Orientador: José Ricardo Paciência Rodrigues / Banca: Afonso Mazario / Banca: Henrique Benedito Brenelli / Banca: Cleverson Teixeira / Banca: Gilberto Uemura / Resumo: Estudos de expressão gênica têm identificado vários grupos moleculares de carcinoma de mama, com diferentes comportamentos clínico e biológico. A correlação entre "cDNA microarray" e imunoistoquímica(IQ) com marcadores para citoceratinas, Her2/neu, receptor de estrógeno(RE) e de células basais mioepiteliais (1A4, S-100 e p63), identificaram cinco grupos: (1) luminal A (RE+; Her2/neu-), (2) luminal B (RE+; Her2/neu+), (3) superexpressão de Her2/neu (RE-; Her2/neu+), (4) tipo basal (RE-; Her2/neu-; Ck 5/6 +) e (5) nenhum destes ("null"). Os de tipo luminal expressam citoceratinas de padrão luminal (Ck8/18) e os de tipo basal expressam citoceratinas 5/6 e 14 ou marcadores de células basais mioepiteliais. Avaliamos a expressão de Ck5/6, Ck8/18 e 1A4 em material de citoinclusão, comparando-a ao espécime cirúrgico. Material e Métodos: Foram selecionados 62 casos, seqüenciais, de carcinoma de mama diagnosticados por PAAF, com citoinclusão e espécime cirúrgico. Cortes de citoinclusão e do espécime cirúrgico foram imunocorados para Ck 5/6, Ck 8/18 e 1A4. Resultados e Conclusão: Os valores, em porcentagem, de sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo(VPP), valor preditivo negativo(VPN) e acurácia foram, respectivamente: Ck5/6 (77, 100, 100, 92 e 94); Ck8/18 ( 98, 66, 96, 80 e 95) e 1A4 ( 92, 96, 85, 98 e 95). Portanto, a identificação de Ck5/6, Ck8/18 e 1A4 por IQ em material de citoinclusão é método confiável, com resultados muito próximos aos obtidos no espécime cirúrgico e pode contribuir para a classificação dos carcinomas mamários de expressão luminal e basal, fornecendo informações importantes que possam orientar na escolha do tratamento, bem como na avaliação de fatores prognósticos e preditivos. A importância da obtenção de dados morfológicos e imunoistoquímicos sobre os carcinomas mamários através do material... (Rewsumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Genetic expression studies have identified many molecular groups of breast carcinoma, with different clinical and biological behavior. The correlation between cDNA microarray and immunohistochemistry (IHC) with markers for cytokeratin, Her2/neu, estrogen receptor (ER) and of basal myoepithelial cells (1A4, S-100 e p63), identified five groups: (1) luminal A (ER+; Her2/neu-), (2) luminal B (ER+; Her2/neu+), (3) overexpression of Her2/neu (ER- ; Her2/neu+), (4) basal-like (ER- ; Her2/neu-; Ck 5/6 +) and (5) none of them (null). The luminal-like express cytokeratines of luminal pattern (Ck8/18) and the basal-like express cytokeratines 5/6 and 14 or markers of myoepithelial basal cells. We have evaluated the expression of Ck5/6, Ck8/18 and 1A4 in cell block comparing it to the surgical specimen. Material and Methods: 43 62 cases have been selected, sequencial, of breast carcinoma diagnosed through fine needle aspiration (FNA), with cell block and surgical specimen. Cuts of cell block and from the surgical specimen were immunostained for Ck 5/6, Ck 8/18 and 1A4. The value, in percentage, of sensibility, specificity, positive predictive value, negative predictive value, and accuracy were respectively: Ck5/6 (77, 100, 100, 92 e 94); Ck8/18 (98, 66, 96, 80 e 95) e 1A4 ( 92, 96, 85, 98 e 95). Therefore, the identification of CK5/6, 8/18 and 1A4 for IHC in cell block is a reliable method, with results very close to the ones obtained in the surgical specimen, and it can contribute to the sub classification of the breast carcinomas of luminal and basal expression, providing important information, which can orientate the treatment... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Mirela Tinucci Costa / Coorientador: Renée Laufer Amorim / Banca: Felipe Augusto Ruiz Sueiro / Banca: Noeme Sousa Rocha / Banca: Geovanni Dantas Cassali / Banca: Andrigo Barboza De Nardi / Resumo: Tumores mamários são muito comuns em cadelas e apresentam comportamento biológico semelhante aos que ocorrem nas mulheres, tornando a cadela um excelente modelo de estudo comparativo. A transição epitélio-mesênquima (EMT) facilita a migração celular, favorecendo a ocorrência de metástases, fator que tem influência direta no prognóstico das pacientes com neoplasia mamária. Assim, este estudo objetivou avaliar, pela técnica de imuno-histoquimica, marcadores de EMT em tumores mamários caninos (E-caderina, β-catenina, Vimentina e Citoceratina), além da expressão gênica e protéica de dos genes WNT5A e APC pelas técnicas de RT-qPCR e imuno-histoquímica. Para isto foram utilizadas 98 cadelas, sem predileção por raça ou idade, além de glândulas mamárias normais. Quatro grupos foram formados: (G1) 5 amostras de mamas normais sem alterações histopatológicas; (G2) 28 alterações mamárias benignas; (G3) 56 carcinomas mamários sem metástase e (G4) 14 carcinomas mamários com metástase. Ambos os genes (APC e WNT5A) mostraram maior expressão entre as mamas normais, sem diferença entre neoplasias benignas e malignas (com e sem metástase). O fenótipo de EMT foi identificado pela análise multivariada, pois neoplasias benignas foram fortemente associadas à β-catenina em membrana, escore elevado de citoceratina e negatividade para vimentina nas células epiteliais, enquanto os carcinomas metastáticos foram associados à β-catenina nuclear, baixo escore de E-caderina e positividade para vimentina em suas células epiteliais neoplásicas. Como a presença de β-catenina nuclear é característica da ativação da via de sinalização do Wnt/β-catenina, é possível concluir que esta via está ativada entre as neoplasias mamárias caninas e que o processo de EMT está ocorrendo visto a transformação das células epiteliais das neoplasias benignas em um fenótipo mesenquimal como o observado nas neoplasias ... / Abstract: Mammary tumors are very common in bitches and have a very similar biological behavior to the ones that occur in women, turning it an excellent model for comparative studies. Epithelial-mesenchymal transition (EMT) facilitate migration and the occurrence of metastasis, factor that have direct influence on prognosis. Thus, this study aimed to evaluate, by immunohistochemistry (IHC), EMT markers in canine mammary tumors (e-cadherin, β-catenin, vimentin and cytokeratin). In addition, gene and protein expressions of two genes WNT5A and APC were evaluated by qRT-PCR and immunohistochemistry. To this, 98 bitches with no breed or age predilection, besides normal mammary glands without neoplastic lesions were used to form four groups: (G1) 5 normal mammary samples; (G2) 28 benign mammary lesions; (G3) 56 non-metastatic mammary carcinomas and (G4) 14 metastatic carcinomas. Both genes, APC and WNT5A show higher expression between normal mammary samples and no difference among benign and malignant tumors (metastatic and non-metastatic). EMT phenotype was identified by multivariate analysis, because benign tumors were stongly associated with membranous β-catenin, high scores of Cytokeratin and no vimentin expression in epithelial cells and metastatic carcinomas were strongly associated to nuclear β-catenin, low E-cadherin expression and vimentin positivity in neoplastic epithelial cells. As nuclear localization of β-catenin is characteristic of Wnt/β-catenin signaling pathway aberrant activation, we can conclude that Wnt/β-catenin signalling pathway is activated among canine mammary tumors and EMT is occuring since benign epithelial cells have been transformed in mesenchymal cells in metastatic tumors. Those findings provide data for a better understanding of cancer progression and open new perspectives about research not only in mammary tumors, but also in other neoplastic types in dogs, facilitating to identify new prognostic factors and ... / Doutor

Orientador: José Joaquim Titton Ranzani / Co-orientador: Adriana Camargo Ferrasi / Banca: Noeme Sousa Rocha / Banca: Rejane Maria Tommasini Grotto / Resumo: Introdução: A E-caderina é uma proteína transmembranosa, codificada pelo gene CDH1, que desempenha um papel importante na adesão intercelular de tecidos epiteliais. A perda da função ou expressão diminuída de E-caderina pode implicar em metástases e progressão do câncer. Nas neoplasias mamárias, metástases pulmonares ocorrem com maior frequência, porém as metástases oculares, especialmente na coroide, são relativamente comuns, mas pouco diagnosticadas clinicamente. Metodologia: Vinte e oito cadelas de diferentes raças, não-castradas, com idade superior a 5 anos, com diagnóstico de carcinoma mamário ao exame citopatológico, sem metástases pulmonares e/ou oculares, foram submetidas à mastectomia radical e ovariosalpingohisterectomia (OSH), sendo reavaliadas após três e seis meses de pós-operatório. O padrão de expressão relativa do gene CDH1 em tecidos tumorais e normais, foi avaliado pelo sistema TaqMan Universal PCR Master Mix; o padrão de metilação foi realizado utilizando-se a técnica de MSP-PCR; o sequenciamento do DNA, análise das mutações e polimorfismos foram realizados a partir do sangue periférico, utilizando-se a técnica de reação de terminação em cadeia pelo kit BigDye Terminator v.3 Cycle Sequencing. Análises imunohistoquímicas foram realizadas para avaliar a expressão da E-caderina. Resultados: Nenhuma das 28 cadelas estudadas apresentou metástase ocular ou pulmonar com três ou seis meses de pós-operatório. Em 57,1% dos casos uma menor expressão relativa do gene CDH1 foi identificada. Em 100% dos casos verificou-se o status metilado para o gene CDH1, reafirmando a hipótese de que células não-tumorais podem contribuir para estes resultados. Em 46,5% dos casos identificou-se expressão reduzida de E-caderina pela técnica de imunohistoquímica. Foram identificados 3 histotipos tumorais: carcinoma complexo, tubulopapilífero e carcinoma em tumor misto. Em 100% dos casos de carcinoma... / Abstract: Introduction: E-cadherin is a transmembrane protein, encoded by CDH1 gene, that has an important role in intercellular adhesion of epithelial tissues. Loss of function or decreased expression of E-cadherin may lead to cancer progression and metastasis. In mammary epithelial neoplasms, lung metastases occur more frequently, but the ocular metastasis, especially in the choroid, are relatively common but underdiagnosed clinically. Methods: Twenty-eight dogs of different breeds, non-castrated, older than five years, diagnosed with breast cancer by cytopathological examination, without pulmonary and/or ocular metastasis, have undergone to radical mastectomy and ovariosalpingohisterectomy (OSH), and re-evaluated after three and six months postoperatively. The pattern of relative expression of CDH1 gene in normal and tumor tissues was assessed by TaqMan Universal PCR Master Mix system; the pattern of methylation was performed using MSP-PCR; DNA sequencing analysis of mutations and polymorphisms were performed from peripheral blood using the termination chain reaction technique with BigDye Terminator v.3 Cycle Sequencing kit. Immunohistochemical analyzes were performed to evaluate the expression of E-cadherin. Results: None of the 28 dogs studied had ocular or pulmonary metastasis with 3 or 6 months postoperatively. In 57,1% of cases a decreased relative expression of CDH1 gene was identified. In 100% of cases there was methylated status for the CDH1 gene, confirming the hypothesis that non-tumor cells can contribute to these results. In 46,5% of the cases reduced E-cadherin expression by immunohistochemistry was identified. Three tumor histotypes were identified: complex carcinoma, tubulopapillary, and carcinoma in mixed tumor. In 100% of cases of tubulopapillary carcinoma was identified a reduced gene expression of CDH1 by both qPCR and by immunohistochemistry. The sequencing of the gene, 6 animals (21,4%) had silent mutations in exons 3, 7 ... / Mestre

Dissertação (mestrado)—Fundação Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2018. / No câncer de mama as metástases estão intimamente relacionadas com modificações na matriz extracelular, onde a modificação mais proeminente observada em estudos recentes é o aumento da deposição de colágeno. As terapias atuais são pouco eficazes em impedir o desenvolvimento e progressão da doença, bem como a reincidência da mesma ao longo dos anos. Com o intuito de incrementar os efeitos da terapia, a associação entre a nanotecnologia e os fármacos utilizados busca melhorar aspectos do tratamento como a eficácia e diminuir os efeitos adversos relacionados ao seu uso. No presente trabalho um modelo de enxerto tumoral de células de carcinoma mamário murino (4T1®ATCC), a uma concentração de 4x104 células/50μL de meio de cultivo, enxertadas no flanco esquerdo de camundongos BalbC fêmeas foi utilizado para avaliação da eficácia do quimioterápico doxorrubicina associado a nanoemulsões e administração simultânea de losartana. Visando potencializar o efeito da terapia, a administração simultânea de losartana foi utilizada como uma tentativa de diminuir os níveis de deposição de colágeno na matriz extracelular de tecidos pulmonares e facilitar a chegada do fármaco aos sítios alvos por meio da ação descompressora dos vasos que permeiam o microambiente tumoral. O tratamento foi administrado por cinco dias consecutivos após quatro semanas do enxerto, nas concentrações de 20mg/kg para doxorrubicina em sua forma livre, 20mg/kg+ 40mg/kg para doxorrubicina livre e losartana, 40mg/kg para doxorrubicina associada a nanoemulsão e 40mg/kg + 40mg/kg para doxorrubicina associada a nanoemulsão e losartana, respectivamente. O acompanhamento in vivo do estado clínico dos camundongos ao longo de cinco semanas mostrou que o tratamento com nanoemulsão e losartana não foi tóxico, enquanto a doxorrubicina promoveu toxicidade que pôde ser observada no comportamento e aspecto físico dos camundongos. As avaliações ex vivo de materiais biológicos realizadas por meio de histologia, imunohistoquímica, ELISA e contagem de nódulos corroboram dados encontrados em estudos científicos, como o menor nível de colágeno nos grupos com administração simultânea de losartana e menor grau metastático. Concluiu-se que a doxorrubicina associada a nanoemulsões e administração de losartana não apresentou diferenças significativas em comparação à doxorrubicina em sua forma livre quando se trata da atividade antitumoral no sítio primário, mas foi capaz de diminuir o grau de colágeno encontrado nos tecidos, bem como as metástases nos tecidos pulmonares, não apresentando toxicidade significativa para os camundongos. / In breast cancer metastasis are closely related to changes in the extracellular matrix, where the most prominent modification observed in recent studies is the increase in collagen deposition. Current therapies are poorly effective in preventing the development and progression of the disease, as well as its recurrence over the years. In order to increase the effects of therapy, the association between nanotechnology and the drugs aims to improve treatment efficacy and to reduce adverse effects related to its use. In the present work a murine mammary carcinoma cell (4T1®ATCC) tumor graft model, at a concentration of 4x10 4 cells/50μl culture medium, grafted on the left flank of female BalbC mice was used to evaluate the efficacy of doxorubicin with nanoemulsions and simultaneous administration of losartan. In order to potentiate the effect of the therapy, the simultaneous administration of losartan was used as an attempt to decrease the levels of collagen deposition in the extracellular matrix of lung tissues and to facilitate the drug delivery at the target sites through the decompressive action of the vessels that permeate the tumor microenvironment. The treatment was administered for five consecutive days after four weeks of grafting, at concentrations of 20mg/kg for doxorubicin in its free form, 20mg/kg + 40mg/kg for free doxorubicin and losartan, 40mg/kg for doxorubicin associated with nanoemulsion and 40mg/kg + 40mg/kg for doxorubicin associated with nanoemulsion and losartan, respectively. In vivo monitoring of the clinical status of mice over five weeks showed that treatment with nanoemulsion and losartan was non-toxic, whereas doxorubicin promoted toxicity that could be observed in the behavior and physical appearance of the mice. Ex vivo evaluations of biological materials performed using histology, immunohistochemistry, ELISA and lung nodule counts corroborate data found in scientific studies, such as the lower level of collagen in the groups with simultaneous administration of losartan and lower metastatic degree. It was concluded that doxorubicin associated with nanoemulsions and administration of losartan did not present significant differences compared to doxorubicin in its free form when it treated the antitumor activity at the primary site, but was able to decrease the degree of collagen found in the tissues, as well as metastasis in the lung tissues, showing no significant toxicity to the mice.

Orientadores : Luiz Carlos Zeferino, Maria Salete Costa Gurgel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-11-09T15:57:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Menezes_MarcusViniciusMartinsde_M.pdf: 4462397 bytes, checksum: 19e649c8f79ccdfab39e8019f7d69049 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Este estudo teve como objetivo avaliar a associação entre a expressão das proteínas bcl-2, c-erbB-2 e p53 com o tecido mamário não-neoplásico, o carcinoma ductal in situ e o carcinoma invasivo da mesma mama, através da imuno-histoquímica, e verificar se há um padrão de variação identificável da expressão destas proteínas com a gravidade das lesões. Foram incluídas 56 mulheres que apresentaram na mesma mama carcinoma invasivo associado com carcinoma in situ. Foram utilizados anticorpos monoclocais específicos para bcl-2 (MxH, clone 124, DAKO, código M0887-1, diluição 1:40), c-erbB-2 (RxH, DAKO, código A0485-1, diluição 1 :300) e p53 (MxH, D0-7, DAKO, código M7001-1, diluição 1:100). Foi considerado como expressão positiva quando pelo menos 1% das células corou. A prevalência da expressão da proteína bcl-2 foi de 98%, 75% e 64%, respectivamente, no tecido não-neoplásico, carcinoma in situ e carcinoma invasivo e estas diferenças foram estatisticamente significantes. O odds ratio mostrou que a magnitude destas diferenças foi maior entre o tecido não-neoplásico e o carcinoma in situ. Não houve expressão da proteína c-erbB-2 no tecido não-neoplásico e a prevalência da expressão foi de 68% e 61%, respectivamente, para o carcinoma in situ e carcinoma invasivo. A diferença observada entre o tecido não-neoplásico e carcinoma in situ foi estatisticamente significante. A prevalência da expressão da proteína p53 foi de 2%, 18% e 16%, respectivamente, no tecido não-neoplásico, carcinoma in situ carcinoma invasivo e estas diferenças foram estatisticamente significantes entre os dois primeiros componentes. A expressão da proteína bcl-2 foi mais freqüente no carcinoma in situ do subtipo não-comedo e grau nuclear 1 ou 2 e no carcinoma invasivo grau nuclear 1 ou 2. A expressão da proteína c-erbB-2 foi mais freqüente no carcinoma in situ grau nuclear 3 e a expressão da proteína p53 foi mais freqüente no carcinoma invasivo grau nuclear 3. Sessenta e quatro porcento das mulheres apresentaram expressão da proteína bcl-2 nos três componentes e 23% apresentaram apenas no componente não-neoplásico. Sessenta e um porcento das mulheres apresentaram expressão da proteína cerbB- 2 apenas nos componentes carcinoma in situ e carcinoma invasivo e 32% não apresentaram expressão em nenhum dos componentes. Setenta e oito porcento das mulheres não apresentaram expressão da proteína p53 em nenhum dos componentes e 14% apresentaram apenas nos componentes in situe invasivo. Os resultados deste estudo permitem inferir que os genes Bcl-2, C-erbB-2 e P53 estão envolvidos nas fases mais iniciais da carcinogênese mamária, ou seja, na transformação do dueto não-neoplásico em carcinoma in situ. Uma vez instalada a lesão intra-epitelial, a progressão para a forma invasiva dependeria de outros genes / Abstract: The present study aims to evaluate the association among the expression of the proteins bcl2, c-erbB-2 and p53 and the non-neoplasic mammary tissue, the ductal carcinoma in situ and the invasive carcinoma of the same breast using the immunohistochemical technique. Through this evaluation it aims to find out if there is an identifiable pattern of variation of the expression of these proteins with the gravity of the lesions. Fifty six women were included in this study and ali of them had, in the same breast, the association between invasive carcinoma and carcinoma in situ. lt has been used specific monoclonal antibodies for bcl-2 (MxH, clone 124, DAKO, code M0887-1, dilution 1:40), cerbB- 2 (RxH, DAKO, code A0485-1, dilution 1:300) and p53 (MxH, D0-7, DAKO, code M7001-1, dilution 1:100). Positive expression has been considered when, at least 1% of the cells dyed. The prevalence of the expression of the protein bcl-2 was 98%, 75% and 64%, respectively in the non-neoplasic tissue, carcinoma in situ and invasive carcinoma and these differences were statistically significant. The odds ratio confirmed that the magnitude of these differences was higher between the non-neoplasic tissue and the carcinoma in situ. There was no expression of the protein c-erbB-2 in the non-neoplasic tissue and the prevalence of expression of this protein was 68% and 61%, respectively in carcinoma in situ and invasive carcinoma. The difference found between the non-neoplasic tissue and the carcinoma in situ was statistically significant. The prevalence of expression of protein p-53 was 2%, 18% and 16%, respectively in the non-neoplasic tissue, carcinoma in situ and invasive carcinoma and these differences were statistically significant between the two formers only. The expression of the protein bcl-2 was more frequent in carcinoma in situ noncomedo type, nuclear degrees 1 or 2 and in invasive carcinoma nuclear degrees 1 or 2. The expression of protein c-erbB-2 was more frequent in carcinoma in situ nuclear degree 3 and the expression of protein p53 was more frequent in invasive carcinoma nuclear degree 3. Sixty four per cent of women studied showed expression of protein bcl-2 in ali three components and 23% of women showed it only in the non-neoplasic component. Sixty one per cent of women showed expression of protein c-erbB-2 only in carcinoma in situ and invasive carcinoma and 32% did not show expression at ali. Sixty eight per cent of women did not show expression of protein p53 in none of the components and 14% showed it only in the components 'in situ' and 'invasive'. The results of the present study allow us to conclude that the genes Bcl-2, C-erbB-2 and P53 are linked to the initial stages of mammary carcinogenesis, in other words, they are linked to the transformation of the non-neoplasic duct in carcinoma in situ. Once the intra-epithelial lesion has started, the progression to invasive form would depend on other genes / Mestrado / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-25Bitstream added on 2014-06-13T19:40:39Z : No. of bitstreams: 1 graciani_fs_dr_arafcf_parcial.pdf: 545160 bytes, checksum: d12c1e4909cabaf516ea500fd292c6e9 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-12-19T18:32:47Z: graciani_fs_dr_arafcf_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-12-19T18:33:34Z : No. of bitstreams: 1 000726391.pdf: 1117169 bytes, checksum: 0f0bc7cc07ba17b24618a33ee997eb8d (MD5) / câncer é considerado como uma das principais causas de morte no mundo. A compreensão das diferenças biológicas entre células cancerígenas e normais é fundamental para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, buscando sempre a maior seletividade em alvos que sejam críticos para células cancerígenas se comparado às células normais, sendo uma das características apresentadas em células cancerígenas o aumento de espécies reativas de oxigênio (EROs). O objetivo deste estudo consiste em estudar a geração de peróxido de hidrogênio (H2O2) por meio da associação ácido ascórbico/naftoquinona e sua aplicação em modelos de citotoxicidade, além de verificação de possível seletividade entre células normais e tumorais. Foram utilizados os métodos de avaliação do consumo de oxigênio, determinação da produção de H2O2, avaliação da ocorrência de cliclo redox por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e interação destas drogas com glutationa (GSH) ou nicotinamida adenina dinucleotídeo reduzida (NADH). O ensaio de citotoxicidade foi determinado pelo método da sulforodamina B em células câncer de mama (MCF-7 BUS) e células normais de ovário de hamster chinês (CHO). Foi descoberto que a presença de um grupo retirador de elétrons na molécula de naftoquinona teve um efeito direto sobre a eficiência da produção de H2O2. O composto 2- bromo-1,4-naftoquinona (BrQ), em que o átomo de bromo substituído no grupo metil na molécula 2-metil-1,4-naftoquinona (VK3), foi aproximadamente 10 a 19 vezes mais eficiente do que VK3 em termos de consumo de oxigênio e produção de H2O2, respectivamente. A proporção [H2O2] μM/minproduzido/[naftoquinona] μM/minconsumido foi 68 ± 11 and 5.8 ± 0.2 para BrQ e VK3, respectivamente, que revelou a maior eficácia de BrQ como um catalisador para a oxidação de ácido ascórbico (VC)... / Cancer is considered as one of the leading causes of death worldwide. Understanding the biological differences between normal cells and cancer cells is critical for the development of new therapeutic strategies, always seeking greater selectivity at targets that are critical for cancer cells compared to normal cells, one of the features shown in cancer cells is the increase reactive oxygen species (ROS). The aim of this study is to investigate the generation of hydrogen peroxide (H2O2) through association naphthoquinone/ascorbic acid and its application in models of cytotoxicity, and check possible selectivity between normal cells and tumor cells. Methods were used to evaluate the oxygen consumption, determination of H2O2 production, assessing the occurrence of redox cycle by HPLC and interaction of these drugs in combination with glutathione (GSH) or reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH). The cytotoxicity assay was determined by the sulforhodamine B in breast cancer cell (MCF-7 BUS) and chinese hamster ovary (CHO). It has been discovered that the presence of an electron withdrawing group in the naphthoquinone had a direct effect on the efficiency of production of H2O2. The compound 2-bromo-1,4-naphthoquinone (BrQ) in which the bromine atom substituted the methyl group in the molecule 2-methyl -1,4- naphthoquinone (VK3) was approximately 10 to 19 times more efficient that VK3 in terms of oxygen consumption and the production of H2O2, respectively. The ratio [H2O2] μM/ minproduced/[naphthoquinone] μM/minconsumed was 68 ± 5.8 and 11 ± 0.2 for BrQ and VK3, respectively, which showed the greatest efficacy BrQ as a catalyst for the oxidation of ascorbic acid (VC). Both VK3 and BrQ reacted with GSH, but the substrate was BrQ more effective. Part of GSH was incorporated into naphthoquinone, giving rise to a nucleophilic substitution product (Q -SG)... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Ulisses Frederigue Júnior / Resumo: Realizou-se um estudo retrospectivo de 613 casos de lesões não palpáveis de mama submetidas a punção aspirativa por agulha fina, dirigida por ultra-sonografia (PAAF-US), arquivados em nosso serviço particular de diagnóstico por imagem. Todas as pacientes, antes de realizarem a PAAF-US, submeteram-se a ultra-sonografia mamária para que fossem detectadas e caracterizadas as lesões não palpáveis, a pedido do clínico ou cirurgião dessas pacientes. Antes de iniciarmos a PAAF-US, o imaginologista e o patologista discutiam o caso em questão, analisavam os exames de imagem (mamografia quando havia, e o US das mamas). Assim, no momento da punção, o patologista já estava ciente da impressão diagnóstica do imaginologista. A ultra-sonografia em tempo real orientava o patologista até que o mesmo estivesse com a agulha junto à lesão e começasse a colher o material para análise. Dessa forma, realizávamos a PAAF-US a "4 mãos". Observamos que o número de material considerado inadequado foi baixo, pois o patologista analisava a lâmina por ele mesmo preparada no ato da punção. Neste estudo foram excluídos dos cálculos estatísticos o único caso de material inadequado que representou 0,1% do total de 613 e os achados indeterminados da ultra-sonografia, da PAAF-US e da histologia. Em nosso trabalho, a Sensibilidade e a Especificidade da PAAF-US foi de 100% e não houve caso de falso-positivo ou de falso-negativo. Creditamos esses valores a diversos fatores, tais como a presença do patologista no ato da punção, realizando-a; o triplo diagnóstico onde clínica e imagem são do conhecimento do patologista e, finalmente, a ampla experiência em patologia mamária dos citopatologistas de nossa equipe. A ultrasonografia, em nossa opinião, é um bom método de escolha para orientar procedimentos invasivos de lesões não palpáveis... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: A retrospective study done in 613 cases of nonpalpable breast lesions submitted to a fine needle aspiration biopsy (FNAB) by ultrasonography is filed in our diagnosis by image service in a private clinic. All patients, before the FNAB were submitted to a breast ultrasonography so that we could detect and characterize the nonpalpable lesions, which was asked by those patients' physicians or surgeons. Before beginning US-guided fine-needle aspiration biopsy the roentgenologist and pathologist discussed the case in question, they analysed the exams through the image (mammography when there was one, and breast US). So, when the aspiration biopsy was beeing operated the pathologist was awave of the previous diagnosis opinion concluded by the roentgenologist. The ultrasonography in real time guided the pathologist until he had the needle in the lesion and could stard to collect the material for the analyses. In this way, we performed a "4 hand" USFNAB. We also could observe that the amount of material considered insufficient was low, thus the pathologist analysed the lamina by himself, which was prepared during biopsy. In this study we excluded from the statistics results the only case of insufficient material that represented a total of just 0,1% from these 613 patients, and the ones that were found indeterminated in the ultrasonography, from the citology and from histology. In our work, the US-FNAB sensitivity and specificity was 100% and there wasn't any case of false-positive or false-negative. We believe this fact is possible because of several factors, such as: the pathologist assistance during the biopsy, performing it; the triple diagnosis in which the clinic and image are known by the pathologist, and also from the broad experience our staff of cytopathologists have in breast. The ultrasonography, in our opinion, is a good choice... (Complete abstract, click electronic address below) / Mestre

Orientador: Noeme Sousa Rocha / Banca: Andrigo Barboza de Nardi / Banca: Renée Laufer Amorim / Resumo: Tumores mamários são freqüentemente diagnosticados em cadelas e apresentam comportamento biológico muito semelhante aos das mulheres, fazendo da cadela um modelo para o estudo comparativo. Nas neoplasias malignas, invasão e metástase são características biológicas que têm influência direta no prognóstico. Com o aumento da disponibilidade de anticorpos para imuno-histoquímica na espécie canina, inúmeros estudos têm sido realizados para prover informações a respeito das transformações celulares que ocorrem durante a carcinogênese e o processo metastático. A p53 é conhecida como "guardiã do genoma" e aparece mutada em cerca de 50% das neoplasias humanas. A p63 possui elevada homologia seqüencial com a p53 e sua função supressora tumoral tem sido investigada. A transição de células epiteliais em mesenquimais (EMT) é um processo fisiológico no qual as células perdem suas características epiteliais e adquirem fenótipo mesenquimal, capaz de permitir a migração celular e esta transição tem sido investigada em participar da disseminação metastática nos cânceres humanos. Assim, este estudo avaliou a presença de p53, p63 e marcadores envolvidos na EMT (TGFβ, pSmad2, E-caderina e Vimentina) em adenomas e carcinomas mamários caninos com e sem metástase. Houve diminuição da marcação para p63 e E-caderina conforme progressão da lesão e o inverso ocorreu com a p53 e Vimentina. O percentual de marcação para o TGFβ não variou, tendo apresentado apenas variação com relação à intensidade de marcação. A marcação do pSmad2 foi diminuída nas células epiteliais neoplásicas e aumentada nas células estromais de acordo com o avanço da neoplasia. Estes achados sugerem que a EMT também ocorra nas neoplasias mamárias caninas e abrem perspectivas para mais estudos nesta área / Abstract: Mammary tumors are often diagnosed in bitches and they are very similar to that occur in women, making this animal an excellent model for comparative studies. In malignancies, invasion and metastasis are important biological features that have direct influence on patient's prognosis. They occur in several pathways and there are several factors that can influence a malignancy until it arrives at a distant site as well as their growth and differentiation into a new tumor. With increasing of availability of antibodies to perform immnuohistochemistry in dogs, numerous studies have been conducted in order to provide more information about the cellular changes that occur in breast carcinogenesis. p53 is a protein that actively participates in cell cycle regulation and appears mutated in about 50% of human malignancies. p63 has a high sequential homology with p53, and despite its known role in embrio development, its tumor suppression function has been investigated. The epithelial-mesenchymal transition (EMT) is a physiological process that occurs during development and wound healing, by which cells lose their epithelial characteristics and acquire mesenchymal phenotype allowing migration. Recently, EMT has been investigated in participate on metastatic spread in human cancers. This way, this study assessed the presence of p53 and p63 as well as EMT's involved markers (TGFβ, e-cadherin and vimentin) in benign and malignant mammary tumors, with or without metastasis. Decrease staining of p63 was observed in injury progression, what occur inversely with p53. The TGFβ staining did not vary between groups, presenting only variation in labeling intensity. We also observed that e-cadherin staining was decreased in advanced cancers and they were express vimentin, a marker of mesenchymal cells. This findings suggest that EMT also occurs in canine mammary neoplasias and give perspectives for... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Daniele Cardoso Geraldo Maia / Banca: Clelia Akiko Hiruma Lima / Banca: Cleverton Roberto de Andrade / Banca: Edson Rodrgues Filho / Resumo: Nos últimos vinte anos, os quimioterápicos naturais foram introduzidos no tratamento do câncer e com estas novas perspectivas, vem aumentando o interesse das indústrias farmacêuticas em produtos de origem natural. Além disso, existe um grande interesse na identificação de novos agentes antineoplásicos, que possuam ação citotóxica seletiva associada à atividade imunomodulatória. Neste contexto, o presente estudo investiga possíveis efeitos farmacológicos de Qualea multiflora Mart (Vochysiaceae), utilizada na medicina popular do cerrado para o tratamento de úlceras, gastrites, amebíase, diarréia com sangue, cólicas intestinais e inflamações. A partir de resultados in vitro, propôs-se avaliar um tratamento in vivo em modelo tumoral mamário murino empregando-se uma fração terpênica (FT) derivada de Qualea multiflora (Q. multiflora) e as substâncias isoladas presentes nesta fração, lupeol (LP), lupenona (LP) e friedelina (FR), concomitantemente à avaliação dos efeitos imunológicos das substâncias testadas nos animais portadores de tumor. Os resultados parciais do presente estudo mostraram que as substâncias isoladas LP, LN e FR e a fração FT, na maioria das concentrações testadas, não apresentaram efeito tóxico in vitro sobre as células imunes, macrófagos e linfócitos . No entanto, LP, LN, FR e FT apresentaram excelente atividade citotóxica contra a linhagem tumoral LM3. AE não mostrou efeito tóxico in vitro contra a linhagem LM3. Por outro lado, a droga padrão Taxol (TX), apresentou pouco efeito tóxico contra a linhagem tumoral LM3, e acentuado efeito citotóxico contra macrófagos, indispensáveis à contenção tumoral. A partir destes resultados foram selecionadas as concentrações ideais para tratamento in vivo. Os resultados mostraram expressiva inibição do volume tumoral quando os animais foram tratados... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the last twenty years, natural chemotherapeutic treatment were introduced into treatment of cancer and with these new perspectives, it has been increasing the interest of pharmaceutical products from natural origin. Moreover, there is great interest in identifying new anticancer agents that have selective cytotoxic activity associated with immunomodulatory activity. In this context, this study investigates possible pharmacological effects of Qualea multiflora (Q. multiflora) Vochysiaceae family, used in folk medicine of Brazilisn cerrado in the treatment of ulcers, gastritis, amebiasis, bloody diarrhea, intestinal pain and inflammation. From in vitro results, this study proposed to evaluate an alternative form of treatment for breast cancer employing a terpenic fraction (FT) derived from the chloroform extract of Q. multiflora and the isolated compounds present in this fraction, Ellagic Acid (EA), lupeol (LP), Lupenona (LP) and friedelin (FR) in an in vivo model of murine breast cancer concurrently to assess the immunological effects of the substances tested in animals with tumor. Partial results of this study showed that the isolated compounds AE, LP, LN and FR and FT fraction, most of the concentrations tested, showed no toxic effect in vitro on immune cells, macrophages and lymphocytes. However, LP, LN, FR and FT showed excellent cytotoxic activity against tumor line LM3. AE showed no toxic effect in vitro against strain LM3. Moreover, the standard drug Taxol (TX) showed little toxic effect against LM3 type of tumor, and marked effect against cytotoxic macrophages necessary for the containment of the tumor. From these results we selected the optimal concentrations for in vivo treatment. The results showed significant inhibition of tumor volume when the animals were treated... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Marcus Antônio Rossi Feliciano / Coorientador: Ricardo Andrés Ramirez Uscategui / Coorientador: Vivian Tavares de Almeida / Banca: Mirela Tinucci Costa / Banca: Leandro Nassar Coutinho / Resumo: A incidência de neoplasmas mamários em cadelas tem aumentado o seu diagnóstico juntamente com a sobrevida desses animais e a avaliação completa das mamas e anexos é fundamental para o diagnóstico adequado. Uma característica dos neoplasmas mamários é a grande capacidade de desenvolver metástase e os linfonodos regionais por serem responsáveis pela drenagem das mamas, desenvolvem um papel importante na disseminação de células tumorais, sendo um fator prognóstico negativo para os pacientes. O desenvolvimento de novas técnicas para detecção do linfonodo sentinela e identificação prévia de alterações contribuem positivamente na sobrevida do paciente. Todavia, a maioria dos métodos utilizados para o diagnóstico conclusivo são métodos invasivos. Sendo assim, este estudo prospectivo visou avaliar a sensibilidade e especificidade das técnicas ultrassonográficas para avaliação de linfonodos locoreginais em cadelas com tumores mamários (Modo-B, Doppler em cores e Elastografia Acoustic Radiation Force Impulse - ARFI), pela diferenciação da malignidade (livres, reativos e metastáticos) Linfonodos axilares (n = 96) e inguinais (n = 100) ipsilaterais de cadeias mamárias de 100 cadelas acometidas foram avaliados por meio da ultrassonografia modo-B (comprimento, altura, relação eixo curto/longo, forma, ecotextura e ecogenicidade), Doppler em cores (presença ou ausência de vascularização) e Elastografia ARFI (rigidez, padrão, deformabilidade, velocidade de cisalhamento e profundidade). As var... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The incidence of mammary neoplasms in bitches has increased their diagnosis along with a survival of the animals and a complete evaluation of the mammarys and appendages is fundamental for the proper diagnosis. A characteristic of mammary neoplasms is a great capacity to develop regional metaphors and lymph nodes because they are responsible for the production of breasts, they play an important role in the dissemination of tumor cells, being a negative prognostic factor for the patients. The development of new techniques for lymph node detection and the preventive identification of positive contributions to patient survival. However, most of the methods used for conclusive diagnosis are invasive methods. (B-mode, Doppler in nuclei and Acoustic Radiation Force Impulse Elastography - ARFI), by the difference in the literature, reactive and metastatic measurements of malignancy (lp, Doppler color and Elastography). Axillary lymph nodes (n = 96) and inguinal lymph nodes (n = 100) ipsilateral mammary chains of 100 bitches were reassessed by means of B-mode ultrasonography (length, height, short / long axis, shape, ecotexture and echogenicity), core Doppler (presence or absence of vascularization) and ARFI Elastography (stiffness, pattern, deformability, shear velocity and depth). The variables that obtained the significant difference have cut-off value, sensitivity, specificity, area over the curve and accuracy. The shear velocity obtained by ARFI elastography showed 95% sensitivi... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre