Leishmaniose visceral canina (LVC) é um dos problemas de saúde pública mais importantes da América Latina, pois geralmente precede a doença humana, a leishmaniose visceral americana (LVA), causada pela Leishmania (L.) infantum chagasi. No presente estudo prospectivo analisou-se durante período de dois anos a prevalência, incidência e dinâmica da evolução clínico-imunológica da infecção canina pela L. (L.) i. chagasi em uma coorte de 316 cães mestiços que vivem em área endêmica de LVA no município de Barcarena, Pará, Amazônia Brasil, pelo uso combinado do teste de imunofluorescência indireta (RIFI-IgG) e de hipersensibilidade tardia (RIM), bem como a pesquisa do parasita pela aspiração do linfonodo poplíteo para o diagnóstico da infecção. A reatividade para RIFI e RIM reconheceu três diferentes perfis de resposta imunológica: (I) RIFI (+) / RIM (-) (81 cães), (II) RIFI (-) / RIM (+) (17 cães), e (III) RIFI (+) / RIM (+) (13 cães), proporcionando uma prevalência global da infecção de 35,1% (111/316). Desta forma, a prevalência específica do perfil I (25,6%) foi superior as dos perfis II e III, 5,4% e 4,1%, respectivamente. Além disso, a frequência destes perfis entre 111 cães infectados mostrou que a taxa de 73% do perfil I também foi maior do que os dos perfis II (15,3%) e III (11,7%). A prevalência da infecção de acordo com as faixas etárias revelou que a taxa de 27,5% do grupo ≥1ano <7 anos foi maior do que as de <1 ano (5,3%) e ≥7anos (2,2%), respectivamente. Por outro lado, a incidência global da infecção foi de 5,7% cães / mês (5,4% perfil I, 0,3% perfil II e 0,0% perfil III). No entanto, observou-se uma progressiva diminuição nas taxas de incidência nos seguintes pontos de tempo: seis (3,6% cães / mês), doze (1,7% cães / mês) e vinte e quatro (0,4% cães / mês) meses do estudo. Além disso, a incidência da infecção de acordo com os grupos etários demonstraram que a taxa de 6,6% cães / mês no grupo <1 ano foi maior em comparação com as de 5,3% e 3,3% cães / mês nos grupos ≥1ano e <7 anos, e <1 ano, respectivamente. O diagnóstico parasitológico da infecção foi confirmado em 19% (21/111) no estudo da prevalência, sendo a maioria dos cães (85,7%) do perfil I, onde 61,1% eram sintomáticos e 38,9% assintomáticos. Entre o restante (14,3%), o diagnóstico foi associado ao perfil III, sendo 66,6% assintomáticos e 33,3% sintomáticos. No levantamento da incidência, o diagnóstico foi confirmado em 11% dos cães, todos pertencentes ao perfil I, sendo 60% assintomáticos e 40% sintomáticos. Com relação ao estado clínico de todos os 179 cães diagnosticados infectados durante o período de dois anos, observou-se que entre 145 (81%) cães do perfil I, 82% eram assintomáticos e 18% sintomáticos; entre os 21 (11,7%) cães do perfil II, todos (100%) eram assintomáticos; e entre 13 (7,3%) cães do perfil III, 84,6% eram assintomáticos e 15,4% sintomáticos. Além disso, observou-se que a conversão do estado clínico assintomático ao sintomática foi registado principalmente em cães do perfil I (40,2%) do que aqueles dos perfis II (5,8%) e III (9%). Por outro lado, apenas 3,2% dos cães do perfil I [RIFI (+) / RIM (-)] converteu resposta RIM (+), enquanto 80% de cães do perfil II [RIFI (-) / RIM (+)] converteu resposta RIFI (+). Por fim, demonstrou-se que 100% dos óbitos por LVC ocorreu entre os cães do perfil I, sendo 85,7% na prevalência e 14,3% na incidência. Considerando todos esses resultados, parece razoável que a interação entre parasita e resposta imune canina é suportada principalmente pelo perfil imunológico claramente vulnerável, o perfil I [RIFI (+) / RIM (-)], o qual não oferece qualquer resistência ao parasita, tornando o cão altamente susceptível à infecção / Canine visceral leishmaniasis (CVL) is one of the most important public health problems in Latin America because it usually precedes human disease, American visceral leishmaniais (AVL), being caused by Leishmania (L.) infantum chagasi. In the present prospective study it was analyzed during two years period the prevalence, incidence and dynamics of the clinical-immunological evolution of canine L. (L.) i. chagasi-infection in a cohort of 316 mongrel dogs living in endemic area of AVL in Barcarena municipality, Pará State, Amazonian Brazil, by the combined use of the indirect fluorescence antibody test (IFAT-IgG) and delayed-type hypersensitivity (DTH), as well as the parasite research by the popliteal lymph node aspiration for the diagnosis of infection. The IFAT and DTH reactivity recognized three different immune response profiles: (I) IFAT(+)/DTH(-) (81 dogs), (II) IFAT(-)/DTH(+) (17 dogs), and (III) IFAT(+)/DTH(+) (13 dogs), providing an overall infection prevalence of 35,1% (111/316). In this way, the specific prevalence of profile I 25,6% was higher than those of profiles II 5,4% and III 4,1%. Moreover, the frequency of these profiles among 111 infected dogs showed that the rate 73% of profile I was also higher than those of profiles II 15,3% and III 11,7%. The infection prevalence according to the age groups revealed that the rate 27,5% of ≥1year <7years was higher than those of <1year 5,3% and ≥7years 2,2%, respectively. On the other hand, the overall incidence of infection was 5,7% dogs/month (5,4% profile I, 0,3% profile II and 0,0% profile III). However, it was noted a progressive decreasing in the incidence rates at the following time-points: six (3,6% dogs/month), twelve (1,7% dogs/month) and twenty four (0,4% dogs/month) months of the study. In addition, the infection incidence according to the age groups demonstrated that the rate 6,6% dogs/month of <1year was higher compared to those of 5,3% and 3,3% dogs/month of ≥1year and <7years, and <1year, respectively. The parasitological diagnosis of infection was confirmed in 19% (21/111) at the prevalence survey, being most dogs (85,7%) of the profile I, 61,1% symptomatic and 38,9% asymptomatic ones. Among the remainder 14,3%, the diagnosis was associated to the profile III, 66,6% in asymptomatic and 33,3% in symptomatic dogs. At the incidence survey, the diagnosis was confirmed in 11% of dogs, all from the profile I, 60% asymptomatic and 40% symptomatic ones. With regards to clinical status of all 179 infected dogs diagnosed during two years period, it was observed that among 145 (81%) dogs from the profile I, 82% were asymptomatic and 18% symptomatic ones; among 21 (11,7%) from the profile II, all (100%) were asymptomatic; and among 13 (7,3%) from the profile III, 84,6% were asymptomatic and 15,4 % symptomatic ones. Besides this, it was noted that the clinical conversion from asymptomatic to symptomatic status was principally recorded in dogs from the profile I (40,2%) than those from the profiles II (5,8%) and III (9%). By the other side, only 3,2% dogs from the profile I [IFAT(+)/DTH(-)] converted DTH(+) response, while 80% dogs from the profile II [IFAT(-)/DTH(+)] converted IFAT(+) response. At last, it was demonstrated that 100% of death by CVL occurred amongst dogs from the profile I, being 85,7% from the prevalence and 14,3% from the incidence. Taking together all these results, it seems reasonable that interaction between parasite and canine immune response is principally supported by immunologic profile clearly vulnerable, the profile I [IFAT(+)/DTH(-)], which does not offer any resistance to parasite, became the dog highly susceptible to infection

Introdução: coinfecção Leishmania/HIV representa um grande problema de saúde visto que há maior recidiva e letalidade por leishmaniose visceral na população de pacientes vivendo com HIV/aids. No entanto, pouco se sabe a respeito da frequência da infecção por Leishmania em pacientes assintomáticos com HIV, que podem futuramente desenvolver doença plenamente manifesta. Ademais poucas informações sobre o desempenho dos métodos de diagnóstico laboratorial de leishmaniose em pacientes coinfectados estão disponíveis no Brasil e na América Latina. Objetivos: avaliar a frequência da infecção por Leishmania spp. em pacientes com HIV/aids em uma coorte de São Paulo/SP, a positividade dos métodos sorológicos e moleculares em pacientes com HIV/aids e as possíveis associações da positividade dos diferentes métodos laboratoriais com variáveis clínicas, laboratoriais e epidemiológicas. Material e métodos: estudo transversal, realizado com pacientes atendidos no Instituto de Infectologia Emílio Ribas com diagnóstico de infecção pelo HIV. A amostra foi calculada com base na prevalência da infecção por Leishmania spp. em pacientes com HIV/aids, estimada em estudos prévios. Foram incluídos 240 pacientes nesta amostragem, os quais foram submetidos à coleta de sangue periférico em dois tubos: um tubo seco para análise sorológica; um tubo contendo EDTA, para o diagnóstico molecular. As amostras foram submetidas aos seguintes testes diagnósticos: ELISA usando antígenos de L. major-like (ELISA L. major-like); ELISA usando antígenos de Leptomonas seymouri (ELISA Leptomonas); ELISA usando antígenos rk39 (ELISA rK39); ELISA usando antígenos rK28 (ELISA rK28); Reação de imunofluorescência indireta (RIFI); Teste de Aglutinação Direta (DAT); Reação em cadeia da polimerase (PCR) com os seguintes genes alvos: kDNA (PCR kDNA) e ITS-1 (PCR ITS-1). Resultados: a frequência, levando-se em consideração a positividade em pelo menos um dos métodos empregados, foi de 34,6%. Sessenta pacientes (25%) foram positivos para ELISA L. major-like; nove (3,8%) para ELISA Leptomonas; três (1,3%) para ELISA rK39; seis (2,5%) para ELISA rK28; onze (4,6%) para RIFI; quatro (1,7%) para PCR kDNA; 10 (4,2%) para PCR ITS-1. Nenhuma amostra foi positiva para DAT. Não houve associação da positividade dos testes com contato com área endêmica para LV ou presença de sintomas sugestivos de LV. Para ELISA L.major-like, ELISA Leptomonas e RIFI, houve associação entre valores de contagem de linfócitos T CD4+ e positividade dos testes. Conclusões: Houve uma alta prevalência da infecção por Leishmania spp. em pacientes infectados pelo HIV na amostra estudada, principalmente utilizando-se ELISA com antígeno total de L. major-like. Apesar de existir a possibilidade de reação cruzada com outros antígenos que possam ter influenciado na positividade de alguns testes, especialmente ELISA L. major-like, outros testes considerados altamente específicos para o diagnóstico de infecção por Leishmania também se apresentaram positivos, o que pode demonstra a magnitude da coinfecção Leishmania/HIV na amostra estudada. Houve associação entre positividade de alguns testes estudados e os valores de linfócitos T CD4+, com maior positividade destes testes em pacientes mais imunodeprimidos. Presença de sintomatologia ou epidemiologia para LV não tiveram influência na positividade dos testes diagnósticos / Introduction: Leishmania/HIV coinfection represents a major health problem since there is greater relapse and lethality due to visceral leishmaniasis in HIV infected population. However, there are few information about the frequency of Leishmania infection in asymptomatic HIV infected individuals, who may develop full-blown symptomatic disease in the future. In addition, few information about the performance of laboratory diagnostic methods for leishmaniasis in coinfected patients are available in Brazil and Latin America. Objectives: The main objective is evaluate the frequency of Leishmania spp. infection in HIV infected patients in a patient cohort from São Paulo/SP. This study also aims to evaluate the positivity of the serological and molecular methods in HIV/AIDS patients and the possible associations of the positivity of the different laboratory methods regarding to clinical, laboratory and epidemiological variables. Material and methods: a cross-sectional study including HIV infected patients treated at Institute of Infectious Diseases Emilio Ribas. The sample was calculated considering the frequency of Leishmania spp. infection in HIV infected patients estimated in previous studies. Two hundred and forty patients were included, whose were submitted to peripheral blood collection in two tubes: a dry tube for serological analysis; a tube containing EDTA, for molecular diagnosis. The samples were submitted to the following diagnostic tests: ELISA using L. major-like antigens (ELISA L. major-like); ELISA using Leptomonas seymouri antigens (ELISA Leptomonas); ELISA using rk39 antigens (ELISA rK39); ELISA using rK28 antigens (ELISA rK28); indirect fluorescent-antibody test (IFAT); direct agglutination test (DAT); polymerase chain reaction (PCR) with the following target genes: kDNA (kDNA PCR) and ITS-1 (ITS-1 PCR). Results: the frequency considering at least one test positive was 34.6%. Sixty patients (25%) were positive by ELISA L. major-like; nine (3.8%) by ELISA Leptomonas; three (1.3%) by ELISA rK39; six (2.5%) by ELISA rK28; eleven (4.6%) by IFAT; four (1.7%) by kDNA PCR; 10 (4.2%) by ITS-1 PCR. No sample was positive by DAT. There was no association between the positivity of the tests and history of having lived in a VL transmission area or presence of symptoms suggestive of VL. For ELISA L.major-like, ELISA Leptomonas and IFAT, there was an association between CD4+ T-lymphocyte counts and test positivity. Conclusions: there was a high prevalence of Leishmania spp. in HIV-infected patients included, mainly using ELISA with total L. major-like antigen. Although there is a possibility of cross-reaction with other antigens that can influence the positivity of some tests, especially ELISA L. major-like, other tests considered to be highly specific for the diagnosis of Leishmania infection were also positive, which may demonstrate the magnitude of Leishmania/HIV coinfection in the sample studied. There was an association between the positivity of some tests studied and the values of T CD4+ lymphocytes, with a higher positivity of these tests in more immunosuppressed patients. Presence of symptoms or epidemiology for VL had no influence on the positivity of the diagnostic tests

As leishmanioses constituem um grupo de zoonoses causadas por várias espécies do gênero Leishmania. O diagnóstico molecular associado aos exames clínicos, sorológicos e parasitológicos facilitam a investigação epidemiológica e controle das infecções. A PCR convencional (cPCR) e em tempo real (qPCR) são utilizadas para detectar moléculas de DNA do parasita em diferentes amostras biológicas, no entanto, quando a carga parasitária é baixa, resultados falsos-negativos são comuns na rotina diagnóstica. O objetivo deste estudo foi o avaliar a utilidade dos iniciadores para qPCR para substituir ou associar à cPCR no diagnóstico molecular da leishmaniose visceral (LV) e leishmaniose tegumentar americana (LTA). Foram testados iniciadores moleculares pelo sistema TaqMan® com o objetivo de discriminar Leishmania (Viannia) braziliensis e Leishmania (Leishmania) infantum chagasi a partir de sequências da actina de Leishmania. O gênero Leishmania foi identificado pelos iniciadores LEISH18S que amplifica uma região 18S de Leishmania. Os iniciadores ACTLDon amplifica uma região da actina de L. (L.) infantum chagasi. L. (V.) braziliensis foi identificada pelos iniciadores ACTLVian, que amplifica uma região da actina do complexo L. (V.) braziliensis. Foram testadas 581 amostras de DNA, extraídas de sangue, necropsias de órgãos, aspirados de linfonodo ou medula e biópsia de lesão. Para LV foram testadas 361 amostras (243 caninas e 118 humanas). Destas, 214 foram positivas na cPCR, foi o padrão ouro, e a sensibilidade com os iniciadores da qPCR variou de 92,99% (199) a 95,32% (204). A especificidade foi determinada por 147 amostras negativas na cPCR e variou de 95,91% (141) a 98,63% (145). Os índices de concordância variaram de 92,99% (RV1/RV2; LEISH18S e ACTLDon) a 95,32% (RV1-RV2 e LEISH18S). Foram testadas 220 amostras para LTA. A especificidade com os iniciadores foi determinada por 80 amostras negativas e os resultados foram 98,75% e 100% para LEISH18S e ACTLVian respectivamente, e das 140 amostras positivas na cPCR 129 (92.14%) e 124 (88,57%) foram positivas com os iniciadores LEISH18S e ACTLVian respectivamente. Os índices de concordância foram de 88,57% (LB-3C/LU-5A/ACTLVian/LEISH18S) e 92,14% (LB-3C/LU-5A e LEISH18S). Estes resultados mostram que a associação dos iniciadores para qPCR em conjunto com a cPCR pode aumentar a detecção do parasita em amostras clínicas. / Leishmaniasis are a group of zoonosis caused by several species belonging to the genus Leishmania. The molecular diagnostic associated with the clinical, serological and parasitological examination favor the epidemiological investigation and the infection control. The conventional PCR (cPCR) and the real time PCR (qPCR) are used to detect the parasite as from DNA molecules in a number of biological samples, however, when the parasite load is low, false results are common in the diagnostic routine. The ain of the present study was to evaluate the advantage of the primers in qPCR in order to replace or associate with cPCR in the molecular diagnosis of visceral leishmaniasis (VL) and cutaneous leishmaniasis (CL) molecular diagnostic. The primers were tested on TaqMan® system in order to discriminate Leishmania (Viannia) braziliensis and Leshmania (Leishmania) infantum chagasi based on a sequence of Leishmania actin. The genus Leishmania was recognized by the primer LEISH18S, which amplifies an 18S region of Leishmania. The primer ACTLDon amplifies a region of the L. (L.) infantum chagasi actin. The L. (V.) braziliensis was determined by the primer ACTLVian and this primer amplifies a region of the L. (V.) braziliensis complex actin. A total of 581 DNA samples were tested. These samples were extracted from blood, organs necropsy, lymph node and bone marrow aspirate and lesion biopsy. A number of 361 samples (243 canine and 118 human) were tested for VL. From these 361 samples, 241 were positive in cPCR and the sensitivity in the qPCR primers ranged from 92,99% (199) to 95,32 (204). The specificity was determined by 147 negative samples in cPCR and ranged from 95,91% (141) to 98,63 % (145). The agreement indices ranged from 92,99% (RV1/RV2; LEISH18S e ACTLDon) to 95,32% (RV1-RV2 and LEISH18S). A total of 220 samples were tested for CL. The primer\'s specificity was determined by 80 negative samples and the results were 98,75% and 100% for LEISH18S and ACTLVan respectively, and from 140 positive samples in cPCR 129 (92,14%) and 124 (88,57%) were positive for primers LEISH18S and ACTLVian respectively. The agreement indices were 88,57% (LB-3/LU-5A/ACTLVian/LEISH18S) and 92,14% (LB-3C/LU-5A and LEISH18S). These results show that the primers for qPCR are likely to improve the detection of the parasite in clinical samples. These results show that the associate use of qPCR primers with cPCR primers can increase the detection of the parasite in clinical samples.

Submitted by LOURDES APARECIDA ZAMPIERI D'ANDREA null (zampieri@muranet.com.br) on 2018-01-08T08:37:28Z No. of bitstreams: 1 Tese -D ANDREA, Lourdes Aparecida Zampieri.pdf: 8216517 bytes, checksum: cc8882ddd2cecf7137d25aa22f866c59 (MD5) / Approved for entry into archive by Claudia Adriana Spindola null (claudia@fct.unesp.br) on 2018-01-08T10:39:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dandrea_laz_dr_prud.pdf: 8216517 bytes, checksum: cc8882ddd2cecf7137d25aa22f866c59 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-08T10:39:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dandrea_laz_dr_prud.pdf: 8216517 bytes, checksum: cc8882ddd2cecf7137d25aa22f866c59 (MD5) Previous issue date: 2017-08-08 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A questão central desenvolvida na presente tese é uma abordagem integrada de elementos que envolvem as ações de vigilância e o controle da leishmaniose visceral (LV), relacionando dados e análise do mundo microbiológico ao conjunto de informações espaciais existentes sobre o tema. Teve como principal objetivo, avaliar a distribuição espacial dos casos humanos com LV notificados e relacioná-los com a infecção na população canina nos municípios pertencentes à Rede Regional de Atenção à Saúde – RRAS 11 de Presidente Prudente – SP e as rotas de dispersão do agente patógeno. Para isto, foram utilizados conhecimentos geoepidemiológicos e de ferramentas de geoprocessamento e análise espacial para analisar as rotas de disseminação dos agentes e da infecção da doença na população canina na área urbana e rural. O estudo foi desenvolvido nos 45 municípios da macrorregião de Presidente Prudente – SP, com base populacional, no delineamento transversal e na coleta de dados in locu. Para entender o contexto da área foi realizado: levantamento de dados secundários, que constitui a criação de bases cartográficas que tenham sido elencadas como explicativas do fenômeno estudado (LV), com base na bibliografia sobre o tema; identificação das espécies de Leishmania circulantes na população canina, discutindo-se fatores de risco individuais para soropositividade de Leishmania em cães em áreas urbanas e rurais, bem como avaliando a prevalência de LV canina em assentamentos rurais da Região de Saúde de Presidente Prudente – SP. Também foi estratificado áreas para LV humana e canina, segundo o risco epidemiológico, com base em mapas temáticos, análises espaciais e proposto um modelo preditivo de rotas de dispersão e fluxos de transmissão da LV na população humana e canina. Com base nesses resultados, foi possível identificar na RRAS 11 de Presidente Prudente três diferentes tipos de centros de dispersão da LV: core, eixo e borda e a necessidade de a política pública repensar o Programa de Vigilância e Controle da LV e estabelecer estratégias diferenciadas para cada tipo de centro de dispersão, visando a quebra da cadeia de transmissão da doença e/ou o retardo do processo de dispersão em território Paulista. / The central issue developed in this thesis is an integrated approach of elements that involve actions of surveillance and controlling of the visceral leishmaniasis (VL), relating data and analysis of the microbiological world to the set of spatial information on this subject. The main objective was to evaluate the spatial distribution of human cases with reported VL and to relate them to infection in the canine population in the municipalities belonging to the Regional Network of Health Care - RRAS 11 of Presidente Prudente - SP and the pathogen's routes of dispersion. Geoepidemiological knowledge, geoprocessing tools and spatial analysis were used to analyze the agents' routes of dissemination and the disease's infection in the canine population in urban and rural areas. The study was carried out in the 45 municipalities of macroregion of Presidente Prudente - SP, with population base, in the cross - sectional design and in locu data collection. To understand the context of the area, were carried out: secondary data collection, for the creation of cartographic bases that have been listed as explanatory of the phenomenon studied (VL), based on the bibliography on the subject; identification of the circulating Leishmania species in the canine population, discussing individual risk factors for Leishmania seropositivity in dogs in urban and rural areas, as well as evaluating the prevalence of canine VL in rural settlements of the Health Region of Presidente Prudente – SP. Areas for human and canine VL were also stratified, according to the epidemiological risk, based on thematic maps and spatial analyzes, and a predictive model of dispersion routes and VL transmission flows in the human population and Canine was proposed. Based on these results, in RRAS 11 of Presidente Prudente were identified three different types of VL dispersion centers: core, axis and border, and the need for public policy to rethink the VL Surveillance and Control Program and to establish differentiated strategies for each type of dispersion center, aiming at breaking the chain of transmission of the disease and / or delaying the dispersal process in the Sao Paulo state area.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:30:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 598716 bytes, checksum: d6fd3f536714334d84a8944a61d08272 (MD5) Previous issue date: 2008-02-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis (Lutz & Neiva 1912) has wide distribution in the Brazilian territory and is incriminated as transmitting the Leishmania (Leishmania) infantum chagasi (Cunha & Chagas 1937). Considering the inconsistency of information about the possibility of L. (L.) longipalpis to be a complex or not of species for Brazilian populations, and that information on the biology of this phlebotomine sand fly are still insufficient for the success of the shares to control the LVA, this paper aims to contribute to the knowledge of some Brazilian populations of L. (L.) longipalpis of Teresina (PI), Jequié (BA), and Sobral Massapé (CE) (the latter two were considered four populations, according to the pattern of abdominal spots in males), studying the morphology and morphometry of specimens adult males, and the eating habits of females. In morphology and morphometry were considered 21 characters, distributed by the head, thorax and abdomen, analyzed by ANOVA and Student-Newman-Keuls (SNK). For the knowledge of the blood sources of females the ELISA test was applyied. Data obtained through morphology revealed, among the six populations analyzed, individuals with one par and two pairs of abdominal spots, within the predominance of "one-pair" males. The most frequent palpal formula was 1.2.4.3.5; other two formulae were also observed, although in a few specimens, 1.4.2.3.5 and 1. (2.4) .3.5. In morphometric analysis, through SNK test, were found unions, disjunctions and intersections among populations analyzed. Based on the analysis of six characters, could observe that the Jequié and Teresina populations produced an individual set from those formed by the Ceará populations. In population of Jequié, when compared to population of Ceará (Massapê and Sobral), it can be observed that 79 to 95% of the characters revealed significant differences. By ANOVA, at the crossroads between the population of Ceará, few significant differences were detected. The dendogram created by TFPGA, revealed a split between the Ceará and others populations, and verified that Sobral populations, S1P and S2P, were in isolated arms. Values of bootstrap showed that the populations of Ceará (S1P, S2P, M1P and M2P) in Teresina/Jequié branches are isolated, with a confidence level of 100%. The populations of Sobral, S1P and S2P, have become isolated arms, with 53% of bootstrap. About the blood feeeding sources studies, 609 females were tested, obtaining an index of general positivity of 40.72%. In the municipality of Jequié, the females showed greater positive for the anti-serum of bird, followed by the human, dog and opossum. In Teresina, was found the highest rate of positivity, although with reactivity only for the anti- serum from bird (higher percentage), followed by the dog anti-serum. In sand flies from Sobral, once again, bird anti- serum showed a higher percentage of positivity, followed by dog and opossum. In specimens from Massapê, it was found the greatest diversity of blood sources combinations, being the only population who got reactivity for all anti-sera. Also, in Teresina, Jequié and Sobral, females were identified with reactivity for more than one anti-serum. / Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis (Lutz & Neiva, 1912) possui ampla distribuição no território brasileiro e está incriminada como transmissora da Leishmania (Leishmania) infantum chagasi (Cunha & Chagas 1937). Considerando a discordância de informações quanto à hipótese de L. (L.) longipalpis ser ou não um complexo de espécies em relação às populações brasileiras, e que informações sobre a biologia deste flebotomíneo, ainda, são insuficientes para o sucesso das ações de controle da LVA, o objetivo deste trabalho foi o de contribuir com o conhecimento de algumas populações brasileiras de L. (L.) longipalpis de Teresina (PI), Jequié (BA), Sobral e Massapê (CE) (as duas últimas foram consideradas quatro populações, de acordo com o padrão de manchas abdominais nos machos), estudando a morfologia e morfometria de espécimes adultos machos, e os hábitos alimentares das fêmeas. Na morfologia e morfometria foram considerados 21 caracteres, distribuídos pela cabeça, tórax e abdome, analisados pelos testes ANOVA e Student-Newman- Keuls (SNK) e para conhecimento das fontes alimentares utilizou-se a técnica de ELISA. Os dados obtidos através da morfologia revelaram, nas seis populações analisadas, exemplares com um par e dois pares de manchas abdominais, havendo sempre a predominância de machos da forma um- par . A fórmula palpal mais freqüente foi 1.2.4.3.5; outras duas fórmulas, também, foram observadas, ainda que em poucos exemplares, 1.4.2.3.5 e 1.(2.4).3.5. Na análise morfométrica, através do teste de SNK foram encontradas uniões, disjunções e intersecções entre as populações analisadas. Baseado na análise de seis caracteres foi possível observar que as populações de Jequié e Teresina formavam um conjunto disjunto daqueles formados pelas populações do Ceará. Na população de Jequié, quando comparada às populações do Ceará (Massapê e Sobral), pode-se observar que 79 a 95% dos caracteres revelaram diferenças significativas. Através da ANOVA, no cruzamento entre as populações do Ceará, foram detectadas poucas diferenças significativas. O dendograma gerado a partir do programa TFPGA, revelou separação entre as populações do Ceará e as demais, bem como evidenciou as populações de Sobral, S1P e S2P, em ramos isolados. Valores de bootstrap demonstraram que as populações do Ceará (S1P, S2P, M1P e M2P) e Teresina/ Jequié constituem ramos isolados, com um nível de confiança de 100%. As populações de Sobral, S1P e S2P se apresentaram como ramos isolados, com bootstrap de 53%. Com relação aos estudos das fontes alimentares, foram testadas 609 fêmeas, obtendo-se um índice geral de positividade de 40,72%. No município de Jequié, as fêmeas revelaram maior positividade para o anti-soro de ave, seguido de humano, cão e de gambá. Em Teresina obteve-se o mais alto índice de positividade, embora com reatividade, apenas, para o anti-soro de ave (maior percentual), seguido do anti- soro de cão. Nos flebotomíneos procedentes de Sobral, mais uma vez, o anti-soro de ave revelou maior percentual de positividade, seguido de cão e gambá. Nos espécimes procedentes de Massapê foi encontrada a maior diversidade de combinações de fontes alimentares, sendo esta a única população que obteve reatividade para todos os anti-soros. Também, em Teresina, Jequié e Sobral, foram identificadas fêmeas com reatividade para mais de um anti-soro.

Submitted by Socorro Pontes (socorrop@ufersa.edu.br) on 2017-01-30T13:39:15Z No. of bitstreams: 1 GiselleSCO_DISSERT.pdf: 1058104 bytes, checksum: 89fd1032b2b20bfc50ba7056a41faafa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-30T13:39:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GiselleSCO_DISSERT.pdf: 1058104 bytes, checksum: 89fd1032b2b20bfc50ba7056a41faafa (MD5) Previous issue date: 2016-01-15 / The visceral leishmaniasis (VL) is an infectious disease and a zoonosis. It is still considered a public health challenge, due to the frequency and mortality caused on the population. The overall objective is to develop an instrument for prevention of Visceral Leishmaniasis in the context of the Family Health Strategy, analyzing the knowledge of health professionals. The specific objectives are characterizing the profile of health professionals on the Family Health Strategy Program; developing an instrument to assess the interest of Health Professionals in the Family Health Strategy Program (FHS) on measures to prevent visceral leishmaniasis in their community; identifying the influencing factors which come into play when those professionals take actions to prevent visceral leishmaniasis; identifying areas of greatest prevalence of visceral leishmaniasis in Mossoró and evaluating the influence of health professionals’ knowledge on the prevalence of visceral leishmaniasis. It is an exploratory, descriptive and quantitative research which was carried out in 30 Basic Health Centers (BHC) of the Family Health Strategy Program in the urban area in the town of Mossoró-RN. The population were health professionals from the FHSP, and the sample composed by 227 elements. Two questionnaires have been administered, one related to knowledge on VL and the other one for identifying the factors that guide health professionals. Data were expressed on standard average and deviation, minimum, maximum, simple frequencies and percentages obtained through the software Statistical Package for Social Science (SPSS) version 20.0. The instrument was developed and submitted to content validation with application of Kappa Index and Content Validity Index. Then, the instrument was applied to health professionals. Being validated with 20 items, divided into five factors such as the work process, environment, socio-personal difficulties, financing, prevention and control. The instrument is suitable and can be used for research in primary health care regarding to prevention and control of visceral leishmaniasis, particularly in endemic areas. Regarding to the knowledge on VL, it was identified that health professionals know the animals that may be affected, enabling an increase in the identification of cases of this disease (OR: 2.74; IC95%=1.17 – 6.41). Knowing the symptoms of the disease in animals is the key to realize its existence (OR: 2.75; IC95%=1.09 – 6.89). In addition, the fact of knowing prevention is a contributing factor to detect the disease in the regions (OR: 2.38; IC95%=1.07 – 5.31). Regarding the transmission times of the disease, it was most relevant to a greater detection of VL cases (OR: 2.75; IC95%=1.24 – 6.05). In conducting an active search for HVL and Canine Visceral Leishmaniasis (CVL), there is a greater risk of finding positive cases of the disease (OR: 2.57; IC95%=1.13 – 5.61). After the crude analysis of the O.R., the adjusted data revealed that these variables are more important. The health professionals have a limited knowledge about the VL, there are still gaps to be considered, especially on the prevention and control of disease in the researched areas. Thus, requiring an ongoing training and implementation of incisive governmental actions / A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença infecciosa e uma zoonose. Considerada um desafio à saúde pública pela frequência e morbimortalidade ocasionada. Objetiva-se desenvolver um instrumento para prevenção da Leishmaniose Visceral no âmbito da Estratégia de Saúde da Família, analisando o conhecimento dos profissionais de saúde. Mais especificamente, caracterizar o perfil dos Profissionais de Saúde da Estratégia de Saúde da Família; elaborar um instrumento que avalie o interesse dos Profissionais de Saúde da Estratégia de Saúde da Família (ESF) sobre as ações de prevenção da Leishmaniose Visceral da sua comunidade; identificar os fatores influenciadores dos Profissionais de Saúde da Estratégia de Saúde da Família (ESF) sobre as ações de prevenção da Leishmaniose Visceral; avaliar a influência do conhecimento dos Profissionais de Saúde da Estratégia de Saúde da Família (ESF) sobre a prevalência de Leishmaniose Visceral; realizar um levantamento das áreas de maior prevalência da Leishmaniose Visceral em Mossoró, Rio Grande do Norte. Trata-se de uma pesquisa exploratória, descritiva e quantitativa. Foi realizada em 30 Unidades Básicas de Saúde (UBS) da ESF na zona urbana, no Município de Mossoró-RN. A população foi composta pelos profissionais de saúde das ESF, sendo a amostra composta por 227 elementos. Foram aplicados dois questionários, um relacionado ao conhecimento sobre LV e outro para identificação de fatores que norteiam os profissionais de saúde. Os dados foram expressos em média e desvio padrão, valores mínimos, máximos, frequência simples e porcentagem obtidos através do programa (SPSS) versão 20.0. O instrumento foi desenvolvido, sendo submetido à validação de conteúdo com aplicação do Índice Kappa e Índice de Validade de Conteúdo. Em seguida, foi aplicado o instrumento aos profissionais de saúde. Ficando validado com 20 itens, subdividido em cinco fatores caracterizados em processo de trabalho, ambiente, dificuldades sócios pessoais, financiamento, prevenção e controle. O instrumento encontra-se adequado, podendo ser utilizado em pesquisas na atenção primária de saúde em relação à prevenção e controle da Leishmaniose visceral, principalmente em áreas endêmicas. Em relação ao conhecimento da LV, foi identificado que os profissionais de saúde conhecem os animais que podem ser acometidos, possibilitando um aumento na identificação de casos da doença (OR: 2,74; IC95%=1,17 – 6,41). O conhecimento da sintomatologia da doença no animal é um determinante para perceber a sua existência (OR: 2,75; IC95%=1,09 – 6,89). Além disso, o fato de conhecer a prevenção é um fator que contribui para detectar a doença nas regiões. (OR: 2,38; IC95%=1,07 – 5,31). Em relação aos horários de transmissão da doença foi relevante para uma maior detecção de casos de LV (OR: 2,75; IC 95%1,24 – 6,05). Na realização de busca ativa de LVH e Leishmaniose Visceral Canina (LVC), existe um maior risco de encontrar casos positivos da doença (OR: 2,57; IC95%=1,13 – 5,61). Após a análise bruta do OR, o ajustado revelou que essas variáveis são mais importantes. Os profissionais de saúde possuem um conhecimento restrito acerca da LV, existindo ainda lacunas a serem consideradas, principalmente sobre a prevenção e controle da doença nas áreas estudadas, necessitando assim, de capacitação continuada por parte das ações governamentais contudentes / 2017-01-27

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-08-14T18:03:14Z No. of bitstreams: 1 Tese_GlauciaFernandesCota.pdf: 3493712 bytes, checksum: fa62c9cc82d462b8b7270f8bcf4123dc (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-14T18:03:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_GlauciaFernandesCota.pdf: 3493712 bytes, checksum: fa62c9cc82d462b8b7270f8bcf4123dc (MD5) Previous issue date: 2013 / Leishmaniose visceral (LV) entre infectados pelo HIV tem incidência crescente em regiões onde as duas infecções são endêmicas. Reconhece-se hoje que a doença está associada a maior mortalidade, menor taxa de resposta clínica e parasitológica e maior toxicidade ao tratamento que as observadas em pacientes não infectados pelo HIV. Várias são as incertezas e dificuldades a cerca do diagnóstico, tratamento e seguimento dos pacientes coinfectados com Leishmania-HIV. Esta tese é composta por três revisões sistemáticas e um estudo clínico e busca contribuir para a redução de algumas lacunas do conhecimento à cerca da coinfecção Leishmania-HIV. Por meio de revisões sistemáticas da literatura e de um estudo transversal, que comparou a acurácia de métodos invasivos e não invasivos para o diagnóstico de LV entre infectados pelo HIV, confirmamos baixa sensibilidade dos testes sorológicos, à exceção do teste de aglutinação direta, que deve ser preferido em rotinas de investigação. Incluindo nossos próprios resultados, foram identificados apenas três estudos que avaliaram o desempenho de testes imunocromatográficos rápidos, baseados na pesquisa do anticorpo contra o antígeno recombinante K39, entre infectados pelo HIV. Por sua vez, testes baseados na reação em cadeia da polimerase, incluindo a técnica que utiliza como alvo a subunidade ribossomal do RNA e testada em nosso meio, apresentam alto desempenho global e despontam como alternativa menos invasiva ao exame parasitológico. De acordo com a evidência disponível, a terapia antirretroviral altamente potente não constitui intervenção suficiente para evitar a recidiva. Por outro lado, o uso de profilaxia secundária reduz significativamente a ocorrência de episódios subsequentes de LV. A revisão da literatura nos permitiu ainda identificar algumas condições marcadoras do risco de recidiva que, se presentes, reforçam a indicação de profilaxia secundária: ausência de elevação da contagem de linfócitos T CD4+ no seguimento; história prévia e recidiva de LV; contagem de linfócitos T CD4+ abaixo de 100 células/mL na ocasião do primeiro diagnóstico de LV. Os trabalhos publicados revelam maior taxa de resposta clínica com o uso de anfotericina B em relação ao tratamento com derivados de antimônio, o que parece estar relacionado à menor toxicidade que à maior eficácia. Os derivados de antimônio são drogas mal toleradas pelos pacientes coinfectados com HIV, associando-se a alta taxa de descontinuidade do tratamento e mortalidade três vezes maior que a observada com o tratamento com anfotericina B. Os dados disponíveis até o momento são insuficientes para se comparar a eficácia entre as várias formulações de anfotericina ou se definir a dose e o tempo de tratamento ideais para LV entre infectados pelo HIV. / Concurrent visceral leishmaniasis (VL) and HIV infection have been reported in most areas of the world where the geographical distribution of the two infections overlap. The disease is characterized by significantly lower cure rates, higher drug toxicity, relapse and mortality rates than those for VL in non-HIV-infected individuals. There are many uncertainties and difficulties about the diagnosis, treatment and monitoring of Leishmania-HIV coinfected patients. This dissertation is composed of three systematic reviews and a clinical study and aims to contribute to the reduction of some of the knowledge gaps in Leishmania-HIV coinfection field. Through a systematic literature review and a cross-sectional study, designed to evaluate the accuracy of invasive and noninvasive tests for VL diagnosis in HIV-infected patients, it was confirmed the low sensitivity of serological tests, except for direct agglutination test. Including our own results, there are only three studies evaluating the performance of anti-rK39 based dipsticks tests among HIV-infected patients. Tests based on DNA detection are highly sensitive and may contribute to a VL diagnostic workup. A good performance was also obtained (in our cross-sectional study) with a real time PCR (polymerase chain reaction) using as target the small subunit of ribosomal RNA. PCR tests are emerging as a less invasive and a useful alternative to parasitological examination. According to the available evidence, highly active antiretroviral therapy is not sufficient to prevent VL recurrence. In contrast, secondary prophylaxis was shown to be protective against relapse. Some predictors of VL relapse could be identified: a) the absence of an increase in CD4+ cells at follow-up; b) lack of secondary prophylaxis; and c) previous history of VL relapse. CD4+ counts below 100 cells/mL at the time of primary VL diagnosis may also be a predictive factor for VL relapse. Based on these observations, a high-risk population might be identified and such patients might then be eligible for secondary prophylaxis. Available evidence suggests higher clinical response rate with amphotericin B than with antimony treatment, which appears to be related to less toxicity than with higher effectiveness. Antimonial therapy carries a higher rate of drug discontinuation and a significantly higher mortality indirectly compared to treatment with amphotericin B. The optimal dose of amphotericin and the difference in efficacy between its various formulations remain to be established.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-08-01T21:22:36Z No. of bitstreams: 1 Nivea Farias Luz Papel da proteína hemeoxigenase....pdf: 1624634 bytes, checksum: 6f830105c144bc3c799743a490e5a511 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-01T21:22:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nivea Farias Luz Papel da proteína hemeoxigenase....pdf: 1624634 bytes, checksum: 6f830105c144bc3c799743a490e5a511 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A leishmaniose visceral (LV) apresenta ampla distribuição geográfica e é fatal caso não seja tratada. As manifestações hematológicas são constantes na LV e em casos não tratados os pacientes evoluem à óbito por sangramento maciço ou anemia grave. Neste cenário, mecanismos ligados à hemólise, metabolismo do heme e atividade da enzima heme oxigenase podem estar envolvidos na imunopatogênese da LV, no entanto essa perspectiva ainda não foi explorada. A heme oxigenase (HO) tem importantes propriedades regulatórias e está envolvida em processos fisiológicos e patofisiológicos como citoproteção e inflamação. Apesar de sua sugestiva participação no contexto da infecção por Leishmania, uma rápida pesquisa no PubMed com as palavras heme oxigenase e Leishmania remete a somente três trabalhos até a presente data. Nesse projeto testaremos a hipótese de que a ativação da enzima heme oxigenase-1 (HO-1) favorece a infecção por Leishmania (L) chagasi, principal agente etiológico da LV humana no Brasil. Nossas observações nesse trabalho indicam que a enzima HO-1 é induzida em macrófagos durante a infecção por L. chagasi e que a indução farmacológica da HO-1, pela CoPP aumenta a carga parasitária de macrófagos infectados por L. chagasi e reduz a produção de mediadores pró-inflamatórios frente à estimulação por LPS, tais como TNF, NO, PGE2, MCP-1, IL-1β e IL-6. Além disso, a HO-1 favorece um ambiente anti-inflamatório onde prevalece a presença de IL-10 sobre a de TNF. Macrófagos derivados de medula óssea de camundongos deficientes no gene HO-1 tem menor carga parasitária, quando infectados por L. chagasi em comparação aos macrófagos de camundongos selvagens. Esses achados indicam um potencial deletério para a HO-1 na infecção por L. chagasi, bem como sugerem possíveis mecanismos envolvidos na imunopatogênese da LV. / Visceral leishmaniasis (VL) is a widespread disease and is fatal if left untreated. Hematological manifestations are common in VL and untreated patients evolve to death from massive bleeding and severe anemia. In this scenario, mechanisms related to hemolysis, heme metabolism and enzyme activity of heme oxygenase may be involved in the immunopathogenesis of VL. But that panorama has not been explored. Heme oxygenase (HO) has important regulatory properties and is involved in patho-physiological processes such as cytoprotection and inflammation. Despite HO participation in the context of Leishmania infection is suggestive, a quick search on PubMed with the words heme oxygenase and Leishmania refers to only three papers to date. This project will test the hypothesis that heme oxygenase- 1 (HO-1) activation favors Leishmania (L) chagasi, the main etiology agent of human VL in Brazil. Our observations indicate that HO-1 is induced in macrophages during L. chagasi infection and pharmacological induction of HO-1 by CoPP increases parasite load of infected macrophages and results in inhibition of TNF- α, IL-1β, IL-6, MCP-1, PGE2 and Nitrite levels upon LPS stimulation and simultaneously induced a higher IL-10/TNF-α ratio in peritoneal macrophages contributing to the anti inflammatory pathway that favors L. chagasi replication. Beyond this, we observed that bone marrow derived macrophages knockout to HO-1 gene have a significant low parasite load when infected by L. chagasi than their wild type counterparts. In summary, our findings suggest that this enzyme can play a deleterious role in VL and clarify one of the immunoregulatory mechanisms involved in VL.

Made available in DSpace on 2015-06-17T12:06:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 339.pdf: 1673760 bytes, checksum: b6988680884c38393a1141615afb2832 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / A leishmaniose visceral ocorre em países dos cinco continentes e quando não tratada pode levar a óbito. Para se evitar esse desfecho, são essenciais o diagnóstico precoce e tratamento adequado. Com o objetivo de contribuir na pesquisa de novos diagnósticos para leishmaniose visceral, esse trabalho propôs desenvolver sistemas baseados em Nested-PCR convencional e em único tubo para o diagnóstico de leishmaniose visceral. A partir de uma revisão na literatura em busca de alvos moleculares utilizados no diagnóstico dessa parasitose, foram selecionados os alvos subunidade menor do RNA ribossômico (ssu rRNA) e espaçador transcrito interno 1 (ITS-1), que compõem o DNA do agente etiológico Leishmania infantum, para o desenvolvimento das nested-PCR. Foi também escolhido o alvo kDNA, o mais aplicado nas abordagens de PCR, para comparações com os sistemas desenvolvidos. Após otimizar todas as PCR com DNA genômico de L. infantum, esses sistemas foram avaliados em amostras de sangue, soro e urina de indivíduos com suspeita de leishmaniose visceral dos hospitais de referência da cidade do Recife - PE. Para utilização da urina, foram avaliados quatro protocolos de extração de DNA e identificou-se que a extração por fenol-clorofórmio, com modificações, foi a de melhor desempenho. Na avaliação com amostras biológicas, as PCR simples e nested-PCR com os alvos ssu rRNA e ITS-1 não tiveram boa sensibilidade ao se usar sangue, e não foram capaz de amplificar DNA do parasito em soro e urina. Esses sistemas desenvolvidos não podem ser usados para o diagnóstico da leishmaniose visceral. No entanto, a kDNAPCR apresentou bons resultados quando avaliada com urina. Mais estudos devem ser feitos para avalia-la como um diagnóstico seguro para esse tipo de amostra biológica. Esse trabalho representa um ponto de início para posteriores estudos que objetivem o aprimoramento e validação da nested-PCR único tubo para o diagnóstico da leishmaniose visceral

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-06-21T17:33:38Z No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuição para o ... 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-06-21T17:33:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuição para o ... 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-21T17:33:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuição para o ... 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:19:17Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuicao para o 2016.pdf.txt: 243367 bytes, checksum: 9df9a4fb8bc7a3cd21d749f05648f537 (MD5) Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuicao para o 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Gonçalo Moniz, Instituto de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / INTRODUÇÃO: A Leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecciosa e parasitária que se encontra em expansão no Brasil. A espécie que causa a doença no Brasil é a Leishmania infantum. O cão é o principal reservatório do parasita. Uma vacina contra leishmaniose visceral canina (LVC) pode favorecer o controle da doença. Este trabalho tem como objetivo contribuir para o desenvolvimento de uma vacina contra LVC. OBJETIVO: O estudo do primeiro capítulo visou o desenvolvimento de um modelo para a avaliação de antígenos candidatos à vacina contra LVC. METODOLOGIA: Um experimento foi realizado para obtenção de cães resistentes a LVC. Os linfócitos dos animais deveriam ser capazes de reconhecer antígenos potencialmente úteis para o desenvolvimento de uma vacina. Para isso, uma cepa de L.infantum foi isolada de cão naturalmente infectado e doente (Camaçari, Bahia). Seis cães adultos e sadios foram inoculados com 1x108 formas promastigotas em fase estacionária de cultura por via dérmica e acompanhados por dois anos. RESULTADOS: Os animais apresentaram: 1) área de induração e ulceração rasa no local da inoculação do parasita com cura espontânea em um período inferior a três meses, 2) ausência de manifestações clínicas e de alterações hematológicas e bioquímicas séricas, 3) produção baixa e flutuante de anticorpos da classe IgG reativos a antígenos de Leishmania, 4) resposta linfoproliferativa (em 4 de 6 cães) frente a estimulação com antígenos de Leishmania, 5) produção baixa de IFN-γ em um ensaio realizado com sangue total incubado por 24h com antígenos de Leishmania (4 de 5 cães), 6) carga parasitária baixa em aspirado de baço, detectada por PCR em tempo real. CONCLUSÃO: Os animais desenvolveram uma forma subclínica da infecção ao lado de resposta imune humoral e celular fracas. OBJETIVO: No segundo capítulo foi testado um ensaio de avaliação da produção de citocinas por células de sangue de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum. O quantiFERON modificado permite a avaliação in vitro e de maneira rápida da produção de citocinas contra Leishmania em animais de área endêmica. METODOLOGIA: Antígeno solúvel e antígenos recombinantes de L. infantum (rLci2-NT-5R-CT e rLci2-NT-CT) foram produzidos e utilizados no ensaio para a estimulação do sangue total de27 cães de área endêmica e não endêmica para LVC por 24h. O plasma foi coletado e a produção das citocinas caninas IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-10 e TNF-α foram quantificadas. RESULTADO: Devido a problemas técnicos não foi possível avaliar os dados obtidos e, consequentemente, não foi possível caracterizar grupos de animais susceptíveis e resistentes. OBJETIVO: No terceiro capítulo, a carga parasitária e aspectos histológicos em diferentes regiões do baço de cães com LVC foi analisada. METODOLOGIA: A carga parasitária e alterações histológicas no baço de 6 cães com LVC foram avaliados por amostragem de três secções inferior, média e superior do órgão. RESULTADO: Observou-se uma variação na distribuição na carga parasitária do baço do mesmo animal. Avaliações histológicas (desorganização polpa branca, granulomas, periesplenite, células plasmáticas, e infiltração polimorfonuclear) mostraram uma variação na freqüência (granulomas) ou intensidade (perisplenite) no baço de 2 dos 6 cães. CONCLUSÃO: Conclui-se que a distribuição da carga parasitária e as alterações histológicas no baço de cães com LV mostram um certo grau de heterogeneidade. / INTRODUCTION: Visceral Leishmaniasis (VL) is an infectious parasitic disease which is increasing in Brazil. The species that causes the disease in Brazil is Leishmaniainfantum. The dog is the main reservoir of the parasite. A canine visceral leishmaniasis vaccine (CVL) may favor the control of the disease. This paper aims to contribute to the development of a vaccine against CVL. OBJECTIVE: The first chapter study aimed the development of a model for the evaluation of candidate antigens for a vaccine against CVL. An experiment was conducted to obtain resistant dogs to CVL. Lymphocytes of these animals should be able to recognize potentially useful antigens for a vaccine development. METHODOLOGY: For this, a strain of L. infantum was isolated from naturally infected and sick dog (Camaçari, Bahia). Six dogs and healthy adults were intradermally inoculated with 1 x 108 promastigotes in the stationary phase culture and were followed for two years. RESULTS: The animals showed: 1) induration area and shallow ulceration in parasite inoculation site with spontaneous healing in a period of less than three months, 2) absence of clinical symptoms and hematological and biochemical changes, 3) low and floating production of antibodies IgG reactive to Leishmania antigens, 4) lymphoproliferative response (in 4 of 6 dogs) compared to stimulation with leishmanial antigens, 5) low IFN-γ in a test performed on whole blood incubated for 24 h with antigen Leishmania (4 of 5 dogs), 6) a low parasite load in spleen aspirates, detected by realtime PCR. CONCLUSION: These animals developed a subclinical form of the infection alongside with a weakspecific humoral and cellular immune response and weak cell. OBJECTIVE: The second section was tested in a trial evaluating cytokine production by blood cells of dogs naturally infected with Leishmaniainfantum. The modified QuantiFERON allows evaluation both in vitro and quickly production of cytokines against Leishmania in animals in an endemic area. METHODOLOGY: Soluble antigen and recombinant antigens of L. infantum (rLci2-5R-NT-CT and rLci2-NT-CT) were produced and used in the assay for the stimulation of whole blood of 27 animals from endemic and nonendemic area for LVC for 24h. Plasma was collected and cytokine production of canine IFN- γ, IL-2, IL-6, IL-10 and TNF-α cytokines were quantified. RESULTS: Due to technical some problems, it was not possible to characterize groups of animals susceptible and resistant in relation to modified QuantiFERON assay results. OBJECTIVE: In the third chapter, the parasite load and histological aspects in different regions of the spleen of dogs with CVL were analyzed. METHODOLOGY: The parasite load and histological changes in the spleen of 6 dogs with CVL were evaluated by sampling three sections of the spleen (lower, middle and upper section of the organ). RESULTS: There was a variation in parasitic load distribution in the spleen of the same animal. Histological evaluations (disorganized white pulp, granulomas, periesplenite, plasma cells, and polymorphonuclear infiltration) showed a variation in the frequency (granulomas) or intensity (perisplenite) in spleen in 2 of 6 dogs. CONCLUSION: Therefore, the distribution of the parasitic load and histological changes in dogs spleen with VL show a certain degree of heterogeneity.