Com a expansão da avicultura, ocorreu um aumento no número de aves alojadas, concentrando as produções e, consequentemente, facilitando a disseminação de doenças. Entre as doenças transmitidas pelo consumo dos produtos avícolas, a salmonelose tem especial importância. Nos últimos anos tem ocorrido um aumento na prevalência do sorovar Salmonella Enteritidis em todo o mundo, sendo o mais isolado. A patogenia da Salmonella e a forma como ela interage com seu hospedeiro são fenômenos multifatoriais e complexos. Entre os principais fatores de virulência da Salmonella estão os genes de virulência. O objetivo deste trabalho foi a pesquisa de genes associados à virulência em cepas de S. Enteritidis oriundas de diferentes origens avícolas. Realizou-se a pesquisa de nove genes de virulência (lpfA, agfA, sefA, invA, hilA, avrA, sopE, sivH, spvC) em 84 amostras de S. Enteritidis. Os genes invA, hilA, sivH, sefA e avrA estiveram presentes em 100% das amostras (84/84); lpfA e sopE em 99% (83/84); agfA em 96% (81/84); e o gene spvC em 92% (77/84). Foi possível caracterizar as amostras em quatro diferentes perfis genéticos, sendo P1 positivo para todos os genes, P2 negativo apenas para spvC, P3 negativo apenas para agfA e P4 negativo para lpfA, spvC e sopE, sendo o grupo P1 o mais prevalente. Apesar de todas as cepas pertencerem a um mesmo sorovar, observou-se uma variação na presença dos genes de virulência. Os perfis estabelecidos e as frequências obtidas podem servir para a escolha de cepas a serem utilizadas para realização da PFGE e em futuros estudos in vivo. / The poultry industry has been characterized by an increase in the number of housed animals in recent years, concentrating the production and facilitating the spread of many diseases. Among all illness transmitted by food, including meat and eggs, salmonellosis is of particular importance. Currently, there has been an increase in prevalence of islament of Salmonella Enteritidis all around the world. The pathogenesis of Salmonella and how it interacts with the host are a complex and multifactorial phenomenon. Among virulence factors of Salmonella, the virulence genes are the most important. The aim of this survey was to search for genes associated with virulence in strains of S. Enteritidis isolated from different origins, all from poultry. We conducted a search of nine virulence genes (lpfA, agfA, sefA, invA, hilA, avrA, sopE, sivH, spvC) in 84 samples of S. Enteritidis. The genes invA, hilA, sivH, sefA e avrA were present in 100% of samples (84/84); lpfA and sopE in 99% (83/84); agfA in 96% (81/84); and spvC in 92% (77/84) of them. It was possible to characterize the samples in four different genetic profiles, P1 being positive for all genes, P2 negative only for spvC, P3 negative only for agfA and P4 negative for lpfA, sopE and spvC. The P1 was the most prevalent. Despite all the strains belong to the same serovar, it is possible to observe a variation in the presence of virulence genes. These established profiles and gene frequencies obtained are useful to select strains to be used in PFGE and in future in vivo studies.

Superfícies fixas contaminadas de hospitais de clínicas veterinárias podem servir como fonte de contaminação por microrganismos potencialmente patogênicos comuns entre animais e seres humanos, promovendo riscos de infecções nosocomiais tanto para os pacientes quanto para os profissionais, estudantes e trabalhadores em saúde veterinária. Com a finalidade de controle dessa microbiota transmissível, procedimentos sanitários de desinfecção e descontaminação são prescritos para serem adotados no ambiente. O presente estudo teve como objetivos isolar e identificar a microbiota presente em superfícies fixas de áreas críticas do setor de pequenos animais de um hospital veterinário de ensino, e verificar a ação de inativação de grupos químicos desinfetantes sobre estes microrganismos. Com swabs rolados sobre a superfície de mesas inox de contato com os pacientes, nos setores de atendimento clínico ambulatorial, de internados, de fluidoterapia, de cirurgia e de pré-operatório, foram isolados Staphylococcus spp. coagulase (+) e (-), Sphingomonas paucimobilis, Streptococcus sp. (não grupo D), Enterobacter sp., Acinetobacter iwoffii, Bacillus cereus, Pseudomonas sp., Micrococcus sp., Enterococcus sp., Cocobacilo não fermentador, Bacillus sp., Citrobacter sp. e Candida guilliermondii. Foi avaliada a capacidade de inativação dos desinfetantes ácido peracético, iodóforo, hipoclorito de sódio, quaternário de amônio, fenol sintético, clorhexidina e álcool. O método utilizado foi o de diluição, pela técnica de suspensão microbiana composta por três pools de bactérias (um por dia de coleta ) e uma cultura de levedura, em três concentrações dos desinfetantes nos tempos de contato 1, 5 e 10 minutos. Os pools eram suspensos na solução desinfetante, e identificados os sobreviventes. Observou-se que o ácido peracético, nas concentrações 25 e 50 mg/L em 10 minutos de contato não inativou Staphylococcus spp. e Candida guilliermondii, e em 100 mg/L precisou mais de 5 minutos para inativá-los. O iodóforo, em 25 mg/L precisou de mais de 1 minuto para inativar Staphylococcus spp., e 10 minutos não foram suficientes para inativar Bacillus sp. Mesmo em 100 mg/L, necessitou mais de 1 minuto para inativar Staphylococcus spp. O hipoclorito, na concentração 250 mg/L, em 1 minuto de contato não inativou Bacillus sp. e precisou de 10 minutos para inativar Candida guilliermondii. Frente a essa levedura, mesmo em 1.000 mg/L o hipoclorito de sódio precisou de tempo maior a 1 minuto para inativa-la. Os demais desinfetantes (quaternário de amônio, fenol sintético, clorhexidina e álcool), nas menores concentrações e tempos de contato, inativaram todos os microrganismos. Concluiu-se que nas superfícies de todos os ambientes hospitalares, puderam ser isolados microrganismos. Os testes in vitro evidenciaram que todos os grupos químicos avaliados podem ser usados para inativar os isolados, mas que os fatores testados: gênero e espécie microbiana, concentrações e tempos de contato, interferiram na capacidade desinfetante. / Noncritical environmental surfaces of veterinary hospitals might be contamination sources of potentially pathogenic microorganisms shared by animal species and humans beings, representing risks of nosocomial infections, either to the patients or to the medical and technical staff and students. Aiming to control this transmissible microbiota, sanitary procedures of decontamination and disinfection are prescribed to be adopted in these environments. The present study aimed to isolate and identify the microbiota occurring in environmental surfaces of critical areas of the small animals sector in a veterinary teaching hospital, and evaluate the inactivation action of disinfectants of different chemical groups against these microorganisms. Staphylococcus spp. coagulase (+) and (-), Sphingomonas paucimobilis, Streptococcus sp. (not group D), Enterobacter sp., Acinetobacter iwoffii, Bacillus cereus, Pseudomonas sp., Micrococcus sp., Enterococcus sp., Cocobacilo non-fermenting, Bacillus sp., Citrobacter sp. and Candida guilliermondii were isolated by means of swabs rolled on the surfaces of stainless steel tables contacting with the patients in the following areas: ambulatory clinical, hospitalization, fluid therapy, surgery and pre-operatory. The efficacy of peracetic acid, iodofor, sodium hypochlorite, a quaternary ammonium product, synthetic phenol, chlorhexidine and alcohol was evaluated. The method used was dilution by the suspension technique composed by three bacterial pools (one for each sampling day) and a yeast culture, in three disinfectant concentrations, and in 1, 5 and 10 minutes of contact. The pools were suspended in the disinfectant solutions and the survivors identified. Peracetic acid, in 25 and 50 mg/L concentration, in 10 min of contact did not inactivate Staphylococcus spp. and Candida guilliermondii, and in a concentration of 100mg/L needed more than 5 minutes to inactivate them. The iodofor, in 25 mg/L, took more than 1 minute to inactivate Staphylococcus spp., and 10 minutes were insufficient to inactivate Bacillus sp.; even in a concentration of 100 mg/L it required more than 1 minute to inactivate Staphylococcus spp. The hypochlorite, in a concentration of 250 mg/L, in 1 minute of contact did not inactivate Bacillus sp. and required 10 minutes to inactivate Candida guilliermondii. Against this yeast, even a 1000 mg/L solution of sodium hypochlorite, required more than 1 minute to inactivate it. The other disinfectants (a quaternary ammonium product, synthetic phenol, chlorhexidine and alcohol) in the lowest concentrations and smaller contact times inactivate all the microorganisms identified. It was concluded that microorganisms might be isolated in surfaces of all environments of the hospital. The in vitro tests showed that all chemical groups evaluated could be used to inactivate the isolates, but the tested variables: genus and species of microorganisms, concentrations and contact times, interfered in the disinfectant efficacy.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 729175 bytes, checksum: d8be6fdfabfabf889bd81cc7f09142f9 (MD5) Previous issue date: 2008-05-16 / The Rhipicephalus (Boophilus) microplus is one of the most important arthropods in veterinary medicine due economic losses and health problems caused in cattle production, mainly in Central and South America, as well as in Australia. As an alternative to chemical control, immunization of bovines with Bm86 antigen to induce a protective immune response. A synthetic peptide, SBm 7462, derived from Bm86, has been shown great results in control of ticks. The construction and synthesis of one nucleotide sequence based on this peptide might be useful for design a DNA vaccine that has many advances than peptide vaccine. A gene, called seq1, was constructed with a three repetition of nucleotide sequence of SBm 7462. It was cloned into a pCIneo vector expression in mammals, transfected in VERO cells and injected in BALB/c mouse. Two methods were used to analysis of peptide expression in vitro: DOT ELISA and PAP. In both, the results showed that the nucleotide sequence (seq1) had not been express in VERO cells. In vivo, when mice were inoculated with the expression cassette they did not response in ELISA. They elevated antibody titles only when vaccinated with the syntetic peptide SBm 7462. And, the best titles of immunoglobulins were seen when the SBm 7462 was administered subcutaneously. After that, we insert a mutation at the begging of seq1, but, the sequenciament demonstrated that any initiation codon (ATG) had been inserted. / O Rhipicephalus (Boophilus) microplus é um dos mais importantes artrópodes em medicina veterinária devido perdas econômicas e problemas de saúde causados na produção de gado na América Central e do Sul, bem como na Austrália. Como alternativa ao controle químico, a imunização de bovinos com antígeno proteíco Bm86 induz uma resposta imune protetora. Um peptídeo sintético, SBm 7462, derivado da Bm86, tem obtido excelentes resultados no controle de carrapatos. A construção e síntese de uma sequência nucleotidíca baseada neste peptídeo podem ser útil para o desenho de uma vacina de DNA que tem muitas vantagens sob uma vacina sintética. Um gene, denominado seq1, foi construído repetindo três vezes a sequência nucleotidídica do SBm 7462. Ele foi clonado no vetor de expressão em mamíferos, pCIneo, transfectado em células VERO e injetado em camundongos BALB/c. Dois métodos foram usados para análise da expressão do peptídeo in vitro: DOT ELISA e PAP. Em ambos, os resultados demonstraram que a seqüência nucleotídica (seq1) não havia sido expressa em células VERO. In vivo, quando camundongos foram inoculados com o cassete de expressão eles não responderam ao ELISA. Eles elevaram os títulos de anticorpos, apenas, quando inoculados com o peptídeo sintético SBm 7462. Os melhores títulos de imunoglobulinas foram vistos quando o SBm 7462 foi administrado subcutâneamente. Após isso, inserimos uma mutação no início do seq 1, porém, o sequenciamento demonstrou que nenhum códon de iniciação (ATG) tinha sido inserido.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 581786 bytes, checksum: 8b2fc3fbb4c202f3a85a87fe53745cd7 (MD5) Previous issue date: 2008-12-11 / Enteroparasitosis and anemia are two major public health problems, particularly when involving young children and pregnant women. Analysis of data from consultations and medical records of pregnant women assisted in the communities of Nova Viçosa and Posses, municipality of Viçosa-MG, the present study showed the need for control and prevention, mainly because the serious consequences of these diseases, standing out the impairment of the cognitive function and learning ability, as well as several physiological complications that can lead patients to death. Social determinants and epidemiological data were collected through the situational diagnosis for health care systems. Socio-economic, socio-demographic, socio-environmental and socio-cultural characteristics were examined. Samples of 270 pregnancies occurring over a period of 3 years - October/2005 to September/2008 - were used in the work in a descriptive transversal study. The prevalence found for enteroparasites was (59/152) 38.8% and for iron deficiency anemia was 52/152 (34.2%). The overall prevalence of helminths in this study was (24/152) 15.8%, and protozoa (42/152) 27.6%. It is emphasized the women s very low income and limited education, besides the high number of residents per household. It was confirmed the relationship between enteroparasitosis and variables of the health diagnosis, as well as it occurred with iron deficiency anemia, when it was also related to the diagnosis. The per capita income was statistically associated with the presence of anemia. Although the association between anemia and enteroparasitosis was not statistically confirmed, and, considering the very poor social conditions that the women from those communities are subjected, the need for control and prevention measures to protect those people is demonstrated, since the poor conditions certainly increase the risk of morbidity in those women. / As enteroparasitoses e a anemia ferropriva são dois grandes problemas de Saúde Pública, principalmente quando acometem crianças jovens e gestantes. Através da análise de dados obtidos junto às consultas e prontuários das gestantes assistidas nas comunidades de Nova Viçosa e Posses, município de Viçosa-MG, esse presente estudo demonstrou a necessidade de medidas de controle e prevenção, principalmente pelas graves conseqüências dessas patologias, destacando-se o comprometimento da função cognitiva e da habilidade para o aprendizado, além de várias intercorrências fisiológicas que podem levar pacientes acometidos por essas doenças ao óbito. Buscou-se os determinantes sociais e os dados epidemiológicos através da realização do Diagnóstico Situacional de Saúde . Foram analisadas características sócio-econômicas, sócio-demográficas, sócioambientais e sócio-culturais. O trabalho teve como amostra 270 gestações ocorridas em um período de 3 anos: outubro/2005 a setembro/2008, por meio de um estudo descritivo transversal. A prevalência encontrada em relação aos enteroparasitas foi de (59/152) 38,8%; e em relação à anemia ferropriva foi 52/152 (34,2%). A prevalência geral de helmintos nesse estudo foi de (24/152) 15,8%; e de protozoários (42/152) 27,6%. Destacam-se baixíssima renda e a limitada escolaridade das gestantes, além do alto número de moradores por família. Constatou-se a existência de relação das enteroparasitoses com as variáveis do Diagnóstico de Saúde realizado, assim como ocorreu com a anemia ferropriva, quando também relacionada a esse Diagnóstico. A renda per capita esteve estatisticamente associada com a presença de anemia ferropriva. Apesar de não ter sido confirmada estatisticamente associação entre anemia ferropriva e enteroparasitoses, e ainda, considerando as péssimas condições sociais a que estão submetidas as gestantes daquelas comunidades assistidas, ficou evidenciada a necessidade de medidas de controle e prevenção para a proteção daquelas pessoas, pois essas precárias condições certamente potencializaram os riscos de morbidade daquelas gestantes.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1212646 bytes, checksum: 32b2636ea3a74079502f0cdadc427fd3 (MD5) Previous issue date: 2004-06-24 / Capybara (Hydrochaeris hydrochaeris) is a rodent of half-aquatic habits, herbivores, exploring aquatic gradients where other herbivores normally don t reach, mainly in flooding areas, being distributed for all the Brazilian territory. Its natural habitat is characterized by the permanent existence of watercourse, and they also require an area of pasture to explore and an area of bush used for rest and to have younglings. Although being a wild animal, it in a so advanced way in the domestication process that can be considered as a new domestic animal, with well established handling and use. Capybaras are regularly kept in close contact with swine, equines and bovines, leading to a bigger dispersion of illnesses, with capybaras being able to act as reservoir, doing important paper in public health and the economic losses in production animals and commercial breeding of the species. Identification stories of some infectious agents in free-life capybaras, as much in wild as in agricultural areas, contribute to this hypothesis. On this way this work had the objective of analyzing the serologic profile of capybaras, as soon as the presence of antibodies against bovine Herpesvirus, bovis Viruses of bovine leukemia, Viruses of equine influenza, Rickettsia, Anaplasma marginale, Babesia bovis, Babesia bigemina, brucellas and leptospires. Blood samples of capybaras from different region had been collected. These samples had been processed in the laboratory of Virology of the Sector of Preventive Veterinary Medicine of the Universities Federal de Viçosa, being submitted to the tests of immuno-diffusion in agar-gel for the virus of bovine leukemia, serum-neutralization for bovine herpes virus, inhibition of the hemaglutination for the virus of equine influenza, indirect immunofluorescence for Rickettsia, elisa for Anaplasma marginale, dot-elisa for Babesia bovis and bigemina Babesia, fast serum agglutination for brucellas and microscopically serum aglutination for Leptospires (15 different sorovares). Gotten results (18/144) indicate the prevalence of antibodies against leptospires of 10,42% (15/144) and 2,09% (3/144) against the equine influenza virus. Antibodies for the other tested agents had not been found. There is great evidence that the creation of capybaras has an important paper in the epidemiologist of the infection for Leptospires, serving as reservoir and potential disseminator for the environment. However, there is a necessity of a more refined evaluation, related to the sanitary and economic aspects to other diseases occurring in capybaras, as well as a deeper relation with other production animals. / A capivara (Hydrochaeris hydrochaeris) é um roedor de hábitos semiaquáticos, herbívoros, forrageando gradientes aquáticos, onde outros herbívoros normalmente não alcançam, principalmente em áreas sazonalmente inundáveis; sendo distribuída por todo o território brasileiro. O seu habitat natural é caracterizado pela existência de curso d água permanente, também requerem uma área de pastagem para forragear e uma área de mata utilizada para repouso e para ter filhotes. Apesar de ser um animal silvestre, encontra-se em um estado tão avançado no processo de domesticação, que pode ser considerado como um novo animal doméstico, com manejo e uso bem estabelecidos. As capivaras regularmente são mantidas em próximos contatos com suínos, eqüinos e bovinos, sendo que este estreito relacionamento conduz a uma maior dispersão de doenças, podendo atuar a capivara como reservatório, desempenhando importante papel na saúde pública e nas perdas econômicas em animais de produção e em criadouros comerciais da espécie. Relatos de identificação de alguns agentes infecciosos em capivaras de vida livre, tanto em áreas silvestres como em rurais, contribuem com essa hipótese. Desta forma, este trabalho teve como objetivo analisar o perfil sorológico de capivaras, quanto à presença de anticorpos contra Herpes vírus bovino, Vírus da Leucose bovina, Vírus da influenza eqüina, Rickettsia, Anaplasma marginale, Babesia bovis, Babesia bigemina, Brucellas e Leptospira. Foram colhidas amostras sangüineas de capivaras de diferentes regiões do Estado de Minas Gerais e São Paulo. Estas amostras foram processadas no laboratório de Virologia do Setor de Medicina Veterinária Preventiva da Universidade Federal de Viçosa, sendo submetidos aos testes de imunodifusão em agar-gel para o vírus da leucose bovina, soroneutralização para o herpes vírus bovino, inibição da hemaglutinação para o vírus da influenza eqüina, imunofluorescência indireta para Rickettsia, eliza para Anaplasma marginale, dot-elisa para Babesia bovis e Babesia bigemina, soroaglutinação rápida para Brucellas e soroaglutinação microscópica para Leptospira (15 diferentes sorovares). Os resultados (18/144) obtidos indicam a prevalência de anticorpos contra leptospira de 10,42% (15/144) e 2,09% (3/144) contra o vírus da influenza eqüina. Não foram encontrados anticorpos para os outros agentes testados. Há grande evidencia que a criação de capivaras tem um papel importante na epidemiologia da infecção por Leptospira, servindo como reservatório e potencial disseminador para o ambiente. Porém, existe uma necessidade de uma avaliação mais apurada, nos aspectos sanitários e econômicos relacionados a outras enfermidades de ocorrência em capivaras, assim como um aprofundamento na relação com outros animais de produção.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 331526 bytes, checksum: 087586b326562ece474e6fe3fa8a0d49 (MD5) Previous issue date: 2004-08-31 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Swine erysipelas, caused by Erysipelothrix rhusiopathiae, is responsible for enormous economic losses related to abortions and mainly to the chronic form of the disease, due to the costs of treatment, reduced growth rate and carcass´s quality. Although Erysipelothrix sp. is not a demanding organism, there are difficulties associated to its laboratorial identification. Lack of information about epidemiology of swine erysipelas in Brazil and the economical and sanitary importance of this disease reveal the necessity of isolation studies and characterization of the Erysipelothrix sp. isolates. The objectives of the present study were to verify the existence of health carriers pigs of E. rhusiopathiae in swine producing regions; to verify isolation rate of Erysipelothrix sp. strains from the tonsils of apparently normal swine by the methods crystal violet selective modified media (CV) and tryptose phosphate enrichment media (TP); to investigate the distribution of carriers pigs according to productive category (finishing pig and sow), animal localization (state of federation), isolation method (CV and TP), cellular morphology (smooth, smooth-intermediate, intermediate, intermediate-rough and rough forms) and Erysipelotrhix species (E. rhusiopathiae and E. tonsillarum). Tonsils from 398 finishing pigs, male and female, and 112 sows, obtained from 46 farms in 28 cities of Mato Grosso do Sul (MS), Goiás (GO), Paraná (PR), São Paulo (SP) and Minas Gerais (MG), were collected from slaughterhouses and were examined in the Laboratório de Microbiologia, Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa MG. Obtained data were expressed in frequency and analized by Qui-square test, using Epi Info version 6.04b (WHO, 1997) and Bio Estat 2.0 (AYRES et al., 2002) programs, adopting significance level of 5%, with p value £ 0,05 considered significant. Of 510 apparently health slaughter pigs, 99 (19,41%) were detected as carriers of Erysipelothrix sp. The percentage of isolation by CV technique was 18,24% (93/510), while TP technique was 5,69% (29/510). There was no difference of tonsillar carriers of Erysipelothrix sp. according to the animal productive category (p > 0,05), suggesting that finishing pigs and sows may be potential source for infection to other animals in swine herds. The percentage of tonsillar carriers was 25,93% in GO, 23,08% in PR, 20,51% in MG, 14,67% in SP and 12,71% in MS, indicating that the presence of the organism is not a local phenomenon. It was observed mainly carriers pigs of only E. rhusiopathiae strains (75,76%), and it was demonstrated that slaughter pigs may be carriers of E. rhusiopathiae and E. tonsillarum simultaneously. In this study, the smooth form (53,4%) was predominant in samples of E. rhusiopathiae, followed by smooth-intermediate form (27,18%). Intermediate and intermediate-rough forms were observed with a low frequency (9,71%), while rough form was not identified in this report. / A erisipela suína, causada pela bactéria Erysipelothrix rhusiopathiae, apresenta relevância pelas perdas econômicas relacionadas com os abortamentos e, principalmente, com o quadro crônico da doença em cevados, devido aos custos com o tratamento, à redução da taxa de crescimento e à pior qualidade da carcaça na tipificação. Embora Erysipelothrix sp. não seja uma bactéria muito exigente, há dificuldades associadas a sua identificação laboratorial. A escassez de dados sobre a epidemiologia da doença no plantel brasileiro, somada à importância econômica e sanitária do patógeno, reforçam a necessidade da realização de pesquisas de isolamento e de caracterização das amostras de E. rhusiopathiae. Os objetivos deste estudo foram: verificar a existência de suínos portadores de E. rhusiopathiae em regiões produtoras de suínos no país; verificar a taxa de isolamento de amostras de Erysipelothrix sp. de tonsilas de suínos aparentemente sadios, utilizando-se o meio seletivo cristal violeta (CV) modificado e o meio de enriquecimento triptose fosfato (TP); verificar a distribuição dos animais portadores, segundo as variáveis categoria produtiva (cevado e matriz), origem dos animais (estado da federação), técnica de isolamento (CV e TP), morfologia celular (lisa, lisa à intermediária, intermediária, intermediária à rugosa e rugosa) e espécie de Erysipelothrix (E. rhusiopathiae e E. tonsillarum). As tonsilas de 398 cevados, de ambos os sexos, e de 112 porcas reprodutoras descartadas, oriundos de 46 propriedades em 28 municípios dos estados de Mato Grosso do Sul (MS), Goiás (GO), Paraná (PR), São Paulo (SP) e Minas Gerais (MG), foram coletadas em estabelecimento de carne e derivados e processadas no Laboratório de Microbiologia do Departamento de Veterinária da Universidade Federal de Viçosa - MG. Os dados obtidos foram expressos pela taxa de freqüência e avaliados pelo teste de Qui-quadrado (c2), através dos programas Epi Info versão 6.04b (WHO, 1997) e Bio Estat 2.0 (AYRES et al., 2002). Para todas as análises, o nível de significância adotado foi de 5% e um valor de p £ 0,05 foi considerado significativo. Dos 510 suínos aparentemente sadios pesquisados, 99 (19,41%) foram diagnosticados carreadores tonsilares de Erysipelothrix sp. A técnica CV diagnosticou 18,24% (93/510) de suínos portadores, enquanto que a TP diagnosticou 5,69% (29/510), havendo diferença estatisticamente significativa (p<0,01) entre as percentagens de cada técnica. Não se observou diferença estatística (p>0,05) quanto à freqüência de suínos carreadores de Erysipelothrix sp. segundo a categoria produtiva, ressaltando que tanto os cevados como as matrizes assumem o status de disseminadores do microrganismo na granja. A percentagem de suínos portadores foi de 25,93% em GO, 23,08% no PR, 20,51% em MG, 14,67% em SP e 12,71% em MS, indicando que a presença do Erysipelothrix sp. nas tonsilas de suínos aparentemente sadios não é um fenômeno local. Constatou-se maior percentagem (75,76%) de suínos carreadores exclusivamente de E. rhusiopathiae, e que os suínos podem ser portadores concomitantemente de E. rhusiopathiae e E. tonsillarum. Avaliando-se a morfologia celular das amostras de E. rhusiopathiae isoladas, a morfologia lisa (53,40%) foi a mais freqüente, seguida da forma lisa à intermediária (27,18%). As morfologias intermediária e intermediária à rugosa apresentaram as menores percentagens (9,71%), enquanto que a forma rugosa não foi identificada em nenhuma amostra.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 502620 bytes, checksum: b4aaf94fa1554152967be942efec1f4f (MD5) Previous issue date: 2011-02-23 / The present study has assessed the efficiency of different protocols for the genomic DNA extraction of Salmonella in SPF (Specific Pathogen Free) hen eggs. Seventy-five eggs were divided into five groups of fifteen eggs. Three of these groups of eggs were inoculated with enteric Salmonella cultures. One of the five groups was inoculated with Escherichia coli bacterium culture. And the last group of eggs was the negative control group, which received saline solution 0.85% infertile. The eggs were incubated on a temperature that varied from 20 to 25 °C during 24 hours. Five yolks were c ollected from each group every 24 hours. These yolks were homogenized and centrifuged for 10 minutes. The supernatant was rejected. After that, PBS pH 7.2 was added and it was once again centrifuged. The sediment obtained from each group was used for the extraction of bacterial genomic DNA. The silica particle and commercial kit methods were used for extraction GenElute Bacterial Genomic DNA kit (Sigma®). The extracted DNA was kept under the temperature of 20 °C until PCR assessment. The primers used were related with the invA gene and resulted in 284 base pair amplification products. Such amplification products were visualized in UV transilluminator. Results showed that the silica particle extraction method was the most efficient one, since good quality and enough DNA was obtained to achieve good results with the PCR technique. / Avaliou-se a eficiência de três protocolos para a extração de DNA genômico de bactérias do gênero Salmonella em ovos de galinhas livres de patógenos específicos SPF. Foram utilizados 75 ovos, divididos em cinco grupos com 15 ovos cada. Três grupos de ovos foram inoculados com culturas de Salmonella sp. Um quarto grupo foi inoculado com cultura de Escherichia coli. O quinto grupo foi o controle negativo, que recebeu solução salina 0,85% estéril. Os ovos ficaram incubados na temperatura em torno de 20 25 ºC durante 24 horas. Após esse intervalo foram colhidas cinco gemas de cada grupo, as quais foram homogeneizadas e centrifugadas por 10 minutos; o sobrenadante resultante foi descartado. Após o descarte, adicionou-se PBS pH 7,2 e centrifugou novamente-se novamente. O sedimento obtido de cada grupo foi utilizado na extração do DNA genômico bacteriano. Os métodos utilizados de extração foram: por partículas de sílica e um kit comercial GenElute Bacterial Genomic DNA kit (Sigma®). O DNA extraído foi mantido em temperatura de 20 ºC até a avaliação por PCR. Os primers utilizados são relacionados com o gene invA e resultaram em uma amplificação de 284 pares de base. Os produtos de amplificação foram visualizados em transluminador com luz ultravioleta. Os resultados demonstraram que o método de extração por partículas de sílica foi o mais eficiente, por obter um DNA de boa qualidade e quantidade suficiente para conseguir bons resultados na técnica de PCR.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1578292 bytes, checksum: a2a484d1dc6ebd6987a9b540cec6851e (MD5) Previous issue date: 2011-04-01 / The damage due to infestation of Rhipicephalus (Boophilus) microplus has been estimated at billions of dollars in the tropical and subtropical countries. The most commonly used forms of combat for this ectoparasite is mainly based on the use of chemical acaricides. Seeking an alternative way to control the parasite, the vaccine was developed synthetic anti R. (B.) microplus (SBm7462®). The synthetic vaccine SBm7462® contains three immunogenic epitopes (4822, 4824 and 4823) derived from the Bm86 protein. Genetic analysis showed that the fragment corresponding to SBm7462® is conserved across populations R. (B.) microplus from different regions in South America, however, the production of this vaccine on an industrial scale would cost very high. Therefore, alternative methods of production are being developed. The use of plants as bioreactors for production of heterologous proteins is a very attractive approach, since the transgenic plants are one of the most economical systems for protein production on industrial scale. The objective was to study the immune response of mice immunized orally with transgenic Arabidopsis thaliana expressing the recombinant peptide rBm7462. For this, seeds processed in a previous work were grown until the fifth generation. After confirmation of the production of the peptide, 0.5 g of leaves of transformed plants were administered orally to BALB/c, three times (interrupted by 3 weeks), as well as 200&#956;L of total soluble protein extract, inoculated subcutaneously. After 9 weeks, during which blood samples were collected from animals, weekly, they were euthanized for collection of lymph nodes and ileum. The results showed that it was not possible to detect levels of IgG anti-rBm7462 in mice immunized orally with leaves of transgenic plants expressing the peptide rBm7462, as well as in mice immunized with total soluble protein extracts of these plants, while the indirect ELISA method was used. However, the lymph nodes of immunized animals showed microscopic changes related to immune response and markings, by immunohistochemistry, for the peptide rBm7462. These observations led to the conclusion that the antigen dose was given to the animals sub-antigenic which may have stimulated mechanisms of tolerance to the antigen. What makes a necessary adjustment in the doses given to animals. Seeds used strains derived from 2NF allowed for the preparation of the fifth generation of transformed plants, indicating that the gene seq2, responsible for the synthesis of peptide rBm7462 probably is homozygous. What it indicates the genomic stability and viability of producing the antigen in transgenic plants. / Os prejuízos causados pela infestação de Rhipicephalus (Boophilus) microplus tem sido estimada em bilhões de dólares nos países tropicais e subtropicais. As formas de combate mais utilizadas para este ectoparasita são baseadas principalmente no uso de químicos acaricidas. Buscando uma forma alternativa para o controle do parasita, foi desenvolvida a vacina sintética anti R. (B.) microplus (SBm7462®). A vacina sintética SBm7462® contém três epitopos imunogênicos (4822, 4824 e 4823) derivados da proteína Bm86. Análises genéticas demonstraram que o fragmento correspondente a SBm7462® é conservado em populações R. (B.) microplus de diferentes regiões na América do Sul. Contudo, a produção desta vacina em escala industrial tornaria seu custo muito elevado. Assim sendo, formas alternativas de produção estão sendo desenvolvidas. A utilização de plantas como bioreatores para produção de proteínas heterólogas é uma metodologia muito atrativa, visto que as plantas transgênicas constituem um dos sistemas mais econômicos para produção de proteínas em escala industrial. O objetivo deste trabalho foi estudar a resposta imunológica de camundongos, imunizados oralmente com Arabidopsis thaliana transgênicas, que expressam o peptídeo recombinante rBm7462. Para isso, sementes transformadas em um trabalho anterior foram cultivadas até a quinta geração. Após confirmação da produção do peptídeo, 0,5g de folhas das plantas transformadas foram administradas oralmente a camundongos BALB/c, por três vezes (intercaladas por 3 semanas); assim como também 200&#956;L de extrato de proteínas totais solúveis, inoculado por via subcutânea. Após 9 semanas, durante as quais foram feitas coletas sanguíneas dos animais, semanalmente, estes foram eutanasiados para a coleta dos linfonodos e íleo. Os resultados demonstraram que não foi possível detectar níveis de IgGs anti-rBm7462 em camundongos imunizados oralmente com folhas de plantas transgênicas expressando o peptídeo rBm7462, como também em camundongos imunizados com extratos de proteínas totais solúveis das mesmas plantas, quando a metodologia ELISA indireto foi utilizada. Contudo, os linfonodos dos animais imunizados apresentaram alterações microscópicas relacionadas à resposta imunológica e marcações, através da técnica de imunohistoquímica, para o peptídeo rBm7462. Estas observações levaram a conclusão que a dose de antígeno oferecida aos animais foi sub-antigênica o que pode ter estimulado mecanismos de tolerância ao antígeno. O que torna necessário um ajuste nas doses oferecidas aos animais. Sementes utilizadas derivadas da linhagem 2FN possibilitaram a obtenção da quinta geração de plantas transformadas, indicando que o gene seq2, responsável pela síntese do peptídeo rBm7462, provavelmente encontra-se em homozigose. O que indica a estabilidade genômica dele e a viabilidade em se produzir o antígeno em plantas transgênicas.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1604601 bytes, checksum: 38fc7a3e41183836ef961684bc79c882 (MD5) Previous issue date: 2011-06-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Escherichia coli is a microorganism of environmental origin highly adaptive and its ability to form biofilms under certain conditions may be critical for their resistance to antimicrobial treatments, which makes E. coli an important causative agent of mastitis. We studied 27 isolates of E. coli producing biofilms obtained from clinical mastitis belong to the collection of the Federal University of Viçosa. The isolates were tested for sensitivity to antibiotics used to treat mastitis, both for planktonic cells, by assessing the minimal inhibitory concentration - MIC as for the sessile, assessing the minimal biofilm eradication concentration - MBEC. In addition, all isolates were grown in minimal media containing different pH values and glucose concentrations and to assess the influence of these factors in producing biofilms. Similarly underwent the isolates at concentrations of antimicrobial sub-inhibitory to verify the possible induction of these doses on the formation of biofilms. Four isolates were chosen, large and weak biofilm producers, to be analyzed by scanning electron microscopy - SEM. The results revealed a high rate of sensitivity, confirmed by the evaluation of MIC, in which only four (14.8%) isolates had high MIC values ranging from 4 to 10 &#956;g / mL and were classified as resistant. However, for the remaining isolates (85.2%) were lower, ranging from 0.125 to 2 &#956;g/mL classified as sensitive. The evaluation of MBEC indicated that the concentration of antibiotic required to eliminate the sessile cells ranged from the 100 &#956;g/mL 500 &#956;g/mL. Gentamicin and enrofloxacin were possible inducers of biofilm formation, respectively, at 0.0312 and 0.0125 &#956;g / mL. MBEC values were significantly higher in isolated large and moderate-producing biofilms in relation to isolated weak biofilm producers (p < 0.001). There was no correlation between the values of MCEC and MIC (p > 0.05). The biofilm production was higher (p < 0.001) in minimal media with limited glucose (0.5%) and pH values further away from neutrality (pH 5.5 and pH 8, 5) in relation to the minimum means-rich glucose (2,5% and 3.5%) and pH close to neutrality (pH 6.5 and 7,5). The presence of biofilms was confirmed in isolates submitted to the SEM, through visualization of adhered cells and the presence of exopolysaccharides, characterizing the typical architecture of biofilms. The knowledge of the characteristics of biofilm production in isolates of E. coli causing mastitis is an important tool for establishing more efficient treatment strategies. / Escherichia coli é um micro-organismo de origem ambiental altamente adaptativo e sua habilidade em formar biofilmes em determinadas condições pode ser fundamental para sua resistência a tratamentos da mastite com antimicrobianos. Estudou-se 27 isolados de E. coli produtores de biofilmes obtidos de leite mastítico. Os isolados foram submetidos a testes de sensibilidade a antimicrobianos usados no tratamento da mastite, tanto para as células planctônicas, por meio da avaliação da concentração mínima inibitória CMI quanto para as sésseis, pela avaliação da concentração mínima de erradicação de biofilmes - CMEB. Todos os isolados foram cultivados em meios mínimos contendo diferentes valores de pH e concentrações de glicose visando investigar a influência desses fatores na produção de biofilmes. De mesmo modo submeteu-se os isolados às CMI para verificar a possível indução dessas concentrações na produção dos biofilmes. Foram escolhidos quatro isolados, grandes e fracos produtores de biofilmes, para serem analisados por microscopia eletrônica de varredura MEV. Os resultados obtidos revelaram uma alta taxa de sensibilidade, confirmada pela avaliação da CMI, na qual apenas quatro (14,8%) isolados obtiveram valores da CMI elevados, variando de 4 a 10 &#956;g/mL, sendo classificados como resistentes. Entretanto, para os demais isolados (85,2%) os valores foram menores, variando de 0,125 a 2 &#956;g/mL, classificados como sensíveis. A avaliação de CMEB indicou que a concentração dos antimicrobianos necessária para eliminar as células sésseis variou de 100 &#956;g/mL a 500 &#956;g/mL. Gentamicina e enrofloxacina foram indutores da produção de biofilmes, respectivamente nas concentrações de 0,0312 e 0,0125 &#956;g/mL. Os valores de CMEB foram significativamente maiores nos isolados grandes e moderados produtores de biofilmes em relação aos isolados fraco produtores biofilmes (p < 0,001). Não houve correlação entre os valores de CMEB e CMI (p > 0,05). A produção de biofilmes foi maior (p < 0,001) nos meios mínimos com pouca disponibilidade de glicose (0,5%) e valores de pH mais distantes da neutralidade (pH 5,5 e 8,5) em relação aos meios mínimos ricos em glicose (2,5% e 3,5%) e com valores de pH próximos da neutralidade (pH 6,5 e 7,5). A presença dos biofilmes foi confirmada nos isolados submetidos à MEV por meio da visualização de células aderidas e da presença de matriz extracelular, caracterizando a arquitetura dos biofilmes. O conhecimento das condições da produção de biofilmes em isolados de E. coli causadores de mastite é uma importante ferramenta para se estabelecer estratégias de controle e tratamentos mais eficientes.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2074097 bytes, checksum: 2249324a9888e3dffcea078cf1aa4fed (MD5) Previous issue date: 2011-02-21 / Ticks are important to public health and animal production because of their ability to transmit various infectious agents. Among ticks, Rhipicephalus microplus is responsible for economic losses in tropical and subtropical countries. Among the ways to control this ectoparasite, the immune option is viable, which doesn t generate resistant tick populations and offers safety to the animal products. The synthetic vaccine SBm7462® contains three immunogenic epitopes (4822, 4824 and 4823) derived from the Bm86 protein. Genetic analysis showed that the fragement corresponding to the SBm7462® is conserved in the population of R. microplus from different regions on South America. To evaluate the events of cellular immunity in calves and histology changes in female R. microplus. Previously were designed and constructed two genes expressed in Pichia pastoris Km71 strain. The rBmseq1 gene was designed to express immunogenic epitopes in tandem and rBmseq4 gene designed expressed this without repetitions. The recombinant peptides were recovered from the extracellular medium and were characterized by SDS-PAGE and Western blotting. These peptides were inoculated three times at intervals of thirty days in five Bos taurus taurus calves at doses of 2 mg plus 1.5 mg saponin. Afterwards, the lymph nodes were collected and processed histologically. Histological sections were stained by (H&E) and immunohistochemical staining for peroxidase-anti-peroxidase (PAP). It was shown that they developed a T-dependent response with immunity induction in animals immunized. Hence, showed clear structures whit confers immunity and affinity in animals immunized whit rBmseq4. However, 21 days after the last immunization, the challenge was made with R. microplus 4500 larvae per animal. At 21 days with the beginning of fallen females, these were randomly selected from each group. R. microplus females fed on animal s rBmseq1 group showed integrity of the intestinal epithelium, similar to control group. However, guts of ticks fed on animal s rBmseq4 group showed denudation and erosion of basal membrane cell. It demonstrates the peptide rBmseq4 peptide has a great ability to generate immune responses which induce adverse reactions in R. microplus. / Devido à sua capacidade de transmitir diversos agentes infecciosos, os carrapatos são importantes para a saúde pública e a produção animal. Dentre estes se destaca o carrapato Rhipicephalus microplus, responsável por perdas econômicas nos países das regiões tropicais e subtropicais. Entre as medidas de controle deste ectoparasito, o controle imunológico se tornou uma alternativa viável, que além de não gerar populações de carrapatos resistentes oferece inocuidade aos produtos de origem animal. A vacina sintética SBm7462®, cuja eficácia já foi demonstrada em bovinos, contém três epítopos imunogênicos (4822, 4824 e 4823) derivados da proteína Bm86. Análises genéticas mostraram que o fragmento correspondente ao peptídeo SBm7462® está conservado nas populações do R. microplus de diferentes regiões da América do Sul. Para avaliar os eventos de imunidade celular em bezerros e as alterações histológicas em fêmeas do R. microplus. Previamente foram desenhados e construídos dois genes que se expressaram na levedura Pichia pastoris cepa Km71. O gene rBmseq1 foi desenhado para produzir os epítopos imunogênicos em tandem e o gene rBmseq4 para produzir a sequência sem repetições. Os peptídeos expressos se recuperaram do meio extracelular e se caracterizaram por SDS-PAGE e Western blotting. Esses peptídeos recombinantes foram inoculados três vezes com intervalos de 30 dias em 4 bezerros Bos taurus taurus, na dose de 2 mg mais 1,5 mg de saponina. Em seguida, os linfonodos foram coletados e processados para análise histológica. Os cortes foram submetidos à coloração por Hematoxilina-eosina (H&E) e imunoistoquímica por peroxidase - anti - peroxidase (PAP), demonstrando que foi induzida uma resposta T- dependente, com desenvolvimento da imunidade nos animais imunizados. Além disso, se observaram claras estruturas que conferem afinidade e imunidade nos animais inoculados com o rBmseq4. Aos 21 dias após a última imunização, foi feito o desafio com 4500 larvas de R. microplus por animal. Com o começo da caída das fêmeas aos 21 dias, foram escolhidas, aleatoriamente, teleóginas de cada grupo. As fêmeas do R. microplus, alimentadas em bovinos do grupo rBmseq1 apresentaram conservação da integridade do epitélio intestinal, similar ao grupo controle. No entanto, alças intestinais de teleóginas, alimentadas em bovinos do grupo rBmseq4 mostraram desnudamento da membrana basal e erosão celular. Demonstrou-se que o peptídeo rBmseq4 possui maior capacidade de gerar uma resposta imune com habilidade para induzir reações adversas nos carrapatos R. microplus.