Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-29Bitstream added on 2014-06-13T18:32:16Z : No. of bitstreams: 1 toledo_gn_me_jabo_parcial.pdf: 87307 bytes, checksum: 2a70f76caa5004cf2f4f6946ef44afa8 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-06-27T19:00:47Z: toledo_gn_me_jabo_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-06-27T19:02:03Z : No. of bitstreams: 1 toledo_gn_me_jabo.pdf: 545355 bytes, checksum: ebe9d8fb1c38b231931ec3d68075ca1f (MD5) / O objetivo do trabalho foi caracterizar lesões musculares e estudar marcação de dois subtipos de macrófagos, M1 (CD68) e M2 (CD163) além de MHC I, MHC II e utrofina, nos músculos mais acometidos pela doença (masseter, diafragma, tríceps braquial e bíceps femoral) em cães distróficos de diferentes idades. Foram utilizadas amostras musculares de 17 cães Golden Retriever (GR) machos e três controles não distróficos e livres de anormalidades neuromusculares, distribuídos em dois grupos: GI – animais distróficos até um ano de idade (n=9) e GII – animais distróficos acima de um ano de idade (n=8). Lesões histopatológicas características foram identificadas e classificadas nos quatro músculos distróficos: hialinização, infiltrado inflamatório mononuclear, necrose, regeneração, atrofia e hipertrofia, calcificação distrófica, fibrose e infiltração adiposa. As lesões variaram em extensão e distribuição de acordo com os músculos e o animal. Resultados mostraram que a imunodetecção do CD163 foi maior que a marcação de CD68 nos dois grupos. CD68 não mostrou variação independente da idade dos animais. A imunodetecção de MHC I foi mais evidente no bíceps femoral e tríceps braquial, seguida de marcações moderadas no masseter e diafragma do grupo com idade superior a um ano de idade. MHC II expressou-se de maneira discreta nos quatro músculos distróficos de ambos os grupos. A imunomarcação de utrofina foi maior no grupo afetado com idade superior a um ano de idade. Conclui-se que os macrófagos M2 estão entre as principais células inflamatórias mononucleares presentes nas lesões em cães distróficos e que com a idade ocorre aumento moderado de M2 no músculo de cães Golden Retriever distróficos indicando a associação deste tipo celular com a cronicidade da lesão muscular nestes animais / The objective was to characterize the lesions and study the expression of two subtypes of macrophages, M1 (CD68) and M2 (CD163) beyond MHC I, MHC II and utrophin in the most affected muscles by the disease (masseter , diaphragm, triceps braquii and biceps femoris) in dystrophic dogs of different ages. Samples muscle of 17 male Golden Retriever dogs and three controls non dystrophic and free of neuromuscular diseases were classified into two groups: G I - dystrophic animals under one year (n = 9) and G II - dystrophic animals over one year (n = 8). Pathological features were identified and classified in four dystrophic muscles: hyalinization, inflammatory infiltration, necrosis, regeneration, hypertrophy and atrophy, dystrophic calcification, fibrosis and fat infiltration. These lesions varied in extent and distribution according to the muscles and the animal evaluated. The results showed that the CD163 immunostaining detected in GRMD dogs was greater than marking CD68 in both groups. CD68 did not vary regardless of the age of the animals. The immunohistochemical expression of MHC I was most evident in the biceps femoris and triceps braquii, followed by moderate staining in the masseter and diaphragm in the group aged over one year old. MHC II expressed discretely in the four dystrophic muscles of both groups. The immunohistochemical expression of utrophin was higher in the affected group aged less than one year old. We concluded that the macrophage M2 were the main mononuclear inflammatory cells present in the dystrophic lesions in dogs. With the age there is a moderate increase of M2 macrophage in dystrophic muscle Golden Retriever dogs indicating the association of this cell type with the chronicity of muscle damage in these animals

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-03Bitstream added on 2014-06-13T19:36:57Z : No. of bitstreams: 1 nunes_ga_me_botfmvz.pdf: 135711 bytes, checksum: ac2deca13d4ed213812621085cb2a3df (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O estresse compreende uma multiplicidade de eventos, envolvendo o sistema imune e ativação do sistema nervoso autônomo, bem como a ativação do eixo hipotálamo-pituitária-adrenal, com conseqüente aumento de catecolaminas e glicocorticóides, respectivamente. Além do papel imunomodulador dos leucotrienos na síntese de citocinas, este mediador contribui para a produção de óxido nítrico (NO), o qual é importante no controle da replicação de fungos, bactérias e vírus. Estudos sobre a participação de leucotrienos e intermediários reativos do oxigênio contribuem para uma melhor compreensão da resposta imune durante o estresse. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação de um inibidor de leucotrienos (MK 886), in vivo e in vitro, sobre o estado de ativação de macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c submetidos a estresse por imobilização, determinando a produção de intermediários reativos do oxigênio (H2O2) e do nitrogênio. Animais submetidos a estresse agudo ou crônico não apresentaram alterações significativas na produção de H2O2 e NO. Entretanto, macrófagos de animais submetidos a estresse agudo ou crônico e estimulados in vitro com MK 886 apresentaram inibição na geração de NO. Animais submetidos a estresse crônico e tratados com MK 886 apresentaram elevação na geração de H2O2 e inibição na produção de NO. Nossos resultados sugerem um importante papel dos leucotrienos quanto à síntese de NO, o qual é importante no controle da replicação de agentes infecciosos, principalmente em animais estressados e imunossuprimidos. / Stress comprises a great variety of events involving the immune system and the central nervous system, providing evidence for autonomic pathways and endocrine modulation of the immune response following stress exposure. Besides the immunomodulatory role of leukotrienes in cytokines synthesis, this mediator contributes for nitric oxide (NO) production, which is important to the control of fungi, bacteria and virus replication. Studies regarding the involvement of leukotrienes and oxygen (H2O2) and nitrogen intermediates contribute for a better comprehension of the immune response during stress. The objectives of this research were to evaluate peritoneal macrophages activation as well as to observe the effect of a leukotrienes inhibitor (MK 886) in mice submitted to immobilization stress. Mice submitted to acute or chronic stress showed no alterations in H2O2 and NO production. However, macrophages of acute or chronic stressed-mice and stimulated in vitro with MK 886 showed NO inhibition. Chronically stressed-mice treated with MK 886 showed an increase in H2O2 generation and inhibited NO production. Our data suggest an important role of leukotrienes with regards to NO synthesis, which is important to control several infectious agents replication, mainly in stressed and immunossupressed animals.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-11Bitstream added on 2014-06-13T20:11:27Z : No. of bitstreams: 1 cesar_jrf_me_jabo.pdf: 550352 bytes, checksum: 1d6db13e1ea88e0f7e6d7733821abce1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Tendo em vista a relação da cicloxigenase-2 com a progressão do câncer, objetivou-se neste trabalho avaliar a expressão da atividade desta enzima com a imunorreatividade de macrófagos no diagnóstico e prognóstico de mastocitoma canino. Para a realização deste estudo foram selecionadas 24 amostras de mastocitomas e 5 amostras de tecido cutâneo sem alterações patológicas (grupo controle). Os espécimes foram divididos em grupos: GO ¬ grupo controle (n=5), G1 -mastocitomas grau I (n=8) , G2 - mastocitomas grau 11 (n=8), G3 - mastocitomas grau 11I (n=8). A avaliação da expressão da COX-2 e macrófagos foi conduzida por imunoistoquímica, utilizando-se o complexo avidina-biotina (ABC). Os resultados mostraram que os dois anticorpos imunorreagiram com tecidos caninos normais ou neoplásicos. A expressão da COX-2 mostrou marcação crescente, conforme a agressividade do tumor e houve significância (P<O,05) entre os grupos GO e G1; GO e G2; GO e G3; G1 e G3. A imunomarcação de macrófagos foi decrescente em relação à gradação histológica e-houve significância (P<O,05) entre os grupos GO e G1; GO e G2; GO e G3; G1 e G3; G2 e G3. Assim como a expressão de macrófagos, a sobrevida dos animais foi decrescente em relação ao grau de malignidade do tumor e inversamente proporcional a marcação de COX-2. / Considering the relationship between cyclooxygenase-2 (COX-2) with the cancer evolution, this study aimed to assessment the expression of this enzyme with the immunoreactive of macrophage in the diagnosis and prognostic of canine mast cell tumor. Twenty four mast cell tumors samples were selected for the accomplishment of this study and tive samples of normal skin tissue (control group - GO). The samples were divided in groups: GO ¬ control group (n=5), G1 - mastocytoma grade I (n=8), G2 - mastocytoma grade 11 (n=8), G3 - mastocytoma grade 11I (n=8). The evaluation of the COX-2 and macrophage expression was achieved by immunohistochemistry, by means of complex avidine-biotine (ABC). The COX-2 expression increased, as the tumor grade progression; moreover. it had relevancy (P<O,05) among the groups: GO and G1, GO and G2, GO and G3, G1 and G3. The macrophage immunoreactive was decreased in relation of histological grade and it had a relevancy (P<O,05) among the groups: GO and G1, GO and G2. GO and G3. G1 and G3, G2 and G3. As macrophage expression, animal survival was decreased in relation of the histological grade of tumor and proportional reversed COX-2 expression.

Orientador: Valéria Marçal Felix de Lima / Banca: Gisele Fabrino Machado / Banca: Sandra helena Penha de Oliveira / Resumo: Os cães são o principal hospedeiro-reservatório para a leishmaniose visceral (LV) zoonótica, uma doença vetorial causada por Leishmania infantum. O óxido nítrico (NO) é a principal molécula envolvida na morte do parasita Leishmania, porém não foi quantificada intracelularmente nos macrófagos, e o seu papel na indução da apoptose celular desencadeada na resposta imune contra Leishmania não está esclarecido. Nós quantificamos a frequência de células produtoras de NO e sua concentração no sangue periférico, e em macrófagos do baço de cães sintomáticos com LV. Também avaliamos se o óxido nítrico tem correlação com a carga parasitária e a apoptose no baço. Nos cães com LV foi observado maior porcentagem de células produzindo óxido nítrico no sangue e baço do que a observada nos cães do grupo controle. A porcentagem de células CD14+ e CD14/NO do sangue e baço foi maior nos cães infectados que nos controles saudáveis. As taxas de apoptose tardia também se encontraram aumentadas no sangue e baço dos cães infectados em relação aos controles saudáveis. A porcentagem de células produtoras de NO do baço apresentou uma correlação positiva com a carga parasitária. Não foi observada uma correlação com a produção de NO e a apoptose no sangue e baço dos cães infectados, sugerindo que outros mecanismos efetores devem estar atuando na apoptose. As taxas de apoptose elevadas das células produtoras de NO do sangue periférico e no baço estão afetando a sua produção, favorecendo o aumento da carga... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dogs are the main reservoir host for visceral leishmaniasis (VL) Zoonotic, a vector disease caused by Leishmania infantum. Nitric oxide (NO) is the main molecule involved in the death of the parasite Leishmania, however it was not quantified intracellularly in macrophages and their role in induction of apoptosis triggered the immune response against Leishmania is unclear. We quantified the frequency of cells producing NO and its levels in the peripheral blood, spleen and macrophages in symptomatic dogs with VL evaluate whether nitric oxide is correlated with the parasite load in spleen and apoptosis. In dogs with LV was higher percentage of cells observed producing nitric oxide in the blood and spleen than that observed in the control group dogs. The percentage of CD14 + and CD14/NO blood and spleen was higher in infected dogs than in healthy controls. The late apoptosis rates are also increased in the blood and spleens of infected dogs compared to healthy controls. The percentage of cells producing NO spleen showed a positive correlation with the parasite load. There is a correlation with the production of NO and apoptosis in the blood and spleens of infected dogs was observed, suggesting that other mechanisms may be acting effectors of apoptosis. The high rates of apoptosis in cells producing NO peripheral blood and spleen are affecting their production, favoring increased parasite load and development of infection. / Mestre

Orientador: Daniela Bernadete Rozza / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Fábio Ermínio Mingatto / Resumo: A inspeção da carcaça e órgãos nos abatedouros objetiva limitar o aproveitamento de produtos impróprios para consumo humano, protegendo a população contra doenças transmitidas pelos alimentos. O fígado é uma víscera nutritiva e bem aceita pelos consumidores, mas suas funções metabólicas o tornam susceptível a diversas lesões, fazendo com que seja condenado frequentemente na rotina de inspeção. Este estudo analisou fígados bovinos e relacionou as lesões macro e microscópicas com os sistemas de produção dos animais abatidos (sistemas intensivo, semi-intensivo e extensivo). Avaliou também a presença de lesão microscópica em fígados sem lesão macroscópica. Foram coletadas 450 amostras de fígado bovino dos diferentes sistemas de produção, as quais foram processadas para exame histológico. As alterações macroscópicas observadas nos fígados bovinos foram: fibrose capsular (32%), aderências/peri-hepatite (25,8%), teleangiectasia (24,4%), manchas pálidas ou amareladas (20,9%), hemorragia subcapsular (7,1%), abscessos (5,3%), granulomas (3,5%), congestão (1,8%) e cistos (0,9%). Os achados microscópicos foram: infiltrado inflamatório mononuclear (66,4%), macrófagos espumosos (40,9%), tumefação hepatocelular (30%), tumefação hepatocelular centrolobular (22,7%), fibrose capsular (26,4%), degeneração gordurosa (15,1%), peri-hepatite (13,8%), necrose (13,5%), teleangiectasia (12,2%), abscessos (2,9%), granulomas (1,8%), congestão (16%), hemorragia subcapsular (4,6%), infiltrado inflamatório... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The inspection of cattle carcasses and organs at slaughterhouses aims at limiting the use of products with abnormalities that makes them improper for human consumption, thereby protecting the public from food-borne diseases. The liver is a nutritious viscera and it is well accepted by consumers. However, its metabolic functions make it susceptible to various injuries, which often condemn it during inspections routine. This study evaluated bovine livers and linked the macro and microscopic lesions found to the beef cattle production systems (intensive, semi intensive and extensive). Also evaluated the presence of microscopic lesions on livers without macroscopic findings. Some 450 samples of beef liver were collected from various production systems and were processed for histological examination. Macroscopic changes observed on the samples were: capsular fibrosis (32%), adhesions/perihepatitis (25.8%), telangiectasia (24.4%), pale or yellowish spots (20.9%), subcapsular hemorrhage (7.1%), abscesses (5.3%), granulomas (3.5%), congestion (1.8%) and cysts (0.9%). Microscopic findings were mononuclear cell infiltration (66.4%), foamy macrophages (40.9%), hepatocellular swelling (30%), centrilobular swelling (22.7%), capsular fibrosis (26.4%), fatty degeneration (15.1%), perihepatitis (13.8%), necrosis (13.5%), telangiectasia (12.2%), abscesses (2.9%), granulomas (1.8%) congestion (16%), subcapsular hemorrhage (4.6%), polymorphonuclear inflammatory infiltrate (2.5%), mixed inflamma... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Regina Maria Barretto Cicarelli / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Sergio de Albuquerque / Resumo: A tripanosomíase americana ou doença de Chagas é uma doença parasitária causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi. Atualmente a doença é considerada negligenciada devido à falta de investimentos para obtenção de fármacos capazes de tratar e curar a doença com menos efeitos colaterais do que o benzonidazol, utilizado até o momento. Desta forma, a busca por novos agentes terapêuticos contra a doença de Chagas é uma estratégia importante para eliminar ou, pelo menos, diminuir a incidência desta doença debilitante e que afeta aproximadamente 10 milhões de pessoas na América Latina. Neste trabalho foi avaliada a atividade tripanocida do ácido gálico e seus ésteres semi-sintéticos contra formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi, assim como a citotoxicidade sobre células de mamíferos (HepG2). Informações adicionais foram obtidas sobre o perfil de produção de citocinas por macrófagos murinos não infectados e tratados com os galatos; também realizou-se o estudo do efeito apoptótico destas substâncias em formas epimastigotas de T. cruzi. Os resultados obtidos foram bastante interessantes e animadores, uma vez que, alguns ésteres de ácido gálico apresentaram atividade tripanocida maior do que aquela observada com benzonidazol e baixa citotoxicidade em células de mamíferos. Além disso, a avaliação do perfil de produção de citocinas, induzido pelas substâncias mostrou resposta favorável à resistência do hospedeiro contra a doença de Chagas. Nos experimentos realizados para avaliar a atividade apoptótica das substâncias em T. cruzi, aquelas que tiveram maior atividade tripanocida apresentaram baixa taxa de apoptose, o que sugere um mecanismo de ação mais relacionado com a característica surfactante destas substâncias; por outro lado, as que apresentaram menor atividade tripanocida, e provocaram apoptose, podem estar atuando como inibidoras da biossíntese de ergosterol / Abstract: The American trypanosomiasis or Chagas disease is a parasitic disease caused by Trypanosoma cruzi protozoan. Currently, it is a neglected disease due to the lack of investments in order to obtain drugs able to treat and cure the disease with fewer side effects than benzonidazole, used until now. Thus, the search for new therapeutic agents against Chagas disease is an important strategy to eliminate or at least reduce the incidence of this debilitating disease that affects approximately 10 million people in Latin America. In this study were evaluated the trypanocidal activity of gallic acid and its semi synthetic esters against epimastigotes forms of Trypanosoma cruzi, as well as, the citotoxicity on mammalian cells (HepG2). Additional information was obtained about the profile of cytokine production by murine macrophages uninfected treated with gallates; also it was studied the apoptotic effect of these substances in epimastigotes forms of T. cruzi. The results obtained were very interesting and encouraging since some esters of gallic acid showed trypanocidal activity greater than that observed with benzonidazole and low citotoxicity in mammalian cells. Moreover, the evaluation of the profile of cytokine production induced by the substances showed a favorable response to the host resistance against Chagas disease. In the experiments performed to evaluate apoptosis activity of the substances in T. cruzi, those who had greater trypanocidal activity, presented a low apoptosis rate, which suggests a mechanism of action based on the surfactant feature of these substances; by the other hand, the substances that showed low trypanocidal activity and caused apoptosis, can act as inhibitors of the ergosterol biosynthesis / Mestre

Orientador: Maria José Soares mendes Giannini / Coorientador: Ana Marisa Fusco-Almeida / Coorientador: Oscar Zaragoza / Banca: Marcia de Souza Carvalho Melhem / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Maristela Pereira / Banca: Christiane Pienna Soares / Resumo: A incidência de infecções fúngicas oportunistas tem aumentado nas últimas décadas devido à crescente proporção de pacientes imunocomprometidos em nossa sociedade. Candida krusei é descrita como um dos agentes de infecções fúngicas em pacientes susceptíveis. Embora sua prevalência seja baixa entre as infecções fúngicas (2-7%), a resistência intrínseca ao fluconazol torna esta levedura importante no contexto relacionado à epidemiologia e na procura de novas alternativas terapêuticas. Modelos de organismos não mamíferos são alternativas viáveis para estudar a virulência de fungos e eficácia de drogas. Neste trabalho utilizou-se Galleria mellonella e Caenorhabditis elegans como modelos para estudar a virulência e avaliar a eficácia antifúngica de anfotericina B e fluconazol durante a infecção por C. krusei, bem como cultura de macrófagos e testes de agrotransformação. No modelo de G. mellonella foi realizada a caracterização completa da interação de C. krusei por meio da determinação do índice de fagocitose, quantificação da densidade hemocitária, melanização, estudos de filamentação, carga fúngica e histopatologia. Além disso, foi realizado estudo de eficácia antifúngica entre G. mellonella e C. elegans mostrando resultados compatíveis entre os dois modelos. Além disso, utilizou-se cultura de macrófagos RAW 267.7 para verificar o efeito das duas drogas sobre a fagocitose e produção de citocinas quando as células foram infectadas com C. krusei. Não houve alterações quanto à fagocitose nesse modelo, entretanto a produção de TNF-α mostrou-se excessivamente aumentada com o tratamento com anfotericina sugerindo que além do efeito direto da droga existem também mecanismos de imunomodulação envolvidos nessa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The incidence of opportunistic fungal infections has increased in the last decades due to the increasing proportion of immunocompromised patients. Candida krusei is described as one of the agents of fungal infections in susceptible patients. Although its prevalence is low among fungal infections (2-7%), the intrinsic resistance to fluconazole makes this yeast important in this context related to epidemiology and new therapies. Models of non-mammalian are viable alternatives to study virulence of fungi and drug efficacy. In this work we used Galleria mellonella and Caenorhabditis elegans as models for studying virulence and evaluate the efficacy of antifungal agent's amphotericin B, fluconazole and caspofungin during infection by C. krusei, and C. albicans, as well as, macrophages and agrotransformation studies. The model of G. mellonella was done full characterization of the interaction with C. krusei by determining the phagocytosis index, measuring the density haemocytic, melanization, filamentation studies, fungal burden and histopathology. In addition, we conducted a study of antifungal efficacy between G. mellonella and C. elegans showing compatible results between the two models. Furthermore, we used macrophage culture RAW 267.7 to determine the effect of drugs amphotericin B and fluconazole on phagocytosis and production of cytokines when the cells were infected with C. krusei and C. albicans. There was no change on the phagocytosis in this model, however, the production of TNF-α was shown to be excessively increased with treatment with amphotericin suggesting that in addition to the direct effect of the drug, immunomodulation mechanisms are also involved in this response. The construction of transformants... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Henrique Leonel Lenzi / Banca: Christiane Pienna Soares / Banca: Maria José Soares Mendes Giannini / Resumo: Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico, agente de doença granulomatosa crônica denominada de paracoccidioidomicose (PCM), com grande variedade de manifestações clínicas, desde formas localizadas até disseminadas evoluindo para letalidade. O fungo tem capacidade de aderir, extravasar e invadir barreiras impostas pelos tecidos do hospedeiro. Em ensaios in vitro verificou-se que P. brasiliensis pode aderir e invadir células epiteliais, aparecendo algumas vezes internalizado dentro de um vacúolo. A identificação do mecanismo pelo qual este fungo adere, invade e sobrevive no interior da célula hospedeira é campo fértil para a descoberta de sua patogênese. Para tanto, a análise de proteínas presentes no microrganismo e nas células do hospedeiro e também os marcadores da via endocítica para co-localizar os microrganismos no interior das mesmas é o objetivo deste estudo. Assim, foi realizada a infecção de células epiteliais A549 e macrófagos AMJ2-C11com P. brasiliensis (Pb18) nos períodos de 3, 5, 8, 24 e 3, 5, 10 e 24h, respectivamente e feitas análises por técnicas de imunofluorescência para as proteínas de junções compactas, junções aderentes, junções tipo fenda e proteínas de ancoramento intracelular, bem como as proteínas da via endocítica. Entres estas, foram ensaiadas a expressão de clatrina, Rab7 e LAMP-1 por imunofluorescência e EEA1, Rab7 e LAMP-1 por imunoblot. As proteínas de junções foram expressas nas células, bem como na parede do fungo. A clatrina foi evidente na célula e aparentemente mais expressa na parede do fungo. Nas células A549 não houve alteração na expressão de Rab7 e LAMP-1, tanto na imunofluorescência quanto no imunoblot, sendo que para EEA1 e Rab5 não foi evidenciada alteração na expressão pela técnica de imunoblot. Rab7 foi expressa nos macrófagos, localizada na periferia das células e também no... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioides brasiliensis is a thermally dimorphic fungus, the etiologic agent of paracoccidioidomycosis (PCM). PCM is a polymorphic disease manifested by an array of diverse clinical manifestations and varying organ involvement. P. brasiliensis may actively penetrate the mucocutaneous surface and parasitize epithelial cells, thus evading the host defenses and reaching deeper tissues. The ability of this fungus to adhere to and invade non-professional phagocyte cells has been observed. In vitro assays verify that P. brasiliensis can adhere and could appear internalized within vacuole. The identification of the mechanism by which this fungus adheres, invades and survivor inside the host cell is a fertile area for discover their pathogenesis. The aim of this study was analyzed the junctions proteins in the fungus and the host cells, as well as the endocytic markers to colocate the microorganisms inside the cells. Thus, the infection was performed in A549 epithelial cells and macrophages AMJ2-C11 with P. brasiliensis (PB18) for periods of 3, 5, 8, 24 and 3, 5, 10 and 24 h, respectively, and the immunofluorescence analysis was developed for the proteins claudin-1, claudin-4, E-cadherin, conexin 43, talin e vinculin, and the endocytic proteins. The macrophages and the cells A549 have been blemish along anti-clatrin, anti-Rab7 and anti-LAMP-1. The junctions' proteins have been expressed at the cells, as well as on the wall from the fungus. The clathrin was present at the cells and apparently more expressed on the fungus wall. Rab7 and LAMP-1 were not expressed in the cells A549 as demonstrated by the imunofluorescence and the imunoblot. On the contrary Rab7 was expressed in macrophages located at the periphery of the cells and also in the own fungus. The expression of LAMP-1 apparently not presented alteration both at the imunofluorescence and at the imunoblot. The expression of EEA1 was... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Danielle Cardoso Geraldo Maia / Banca: Lucia Helena Faccioli / Resumo: Os organismos marinhos da costa brasileira são pouco explorados como fonte de metabólitos secundários para aplicação farmacológica. São conhecidas aproximadamente 10.000 substâncias do metabolismo secundário de invertebrados e microrganismos marinhos. Dentre os organismos marinhos estudados do ponto de vista químico e farmacológico, destacam-se as esponjas, as ascídias, os briozoários e os octocorais. No entanto, pouco se sabe quanto ao potencial imunomodulador de compostos isolados de microrganismos marinhos, em especial da costa brasileira. Neste estudo, nós identificamos o composto DR(A)6 com potencial anti-inflamatório e após fracionamento foi isolado a substância pura majoritária denominada Pyrenocine A (1), oriunda do fungo marinho Penicillium paxill.O conjunto de resultados demonstra que Pyrenocine A é capaz de inibir tanto de maneira profilática como terapêutica a ativação de macrófagos induzida por LPS através da inibição da síntese de nitrito, produção de citocinas inflamatórias e PGE2, porém de maneira independente da modulação de COX- 2. Os efeito supressores desta substância também pode ser comprovado quanto a expressão de moléculas diretamente relacionadas com a migração celular (CD11b) assim como moléculas imprescindíveis para o processo de ativação de linfócitos (B7.1 e B7.2), porém não foi observado a inibição da expressão do receptor TLR4. A inibição da síntese de nitrito pela Pyrenocine A em macrófagos estimulados com CpG, mas não com Poly I:C, sugere que a via de sinalização intracelular pela qual a Pyrenocine A atua é via MyD88. Além disso, nós demonstramos que... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Marine organisms from Brazilian coast are unexploited as a source of secondary metabolites in applying biotechnology. There are approximately 10,000 known substances from the secondary metabolites from microorganisms and marine invertebrates. Among the marine organisms studied from chemical and pharmacological aproauchs sponges, sea squirts, bryozoans and octocorals are the relevant source of drugs. However, little is known about the immunomodulatory potential of compounds isolated from marine microorganisms, in particular from Brazilian coast. In this study, we identified the compound DR (A) 6 with potential anti-inflammatory and after fractionation, we identificated the majority pure substance, called Pyrenocine A (1), derived from the marine fungus Penicillium paxilli. Our results demonstrates that the Pyrenocine A is able to inhibit by both prophylactically and therapeutic approach the macrophages activation induced by LPS through inhibition of nitrite, synthesis of inflammatory cytokines and PGE2 but independently of modulation of COX-2. The anti-inflammatory effect of Pyrenocine A can also be observed by the expression of molecules directly related to cell migration (CD11b) as well as molecules evolved in the process of lymphocyte activation (B7.1 and B7.2), but there was no inhibition of the TLR4 expression. The inhibition of nitrite by Pyrenocine A in macrophages stimulated with CpG, but not in the presence of Poly I: C, suggesting that Pyrenocine A act by MyD88 intracellular signaling pathway. Furthermore, we demonstrate that the addition of Pyrenocine A exert a suppressive effect on cells from innate immune response is also able to inhibit of B cells proliferation. However, the mechanisms by which this compound exerts its anti-inflammatory functions as well as their pharmacological application in various experimental... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Regina Maria Barrteo Cicarelli / Banca: Márcia Aparecida Silva Graminha / Banca: Sergio de Albuquerque / Resumo: O protozoário hemoflagelado, Trypanosoma cruzi, transmitido principalmente pelo inseto triatomíneo, por infecção congênita ou por transfusão sanguínea, causa a tripanossomíase americana ou doença de Chagas, como é mais conhecida. Essa é uma séria doença parasitária que ocorre na América Latina, com considerável impacto social e econômico. Dois medicamentos, nifurtimox e benzonidazol, são indicados no tratamento de pessoas infectadas, mas são pouco eficientes na fase aguda e praticamente ineficientes na fase crônica. Devido a esses fatores, é de extrema importância que se encontre um novo e eficiente agente quimioterápico e/ou quimiopreventivo. Neste trabalho, foi investigada a atividade de extratos, frações, substâncias puras e semi-sintéticas de diferentes espécies da Família Piperaceae na presença das formas epimastigotas da cepa Y do T. cruzi; as substâncias que se apresentaram ativas, também foram analisadas nas cepas NCS e Bolívia. Além disso, observaram-se as possíveis modificações morfológicas que essas substâncias poderiam causar nos parasitos, bem como um possível local de sua atuação e uma análise preliminar de sua citotoxicidade, quando na presença de macrófagos de camundongos isogênicos. A eficácia dessas substâncias foi avaliada pelo método colorimétrico utilizando a redução do MTT [3-(4,5-dimethylthiazol- 2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] em formazan, produzido pela atividade da enzima succinato desidrogenase da mitocôndria. Os cristais de formazan formados, depois de dissolvidos, foram determinados espectrofotometricamente. Os resultados encontrados foram proporcionais às atividades metabólicas das células (parasitos e/ou macrófagos), sendo o IC50 (metade da concentração inibitória máxima) calculado por regressão linear para cada substância. Intensas modificações morfológicas foram observadas nos parasitos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The hemoflagellate protozoan, Trypanosoma cruzi, transmitted by triatominae bugs, congenital route or blood transfusion, causes American trypanosomiasis or Chagas' disease, as it is more known. This is a serious parasitic disease which occurs in Latin America, as a considerable social and economic impact. Two drugs, nifurtimox and benznidazol, had been evaluated in the treatment of infected people, but they have low tolerance in the acute phase and practically inefficient in the chronic phase. Because of these considerations, it is important to search for new more efficient chemopreventive and chemotherapeutic agents. In this work, we have been investigating the activity of crude extracts, fractions, pure and halfsynthetic substances from different species of the Piperaceae Family in the presence of the epimastigote forms from T. cruzi Y strain; the samples which presented some activity also were analyzed in NCS and Bolívia strains. Moreover, we observed morphological modifications that some samples can make in the parasites, as well as a possible action site and a preliminary analysis of their citotoxicity, when in the presence of isogenic mice macrophages (Balb/c and C57/Black). The efficacy of these samples was also measured using the reduction of MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] into a stained formazan product by the mitochondrial enzyme succinate dehydrogenises activity. The crystals of formazan formed, after dissolved, had been determined spectrophotometrically. The results were proportional to the metabolic activity of the cells (parasites and/or macrophages), being the IC50 (half of the maximum inhibitory concentration) calculated by linear regression for each sample. Intense morphological modifications were observed in the parasites after a determined time of incubation, confirming the toxic activity of some substances. However, it seems... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre