Malassezia pachydermatis is an opportunistic fungus associated to dermatomycoses and otopathies in domestic and wild animals. The aim of this study was to compare the susceptibility profile of clinical isolates of M. pachydermatis against topic and systemic antifungals, through two standardized CLSI techniques: broth microdilution (M27-A3, 2008) and disk diffusion (M44-A, 2004). A standard Candida albicans strain (ATCC 28367) was used as quality control. M. pachydermatis isolates assayed through the broth microdilution method showed susceptibility to anfotericina-B (100%), fluconazole (97,83%), ketoconazole (95.66%), itraconazole (93,48%), followed by clotrimazole and miconazole (86.96%). The disk diffusion method showed susceptibility of 97,83% to nystatin, 95,66% to itraconazole and to amphotericin B, 91,32% to ketoconazole, 89,14% to fluconazole and of 86.96% to miconazole and clotrimazole. Through the in vitro induction of resistance to fluconazole (100%), cross-resistance was observed through the broth microdilution method among the 30 M. pachydermatis isolates against the azoles itraconazole (93%), ketoconazole (97%) and voriconazole (100%). The study of the activities of the essential oils obtained through the broth microdilution, based on geometric means of the minimum fungicidal concentration, showed that concentrations above 195.42 μg/mL, 332.49 μg/mL and 448.8 μg/mL of oregano, Mexican oregano and cinnamon essential oils, respectively, have fungicidal action against M. pachydermatis, independently of the sensitivity or resistance to fluconazole. The fungicidal activity of the essential oils against fluconazole-resistant M. pachydermatis strains is important for further therapeutic studies of this mycosis. Despite the susceptibility observed among sensitive M. pachydermatis strains suggesting fluconazole as a safe drug for the treatment of most cases of superficial and invasive malasseziosis, it is essential continuous surveillance studies to detect changes in the microbiological profile due to therapeutic practices. / Malassezia pachydermatis é um fungo oportunista, associado à dermatomicoses e otopatias em animais domésticos e selvagens. O objetivo deste estudo foi comparar o perfil de susceptibilidade de isolados clínicos de M. pachydermatis frente antifúngicos tópicos e sistêmicos, através de duas técnicas padronizadas pelo CLSI: microdiluição em caldo (M27- A3, 2008) e disco-difusão (M44-A, 2004). Para todos os testes foi utilizada uma cepa padrão de Candida albicans (ATCC 28367) como controle de qualidade. Isolados de M. pachydermatis testados através do método de microdiluição em caldo apresentaram em ordem decrescente de susceptibilidade: anfotericina-B (100%), fluconazol (97,83%), cetoconazol (95,66%), itraconazol (93.48%), seguido de clotrimazol e miconazol (86,96%). Pelo método de disco-difusão 97,83% dos isolados foram suscetíveis a nistatina, 95,66% ao itraconazol e a anfotericina-B; 91,32% ao cetoconazol, 89,14% ao fluconazol; e 86,96% ao miconazol e clotrimazol. Através da indução de resistência in vitro, de 30 isolados de M. pachydermatis, ao fluconazol (100%) foi possível evidenciar resistência cruzada pelo método de microdiluição em caldo frente aos antifúngicos azólicos, itraconazol (93%), cetoconazol (97%) e voriconazol (100%). O estudo da atividade de óleos essenciais gerados pelo método de microdiluição em caldo, baseado nas médias geométricas das CFMs, evidenciou-se que concentrações acima de 195.42 μg/mL de óleo essencial de orégano, 332.49 μg/mL de óleo essencial de orégano mexicano e 448.8 μg/mL de óleo essencial de canela, possuem ação fungicida in vitro sobre M. pachydermatis, independente da sensibilidade ou resistência ao fluconazol. A atividade de óleos essenciais frente M. pachydermatis fluconazol resistente, é um achado que consolida a importância destes para estudos futuros voltados a terapêutica desta micose. Apesar dos dados de susceptibilidade apresentados pelas cepas sensíveis de M. pachydermatis sugerirem que o fluconazol ainda é uma droga segura para terapêutica da maioria dos casos de malasseziose superficial ou invasiva, é fundamental que estudos de vigilância epidemiológica sejam realizados continuamente para evidenciar mudanças no perfil microbiológico em função de práticas terapêuticas.

Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-13T19:08:16Z No. of bitstreams: 1 Tese - Milena Rodrigues Soares Mota.pdf: 10830184 bytes, checksum: b6f2977c2b749cd675523693c33de0ff (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-15T17:58:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Milena Rodrigues Soares Mota.pdf: 10830184 bytes, checksum: b6f2977c2b749cd675523693c33de0ff (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-15T18:07:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Milena Rodrigues Soares Mota.pdf: 10830184 bytes, checksum: b6f2977c2b749cd675523693c33de0ff (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-15T18:07:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Milena Rodrigues Soares Mota.pdf: 10830184 bytes, checksum: b6f2977c2b749cd675523693c33de0ff (MD5) Previous issue date: 2011-03-25 / Não Informada / This study describes the therapeutic potential of extracts and standardized fractions of Arrabidaea chica leaves. A. chica is a Bignoniaceae popularly known as “crajiru”. The genus Arrabidaea occurs in Tropical America, from the Southern Mexico to the Southern Brazil. The red color of its dried leaves is attributed to two flavonoidal pigments: carajurina (main pigment) and carajurona. Chemical studies described the isolation of saponins and flavonoids from the plant leaves; purified 3- desoxyanthocyanidins were reported as anti-inflammatory. The infusion or decoction of the plant leaves is used in the folk medicine to treat anemia, inflammation and in skin wound-healing. In this work, the antimicrobial activity of the standardized extracts and fractions of A. chica cultivated at Embrapa Amazônia Ocidental, Manaus, were evaluated against fungal and bacterial microorganisms grown either from local domestic dogs and cats, or from human samples supplied by the Microorganism Collection of FIOCRUZ, in Manaus, Brazil. The plant dried leaves were extracted with increasing polarity solvents and progressively purified in preparative thin layer chromatography (TLC) and silica-gel column; the semi-purified extracts were standardized in TLC. The agar diffusion method; bioautography; minimum inhibitory concentrations tested against Staphylococcus epidermidis (CBAM 293), Staphylococcus aureus (CBAM 324), Pseudomonas aeruginosa (CBAM 232), Escherichia coli (CBAM 002), Trichophyton mentagrophytes (CFAM 1288), Microsporum canis (CFAM 1289), Malassezia pachydermatis (CFAM 1290) e Candida albicans (CFAM 1285). The standardized fractions were effective against all these microorganisms, but more intensively against Microsporum canis and Staphylococcus epidermidis. The results might favour the use of the standardized sub-fractions of A. chica as topic phytotherapic agent to treat canine external otitis. So far oleanolic and ursolic acids were identified as the main compounds in the active semi-purified fraction but other compounds of the leaves extract were not discarded. Later studies will consider the veterinarian use of the standardized extract, of the active pure entities and the convenience of the natural active antibiotic mix. / Este estudo analisou o potencial terapêutico de extratos e frações purificadas da planta amazônica Arrabidaea chica visando seu uso tópico como medicamento e eficácia comprovada em doenças cutâneas. A. chica Verl., é uma Bignoniaceae conhecida popularmente como crajiru. O gênero Arrabidaea ocorre na América tropical, do sul do México ao sul do Brasil. A cor avermelhada da folha seca e sua propriedade tintorial são devidas a dois pigmentos flavonoídicos: a carajurina, que é o pigmento principal e a carajurona. Dela foram isolados saponinas e flavonóides; As 3-desoxiantocianidinas, descritas na planta parecem possuir atividade antiinflamatória. A medicina popular utiliza o decocto ou a infusão das folhas para tratar anemia, inflamações e na cicatrização da pele. Neste trabalho, a atividade antimicrobiana de extratos e frações padronizadas da A. chica cultivada na Embrapa Amazônia Ocidental, em Manaus/AM, foi avaliada contra fungos e bactérias de amostras clínicas coletadas de animais domésticos e contra amostras humanas depositadas na coleção de Microrganimos da FIOCRUZ, Manaus/AM. Para isso, as folhas secas da planta foram extraídas com solventes de polaridade crescente, as frações foram progressivamente purificadas em cromatografia de placa ou coluna de sílica-gel, os extratos semi-purificados foram padronizados em cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas. Os testes de difusão em ágar, bioautografia e concentração inibitória mínima foram usados para avaliar a atividade antimicrobiana das subfrações padronizadas frente aos microrganismos Staphylococcus epidermidis (CBAM 293), Staphylococcus aureus (CBAM 324), Pseudomonas aeruginosa (CBAM 232), Escherichia coli (CBAM 002), Trichophyton mentagrophytes (CFAM 1288), Microsporum canis (CFAM 1289), Malassezia pachydermatis (CFAM 1290) e Candida albicans (CFAM 1285). As frações padronizadas foram ativas contra todos esses microrganismos, com melhores resultados contra M. pachydermatis e S. epidermidis. Os resultados foram favoráveis à utilização das subfrações padronizadas na formulação de um produto fitoterápico para uso tópico em otite canina. Nas frações ativas foram identificados os ácidos oleanólico e ursólico. Estudos posteriores deverão avaliar a possibilidade de uso humano das frações purificadas ou dos compostos identificados.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_angelita_reis_gomes.pdf: 850060 bytes, checksum: 1f4da5ff7cd0955fa9cc9d07431a3c49 (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / This study aims to get to know potential risk factors for dogs and cats presenting positive pathogenic fungus culture diagnosis. A retrospective observational study on fungus infections diagnosed in dogs and cats in southern Brazil between 1980 and 2011 was performed. One thousand seven hundred and thirty-nine clinical sample records of dogs and cats a with suspicion of fungal infections from the Diagnostic and Research Center in Veterinary Mycology (MICVET) and the Regional Diagnosis Laboratory (RDL), both belonging to the Veterinary School of the Pelotas Federal University (FAVET UFPel) were analyzed. Fungal growth was detected in 52,85 % of the samples, of which 37,49 % were pathogenic-related. The winter season presented a 29,49 % pathogenic fungus diagnosis positivity; of these, 48,76 % of the samples were from female animals and 44,11 % of male, whereas 7,13 % were unidentified; also, 79,30 % of the positive samples were of dogs and 20,70 % of cats; the highest positivity rate (26,80 %) occurred in young animals up to two years old. The three most common fungus infections were malasseziosis at a 59,98 % incidence rate, dermatophytosis 18,56 % and sporotrichosis 14,26 %. The species Malassezia Pachydermatis was isolated from 100 % of malasseziosis cases, and 78,98 % malasseziosis cases were otitis-related, most of which in dogs (94,88 %). 24,49 % of dogs were up to two years old, and 54,7 % of canine cases occurred in females. Cocker Spaniel (10,24 %) and Poodle (8,89 %) were the most affected breeds. Dermatophytes were isolated in 18,56 % fungal infections, and Microsporum canis was the most commonly isolated species (57,78 % of dogs and 77,42 % of cats). Dogs presented a 74,38 % rate of cases and the one 24 month age group encompassed 56,67 % of records in dogs and 64,52 % in cats. The most affected breeds were Yorkshire Terrier (10%) and Persian (29,03 %). Sporothrix schenckii infection showed a 13,98 % rate in dogs and an 80,02 % rate in cats. Isolation occurred in 71,25 % cases in male cats; as to dogs, a significant gender-related difference was not found. The two to four year age group showed a 23,75 % occurrence rate. Crossbred animals corresponded to 82,50 % of the cases in cats and 53,85 % in dogs. These data demonstrated that most cats and dogs with fungal infections are young animals, with females showing a greater predisposition; however, no significant differences as to breed, animal fur or seasonality were found. The three most frequently isolated fungi in dogs and cats in southern Brazil were Malassezia pachydermatis, dermatophytes and Sporothrix schenckii. / O objetivo deste trabalho foi conhecer possíveis fatores de risco para cães e gatos com resultados positivos para cultura de fungos patogênicos. Foi realizado um estudo observacional de caráter retrospectivo das infecções causadas por fungos, diagnosticadas em cães e gatos na região Sul do Brasil, no período de 1980 a 2011. Foram analisados 1.739 registros de amostras clínicas de caninos e felinos com suspeitas fúngicas, provenientes dos bancos de dados do Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Micologia Veterinária (MICVET) e do Laboratório Regional de Diagnóstico (LRD), ambos da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas (FAVET- UFPel). Houve crescimento fúngico em 52,85% das amostras, das quais 37,49% corresponderam ao crescimento de fungos patogênicos. O inverno 29,75% de frequência nos diagnósticos positivos para fungos patogênicos, 48,76% das amostras positivas eram de fêmeas, 44,11% machos e 7,13% não identificados, das amostras positivas 79,30 pertenciam a caninos 20,70% a felinos. A maior frequência, 26,80%, de casos positivos ocorreu em animais jovens, com até dois anos de idade. As três infecções fúngicas de maior ocorrência foram a malasseziose 59,98%, dermatofitose 18,56% e esporotricose 14,26%. Em 100% dos casos de malasseziose foi isolada a espécie Malassezia pachydermatis, em 78,98% dos casos a malasseziose era relacionada à otite, a maioria de 94,88% ocorreram em caninos. Nos caninos 20,49% tinham até dois anos de idade e 54,72% dos casos eram de fêmeas. As raças definidas Cocker Spaniel (10,24%) e Poodle (8,89%) foram as mais afetadas. O isolamento de dermatófitos ocorreu em 18,56% das infecções fúngicas, Microsporum canis foi a espécie mais isolada em caninos 57,78% e felinos 77,42%. Os caninos tiveram frequência de 74,38% dos casos e a faixa etária entre um e 24 meses teve 56,67% dos registros em caninos e 64,52% nos felinos, as raças Yorkshire Terrier 10%, e Persa 29,03% foram as mais afetadas. A infecção por Sporothrix schenckii teve frequência de 14,26%, sendo 13,98% em caninos e 86,02% em felinos. Em 71,25% o isolamento se deu em machos felinos, em caninos não houve diferença significativa relacionada ao sexo. A idade entre dois e quatro anos teve ocorrência de 23,75%. Os animais SRD corresponderam a 82,50% dos casos em felinos e 53,85% em caninos. Conclui-se que os dados gerais demonstram que a maioria de caninos e felinos com infecções fúngicas são animais jovens, com maior predisposição de fêmeas, não havendo diferença significativa para raça, comprimento do pelo e sazonalidade. Os três fungos com maior frequência de isolamentos em caninos e felinos na região sul do Rio Grande do Sul foram Malassezia pachydermatis, dermatófitos e Sporothrix schenckii.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_claudia_giordani.pdf: 2276944 bytes, checksum: 55ee4444fa59202346411910205995d3 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / The rescue and use of medicinal plants have been gaining space in human and veterinary medicine, as treatment and prophylaxis of diseases. In the treatment of mycosis, there is still issues regarding the limited amount of drugs and the occurrence of resistance, adverse reactions and relapses. Thus, the objective was to conduct a survey of medicinal plants and toxic found in the region of the Veterinary Clinic-Federal University of Pelotas, organize an instructional manual of the studied plants and uses in animal health, and to determine the antifungal effect of plant extracts on clinical isolates of Malassezia pachydermatis. In the survey, animal owners in the Veterinary Ambulatory were interviewed and visited. There were 111 interviews, which 74 species cited for medical use but the minority used them in animals. With respect to toxic plants 20 species were observed, but only six were reported by the population, and from the results in the survey was made a manual on plants. To evaluate the antifungal activity were tested six hydroalcoholic extracts of Aroeira, Carqueja, Erva-de-bicho, Lanceta, Pitangueira e Rabo-de-lagarto, the techniques microdilution and disk diffusion against M. pachydermatis isolated from dogs (dermatitis=38, otitis=10). The extracts that resulted in higher activity were Aroeira, Erva-de-Bicho and Pitangueira. From these results, we can see the importance of further studies of the activities of plants to determine more precisely its action and toxicity. With this study concludes that there are many medicinal and toxic species distributed in the region of the Veterinary Clinic-UFPel, but is still scarce use of medicinal plants in animal, and that the hydroalcoholic extracts of Aroeira, Erva-de-bicho and Pitangueira had action on M. pachydermatis, opening the possibility of numerous studies in veterinary medicine. / O resgate e uso das plantas medicinais vêm ganhando espaço na medicina e veterinária, como tratamento e profilaxia de doenças. No tratamento das micoses, ainda observa-se uma quantidade limitada de medicamentos e a ocorrência de resistência, reações adversas e recidivas. Assim, objetivou-se realizar um levantamento das plantas medicinais e tóxicas encontradas na região do Ambulatório Veterinário-Universidade Federal de Pelotas, organizar um manual didático das plantas estudadas e usos na saúde animal, e determinar a ação antifúngica de extratos vegetais sobre isolados clínicos de Malassezia pachydermatis. No levantamento, foram entrevistados e visitados proprietários de animais atendidos no Ambulatório Veterinário. Foram 111 entrevistas, citando 74 espécies medicinais, porém a minoria usava-as em animais. Com relação às plantas tóxicas foram observadas 20 espécies, porém apenas seis eram relatadas pela população; e por fim, confeccionado um manual informativo das plantas. Para avaliação da atividade antifúngica foram testados extratos hidroalcoólicos de Aroeira, Carqueja, Erva-de-bicho, Lanceta, Pitangueira e Rabo-de-lagarto, pelas técnicas de microdiluição em caldo e difusão em disco frente a M. pachydermatis isolada de cães (dermatite=38; otite=10). Os extratos com maior atividade foram Aroeira, Erva-de-bicho e Pitangueira. Assim, percebe-se a importância de aprofundar os estudos sobre as plantas, determinando mais precisamente sua ação e toxicidade. Com o estudo conclui-se que existem muitas espécies medicinais e tóxicas na região do Ambulatório Veterinário-UFPel, porém ainda é escasso o uso das plantas medicinais em animais; e que os extratos hidroalcoólicos de Aroeira, Erva-de-bicho e Pitangueira apresentaram ação sobre M. pachydermatis, abrindo a possibilidade de inúmeras pesquisas em veterinária.

Orientador: Luciana Campos Paulino / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2014

Orientadora: Profa. Dra. Luciana Campos Paulino / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2014.

Members of the genus Malassezia are commensal fungi found on the skin of both human and domestic animals and are associated with skin diseases including dandruff/seborrheic dermatitis, pityriasis versicolor, and atopic eczema (AE) in humans. In this study we have characterized the cell-wall carbohydrates of Malassezia sympodialis, one of the species most frequently isolated from both AE patients and healthy individuals. Cells were grown in liquid Dixon media at 32 °C, harvested, and processed using a standard Fehling's precipitation methodology for the isolation of mannan and a standard base/acid extraction for (1→3)-β-d-glucans. Using these classic extraction methods we were unable to isolate precipitable mannan or insoluble (1→3)-β-d-glucan. However, acidification and addition of methanol to the remaining Fehling's-treated sample resulted in a very clean precipitate. This material was characterized by GPC-MALLS, 1D and 2D NMR, and GC-MS for monomer-type and linkage-type composition. We determined that trace amounts of both mannan and branched (1→3, 1→6)-β-d-glucan were present in the recovered precipitate, but not linear (1→3)-β-d-glucan. Surprisingly, NMR analysis indicated that (1→6)-β-d-glucan was the major carbohydrate component isolated from M. sympodialis cell wall. GC-MS linkage analysis confirmed the (1→6)-β-d-glucan structure. Based on these studies we have determined that the M. sympodialis cell wall contains (1→6)-β-d-glucan as the major carbohydrate component along with trace amounts of mannan and (1→3, 1→6)-β-d-glucan. In addition, these data indicate that modification of the classic mannan isolation methodology may be useful in the simultaneous isolation of both mannan and (1→6)-β-d-glucan from other fungi.

A criopreservaÃÃo à a metodologia de escolha em muitos bancos de microrganismos pois conduz a uma situaÃÃo de dormÃncia metabÃlica e em conseqÃÃncia as culturas mantÃm-se estÃveis por longos perÃodos. Ao reduzir a temperatura pode todavia ocorrer a formaÃÃo de cristais de gelo que tendem a promover lesÃo celular A lesÃo celular por sua vez pode ser evitada pelo processo de vitrificaÃÃo que ocorre, combinando uma soluÃÃo concentrada com o congelamento rÃpido A literatura relata o uso de carboidratos como agentes vitrificadores e crioprotetores TambÃm informa que a tÃcnica de imobilizaÃÃo de cÃlulas em alginato de sÃdio permite o fracionamento da cultura e favorece a preservaÃÃo de microrganismos O objetivo deste trabalho consiste em avaliar a viabilidade dos fungos dos gÃneros Malassezia spp e do grupo dos Zigomicetos imobilizados em alginato de sÃdio utilizando glicose e lactose como crioprotetores Doze cepas de espÃcies de Malassezia spp (9 M furfur 2 M globosa 1 M simpodialis) e doze cepas de Zigomicetos (7 Mucor s e 5 Rhizopus sp) pertencentes à micoteca do Centro Especializado em Micologia MÃdica da Universidade Federal do Cearà O gÃnero Malassezia abrange leveduras lipodependentes associadas a vÃrias enfermidades dermatolÃgicas compreendem na atualidade 13 espÃcies Zigomicetos, por sua vez sÃo fungos saprÃfitas e ubÃquos cujas hifas por apresentarem elevado tamanho e reduzido conteÃdo protÃico estÃo mais vulnerÃveis a danos mecÃnicos Dessa forma constituem grupos fÃngicos de preservaÃÃo difÃcil em estoque portanto uma metodologia que mantenham a viabilidade de Malassezia spp e Zigomicetos tambÃm poderia ser empregada com eficiÃncia para a estocagem de outros fungos As estruturas fÃngicas foram removidas e transferidas para duas soluÃÃes de estoque, formadas por 3% de caldo Sabouraud 15% de alginato de sÃdio e diferenciadas nas concentraÃÃes de glicose e lactose de 9% ou 23% Em seguida, foram adicionadas esferas plÃsticas, medindo 07cm de diÃmetro com orifÃcio central e 0,5cm de comprimento ApÃs a gelificaÃÃo iÃnica com cloreto de cÃlcio, cada cepa foi estocada à temperatura de -20 ÂC e -80 ÂC distribuÃdas em cinco tubos criogÃnicos de 15mL contendo cinco esferas cada uma sendo avaliados em cinco perÃodos ApÃs nove meses foi verificado que nÃo houve recuperaÃÃo de nenhuma cepa de Malassezia spp Com relaÃÃo Ãs espÃcies de Zigomicetos observou-se que apÃs nove meses de estoque quatro cepas mostraram viÃveis a -80 ÂC empregando glicose a 9%, seis cepas foram preservadas a -80 ÂC, utilizando glicose a 23% finalmente seis e sete exemplares foram recuperados a -80 ÂC utilizando lactose a 9% e 23% respectivamente. Dessa forma, o uso de carboidratos como crioprotetores em conjunto com a tÃcnica de imobilizaÃÃo de cÃlulas em alginato de sÃdio constitui alternativa à manutenÃÃo de algumas espÃcies fÃngicas / Cryopreservation is the method of choice in many banks of microorganisms because it leads to a situation of metabolic dormancy and consequently cultures are stable for long periods. By reducing the temperature may however be formed of ice crystals which tend to cause cell damage to cell damage in turn can be avoided by vitrification process which takes place by combining a solution with the quick freezing the literature reports the use of carbohydrates vitrificadores cryoprotectants agents and also advises that the technique of immobilization of cells in sodium alginate allows the fractionation of culture and promotes the preservation of microorganisms The objective of this study is to assess the viability of the fungi of the genus Malassezia spp and the Zygomycetes group of assets in sodium alginate and lactose using glucose as cryoprotectants Twelve strains of species of Malassezia spp (9 M furfur 1 M 2 M globosa simpodialis) and twelve strains of zygomycetes (seven Mucor Rhizopus sp is 5) belonging to the mycology collection of the Specialized Center for Medical Mycology Federal University of Cearà The genus Malassezia comprises yeasts lipodependent associated with various dermatologic diseases currently comprise 13 Zygomycetes species, in turn, are ubiquitous and saprophytic fungi whose hyphae because they have high protein content and reduced size are more vulnerable to mechanical damage this way are groups of fungi in stock so hard to preserve a methodology to maintain the viability of Malassezia spp and Zygomycetes could also be used effectively for the storage of other fungi fungal structures were removed and transferred to two stock solutions, formed by 3% broth Sabouraud 15% sodium alginate and different concentrations of glucose and 9% lactose and 23% were then added plastic spheres, measuring 07cm in diameter and 0.5 cm center hole length After ionic gelation with calcium chloride Each strain was stored at -20  C and -80  C cryogenic distributed in five tubes containing 15 mL each of five levels being evaluated in five periods after nine months it was found that there was no recovery of any strain of Malassezia spp Regarding Zygomycetes species showed that after nine months of inventory four strains were viable at -80  C using glucose 9%, six strains were preserved at -80  C, using 23% glucose last six seven specimens were recovered at -80  C using a 9% lactose and 23% respectively. Thus, the use of cryoprotectants such as carbohydrates in conjunction with the technique of immobilization of cells in sodium alginate is an alternative to maintaining some fungal species

Les levures du genre Malassezia font partie intégrale de la flore normale de la peau où ils représentent 50-80% du mycobiome total de l’épiderme. Ce champignon se distingue des autres organismes de par son absence de synthase d’acides gras (FAS), ce qui le rend dépendant à une source externe de lipides. De récents travaux ont démontré la présence de cette levure au niveau des organes internes, comme la muqueuse intestinale, où elle pourrait jouer un rôle dans le développement de la maladie de Crohn. Les circonstances amenant Malassezia à passer de commensal à pathogène restent, de nos jours, nébuleuses. Afin de mieux comprendre la niche écologique de Malassezia, nous avons effectué une caractérisation physiologique de l’assimilation lipidique de différentes espèces de Malassezia en contrôlant la source de lipides. Notre analyse a révélé que la présence du profil lipidique est hétérogène entre les espèces ainsi qu’entre les souches de la même espèce. Nos observations sont cohérentes avec la littérature, c’est-à-dire que l’acide palmitique (C16), l’acide stéarique (C18), l’acide oléique (C18:1) et l’acide linoléique (C18:2) sont extrêmement importants pour la croissance des différentes espèces. Dans l’ensemble, notre étude nous a permis de générer un nouveau milieu de croissance qui nous a permis de tester différents composés, seuls et en combinaison, pouvant avoir des propriétés antifongiques. La combinaison entre l’itraconazole, la terbinafine et un nouvel inhibiteur de protéase (BMZ2-134B) s’est avérée particulièrement efficace afin d’inhiber Malassezia. Avec le nombre grandissant de données démontrant un lien étroit entre la dysbiose du microbiote, l’inflammation et les maladies cardiovasculaires, il devient impératif de développer de nouvelles stratégies thérapeutiques afin de prévenir les maladies cardiovasculaires en tirant profit de nos connaissances sur le mycobiome. / Yeasts of the genus Malassezia are an integral part of the normal flora of skin, where they represent 50-80 % of the total epidermis mycobiota. This fungus is distinguishable from other organisms by the fact that it lacks a fatty acid synthase (FAS), making it dependent on an external source of lipids. Recent work has shown the presence of this yeast in internal organs, such as the intestinal mucosa, where it could play a potential role in the development of Crohn’s disease. The circumstances leading Malassezia to switch from commensal to pathogen remain, nowadays, nebulous. In order to better understand the ecological niche of Malassezia, we carried out a physiological characterization of lipid assimilation of different species of Malassezia by controlling the lipid source. Our analysis revealed that the lipid assimilation profile is heterogeneous between species as well as between strains of the same species. Our observations are consistent with the literature, i.e., palmitic acid (C16), stearic acid (C18), oleic acid (C18:1) and linoleum acid (C18:2) are extremely important for the growth of the different species. Overall, our study allowed us to generate a new growth medium where we could test different compounds, alone and in combination, that could have antifungal properties. The combination of itraconazole, terbinafine and a new protease inhibitor proved to be particularly effective in inhibiting Malassezia’s growth. With the growing evidence demonstrating a strong link between microbiota dysbiosis, inflammation and cardiovascular diseases, it becomes imperative to develop new therapeutic strategies by leveraging our knowledge of the mycobioma.