Linfomas representam um grupo de neoplasias que tem em comum a origem em células linforreticulares, manifestando-se geralmente em tecidos linfóides. Em sua evolução há uma reação generalizada contra as alterações sistêmicas que comprometem a homeostase, conhecida como resposta de fase aguda. Citocinas são proteínas relacionadas à imunidade inata e adquirida que medeiam diversas funções e estão envolvidas na resposta inflamatória e são produzidas em resposta a vários estímulos. Foram objetivos desse estudo, verificar se existem diferenças no perfil das citocinas interleucina-2, interleucina-6, interleucina-10, MCP-1 e TNF-alfa nos animais com linfoma multicêntrico ao diagnóstico, quando comparados a um grupo controle e verificar se existe diferença entre os níveis apresentados no momento do diagnóstico e na 6ª semana, momento em que se avalia a remissão. Os grupos do estudo foram constituídos por 20 cães com linfoma (experimental) e 19 cães clinicamente normais (controle) sendo excluídos do estudo cães que apresentavam tratamento prévio e/ou doença concomitante. A quantificação das variáveis estudadas foi realizada utilizando-se kit comercial CCYTOMAG 90K (Milliplex®), sendo as mesmas determinadas no grupo controle uma única vez e no grupo experimental, quando do diagnóstico e na 6ª semana de tratamento. A análise estatística foi realizada através de teste não paramétrico de Mann-Whitney não pareado para o grupo controle e diagnóstico, bem como o diagnóstico e a 6ª semana de tratamento, enquanto que a análise de variância simples (ANOVA) não paramétrico Kruskal-Wallis foi aplicada na comparação dos três grupos (controle, ato do diagnóstico e 6ª semana de tratamento) para todas as citocinas. Foi observada diferença significante nos níveis de IL-10 entre o grupo controle e o experimental ao diagnóstico (p= 0,0033). Os valores do grupo linfoma ao diagnóstico foram elevados em relação ao controle, sem diferença significante entre os momentos do diagnóstico e 6ª semana. As IL-2 e IL-6 mostraram diferenças significantes entre o grupo controle e o grupo linfoma ao diagnóstico (p= 0,0037 e p=0,0017, respectivamente), mas os valores do controle apresentaram-se elevados em relação ao momento do diagnóstico e não houve diferença entre o diagnóstico e 6ª semana. As citocinas TNF-α e MCP-1 não apresentaram diferença significativa. Concluiu-se que os animais com linfoma no diagnóstico apresentaram níveis séricos mais elevados de IL-10, quando comparados ao diagnóstico e ao grupo controle e seus níveis mantiveram-se elevados na 6ª semana de tratamento. As concentrações de IL-2 e IL-6 estiveram mais elevadas no grupo controle quando comparadas aos animais do grupo experimental e as concentrações de TNF-α e de MCP-1 não apresentaram diferença significativa / Lymphomas belongs to a group of malignancies that have in common the origin in lymphoreticular cells, and is generally manifested in lymphoid tissues. In its evolution there is a generalized reaction against the systemic changes that compromise the homeostasis, known as acute phase response. Cytokines are proteins related to innate and acquired immunity which mediate several functions and are involved in inflammatory response and produced in response to several stimulant. This study was designed to verify if there are differences in the profile of cytokines interleukin-2, interleukin-6, interleukin-10, MCP-1 and TNF-alpha in dogs with multicentric lymphoma when compared to a control group and see if there is difference between the levels at the time of diagnosis and at the 6th week, when remission is achieve. The study group consisted of 20 dogs with lymphoma (experimental) and 19 clinically healthy dogs (control). We excluded patients who had previous treatments and/ or concomitant disease. For measurements of cytokines we use a commercial kits CCYTOMAG 90K (Milliplex®), the same being determined in the control group only once and in the experimental group at diagnosis and at 6 week of treatment. Statistical analysis was performed using nonparametric Mann-Whitney unpaired test for the control group and diagnosis, and the diagnosis and 6 week of treatment, while the simple analysis of variance (ANOVA) nonparametric Kruskal-Wallis test was applied when comparing the three groups (control, diagnosis and act 6th week of treatment) for all cytokines. There was a significant difference in IL-10 levels between the control group and the experimental diagnosis (p = 0.0033). The values of the lymphoma group at diagnosis were higher than the control, without significant difference between the time of diagnosis and 6th week. IL-2 and IL-6 showed significant differences between the control and lymphoma groups at diagnosis (p = 0.0037 and p = 0.0017, respectively), but the control had higher levels than the lymphoma group and there was no difference between diagnosis and 6th week. The TNF-α and MCP-1 cytokines showed no significant difference. It was concluded that animals with lymphoma had higher serum levels of IL-10 when compared to control and their levels remained high at 6 weeks of treatment. IL-2 and IL-6 concentrations were higher in the control group compared to lymphoma group and the concentrations of TNF-α and MCP-1 were not significantly different

O objetivo do trabalho foi avaliar a técnica de biópsia retal em equinos e as alterações histopatológicas encontradas na mucosa retal em animais clinicamente saudáveis e em animais com alterações do trato gastrintestinal. Foram utilizados 32 equinos divididos em três grupos: 10 animais clinicamente saudáveis (grupo 1), sete animais com alterações do trato gastrintestinal com diagnóstico estabelecido (grupo 2) e 15 animais com manifestações clínicas inespecíficas do trato gastrintestinal (grupo 3). Os equinos do grupo 1 foram biopsiados duas vezes, a segunda biópsia sendo realizada 48 horas após a primeira. As biópsias retais foram realizadas com os animais em estação, utilizando-se pinça de biópsia tipo jacaré. As amostras de mucosa retal foram coradas por hematoxilina-eosina (HE), azul de alciano com ácido periódico de Schiff a 2,5% e azul de toluidina. No grupo 1, não foram observadas diferenças significativas entre a primeira e a segunda biópsia, mas três equinos apresentaram pequenas alterações que podem ser decorrentes da palpação retal. Na primeira avaliação, sete animais desse grupo apresentaram padrão semelhante, permitindo estabelecer um padrão de normalidade histológica para a mucosa retal: epitélio superficial preservado; criptas uniformes e alinhadas perpendicularmente à superfície com grande número de células caliciformes com mucinas ácidas em maior quantidade; linfócitos intra-epiteliais na superfície do epitélio em número de até 15 linfócitos para cada 100 colonócitos; pequeno número de linfócitos, plasmócitos e eosinófilos infiltrando a lâmina própria e a submucosa. Os outros três equinos deste grupo apresentaram um aumento na intensidade das células inflamatórias (discreto a moderado na intensidade de linfócitos e plasmócitos na lâmina própria e submucosa, e moderado na intensidade dos eosinófilos na submucosa). Os equinos do grupo 2, todos com síndrome cólica, apresentaram as seguintes alterações histopatológicas: proctite linfoplasmocítica simples (4/7) e proctite eosinofílica (1/7). No grupo 3 (12 equinos com diarreia crônica e três com emagrecimento progressivo), apenas um animal apresentou mucosa retal com padrão de normalidade. Nos outros animais foram observadas: proctite linfoplasmocítica simples (6/15), proctite erosiva (3/15), proctite linfoplasmocítica com aumento de neutrófilos (2/15), proctite eosinofílica (2/15), proctite linfoplasmocítica com aumento de neutrófilos e eosinófilos (1/15) e infiltração por linfócitos atípicos/linfoma (1/15). Concluiu-se que: a técnica de biópsia retal avaliada é de fácil execução e segura; embora algumas alterações histológicas possam ser observadas na mucosa retal de equinos clinicamente saudáveis, causadas ou não por palpação retal, há um padrão de normalidade que deve ser usado para a avaliação de equinos com alterações gastrintestinais; apenas em alguns casos as alterações histológicas encontradas na mucosa retal em equinos permitem um diagnóstico definitivo, mas elas podem direcionar o raciocínio diagnóstico em outros, sendo este um importante exame complementar a ser indicado em casos de equinos com alterações gastrintestinais inespecíficas. / The purpose of this study was to asses the rectal biopsy techique in horses and the histopathological changes found in the rectal mucosa in clinically healthy animals and in animals with clinical signs of intestinal disorders. 32 horses were divided into three groups: 10 animals clinically healthy (group 1), seven animals with gastrointestinal disorders with an established diagnosis (group 2) and 15 animals with nonspecific clinical manifestations of the gastrointestinal tract (group 3). The horses in group 1 had two biopsies, the second biopsy was performed 48 hours after the first. Rectal biopsies were performed on the animals station, using alligator biopsy forceps. The samples of rectal mucosa were stained with hematoxylin end eosin (HE), alcian blue PAS pH 2.5% and toluidine blue. In group 1, no significant differences between the first and second biopsy were observed, but three horses showed small changes that may result from rectal palpation. In the first evaluation, seven animals of this group showed a similar pattern, establishing a standard of normality for histological rectal mucosa: Surface epithelial preserved; crypts of uniform length, diameter and perpendicular arrangement to the surface with acid mucins strongly dominated over neutral mucins in the goblet cell population; intraepithelial lymphocytes in the surface of the epithelium with sparse population of approximately 15 cells per stretch of 100 epithelial cells; sparse individual lymphocytes, plasma cells and eosinophils infiltrating the lamina propria and submucosa. The other three horses in this group had an increase in the intensity of inflammatory cells (mild to moderate in intensity of lymphocytes and plasma cells in the lamina propria and submucosa, and moderate intensity of eosinophils in the submucosa). The horses in group 2, all with colic syndrome, showed the following pathological changes: simple lymphocyticplasmacytic proctitis (4/7) and eosinophilic proctitis (1/7). In group 3 (12 horses with chronic diarrhea and three with progressive weight loss), only one animal showed rectal mucosa with normal histology. It was observed in the other animals: simple lymphocytic-plasmacytic proctitis (6/15), erosive proctitis (3/15), lymphocyticplasmacytic proctitis with increased neutrophils (2/15), eosinophilic proctitis (2/15), lymphocytic-plasmacytic proctitis with increased neutrophils and eosinophils (1/15) and atypical lymphocytes infiltration/lymphoma (1/15). It was concluded that: the rectal biopsy technique evaluated is effective and safe; although some histological changes can be observed in the rectal mucosa of clinically healthy horses, whether or not caused by rectal palpation, there is a normal range that should be used to the evaluation of horses with gastrointestinal disorders; only in some cases the histological changes found in the rectal mucosa in horses allow a definitive diagnosis, but they can lead to a diagnostic logic in others, which is an important complementary test to be indicated in cases of horses with nonspecific gastrointestinal disturbances.

Linfoma é uma neoplasia maligna originária dos linfócitos. Podem atingir regiões nodais e extranodais, este último ocorrendo mais comumente em casos de linfoma não-Hodking (LNH) e raramente em linfomas de Hodking (LH). Na cavidade oral, o linfoma é classificado como a terceira neoplasia mais comumente encontrada depois do Carcinoma epidermóide e tumores de glândula salivar. O linfoma difuso de grandes células B (LDGCB) é o subtipo mais comum de LNH na cavidade oral, e ocorre mais comumente em região do palato e gengiva marginal. O diagnóstico do linfoma requer um estudo imuno-histoquímico, incluindo anticorpos específicos para maior precisão. O presente trabalho fez um levantamento de todos os casos de linfoma oral diagnosticados no Serviço de Patologia Cirúrgica da FOUSP de maneira retrospectiva no período de 1997 a 2017. Foram analisadas as fichas de pedido de exame e diagnóstico histopatológico. Através da coleta de dados foi possível a visualização do perfil dos casos presentes e de um painel imuno-histoquimico mínimo encontrados no acervo da Faculdade de Odontologia da USP. Concluímos que em um laboratório de patologia Oral com recursos limitados, os anticorpos LCA, CD20, CD3 e Plasma cell são de grande valia para diagnosticar a maior parte dos principais linfomas que acometem a cavidade oral. / Lymphoma is a malignant neoplasm originating from lymphocytes. They may reach nodal and extranodal regions, the latter occurring most commonly in cases of non-Hodgkin\'s lymphoma (NHL) and rarely in Hodgkin\'s lymphoma (LH). In the oral cavity, lymphoma is classified as the second neoplasm most commonly found after spinous-cell carcinoma. Diffuse large B-cell lymphoma (LDGCB) is the most common subtype of NHL in the oral cavity, and occurs mostly in the palate and marginal gingiva. Diagnosis of lymphoma requires an immunohistochemical study, including specific antibodies for greater accuracy. The present study made a survey of all cases of oral lymphoma diagnosed in the Department of Surgical Pathology of FOUSP, retrospectively, in the period from 1997 to 2017. The files of the application for examination and histopathological diagnosis were analyzed. Through the collection of data it was possible to visualize the profile of the present cases and a minimal immunohistochemical panel found in the collection of the Faculty of Dentistry of USP. We conclude that in an oral pathology laboratory with limited resources, the LCA, CD20, CD3 and Plasma cell antibodies are of great value to diagnose some of the main lymphomas that affect the oral cavity.

Nós avaliamos a utilidade de um painel de anticorpos constituído por CD5, CD10, CD23, CD43, bcl-2 e ciclina D1 na classificação de 134 linfomas de pequenas células B. O CD10, positivo nos linfomas foliculares, o CD23, positivo nos linfomas linfocíticos/LLC, e a ciclina D1, expressa nos linfoma do manto, foram os que mais contribuíram na diferenciação destes linfomas, firmando o diagnóstico em 88,1% dos casos. A ausência de aspecto nodular e de células dendríticas, e a presença de centros de proliferação diferencia o linfoma linfocítico/LLC dos outros tipos. A expressão de proteína p53 e de antígeno Ki-67 > 20% foi associada com tempo de sobrevida menor, principalmente no linfoma do manto / We evaluated the usefulness of a panel of antibodies comprising CD5, CD10, CD23, CD43, bcl-2 and cyclin D1 in the classification of 134 small B-cell lymphomas. CD10, positive in follicular lymphomas, CD23, positive in lymphocytic lymphoma/CLL and cyclin D1 expressed in mantle cell lymphoma were the ones that contributed the most in the differentiation of these lymphomas, confirming the diagnosis in 88.1% of the cases. The absence of nodular aspect and dendritic cells and the presence of proliferation centers differentiate the lymphocytic lymphoma/CLL from the other types. The expression of p53 protein and Ki-67 > 20% was associated to a shorter survival, especially in mantle cell lymphoma

Classic Hodgkin Lymphoma (cHL) has an annual incidence of 2.4 cases per 100 000 population in the UK, and is one of the most common malignancies diagnosed in young adults aged 15 to 34. The majority of younger patients have a good long-term outcome with between 80 and 90% disease-specific survival but cHL also affects older adults in whom the prognosis is significantly poorer. The role of tumour-associated macrophages (TAM) in cHL has gained much interest, with several studies reporting an association between high numbers of CD68-positive TAM and poor prognosis. There is also a question over the prognostic significance of Epstein-Barr Virus (EBV) infection which is implicated in up to 50% of cHL cases in developed countries. Published data suggests that EBV positivity in elderly patients may be associated with a poorer outcome, whereas in younger adults may be of prognostic benefit. Differences related to age are of interest particularly as an age-related decline in immunity has been linked with the development of certain subtypes of Non-Hodgkin Lymphoma in older patients. In a retrospective study, two separate cohorts of patients with cHL were examined with the aim of identifying: • Differences in the cellular composition of the tumour microenvironment in cHL which has arisen in young and elderly adult patients; • Differences in the cellular composition of the tumour microenvironment in cHL associated with or without EBV infection; • Factors within the tumour microenvironment which may influence prognosis and may be targeted for novel treatments. One group consisted of patients aged between 15 and 34 years at diagnosis and the other, of those aged 60 or over at presentation. Tissue obtained at the time of diagnosis was examined with regard to a number of factors related to the malignant cells and the surrounding microenvironment, including the number and phenotype of macrophages, the number of plasmacytoid dendritic cells and the number of malignant Hodgkin Reed-Sternberg (HRS) cells and non-malignant ‘background’ cells undergoing apoptosis. Comparisons were made between the two age groups, also taking into account the EBV-status of tumours, cHL subtype and gender. Results confirmed the current understanding that EBV-positive cHL is more common in older patients and has a strong, but not exclusive, association with the MCHL subtype. In addition, a strong link between young males and EBV-positive disease was shown. Macrophages were found to vary between the two age groups, in number and phenotype and there were clear differences associated with the presence or absence of EBV infection. While no definite link with outcome and macrophages was identified it was apparent that the implications of macrophages in the tumour microenvironment may differ between the two age groups. The number of apoptotic cells correlated closely with the number of macrophages and in the young the number of HRS cells was associated with prognosis. Investigation of the tumour microenvironment is complex and caution is needed in interpreting studies which do not differentiate between patients according to age, as tumour characteristics may have variable implications in different age groups. In this thesis a number of clinicopathological differences were identified between the two age groups. These point to the need for further larger studies to delineate how such age-related differences may or may not be associated with immune function and how this information could be translated into treatments to improve outcomes.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:38:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hugo Freire Nunes.pdf: 9223555 bytes, checksum: 727e689aec4609cbe403ed62b05a1443 (MD5) Previous issue date: 2011-02-11 / Healthy radio-exposed individuals, who received low levels of Cesium-137 radiation, during the accident that happened in Goiania, in 1987 and their familiars were tested for the detection of t(14;18) rearranged B cells in peripheral blood, using a high sensitive real-time quantitative PCR method. Also were tested a control group comprised of healthy non exposed age matched men. The chromosomal translocation t(14;18)(q32;q21) is characteristic of Follicular Lymphoma and it is a frequent abnormality in other types of non-Hodgkin lymphoma. This translocation leads to constitutive activation of the BCL2 oncogene by the enhancers of the immunoglobulin heavy chain loco. T(14;18) translocation constitute the genetic hallmark and early initiating event of Follicular Lymphoma. In healthy individuals, the same translocation may also be found in a small fraction of peripheral blood lymphocytes and positive cells might serve as an indicator for environmental exposure to carcinogens and possibly correlate with the cumulative risk of developing t(14;18)-positive non-Hodgkin lymphoma. Eight healthy radio-exposed, five relatives including three children, and four not exposed healthy men were tested for the detection of this translocation. Only one unexposed individual from the control group was positive for the chromosomal translocation, healthy radio-exposed individuals presented lower levels of cells bearing the BCL-2/JH rearrangement when compared to the levels of the patients with Follicular Lymphoma before treatment, however, test more cells would be required to confirm the total absence of circulating cells bearing the rearrangement BCL2/JH. / Indivíduos radioexpostos saudáveis que receberam acidentalmente baixas doses de radiação ionizante de Césio -137 no acidente ocorrido em Goiânia em 1987 e familiares, foram testados neste trabalho para a presença de células B em sangue periférico apresentando a translocação t(14;18) MBR. Da mesma maneira foram testados voluntários sem histórico de exposição à radiação ionizante, componentes de um grupo controle. Foi utilizado um método de PCR quantitativo em tempo real muito sensível. A translocação cromossômica t(14;18)(q31; q21) é característica de Linfomas Foliculares e é uma anormalidade freqüente em outros Linfomas não Hodgkin. Esta translocação acarreta em uma ativação constitutiva do oncogene BCL2 por uma região do gene de imunoglobulina de cadeia pesada. A ocorrência da translocação é considerada um evento marcante e inicial para o desenvolvimento de Linfoma Folicular. Em indivíduos saudáveis a mesma translocação pode ser encontrada em pequenas frações dentre os linfócitos de sangue periférico. As células translocadas são importantes referências para exposição ambiental à carcinógenos e possivelmente podem ser correlacionadas ao risco acumulativo de desenvolvimento de Linfoma não Hodgkin t(14;18) positivo. Oito radio expostos, cinco familiares e quatro voluntários não expostos foram testados para a detecção desta translocação cromossômica. Não foram encontras células t(14;18) MBR nos radioexpostos e familiares. Apenas um indivíduo não exposto pertencente ao grupo controle apresentou o rearranjo BCL2/JH, assim foi possível determinar com o estudo que os radioexpostos e familiares não apresentam freqüência da célula B t(14;18) similares das encontradas em média no sangue periférico de indivíduos com Linfoma Folicular antes do tratamento segundo outros estudos, entretanto apenas testando maiores quantidades de DNA de cada indivíduo será possível determinar abstenção total de células portando o rearranjo BCL2/JH

Pacientes com linfoma de Hodgkin (LH) tratados com poliquimioterpia com adriamicina, bleomicina, vincristina e doxorrubicina (ABVD) apresentam resposta terapêutica distinta. Para aprimorar a avaliação prognóstica e a abordagem terapêutica em LH objetivamos avaliar o valor prognóstico da PET-FDG após 2 ciclos de ABVD (PET2) em pacientes com LH. Foram incluídos nesse estudo prospectivo 115 pacientes com diagnóstico recente de LH no período de agosto de 2005 a dezembro de 2007. Os pacientes foram estadiados com exame clínico, laboratorial, tomografia computadorizada e PET-FDG (PET0). Todos os pacientes foram tratados com ABVD e aqueles com massa tumoral extensa foram tratados com radioterapia associada. Após dois ciclos de ABVD os pacientes foram submetidos a PET2. Nenhum tratamento foi alterado baseado na PET2. Foi avaliado o valor prognóstico dos fatores clínicos, Índice Prognóstico Internacional (IPI) e PET2 em relação à sobrevida livre de eventos (SLE) em três anos. Dos 104 pacientes que foram avaliados, 82 atingiram remissão completa e 22 pacientes apresentaram falha de tratamento durante a mediana de 36 meses de acompanhamento. A SG e SLE em três anos foi de 94,2% e 74,2% respectivamente. A SLE em três anos da PET2 positiva foi de 54,3%, enquanto da PET2 negativa foi de 90,5% (p< 0.001). Na análise de subgrupos de pacientes com estádio precoce, avançado, IPI baixo e alto risco, a PET2 também apresentou correlação estatisticamente significativa com o prognóstico. Concluímos que a PET2 é o melhor fator prognóstico independente na avaliação de pacientes com LH / Patients with Hodgkin lymphoma (HL) treated with poliquimioteraphy with adriamycin, bleomycin, vincristine and doxorubicin (ABVD) have distinct therapeutic response. In order to improve the prognostic assessment and therapeutic approach in HL we have evaluated the prognostic value of FDG-PET after 2 cycles of ABVD (PET2). Were included in this prospective study 115 patients with newly diagnosed LH in the period of August 2005 to December 2007. The patients were staged with physical examination, laboratory, CT and PET-FDG (PET0). All patients were treated with ABVD and those with extensive tumor were treated with radiotherapy associated. After two cycles of ABVD patients underwent PET2. No treatment was changed based on PET2. We assessed the prognostic value of clinical factors, international prognostic score (IPS) and PET2 in relation to event-free survival (EFS) in three years. Of the 104 patients who finalized the evaluation, 82 achieved complete remission and 22 patients experienced treatment failure during the median of 36 months of follow-up. The EFS at three years was 74.2%. EFS in three years of PET2 positive was 54.3%, while the PET2 negative was 90.5% (p <0.001). In subgroup analysis of patients with early stage, advanced, low and high risk IPS, PET2 also showed significant correlation with the prognosis. We conclude that the PET2 is the best independent prognostic factor in the evaluation of overall patients with LH, or in subgroups of early, advance; low and high risk of HL

O linfoma canino é uma das neoplasias mais prevalentes em cães, diagnosticado frequentemente através de exame citológico de aspirados. A imunofenotipagem para diferenciação entre linfomas de células B e T é importante para definição prognóstica e tratamento, entretanto, dificilmente é realizada em materiais provenientes de aspirados citológicos. A citologia em meio líquido (CML) é uma metodologia automatizada de produção de esfregaços citológicos, que permite a conservação de todo o material da aspiração, e utilização do material residual para, por exemplo, produção de emblocado celular (EC) e imunocitoquímica. Este trabalho teve como objetivo aplicar a CML e EC com imunocitoquímica em amostras de linfonodos caninos suspeitos para linfoma. Além disso, pretendeu caracterizar morfologicamente as células linfoides neste tipo de preparado, comparando ao esfregaço convencional. Para isto, foram selecionados 54 cães com linfadenomegalia, 10 deles sorologicamente positivos para leishmaniose canina. Comparou-se a CML com a citologia convencional, quanto às características técnicas e testou-se dois métodos diferentes de EC: Bouin e agarose com formalina. Aplicou-se painel imunocitoquímico de anticorpos anti-CD3, anti-CD79a, anti-Pax-5 e anti-Ki67, para imunofenotipagem e determinação da proliferação celular. Adicionalmente, realizaram-se análises estatísticas para avaliação do desempenho e concordância interobservador comparada entre citologia convencional, CML e o uso conjunto de CML e imunocitoquímica do emblocado celular. Como resultado, as células linfoides apresentaram-se preservadas, com melhor definição de cromatina e nucléolos, porém com tamanho reduzido e pior definição citoplasmática, na CML. O EC de Bouin revelou grupos densos e bem definidos, que permitiram a aplicação da imunocitoquímica. Por outro lado, os emblocados de agarose, apresentaram-se frouxos, com células marcadamente dispersas, revelando-se inadequados para preparados de células linfoides. O anticorpo anti-Pax-5 mostrou-se mais adequado do que o anti-CD79a para marcação de células B em emblocados, por produzir menos fundo e pela marcação nuclear ser mais distinguível do que a citoplasmática. A concordância interobservadores da CML foi moderada (k= 0,434), enquanto a da citologia convencional foi boa (k=0,762). Ambas as técnicas exibiram a mesma acurácia e, com aplicação da CML, houve redução do percentual de amostras insatisfatórias. A CML em conjunto com EC e imunocitoquímica apresentou maior sensibilidade (75%), especificidade (99%) e acurácia (89,47%). Como conclusão, a CML em conjunto com EC e imunocitoquímica pode ser aplicada para diagnóstico de linfoma canino, com maior sensibilidade, especificidade e acurácia / Canine lymphoma is one of the most commonly treated neoplasia in dogs, frequently diagnosed through cytological smears. Differentiating B lymphomas from T lymphomas is important for prognosis and treatment, however, immunophenotyping is rarely applied to cytological preparations. Liquid-based cytology (LBC) is an automated method for producing cytological smears, allowing preservation of the residual material for other analysis, as cell block (CB) immunocytochemistry. The aim of this study was to apply LBC and cell block immunocytochemistry in the diagnosis of lymphoid samples from dogs suspected of lymphoma. Besides, we intended to characterize the lymphoid cells regarding to its morphology, comparing to conventional cytology. To accomplish these goals, 54 dogs were selected, being 10 of them with canine leishmaniasis. LBC smears were compared to conventional smears, with production of two types of CB: bouin and formalin with agarose. Also, an immunocytochemistry panel with anti-CD3, anti-CD79a, anti-Pax-5 and anti-Ki-67 was applied, for immunophenotyping and cellular proliferation determination. As results, lymphoid cells were well preserved, with better nuclear definition, but smaller size and worst cytoplasmic definition, in LBC. Bouin CBs revealed cohesive groups, which allowed immunocytochemistry. In the other hand, agarose CBs were loose, with disperse cells, inadequate for lymphoid aspirates. Anti-Pax-5 antibody was more adequate than anti-CD79a, once it produced less background and the nuclear marking was more distinct than cytoplasmic. CML interrater agreement was moderate (k=0,434), while conventional cytology agreement was good (k=0,762). Both techniques exhibited the same accuracy, and, with CML, there was reduction of unsatisfactory results. LBC with cell block immunocytochemistry presented the higher sensitivity (75,00%), specificity (99,99%) and accuracy (89,47%). As conclusion, LBC with immunocytochemistry CB can be applied for canine lymphoma diagnosis, with higher sensitivity, specificity and accuracy

Uma das causas mais freqüentes de insucesso terapêutico do câncer, está associada à Resistência a Múltiplas Drogas (MDR). A resistência a múltiplas drogas refere-se ao desenvolvimento de resistência simultânea a uma variedade de agentes citotóxicos que apresentam diferentes sítios de ação e estruturas químicas diversas. Os mecanismos MDR são representados por genes cujos produtos funcionam como bombas, reduzindo o acúmulo intracelular de drogas e a resposta ao tratamento. O linfoma é uma neoplasia comum na espécie, sendo muito responsiva à quimioterapia, embora a recidiva seja esperada e possa estar relacionada ao MDR. O presente estudo teve como objetivo avaliar a expressão dos genes MDR-1, MRP e LRP e de seus produtos, em cães com linfoma. Foram colhidas amostras de linfonodos periféricos de 15 cães com linfoma multicêntrico ao diagnóstico e na recidiva (durante a quimioterapia). A expressão dos genes e proteínas MDR foram determinados por RT-PCR e \"Dot Blotting\", respectivamente. As freqüências de expressão ao diagnóstico dos genes MDR, MRP e LRP foram 93,3% igualmente e as freqüências de seus produtos foram 85,8%; 71,5% e 85,8% respectivamente. Na recidiva, as freqüências de expressão dos genes MDR, MRP e LRP elevaram-se para 100% igualmente e as freqüências de suas proteínas foram 92,9% para P-gp e MRP e de 100% para LRP. Portanto, obteve-se uma alta freqüência na expressão do MDR-1/P-gp, MRP e LRP, em quase todos os cães, não só na recidiva, como também ao diagnóstico. É necessário verificar se estes mecanismos podem induzir o fenótipo MDR no linfoma canino multicêntrico. O estudo dos mecanismos MDR trará novas perspectivas para o tratamento de tumores como o linfoma canino. A modulação desses mecanismos por meio de drogas específicas ou por terapia gênica, pode contribuir para o sucesso do tratamento de neoplasias caninas ou humanas. / One of the most frequent causes of treatment failure in cancer is associated to Multiple Drug Resistance (MDR). MDR refers to simultaneous resistance to a variety of cytotoxic agents that have different targets and diversal chemical structures. MDR mechanisms are represented by genes wich encodes proteins that work like pumps, reducing intracellular drug acumulation and the response to treatment. Lymphoma is a common neoplasia in dogs wich is very responsive to chemotherapy, although relapses are expected, including those related to MDR. The aim of this study was to evaluate the possible expression of MDR-1, MRP and LRP genes and their proteins, in dogs with lymphoma. Lymph node samples at diagnosis and at relapse (during chemotherapy) from 15 dogs with multicentric lymphoma were obtained. The expression of MDR genes and proteins were determined by RT-PCR and Dot Blotting. Expression of MDR, MRP and LRP gene were 93,3% at diagnosis and their products were 85,8%; 71,5% and 85,8% respectively. Expression of MDR, MRP and LRP gene increased to 100% at relapse and their proteins were 92,9% to P-gp and MRP and 100% to LRP. High frequency of MDR-1/P-gp, MRP and LRP expressions were found in almost all dogs, not only at relapse but also at diagnosis. It\'s necessary to analyse if these mechanisms can induce the MDR fenotype in canine multicentric lymphoma. The study of MDR mechanisms will conduct the treatment of tumors like canine lymphoma to new perspectives. The modulation of these mechanisms by certain drugs or gene therapy, may contribute to the success in treatment of canine or human neoplasias.

Anemia é a anormalidade hematológica mais comum em pacientes com câncer. Aproximadamente 30% dos cães com linfoma são anêmicos. A anemia pode ocorrer devido substituição da medula óssea por células tumorais, sangramentos ou hemólise, porém mais frequentemente é associada à doença crônica. Estudos realizados em seres humanos com neoplasias hematopoiéticas demonstraram que a diminuição das defesas antioxidantes eritrocitárias e aumento na concentração de marcadores de peroxidação lipídica no plasma são responsáveis pelo estresse oxidativo e ocorrência da anemia. Foram objetivos deste estudo determinar as concentrações eritrocitárias de glutationa reduzida e as atividades das enzimas antioxidantes eritrocitárias glutationa redutase, glutationa peroxidase, além de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico e o estado antioxidante total em cães hígidos e com linfoma multicêntrico com e sem anemia, para avaliar a influência dos mecanismos oxidativos no desenvolvimento das anemias associadas a essa neoplasia. Foram observadas reduções significativas nas concentrações eritrocitárias de glutationa reduzida e glutationa peroxidase nos cães com linfoma multicêntrico e com anemia (p < 0,001 e p < 0,01, respectivamente). Não houve diferença significativa na avaliação das concentrações eritrocitárias de glutationa redutase e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, entretanto as concentrações plasmáticas de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico eram maiores no grupo de cães com linfoma multicêntrico e com anemia (0,94 mol/L &plusmn; 0,72; média &plusmn; desvio padrão). Os valores do estado antioxidante total foram significativamente menores (p < 0,001) nos cães com linfoma multicêntrico e com anemia (0,60 mol/L &plusmn; 0,12) do que nos animais hígidos (0,87 mol/L &plusmn; 0,11). Os resultados obtidos indicam um aumento do estresse oxidativo principalmente nos cães com linfoma multicêntrico e com anemia pela diminuição das defesas antioxidantes, representadas pelo estado antioxidante total e glutationa reduzida intraeritrocitária e pela tendência a maior aumento das concentrações plasmáticas de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, podendo estas alterações contribuir para a ocorrência de anemia em cães com linfoma multicêntrico. / Anemia is the most common hematological abnormality in cancer patients. Approximately 30% of dogs with lymphoma are anemic. Anemia can occur due to bone marrow replacement by tumor cells, bleeding or hemolysis, but more often is associated with chronic disease. Researches in human hematopoietic malignancies demonstrated that reduction of erythrocyte antioxidant defenses and increased concentrations of markers of lipid peroxidation in the plasma are responsible for the occurrence of oxidative stress and anemia. This study was designed to measure the concentration of erythrocyte reduced glutathione and antioxidant enzyme activities of erythrocyte glutathione reductase, glutathione peroxidase, and thiobarbituric acid reactive substances and total antioxidant status in healthy dogs and with multicentric lymphoma with or without anemia, to evaluate the influence of oxidative mechanisms in the development of anemia associated with this neoplasia. Significant reductions were observed in erythrocyte concentrations of reduced glutathione and glutathione peroxidase in dogs with multicentric lymphoma and anemia (p < 0.001 and p < 0.01, respectively). There was no significant difference in the assessment of concentrations of erythrocyte glutathione reductase and thiobarbituric acid reactive substances, although concentrations of plasma thiobarbituric acid reactive substances were higher in dogs with multicentric lymphoma and anemia (0.94 mol/L &plusmn; 0.72, mean &plusmn; standard deviation). The values of total antioxidant status were significantly lower (p < 0.001) in dogs with multicentric lymphoma and anemia (0.60 mol/L &plusmn; 0.12) than in healthy animals (0.87 mmol/L &plusmn; 0.11). The results indicate an increased oxidative stress, especially in dogs with multicentric lymphoma with anemia and the decrease of antioxidant defenses, represented by the total antioxidant status and intraerythrocytic reduced glutathione and the trend to greater increase in plasma thiobarbituric acid reactive substances and may these changes contribute to the occurrence of anemia in dogs with multicentric lymphoma.