Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-09-29T20:14:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BiomarcadoresResistênciaSuscetibilidade.pdf: 3171580 bytes, checksum: def3e8b602b44b6105f51a992438faa6 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-11-07T13:09:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BiomarcadoresResistênciaSuscetibilidade.pdf: 3171580 bytes, checksum: def3e8b602b44b6105f51a992438faa6 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-07T13:09:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BiomarcadoresResistênciaSuscetibilidade.pdf: 3171580 bytes, checksum: def3e8b602b44b6105f51a992438faa6 (MD5) Previous issue date: 2013 / A leishmaniose visceral (LV) tem grande impacto na saúde pública e cães são considerados os principais reservatórios domésticos do parasito. Estudos longitudinais em área endêmica tem demonstrado que a história natural da LV canina (LVC), pode manifestar-se num amplo espectro clínico, desde infecção assintomática até a forma sintomática. Nos últimos anos tem sido observado que cães assintomáticos e soronegativos podem apresentar-se PCR positivo e, estes animais são classificados como CA-I. Interessantemente estes cães apresentam um perfil de resposta imune diferenciado em comparação aos assintomáticos soropositivos (CA-II). Neste contexto, a busca de biomarcadores de progressão clínica é essencial para uma melhor compreensão dos mecanismos imunológicos associados a um perfil de resistência e/ou suscetibilidade na LVC. Neste trabalho, 159 cães de área endêmica, naturalmente infectados por L. infantum, foram distribuídos em quatro grupos de acordo com a forma clínica e os resultados do diagnóstico sorológico e molecular: (i) cães assintomáticos soronegativos/PCR+ para L. infantum (CA-I); (ii) cães assintomáticos soropositivos (CA-II); (iii) cães sintomáticos soropositivos (CS) e (iv) grupo controle (CN) cães sem sinais clínicos com resultados sorológicos e moleculares negativos. Além dos parâmetros hematológicos, uma análise detalhada da resposta celular, através da citometria de fluxo, no contexto ex vivo, foi realizada. Linfócitos T (CD5+, CD4+ e CD8+), células B (CD21+) e monócitos (CD14+) circulantes foram os fenótipos celulares investigados. Adicionalmente, foram realizados estudos in vitro empregando-se biomarcadores de resistência e suscetibilidade para a LVC, relacionados à produção intracitoplasmática de IFN- e IL-4+ por neutrófilos, eosinófilos e linfócitos T (CD4+ e CD8+). Nossos resultados confirmam que a progressão da doença induz anemia, caracterizada pela redução de hemácias, hemoglobina e hematócrito. Já na série branca, foi observado aumento na população de neutrófilos bastonetes e redução de eosinófilos, monócitos e linfócitos. A investigação da resposta imune, baseada no perfil imunofenotípico de células mononucleares do sangue periférico (CMSP), mostrou uma redução no número absoluto de linfócitos T CD5+, e suas subpopulações (CD4+ e CD8+), bem como uma queda no número dos linfócitos B CD21+ e monócitos CD14+ nos animais soropositivos (CA-II e CS). Neutrófilos quando estimulados com antígeno solúvel de L. infantum (ASLi), aumentaram a síntese de IFN-γ+ nos grupos CA-II e CS e diminuíram a produção de IL-4+ no grupo CA-I. Já nos grupos CA-II e CS, as subpopulações de linfócitos T (CD4+ e CD8+), tanto na cultura controle quanto na estimulada com ASLi, também apresentaram uma maior síntese de IFN-γ+ e IL-4+. Estes resultados sugerem que os animais dos grupos CA-II e CS apresentam um perfil imunológico misto (Tipo 1 e 2). Por outro lado, os animais do grupo CA-I não diferem dos animais do grupo CN conferindo a este grupo um perfil de resistência, uma vez que não ocorre queda em nenhuma das populações avaliadas, bem como não há ativação do Tipo 2 com produção de IL-4+. Já os animais do grupo CA-II e principalmente do grupo CS apresentam uma imunossupressão, que acomete tanto o compartimento T como B, além de queda de monócitos circulantes, concomitante a presença de IFN-γ+ e IL-4+ produzidas por neutrófilos e linfócitos T tornando-os incapazes de controlar a replicação parasitária. ____________________________________________________________________ / ABSTRACT: Visceral leishmaniasis (VL) has great impact on public health and dogs are considered the main domestic reservoir of the parasite. Longitudinal studies in endemic areas have shown that the natural history of canine VL (CVL) can manifest itself in a wide clinical spectrum, from asymptomatic to symptomatic form. In recent years it has been observed that asymptomatic and seronegative dogs can present positive PCR, and these animals are classified as AD-I. Interestingly these dogs have a profile of differential immune response compared to asymptomatic seropositive dogs (AD-II). In this context the search for biomarkers of clinical progression is essential for better understanding of the immunological mechanisms associated with a profile of resistance and/or susceptibility in CVL. In this study, 159 animals from an endemic area naturally infected by L. infantum, were divided into four groups according to their clinical forms and the results of serological and molecular diagnosis: (i) asymptomatic dogs seronegative/PCR+ for L. infantum (AD-I), (ii) asymptomatic dogs seropositive (AD-II), (iii) symptomatic dogs seropositive (SD) and (iv) control group (CD) dogs without clinical results with serologic and molecular negative. In addition to the haematological parameters, a detailed analysis of the cellular response by flow cytometry, ex vivo context was performed. T cells (CD5+, CD4+ and CD8+), B cells (CD21+) and monocytes (CD14+) circulating cell phenotypes were investigated. Additionally, in vitro studies were conducted employing biomarkers of resistance and susceptibility to CVL, intracytoplasmic related to production of IFN-γ and IL-4 by neutrophils, eosinophils and T lymphocytes (CD4+ and CD8+). Our results confirm that the progression of the disease induces anemia, characterized by the reduction of red blood cells, hemoglobin and hematocrit. In the white blood cells, we observed an increase in the population of rod neutrophils and reduction of eosinophils, monocytes and lymphocytes. The investigation of immune response, based on the immunophenotypic profile of mononuclear cells from peripheral blood (PBMC) showed a reduction in the absolute number of T lymphocytes CD5+, and their subsets (CD4+ and CD8+) and one drop of B lymphocytes CD21+ and CD14+ monocytes in positive animals (AD-II and SD). Neutrophils when stimulated with soluble antigen of L. infantum (SLA), increased synthesis of IFN-γ in AD-II and SD groups, and presents a decreased production of IL-4 in the AD-I group. In the AD-II and SD groups, subpopulations of T lymphocytes (CD4+ and CD8+) in control and culture stimulated in the with SLA also exhibited greater synthesis of IFN-γ+ and IL-4+. These results suggest that the animals of AD-II and SD groups exhibit a mixed immune profile (Type 1 and 2). In contrast, animals of AD-I group do not differ from the animals of CN group conferring this group a resistance profile, since no resistance fall occurs in any of the populations, and there is no activation of the Type 2 producing IL-4+ cells. The animals of AD-II and SD group mainly exhibit a immunosuppression, which affects both the compartment T and B, besides the decrease of circulating monocytes with the concomitant presence of IFN-γ+ and IL-4+ produced by neutrophils and lymphocytes T making them unable to control parasite replication.

Orientador: Agnaldo Lopes da Silva Filho / Coorientador: Andréa Teixeira de Carvalho / Banca: Paulo Traiman / Banca: Gilberto Uemira / Banca: Eduardo Batista Cândido / Banca: Ricardo dos Reis / Resumo: A alta prevalência do câncer de mama é um fator que nos instiga a investigar novos biomarcadores para a doença. Proteínas séricas ou plasmáticas já são utilizadas rotineiramente no rastreamento de algumas neoplasias. As micropartículas (MPs) são fragmentos da membrana plasmática liberadas por diversos tipos celulares e estão associadas com a resposta inflamatória. Estudos recentes mostram que a presença de MPs e citocinas/quimiocinas circulantes possuem uma relevante associação clínica com o câncer de mama. O objetivo deste estudo foi medir os níveis desses biomarcadores inflamatórios (MPs, citocinas e quimiocinas) no soro de mulheres com câncer de mama pré e pós-quimioterapia comparando com o grupo controle; assim como associar esses dados com diversos parâmetros clínicos e hemograma. Foi coletado sangue periférico de mulheres sem evidências de doenças (n=20) e com câncer de mama (n=38). Foi utilizada a citometria de fluxo para dosagens dos níveis séricos de citocinas (IL-1, IL-2, IL-4, IL-6 IL-10, IL-12, IL- 17A, TNF, IFN-gama), quimiocinas (CXCL-8, CXCL-9, CXCL-10, CCL-2, CCL-5) e micropartículas provenientes de diversas células (neutrófilos, leucócitos, monócitos, eritrócitos, endotélio, plaquetas, linfócitos). As diferenças entre os grupos foram avaliadas pelo teste de Mann-Whitney ou Kruskal- Walis. As diferenças com valor de p<0,05 foram consideradas significativas. Não houveram diferenças significativas nos níveis de micropartículas, citocinas e quimiocinas estudadas entre os grupos controle e câncer de mama. Entretanto houve uma diminuição dos níveis de micropartículas derivadas de plaquetas nas pacientes pós-quimioterapia e um aumento de níveis séricos de IL-6, CCL-5 e CXCL-10 pós-quimioterapia. Em associação com os dados clínicos foi demostrado que baixos níveis de micropartículas derivadas de monócitos e altos níveis de CCL-2 e CXCL10 estão associados a tumores mais ... / Abstract: Not available / Doutor

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:06:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000399977-Texto+Completo-0.pdf: 590001 bytes, checksum: 485a15e7428b697b28d0b0d2383db707 (MD5) Previous issue date: 2008 / Introduction: Rheumatoid arthritis (RA) in a classic example of chronic erosive arthropathy. RA is a potentially severe and incapacitanting disorder. Progression of disease is mostly variable among affected individuals. The cartilage oligomeric matrix protein/thrombospondin 5 (COMP/TSP-5) is considered as a potential prognostic biomarker of RA. Studies on the association of functional class of RA with serum levels of COMP/TSP-5 have not been available as yet. Objective: To evaluate the serum levels COMP/TSP-5 in RA patients stratified for functional class and in healthy controls. Patients and methods: The study was cross-sectional. Fifty-eight patients with RA followed in the Outpatient Rheumatology Clinic of São Lucas Hospital of PUCRS comprised the target population. The Hochberg classification was utilized to estimate the functional status of RA patients. The control group included 100 blood donors consecutively selected. Levels of COMP/TSP-5 were evaluated by immunoenzimatic assay (AnaMar Medical TM, Lund, Suécia). Levels above 12 U/I were considered positive. Testing for rheumatoid factor was carried out by nephelometry. Anti-CCP antibodies were detected by immunoenzymatic assay. Comparison of groups was obtained by analysis of variation. A 5% significance levels was considered for P values. Results: The medium age was 48±6 years for the control group and of 54±14 years for RA patients (P>0. 05). The female gender predominated in patients with RA (P<0. 05). After adjustment for sex and age, the average levels of COMP/TSP-5 were 7. 0 U/L (95%CI 6. 1- 7. 9) for the control group and of 12. 6 U/L (95%CI 11. 1-14. 1) for patients with RA (P<0. 01).Among RA patients, 25 showed functional class I (43. 1%), 14 functional class II (24. 13%), 10 functional class III (17. 2%), and 9 class functional IV (15. 5%). With the exception of individuals with class functional III, patients from the other functional status presented higher frequency of positive test for COMP/TSP-5 as compared to controls (P<0. 001). In each of the functional classes, the average levels of COMP/TSP-5 were significangly higher that those of the control group (P<0. 05). The 28 RA patients with elevated COMP/TSP-5 were distributed uniformly in all 4 functional classes (P=0. 65). Similarly, RA patients with a positive test for rheumatoid factor (P=0. 36) and anti-CCP antibodies (P=0. 45) distributed homogeneously among all functional classes. Conclusion: The levels of COMP/TSP-5 were significantly higher in RA patients than in controls. The average serum levels of the protein remained elevated as compared to controls in all 4 functional classes of RA patients. With the exception of class III, positivity for COMP/TSP-5 was more frequent in all other functional classes as compared to controls. Positive testing for COMP/TSP-5, rheumatoid factor, and anti-CCP antibodies occurred uniformly in all functional classes of disease. The presence of these biomarkers associated to variable levels of functional incapacity in RA patients. / Introdução: A artrite reumatóide (AR) é o exemplo clássico de artropatia crônica erosiva. É uma doença potencialmente severa e incapacitante. Seu curso e sua progressão são bastante variáveis. A proteína oligomérica da matriz cartilaginosa/trombospondina-5 (COMP/TSP-5) é considerada um potencial biomarcador de prognóstico na AR. Não há, entretanto, estudos detalhados acerca da associação entre grau funcional da AR e níveis séricos de COMP/TSP-5. Objetivo: Avaliar os níveis séricos de COMP/TSP-5 em pacientes com AR estratificados para grau funcional e em controles sadios. Pacientes e métodos: O estudo foi transversal controlado. Cinqüenta e oito pacientes com AR, em acompanhamento no Ambulatório de Reumatologia do Hospital São Lucas da PUCRS compuseram a população-alvo. A classificação de Hochberg foi utilizada para estimar grau funcional destes pacientes. O grupo-controle consistiu de 100 doadores de sangue consecutivamente selecionados. Os níveis de COMP/TSP-5 foram avaliados através imunoensaio enzimático (AnaMar Medical TM, Lund, Suécia). Níveis acima de 12 U/I foram considerados positivos. A testagem para fator reumatóide foi efetuada por nefelometria. Anticorpos anti-CCP foram detectados por imunoensaio enzimático. A comparação entre os grupos foi obtida por análise de variância. Um nível de significância de 5% foi considerado para valores P. Resultados: A média de idade foi de 48±6 anos para o grupo-controle e de 54±14 anos para pacientes com AR (P>0,05). O sexo feminino predominou no grupo de pacientes com AR (P<0,05). Após ajuste para sexo e idade, os níveis médios de COMP/TSP-5 foram de 7,0 U/L (IC95% 6,1-7,9) para o grupo-controle e de 12,6 U/L (IC95% 11,1-14,1) para o grupo de AR (P<0,01).Entre os pacientes com AR, 25 apresentaram grau funcional I (43,1%), 14 grau funcional II (24,13%), 10 grau funcional III (17,2%) e 9 grau funcional IV (15,5%). Com exceção de indivíduos de classe funcional III, pacientes de outras classes funcionais tiveram maior freqüência de níveis superiores de COMP/TSP-5 superiores a 12 U/L do que controles (P<0,001). Em cada uma das classes funcionais, os níveis médios de COMP/TSP-5 foram significantemente maiores do que os do grupo-controle (P<0,05). Os 28 pacientes reumatóides com COMP/TSP-5 elevada distribuíram-se uniformemente entre as 4 classes funcionais (P=0,365). De forma similar, pacientes com AR positivos para fator reumatóide (P=0,360) e para anticorpos anti-CCP (P=0,450) se distribuíram homogeneamente em todas as classes funcionais. Conclusões: Os níveis de COMP/TSP-5 foram significativamente maiores em pacientes com AR do que em controles. Os níveis médios de COMP/TSP-5 se mantiveram acima dos controles para todas as classes funcionais da doença. Com exceção da classe III, a positividade para COMP/TSP-5 foi mais freqüente em todas as outras classes funcionais, comparativamente a controles. A testagem positiva para COMP/TSP-5, fator reumatóide e anticorpos anti-CCP, ocorreu uniformemente em todas as classes funcionais da doença. A presença destes biomarcadores associou-se a variados graus de incapacidade funcional na AR.

Made available in DSpace on 2014-10-18T02:02:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000462079-Texto+Completo-0.pdf: 3544507 bytes, checksum: 8aa2241950201e3ad9aaa5bc2c51d167 (MD5) Previous issue date: 2014 / Background: The high prevalence of anti-inflammatory and analgesic drug use by the elderly has been widely discussed in the literature because polymedication increases the risk of adverse effects and iatrogenic and drug interactions. Anti-inflammatory and analgesic drugs are primarily used to treat pain in the elderly, who are subject to high rates of arthrosis, arthritis and rheumatism. The prescription of anti-inflammatories and analgesics in the elderly should be individualized because the pharmacokinetics and pharmacodynamics of these drugs are altered in the elderly, which can cause numerous adverse effects. However, many studies have indicated a possible antioxidant action of anti-inflammatory drugs. Some studies have suggested that anti-inflammatory drugs induce the generation of reactive oxygen species, while other studies have demonstrated that they also have antioxidant activity. Aims: We report the findings of a transversal study of the use of anti-inflammatory and analgesic drugs among a random sample of elderly patients at the Family Health Strategy (FHS) in Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brazil. Methods: This study is part of the “The multidimensional study of the elderly in the Family Health Strategy in Porto Alegre, Brazil (EMI-SUS)” conducted over the period of March 2011 to December 2012. Data collection was performed by community health workers at the subjects’ homes using a general questionnaire and included sociodemographic data, life conditions and habits, chronic diseases and drug use. For this study, the focus was on drugs classified as anti-inflammatory or analgesic drugs according to the Anatomical Therapeutic Chemical classification system recommended by the World Health Organization. Blood was subsequently collected by the project team at the healthcare unit where the elderly patients were registered. The plasma levels of oxidative and inflammatory markers such as insulin, homeostatic model assessment-insulin resistance (HOMA-IR), malondialdehyde (MDA), ferric reducing ability of plasma (FRAP), advanced oxidation protein products (AOPP), interleukin-6 (IL-6) and ultra-sensitivity C-reactive protein (PCR_US) were determined. Anthropometric data were measured, but only body mass index (BMI) was used in this study. Results: Among the 758 elderly patients included in this study, between 60 and 111 years old, with the prevalence of anti-inflammatory and analgesic drug use was 28. 8%. Paracetamol (67. 9%) and ibuprofen (31. 7%) were the most commonly used drugs. Women used antiinflammatory and analgesic drugs (P = 0. 022) more frequently than men. Self-rated health was related to the use of anti-inflammatory and analgesic drugs, i. e., the worse the reported health, the greater the use of these drugs (P < 0. 001). Of the conditions described by the elderly, hepatic disease (P = 0. 004) and arthrosis/arthritis/rheumatism were associated with the use of anti-inflammatory and analgesic drugs. In addition, we observed that the higher the usage of medicines in general, the greater the use of anti-inflammatory and analgesic drugs (P < 0. 001). Gastric problems reported by this elderly cohort may be associated with chronic or occasional use of NSAIDs (P = 0. 042). There was no statistically significant association between the use of NSAIDs and oxidative or inflammatory markers. Conclusion: This study demonstrates the moderate use of anti-inflammatory and analgesic drugs by elderly patients at the FHS in Porto Alegre. Although these medications are important for the management of pain and inflammation, they may interfere with the improvement of the quality of life of the elderly. Thus, anti-inflammatory and analgesic drugs should be prescribed very carefully and individually in the elderly. With regard to inflammatory and oxidative markers, it is important to emphasize that the physiological effects of NSAIDs on markers of inflammation and oxidative metabolism are poorly characterized and controversial. This is the first study to demonstrate a lack of association between NSAID use and plasma levels of oxidative, antioxidant and inflammatory markers or the HOMA-IR value. / Introdução: A alta prevalência de uso de anti-inflamatórios e analgésicos por idosos é amplamente discutida na literatura devido aos riscos de efeitos adversos, iatrogenias e interações medicamentosas, uma vez que a maioria dos idosos é polimedicada. A dor é um dos principais motivos de uso desses medicamentos, principalmente devido ao alto índice de artrose, artrite e reumatismo nessa população. A prescrição de anti-inflamatórios e analgésicos em idosos deve ser individualizada, pois a farmacocinética e a farmacodinâmica desses fármacos sofrem alterações no organismo idoso, podendo causar inúmeros efeitos adversos. Apesar de todos esses indicativos, muitos estudos vêm apontando uma possível ação antioxidante dos anti-inflamatórios. A literatura tem sugerido que os anti-inflamatórios induzem à geração de espécies reativas de oxigênio, contudo outros estudos demonstram que também podem desempenhar uma atividade antioxidante. Objetivo: Estudar o uso de anti-inflamatórios e analgésicos pelos idosos que frequentam a Estratégia Saúde da Família (ESF) de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil.Métodos: Estudo transversal coletado em uma amostra aleatória de idosos da ESF do município de Porto Alegre. Este estudo faz parte do “Estudo epidemiológico e clínico dos idosos atendidos pela Estratégia Saúde da Família do município de Porto Alegre (EMI-SUS)”, realizado durante o período de março de 2011 a dezembro de 2012. A coleta de dados foi realizada pelos Agentes Comunitários de Saúde, em visita domiciliar, por meio de questionário geral contendo dados sociodemográficos, condições de saúde, doenças crônicas e hábitos de vida dos idosos e uso de medicamentos. Para este estudo, foram incluídos os antiinflamatórios e analgésicos conforme o sistema de classificação Anatomical Therapeutic Chemical. Foram coletados dados antropométricos dos idosos e para este estudo foi utilizado o índice de massa corporal (IMC). A coleta de sangue foi realizada posteriormente pela equipe do projeto na unidade de saúde onde os idosos estavam cadastrados. Foram determinados os níveis plasmáticos de marcadores oxidativos e inflamatórios, tais como insulina, HOMA-IR (homeostatic model assessment-insulin resistance), malondialdeído (MDA), habilidade de redução férrica plasmática ou “poder antioxidante” (FRAP), produto avançado da oxidação proteica (AOPP), interleucina-6 (IL-6) e proteína c reativa ultrassensível (PCR-US).Resultados: Foram incluídos 758 idosos, com idade de 50 à 111 anos e a prevalência de uso de anti-inflamatórios e analgésicos foi de 28,8%. O paracetamol (67,9%) e o ibuprofeno (31,7%) foram os medicamentos mais utilizados. O sexo feminino utilizava com maior frequência anti-inflamatórios e analgésicos (P=0,022). Diante das variáveis de saúde, a autopercepção de saúde mostrou estar relacionada com o uso de anti-inflamatórios e analgésicos, sendo que, quanto pior a saúde relatada, maior o uso da terapêutica (P<0,001). Entre as patologias descritas pelos idosos, a doença hepática (P=0,004) e a artrose/artrite/reumatismo (P<0,001) mostraram estar associadas ao uso de anti-inflamatórios e analgésicos. Foi observado que, quanto maior o uso de medicamentos em geral, maior o uso de anti-inflamatórios e analgésicos (P<0,001). Quanto ao uso crônico de anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs), verificou-se associação com as doenças gastrintestinais relatadas pelos idosos (P=0,042). Quanto à associação dos AINEs com os marcadores oxidativos e inflamatórios, nada estatisticamente significativo foi encontrado. Conclusão: Os resultados deste estudo mostram a utilização moderada de anti-inflamatórios e analgésicos pelos idosos da ESF de Porto Alegre. Sabe-se da importância desses medicamentos para o manejo da dor e da inflamação, podendo interferir na melhoria da qualidade de vida do idoso. Porém, a prescrição de anti-inflamatórios e analgésicos deve ser feita com muita cautela e de forma individualizada nos idosos. Quanto aos marcadores inflamatórios e oxidativos, é importante ressaltar que os efeitos fisiológicos dos AINEs nos marcadores do metabolismo oxidativo e inflamatório ainda são escassos e controversos. Entretanto, este é o primeiro estudo que demonstrou a ausência de associação do uso de AINEs com níveis plasmáticos de marcadores inflamatórios e oxidativos, poder antioxidante e HOMA-IR.

Avaliou-se a influência da exposição ao flúor (F) através da água de beber, da velocidade de crescimento das unhas, da idade e do gênero na concentração deste elemento nas unhas das mãos e dos pés. Em adição, verificou-se a correlação entre as concentrações de F na saliva total, saliva do ducto da parótida e unhas das mãos e dos pés. Participaram do estudo 300 indivíduos, das faixas etárias de 3-7,14-20, 30-40 e 50-60 anos, residentes de cinco comunidades brasileiras, sendo duas no Estado de São Paulo (Pirajuí e Bauru, com água não fluoretada e 0,7 mgF/L na água de abastecimento, respectivamente) e três no Estado da Paraíba (Cajazeirinhas, Brejo dos Santos e Brejo das Freiras, com 0,2, 0,7 e 1,7 mgF/L na água de consumo, respectivamente). Foram coletadas duas ou três (apenas em Bauru) amostras de água de beber, além de duas amostras de: unhas dos pés, unhas das mãos, saliva total e saliva do ducto da parótida de cada indivíduo. O F nas amostras foi analisado com eletrodo íon-específico. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente através de análise de variância e regressão linear (p<0,05). A exposição ao F através da água de beber, a velocidade de crescimento das unhas, a idade e o gênero influenciaram a concentração de F nas unhas das mãos e dos pés, sendo que o fator de exposição ao F através da água foi o que exerceu maior influência pelo modelo de regressão linear adotado. As unhas dos pés (R2=0,46) se mostraram melhores indicadoras de exposição ao F do que as das mãos (R2=0,24). Foi encontrada uma correlação negativa significativa entre velocidade de crescimento das unhas e concentração de F nas mesmas. Houve correlação positiva significativa entre concentração de F nas unhas das mãos e dos pés com: saliva total (r=0,36 e r=0,41) e saliva do ducto da parótida (r=0,25 e r=0,53), respectivamente. Também se observou correlação positiva entre saliva total e do ducto da parótida (r=0,24), bem como entre concentração de F na água e saliva total (r=0,41) e saliva do ducto (r=0,65). Todos os fatores testados influenciaram os níveis de F nas unhas e, portanto, devem ser levados em consideração quando se utiliza este marcador biológico. / The influence of fluoride (F) concentration in the drinking water, nails growth rate, age and gender upon the F content in fingernail and toenail were evaluated. In addition, the correlations among the F concentrations in whole saliva, parotid ductal saliva and finger/toenails were verified. Three hundred volunteers of 3-7, 14-20, 30-40, 50-60 years participated. They were residents of five Brazilian communities, two in Sao Paulo State (Pirajuí and Bauru, non-fluoridated and 0.7 mgF/L artificially fluoridated drinking water, respectively) and three in Paraiba State (Cajazeirinhas, Brejo dos Santos and Brejo das Freiras, 0.2, 0.7 and 1.73 mgF/L naturally fluoridated drinking water, respectively). Two or three samples of drinking water, and two samples of fingernails, toenails, whole saliva and ductal saliva were collected from each volunteer, with one-week interval period between the collections. F in water, whole saliva, ductal saliva and nails was determined using the ion-sensitive electrode. Data were analyzed by ANOVA and linear regression (p<0.05). The F exposure from the drinking water, nails growth rate, age and gender influenced the levels of F in fingernails and toenails. Considering the model of multivariate linear regression adopted, F exposure from the water influenced the most. Toenails (R2=0.46) seemed to be better indicators of F than fingernails (R2=0.24). It was found a significant negative correlation between nails growth rate and their content of F. Positive correlations were found between F concentration in fingernails and toenails and: F concentration in whole saliva (r=0.36 and r=0.41) and in parotid ductal saliva (r=0.25 and r=0.53), respectively. Moreover, it was observed a positive correlation between whole and parotid saliva (r=0.24), as well as between F concentration in the drinking water and whole (r=0.41) and parotid saliva (r=0.65). All factors that influenced nails F concentration must be taken into account when using them as biological markers.

Orientadores: Elza Cotrim Soares, Maria Aparecida Mesquita / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T02:56:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wyszomirska_RozangelaMariadeAlmeidaFernandes_D.pdf: 7125375 bytes, checksum: 3ee76f7cc2429d7c6443f7b1d20a9199 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A fibrose hepática resulta de um desequilíbrio entre deposição e remoção de componentes da matriz extracelular, sendo sua degradação mediada por metaloproteinases, e estas são reguladas por inibidores fisiológicos (TIMPs). Alterações no baço de indivíduos portadores de esquistossomose mansoni poderiam contribuir para a acentuação da fibrose hepática bem como da ativação de TIMPs, não estando esses aspectos totalmente esclarecidos. O objetivo desse estudo foi avaliar o comportamento de marcadores séricos de fibrose hepática, o TIMP-l e o colágeno tipo IV em pacientes portadores da forma hepatoesplênica da Esquistossomose mansoni submetidos à esplenectomia. Foram incluídos 24 pacientes com idade que variou de 14 a 61 anos (36,92i:13,59 anos), sendo 17 do sexo masculino e sete do sexo feminino. Os níveis séricos de TIMP-I e colágeno IV foram determinados por método imunoenzimático sanduíche (EIA), no pré-operatório (PRÉ), e nos 2° (POl) e 600 (P02) dias após esplenectomia. Antes da esplenectomia, os níveis séricos do colágeno tipo IV e do TMP-I estavam elevados (175,04i:1l2,84ng/ml e 8I2,56i:861,31ng/ml, respectivamente). Após esplenectomia, a média dos valores de colágeno tipo IV revelou uma diminuição significante da média dos valores, em relação ao PO1 (113,98i:73,38ng/ml; p= 0,039) e em relação ao P02 {l09,53i:36.1ng/ml; p= 0,015). Níveis séricos de TIMP-I também mostraram uma significante diminuição em relação ao POI (245,08i:363,08ng/ml; p=0,008) e P02 (108,77i:1l2,05ng/ml; p= 0,001). Em adição, não foi encontrada diferença significante entre níveis séricos de PO 1 e P02, tanto para colágeno tipo IV (p= 0,061) como para TIMP-I (p= 0,145). Os nossos resultados mostram que após esplenectomia, ocorreu diminuição do TIMP-l e do colágeno tipo IV, que persistiu até o 60° dia. Estes resultados sugerem que o baço parece desempenhar um papel na regulação da fibrose hepática / Abstract: Hepatic fibrosis is a dynamic process that results in a net accumulation of extracellular matrix proteins and altered matrix degradation regulated by a family of enzymes called the matrix metalloproteinases and their inhibitors (TIMPs). The role of the spleen in the process of liver fibrosis in schistosomiasis still needs c1arification. The aim of this study was to assess the effect of splenectomy on serum levels of two markers of fibrosis, type IV collagen and TIMP-l, in patients with schistosomiasis mansom. Twenty-four patients with hepatosplenic schistosomiasis mansoni participated in the study. Type IV collagen and TIMP-l serum levels were measured preoperatively, and after two (POl) and 60 days (PO2) of spleen removal. Before splenectomy, both type IV collagen and TIMP-l serum levels were elevated (175,04j:112,84ng/ml e 812,56j:861,31ng/ml, respectively). After splenectomy, the levels of type IV collagen showed a significant decrease in relation to the preoperative values both in POl (113,98j:73,38ng/m1; p= 0,039) and PO2 (l09,53j:36.1ng/m1; p= 0,015). Serum levels ofTIMP-l also showed a significant decrease in relation to the preoperative values both in POl (245,08j:363,08ng/m1; p=0,008)and PO2 (l08,77j:112,05ng/ml; p= 0,001). There was no difference between POland PO2 values for each serum marker. In conc1usion, splenectomy in schistosomotic patients was associated to a decrease in serum markers of fibrosis levels, which persisted for at least 60 days. These results suggest that the spleen may play a role in the extracellular matrix production, and therefore may contribute to liver fibrosis in schistosomiasis mansoni / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientadores: Hiroshi Aoyama, Claudio Martín Jonsson / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T01:07:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dantzger_Miriam_M.pdf: 2456182 bytes, checksum: ce7e4445d55ff9a2572a6ad4f3dea90d (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Daphnia similis é um microcrustáceo da família dos cladóceros que se encontra amplamente distribuído em ambientes de água doce. Devido a sua natureza cosmopolita e sensibilidade, o seu uso em estudos de ecotoxicidade, como biomarcador, é recomendado em protocolos nacionais e internacionais. Agentes poluentes como os agrotóxicos, efluentes industriais e metais são diariamente despejados nos corpos d'água, influenciando sistemas locais e podendo causar efeitos toxicológicos aos organismos aquáticos. Tendo em vista a necessidade da normalização de biomarcadores enzimáticos, nossa proposta foi analisar a atividade enzimática de fosfatases de D. similis como uma alternativa.Especificamente, nossos objetivos foram: a) analisar o efeito de poluentes agrícolas e metais nas atividades in vitro de fosfatases ácidas e alcalinas de D. similis, com o intuito de selecionar a enzima mais sensível à ação dos poluentes; b) realizar estudos mais detalhados in vitro com a fosfatase mais sensível na presença de poluentes préselecionados; c) avaliar a atividade in vivo desta enzima perante concentrações subletais de poluentes provenientes de ensaios de toxicidade aguda. Dessa forma, foram analisados os efeitos in vitro de vários agentes poluentes (metais e pesticidas) nas atividades da fosfatase ácida total (FAT) e fosfatase alcalina. A FAT apresentou maior alteração em relação à fosfatase alcalina quando exposta aos poluentes in vitro, sendo que, dentre estes, os metais apresentaram efeitos mais significativos. Dos metais testados, Al3+, Se3+ e Mo6+, exibiram maior efeito inibitório, enquanto permetrina e Cd2+ apresentaram efeito ativador. A energia de ativação da reação catalisada pela FAT, usando-se p-nitrofenilfosfato (pNPP) como substrato, foi reduzida de 13 para 10 Kcal.mol-1 na presença de 0,5mM de Cd2+. Na reação catalisada pela FAT, os valores de IC50 (concentração do metal que promove 50% de inibição da atividade enzimática) obtidos para Al3+, Se3+ e Mo6+, foram, respectivamente: 1,23 mM, 0,54 mM e 0,9 µM. A inibição da FAT mostrou-se do tipo não competitiva para oAl3+ e do tipo competitiva para Se3+ e Mo6+, com os seguintes valores de constante de inibição (Ki): 0,9 mM para o Al3+; 0,62 mM para o Se3+ e 1,32 µM para o Mo6+. Nos ensaios in vivo de toxicidade aguda 48h com D. similis, a permetrina apresentou maior toxicidade comparada aos demais poluentes, sendo que a ordem de toxicidade, em mM, foi: Permetrina (0,000056) > Cd2+ (0,00139) > Se4+ (0,004) > Mo6+ (0,024) > Al3+(0,072). A ordem de inibição da atividade da FAT de D. similis exposta ao EC50 (48h) assemelhouse à obtida nos ensaios de toxicidade aguda (Cd2+ > permetrina > Al3+ > Mo6+), sugerindo uma relação entre alteração de atividade enzimática com a toxicidade dos poluentes ao modelo biológico em estudo. Nos ensaios de toxicidade aguda também foram estudados os efeitos da mistura binária dos metais Al3+, Cd2+, Mo6+ e Se4+. Observou-se que somente Al3+ + Cd2+ (S = 0,588) e Al3+ + Mo6+ (S = 0,951) apresentaram efeito sinérgico sobre D. similis, constatado pelo valor de S<1; nas mesmas condições, a mistura Al3+ + Se4+ não mostrou nenhuma alteração significativa. A ordem de inibição da atividade da FAT para a concentração de EC50 e seus respectivos percentuais foram: Al3+ + Cd2+ (90%) > Al3+ + Mo6+ (78%) > Se4+ + Cd2+ (72%) > Mo6+ + Cd2+ (32%). Contraditoriamente, a mistura Se4+ + Mo6+ promoveu uma ativação de 50% na atividade enzimática nos mesmos níveis de toxicidade analisados para as demais misturas. Esses resultados evidenciam a necessidade de complementar os testes de toxicidade aguda com mistura de poluentes a partir da utilização de biomarcadores enzimáticos, tais como a FAT. Concluiu-se que a FAT, através da alteração de sua atividade in vivo, pode ser utilizada como biomarcadora de toxicidade em nível letal (EC50), para os poluentes permetrina e Al3+ e, em níveis subletais, para Cd2+ e Se4+, podendo-se predizer o impacto ambiental / Abstract: Daphnia similis, a microcrustacean of the cladoceran's family, is widely found in freshwater environment. Because of its cosmopolitan nature and sensitivity, this organism is recommended by national and international protocols as a biomarker in ecotoxicity analyses. Agrochemicals, industrial effluents and metals are daily released in the rivers, impairing local living systems and causing toxicological effects on aquatic organisms. In order to contribute with enzymatic biomarkers normalization, our purpose was to evaluate D. similis phosphatases activities in the presence of several pollutants. Specifically, our aim was: a) to analyze in vitro effects of metals and agrochemicals on D. similis alkaline and acid phosphatases activities, in order to select the more pollutants-sensitive enzyme; b) to perform more detailed in vitro studies with those more sensitive enzyme and selected pollutants; c) to analyze the in vivo activity of this enzyme at sub-lethal levels of pollutants, derived from acute toxicity assays. In this way, in vitro effects of several pollutants (metals and pesticides) were evaluated on total acid phosphatase (TAP) and alkaline phosphatase activities. Our results showed that TAP presented higher alterations in relation to alkaline phosphatase when exposed to in vitro pollutants, from which the metals showed more remarkable effects. The metals Al3+, Se3+ and Mo6+ exhibited higher inhibitory effects, whereas permethrin and Cd2+ presented activator effects. The activation energy of the reaction catalyzed by TAP, by using p-nitrophenylphosphate as substrate, was decreased from 13 to 10 kcal.mol-1, in the presence of 0,5mM Cd2+. IC50 (concentration of metal that promotes 50% of enzyme inhibition) values for Al3+, Se3+ and Mo6+ were determined to be: 1.23 mM, 0.54 mM e 0.9 µM, respectively, in the TAP catalyzed reaction. The TAP inhibition was of non-competitive type for Al3+, and competitive for Se3+ and Mo6+, with inhibition constant (Ki) values ranging 0.9 mM, 0.62 mM and 1.32 µM, respectively. In the 48 hours acute toxicity assays with D. similis, permethrin presented higher effect in relation to the other pollutants, with the following toxicity order (mM): Permethrin (0.000056) > Cd2+ (0.00139) > Se4+ (0.004) > Mo6+ (0.024) > Al3+ (0.072). The inhibition order of D. similis TAP activity exposed to 48 hours EC50 was similar to the acute toxicity values (Cd2+ > permethrin > Al3+ > Mo6+), suggesting a relationship between enzymatic activity alteration and the pollutants toxicity. Further, we decided to evaluate the effects of binary metals mixtures of Al3+, Cd2+, Mo6+ and Se4+ on the acute toxicity assays, it was observed that only Al3+ + Cd2+ (S = 0.588) and Al3+ + Mo6+ (S = 0.951) exhibited synergic effects on D. similis, evidenced by the S<1 values; at the same conditions the mixture Al3+ + Se4+ did not show significant alterations. The TAP activity inhibition order for EC50 concentration and its respective percentuals were: Al3+ + Cd2+ (90%) > Al3+ + Mo6+ (78%) > Se4+ + Cd2+ (72%) > Mo6+ + Cd2+ (32%). On the other hand, the mixture Se4+ + Mo6+ presented 50% enzyme activation at the same toxicity levels analyzed for the other mixtures. These results emphasize the need to complement acute toxicity tests with pollutants mixtures, using enzymatic biomarkers, such as TAP. In conclusion, TAP, through the alteration of its in vivo activity, could be used as a lethal level toxicity biomarker for the permethrin and Al3+, and at sub-lethal levels for Cd2+ and Se4+, predicting possible environmental impact / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Wagner José Fávaro, Ubirajara Ferreira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T23:53:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SilvaJunior_MauricioMoreira_M.pdf: 2314249 bytes, checksum: be24263c754c5e69f527d328e09d006b (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Caracterização do Estroma Reativo na Progressão do Câncer de Próstata: Envolvimento dos Fatores de Crescimento, Metaloproteinases da Matriz, Receptores de Hormônios Sexuais e Células-Tronco Prostáticas RESUMO A contribuição do estroma para a progressão do câncer de próstata (CaP) ainda é pouco conhecida. As células neoplásicas podem alterar seu componente estromal adjacente para formar um ambiente que possibilita e suporta a progressão tumoral. A modificação desse estroma é denominado de estroma reativo (EstR), o qual ocorre em muitos tipos de cânceres humanos relacionando-se à progressão e recidiva tumorais. Os fatores de crescimento e as metaloproteinases da matriz (MMP) são altamente expressos no CaP e podem atuar como fatores de crescimento parácrinos e/ ou autócrinos. As relações entre os hormônios sexuais esteróides e seus receptores com os fatores de crescimento e MMPs são cruciais reguladores da homeostase prostática, sendo fundamental o entendimento dessas relações com o desenvolvimento do EstR e progressão do CaP. Além disso, a ocorrência das células-tronco prostáticas cancerosas representam um passo importante na patogênese glandular. Assim, os objetivos principais do presente estudo foram caracterizar morfológica e molecularmente o microambiente do EstR em amostras com CaP, bem como encontrar alguma associação dos fatores de crescimento, MMPs, receptores de hormônios sexuais esteróides e células-tronco cancerosas na sua patogênese. Além disso, verificou-se a relevância da reatividade estromal e de seus marcadores moleculares na progressão do CaP.O presente trabalho baseou-se em estudo retrospectivo, o qual utilizou 40 amostras prostáticas de pacientes, na faixa etária de 60 a 80 anos, com diagnóstico de CaP. Tais amostras foram divididas em 2 grupos (20 amostras por grupo): Grupo 1: amostras de CaP sem estroma reativo; Grupo 2: amostras de CaP com intensa reatividade estromal; e posteriormente submetidas à análises histopatológicas e imunohistoquímicas. Os resultados demonstraram que o EstR foi caracterizado morfologicamente pela significativa diminuição das fibras musculares lisas e pela abundante quantidade de fibras colágenas no estroma adjacente aos ácinos neoplásicos. Intensa reatividade estromal foi verificada nos tumores de graus intermediário (Gleason 7, 3+4) e alto (Gleason 7, 4+3). Com relação à caracterização molecular do EstR, os presentes resultados demonstraram imunorreatividades aumentadas para vimentina, IGF-1, MMP-2, FGF-2 e C-Myc nas amostras com intensa reatividade estromal quando comparadas às amostras sem reatividade estromal. As imunorreatividades para AR e ER'alfa' foram aumentadas nas amostras prostáticas com intensa reatividade estromal Em contraste, a imunorreatividade para o ER'beta' foi aumentada nas amostras sem reatividade estromal. Com relação à ocorrência das células-tronco prostáticas cancerosas, estas ocorreram com maior frequência no estroma com intensa reatividade estromal. Considerando os dados em conjunto, pode-se concluir que o EstR pode ser considerado um marcador preditivo o da progressão do CaP, uma vez que este foi mais frequente nos tumores de intermediário e alto graus. As imunorreatividades aumentadas para vimentina, IGF-1, MMP-2, FGF-2 e C-Myc foram fundamentais para a ativação do EstR e tornaram o microambiente prostático favorável à progressão do câncer, devido a potencialização do desequilíbrio da interação epitélio-estroma. As imunorreatividades aumentadas para AR e ER? demonstraram o envolvimento desses receptores tanto na sinalização para o aumento dos fatores de crescimento e metaloproteinases da matriz quanto nos mecanismos de ativação do EstR. Em contraste, a sinalização do ER? indicou papel inibitório desse receptor nos mecanismos de ativação do EstR e na progressão tumoral. Finalmente, a ocorrência de células-tronco prostáticas cancerosas indicou um possível envolvimento dessas células na sinalização para o desenvolvimento do EstR e progressão do CaP / Abstract: haracterization of Reactive Stroma in the Progression of Prostate Cancer: Involvement of Growth Factors, Matrix Metalloproteinases, Receptors, Sex Hormones and Prostatic Stem Cells ABSTRACT The contribution of the stroma to the progression of prostate cancer (CaP) cancer is still unknown. The cancer cells can alter their adjacent stromal component to form an environment that enables and supports tumor progression. A modification of this is called the stroma reactive stroma (EstR), which occurs in many types of human cancers relating to the progression and tumor recurrence. Growth factors and matrix metalloproteinasys (MMP) are highly expressed in CaP and can act as a paracrine and / or autocrine growth factors. The relationship between sex steroid hormones and their receptors with growth factors and MMPs are crucial regulators of prostatic homeostasis, a fundamental understanding of these relationships with the development and progression of Estr of CaP. Moreover, addition, the occurrence of prostate stem cells cancer represent an important step in the pathogenesis glandular. Thus, the main objectives of this study were to characterize the morphological and molecular microenvironment EstR in samples with CaP as well as find some association of growth factors, MMPs, sex steroid hormone receptors and cancer stem cells in its pathogenesis. Furthermore, we verified the relevance of stromal reactivity and its molecular markers in the progression of CaP. The present work was based on a retrospective study, which used 40 prostate samples from patients, aged 60-80 years, diagnosis of CaP. These samples were divided into 2 groups (20 samples per group): Group 1: CaP samples without reactive stroma; Group 2: CaP samples with intense stromal reactivity; and subsequently subjected to histopathological and immunohistochemical analyzes. The resulted showed that EstR was morphologically characterized by the significant reduction of smooth muscle fibers and the abundant amount of collagen fibers in the stroma adjacent to the neoplastic acini. Intense reactivity was observed in stromal tumors of intermediate grades (Gleason 7, 3 +4) and high (Gleason 7, 4 +3). With respect to the molecular characterization of EstR, our results showed increased vimentin immunoreactivity, IGF-1, MMP-2, FGF-2 and C-Myc in samples with intense stromal reactivity when compared to samples without stromal reactivity. The immunoreactivity for AR and ER'alfa' were elevated in prostatic stromal samples with intense reactivity In contrast, immunostaining for ER"beta' was increased in samples with no stromal reactivity. With regard to the occurrence of prostate cancer stem cells, they occurred more frequently in the stroma with intense stromal reactivity. Considering the data together, we can conclude that the EstR can be considered a predictive marker of the progression of CaP, since this was more common in tumors intermediate, and high grades. The immunoreactivity increased vimentin, IGF-1, MMP-2, FGF-2 and C-Myc were essential for the activation of rd and made a favorable microenvironment for prostate cancer progression due to the potentiating imbalance of epithelial-stromal interaction. The immunoreactivity increased to AR and ER? demonstrated the involvement of these receptors in signaling both to the increase of growth factors and matrix metalloproteinasys as the engine that activation EstR. In contrast, ER? showed inhibitory signaling role of this receptor in the mechanism of activation of the rd and in tumor progression. Finally, the occurrence of prostate cancer stem cells indicated a possible involvement of these cells in signaling for EstR development and progression of CaP / Mestrado / Fisiopatologia Cirúrgica / Mestre em Ciências

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T08:03:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FontesJardim_DenisLeonardo_D.pdf: 4065886 bytes, checksum: 09542135435393259e6847f6bad0b542 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Tradicionalmente, o modelo de desenvolvimento de drogas em onco-hematologia utiliza-se de estudos de fase I como a primeira etapa no desenvolvimento clínico de uma droga. Nesses estudos, procura-se estabelecer a dose recomendada de novos agentes e seu perfil de segurança inicial, sendo as toxicidades o principal desfecho a ser monitorado. Posteriormente, estudos de registro são conduzidos para a aprovação de novas medicações por agências regulatórias. A maioria das medicações foi historicamente desenvolvida para uma população não-selecionada de um subtipo tumoral. No entanto, recentemente, o conhecimento em onco-hematologia vem sofrendo profundas mudanças, principalmente com o advento de novas técnicas de biologia molecular que permitem um melhor conhecimento da biologia das neoplasias. Com isso, é crescente a percepção de que existem subpopulações de pacientes com alterações moleculares específicas que demandam estratégias direcionadas; também é crescente o número de novas drogas de alvo molecular em desenvolvimento. Nesse contexto, é pouco sabido se o modelo tradicional de desenvolvimento de drogas, historicamente utilizado para medicações citotóxicas e para populações não selecionadas, estaria adequado frente essas novas demandas. Neste projeto de doutorado, avaliamos a correlação dos resultados de dose e toxicidade dos estudos de fase I com desfechos semelhantes nos estudos futuros de registro de novas medicações aprovadas pelo Food and Drug Administration (FDA) em onco-hematologia, com ênfase na comparação entre drogas citotóxicas tradicionais e drogas de alvo molecular. Determinamos que em 73% das comparações os estudos de registro adotaram uma dose entre 80% e 100% daquela recomendada pelos estudos de fase I, sendo que para drogas de alvo molecular os estudos clínicos iniciais foram menos preditores da dose futuramente aprovada dos agentes. Setenta por cento das toxicidades clinicamente relevantes em estudos de registro foram ao menos citadas em estudos de fase I, havendo uma correlação positiva com um maior número de pacientes incluídos em estudos iniciais, até cerca de 60 pacientes. Apesar das diferenças entre as populações de um estudo de fase I e de registro, a análise mostrou que um dos objetivos dos estudos de fase I foi cumprido, que seria de garantir a segurança de pacientes através da determinação de dose. Também buscamos comparar a eficácia em termos de controle de neoplasias entre drogas desenvolvidas com o conceito de terapia personalizada em relação àquelas para uma população não selecionada. Através da metodologia de meta-análise, demonstramos que em estudos de registro randomizados utilizados pelo FDA, terapias consideradas personalizadas proporcionaram maiores chances de respostas antitumorais e prolongamento do tempo até progressão de doença. A análise de todos os estudos de registro (randomizados e não randomizados) também mostrou que a terapia personalizada foi um fator independente relacionado ao aumento de sobrevida global dos pacientes. Os resultados obtidos sugerem que, frente as recentes modificações no entendimento de neoplasias e desenvolvimento de drogas, o modelo tradicional de determinação de doses em estudos de fase I necessita de adaptações, principalmente para drogas de alvo molecular, e que a incorporação do conceito de terapia personalizada é benéfica e segura para pacientes / Abstract: Traditionally, phase I trials are the first step in the clinical development model of new drugs in hematology-oncology. Phase I trials aim to establish the recommended dose of new agents for further development and their initial safety profile. Toxicities are the main outcome in these studies. Subsequently, registration trials are conduct to be the basis for drug approval by regulatory agencies, including the Food and Drug Administration (FDA). The majority of new drugs were developed for an unselect histologic type of cancer. Nevertheless, new technologies led to advances in the comprehension of the molecular basis of cancers. There is a growing evidence suggesting that specific molecular subtypes of cancers need specific strategies to target their genetic drivers. Additionally, the availability of new targeted therapies is increasing. In this context, it is not known how the traditional drug development model originally developed for cytotoxic drugs and for an unselect cancer population would perform. In this PhD thesis, we compared dosing and toxicity information from phase I trials with registration trials that led to approval of new drugs for cancer treatment by the FDA, with special attention to the sub-analysis comparing targeted versus cytotoxic agents. In 73% of matched trials (phase I trial and the respective registration trial), the dose from the registration trial was within 20% of the dose recommended by the phase I. In a multivariable analysis, phase I trials of targeted agents were less predictive of the final approved dose when compared to cytotoxic agents. Of the 530 clinically relevant toxicities in later trials, 70% were described in the respective phase I. A significant relationship between increasing the number of patients in phase I (up to 60) and the ability to describe future clinically relevant toxicities was observed. Despite several differences in design and cancer population when compared to registration trials, phase I trials were able to assure safety of patients based on its dose recommendation, which is one of the major objectives of these trials. We also compared efficacy outcomes between anticancer drugs developed under a personalized strategy (biomarker-driven treatment) with drugs developed for an unselected population. In randomized registration trials (using a random-effects meta-analysis model), personalized therapy arms were associated with a higher relative response rate ratio (compared to their corresponding control arms), prolongation of progression-free survival (PFS) and trend towards longer overall survival (OS) in comparison to non-personalized trials. Analysis of experimental arms in all registration trials (randomized and non-randomized) demonstrated that personalized therapy was an independent predictor of better response rates, PFS and OS. Treatment-related mortality rate was similar for personalized and non-personalized trials. Our results suggests that the traditional dose determination model from phase I trials needs further adaptations, especially for new molecularly targeted therapies. In addition, a personalized therapy approach for development of new agents was safe and associated with improved efficacy outcomes. We believe that our results will help to implement strategies for the development of new agents for the treatment of hematologic and solid cancers / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Adriana Franco Paes Leme / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-21T23:53:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Flores_IsadoraLuana_M.pdf: 6195465 bytes, checksum: 1730d0ae0783d2ec60f422de2cb20fa1 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O carcinoma espinocelular oral (CEC oral) é a neoplasia maligna de cabeça e pescoço mais frequente e com grande morbidade. As melhorias nos protocolos terapêuticos não têm sido associadas com a melhora no prognóstico dos pacientes nas últimas décadas. Além disso, a taxa de descoberta de biomarcadores com utilização clínica de rotina ainda é um desafio para a grande maioria dos cânceres, inclusive para o CEC oral. Neste cenário, a associação da microdissecção a laser (ML) a espectrometria de massas (MS) tem sido considerada uma abordagem com alta robustez na descoberta de biomarcadores para o câncer. Diante disso, o objetivo deste estudo foi identificar potenciais biomarcadores para o CEC oral através da associação da ML a MS além de buscar possíveis mecanismos biológicos associados aos principais biomarcadores identificados com auxílio de ferramentas de bioinformática. Para isso, 10 pares de amostras teciduais frescas de CEC oral e mucosa oral normal foram obtidos para isolamento por ML para análise por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas em tandem (LC-MS/MS) seguida por análises de bioinformática. Foram identificadas 2529 proteínas e entre essas, 107 proteínas apresentaram maior expressão nas amostras de CEC oral comparadas com a mucosa oral normal (teste t Student não-pareado, p<0,05 e razão >1,5). Os dados também foram submetidos às análises multivariadas pelos modelos Partial Least Squares Discriminant Analysis (PLS-DA) e Support Vector Machine (SVM) que indicaram, respectivamente, um painel de 40 e 70 potenciais biomarcadores. No geral, as análises pelo Ingenuity, KEGG (banco de dados Enciclopédia Kyoto para genes e genomas) e Gene Ontology mostraram que os processos mais significantes foram relacionados à sinalização célula-célula, a replicação do DNA, a recombinação e ao reparo, a adesão focal, a regulação do citoesqueleto de actina e a interação do receptor da matriz extracelular, entre outras. O fator eucariótico de elongação delta 1 (EEF1D) foi à proteína indicada para validação por ter apresentado reprodutibilidade de expressão entre as amostras de CEC oral, alta significância estatística segundo o teste t Student, expressão aumentada em CEC oral, por ter sido indicada como um marcador de classe na análise por PLS-DA e porque a sua função biológica ainda não foi investigada para esta neoplasia. Os resultados dos ensaios de validação confirmaram uma maior expressão de EEF1D por western blot utilizando-se células SCC-9 e tecido tumoral originado de modelo ortotópico. Além disso, uma intensidade de marcação maior para EEF1D foi observada em CEC oral pela validação por imuno-histoquímica (IHQ). Portanto, esse estudo combinou técnicas de ML, MS e bioinformática para a identificação de potenciais biomarcadores sendo que a proteína EEF1D foi considerada um potencial biomarcador para o CEC oral e validada por WB e IHQ podendo futuramente ser indicada também para validação em estudos translacionais / Abstract: The oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a malignant head and neck with more frequency of occurrence and with greater morbidity. Improvements in treatment protocols have not been associated with improved prognosis of patients in recent decades. Furthermore, the rate of discovery of biomarkers with clinical routine use is still a challenge for the large majority of cancers, including OSCC. In this scenario, the combination of laser microdissection (LM) and mass spectrometry (MS) has been considered an approach with high robustness to biomarker discovery for cancer. Thus, the aim of this study was to identify potential biomarkers for OSCC through the association of the LM, MS and bioinformatics aiming at exploring biological mechanisms associated with major candidate biomarkers identified. For this, 10 pairs of fresh tissue samples of OSCC and normal oral mucosa were obtained for isolation by LM for analysis by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) and bioinformatics analysis. 2529 proteins were identified and among these, 107 proteins have higher expression in oral SCC samples compared with normal oral mucosa (unpaired Student's t test, p <0.05 and ratio >1.5). The data were also submitted to multivariate models by Partial Least Squares Discriminant Analysis (PLS-DA) and Support Vector Machine (SVM) that, respectively, indicated a panel of 40 and 70 potential biomarkers. Overall, the Ingenuity analysis, KEGG (Kyoto Encyclopedia database for genes and genomes) and Gene Ontology showed that the most significant processes were related to cell-cell signaling, DNA replication, recombination and repair, adhesion focal, regulation of acting cytoskeleton and the interaction of the receptor extracellular matrix. The eukaryotic elongation factor 1 delta (EEF1D) was the protein indicated to validation because presented reproducibility of expression between OSCC samples, high statistical significance according to the Student t test, increased expression in OSCC, having been appointed as a class marker analysis for PLS-DA and because its biological function has not yet been investigated for this cancer. The higher expression of EEF1D was confirmed by western blot using proteins extracted from SCC-9 cells and tumor tissue originated from orthotropic model. Moreover, a higher marking intensity was observed in EEF1D for OSCC for validation by immunohistochemistry (IHC). Therefore, this study combined techniques ML, MS, and bioinformatics to identify potential biomarkers and EEF1D was the protein identified as a potential biomarker for OSCC and validated by WB and IHC and may also be indicated for validation in future translational studies / Mestrado / Estomatologia / Mestra em Estomatopatologia