram avaliados LV/HIV-1, sendo vinte e um casos com LV ativa e quatorze em fase de remissão pós-tratamento anti-leishmania. Sete casos fazem parte de um estudo longitudinal e ainda se encontram em acompanhamento até o momento Indivíduos com LV (fase ativa e de remissão), casos de HIV-1 e indivíduos sadios também foram estudados como controles. O comprometimento imune foi avaliado através das contagens absolutas de linfócitos T CD4 + , expressão de moléculas associadas à ativação celular (CD38) e à senescência/diferenciação replicativa (CD57 e CD27), bem como, pela caracterização das regiões variáveis da cadeia beta (V\03B2) do receptor de linfócitos T ex vivo e in vitro. Os fatores potencialmente associados à ativação celular também foram avaliados, entre eles: carga viral plasmática (CV), quantificação do parasitismo por Leishmania, níveis de lipopolissacarídeo (LPS), CD14 solúvel (sCD14), proteína intestinal ligadora de ácido graxo (IFABP) e o perfil de citocinas circulantes. Os pacientes LV/HIV-1 apresentaram contagens de linfócitos T CD4 + inferiores a 250 células/mm 3 , sem correlação com a CV e independente da fase clínica. Os maiores percentuais de linfócitos T CD8 + expressando CD38 foram observados nos pacientes coinfectados, comparados aos casos de HIV-1/AIDS e de LV apenas. Além disso, tais níveis permaneceram elevados apesar do uso de TARV e da menor carga parasitária pós-tratamento anti-leishmania. O acompanhamento prospectivo de um paciente LV/HIV-1 até longo tempo pós-tratamento para LV também mostrou a ausência de recuperação quantitativa e qualitativa da resposta imune celular, aliado à presença de lesões cutâneas concomitantes e episódio de reativação Altos níveis de LPS foram observados nos casos de LV apenas, os quais se correlacionaram com a ativação de células T, sCD14, IFABP e citocinas pró-inflamatórias, sugerindo que um produto bacteriano não associado à infecção por Leishmania e, de provável origem luminal, pode exercer um papel importante na imunopatogênese da LV. Os níveis de LPS também foram elevados na coinfecção LV/HIV-1 e embora não tenham sido superiores aos casos de HIV-1 apenas, se correlacionaram com o percentual de células T CD8 + ativadas e com o perfil de citocinas pró-inflamatórias. Consistente com o status de ativação celular e comprometimento imune, os pacientes LV/HIV-1 apresentaram níveis elevados de células senescentes e alterações no repertório do TCR, sem a mobilização diferencial de uma determinada família V\03B2 frente à coinfecção. Além disso, a análise prospectiva de cinco casos de LV/HIV-1 mostrou que o desfecho clínico da LV não pôde ser associado a um perfil de distribuição dos V\03B2 (mono/oligo/policlonal). Nossos resultados sugeriram que a associação LV/HIV-1 resulta num efeito sinérgico in vivo, no qual o grau de ativação celular e o perfil de citocinas liberadas podem estar diretamente relacionados à infecção por L. infantum e suas consequências imunopatogênicas, bem como à atividade estimulatória do LPS. Estudos prospectivos poderão auxiliar a validar o papel desses parâmetros imunológicos no prognóstico da associação Leishmania/HIV / Leishmania/HIV co-infection has been considered an association in many regions around the world and the outcome of this disease is aggravated by immune impairment caused by both pathogens. Chronic immune activation is a hallmark of HIV-1 and Leishmania infantum infection separately. In this context, our aim was to evaluate the influence of Leishmania infection in the degree of quantitative and qualitative impairment of T lymphocytes and in the cellular activation of co-infected patients. In addition, we also evaluated microbial products associated with cellular activation in visceral leishmaniasis (VL) and in VL/HIV co-infection, as well as, the impact of immune reconstitution after antiretroviral therapy (ART) and anti-leishmania treatment in the recovery of specific immune response to VL. For this purpose, VL/HIV-1 co-infected patients were evaluated: twenty one cases in the active phase of VL and fourteen in the remission. Among VL/HIV-1 patients, seven cases are part of a longitudinal study and they are still in follow up until this moment. Individuals with VL (active and remission), HIV-1 infection and healthy subjects were also investigated as controls. The immune impairment was evaluated by the absolute counts of CD4+ T cells, expression of molecules associated with cellular activation (CD38) and to replicative senescence/differentiation (CD57 and CD27), as well as, by the ex vivo and in vitro characterization of the variable regions of the beta chain (Vβ) of T cell receptor (TCR). Factors potentially associated with cellular activation were also assessed, such as: plasma viral load, Leishmania parasite load, lipopolyscharide levels (LPS), soluble CD14 (sCD14), intestinal fatty acid binding protein (IFABP) and the profile of plasma cytokines. VL/HIV-1 co-infected patients presented counts of CD4+ T cells lower than 250 cells/mm3, without correlation with viral load and independent of clinical phase of leishmaniasis. The highest percentages of CD8 T cells expressing CD38 were observed in co-infected patients, especially those with the visceral form of the disease, compared with HIV-1 and VL cases alone. Moreover, such high levels remained despite ART use and lower parasite load in the remission co-infected patients. The prospective analysis of one VL/HIV-1 patient until long term after anti-Leishmania treatment also showed the absence of quantitative and qualitative recovery of the cellular immune response, coupled with concomitant cutaneous lesions and reactivation episode. High levels of LPS were observed in VL cases alone, which correlated with T-cell activation, sCD14, IFABP and pro-inflammatory cytokines levels, suggesting that a bacterial molecule not associated with Leishmania infection, and probably from luminal origin may play an important role in the immunopathogenesis of VL. LPS levels were also elevated in VL/HIV-1 patients, and although no higher than HIV-1 cases, it were correlated with activated CD8+ T cells and with inflammatory cytokines. Consistent with the cellular activation state and immune impairment, co-infected patients presented high levels of senescent cells and alterations in the TCRVβ repertoire, without the differential mobilization of any Vβ for VL/HIV-1 co-infection. In addition, prospective analysis of five VL/HIV-1 cases showed the clinical outcome could not be associated with any Vβ profile (mono/oligo/polyclonal). Our results suggested that VL/HIV-1 association results in a synergistic effect in vivo, in which the degree of cellular activation and the profile of cytokines may be directly related to L.infantum infection and its immunopathogenic consequences, along with the stimulatory LPS activity. Prospective studies may help to validate the role of these immunologic parameters in the prognosis of Leishmania/HIV co-infection.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-04-11T16:10:17Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_LaraSaraiva.pdf: 5064404 bytes, checksum: 0de0a8fd07fbd0e6a577f8be885ebb1b (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-04-11T16:10:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_LaraSaraiva.pdf: 5064404 bytes, checksum: 0de0a8fd07fbd0e6a577f8be885ebb1b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-11T16:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_LaraSaraiva.pdf: 5064404 bytes, checksum: 0de0a8fd07fbd0e6a577f8be885ebb1b (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / O município de Belo Horizonte e sua região metropolitana ilustram o mais sério exemplo de expansão da leishmaniose visceral no sudest e do Brasil. O município e o parque Estadual do Sumidouro localizam-se no bioma cerrado, segundo ma ior bioma terrestre da América do Sul. Os objetivos deste projeto foram: estudar a variação sazonal da fauna flebotomínica no DS Venda Nova (Belo Horizonte) e no PES; descrever os padrões de riqueza e diversidade fauna flebotomínica nas formações vegetais do PES e no DS Venda Nova; de terminar a taxa de infecção natural de fêmeas capturadas; est udar a variação morfológica das populações de Lu. longipalpis coletadas nos diferentes ambientes; aval iar os impactos das ações de controle realizadas no DS Venda Nova nas taxas de oc orrência sazonal e dens idade das populações de flebotomíneos. Foram realizadas coletadas mensais no pe ríodo de agosto de 2011 a agosto de 2013. Os insetos foram identificados de acordo com Galati 2003. As fêmeas coletadas não ingurgitadas foram submetidas à extração de DNA e reações de PCR e de PCR-RFLP para a averiguação da infecção natural por espécies de Leishmania. Para comparação das localidades de estudo foi utilizada análise descritiva e índices ecológicos. Para a comparação morfológica trinta casais (quinze proveni ente do DS Venda Nova e quinze do PES) da espécie Lu. longipalpis foram medidos, e foram comparados tantos as médias como as variâncias dos caracteres entre os grupos. As ações de contro le da LV no DS Venda Nova realizadas nos período de janeiro de 2011 a dezembro de 2013 foram analisadas descritivamente e relacionadas à curva sazonal de Lu. longipalpis . A riqueza, a diversidade e a equitabilidade da fauna de flebotomíneos foram marcadamente dife rentes entre o DS Venda Nova e o PES. Na área urbana foram coletados 2.247 espécimes pertencentes a cinco gênero s e oito espécies, a curva de acumulação de espécies atingiu a satu ração na 19º amostragem. No DS Venda Nova a curva de variação sazonal foi delineada principalmente por Lu. longipalpis e 95,3% dos espécimes pertenciam a esta espécie. Lu. longipalpis apresentou taxas de infecção natural de 1,01% para Leishmania infantum e 1,77% para Leishmania braziliensis . No PES foram coletados 4.675 espécimes pertencentes a ci nco gêneros e 25 esp écies e a curva de acumulação atingiu a saturação na 16º amostragem. No PES não houve uma única espécie que apresentasse padrão tão pronunciado de dominância. Lu. longipalpis correspondeu a 5,35% dos espécimes. Diversas espécies com envolvi mento (suspeito ou comprovado) nos ciclos de LTA foram registradas. Uma fêmea do comple xo cortellezzi apresent ou detecção positiva para Le. braziliensis. A comparação morfométrica e de co mposição de feromônios indicou grande similaridade entre as duas populações de Lu. longipalpis avaliadas. A análise realizada para co rrelação das ações de controle com a variação sazonal de Lu. longipalpis indicam a necessidade de estudos pormenorizados para inferências mais robustas. Os resultados evidenciam a dominância da espécie Lu. longipalpis no ambiente urbano, e indicam que as mudanças antrópicas no cerrado podem a lterar a composição das populações de flebotomineos e os ciclos de tran smissão de patógenos aos humanos. / The municipality of Belo Horizonte and its me tropolitan region illustrate the most serious example of the expansion of leishmaniasis in southeast Brazil. The m unicipality of Belo Horizonte, its metropolitan region, and th e Sumidouro State Park, are in the Brazilian Savannah biome (Cerrado). This is the second la rgest terrestrial biome in South America. The aims of this project were: to study the seasona l variation of sand flies in SD Venda Nova (Belo Horizonte) and in the PES; to describe the ric hness and diversity pa tterns of sand flies in the vegetable formations of PES and SD Venda Nova; to determine the natural infection rate of females captured; to study the morphological variation of Lu. longipalpis populations from different environments; to evaluate the im pacts of LV control actio ns carried out in DS Venda Nova in seasonal occurr ence of sandflies. Sampling was performed every month over three consecutive days using HP light trap s form August 2011 to August 2013. The insects were identified according to Galati 2003. Th e non-engorged females were subjected to DNA extraction and PCR reactions and the PCR-RFLP for the investigation of natural infection with Leishmania species. To compare the study sites was used descriptive analysis and ecological indexes. In the morphological comp arison thirty couples (fifteen from the DS Venda Nova and fifteen PES) of Lu. longipalpis species were measured and the means and variances were compared. The LV control actions in DS Venda Nova conducted in the period from January 2011 to December 2013 were analyzed descriptively and related to seasonal curve Lu. longipalpis. Richness, diversity and evenness in the study areas, urban and park protected area, were distinct. In Venda Nova SD 2.427 sand flies specimen s belonging to five genera and eight species were collected and the species accumulation curve reached saturation in the 19º sampling. In Sumidouro State Park a total of 4,675 sand flie s specimens belonging to nine genera and 25 species were collected and the species accumulation curve reached the saturation in the 16º sampling. In Venda Nova SD the species seasonal variation curve is predominantly determined by Lu. longipalpis . In Venda Nova 95.3% of the collected specimens belonged to the species Lu. longipalpis and this species exhibited a natural infection rate of 1.01% for Le. infantum and 1.77% for Le. braziliensis . In the Sumidouro State Park a total of 4,675 sand fly specimens of 25 species bel onging to nine genera were collected. The seasonal curve is not delineated by a unique species. In the park area, Lu. longipalpis accounted for only 5.35% of the collect ed specimens. The main vector of Le. infantum , Lu. longipalpis, accounted for only 5.35% of the specimens collected. Proven or suspected vectors of Le. braziliensis were recorded, and one female of the cortellezzii complex tested positive for Le. braziliensis DNA. The results make evident the Lu. longipalpis dominance in the urban environment. Our d ata demonstrate that anthropic modifications in the savannah studied area sign ificantly altered the sandflies populations and the Leishmania transmission cycles.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:01:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 78.pdf: 8994728 bytes, checksum: 69b907a918fd891b88f8ba01c3be666b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Este trabalho buscou avaliar a eficiência do teste rápido SandFly em campo, tendo a PCR como padrão ouro. As coletas e a realização dos testes se deram na Ilha da Marambaia, Estado do Rio de Janeiro, que possui registros de LTA em humanos e LVC. As capturas de flebotomíneos ocorreram utilizando armadilhas luminosas do tipo CDC, que funcionaram entre 19:00 hr e 7:00 hr da manhã seguinte, durante 2 meses consecutivos, Setembro e Outubro de 2014, totalizando 8 coletas em 5 áreas distintas. No total, foram coletados 1505 espécimes de flebotomíneos. Para o diagnóstico de infecção, as fêmeas de cada coleta foram escolhidas ao acaso e separadas em pools de dez; cada pool foi macerado com o tampão de lise e metade de cada amostra foi utilizada nos testes; a outra metade foi encaminhada para realização da PCR. O restante dos flebotomíneos foi encaminhado para identificação de espécies. Nos TRs, 4 resultados foram positivos, 1 em Setembro (amostra A13) e 3 em Outubro (B11, B13 e B14) nos 49 pools analisados, todos sendo fracos. O diagnóstico pela PCR revelou infecção natural por Leishmania em flebotomíneos de 3 áreas na Ilha de Marambaia: Praia Grande, Praia de São José e Praia da Cutuca: 7 resultados positivos (A13, A17, A18, A19, A22, A23 e A24) nas 29 amostras de Setembro e 7 resultados positivos (B01, B02, B05, B06, B09, B13 e B17) nas 19 amostras com fêmeas de Outubro, totalizando 14 resultados positivos. Comparando ao padrão ouro, dos 49 testes realizados: 2 revelaram ser verdadeiros positivos, 33 verdadeiros negativos, 2 falsos positivos e 12 falsos negativos. / Cálculos foram feitos para avaliar a eficiência do TR comparado à PCR: a sensibilidade relativa encontrada foi de 14 por cento e a especificidade relativa de 94,2 por cento. O Valor Preditivo Positivo encontrado foi VPP= 0,50 enquanto o Valor Preditivo Negativo foi VPN= 0,73; a acurácia foi 0,71. Para verificar a concordância entre os testes diagnósticos foi utilizado o índice de concordância de Kappa. Esta concordância foi considerada fraca, com o valor de k= 0,1091 Concluiu-se que apesar do teste rápido SandFly possuir boa especificidade, a sensibilidade deve ser melhorada. Para identificar as espécies de flebotomíneos foi utilizada a nomenclatura de Galati (2003); dentre essas, 6 espécies foram identificadas Nyssomyia intermedia, Migoneimyia migonei, Pintomyia fischeri, Evandromyia edwardsi, Brumptomyia sp. e Micropygomyia capixaba. Cabe ressaltar que as taxas de infecção encontradas foram altas e carecem de mais investigações. A taxa mínima de infecção referente aos dois meses foi de 2,9 por cento e a taxa mínima de infecção em Praia Grande nos dois meses foi de 3,5 por cento. A melhora da sensibilidade do teste rápido e sua validação de campo apontam para um avanço significativo na luta contra as Leishmanioses. / This study aimed to evaluate the efficiency of the Sandfly rapid test in the field considering the PCR as the gold standard. The collections and the tests were performed in Marambaia Island (State of Rio de Janeiro) that has records of Tegumentar Leishmaniasis in humans and Visceral Leishmaniasis in dogs. The collections were performed using CDC light traps from 7 pm to 7 am, for 2 consecutive months - September and October 2014, totaling 8 collections in 5 different areas. A total of 1505 sandflies were collected. Females of each collection were chosen at random and stored in labeled pools of 10 specimens. Each pool was macerated with lysis buffer solution and half of each sample was used in the tests; the other half of the samples was referred for evaluation of infection by Leishmania spp. through PCR. The remaining sandflies were sent for species identification. 4 rapid test results were positive - 1 September (sample A13) and 3 October (B11, B13 and B14) in the 49 analyzed pools and all were weak. Diagnosis by PCR revealed Leishmania natural infection in 3 areas in Marambaia Island: Praia Grande, Praia de São José and Praia da Cutuca. It was 7 positive results (A13, A17, A18, A19, A22, A23 and A24) in 29 samples of September and 7 positive results (B01, B02, B05, B06, B09, B13 and B17) in 19 samples with October females, totaling 14 positive results. Considering PCR as the gold standard, 2 rapid tests results were evaluated as true positives, 33 as true negative, 2 as false positives and 12 as false negatives. Some calculations were performed to evaluate the rapid test efficiency compared to PCR. The relative sensitivity was 14 percent and the relative specificity was 94.2 percent. The Positive Predictive Value was PPV = 0.50 while the Negative Predictive Value was 0.73. The accuracy was 0.71. ^ien / The Kappa agreement index was used to verify the correlation between the diagnostic tests, that was considered weak, with the value of k = 0.1091. It was concluded that despite the Sandfly rapid test has a good specificity the sensitivity needs to be improved. 6 species of sandflies were identified: Nyssomyia intermedia, Migoneimyia migonei, Pintomyia fischeri, Evandromyia edwardsi, Brumptomyia sp. and Micropygomyia capixaba. It is noteworthy that infection rates found were high and require more investigation. The minimum infection rate of the two months was 2.9 percent and the minimum rate of infection in Praia Grande within two months was 3.5 percent. The improvement of the rapid test sensitivity and its field validation points to a significant advance in the fight against Leishmaniasis. (AU)^ien

Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-08-20T16:55:32Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 1353741 bytes, checksum: d35a91a5ba75fa3d48e954528062cc3a (MD5) / Rejected by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br), reason: O PDF não é o da descrição. on 2014-08-25T13:06:19Z (GMT) / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-08-28T19:19:41Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 2387079 bytes, checksum: 408539ffed7be7b6d46f7b881d7c3cc6 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-08-29T16:38:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 2387079 bytes, checksum: 408539ffed7be7b6d46f7b881d7c3cc6 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-29T16:43:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 2387079 bytes, checksum: 408539ffed7be7b6d46f7b881d7c3cc6 (MD5) Previous issue date: 2013 / O presente estudo avaliou a utilização de lipossomas convencionais como veículos vetores do antimônio trivalente, na forma de tártaro emético, bem como sua associação ao ácido ascórbico, para o tratamento da leishmaniose visceral no modelo murino. Lipossomas constituídos por distearoilfosfatidilcolina/colesterol (5:4) foram obtidos pela metodologia de congelamento/descongelamento. A caracterização da formulação mostrou tamanho aproximado de 222,5 nm, índice de polidispersão de 0,214, eficiência de encapsulação de 15%, concentração final de 4 mg SbIII/mL e cinética de liberação bifásica avaliada in vitro. Lipossomas vazios, igualmente obtidos e hidratados com tampão fosfato serviram como controle. Camundongos BALB/c com idade entre 6 e 8 semanas foram inoculados com 1 x 107 promastigotas de Leishmania (Leishmania) infantum (cepa C43) por via endovenosa. Após seis semanas de infecção, os animais foram divididos em sete grupos (n=8) e tratados por via intraperitoneal, em dose única com: (1) tampão fosfato, (2) antimônio trivalente (SbIII) - 9 mgSb/Kg, (3) lipossomas vazios, (4) lipossomas de SbIII (9 mgSb/Kg), (5) ácido ascórbico (AA) - 300 mg/kg; (6) associação do AA (300 mg/kg) ao SbIII (9 mgSb/kg) e (7) associação de AA (300 mg/kg) aos lipossomas de SbIII (9 mgSb/kg). Dez dias após o tratamento, os animais foram eutanasiados e avaliou-se: a carga parasitária no fígado, baço e medula óssea pelo método de diluição limitante; o padrão de células do baço por citometria de fluxo; a função renal, hepática e cardíaca por análises bioquímicas e o padrão histopatológico do fígado, rins e coração. Observou-se redução significativa na carga parasitária após tratamento com antimônio trivalente lipossomal no fígado, baço e medula óssea de 47%, 33% e 47%, respectivamente, indicando a capacidade do sistema de vetorização de direcionar o medicamento para esses compartimentos. A administração concomitante do AA e SbIII livre ou em formulação lipossomal não interferiu na atividade leishmanicida do SbIII. Não foi observada diminuição na carga parasitária após tratamento com antimônio trivalente livre em nenhum dos órgãos avaliados. Os resultados mostraram nenhuma alteração no padrão fenotípico de células do baço por citometria de fluxo ou nas funções hepática, cardíaca e renal por análises bioquímicas. As análises histopatológicas mostraram que a coadministração dos lipossomas de SbIII e AA foi capaz de preservar os tecidos hepático e renal quando comparados os diferentes grupos experimentais. Os resultados desse trabalho permitiram concluir que a referida preparação lipossomal representa uma alternativa terapêutica capaz de reduzir a carga parasitária nos diferentes órgãos alvo, com potencial para a eliminação do parasito na medula óssea. A coadministração do AA aos lipossomas de SbIII acarretou redução na toxicidade do SbIII. Em conjunto, nossos dados apontam os benefícios do encapsulamento do SbIII em lipossomas unilamelares demonstrados pela redução das alterações histopatológicas para fígado e rins, particularmente em combinação com AA. Acreditamos que nosso trabalho será útil para a proposição de novos regimes terapêuticos para o tratamento da leishmaniose visceral, garantindo a adesão do paciente à terapia devido à redução dos efeitos colaterais. _______________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The present study evaluated the utilization of conventional liposomes as carriers of trivalent antimony (SbIII), and its association with ascorbic acid, for the treatment of murine visceral leishmaniasis. Liposomes composed of diestearoylphosphatidylcholine and cholesterol (5:4) were obtained according to the freeze / thaw technique and hydrated in a solution of tartar emetic. Empty liposomes, hydrated in phosphate buffer, served as control vehicles. Characterization of the liposomal formulation revealed size, polydispersity index and encapsulation efficiency of 222.5 nm, 0.214 and 15%, respectively, for a formulation containing 4 mg SbIII/mL. It also displayed biphasic release kinetics in vitro. BALB/c mice, aged 6 to 8 weeks, were intravenously inoculated with 1 x 107 Leishmania (Leishmania) infantum promastigotes (C43 strain). Six weeks post infection, the animals were divided into seven groups (n=8) and treated intraperitoneally, as a single dose, with either (1) phosphate buffer, (2) SbIII at 9 mg Sb/kg, (3) empty liposomes, (4) SbIII-entrapped liposomes at 9 mg Sb/kg, (5) ascorbic acid (AA) at 300 mg/kg, (6) association of AA (300 mg/kg) with SbIII at 9 mg Sb/kg or (7) association of AA (300 mg/kg) with SbIII-entrapped liposomes at 9 mg Sb/kg. Ten days after treatment, animals were euthanized and the parasite load associated to the liver, spleen and bone marrow evaluated through the limiting dilution technique. Immunophenotyping of spleen cells was performed using flow cytometry. Enzyme activities in the serum were used to monitor hepatic, kidney and cardiac functions. Histopathological examinations of the liver, kidney and heart were also conducted. After treatment with SbIII-entrapped liposomes it was observed 47%, 33% and 47%, reductions in parasite load in the liver, spleen and bone marrow, respectively, indicating the ability of such delivery system to target the active principle to these compartments. Parallel administration of ascorbic acid with either free SbIII or SbIII-entrapped liposomes did not interfere with SbIII´s leishmanicide activity. No reduction in parasite load was observed after treatment with free SbIII for any of the investigated organs. Our results did not reveal any significant alteration in the profile of spleen cells. In addition, no impairment in the hepatic, renal and cardiac functions were observed. Histopathological analyses demonstrated that the co-administration of ascorbic acid with SbIII-entrapped liposomes was able to preserve the integrity of the hepatic and kidney tissues, in comparison to those from other experimental groups. The obtained results allowed us to conclude that our proposed SbIII liposomal preparation represents a therapeutic alternative able to reduce parasite burden with the potential to eliminate parasitism at the bone marrow. Co-administration of AA and SbIII-entrapped liposomes promoted reduced toxicity of SbIII. Collectively, our data extended the proposed benefits of unilamellar liposomes carrying SbIII by demonstrating their reduced toxicity, particularly in combination with ascorbic acid to the liver and kidney tissues. We believe our investigation can be useful for the proposal of novel therapeutic regimens to successfully treat visceral leishmaniasis aiming to guarantee patient compliance whilst minimizing potential side effects.