Orientador: Jose Pedrazzoli Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T03:40:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Morita_MilenaRodrigues_M.pdf: 4296553 bytes, checksum: 165726f88ad105c8817c9cc33149c67a (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Objetivo: Desenvolver e validar um método analítico para quantificação de levocetirizina em plasma humano. Além disso, a biodisponibilidade relativa de uma formulação contendo 5 mg de dicloridrato de levocetirizina (formulação teste e formulação referência produzida por Farmalab Indústrias Químicas e Farmacêuticas Ltda.) foi avaliada em trinta e seis voluntários sadios de ambos os sexos. Método: O plano de estudo utilizado foi aberto, randomizado, cruzado com um intervalo de washout de 7 dias. As amostras de plasma foram obtidas por um período de 48 horas. As concentrações plasmáticas de levocetirizina foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas (HPLC-MS/MS), com modo de ionização electrospray positivo usando um monitoramento de reação simples (SRM). O método analítico foi validado considerando os seguintes parâmetros: especificidade, linearidade, precisão, exatidão, recuperação e estabilidades de acordo com a RE n°899/03 (ANVISA). Das curvas de concentração plasmática versus o tempo para levocetirizina, os seguintes parâmetros farmacocinéticos foram obtidos: ASC0-48h, ASC0-inf e Cmax. Resultados: A curva de calibração foi linear de 0,5 a 500,0 ng/mL. O método obteve uma corrida cromatográfica de 2,0 minutos usando uma coluna POLARIS C18 (3 µm, 50 mm x 2,0 mm). A precisão inter-corrida dos controles de qualidade foi 4,76% (CQB 1,5 ng/mL), 7,14% (CQM 200,0 ng/mL) e 3,78% (CQA 400,0 ng/mL). A exatidão inter-corrida dos controles de qualidade acima mencionados foi de 98,00%, 99.63% e 97,84%, respectivamente. A razão das médias geométricas dos dois medicamentos (teste e referência) e o intervalo de confiança (IC) foram respectivamente: 101,11% (90% IC= 97,42% - 104,93%) para ASC0-48h, 101,17% (90% IC= 97,49% - 104,99%) para ASC0-inf, 99,43% (90% IC= 94,29% - 104,86%) para Cmax. Conclusão: O método analítico mostrou-se preciso, exato e rápido para quantificação de levocetirizina em plasma humano. Desde que os IC 90% para ASC0-48h, ASC0-inf e Cmax apresentaram-se dentro do intervalo de 80-125% proposto pela ANVISA, foi concluído que a formulação teste Levocetirizina 5 mg é bioequivalente a formulação Zyxem® fabricada pelo laboratório Farmalab Indústrias Químicas e Farmacêuticas Ltda. / Abstract: Objective: To develop and validate an analytical method for levocetirizina quantification in human plasma. Moreover, it was evaluated the relative bioavailability of a levocetirizine dichloridrate 5 mg tablet formulation (test formulation vs reference formulation from Farmalab Ltda.) in 36 healthy volunteers of both sexes. Methods: The study was conducted using an open, randomized, two-period crossover design with 7 days washout period between doses. Plasma samples were obtained over a 48 h period. Plasma levocetirizine concentrations were analyzed by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) with positive ion electrospray ionization using single reaction monitoring (SRM). The analytical method was validated considering specificity, linearity, precision, accuracy, recovery and stabilities parameters according to RE n°899/03 (ANVISA). From the levocetirizine plasma concentration vs time curves, the following pharmacokinetic parameters were obtained: AUC0-48h, AUC0-inf e Cmax. Results: The calibration curve was linear over de range from 0,5 to 500,0 ng/mL. The method chromatographic run was 2,0 minutes using a POLARIS C18 column (3 µm, 50 mm x 2,0 mm). The between-run precision of quality controls was 4,76% (CQB 1,5 ng/mL), 7,14% (CQM 200,0 ng/mL) e 3,78% (CQA 400,0 ng/mL). The between-run accuracy for the above mentioned quality controls was 98,00%, 99.63% e 97,84% respectively.The limit of quantification was 0.5 ng/mL. The geometric mean ratio of both formulations (test and reference) and respective 90% confidence interval (CI) were: 101,11% (90% CI= 97,42% - 104,93%) for AUC0-48h, 101,17% (90% CI= 97,49% - 104,99%) for AUC0-inf, 99,43% (90% CI= 94,29% - 104,86%) for Cmax. Conclusion: The analytical method has proven to be precise, accurate and fast to levocetirizina quantification in human plasma. Since the 90% CI for AUC0-48h, AUC0-inf and Cmax ratios were within the 80-125% interval proposed by the ANVISA, it was concluded that levocetirizine formulation elaborated by Eurofarma Laboratórios Ltda. is bioquivalent to Zyxem® formulation. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Ronilson Agnaldo Moreno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T08:52:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mazuqueli_AnaCristina_M.pdf: 7140095 bytes, checksum: c193ad443d7fe35cf3c6d7b25f3175e8 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a bioequivalência de duas formulações de acetato de ciproterona e etinilestradiol em drágea vs comprimido (Selene® comprimidos, Laboratório Eurofarma Ltda., formulação Teste e Diane® 35, Schering do Brasil, como Referência) após administração oral em 48 voluntárias adultas sadias. O estudo foi do tipo aberto, randomizado com duas fases, em que as voluntárias receberam uma dose única de acetato de ciproterona 2mg e etinilestradiol 0,035mg . As amostras de plasma foram obtidas em um período total de 240h. As concentrações plasmáticas de acetato de ciproterona e etinilestradiol foram analisadas por um método baseado na cromatografia líquida acoplada ao espectrômetro de massa usando como fonte de ionização photospray ( LC-MS/MS ) utilizando finasterida como padrão interno do acetato de ciproterona e 17-a-etinilestradiol-D4 como padrão interno do etinilestradiol. A concentração plasmática do acetato de ciproterona não teve diferença significante após a administração de ambas as formulações (formulação teste e referência do Diane®35). A média geométrica da razão entre o medicamento teste e referência com 90% IC, foi 90,66% (84,39% - 97,40% ) para Cmax, 96,20% (90,45% - 102,33%) para ASC0-240 e 95,86% (89,81% - 102,31%) para ASC0-inf. Já para o Etinilestradiol a média geométrica da razão entre o medicamento teste e referência com 90% IC, foi de 109,92% (IC 90% = 102,67% - 117,69% ) para Cmax, 90,63% (83,75% - 98,08%) para ASC0-120 e 83,85% (69,98% - 100,47%) para ASC0-inf. Diante dos resultados encontrados de Cmax e ASC0-t e estando dentro do intervalo de confiança entre 80% e 125% proposto pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) e pelo Food and Drug Administration (FDA), conclui-se que o Acetato de Ciproterona 2mg e o Etinilestradiol 0.035mg da Eurofarma Laboratórios Ltda. em comprimido é bioequivalente ao Diane®35 da Schering do Brasil, de acordo com sua taxa e extensão de absorção. / Abstract: The aim of this study was to assess the bioequivalence of two cyproterone acetate + ethinylestradiol tablet formulations (Selene® tablet formulation elaborated by Eurofarma Laboratórios Ltda., Brazil, as test formulation, and Diane ® 35 tablet formulation by Schering of Brazil, as reference formulation) after their oral administration to 48 healthy adult females. The study was conducted using an open, randomized two-period crossover design, in which twenty-four healthy volunteers received a single oral dose of cyproterone acetate + ethinylestradiol (2mg + 0.035mg) tablet. Plasma samples were obtained over a 240-hour period. Plasma cyproterone acetate + ethinylestradiol concentrations were analyzed by a method based on liquid chromatography by positive-ion photospray ionization (LC-MS/MS), using finasteride as internal standard of cyproterone acetate and 17-a-ethinyl estradiol-D4 as internal ethinylestradiol standard. The plasma concentration of CYP acetate did not differ significantly after the administration of both formulations (test formulation and the reference Diane®), according to the geometric mean ratio between the test and reference formulations, with 90% CI: 90.66% (84.39% - 97.40% ) for Cmax, 96.20% (90.45% - 102.33%) for ASC0-240 and 95.86% (89.81% - 102.31%) for ASC0-inf. Conversely, the geometric mean ratio between the test and reference formulations for ethinylestradiol, with 90% CI, was 109.92% (CI 90% = 102.67% - 117.69% ) for Cmax, 90.63% (83.75% - 98.08%) for ASC0-120 and 83.85% (69.98% - 100.47%) for ASC0-inf. Considering the results of Cmax and ASC0-t within the confidence interval between 80% and 125% proposed by the Brazilian National Agency for Sanitary Surveillance (ANVISA) and for the US Food and Drug Administration (FDA), it was concluded that the cyproterone acetate 2mg and ethinylestradiol 0.035mg by Eurofarma Laboratórios Ltda. in tablet is bioequivalent to the Diane®35 by Schering of Brazil, according to its absorption and extension rate. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Fábio César Gozzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-25T06:35:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_TatianiBrenellide_M.pdf: 10987476 bytes, checksum: 5ef2abf84b79afba4ad901cc1e46c719 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A espectrometria de massas (MS) tem sido bastante utilizada em analises de amostras biológicas, tornando uma ferramenta indispensável para pesquisas na área de proteômica. A ligação cruzada é um processo de união covalente entre dois átomos espacialmente próximas. A ligação cruzada acoplada a MS permite estudos estruturais de proteínas baseado nas restrições de distância determinadas pelos espécies inter- intra-moleculares ligadas entre as cadeias laterais de resíduos de aminoácidos. Essa técnica vem sendo bastante utilizada na análise de interação entre proteínas, entretanto, um aspecto pouco explorado é a analise estrutural de proteínas. O objetivo desse trabalho foi determinar as estruturas terciárias e quaternárias de proteínas de chaperonas moleculares de cana-de-açúcar ou proteínas de choque térmico (do inglês, sugarcane heat shock protein, SHsp) utilizando a técnica de ligação cruzada acoplada com MS e modelagem molecular. As restrições de distâncias obtidas pela ligação cruzada e o gráfico de Ramanchandran foram utilizados para validar as estruturas tridimensionais da SHsp70 e SHsp90 obtidas por modelagem por homologia. Informações adicionais de dinâmica e flexibilidade da SHsp90 foi obtida pela técnica de troca hidrogênio/deutério. As chaperonas moleculares são proteínas importantes presentes em células para evitar o enovelamento incorreto de outras proteínas e suas agregações. Em plantas, fatores que corroboram com a tolerância ao estresse ainda são pouco compreendidos, mas provavelmente as chaperonas moleculares desempenha um papel importante no controle aos danos desse organismo. Desse modo, caracterizar estruturas de Hsp de cana de açúcar é uma informação essencial para a compreensão do mecanismo deste acompanhante de ação. Os estudos estruturais baseados em ligação cruzada acoplada a MS e modelagem por homologia permitiu propor um modelo estrutural para SHsp90 e SHsp70 / Abstract: Mass spectrometry (MS) has been extensively used to analyze biological samples and has advanced as an indispensable tool for proteomics research. Cross-linking is the process of chemically joining two spatially close atoms by covalent bond. The chemical cross-linking coupled to MS allows structural studies of protein based on distance constrains determined by inter- and intra-molecular cross-link between side chains of amino acids residues. This technique has been normally used to analyze protein-protein interaction but is mostly unexplored for structural analysis of proteins. The aim of this work was to investigate tertiary and quaternary structure of sugarcane molecular chaperone or heat shock protein (SHsp) using chemical cross-linking coupled to MS and homology modeling. The distance constrains obtained by chemical crosslinking and Ramachandran plot were used to validate tridimensional structures of SHsp70 and SHsp90 that was predicted by homology modeling. Additional information about flexibility and dynamics of SHsp90 was obtained using hydrogen/deuterium exchange (HDX) coupled to MS. The molecular chaperones are important proteins present in cell that helps prevent incorrect folding of proteins and their aggregation. The stress tolerance in plants is still poorly understood, but heat shock proteins likely play a large role in the plant damage control machinery. Thereby, characterizing Sugarcane Hsp structures is essential information toward the understanding of this chaperone¿s mechanism of action. The structural study of molecular chaperones by chemical cross-linking coupled to MS and homology modelling allowed the generation of a structural model for SHsp90 and SHsp70 / Mestrado / Quimica Organica / Mestra em Química

Orientador: Rodrigo Ramos Catharino / Texto em português e inglês / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T05:33:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_LiviaRiberti_M.pdf: 1203619 bytes, checksum: a17baf81fa013532bd6c9d451b2336f2 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Atualmente, as doenças cardiovasculares constituem uma das primeiras causas de mortes no Brasil e no mundo. Neste cenário, as estatinas constituem uma notável classe de medicamentos redutores de colesterol e têm sido associadas com uma expressiva diminuição da morbidade e mortalidade cardiovascular para pacientes em prevenção primária ou secundária da doença coronariana. Elas agem inibindo competitivamente a enzima HMG-CoA redutase, através da afinidade destes fármacos pelo sítio ativo da enzima. Esta enzima é responsável por catalisar a conversão do substrato HMG-CoA em mevalonato, um dos precursores do colesterol. A crescente necessidade e busca por medicamentos cada vez mais efetivos traz a preocupação na segurança destes produtos para seus usuários. Neste sentido, o conhecimento das impurezas e produtos de degradação torna-se necessário para garantir sua qualidade. Uma técnica muito utilizada para análises de impurezas e degradantes é a espectrometria de massas, pois é uma técnica sensível e seletiva e permite elucidar as estruturas químicas presentes na formulação do medicamento. Sendo assim, amostras de Atorvastatina cálcica foram analisadas pela técnica de espectrometria de massas por imagem (MALDI-MSI), permitindo a quantificação de impurezas do medicamento através da imagem da distribuição dessa impureza no comprimido. Dessa forma, é possível minimizar o preparo de amostra e obter um melhor conhecimento da formulação / Abstract: Currently, cardiovascular diseases constitute one of the first causes of deaths in Brazil and in the world. In this scenario, the statins are a notable class of medicines and cholesterol reducers have been associated with a significant reduction in cardiovascular morbidity and mortality for patients in primary or secondary prevention of coronary heart disease. They act by inhibiting competitively the enzyme HMG-CoA reductase, through the affinity of these drugs by the active site of the enzyme. This enzyme is responsible for catalyzing the conversion of HMG-CoA to mevalonate substrate, one of the precursors of cholesterol. The growing need and search for increasingly effective drugs brings the concern on the safety of these drugs for their users. In this sense, the knowledge of the impurities and degradation products becomes necessary to ensure their quality. A widely used technique for analysis of impurities and degrading is mass spectrometry, because it is a sensitive and selective technique and allows elucidating the chemical structures of the present formulation of the medicinal product. Thus, samples of Atorvastatin calcium were analyzed by the technique of mass spectrometry imaging (MALDI-MSI), which allows the quantification of impurities from the medicine through the image of the distribution of impurity in the tablet. That way, it is possible minimize sample preparation and get a better understanding of the formulation / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestra em Ciências Médicas

Orientador: Rodrigo Ramos Catharino / Texto em português e inglês / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T16:32:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Damario_Natalia_M.pdf: 490227 bytes, checksum: 825e09295040a1c513eea757bb6936f0 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O alto consumo global de queijos e a flutuação de disponibilidade e preço destes produtos lácteos os tornam alvos de fraudes. Uma das mais comuns é a adulteração de leites de alto valor agregado, como os de cabra e ovelha, com o então menos valioso leite de vaca, posteriormente vendido como matéria-prima para a indústria de queijo. Esta prática cria a necessidade de técnicas sensíveis para avaliar a autenticidade de queijos, incentivando o desenvolvimento e melhoria de métodos analíticos. Neste caminho, nós trazemos esta abordagem empregando a Direct Imprinting in Glass Surface Mass Spectrometry (DIGS-MS) para análise qualitativa de queijo em um instrumento MALDI. Esse método inclui uma preparação de amostra simples e eficaz além de rápida aquisição e interpretação de dados. A abordagem comprovou identificar prontamente lipídios de massas grandes em diferentes tipos de queijo, que podem ser associados a marcadores de qualidade. Também representa um potencial para controlar não só o produto final, mas também etapas produtivas, através da integração de dados estatísticos e analíticos, resultando em uma combinação poderosa para a discriminação de amostras com base no perfil lipídico. A ausência do efeito de matriz em toda cadeia analítica garante maior limpeza de sinal de espectros de massa e simplifica o processo / Abstract: High global consumption of cheeses and their availability and price fluctuations make these foodstuffs targets for frauds. One of the most common is the adulteration of highly priced milk (goat and sheep) with less valuable cow milk, which is sold as raw material for cheese industry. This creates the need for sensitive techniques to assess cheese authenticity by encouraging the development and improvement of analytical methods. In this path, we bring this approach employing Direct Imprinting in Glass Surface Mass Spectrometry (DIGS-MS) for qualitative cheese analysis in a MALDI instrument. This method includes simple and effective sample preparation and fast data acquisition and interpretation. It has proven to readily identify higher mass lipids in different types of cheese, which can be associated as quality markers. This can also represent potential to control not only the final product, but also productive stages, by integrating analytical and statistical data, resulting in a powerful combination for sample discrimination based on lipid profiles. The absence of matrix effect in the whole analytical chain ensures greater signal cleanliness of mass spectra and simplifies the process / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestra em Ciências Médicas

Orientador: Rodrigo Ramos Catharino / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T23:10:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_MonicaSiqueira_D.pdf: 2752694 bytes, checksum: 8012f1d5668a55e8fba463c5f394c113 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Com a grande incidência de resistência ao único fármaco utilizado no tratamento de esquistossomose, Praziquantel (PZQ), e relatos de diferentes níveis de virulência do parasita, o controle da doença tem se tornado cada vez mais difícil. Além disso, o método de diagnóstico convencional demanda tempo e grande preparo amostral. Num cenário clínico, quanto mais rápido o diagnóstico, maiores as chances de sucesso no tratamento da doença. Tendo em vista esse escopo, apresentamos uma nova plataforma "ômica" - a Parasitômica, que propõe o uso de metodologias simplificadas e de grande eficácia em termos de preparo de amostra e facilidade na aquisição de dados voltados a área de parasitologia, englobando diagnóstico, tratamento e elucidação de vias e mecanismos de ação. Amostras de diferentes cepas de Schistosoma mansoni, bem como diferentes estágios e tratamento com PZQ, foram analisadas através da técnica de espectrometria de massas por imagem (MALDI-MSI) e por alta resolução (ESI-HR-FTMS), pela integração de dados tanto analíticos quanto estatísticos. É possível a caracterização e diferenciação química de cada sexo e cepa do S. mansoni, bem como a visualização das alterações na composição molecular de vermes submetidos ao tratamento com PZQ. Tais resultados poderão ser úteis como potenciais alvos de novos fármacos. Nossos resultados também demonstram uma possível forma de futuro diagnóstico da esquistossomose pela análise da urina utilizando a parasitômica / Abstract: With the large incidence of resistance to the only drug used to schistosomiasis treatment, Praziquantel (PZQ), and reports of different levels of parasite virulence, disease control has become increasingly difficult. Furthermore, the conventional diagnosis method is time consuming and requires extensive sample preparation. In a clinical setting, the sooner the diagnosis is, the greater are the chances of successful disease treatment. Within this scope, we present a new "omic" platform ¿ Parasitomics, which proposes the use of simple and effective methods in terms of sample preparation and readiness of data acquisition focused on parasitology, including diagnosis, treatment and elucidation of pathways and mechanisms of action. Samples with different strains of Schistosoma mansoni, as well as different stages of life cycle and treatment with PZQ, were analyzed by mass spectrometry imaging (MALDI-MSI) and by high-resolution technology (ESI-HR-FTMS), through the integration of analytical and statistical data. Results have enabled the characterization and chemical differentiation of each sex and strain of S. mansoni, as well as the visualization of molecular composition changes in worms¿ body submitted to PZQ treatment. These results could be helpful on unraveling potential targets for new drugs. Our results also demonstrated a possible form of future schistosomiasis diagnosis by urine analysis using the parasitomics platform / Doutorado / Fisiopatologia Médica / Doutora em Ciências

Orientador: Gilberto De Nucci / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T05:49:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moraes_FernandaCustodio_M.pdf: 2535372 bytes, checksum: 8c0543a6d03f7d2069375240a51187f3 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Um método simples, seletivo e sensível de cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massa em tandem (CLAE-EM/EM) foi desenvolvido para a determinação de dapaconazol (BL-125) em plasma humano usando tioconazol como padrão interno. As drogas foram extraídas a partir do plasma por uma extração líquido-líquido com éter/hexano (80/20, v/v). A cromatografia foi realizada em uma coluna analítica Genesis C18 partícula 4 ?m (100x2.1mm i.d) com uma fase móvel de metanol/acetonitrila/água (80/10/10,v/v/v) e acetato de amônia (0.5 mM). O dapaconazol foi quantificado usando um espectrômetro de massa com uma fonte de electrospray no modo positivo (ES+) configurado para o modo de monitoramento de múltiplas reações (MRM) para monitorar as transições 415.1 > 159.2 e 387.0 > 131.0 para o dapaconazol e tioconazol, respectivamente. O método teve tempo total de corrida de 3.8 min e uma curva de calibração linear no intervalo de 0.2-100 ng/mL (r = 0.9998). O limite inferior de quantificação (LIQ) foi de 0.2 ng/mL. Os valores de precisão e exatidão do ensaio estavam dentro de ± 10%. Os testes de estabilidade não indicaram nenhuma degradação significativa em condições do experimento. Este método foi usado posteriormente para um estudo de fase I de administração tópica de tosilato de dapaconazol em voluntários humanos saudáveis do sexo masculino / Abstract: A simple, selective and sensitive method based on high-performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) has been developed for the determination of dapaconazole (BL-125) in human plasma using tioconazole as internal standard. The drugs were extracted from plasma by liquid-liquid extraction with ether/hexane (80/20, v/v). The chromatography separation was performed on a Genesis C18 analytical column 4 ?m (100 x 2.1 mm i.d.) with a mobile phase of methanol/acetonitrile/water (80/10/10, v/v/v) and ammonium acetate (0.5 mM). Dapaconazole was quantified using a mass spectrometer with an electrospray source in the ESI positive mode (ES+) configured for multiple reaction monitoring (MRM) to monitor the transitions 415.1 > 159.2 and 387.0 > 131.0 for dapaconazole and tioconazole, respectively. The method had a chromatography run time of 3.8 min and a linear calibration curve over the range 0.2 ¿ 100 ng/mL (r = 0.9998). The lower limit of quantification (LLOQ) was 0.2 ng/mL. The precision and accuracy values of the assay were within ±10%. The stability tests indicate no significant degradation under conditions of experiment. This method was used for a phase I study of topical administration of dapaconazole tosylate in healthy human male volunteers / Mestrado / Farmacologia / Mestra em Farmacologia

Orientador: Marcos Nogueira Eberlin / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-22T17:49:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_FlamysLenadoNascimento_D.pdf: 3948483 bytes, checksum: d08c9b4a732a432656e3795bc2d362dc (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: As variedades de uvas do gênero Vitis vinífera, incluindo a uva Syrah, são amplamente utilizadas na vinificação. O híbrido (Máximo-IAC 138-22), obtida do cruzamento entre Syrah e Seibel 11342 tem mostrado grande capacidade de adaptação ao clima de São Paulo e, aparentemente, produz um vinho de boa qualidade. A primeira parte deste estudo consistiu em comparar a composição volátil no headspace do vinho tinto paulista com outros vinhos originados da casta fina Syrah de diferentes regiões do mundo. Para isso foi empregada a técnica de microextração em fase sólida (SPME) com a cromatografia em fase gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC-MS). Na segunda parte foi estudado o perfil fenólico de vinhos empregando a técnica de ionização por eletrospray (ESI) acoplada com a espectrometria de massas de ressonância ciclotrônica de íons com transformada de Fourier (FT-ICR MS) que permitiu a detecção de milhares de compostos polares no vinho sem separação cromatográfica e simples preparo de amostra. Constatou-se que o vinho paulista possui um perfil fenólico similar aos outros vinhos comerciais da uva Syrah. No terceiro e quarto estudos empregou-se a técnica ESI-MS por inserção direta para quantificar os ácidos orgânicos em vinho e em uva. Apesar de o vinho constituir uma matriz complexa, a técnica ESI-MS por inserção direta permitiu quantificar os compostos polares majoritários tais como ácido málico, ácido tartárico e ácido cítrico. Nas uvas Vitis vinífera, Vitis labrusca e híbridos a análise de componentes principais (PCA) mostrou clara distinção entre vinhos de uvas diferentes e o agrupamento do vinho paulista com os vinhos da uva Syrah. O método ESI-MS por inserção direta está sendo proposto pela primeira vez para quantificação de ácidos em vinhos e uvas. O método aqui desenvolvido foi validado segundo as normas do Instituto Nacional de Metrologia, Qualidade e Tecnologia (INMETRO) / Abstract: Varieties of grapes from the Vitis vinifera group incluind the Syrah grape are the most widely used for winemaking. A hybrid grape (Maximum-IAC 138-22) obtained by crossing Syrah and Seibel 11342 grapes has shown great adaptability in São Paulo State, producing apparently a high quality wine. This part first has compared the headspace aroma volatile composition of wine made from the Maximum IAC 138-22 grape with wines made from Syrah varietals originated from different regions of the world. Using static solid-phase microextration (SPME) followed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) analysis, main volatile compounds were identifield. Hierarchical clustering analysis (HCA) showed that the wine from the hybrid grape Maximum 138-22 has volatile aroma composition very similar to most high quality Syrah grape wines studied. In the second part the phenolic profile wine using the technique of electrospray ionization (ESI) coupled with mass spectrometry íon cyclotron resonance Fourier transform (FT-ICR MS) that allows detection of thousands of polar compounds in wine without chromatographic separation and simple sample preparation. Was found that the wine paulista has a profile similar phenolic other commercial wines from Syrah grapes. The ESI-MS technique for direct insertion allows us to obtain qualitative and quantitative results without chromatographic separation of wine. In the third and fourth studies employed the technique ESI-MS by direct insertion for quantifying organics acids in wine and grapes. As the wine is a complex matrix, pre concentration and filtration ESI-MS for direct insertion quantify the major polar compounds such as malic acid, tartaric acid and citric acid. In Vitis vinifera grape, Vitis labrusca and hybrid the principal component analysis (PCA) showed a clear distinction between wines from different grapes and wine group in São Paulo with wines from Syrah grapes. The ESI-MS method for direct insertion is first proposed for quantification of acids in wines and grapes. The method ESI-MS by direct insertion is first proposed for quantification acid in wines and grapes. The method developed here was validated according to the standards of the National Health Surveillance Agency and National Institute of Metrology, Quality and Technology (INMETRO) / Doutorado / Quimica Analitica / Doutora em Ciências

Orientador: Altair Antoninha Del Bel Cury / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-19T16:58:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Custodio_William_D.pdf: 6418945 bytes, checksum: f47ba0f315d5085af1b6afa2e2734527 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O desenvolvimento de biofilme de Candida albicans pode ser mediado pela expressão diferencial de sítios de ligação protéicos na película adquirida formada sobre as superfícies das próteses dentais. Assim, objetivo geral deste estudo foi verificar a influência das proteínas de origem salivar e plasmática na formação dos biofilmes de C. albicans. No primeiro capítulo foi revisado o estado da arte de metodologias aplicadas para análise de proteínas. A partir do conhecimento das metodologias, a pesquisa foi realizada com objetivo de caracterizar os perfis protéicos de películas adsorvidas (ADP) à superfície de espécimes de poli(metilmetacrilato), na presença de saliva ou saliva acrescida de plasma sanguíneo. A composição da ADP foi analisada utilizando a técnica de espectrometria de massas, cujo resultado demonstrou diferenças significativas nos proteomas obtidos entre os grupos. Ainda, foi verificada a influência destas películas na energia livre de superfície (SFE) e expressão de fatores de virulência de biofilmes de C. albicans. Os achados demonstraram que a ligação de proteínas plasmáticas determinou aumento de ambas variáveis. A partir desses dados estudou-se o efeito individual de algumas das proteínas identificadas na ADP no desenvolvimento de biofilmes de C. albicans. Com esse objetivo, biofilmes de C. albicans foram desenvolvidos (90 min, 24, 48 e 72 h) sobre películas mono protéicas de albumina, mucina I e II, lactoferrina, fibrinogênio, C3b, IgA e histatina 5. Em cada um dos tempos foi avaliada a atividade metabólica da célula fúngica (teste de XTT), a organização estrutural do biofilme (microscopia confocal por varredura à laser) e a expressão de fatores de virulência por meio dos testes de produção enzimática. Baseado nas evidências geradas por estes trabalhos, podese concluir que proteínas salivares e plasmáticas adsorvidas como integumentos protéicos mantêm sua função biológica e, assim, exercem uma influência modulatória no desenvolvimento de biofilmes de C. albicans / Abstract: The development of Candida albicans biofilms may be mediated by a differential expression of proteic ligand sites in the acquired pellicle formed onto the oral prosthesis surfaces. Therefore, the main objective of this study was to evaluate the influence of salivary and plasmatic-derived proteins on the development of C. albicans biofilms. In the first chapter the state-of-the-art was reviewed for methodologies applied to the analysis of proteins. From the knowledge of the methodologies, the research was realized aiming to characterize the protein profile of acquired pellicles (ADP) on poly(methylmetacrilate) surfaces' specimens in the presence of saliva or saliva supplemented with blood plasma. ADP composition was analyzed by mass spectrometry techniques, which results demonstrated a significant difference in the obtained proteome between the groups. Moreover, the influence of these pellicles was evaluated for the surface free energy (SFE) and expression of virulence factors by C. albicans biofilms. The findings demonstrated that the binding of plasmatic proteins in the ADP determined increases in both experimental variables. From these data, the individual effect of some identified ADP proteins was evaluated on C. albicans biofilm development. With this objective, C. albicans biofilms were developed (90 min, 24, 48 and 72 h) over mono-protein pellicles of albumin; mucin I and II; lactoferrin; fibrinogen; C3b; IgA and histatin 5. For each time point, biofilms were analyzed for metabolic activity (XTT assay), structural biofilm conformation (Confocal scanning laser microscopy) and, expression of virulence factors by means of enzymatic activity assays. Based on the generated evidences of these studies, we can conclude that adsorbed salivary and plasmatic proteins as proteic integuments keep their biological function, and thus exert a modulatory influence on C. albicans biofilm development / Doutorado / Protese Dental / Doutor em Clínica Odontológica

Orientador: Daniel Barrera Arellano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-19T21:15:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernandes_GabrielDeschamps_M.pdf: 1854677 bytes, checksum: e57833484e8f9ad4a136187bed59d8d2 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Os fosfolipídios são definidos como o grupo de moléculas que contém um grupamento fosfato. Por apresentarem características anfipáticas, este grupo de moléculas se organiza naturalmente em bicamadas, originando as membranas dos seres vivos. Industrialmente são capazes de estabelecer interfaces óleo/água, possibilitando a formação e estabilização de emulsões. Este grupo de moléculas é bastante diverso quimicamente, sendo os principais componentes a fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol, ácido fosfatídico e esfingomielina. A determinação e quantificação desses compostos é bastante laboriosa tanto nos meios industriais como acadêmicos, envolvendo, entre outras, etapas de digestão ácida e incineração. A espectrometria de massas desponta como uma técnica bastante favorável à análise de lipídios, englobando desde estudos clínicos até de biocombustíveis. Mais recentemente, as técnicas de espectrometria de massas com ionização ambiente facilitaram o acesso a este tipo de tecnologia, diminuindo os custos de implantação e principalmente de operação. A ionização ambiente por sonic-spray (EASI, easy ambient sonic-spray ionization) denota-se como uma técnica adequada à análise de lipídios, uma vez que não aplica alta voltagem e alta temperatura, prevenindo, portanto possíveis degradações destas moléculas. Este trabalho teve como objetivo, estudar a ionização de fosfolipídios (PL) e triacilgliceróis (TAG) frente à técnica EASI-MS, bem como, estudar a viabilidade técnica da caracterização de lecitinas comerciais por meio da técnica EASI-MS. Quanto à ionização dos lipídios, foi possível observar, nas condições de estudo, que dentro de uma mesma classe (PL ou TAG) a intensidade de ionização diminui com o aumento da cadeia dos ácidos graxos e aumenta com o aumento das insaturações. Para o estudo de caracterização foram utilizadas seis amostras de lecitina de soja comercial, obtidas por diferentes processos. As amostras foram diluídas em clorofórmio e submetidas à análise de EASI-MS, nos modos positivo e negativo. Nos espectros de EASI(+)-MS, os íons mais representativos foram os íons correspondentes à fosfatidilcolina e aos triacilgliceróis, enquanto que, nos espectros de EASI(-)-MS os íons mais representativos corresponderam à fosfatidiletanolamina, aos ácidos graxos livres e aos glicofosfolipídios. A técnica EASI-MS mostrou-se eficiente na caracterização das lecitinas comerciais. Sendo uma técnica rápida e que não exige preparo de amostra / Abstract: Phospholipids are defined as the group of molecules containing a phosphate grouping. As they have amphipathic characteristics, this group of molecules naturally organizes bilayer, origin the membranes of living organism and are able to establish an industrial oil / water interface, allowing the formation and stabilization of emulsions. This group of molecules is very chemically different; the main components are phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylserine, phosphatidylinositol, phosphatidic acid and sphingomyelin. The determination and quantification of these compounds is very laborious for the academic and industrial circles, involving, among others, several steps, like acid digestion and incineration. Mass spectrometry is emerging as a very favorable tool of lipids analysis, since clinical and biofuel studies. Recently, the techniques of ambient mass spectrometry have facilitated the access to this type of technology, reducing deployment costs and especially the operation. Easy ambient sonic-spray ionization (EASI) denotes as a suitable technique to analyze the lipids, since it does not apply high voltage and high temperature, and thereby prevent possible degradation of these molecules. This work aimed to study the ionization of phospholipids (PL) and triacylglycerols (TAG) in EASIMS technique, as well as studying the technical feasibility of the characterization of commercial lecithins by EASI-MS. On the lipid ionization, it was observed, under the conditions of the study, that within the same class (TAG or PL) the ionization intensity decreases with increasing of fatty acids chains and increases with increasing of unsaturation. For characterization studies were used six samples of commercial soy lecithin, obtained by different processes. Samples were diluted in chloroform and analyzed for EASI-MS in positive and negative ion modes. In the spectra of EASI (+)- MS, the most representing ions are corresponding to triglycerides and phosphatidylcholine, whereas in the spectra of EASI (-)-MS the most representative ions correspond to the phosphatidylethanolamine, the free fatty acids and glicophospholipidios. The EASI-MS technique was efficient in the characterization of commercial lecithins. As a fast technique and does not require sample preparation / Mestrado / Tecnologia de Alimentos / Mestre em Tecnologia de Alimentos