A leishmaniose visceral americana (LVA) é uma doença em expansão no Brasil, para a qual se dispõem de poucas, e aparentemente ineficientes, estratégias de controle. Um dos grandes problemas para a contenção da leishmaniose visceral americana é a falta de um método acurado de identificação dos cães infectados, considerados os principais reservatórios da doença no meio urbano. Neste sentido, a caracterização de marcadores clínico-laboratoriais da infecção neste reservatório e a avaliação mais adequada do desempenho de testes para diagnóstico da infecção podem contribuir para aumentar a efetividade das estratégias de controle da LVA. Com isso, o presente estudo tem dois objetivos principais: (1) desenvolver e validar um modelo de predição para o parasitismo por Leishmania chagasi em cães, baseado em resultados de testes sorológicos e sinais clínicos e (2) avaliar a sensibilidade e especificidade de critérios clínicos, sorológicos e parasitológicos para detecção de infecção canina por L. chagasi mediante análise de classe latente. O primeiro objetivo foi desenvolvido a partir de estudo em que foram obtidos dados de exames clínico, sorológico e parasitológico de todos os cães, suspeitos ou não de LVA, atendidos no Hospital Veterinário Universitário da Universidade Federal do Piauí (HVU-UFPI), em Teresina, nos anos de 2003 e 2004, totalizando 1412 animais. Modelos de regressão logística foram construídos com os animais atendidos em 2003 com a finalidade de desenvolver um modelo preditivo para o parasitismo com base nos sinais clínicos e resultados de sorologia por Imunofluorescência Indireta (IFI). Este modelo foi validado nos cães atendidos no hospital em 2004. Para a avaliação da área abaixo da curva ROC (auROC), sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivo (VPP), valores preditivos negativo (VPN) e acurácia global, foram criados três modelos: um somente baseado nas variáveis clínicas, outro considerando somente o resultado sorológico e um último considerando conjuntamente a clínica e a sorologia. Dentre os três, o último modelo apresentou o melhor desempenho (auROC=90,1%, sensibilidade=82,4%, especificidade=81,6%, VPP=73,4%, VPN=88,2% e acurácia global=81,9%). Conclui-se que o uso de modelos preditivos baseados em critérios clínicos e sorológicos para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina pode ser de utilidade no processo de avaliação da infecção canina, promovendo maior agilidade na contenção destes animais com a finalidade de reduzir os níveis de transmissão. O segundo objetivo foi desenvolvido por meio de um estudo transversal com 715 cães de idade entre 1 mês e 13 anos, com raça variada avaliados por clínicos veterinários no HVU-UFPI, no período de janeiro a dezembro de 2003. As sensibilidades e especificidades de critérios clínicos, sorológicos e parasitológicos para detecção de infecção canina por Leishmania chagasi foram estimadas por meio de análise de classe latente, considerando quatro modelos de testes e diferentes pontos de corte. As melhores sensibilidades estimadas para os critérios clínico, sorológico e parasitológico foram de 60%, 95% e 66%, respectivamente. Já as melhores especificidades estimadas para os critérios clínico, sorológico e parasitológico foram de 77%, 90% e 100%, respectivamente. Conclui-se que o uso do exame parasitológico como padrão-ouro para validação de testes diagnósticos não é apropriado e que os indicadores de acurácia dos testes avaliados são insuficientes e não justificam que eles sejam usados isoladamente para diagnóstico da infecção com a finalidade de controle da doença. / American visceral leishmaniasis (AVL) is an expanding disease in Brazil, for which few, and apparently inefficient, control strategies are available. A major problem for the containment of visceral leishmaniasis is the lack of an accurate test for the identification of infected dogs, which are considered the main reservoirs of the disease in urban areas. In this sense, the characterization of clinical and laboratory markers of the infection in this reservoir, as well as, a more appropriate assessment of the performance of tests for the diagnosis of infection, might increase the effectiveness of control strategies for AVL. Thus, this study has two main objectives: (1) to develop and validate a prediction model for parasitism by Leishmania chagasi in dogs, based on the results of serological tests and clinical signs and (2) to evaluate the sensitivity and specificity of a clinical criterion, and of parasitological and serological tests for canine infection by L. chagasi using latent class analysis. The first goal was developed from a study in which clinical, serological and parasitological data were obtained for all dogs, suspicious or not to AVL, admitted at the Veterinary Hospital at the Federal University of Piauí, Teresina, in the years of 2003 and 2004, totaling 1412 animals. Logistic regression models were constructed with the animals admitted in 2003 with the aim of developing a predictive model for parasitism based on clinical signs and results of serology by indirect immunofluorescence (IIF). This model was validated in dogs admitted at the hospital in 2004. To evaluate the area under the ROC curve (AuROC), sensitivity, specificity, positive predictive value (PPV), negative predictive value (NPV) and overall accuracy, three models were developed: one based only on clinical variables, other only with the serological results and a final model based on both the clinical and serological data. Among the three, the last model showed the best performance (AuROC=90.1%, sensitivity 82.4%, specificity=81.6%, PPV=73.4% NPV=88.2% and overall accuracy=81.9%). It is concluded that the use of predictive models based on clinical and serological data for diagnosis of canine visceral leishmaniasis might be useful in the evaluation of canine infection, allowing the anticipation of ontainment of these animals in order to reduce transmission levels. The second goal was developed through a cross-sectional study of 715 dogs aged between 1 month and 13 years, with varied races evaluated by veterinarians at VUH-UFPI in the period January to December 2003. The sensitivities and specificities of clinical, parasitological and serological tests for detection of canine infection by Leishmania chagasi were estimated using latent class analysis, considering four types of models and different cutoffs. The best sensitivity estimates for the clinical, serological and parasitological tests were 60%, 95% and 66% respectively. The best estimates for the specificity of clinical, serological and parasitological tests were 77%, 90% and 100% respectively. It is concluded that the use of parasitological assays as the gold standard for validation of diagnostic tests is not appropriate and that the indicators of accuracy of the tests evaluated are insufficient to justify that they are used alone for diagnosis of infection in order to control the disease.

Pancitopenia é uma manifestação frequente na leishmaniose visceral (LV) cuja patogenia não é esclarecida. Neste estudo, a patogenia foi analisada em cão e camundongo com LV. Cães com LV, naturalmente infectados, sem coinfecção com erliquiose, foram classificados de acordo com as alterações hematimétricas em: pancitopenia, bicitopenia, citopenia e sem alterações hematológicas. O mielograma revelou um aumento na proporção mielóide:eritróide nos cães infectados em relação ao grupo controle. Havia mudanças no padrão morfológico e quantitativo nas células sanguíneas, particularmente na série eritróide em cães pancitopênicos. Na contagem diferencial, notou-se a diminuição da porcentagem de linfócitos, plasmócitos e monócitos que tinham correlação com a gravidade das alterações hematológicas. No exame histopatológico da medula óssea, observaram-se aumento na celularidade, hiperplasia megacariocítica, proliferação macrofágica e degeneração e/ou necrose. No estudo de fatores de crescimento e citocinas, o aumento da expressão de IFN-?, GM-CSF, IL-7 e TNF-? parece assumir um papel importante nos cães bicitopênicos, e IL-3 nos cães com citopenia. A expressão de IGF-I, em contraste, estava diminuída significantemente em cães pancitopênicos em relação aos demais grupos. Os dados sugerem, portanto, a ocorrência de uma dishematopoiese com a diminuição da expressão de IGF-I na doença severa. Em camundongos C57BL/6 infectados por via intravenosa com L. (L.) donovani, as alterações hematológicas foram analisadas com 28 dias pós-infecção quando vimos o desenvolvimento de um quadro pancitopênico. O mielograma revelou displasia celular, aumento na proporção mielóide:eritróide e do índice de maturação mielóide, bem como, uma hipoplasia eritróide. Além disso, observamos um aumento significante na porcentagem de linfócitos e macrófagos nos animais infectados. No exame histopatológico havia um aumento significante da celularidade com infiltrado e/ou proliferação de células mononucleares similares a macrófagos. Na caracterização dessas células por microscopia confocal, estas expressavam F4/80, um marcador típico de macrófagos residentes e/ou estromais. Por citometria de fluxo, constatamos um aumento significante na porcentagem de células F4/80+ em proliferação. Além disso, utilizamos outros marcadores expressos em macrófagos como CD169 e CD11b, e vimos que a população F4/80+CD169+CD11b+ estava diminuída nos camundongos infectados. Com base nesses dados, consideramos o camundongo C57BL/6 infectado por L. (L.) donovani um bom modelo para o estudo da dishematopoiese na LV e que os macrófagos estromais devam ter um papel importante, o que merece estudos futuros mais aprofundados. / Pancytopenia is a common manifestation in visceral leishmaniasis (VL) that may contribute to lethality. We assessed the factors involved in the pathogenesis of pancytopenia in canine and murine VL. We selected dogs with VL but without erlichiosis that were classified according to hematological alterations in: pancytopenia, bicytopenia, cytopenia and dogs infected without hematological changes. The myelogram revealed an increase in the myeloid:erythroid cell ratio in infected dogs compared with healthy dogs and changes in the morphological and quantitative patterns in hematopoietic cells, particularly in erythroid series of the pancytopenic dogs. In differential cell count, decrease in the percentage of lymphocytes, plasma cells and monocytes correlated with the severity of hematological changes. In the histopathological examination of the bone marrow, the main alterations were the increase in cellularity, megakaryocytic hyperplasia, macrophage proliferation and degeneration and/or necrosis. Addressing the growth factors and cytokines, increased expression of IFN-?, GM-CSF, IL-7 and TNF-? seemingly plays an important role in bicytopenic dogs, and the expression fo IL-3 in dogs with cytopenia. In contrast, pancytopenic dogs had a significant decrease in the IGF-I expression compared with other groups. The data suggest a dyshematopoiesis with participation of IGF-I in severe stage of disease. In L. (L.) donovani-intravenously infected C57BL / 6 mice hematological changes were evaluated at 28 days post-infection when pancytopenia was established. The bone marrow examination showed cellular morphological changes, an increase in myeloid:erythroid ratio and myeloid maturation index, and erythroid hypoplasia. Moreover, we observed a significant increase in the percentage of lymphocytes and macrophages in infected animals. In histopathological examination, we observed a significant increase in the cellularity accompanied by infiltration and/or proliferation of mononuclear cells resembling macrophages. We characterized these cells as F4/80+ cells by confocal microscopy, a typical marker of residents and/or stromal macrophages. Using flow cytometry, we found a significant increase in the percentage of F4/80 in proliferation. In addition, we used other macrophage markers such as CD169 and CD11b, when a reduction in F4/80+CD169+CD11b+ population was shown in infected mice. Based on these data, we may consider L. (L.) donovani-infected C57BL/6 mouse a good model for the study of dyshematopoiesis in VL and that stromal macrophage may have important role in the in the hematopoiesis that deserve further studies .

A leishmaniose visceral é uma infecção grave que leva a pancitopenia. Quando se trata de disfunções medulares decorrentes de infecção por Leishmania (Leishmania) infantum há poucas abordagens descrevendo as alterações na mielopoiese e os mecanismos que levam a pancitopenia na LV. Alguns estudos demonstram uma relação importante entre a pancitopenia e o fator de crescimento insulin-like growth fator-I (IGF-I), no entanto, o seu papel endógeno na hematopoiese ainda não está claro. Propomos estudar a influência desse fator na hematopoiese e sua relação com o desenvolvimento da pancitopenia em hamsteres infectados por via intra-peritoneal com 2x107 de amastigotas por L. (L.) infantum. Avaliamos em 90 e 120 dias pós-infecção a LDU (Leishman-Donovan units) no baço e fígado, quando observamos tendência à progressão da infecção. Aos 60 dias pós-infecção, os animais com LV desenvolveram a plaquetopenia como primeira alteração hematológica, e a partir dos 90 dias pós-infecção, a anemia, e a leucopenia com reduções significantes nos leucócitos totais, linfócitos e neutrófilos. Já aos 120 dias de infecção, os leucócitos totais diminuíram significantemente acompanhados por uma redução de linfócitos, monócitos e eosinófilos. A partir desses dados, focamos a análise da medula óssea nos hamsteres com 90 e 120 pós-infecção. No mielograma, vimos alterações somente nos hamsteres com LV aos 90 dias pós-infecção, com um aumento significante na proporção células mielóides imaturas: células mielóides maduras. Na biópsia da tíbia, houve um aumento significante da celularidade quando comparados com seu respectivo controle, apenas no período de 90 dias pós-infecção. Em adição, observamos uma proliferação e/ou infiltrado macrofágico significante nos hamsteres com LV, mas sem diferença estatística nos períodos de 90 e 120 dias pós-infecção. Na avaliação semi-quantitativa de fibras de reticulina, somente aos 90 dias pós-infecção, observamos aumento significante nos infectados comparados aos controles, caracterizando um quadro fibrótico. Foi medida a expressão de mRNA de IGF-I por PCR em tempo real, aos 90 e 120 dias pós-infecção, onde ocorreu um aumento significante da expressão de IGF-I nos animais infectados em relação aos controles aos 90 dias. Como expostos, os hamsteres com LV apresentam alterações hematológicas como anemia, leucopenia e plaquetopenia, e ainda alterações na medula óssea como aumento da celularidade, proliferação macrofágica e fibrose acompanhados por um aumento da expressão de IGF-I. Assim podemos concluir que nossos dados indicam que o hamster se constitui num bom modelo para o estudo da patogênese da pancitopenia e das alterações medulares decorrentes da infecção por L.(L.) infantum. Neste modelo, ocorre alteração da expressão de IGF-I durante a evolução da infecção com possível papel na patogenia da pancitopenia. / Visceral leishmaniasis is a serious infection that leads to pancytopenia. When it comes to spinal cord dysfunction resulting from infection Leishmania (Leishmania) infantum there are few approaches describing the changes in myelopoiesis and mechanisms that lead to pancytopenia in LV. Some studies have shown a significant relationship between pancytopenia and insulin-like growth factor-growth factor I (IGF-I), however, their endogenous role in hematopoiesis is still not clear. We propose to study the influence of this factor in hematopoiesis and its relationship to the development of pancytopenia in hamsters infected intraperitoneally with 2x107 amastigotes by L. (L.) infantum. Evaluated at 90 and 120 days post-infection the LDU (Leishman-Donovan units) in the spleen and liver, when we observed a tendency to progression of the infection. At 60 days post-infection, animals with LV developed thrombocytopenia as the first hematologic changes, and from 90 days post-infection, anemia, and leukopenia with significant reductions in total leukocytes, lymphocytes and neutrophils. Already at 120 days of infection, total leukocytes decreased significantly accompanied by a decrease lymphocytes, monocytes and eosinophils. From these data, we focus on the analysis of the bone marrow in hamsters with 90 and 120 post-infection. The myelogram changes seen only in hamsters with LV at 90 days post-infection, with a significant increase in the proportion immature myeloid cells: mature myeloid cells. Biopsy of the tibia, there was a significant increase in cellularity compared with their respective control, only 90 days post-infection. In addition, we observed a proliferation and / or infiltration significant macrophage in hamsters with LV, but no statistical difference in the periods of 90 and 120 days post-infection. In semi-quantitative assessment of reticulin fibers, only at 90 days post-infection, we observed a significant increase in infected compared to controls, featuring a fibrous framework. MRNA expression of IGF-I was measured by real-time PCR, at 90 and 120 days post-infection, where a significant increase in IGF-I expression in infected animals compared to controls at 90 days occurred. As set out, the present hamsters VL hematological disorders such as anemia, leukopenia and thrombocytopenia, as well as changes in bone marrow cellularity increased, macrophage proliferation and fibrosis accompanied by a reduction in IGF-I expression. Thus we can conclude that our data indicate that the hamster is a good model to study the pathogenesis of pancytopenia and marrow changes resulting from infection by L. (L.) Infantum. In this model, alteration of IGF-I expression during the course of infection with a possible role in the pathogenesis of pancytopenia.

As leishmanioses constituem um grupo de zoonoses causadas por várias espécies do gênero Leishmania. O diagnóstico molecular associado aos exames clínicos, sorológicos e parasitológicos facilitam a investigação epidemiológica e controle das infecções. A PCR convencional (cPCR) e em tempo real (qPCR) são utilizadas para detectar moléculas de DNA do parasita em diferentes amostras biológicas, no entanto, quando a carga parasitária é baixa, resultados falsos-negativos são comuns na rotina diagnóstica. O objetivo deste estudo foi o avaliar a utilidade dos iniciadores para qPCR para substituir ou associar à cPCR no diagnóstico molecular da leishmaniose visceral (LV) e leishmaniose tegumentar americana (LTA). Foram testados iniciadores moleculares pelo sistema TaqMan® com o objetivo de discriminar Leishmania (Viannia) braziliensis e Leishmania (Leishmania) infantum chagasi a partir de sequências da actina de Leishmania. O gênero Leishmania foi identificado pelos iniciadores LEISH18S que amplifica uma região 18S de Leishmania. Os iniciadores ACTLDon amplifica uma região da actina de L. (L.) infantum chagasi. L. (V.) braziliensis foi identificada pelos iniciadores ACTLVian, que amplifica uma região da actina do complexo L. (V.) braziliensis. Foram testadas 581 amostras de DNA, extraídas de sangue, necropsias de órgãos, aspirados de linfonodo ou medula e biópsia de lesão. Para LV foram testadas 361 amostras (243 caninas e 118 humanas). Destas, 214 foram positivas na cPCR, foi o padrão ouro, e a sensibilidade com os iniciadores da qPCR variou de 92,99% (199) a 95,32% (204). A especificidade foi determinada por 147 amostras negativas na cPCR e variou de 95,91% (141) a 98,63% (145). Os índices de concordância variaram de 92,99% (RV1/RV2; LEISH18S e ACTLDon) a 95,32% (RV1-RV2 e LEISH18S). Foram testadas 220 amostras para LTA. A especificidade com os iniciadores foi determinada por 80 amostras negativas e os resultados foram 98,75% e 100% para LEISH18S e ACTLVian respectivamente, e das 140 amostras positivas na cPCR 129 (92.14%) e 124 (88,57%) foram positivas com os iniciadores LEISH18S e ACTLVian respectivamente. Os índices de concordância foram de 88,57% (LB-3C/LU-5A/ACTLVian/LEISH18S) e 92,14% (LB-3C/LU-5A e LEISH18S). Estes resultados mostram que a associação dos iniciadores para qPCR em conjunto com a cPCR pode aumentar a detecção do parasita em amostras clínicas. / Leishmaniasis are a group of zoonosis caused by several species belonging to the genus Leishmania. The molecular diagnostic associated with the clinical, serological and parasitological examination favor the epidemiological investigation and the infection control. The conventional PCR (cPCR) and the real time PCR (qPCR) are used to detect the parasite as from DNA molecules in a number of biological samples, however, when the parasite load is low, false results are common in the diagnostic routine. The ain of the present study was to evaluate the advantage of the primers in qPCR in order to replace or associate with cPCR in the molecular diagnosis of visceral leishmaniasis (VL) and cutaneous leishmaniasis (CL) molecular diagnostic. The primers were tested on TaqMan® system in order to discriminate Leishmania (Viannia) braziliensis and Leshmania (Leishmania) infantum chagasi based on a sequence of Leishmania actin. The genus Leishmania was recognized by the primer LEISH18S, which amplifies an 18S region of Leishmania. The primer ACTLDon amplifies a region of the L. (L.) infantum chagasi actin. The L. (V.) braziliensis was determined by the primer ACTLVian and this primer amplifies a region of the L. (V.) braziliensis complex actin. A total of 581 DNA samples were tested. These samples were extracted from blood, organs necropsy, lymph node and bone marrow aspirate and lesion biopsy. A number of 361 samples (243 canine and 118 human) were tested for VL. From these 361 samples, 241 were positive in cPCR and the sensitivity in the qPCR primers ranged from 92,99% (199) to 95,32 (204). The specificity was determined by 147 negative samples in cPCR and ranged from 95,91% (141) to 98,63 % (145). The agreement indices ranged from 92,99% (RV1/RV2; LEISH18S e ACTLDon) to 95,32% (RV1-RV2 and LEISH18S). A total of 220 samples were tested for CL. The primer\'s specificity was determined by 80 negative samples and the results were 98,75% and 100% for LEISH18S and ACTLVan respectively, and from 140 positive samples in cPCR 129 (92,14%) and 124 (88,57%) were positive for primers LEISH18S and ACTLVian respectively. The agreement indices were 88,57% (LB-3/LU-5A/ACTLVian/LEISH18S) and 92,14% (LB-3C/LU-5A and LEISH18S). These results show that the primers for qPCR are likely to improve the detection of the parasite in clinical samples. These results show that the associate use of qPCR primers with cPCR primers can increase the detection of the parasite in clinical samples.

A definição de caso confirmado de leishmaniose visceral é baseada em aspectos clínicos, epidemiológicos e laboratoriais. As técnicas padrão-ouro para o diagnóstico laboratorial da leishmaniose visceral são as parasitológicas esfregaço e cultura de aspirado de medula óssea, que permitem a identificação do gênero Leishmania por visualização microscópica do parasito em lâmina, e os testes sorológicos, como o imunocromatográfico, que apresenta baixa sensibilidade em indivíduos imunodeprimidos. Em determinadas situações, como na coinfecção Leishmania/HIV, para o tratamento específico ou nos inquéritos epidemiológicos, faz-se necessária a identificação do agente etiológico da leishmaniose visceral, que comumente é a L. (L.) infantum. Desse modo, propusemos um algoritmo para o diagnóstico molecular da leishmaniose visceral, com o emprego da kDNA PCR (K20-K22 E RV1-RV2) do ITS1 PCR (LITSR e L5. 8S), tendo como referência os resultados obtidos nos exames parasitológicos e sorológicos, além de dados clínicos e epidemiológicos dos pacientes. Complementando nossa proposta, a realização da técnica de análise dos polimorfismos dos fragmentos da ITS1 PCR por RFLP, para identificação do agente etiológico, foi avaliada como alternativa à laboriosa técnica de eletroforese de isoenzimas, padrão-ouro para definição de espécies no diagnóstico das leishmanioses. As técnicas moleculares empregadas foram validadas em 82 amostras (ITS 1 PCR e kDNA PCR RV1-RV2) e 48 amostras (kDNA PCR K20-K22) de pacientes com leishmaniose visceral confirmada e em 30 amostras de pacientes saudáveis. Os ensaios obtiveram as seguintes sensibilidades: 97,5% (80/82) na ITS1 PCR, 98% (47/48) na kDNA PCR K20-K22, e 92,7% (76/82) na kDNA PCR RV1-RV2, e 100% de especificidade em todos os testes. Quando comparados os resultados obtidos nos testes moleculares ITS1 PCR, kDNA PCR K20-K22 e kDNA PCR RV1-RV2 ao padrão ouro observou-se uma concordância quase perfeita, com um índice kappa maior que 0,80, e um valor de p < 0,001. No que concerne à realização da ITS1 PCR RFLP nas 80 amostras positivas, 52,5% (42/80) demonstraram perfil semelhante ao de L. (L.) infantum. Três das amostras que não demonstraram perfil na RFLP da ITS1 PCR e na kDNA PCR K20-K22 obtiveram mais de 90% de identidade com a cepa de L. (L.) chagasi, mediante análise das amostras na técnica do sequenciamento. Concluímos o presente estudo com a proposta de um algoritmo de diagnóstico molecular da leishmaniose visceral, que deverá considerar a realização prévia do diagnóstico parasitológico e imunocromatográfico. E sugerimos, quando necessário, a realização da kDNA PCR K20-K22 e a kDNA PCR RV1-RV2 para a determinação do gênero e de subgênero da Leishmania, respectivamente. Por fim, que se complemente com a ITS1 PCR, seguida da ITS1 RFLP para a definição do agente etiológico da leishmaniose visceral. / The definition of visceral leishmaniasis case is based on clinical, epidemiological and laboratory aspects. The gold standard techniques for laboratory diagnosis of visceral leishmaniasis are parasitological, smear and culture of bone marrow aspirate, which allow the identification of Leishmania in microscopic visualization, and the serological tests, like the immunochromatographic, which presents low sensitivity in immunodepressed individuals. In certain situations, such as Leishmania/HIV co-infection, for specific treatment or in epidemiological surveys, it is necessary to identify the etiological agent of visceral leishmaniasis, commonly caused by L. (L.) infantum. In this way, an algorithm for the molecular diagnosis of visceral leishmaniasis by kDNA PCR (K20/K22 and RV1/RV2) and ITS1 PCR (LITSR e L5.8S) was proposed, using as the gold standard, the parasitological and serological results, as well as clinical and epidemiological data of patients. Complementing our proposal, the performance of the Restriction Fragment Length Polymorphism of the ITS1 (ITS1 PCR RFLP) to identify the etiological agent, was evaluated as an alternative to technical laboriously isoenzyme electrophoresis, the gold standard for defining species in the diagnosis of leishmaniasis. The molecular techniques were validated on 82 samples (ITS 1 kDNA PCR and PCR-RV1 RV2) and 48 samples (K20-K22 kDNA PCR) from patients with confirmed visceral leishmaniasis and 30 samples from healthy patients. The following sensitivities were presented by the molecular tests: 97.5% (80/82) for the ITS1 PCR, 98% (47/48) for kDNA PCR K20-K22 and 92.7% (76/82) for kDNA PCR-RV2 RV1, and 100% specificity for all tests. When comparing the results from molecular tests ITS1 PCR, kDNA PCR K20-K22 and kDNA PCR RV1-RV2 with the established gold standard, we see an almost perfect agreement with kappa index higher than 0.80, and p value <0.001 were obtained. As regard to ITS1 PCR RFLP, from 80 positive samples, 52.5% (42/80) showed a similar profile to that of L. (L.) infantum. Three of the samples that did not demonstrate RFLP profile in the ITS1 PCR and PCR kDNA K20-K22 obtained more than 90% of identity with strain L. (L.) chagasi, by analyzing the samples in sequencing. As our conclusion, an algorithm for the molecular diagnosis of visceral leishmaniasis must consider a previous performance of the parasitological and immunochromatographic diagnosis. When necessary kDNA PCR K20-K22 and kDNA RV1-RV2 PCR are suggested to determine the genus and the subgenus Leishmania, respectively. In addition, this molecular diagnosis can be complemented, with the ITS1 PCR, followed by RFLP ITS1, which can define the etiological agent of visceral leishmaniasis.

Na fase ativa da leishmaniose visceral (LV) ocorrem alterações no metabolismo de lipoproteínas com redução dos níveis de HDL e aumento de triglicérides. A partir desses dados, focamos neste projeto essas alterações na progressão da infecção e apontamos alguns elementos como seus possíveis desencadeantes. Como essas alterações poderiam resultar de redução de atividade e expressão da lipoproteína lipase (LPL), do receptor alfa do proliferador ativado de peroxissoma (PPAR?) e da proteína transferidora de ésteres de colesteril (CETP), a sua expressão foi avaliada durante a progressão da LV em hamster. Em hamsteres infectados com 2 x 107 amastigotas de L. (L.) infantum observamos aumento de triglicérides nos hamsteres com 55 dias (mediana = 294,0 mg/dL) e 90 dias (303,0 mg/dL ) de infecção comparados aos controles de 55 dias (119,0 mg/dL) e de 90 dias (117,0 mg/dL) (p <= 0,05). Os níveis de colesterol total e de HDL não apresentaram diferença significante entre controles e infectados com 30, 55 e 90 dias de infecção. A expressão de mRNA de PPAR? no fígado com 55 e 90 dias de infecção apresentou tendência de redução nos infectados. Já de CETP no fígado dos hamsteres com 55 dias de infecção, a expressão relativa (CT) estava reduzida nos infectados (0,08) comparados aos controles (1,69) (p <= 0,05) e de LPL no coração dos hamsteres com 90 dias de infecção também estava reduzida (1,43) com relação aos controles (2,61) (p <= 0,05). Há dados na literatura sugerindo a importância de lipídios para o desenvolvimento de amastigotas no hospedeiro vertebrado e é possível que as alterações dos níveis de lipoproteínas contribuam na progressão da infecção. Assim, avaliamos neste estudo o efeito da droga hipolipemiante ciprofibrato no controle do parasitismo na LV em hamster, sabendo-se que ciprofibratos atuam aumentando a expressão de PPAR? e a produção e atividade de LPL. O tratamento com ciprofibrato nos hamsteres com 55 dias de infecção gerou redução de triglicérides (123,0 mg/dL) em relação aos infectados não tratados (294,0 g/dL) (p <= 0,05), além dos níveis de triglicérides nos animais infectados não tratados terem aumentado quando comparados aos controles não tratados (119,0 mg/dL) (p <= 0,05). Houve também, redução de triglicérides nos animais não infectados tratados com ciprofibrato (89,0 mg/dL) comparando-se aos infectados não tratados (p <= 0,05). Os níveis de colesterol nos hamsteres não infectados tratados com ciprofibrato reduziram (53,5 mg/dL) em comparação aos infectados não tratados (93,0 mg/dL) (p <= 0,05). Já naqueles que foram infectados e tratados com ciprofibrato, constatamos redução de colesterol (53,5 mg/dL) quando comparados aos infectados não tratados (p <= 0,05). Os níveis de HDL não aumentaram com ciprofibrato e foram similares entre os hamsteres infectados não tratados e os controles não tratados. A carga parasitária no baço e no fígado não foi reduzida com ciprofibrato. Na leishmaniose visceral em hamster ocorrem alterações do metabolismo lipídico com aumento de triglicérides e redução da expressão da mRNA de LPL e CETP. O tratamento com ciprofibrato foi eficaz no controle das alterações de níveis de lipoproteínas. / In the active phase of visceral leishmaniasis (VL) changes occur in lipoprotein me-tabolism with reduction in HDL and increase in triglyceride (TG) levels. From these data, in this project we focused these changes during the progression of the infection and we approached some elements as their underlying factors. Since these changes may result from the reduction of the activity and the expression of the lipoprotein lipase (LPL), of the peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPAR?) and of the cholesteryl ester transfer protein (CETP), their expression were evaluated during VL progression in hamster. In 2 x 107 L. (L.) infantum amastigote-infected hamsters we observed an increase in the triglycerides in hamsters with 55 days (median = 294.0 mg/dL) and 90 days (303.0 mg/dL) of infection compared with controls of 55 days (119.0 mg/dL) and of 90 days (117.0 mg/dL) (p <= 0.05). The total cholesterol and the HDL levels did not present significant differences between control and in-fected groups at 30, 55 and 90 days of infection. The expression of mRNA of the PPAR in the liver with 55 and 90 days of infection tended to be reduced in infected animals. However the relative expression (CT) of CETP in the liver of hamsters with 55 days of infection was signicantly reduced in infected (0.08) compared with control animals (1.69) (p <= 0.05). The relative expression (CT) of LPL in the heart of hamsters with 90 days of infection was also reduced (1.43) in relation to controls (2.61) (p <= 0.05). There are data in the literature suggesting the importance of lipids for the development of amastigotes in vertebrate host and it is possible that the changes in the lipoprotein levels contribute for the infection progression. Therefore, we evaluated in this study the effect of the lipid-lowering drug ciprofibrate in the control of parasitism in VL in the hamster, knowing that ciprofibrate acts increasing the expression of the PPAR? and of the LPL production and activity. The treatment with ciprofibrate in infected hamsters at 55 days lead to the reduction of triglyceride level (123.0 mg/dL) in relation to non-treated infected animals (294.0 g/dL) (p <= 0.05). Further the triglyceride levels in the non-treated infected animals were in-creased when compared with untreated controls (119.0 mg/dL) (p <= 0.05). There was also reduction of triglyceride in ciprofibrate treated-non infected animals (89.0 mg/dL) compared with non-treated infected animals (p <= 0.05). The cholesterol lev-els were reduced in the ciprofibrate-treated non-infected hamsters (53.5 mg/dL) in comparison to the non-treated infected ones (93.0 mg/dL) (p <= 0.05). In the ciprofibrate-treated infected ones we found a reduction of cholesterol level (53.5 mg/dL) when compared with non treated infected animals (p <= 0.05). The HDL lev-els did not increase with ciprofibrate and they were similar between the non-treated infected hamsters and non-treated controls. The parasite load in the spleen and liver were not reduced with ciprofibrate. In the visceral leishmaniasis in hamster changes occur in the lipid metabolism with increase in the triglyceride level and the reduction of expression of mRNA of LPL and CETP. The treatment with ciprofibrate was ef-fective in the control of changes in the lipoprotein levels.

Introdução: coinfecção Leishmania/HIV representa um grande problema de saúde visto que há maior recidiva e letalidade por leishmaniose visceral na população de pacientes vivendo com HIV/aids. No entanto, pouco se sabe a respeito da frequência da infecção por Leishmania em pacientes assintomáticos com HIV, que podem futuramente desenvolver doença plenamente manifesta. Ademais poucas informações sobre o desempenho dos métodos de diagnóstico laboratorial de leishmaniose em pacientes coinfectados estão disponíveis no Brasil e na América Latina. Objetivos: avaliar a frequência da infecção por Leishmania spp. em pacientes com HIV/aids em uma coorte de São Paulo/SP, a positividade dos métodos sorológicos e moleculares em pacientes com HIV/aids e as possíveis associações da positividade dos diferentes métodos laboratoriais com variáveis clínicas, laboratoriais e epidemiológicas. Material e métodos: estudo transversal, realizado com pacientes atendidos no Instituto de Infectologia Emílio Ribas com diagnóstico de infecção pelo HIV. A amostra foi calculada com base na prevalência da infecção por Leishmania spp. em pacientes com HIV/aids, estimada em estudos prévios. Foram incluídos 240 pacientes nesta amostragem, os quais foram submetidos à coleta de sangue periférico em dois tubos: um tubo seco para análise sorológica; um tubo contendo EDTA, para o diagnóstico molecular. As amostras foram submetidas aos seguintes testes diagnósticos: ELISA usando antígenos de L. major-like (ELISA L. major-like); ELISA usando antígenos de Leptomonas seymouri (ELISA Leptomonas); ELISA usando antígenos rk39 (ELISA rK39); ELISA usando antígenos rK28 (ELISA rK28); Reação de imunofluorescência indireta (RIFI); Teste de Aglutinação Direta (DAT); Reação em cadeia da polimerase (PCR) com os seguintes genes alvos: kDNA (PCR kDNA) e ITS-1 (PCR ITS-1). Resultados: a frequência, levando-se em consideração a positividade em pelo menos um dos métodos empregados, foi de 34,6%. Sessenta pacientes (25%) foram positivos para ELISA L. major-like; nove (3,8%) para ELISA Leptomonas; três (1,3%) para ELISA rK39; seis (2,5%) para ELISA rK28; onze (4,6%) para RIFI; quatro (1,7%) para PCR kDNA; 10 (4,2%) para PCR ITS-1. Nenhuma amostra foi positiva para DAT. Não houve associação da positividade dos testes com contato com área endêmica para LV ou presença de sintomas sugestivos de LV. Para ELISA L.major-like, ELISA Leptomonas e RIFI, houve associação entre valores de contagem de linfócitos T CD4+ e positividade dos testes. Conclusões: Houve uma alta prevalência da infecção por Leishmania spp. em pacientes infectados pelo HIV na amostra estudada, principalmente utilizando-se ELISA com antígeno total de L. major-like. Apesar de existir a possibilidade de reação cruzada com outros antígenos que possam ter influenciado na positividade de alguns testes, especialmente ELISA L. major-like, outros testes considerados altamente específicos para o diagnóstico de infecção por Leishmania também se apresentaram positivos, o que pode demonstra a magnitude da coinfecção Leishmania/HIV na amostra estudada. Houve associação entre positividade de alguns testes estudados e os valores de linfócitos T CD4+, com maior positividade destes testes em pacientes mais imunodeprimidos. Presença de sintomatologia ou epidemiologia para LV não tiveram influência na positividade dos testes diagnósticos / Introduction: Leishmania/HIV coinfection represents a major health problem since there is greater relapse and lethality due to visceral leishmaniasis in HIV infected population. However, there are few information about the frequency of Leishmania infection in asymptomatic HIV infected individuals, who may develop full-blown symptomatic disease in the future. In addition, few information about the performance of laboratory diagnostic methods for leishmaniasis in coinfected patients are available in Brazil and Latin America. Objectives: The main objective is evaluate the frequency of Leishmania spp. infection in HIV infected patients in a patient cohort from São Paulo/SP. This study also aims to evaluate the positivity of the serological and molecular methods in HIV/AIDS patients and the possible associations of the positivity of the different laboratory methods regarding to clinical, laboratory and epidemiological variables. Material and methods: a cross-sectional study including HIV infected patients treated at Institute of Infectious Diseases Emilio Ribas. The sample was calculated considering the frequency of Leishmania spp. infection in HIV infected patients estimated in previous studies. Two hundred and forty patients were included, whose were submitted to peripheral blood collection in two tubes: a dry tube for serological analysis; a tube containing EDTA, for molecular diagnosis. The samples were submitted to the following diagnostic tests: ELISA using L. major-like antigens (ELISA L. major-like); ELISA using Leptomonas seymouri antigens (ELISA Leptomonas); ELISA using rk39 antigens (ELISA rK39); ELISA using rK28 antigens (ELISA rK28); indirect fluorescent-antibody test (IFAT); direct agglutination test (DAT); polymerase chain reaction (PCR) with the following target genes: kDNA (kDNA PCR) and ITS-1 (ITS-1 PCR). Results: the frequency considering at least one test positive was 34.6%. Sixty patients (25%) were positive by ELISA L. major-like; nine (3.8%) by ELISA Leptomonas; three (1.3%) by ELISA rK39; six (2.5%) by ELISA rK28; eleven (4.6%) by IFAT; four (1.7%) by kDNA PCR; 10 (4.2%) by ITS-1 PCR. No sample was positive by DAT. There was no association between the positivity of the tests and history of having lived in a VL transmission area or presence of symptoms suggestive of VL. For ELISA L.major-like, ELISA Leptomonas and IFAT, there was an association between CD4+ T-lymphocyte counts and test positivity. Conclusions: there was a high prevalence of Leishmania spp. in HIV-infected patients included, mainly using ELISA with total L. major-like antigen. Although there is a possibility of cross-reaction with other antigens that can influence the positivity of some tests, especially ELISA L. major-like, other tests considered to be highly specific for the diagnosis of Leishmania infection were also positive, which may demonstrate the magnitude of Leishmania/HIV coinfection in the sample studied. There was an association between the positivity of some tests studied and the values of T CD4+ lymphocytes, with a higher positivity of these tests in more immunosuppressed patients. Presence of symptoms or epidemiology for VL had no influence on the positivity of the diagnostic tests

Infection is the major complication for neutropenic patients, and cause of morbidity and mortality. Clinical signs are nonspecific and fever may be a late marker for the early use of antibiotics, which may complicate the prognosis. The approaches of most protocols focus on adult patients. Thus, to improve safety in the clinical approach in pediatric neutropenic patients, this work was performed in order to evaluate biomarkers involved in the inflammatory response in pediatric patients. In the period 2010 to 2012 were included 70 children with neutropenia with neutrophil count ≤ 1000 cells / mm ³, 35 pediatric patients with visceral leishmaniasis (VL) and 35 patients with onco-hematological disease, ranging in age from 0 to 18, from the oncology service of the Hospital Emergency ward Segipe and Pediatrics Diseases, University Hospital of Sergipe. Serum levels of biomarkers were evaluated following: Interferon gamma (IFN-γ), interleukin-5 (IL-5), interleukin-6 (IL-6), interleukin-10 (IL-10), lactate, ultrasensitive CRP (hsCRP), nprocalcitonina (PCT) and Tumor Necrosis Factor-α (TNF-α). The results showed that the average of the groups was no significant difference with biomarkers IFN-γ, IL-10 and TNF-α with p <0.001, IL-5 and p = 0.020, p = 0.002 with lactate and p = 0.011 PCT The hsCRP and IL-6 did not show statistical significance. Correlating CAN groups with the average of biomarkers, there was no statistical significance. This study suggests that biomarkers biomarkers that IFN-γ, IL-5, IL-10, lactate, procalcitonin and TNF-α, laboratory values showed a significant difference between the group of patients neutropenic patients with LV disease and onco- hematologic, this is not happening with the results presented by biomarkers IL-6 and hsCRP, leading us to observe that although the groups have in common neutropenia, interpretation of these biomarkers should be performed separately for each group. Except for lactate and procalcitonin, all other biomarkers showed increased results when comparing the mean of the two groups, which leads us to conclude that studies with larger numbers of subjects are important to verify the use of IFN-γ biomarkers, IL- 5, IL-6, IL-10 and TNF-α in the diagnosis of infection in neutropenic patients. / A infecção constitui a maior complicação para o paciente neutropênico, sendo causa de morbidade e mortalidade. Sinais clínicos são inespecíficos e febre pode ser um marcador tardio para início do uso de antibióticos, podendo complicar o prognóstico. As abordagens da maioria dos protocolos focam-se em pacientes adultos. Desta forma, para reforçar a segurança na abordagem clínica em pacientes neutropênicos pediátricos, foi realizado este trabalho com o objetivo de avaliar os biomarcadores envolvidos na resposta inflamatória em pacientes pediátricos. No período de 2010 a 2012 foram incluidos 70 crianças portadoras de neutropenia, com contagem de neutrófilos ≤ 1000 cel/mm³, sendo 35 pacientes pediatricos portadores de Leishmaniose visceral(LV) e 35 portadores de doença onco-hematológica , com idade variando de 0 a 18 anos, oriundos do serviço de oncologia do Hospital de Urgência de Sergipe e da enfermaria de Pediatria do Hospital Universitário de Sergipe. Os níveis séricos dos seguintes biomarcadores foram avaliados: Interferon gamma (IFN-γ), Interleucina-5(IL-5), interleucina-6(IL-6), interleucina-10(IL-10), lactato, Proteina C Reativa ultrassensível(PCR-US),procalcitonina(PCT) e Fator de Necrose Tumoral alfa(TNF-α) . Os resultados mostraram que na média dos grupos estudados houve diferença significativa com os biomarcadores IFN-γ, IL-10 e TNF-α com p <0,001, IL-5 com p=0,020, lactato com p=0,002 e PCT com p=0,011 A PCR-US e a IL-6 não apresentaram estatiscamente significância. Correlacionando a CAN dos grupos com a média dos biomarcadores, não foi observado significancia estatística. Este trabalho sugere que os biomarcadores que os biomarcadores IFN-γ, IL-5, IL-10, lactato, procalcitonina e TNF-α, apresentaram valores laboratoriais com diferença significativa entre o grupo de pacientes neutropênicos portadores de LV e doença onco-hematológica, o mesmo não acontecendo com os resultados apresentados pelos biomarcadores IL-6 e a PCR-US, levando-nos a observar que apesar dos grupos terem a neutropenia em comum, a interpretação destes biomarcadores deve ser realizada de forma distinta para cada grupo. Excetuando-se o lactato e a procalcitonina, todos os demais biomarcadores apresentaram resultados aumentados quando comparadas as médias dos dois grupos, fato que nos faz concluir que estudos com um número maior de indivíduos são importantes para verificar o uso dos biomarcadores IFN-γ, IL-5, IL-6, IL-10 e TNF-α no diagnóstico de infecção em pacientes neutropênicos.

Introduction: Human Visceral Leishmaniasis (HVL) is a major public health problem in Brazil with more than 3,500 new cases per year and can lead to death if not treated. The gold standard for diagnosis is the parasitological test, but it is an invasive, expensive technique, and does not present ideal sensitivity. The serologic Indirect Immunofluorescence test is available in the public health system, however, this low sensitive that technique that requires time, equipment. Currently, there has been an investment in the development of rapid immunochromatographic tests that show good sensitivity and specificity, in addition to being faster, practical and economical. The rK39 is the immunoassay currently used for the diagnosis of HVL and has international production. Methodology: This study evaluated three new rapid immunochromatic tests (TRs) for screening of HVL, these tests were produced by Gonçalo Moniz Research Center (Fiocruz). The three tests were identified as: Test 1, comprising the recombinant antigen Lci1A; Test 2, formed by the recombinant antigen Lci2B; and Test 3, comprising the conjugate of the two antigens. A total of 159 sera from different individuals were used. The group "cases" consisted of 79 sera from patients diagnosed with VL, it considered compatible clinical symptoms (fever associated with splenomegaly and hepatomegaly), bone marrow culture and / or rK39 positive test, pancytopenia and therapeutic success. The group of "non-cases" consisted of 90 sera from patients with other diseases and healthy people. Results: The sensitivity values were good for the three tests (over 90%), but the specificity of test 1 was very low (10,0%). As for tests 2 and 3, the specificities were 90.0% and 83.3%, respectively. Conclusion: The results indicate that both test 2 has potential for use as diagnostic screening for VL in humans. / Introdução: A leishmaniose visceral humana (LVH) é um importante problema de saúde pública no Brasil com mais de 3.500 novos casos anuais e pode ser fatal quando não tratada. O padrão-ouro para diagnóstico é o teste parasitológico, porém é uma técnica invasiva, dispendiosa, além de não apresentar sensibilidade ideal. No Sistema público de Saúde é disponibilizado o teste sorológico Imunofluorescência Indireta, entretanto, é uma técnica que demanda tempo, equipamentos, pessoal treinado e também apresenta sensibilidade limitada. Os testes imunocromatográficos rápidos, apresentam boa sensibilidade, especificidade, além de práticos, rápidos e econômicos. O mais utilizado é o rK39 (produto importado). Portanto, é de grande valia ter outro teste equivalente com produção nacional, a fim de ter outra alternativa com igual eficiência e com menor custo. Metodologia: no estudo atual foram avaliadostrês testes imunocromatográficos rápidos (TRs) para o diagnóstico da LVH. Os testes foram produzidos pelo Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz (Fiocruz) e identificados como teste 1, constituído pelo antígeno recombinante Lci1A; teste 2, formado pelo antígeno recombinante Lci2B e teste 3 composto pelo conjugado dos antígenos citados. O grupo de casos foi composto por 79 soros de pacientes com diagnóstico de LV, a partir de clínica compatível (febre associada a esplenomegalia e hepatomegalia), mielocultura e/ou rK39 positivos, pancitopenia e sucesso terapêutico. O grupo de não casos foi formado por 90 soros de pacientes com outra patologia e pessoas sadias. Resultados: os valores de sensibilidade foram bons para os três testes (acima de 90%), porém a especificidade do teste 1 foi muito baixa (10,0%), já para os testes 2 e 3, as especificidades foram 90,0% e 83,3%, respectivamente. Conclusão: Os resultados mostram que o teste 2 apresenta potencial para utilização como triagem diagnóstica da LVH.

Leishmaniasis is a serious public health problem worldwide, requiring effective measures for its control and treatment. Visceral leishmaniasis is the most severe form and has a lethal potential. Depending on the interaction between the parasite and the host immune response, different clinical manifestations may develop: asymptomatic, oligosymptomatic and symptomatic. Macrophages play a central role in immune response. However, their microbicidal activity may be impaired, leading to the survival and proliferation of the parasites inside them. The objective of this study was to evaluate the leishmanicidal activity of macrophages isolated from treated and asymptomatic visceral leishmaniasis subjects after infection by Leishmania chagasi. Our hypothesis was that macrophages isolated from treated subjects were more susceptible to infection by Leishmania chagasi in relation to asymptomatic patients. From a cross-sectional study, 05 symptomatic patients and 02 asymptomatic were investigated at University Hospital. Mononuclear cells were isolated from peripheral blood of 07 patients in order to obtain monocytes and further differentiation into macrophages. These were infected with the isolated LVHSE-07 from L. chagasi for 2, 72 and 96 hours in conditions with and without stimulus of LPS and IFN-. To examine whether macrophages responded differently to the symptomatic patient's own Leishmania, 03 symptomatic and 02 asymptomatic patients were reconvened, so that their macrophages would be infected with Leishmania from symptomatic patients (LVHSE-24, LVHSE-28, LVHSE-37). Leishmanicide response of macrophages was assessed by determining the percentage of infected macrophages and the number of amastigotes inside macrophages. The results suggest that the macrophages of the symptomatic patients were more infected, especially when used patient's own Leishmania, and they did not control infection, even in the presence of stimulus, unlike asymptomatic's macrophages, which controlled infection, independently of what Leishmania was used. This study demonstrated that macrophages from symptomatic patients are more susceptible to infection by Leishmania chagasi, when compared with macrophages from asymptomatic patients; macrophages from symptomatic patients are more infected with their own isolated of L. chagasi; macrophages from asymptomatic patients are less infected with L. chagasi and have a parasitic load lower than the macrophages of symptomatic patients, regardless of the Leishmania isolated used in infection. It follows that macrophages are related to susceptibility or resistance to infection by Leishmania chagasi. / As leishmanioses são um grave problema de saúde pública no mundo, demandando medidas eficazes no seu controle e tratamento. A leishmaniose visceral é a forma mais grave e pode ser letal, caso não seja tratada. A depender da interação entre o parasita e a resposta imune do hospedeiro, podem-se desenvolver diferentes manifestações clínicas: forma assintomática, oligossintomática e sintomática. Os macrófagos desempenham um papel fundamental na resposta imune. Entretanto, suas atividades leishmanicidas podem estar prejudicadas, levando à sobrevivência e proliferação dos parasitas no seu interior. Assim, o objetivo geral deste trabalho foi avaliar a atividade leishmanicida de macrófagos infectados por Leishmania chagasi isolados de indivíduos tratados e assintomáticos para Leishmaniose visceral. A nossa hipótese era que macrófagos isolados de indivíduos tratados eram mais susceptíveis à infecção por Leishmania chagasi em relação aos de pacientes assintomáticos. A partir de um estudo transversal, foram investigados 05 indivíduos tratados e 02 assintomáticos do Hospital Universitário. Células mononucleares do sangue periférico foram isoladas dos 07 pacientes para obtenção de monócitos e posterior diferenciação em macrófagos. Estes foram infectados com o isolado LVHSE-07 de L. chagasi durante 2, 72 e 96 horas em condições sem e com estímulo de LPS e IFN-. Para analisar se os macrófagos respondiam de maneira diferenciada com a Leishmania do próprio indivíduo tratado, foram reconvocados 03 tratados e 02 assintomáticos para infectar seus macrófagos com as Leishmanias dos tratados (LVHSE-24, LVHSE-28, LVHSE-37). A resposta leishmanicida dos macrófagos foi analisada determinando-se o percentual de macrófagos infectados e o número de amastigotas no interior dos macrófagos. Os resultados sugerem que os macrófagos dos indivíduos tratados foram mais infectados, principalmente quando utilizada a Leishmania do próprio indivíduo, e não controlaram a infecção mesmo na presença do estímulo, ao contrário dos macrófagos dos assintomáticos que sugerem um controle da infecção independente da Leishmania utilizada. Este estudo mostrou que macrófagos de indivíduos tratados são mais susceptíveis à infecção por Leishmania chagasi quando comparados com macrófagos de pacientes assintomáticos; macrófagos indivíduos tratados são mais infectados com seus próprios isolados de L. chagasi; macrófagos de pacientes assintomáticos são menos infectados por L. chagasi e apresentam uma carga parasitária menor que os macrófagos de indivíduos tratados independente do isolado de Leishmania utilizado na infecção. Conclui-se que os macrófagos estão relacionados com a susceptibilidade ou resistência à infecção por Leishmania chagasi.