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Desenvolvimento osseo e dentario : aspectos biologicos, bioquimicos e moleculares da remodelação da matriz extracelular regulada pelas metaloproteinases de matriz e seus inibidores / Dental and bone development : biology, biochemistry, and molecular aspects of the matrix metalloproteinases and their inhibitors during extracellular matrix remodeling

Paiva, Katiucia Batista da Silva 14 August 2018 (has links)
Orientador: Jose Mauro Granjeiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-14T17:09:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paiva_KatiuciaBatistadaSilva_D.pdf: 3483379 bytes, checksum: 7c286d954d5465463a66555914cbdafc (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi delinear o perfil de expressão temporal e espacial das MMP-2 e -9, TIMP-1 e -2 e RECK durante os eventos de formação de tecidos mineralizados (osso, esmalte e dentina) em camundongos em fase embrionária, recém nascidos e indivíduos adultos através de imunohistoquímica e hibridização in situ. Durante a amelogênese em incisivos de rato adulto, na fase de secreção, as MMPs e RECK foram imunocoradas na região infracelular dos ameloblastos de secreção e RECK foi ainda detectado difuso no citoplasma destas células. MMP-9 foi localizada nas células do retículo estrelado e RECK nas células do epitélio externo. Na fase de transição, detectados uma fraca imunomarcação ao nível da membrana dos ameloblastos de transição para as MMPs e RECK esteve difuso no citoplasma destas células. Na camada papilar, as MMPs e RECK foram imunomarcadas nos macrófagos ou células dendríticas. Do início ao final da fase de maturação, a expressão de RECK foi aumentando nos ameloblastos de maturação e nas células da camada papilar, enquanto que a expressão das MMPs foi diminuindo nestas células. AS TIMPs foram detectadas somente nos ameloblastos na fase de maturação. Nós observamos RECK e a MMP-9 no citoplasma do odontoblastos, provavelmente, no complexo de Golgi ou na rede do retículo endoplasmático rugoso. Durante a ossificação intramembranosa da mandíbula e maxila, os osteoblastos foram imunocorados pelas MMPs, TIMPs e RECK. Na degradação da cartilagem de Meckel, MMPs, TIMPs e RECK foram imunomarcadas nas células do pericôndrio, bem como o mRNA de RECK. Durante a odontogênese, RECK foi imunocorado nas células do epitélio oral migrando ao ecto-mesênquima, na fase de broto, no epitélio interno do órgão do esmalte, na fase de capuz e em odontoblastos e ameloblastos na fase final de campânula. Transcritos de RECK foram localizados em todo o germe dentário na fase de capuz, mais concentrado no nó-do-esmalte secundário, na fase de campânula inicial e nos odontoblastos e ameloblastos, na fase final de campânula. O osso alveolar foi marcado em todos os períodos. Durante a ossificação endocondral, os condrócitos foram imunopositivos para as MMPs, TIMPs e RECK, na fase de diferenciação dos condrócitos (E13). Na fase de molde cartilaginoso (E14) os condrócitos hipertróficos foram imunocorados para as MMPs e RECK. RECK e TIMPs foram também encontradas no pericôndrio. Na fase de invasão vascular e celular (E15), MMPs, TIMPs e RECK foram expressos por células que migram do colar ósseo para o centro da diáfise, bem como por osteoclastos/condroclastos próximos ao septo transverso. Os condrócitos hipertróficos continuam imunocorados. De E16 a PN1, as MMPs, TIMPs e RECK foram expressas por osteoblastos e condrócitos hipertróficos na placa de crescimento e pelas células do periósteo e pericôndrio. Os resultados obtidos apontam para a expressão diferenciada de MMPs, TIMPs e RECK nos diversos eventos estudados, sugerindo que a atividade biológica destas proteínas regula a degradação da matriz extracelular tanto durante o desenvolvimento dos tecidos como sua manutenção. Além disso, pela primeira vez, demonstra-se a expressão de RECK pelas células formadoras de tecido ósseo e dentário. / Abstract: Our objective was to analyse the spatial-temporal distribution of MMP-2, MMP-9, TIMP-1, TIMP-2 and RECK during development of mineralized tissue (bone, enamel, and dentine) in embryos, newborn, and adult mice by immunohistochemistry and in situ hybridization. During rat amelogenesis, at the secretion phase, MMPs and RECK were immunostained in the ameloblast infracelular region and RECK was also detected in the cytoplasm of these cells. MMP-9 was localized in the stellated cells and RECK in the outer enamel epithelium cells. At the transition phase, a weak immunostaining was observed at the ameloblast membranes for MMPs and RECK. RECK was also detected in the cytoplasm of these cells. At the papillary layer, MMPs and RECK have been observed in macrophages and/or dendritic cells. At early and late maturation phases, MMPs and Reck profiles were similar to the transition phase, but the immunostaining was less pronounced. TIMPs were identified exclusively in maturation ameloblasts throughout the maturation phase. We also observed that the cytoplasm of odontoblasts, probably at the Golgi apparatus and/or the RER network were immunostained for Reck and MMP-9. During mandible and maxillae intramembranous ossification, osteoblasts were immunostained for MMPs (early stage), TIMPs (late stage) and RECK. In Meckel cartilage degradation, MMPs, RECK and TIMPs mRNA and protein were found in perichondrial cells. During odontogenesis migrating epithelial cells in bud stage, enamel inner epithelial cells in cap stage, and ameloblasts and odontoblasts in bell stage were immunostained for RECK. Also, RECK mRNA was found difuse in all tooth germ in cap stage, mainly localized in primary enamel knout in early bell stage, and in ameloblasts and odontoblasts in late bell stage. The alveolar bone was immunolabelled in all periods. During endochondral ossification, chondrocytes were immunopositive for MMPs, RECK, and TIMPs during chondrocyte differentiation (E13). At the cartilaginous template (E14), the hypertrophic chondrocytes (HC) were immunostained for MMPs and RECK. RECK and TIMPs immunopositive cells were found in the perichondrium. At the vascular and cellular invasion (E15), MMPs, RECK and TIMPs were expressed by migrating cells from bone collar as well as by osteoclasts/chondroclasts close to the transverse septum. HC remained immunostained. From E16 to PN1, MMPs, TIMPs, and RECK were expressed by osteoblasts and HC in the growth plate and by cells in the perichondrium and periosteum. The results show the differential expression of MMPs, TIMPs, and RECK during the processess studied, sugesting that the biological activity these proteins regulates the MEC degradation and its maintenance in tissue development. Our results show for the first time that RECK is expressed by bone-forming and tooth-forming cells during mouse endochondral and intramembranous and in embryonic and adult odontogenesis, even if these cells are from different embryonic origins. / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular
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Análise do padrão de expressão de MMP-2, -9 e -8 em tecido humano pulpar normal e inflamado / Analysis of the expression perfile of MMP-2, -9 and -8 in normal and inflamed human pulp tissue

Maria Cecília Ribeiro de Mattos 19 October 2009 (has links)
As metaloproteinases da matriz (MMPs) foram relacionadas a diversas doenças inflamatórias como artrite e também ao câncer. O presente trabalho tem por objetivo estabelecer o papel da MMP-2, MMP-9 e MMP-8 no processo de inflamação pulpar. Foram adotadas as seguintes hipóteses nulas: (1) o padrão de expressão das MMP-2, MMP-9 e MMP-8 não sofre alteração nos diferentes estágios da polpa humana: normal, reversível, transição, irreversível ou necrose; (2) não há diferença de expressão das MMP-2, -9 e MMP-8, considerando-se um mesmo estágio de inflamação tecidual pulpar. Os métodos utilizados foram: (I) Obtenção dos espécimes, que foram divididos em grupos de acordo com critérios adotados de semiologia subjetiva e objetiva. Obtiveram-se os seguintes grupos: GI (Controle) dentes hígidos (n=7); GII (Pulpite Reversível n=4); GIII (Pulpite Transição n=4); GIV (Pulpite Irreversível/Necrose n=8). Logo após exodontia, os dentes obtidos foram cortados ligeiramente abaixo da junção amelodentinária e fixados em formol a 10% por 48h. Foram lavados em água corrente (24h) para então serem processados histologicamente. Foram obtidas secções de 4m, aderidas em lâminas silanizadas e submetidas à imunomarcação (Técnica da Peroxidase), utilizando os anticorpos anti MMP-2, MMP-9 e MMP-8 humanos. A presença de imunomarcação foi realizada através da análise semi-quantitativa por escores, sendo que a quantificação de marcação por corte seguiu o seguinte escore: 0= ausente; 1= leve; 2= moderada; 3= intensa. Realizou-se teste estatístico não paramétrico Kruskal-Wallis, p<0,05. As comparações intergrupos revelaram, para CO: (1)MMP-2 - GI=GII=GIII, GIII=GIV, GI>GIV (p<0,01) e GII>GIV (p<0,05); (2)MMP-9 GI=GII=GIV, GII=GIII e GIII>GI (p<0,01); (3)MMP-8 GI=GII=GIII=GIV. Na região central da polpa, obteve-se: (1)MMP-2 GI=GII=GIII, GIII=GIV, GI>GIV (p<0,001) e GII>GIV (p<0,01); (2)MMP-9 GI=GII=GIII, GIII=GIV, GIV>GI (p<0,001) e GIV>GII (p<0,01); (3)MMP-8 GI=GII, GIII=GIV, GIII>GI (p<0,05), GIV>GI (p<0,01), GIII>GII (p<0,05) e GIV>GII (p<0,05). Quanto às comparações intragrupos, na CO mostraram: (1)GI - MMP-2>MMP9 (p<0,001), MMP-2=MMP-8 e MMP-9=MMP-8; (2)GII MMP-2>MMP-9 (p<0,01); MMP-2=MMP-8 e MMP-9=MMP-8; (3)GIII e GIV MMP-2=MMP-9=MMP-8. Para a região mais central da polpa: (1)GI e GII MMP-2=MMP-9=MMP-8; (2)GIII MMP9>MMP-2 (p<0,05), MMP- 2=MMP-8 e MMP-9=MMP-8; (3)GIV MMP-9>MMP-2 (p<0,01), MMP-2=MMP-8 e MMP-9=MMP-8. Sendo assim, as duas hipóstese nulas foram rejeitadas. Conclui-se ainda que MMP-2, MMP-9 e MMP-8 atuam no processo de inflamação pulpar de maneira distinta na CO e polpa central; MMP-2 é mais expressa em polpa sadia; a maior expressão de MMP-9 relaciona-se à presença de inflamação pulpar; em polpas inflamadas, a expressão de MMP- 8 é maior quando comparadas a polpas normal, embora tal enzima seja também levemente expressada em tecido pulpar normal. / The matrix metalloproteinases (MMPs) have been related to various inflammatory diseases, such as arthritis, as well as to cancer. The aim of the present study was to establish the role of MMP-2, MMP-9 and MMP-8 in the process of dental pulp inflammation. The following null hypotheses were adopted: (1) the pattern of MMP-2, MMP-9 and MMP-8 expression does not undergo alteration in the following different stages of human pulp: normal, reversible, transition, irreversible or necrosis; (2) there is no difference in the expression of MMP-2, -9 and MMP-8, when considering the same stage of pulp tissue inflammation. The methods used were: (I) Obtainment of specimens, which were divided into groups according to the subjective and objective criteria of semiology adopted. The following groups were obtained: GI (Control) healthy teeth (n=7); GII (Reversible Pulpitis n=4); GIII (Transition Pulpitis n=4); GIV (Irreversible Pulpitis/Necrosis n=8). Soon after extraction the teeth obtained were cut slightly below the amelodentinal junction and fixed in 10% formol for 48h. They were washed under running water (24h) and were histologically processed afterwards. Sections of 4m were obtained, adhered to silanized slides, and submitted to immunomarking (Peroxidase Technique), using human anti MMP-2, MMP-9 and MMP- 8 antibodies. The presence of immunomarking was determined through semi-quantitative analysis by scores, and marking by cut was quantified using the following score: 0= absent; 1= slight; 2= moderate; 3= intense. The Kruskal-Wallis non-parametric statistical test was performed, p<0.05. Intergroup comparisons revealed the following: for CO: (1)MMP-2 - GI=GII=GIII, GIII=GIV, GI>GIV (p<0.01) and GII>GIV (p<0.05); (2)MMP-9 GI=GII=GIV, GII=GIII and GIII>GI (p<0,01); (3)MMP-8 GI=GII=GIII=GIV. In the central region of the pulp, the following results were obtained: (1)MMP-2 GI=GII=GIII, GIII=GIV, GI>GIV (p<0.001) and GII>GIV (p<0.01); (2)MMP-9 GI=GII=GIII, GIII=GIV, GIV>GI (p<0.001) and GIV>GII (p<0.01); (3)MMP-8 GI=GII, GIII=GIV, GIII>GI (p<0.05), GIV>GI (p<0.01), GIII>GII (p<0.05) and GIV>GII (p<0.05). With regard to intragroup comparisons, in CO the following were shown: (1)GI - MMP-2>MMP9 (p<0.001), MMP-2=MMP-8 and MMP-9=MMP-8; (2)GII MMP-2>MMP-9 (p<0.01); MMP-2=MMP-8 and MMP-9=MMP-8; (3)GIII and GIV MMP- 2=MMP-9=MMP-8. For the most central region of the pulp: (1)GI and GII MMP-2=MMP- 9=MMP-8; (2)GIII MMP9>MMP-2 (p<0.05), MMP-2=MMP-8 and MMP-9=MMP-8; (3)GIV MMP-9>MMP-2 (p<0.01), MMP-2=MMP-8 and MMP-9=MMP-8. Therefore, the two null hypotheses were rejected. Moreover, it was concluded that MMP-2, MMP-9 and MMP-8 act in the process of pulp inflammation in a distinct manner in CO and central pulp; more MMP-2 is expressed in healthy pulp; the highest expression of MMP-9 is related to the presence of pulp inflammation; in inflamed pulp, the expression of MMP-8 is higher when compared with that of normal pulp, although this enzyme is also slightly expressed in normal pulp tissue.
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Resistência de união de uma resina composta à dentina normal e erodida: o papel da aplicação de soluções de clorexidina em diferentes concentrações após seis meses e um ano de envelhecimento / Bond strength of a composite resin to normal and eroded dentin: the role of the application of chlorhexidine solutions in different concentrations after sixmonths and one-year of aging

Luciana Fávaro Francisconi 10 August 2012 (has links)
A aplicação de soluções de digluconato de clorexidina (CHX), em diferentes concentrações, tem demonstrado potencial em prevenir a progressão da erosão dentinária in situ e a diminuição, com o passar do tempo, dos valores de resistência de união (RU) de resinas compostas (RC) à dentina normal ou afetada por cárie. Entretanto, seu papel na adesão à dentina já erodida é desconhecido. Este estudo se propôs, portanto, a avaliar o efeito da aplicação de soluções de CHX em diferentes concentrações na RU de uma RC à dentina normal (parâmetro para comparações) e à dentina erodida, ao longo do tempo. Terceiros molares humanos hígidos extraídos (n=48) tiveram seu terço oclusal seccionado e as superfícies dentinárias expostas foram somente submetidas à ação de uma lixa de carbeto de silício de granulação 600/1 min (dentina normal-N, n=24), ou subsequentemente erodidas por um refrigerante a base de cola (imersões de 5 min, 3x/dia, 5 dias; dentina erodida-E, n=24). Foram, então, condicionadas (H3PO4 a 37%; 15 s), lavadas, secas e reidratadas com 1,5 L, respectivamente, de água deionizada (controle-NC, n=8 / EC, n=8), de CHX a 0,004% (N0,004%, n=8 / E0,004%, n=8) ou de CHX a 2% (N2%, n=8 / E2%, n=8). O sistema adesivo AdperTMSingle Bond 2® foi aplicado em todos os espécimes e a porção coronária foi incrementalmente reconstruída com a RC FiltekTMZ350®. Depois de armazenados em água deionizada (24 h, 37oC), os espécimes foram seccionados em palitos (secção transversal 0,81 mm2), que foram testados, sob força de tração (EMIC; célula de carga de 50 kgf; 0,5 mm/minuto), imediatamente ou depois de 6 meses ou 1 ano de envelhecimento. As falhas foram analisadas e classificadas em adesivas, mistas, coesivas em dentina ou em resina. Paralelamente, avaliou-se a qualidade da hibridização para cada grupo experimental, por meio da obtenção de imagens em microscopia confocal de varredura a laser de um espécime por grupo, hibridizado pelo mesmo adesivo, mas marcado pela adição de rodamina B, e seccionado apenas no sentido mésio-distal. Os dados obtidos da microtração foram analisados por meio dos testes de ANOVA a três critérios e de Tukey (p<0,05). Os valores médios de RU (MPa±dp; imediatamente / 6 meses / 1 ano) foram: NC (34,74±9,79 / 20,77±14,35 / 7,58±4,94); N0,004% (35,69±9,85 / 23,10±8,13 / 13,82±10,12); N2% (41,22±5,38 / 34,64±6,62 / 13,25±4,83); EC (20,94±5,37 / 7,87±8,81 / 5,43±4,99); E0,004% (22,12±7,44 / 3,47±6,25 / 4,97±3,11); E2% (15,97±5,17 / 22,23±9,12 / 5,41±5,47). Falhas adesivas e/ou mistas consistiram-se nas preponderantemente observadas. Os valores de RU da RC à dentina erodida foram sempre inferiores àqueles da RC à dentina normal. Tais valores, para ambas as condições de dentina, experimentaram redução significante com o passar do tempo, mas a aplicação da solução de CHX a 2% foi capaz de mantê-los estáveis até os 6 meses de envelhecimento dos espécimes. Portanto, a aplicação de soluções de CHX, a 2%, apresenta-se como uma estratégia promissora para conservar a RU de resinas compostas tanto à dentina normal quanto à dentina erodida. Com o tempo, no entanto, seu efeito pode tornar-se reduzido ou irrelevante. / The application of chlorhexidine digluconate (CHX) solutions, in different concentrations, has shown potential in preventing the progression of dentin erosion in situ and the decline, in the course of time, of the bond strength (BS) values of composite resins (CR) to normal or caries-affected dentin. However, its role on adhesion to already eroded dentin is unknown. This study aimed, therefore, to evaluate the effect of the application of CHX solutions in different concentrations on BS of a CR to normal (parameter for comparisons) and to eroded dentin over time. Extracted sound human third molars (n=48) had their occlusal thirds sectioned and exposed flat dentin was only submitted to a 600-grit SiC paper/1min (normal dentin- N, n=24), or subsequently eroded by a regular-cola soft-drink (5-min immersions, 3x/day, 5 days; eroded dentin-E, n=24). They were, then, acid-etched (37% H3PO4; 15 s), washed, vigorously dried, and rehydrated with 1.5 L, respectively, of deionized water (control-NC, n=8 / EC, n=8); of 0.004% CHX (N0.004%, n=8 / E0.004%, n=8); or of 2% CHX (N2%, n=8 / E2%, n=8). AdperTMSingle Bond 2® was applied in all specimens and composite core buildups were incrementally constructed with FiltekTMZ350®. After storage in deionized water (24 h, 37°C), specimens were sectioned in beams (cross-section 0.81 mm2), which were tested, under tensile (EMIC; 50 kgf load cell; 0.5 mm/minute), immediately or after 6 months or 1 year of aging. Failures were analyzed and classified in adhesive, mixed, cohesive in dentin or in resin. In parallel, the quality of the hybridization for each experimental group was evaluated, by means of the obtainment of laser scanning confocal microscopy images from one specimen per group, hybridized with the same adhesive, but marked by the addition of rhodamine B and sectioned only mesiodistally. Microtensile data were analyzed by three-way ANOVA and Tukey tests (<0.05). Mean TBS values (MPa±sd; immediately / 6 months / 1 year) were: NC (34,74±9,79 / 20,77±14,35 / 7,58±4,94); N0,004% (35,69±9,85 / 23,10±8,13 / 13,82±10,12); N2% (41,22±5,38 / 34,64±6,62 / 13,25±4,83); EC (20,94±5,37 / 7,87±8,81 / 5,43±4,99); E0,004% (22,12±7,44 / 3,47±6,25 / 4,97±3,11); E2% (15,97±5,17 / 22,23±9,12 / 5,41±5,47). Adhesive and/or mixed failures consisted in the mainly observed ones. BS values of the CR to the eroded dentin were always lower than that of the CR to the normal dentin. These values, to both dentin conditions, experienced a significant reduction in the course of time, but application of the 2% CHX solution was able to keep them stable until 6-months aging of the specimens. Therefore, the application of CHX solutions, at 2%, is presented as a promising strategy to conserve BS both to normal and to eroded dentin. Over time, however, its effect may become reduced or irrelevant.
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Efeito do flavonÃide epigalocatequina-3-galato na resistÃncia de uniÃo de sistema adesivo de condicionamento total à dentina. / Influence of the flavonoid epigallocatechin-3-gallate on the bond strength of adhesive system to dentin

Jiovanne Rabelo Neri 18 January 2011 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O objetivo desse estudo in vitro foi avaliar o efeito do flavonÃide epigalocatequina-3-galato (EGCG) na resistÃncia de uniÃo à dentina nos perÃodos imediato e apÃs 6 meses de armazenamento. Trinta terceiros molares humanos recÃm-extraÃdos tiveram o esmalte oclusal removidos, obtendo-se uma superfÃcie plana de dentina. Os dentes foram divididos em 5 grupos (n=6) de acordo com a soluÃÃo de re-hidrataÃÃo da dentina. As superfÃcies expostas de dentina foram condicionadas com Ãcido fosfÃrico a 35% por 15s, lavadas por 30s, e secas com jatos de ar. Os dentes dos grupos G1, G2, G3, G4 e G5 foram re-hidratados, respectivamente, com Ãgua destilada, EGCG a 0,02%, 0,1%, 0,5% e clorexidina a 2%. Cada soluÃÃo de re-hidrataÃÃo foi mantida em contato coma superfÃcie dentinÃria por 60s. O sistema adesivo - Adper Single Bond 2 (3M ESPE) foi aplicado de acordo com a instruÃÃes do fabricante. Cinco incrementos de 1 mm de espessura de resina composta foram aplicados e fotoativados individualmente por 20 segundos. Os dentes foram armazenados em Ãgua destilada a 37ÂC por 24h. Em seguida, foram confeccionados cortes seriados perpendiculares entre si, atravÃs da interface de uniÃo, para obter espÃcimes em forma de palito com a Ãrea de secÃÃo transversal de aproximadamente 1 mm2. Metade dos espÃcimes foi testada imediatamente enquanto a outra metade foi armazenada em soluÃÃo de azida de sÃdio a 0,3 mMol/l a 37ÂC por seis meses. Cada espÃcime foi tracionado a velocidade de 0,5mm/minuto em uma mÃquina universal de ensaios. Os valores de resistÃncia de uniÃo foram estatisticamente avaliados por ANOVA a dois critÃrios e Student-Newman-Keuls, com nÃvel de significÃncia de 95%. A mÃdia (desvio padrÃo) dos valores de resistÃncia de uniÃo (em MPa) foram os seguintes: No perÃodo imediato - G1= 34,17 (7,75); G2= 31,39 (7,82); G3= 34,74 (9,14); G4= 27,11 (7,78); G5= 34,68 (7,30). No perÃodo de 6 meses - G1= 27,67 (6,98); G2= 31,75 (10,58); G3= 35,99 (10,91); G4= 31,18 (9,29); G5= 31,62 (5,78). O EGCG a 0,02 % e a 0,1% nÃo afetou a resistÃncia de uniÃo, no perÃodo imediato (p>0,05). ApÃs 6 meses de armazenamento, o EGCG em diferentes concentraÃÃes manteve a resistÃncia de uniÃo. EGCG pode ser usado como uma alternativa para melhorar a durabilidade das restauraÃÃes adesivas, pois preserva a resistÃncia de uniÃo das interfaces.
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Alterações das concentrações plasmáticas de troponina I e de metaloproteinases 2 e 9 da matriz extracelular após embolia aguda em cães / Severity dependent increases in circulating cardiac troponin I and MMP-2 and 9 concentrations after experimental acute pulmonary thromboembolism

Juliana Alves Uzuelli 07 February 2008 (has links)
O diagnóstico da tromboembolia pulmonar aguda (EPA) e a avaliação da gravidade desta condição é desafiador. Enquanto as concentrações de troponina I cardíaca (TI) já estão bem estabelecidas quanto ao risco de estratificação, não há estudos prévios que tenham examinado se há alguma relação linear entre as concentrações de TI cardíaca e a gravidade da EPA. Além disso, as metaloproteinases (MMPs) da matriz extracelular estão envolvidas na fisiopatologia da EPA. Entretanto, é desconhecido se o aumento da atividade gelatinolítica das MMPs após a EPA reflete a gravidade desta condição. Nós examinamos se as concentrações circulantes destes biomarcadores aumentam em proporção à gravidade da EPA experimental induzida em cães anestesiados. A EPA foi induzida com coágulos de sangue autólogo (salina, 1, 3 ou 5 mL/Kg) injetados no átrio direito. As avaliações hemodinâmicas foram realizadas no momento basal e 120 minutos após a EPA. Da mesma forma, foram realizadas as quantificações de troponina I no soro e a zimografia das MMPs 2 e 9 no plasma. Nossos resultados sugerem não haver aumento significativo da atividade gelatinolítica da pró-MMP-2 no plasma após a EPA, enquanto que a atividade da pró-MMP-9 aumenta em 80% apenas no grupo que recebeu 5 mL/Kg de coágulos. A TI cardíaca no soro e a atividade da pró-MMP-9 no plasma tiveram uma correlação positiva com o índice de resistência vascular pulmonar (p=0,007 e rs=0,833 para a TI, e p=0,034 e rs=0,684 para a pró-MMP-9) e com a pressão média na artéria pulmonar (p=0,005 e rs=0,610 para a TI, e p=0,022 e rs=0,720 para a pró-MMP-9). Concluímos que a TI cardíaca e a pró-MMP-9 circulantes aumentam em proporção à gravidade da EPA, embora o aumento da pró-MMP-9 não seja muito evidente em graus menos severos da EPA. Estes achados podem ser relevantes para a clínica da EPA. / Making the diagnosis of acute pulmonary thromboembolism (APT) and assessing its severity is very challenging. While cardiac troponin I (CTI) levels are promising in risk stratification, no previous study has examined whether there is a linear relation between CTI levels and the severity of APT. Moreover, matrix metalloproteinases (MMPs) are involved in the pathophysiology of APT. However, it is unknown whether the increases in MMP levels after APT reflect the severity of this condition. We examined whether the circulating levels of these biomarkers increase in proportion to the severity of experimental APT induced in anesthetized dogs. APT was induced with autologous blood clots (saline, 1, 3, or 5 mL/kg) injected into the right atrium. Hemodynamic evaluations were carried out for 120 min. Gelatin zymography of MMP-2 and MMP-9 from plasma samples were performed and serum CTI levels were determined at baseline and 120 min after APT. Our results sugest that while no significant increases in pro-MMP-2 levels were found after APT, pro-MMP-9 levels increased by 80% only after 5 mL/kg of clot embolization. Serum CTI and plasma pro-MMP-9 levels correlated positively with pulmonary vascular resistance (p=0.007 and rs=0.833 for troponin I, and p=0.034 and rs=0.684 for pro-MMP-9) and with pulmonary artery pressure (p=0.005 and rs=0.610 for troponin I, and p=0.022 and rs=0.720 for pro-MMP-9). We conclude that circulating CTI and pro-MMP-9 increase in proportion to the severity of APT, although the increases in plasma pro-MMP-9 are less clear with less severe APT. These findings may be relevant for clinical APT.
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Avaliação de polimorfismos dos genes das metaloproteinases da matriz no câncer de próstata / Evaluation of polymorphisms of matrix metalloproteinases genes in prostate cancer

Sabrina Thalita dos Reis 12 September 2008 (has links)
Introdução: O Câncer de próstata (CaP) é o mais comum do homem brasileiro. É importante a identificação de alterações moleculares que possam prever o seu desenvolvimento e potencial biológico. Polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) são alterações da seqüência do DNA onde somente uma base é trocada com uma freqüência superior a 1% na população, que podem levar a modificações estruturais e funcionais na proteína, ou afetar a sua quantidade, e podem constituir marcadores de predisposição e prognóstico de neoplasias. Metaloproteinases (MMP) são proteínas da família de enzimas proteolíticas, que degradam a matriz extracelular, e SNP na sua estrutura têm sido associados ao comportamento de tumores. Objetivos: Avaliar a freqüencia de SNP nos genes das MMP1, 2, 7 e 9, em pacientes com CaP e grupo controle, relacionando com suscetibilidade para o desenvolvimento da doença e previsão de seu potencial biológico. Material e Métodos: A amostra é constituída por tecido não tumoral de 100 indivíduos com CaP, e 100 amostras controle representadas por soro de indivíduos saudáveis, sem câncer de próstata. O DNA foi obtido utilizando protocolos convencionais de extração. Para genotipagem foi utilizada técnica de identificação de base única com uso de sondas marcadas com fluoróforos (Taqman®) pela técnica de reação em cadeia da polimerase em tempo real. As freqüências alélicas foram calculadas e a comparação entre os grupos foi feita utilizando-se o teste de qui-quadrado com valor de significância de 0,05. Resultados: Nos genes das MMP1 a freqüência do genótipo homozigoto polimórfico esteve mais presente no grupo controle que no CaP (p>0,001). No gene da MMP9 o alelo polimórfico esteve mais presente em pacientes com CaP (p>0,001), e em tumores com escore de Gleason6 (p=0,003). No gene da MMP2 de acordo com estadiamento patológico o alelo polimórfico foi mais freqüente em tumores pT3 (p=0,026) e Gleason maior ou igual a 7(p=0,042). Conclusão: Nossos resultados sugerem que o polimorfismo no gene da MMP1 está associado a um caráter de proteção aos indivíduos quanto ao desenvolvimento do CaP. O polimorfismo no gene da MMP9 está associado a um aumento no risco de desenvolvimento desta neoplasia, e quando analisamos as associações com os fatores prognósticos encontramos uma correlação com tumores de melhor prognóstico. Por outro lado o polimorfismo do gene da MMP2 se associa a tumores não órgãoconfinados / Introduction: Prostate cancer (PCa) is the most frequent tumor in males in Brazil. Research has been directed for the identification of molecular markers that can predict the PCa predisposition and prognosis. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) are genome variations, present in a frequency of 1% or more. The matrix metalloproteinases (MMPs) are a family of enzymes responsible for the degradation of extracellular matrix. SNPs have been demonstrated in the promoter region of these genes and have been associated with development and progression of some cancers. Objective: To investigate the correlation between polymorphisms of MMP1, 2, 7, 9 with susceptibility and classical prognostic parameters in PCa. Patients and methods: The sample is constituted by normal tissue of 100 patients with PCa, and 100 healthy men as controls (serum). DNA genomic was extracted from paraffin blocks and serum using conventional protocols. The DNA sequence containing the polymorphic sites was amplified by Real-Time polymerase chain reaction, using fluorescent probes (Taqman®). The allelic frequency was calculated and the comparison between the groups was made using the qui-square test with value of significance of 0.05. Results: The polymorphic homozygote genotype of the MMP1 was more frequent in the control group than in the PCa (p<0.001). The polymorphic allele of MMP9 was more frequent in the PCa group (p<0.001), and in tumors Gleason6 (p=0,003). The polymorphic allele of MMP2 was more frequent in tumors of higher stage (pT3) (p=0.026) and higher Gleason Score (7) (p=0.042). Conclusion: We have shown that MMP1 polymorphism is more frequent in the control group, than in patients with PCa, it may be associated to protection for the development of PCa. The MMP9 polymorphism was related to higher risk for development of this neoplasia, but associated with lower Gleason score. MMP2 polymorphism was associated with non organconfined disease.
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Influência do pH na atividade funcional de enzimas endógenas (metaloproteinases -2 e -9) que degradam a matriz de colágeno da dentina coronária e radicular humana / pH-influence on the functional activity of endogenous enzymes (metaloproteinases -2 and -9) that degrade collagen matrix of coronal and radicular human dentin

Stella da Silva Ferreira 29 January 2015 (has links)
As metaloproteinases da matriz (MMPs) são uma família de endopeptidades cálcio e zinco dependentes que participam da degradação de praticamente todos os componentes da matriz extracelular. Com o pressuposto de que estas enzimas podem estar relacionadas à progressão da erosão dental e que os agentes ácidos causadores da erosão podem influenciar na ativação das MMPs, o objetivo desse estudo in vitro foi avaliar a influência do pH sobre a atividade funcional das MMP-2 e -9 presentes na dentina coronária e radicular humana. O pó das dentinas coronária e radicular, provenientes de terceiros molares inclusos recém extraídos foi obtido separadamente e submetido ao protocolo de extração das proteínas, com ácido fosfórico a 1%. Após, o extrato contendo as proteínas e o pó de dentina parcialmente desmineralizado foram incubados em uma das respectivas soluções: solução 2 mM de APMA (acetato de 4-aminofenilmercúrio / grupo controle) ou em uma das soluções tampão (fosfato de potássio 0.1 M) com diferentes pHs (2.5, 4.5, 5.0, 6.0 e 7.0). Após a incubação, as proteínas foram separadas por eletroforese, em um gel de poliacrilamida copolimerizado com gelatina, para a avaliação da atividade gelatinolítica das MMPs, por zimografia. Esta análise foi realizada em triplicada e os zimogramas obtidos ao final foram avaliados por densitometria. A quantificação das bandas observadas nos zimogramas foi realizada pelo programa de imagens ImageJ e os dados avaliados de maneira descritiva e qualitativa. Para a avaliação do conteúdo de colágeno solubilizado, o pó de dentina parcialmente desmineralizado e incubado nos respectivos pHs (n = 8) foi mantido em um tampão de incubação durante 24h, e o conteúdo de hidroxiprolina (HYP) liberado neste meio foi mensurado em espectrofotômetro. Os dados obtidos foram avaliados estatisticamente por ANOVA 1 fator, seguido do teste de Tukey, com 5% de significância. A análise por zimografia mostrou bandas evidentes correspondente a MMP-2 na sua forma ativa (66kDa) e bandas menos expressivas relacionadas a sua forma latente (72kDa), tanto para a dentina coronária quanto para a radicular, em todos os grupos experimentais. Não foram identificadas bandas correspondentes a MMP-9, para nenhum dos substratos avaliados. As soluções com os menores pHs (2.5, 4.5 e 5.0) resultaram na maior atividade funcional da MMP-2, em comparação as soluções com os maiores pHs (6.0 e 7.0), em ambos os substratos. Para a análise de HYP, os grupos pH 2.5 e pH 4.5 mostraram valores de absorbância abaixo do limite de detecção do aparelho. Para os demais grupos experimentais, tanto para a dentina coronária quanto para a radicular, foram encontradas diferenças estatisticamente significantes entre eles (p < 0,05). O conteúdo de HYP liberada foi maior para o pH 7.0, comparado aos demais grupos (p < 0,05), exceto para o pH 6.0. Não foi encontrada diferença estatisticamente significante entre os grupos pH 6.0, pH 5.0 e controle (p > 0,05). Conclui-se que a atividade funcional da MMP-2 é dependente do pH. Os menores pHs promoveram um aumento na ativação da MMP-2 da dentina coronária e radicular humana. Nota-se em pHs próximos ao neutro, uma maior degradação da matriz orgânica dentinária desmineralizada por essas enzimas endógenas. / Matrix metalloproteinases (MMPs) are a family of endopeptidades calcium and zinc dependent that participate in the degradation of pratically all components of the extracellular matrix. With the assumption that these enzymes may be related to the progression of dental erosion and acidic agents that cause erosion can influence the activation of MMPs, the aim of this in vitro study was to evaluate the pH-influence on the functional activity of MMP-2 and -9 present in human coronal and root dentin. The powder of root and coronal dentine, from freshly extracted third molars was separately obtained and subjected to protein extraction protocol, with 1% phosphoric acid. After, the extract containing proteins and the partially demineralized powder were incubated in one of the following solutions: 2 mM APMA (4-aminophenylmercuric acetate / control) or one of the buffer solutions (0.1 M potassium phosphate) with different pHs (2.5, 4.5, 5.0, 6.0 and 7.0). After incubation, the proteins were separated by electrophoresis in a polyacrylamide gel copolymerized with gelatin, to evaluate the gelatinolytic activity of MMPs by means of zymography. This analysis was performed in triplicate and the zymograms obtained were evaluated by densitometry. Quantification of the bands observed in zymograms was performed by ImageJ software and the data were evaluated descriptively and qualitatively. To assess the solubilized dentin collagen, the partially demineralized dentin powder treated with different pHs (n=8) was incubated in an artificial saliva for 24 h, and the amount of hydroxyproline (HYP) released in media was measured by spectrophotometer. Data were statistically analyzed by ANOVA one factor, followed by the Tukey\'s test, with 5% significance. Zymography showed evident bands corresponding to active MMP-2 (66kDa) and less expressed bands related to its latent form (72kDa), for both coronal and root dentin, in all experimental groups. No bands corresponding to MMP-9 were identified, for both substrates. The lowest pH solutions (2.5, 4.5 and 5.0) yielded the higher functional activity than did the highest pH solutions (6.0 and 7.0), for both substrates. For HYP analysis, the groups pH 2.5 and pH 4.5 showed absorbance values below the detection limit of the equipment. For the other groups, for both coronal and root dentin, statistically significant diferences were found between them (p<0.05). The amount of HYP was higher for pH 7.0 than all other groups (p<0.05), except for pH 6.0. No statistical difference was found between pH 6.0, pH 5.0 and control (p>0.05). It can be concluded that the functional activity of MMP-2 is pH-dependent. Low pH solutions are able to increase the activation of human coronal and root MMP-2. It is noted in pHs close to neutral, a higher degradation of demineralized dentin organic matrix by these endogenous enzymes.
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Avaliação das alterações morfológicas, da expressão imunoistoquímica de metaloproteinases de matriz e da atividade gelatinolítica em dentes expostos à radioterapia na região de cabeça e do pescoço / Evaluation of morphological changes, immunohistochemical expression of matrix metalloproteinases and gelatinolitic activity in teeth exposed to radiotherapy in the head and neck area

Silva, Wagner Gomes da, 1990- 25 August 2018 (has links)
Orientadores: Mário Fernando de Góes, Alan Roger dos Santos Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-25T14:50:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_WagnerGomesda_M.pdf: 3135648 bytes, checksum: 61c724ad2dea362d9e0c9ac978529067 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A cárie relacionada à radioterapia (CRR), também conhecida como "cárie de radiação", é uma grave toxicidade bucal que acomete pacientes oncológicos submetidos à radioterapia (RDT) na região de cabeça e pescoço. Apesar de ser atribuída principalmente aos efeitos indiretos da RDT, como a hipossalivação, a CRR também é associada a efeitos diretos da radiação sobre o esmalte, a dentina e a polpa dental. Desta forma, o objetivo deste estudo foi testar a hipótese nula de que a RDT não é capaz de gerar danos diretos aos componentes micromorfológicos da matriz inorgânica e orgânica dos dentes de pacientes com câncer de cabeça e pescoço (CCP). Um total de 39 dentes, incluindo 22 que receberam RDT in vivo e 17 dentes não irradiados provenientes de pacientes com CCP, foram agrupados em dois eixos experimentais que avaliaram cortes histológicos preparados por desgaste (grupo experimental I) e por desmineralização (grupo experimental II). No grupo I, investigou-se a preservação da micromorfologia dos tecidos dentários; bem como a atividade gelatinolítica por meio da zimografia in situ. No grupo II, investigou-se a preservação da micromorfologia dos tecidos dentários; bem como a expressão imunoistoquímica de MMP-2, MMP-9 e MMP-20. Foi constatada preservação estrutural de todos os componentes micromorfológicos analisados, alta atividade gelatinolítica em dentina desmineralizada e intensa expressão de MMP-2, MMP-9 e MMP-20 em diferentes áreas de todos os espécimes avaliados. Contudo, não foi possível identificar diferenças significativas entre os espécimes irradiados e não irradiados em nenhuma das análises estatísticas. A hipótese nula teste não foi rejeitada e os resultados deste estudo sugerem que a ação direta da RDT não é capaz de gerar destruição radiogênica da matriz inorgânica ou orgânica dos dentes de pacientes com CCP e que, possivelmente, os efeitos diretos da RDT sobre a estrutura dentária não são determinantes para o início ou progressão da CRR / Abstract: Radiation-Related Caries (RRC), also known as "radiation caries" is a severe oral toxicity that affects cancer patients who have undergone radiotherapy (RDT) in the head and neck area. Although mainly attributed to the indirect effects of RDT, such as hyposalivation, RRC is also associated with direct effects of radiation on the enamel, dentin and dental pulp. Therefore, the aim of this study was to test the null hypothesis that RDT is not able to generate direct damage to the micromorphological components of inorganic and organic matrix of teeth from patients with head and neck cancer (HNC). A total of 39 samples, including 22 teeth that received in vivo RDT and 17 teeth from non-irradiated patients with HNC were grouped into two experimental groups that evaluated ground sections (experimental group I) and histological sections prepared by demineralization (experimental group II). In group I, the preservation of the micromorphological components of dental tissues as well as the gelatinolytic activity by in situ zymography were investigated. In group II, the preservation of micromorphological components of dental tissues and the immunohistochemical expression of MMP-2, MMP-9 and MMP-20 were investigated. Structural preservation of all micromorphological components analyzed, a high gelatinolitic activity in demineralized dentin and intense expression of MMP-2, MMP-9 and MMP-20 were found in different areas of all specimens evaluated. However, it was not possible to identify significant differences between irradiated and non-irradiated specimens in any of the statistical analyses. The null hypothesis was not rejected and the results of this study suggest that direct effects of RDT are not able to generate morphological radiogenic destruction of inorganic or organic teeth matrix of HNC patients, and, possibly, the direct effects of RDT on the dental tissues are not decisive to the onset and progression of RRC / Mestrado / Patologia / Mestre em Estomatopatologia
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Análise dos mecanismos envolvidos na destruição tecidual periodontal em ratos obesos com doença periodontal experimental / Analysis of mechanisms involved in periodontal tissue destruction in obese rats with experimental periodontal disease

Bianchi, Henrique de Oliveira, 1988- 21 August 2018 (has links)
Orientador: Dagmar Ruth Stach Machado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T15:02:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bianchi_HenriquedeOliveira_M.pdf: 6836642 bytes, checksum: aae9f7b606a807a8c74a13a7677091c7 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A doença periodontal (DP) é uma doença inflamatória crônica que acomete os tecidos que suportam o dente, podendo resultar na perda dentária. O agente etiológico da DP é a placa bacteriana que se forma junto ao dente, no entanto, é a resposta imune do hospedeiro que vai determinar a suscetibilidade ao desenvolvimento e a progressão da DP. Uma resposta imune com perfil pró inflamatório, representado por linfócitos T helper (Th) 1 e Th17, leva à progressão da DP, enquanto que com perfil antiinflamatório, representado por linfócitos Th2 e T regulatórios, não há desenvolvimento da doença. Citocinas pró-inflamatórias induzem a expressão de metaloproteinases de matriz (MMP) e inibem a expressão de seus inibidores, os inibidores teciduais de metaloproteinases de matriz (TIMP). O desequilíbrio dos níveis de MMPs/TIMPs é responsável pela degradação da matriz extracelular, presente na DP. Essa resposta pró-inflamatória também leva os desbalanço da expressão do ligante do receptor ativador do fator nuclear kappa B (RANKL) e seu inibidor, a osteoprotegerina (OPG), resultando na reabsorção do osso alveolar, o ponto chave da lesão tecidual na DP. Indivíduos obesos apresentam maior predisposição ao desenvolvimento da DP e apresentam uma maior severidade da doença. Desse modo, o presente trabalho teve como objetivo analisar a influência da obesidade nas alterações gênicas e protéicas associadas à resposta inflamatória e à destruição tecidual durante o desenvolvimento e progressão da DP induzida por ligadura em ratos. A obesidade induzida por dieta hiperlipídica (DHL) foi caracterizada por intolerância à glicose, glicemia elevada, elevado índice de Lee, alterações hepáticas, aumento do peso das gorduras viscerais, hiperinsulinemia e alterações nos níveis plasmáticos de colesterol. Animais do grupo DHL apresentaram uma maior expressão gênica e protéica de citocinas pró-inflamatórias no tecido gengival acometido pela DP. Em especial, a expressão da interleucina (IL) 17, da IL6 e do interferon gama (IFNG) foi significativamente maior em relação ao grupo alimentado com ração normolipídica. Não foram observadas diferenças muito significativas entre os dois grupos na expressão das citocinas antiinflamatórias IL4, IL10 e fator de transformação do crescimento beta (Tgfb). O grupo DHL apresentou um aumento da expressão gênica de MMPs, em especial da Mmp13, e uma diminuição na expressão de Timp1, Timp2 e Reversion Inducing Cysteine-rich Protein with Kazal Motifs (Reck). Ademais, foi observado um aumento significativo da razão Rankl/Opg no grupo DHL, acompanhado de maior reabsorção do osso alveolar. A alimentação com a dieta hiperlipídica induziu alterações metabólicas características da obesidade, que resultaram na exacerbação da resposta inflamatória no tecido gengival com DP. Essa resposta pró-inflamatória, polarizada para os perfis Th1 e Th17, levou ao desbalanço da expressão gênica das razões MMPs/TIMPs e Rankl/Opg. Por fim, a desregulação dos mediadores da destruição tecidual e de seus inibidores resultou no agravamento da DP, com aumento da reabsorção do osso alveolar. Desse modo, esse trabalho possibilitou relacionar o estado obeso à progressão da DP / Abstract: Periodontal disease (PD) is a chronic inflammatory disease that affects the tissues that support the teeth and can result in tooth loss. The etiological agent of PD is the dental plaque, which can be formed on the surface of the tooth. However, the host immune response is determinant for the susceptibility to development and progression of PD. Immune responses with a pro-inflammatory profile, represented by T helper (Th) 1 and Th17 cells, leads to PD progression, whereas an anti-inflammatory profile, represented by Th2 and T regulatory cells, is associated with no disease development. Proinflammatory cytokines induce expression of matrix metalloproteinases (MMP) and inhibit expression of their inhibitors, called tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMP). The imbalance of MMPs/TIMPs levels is responsible for the characteristic degradation of the extracellular matrix in PD. The proinflammatory response also leads to expression imbalance of the receptor activator of nuclear factor kappa B ligand (RANKL) and its inhibitor, osteoprotegerin (OPG), resulting in alveolar bone resorption, which is the key event in tissue damage in PD. It is known that obese individuals have a higher predisposition to PD development and present a greater disease severity. Thus, the present study aimed to evaluate the influence of obesity on gene and protein changes associated with the inflammatory response and tissue destruction during the development and progression ligature-induced PD in rats. The high fat diet-induced obesity (HFD) was characterized by impaired glucose tolerance, increased blood glucose level, increased Lee index, liver alterations, increased weight of visceral fat, hyperinsulinemia and changes in plasma levels of cholesterol. Animals from HFD group showed a higher protein and gene expression of pro-inflammatory cytokines in gingival tissue affected by PD. In particular, the expression of interleukin (IL) 17, of IL6 and interferon gamma (IFNG) was significantly higher compared to the group fed a normolipidic diet. There were not much significant differences between both groups in the expression of anti-inflammatory cytokines IL4, IL10 and transforming growth factor beta (Tgfb). HFD group showed an increased MMPs gene expression, especially Mmp13, and a decrease in the expression of Timp1, Timp2 and Reversion Inducing Cysteine-rich Protein with Kazal Motifs (Reck). Moreover, we observed a significant increase in Rankl/Opg ratio in group HFD, followed by greater alveolar bone resorption. HFD induced metabolic changes that are characteristic of obesity, which resulted in exacerbation of inflammatory response in gingival tissue with PD. This pro-inflammatory response, which was polarized to Th1 and Th17 profiles, led to an imbalance in MMPs/TIMPs and Rankl/Opg gene expression ratios. Finally, the deregulation of the mediators of tissue destruction and their inhibitors resulted in worsening of PD with increased alveolar bone resorption. Therefore, this study allowed a correlation between obesity and PD progression / Mestrado / Imunologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular
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Análise Imuno-histoquímica das Metalproteinases da Matriz 2 E 9 nasLesões Intraepiteliais e Invasivas da Cérvice Uterina

Vasconcelos, Lianne D’Oleron Lima 11 August 2015 (has links)
Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-04-15T13:55:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Lianne versão final.pdf: 1813010 bytes, checksum: 7347cf54c764e95be94ff262dc30ccb5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-15T13:55:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Lianne versão final.pdf: 1813010 bytes, checksum: 7347cf54c764e95be94ff262dc30ccb5 (MD5) Previous issue date: 2015-08-11 / CAPEs / O câncer do colo uterino é o quarto tipo de câncer mais comum entre as mulheres mundialmente, e o sétimo no geral. No Brasil, esta neoplasia é a terceira mais frequente no gênero feminino, com mais de 15 mil casos novos a cada ano. A infecção persistente pelo papilomavírus humano dos tipos de alto risco oncogênico está associada ao câncer cervical, porém uma pequena percentagem de mulheres infectadas por estes vírus desenvolve lesões pré-malignas que podem evoluir à invasão. Portanto, outros cofatores são necessários para a persistência viral que, após 2 anos sem intervenção, leva à expressão desregulada e concomitante das oncoproteínas transformantes E6 e E7. As enzimas degradadoras de matriz extracelular conhecidas como metaloproteinases da matriz tem sido extensamente estudadas devido ao seu papel na invasão, metástase, angiogênese e recidiva tumoral. Nas lesões cervicais, um aumento na expressão das metaloproteinases foi identificado, porém, seu papel na progressão das lesões pré-invasivas e sua interação com a infecção pelo papilomavírus ainda não está bem esclarecida. Neste intuito, o presente estudo visou avaliar, através de técnica imuno-histoquímica, a associação dos níveis de expressão das metaloproteinases da matriz 2 e 9 com os graus de lesões cervicais. Para isso, foram utilizadas amostras de biopsias parafinadas, diagnosticadas e arquivadas entre 2011 e 2015 no Laboratório de Anatomia Patológica do Hospital das Clínicas de Recife, Pernambuco, Brasil, incluindo 115 biopsias de lesões cervicais, obtidas por conização, bem como 14 casos de tecidos cervicais sem lesão. Os resultados obtidos neste trabalho demonstraram um aumento da expressão das metaloproteinases 2 e 9 nos casos de invasão em relação a condições pré-malignas, tanto no citoplasma quanto no núcleo de células epiteliais escamosas, sendo a intensidade da expressão nuclear das metaloproteinases estudadas mais significativa nas células cancerosas. Também foi observada diminuição da expressão das metaloproteinases 2 e 9 no citoplasma das células glandulares adjacentes na presença do carcinoma escamoso invasor, quando comparadas ao controle. Mais estudos precisam ser realizados para avaliar o valor prognóstico das metaloproteinases 2 e 9 nas condições pré-malignas e malignas do colo uterino. / The cervical cancer is the fourth most common cancer among women worldwide, and seventh overall. In Brazil, this cancer is the third most common in women, with more than 15,000 new cases each year. Persistent infection with human papillomavirus types of high oncogenic risk is associated with cervical cancer, but a small percentage of women infected by these viruses develop precancerous lesions that may progress to invasion. Therefore, other cofactors are required for viral persistence which, after 2 years without intervention, leads to unregulated and concomitant expression of transformants E6 and E7 oncoproteins. The extracellular matrix degrading enzymes known as matrix metalloproteinases has been extensively studied because of its role in invasion, metastasis, angiogenesis and tumor recurrence. In cervical lesions, an increase in the expression of metalloproteinases was identified, however, its role in the progression of pre-invasive lesions and their interaction with the papillomavirus infection is not well understood. To this end, the present study evaluated, through immunohistochemical technique, the association of the expression levels of matrix metalloproteinases 2 and 9 with grades of cervical lesions. For this, we used paraffined biopsy samples, diagnosed and filed between 2011 and 2015 at the Pathology Laboratory of the Hospital das Clínicas of Recife, Pernambuco, Brazil, including 115 biopsies of cervical lesions, obtained by conization, and 14 cases of tissues without cervical injury. The results of this study demonstrated an increased expression of metalloproteinases 2 and 9 in invasion compared to pre-malignant conditions, in both cytoplasm and nucleus of squamous epithelial cells, and a more significant intensity of the nuclear expression of metalloproteinases studied in cancer cells. It was also observed decreased expression of metalloproteinases 2 and 9 in the cytoplasm of adjacent glandular cells in the presence of invasive squamous cell carcinoma, when compared to control. More studies are needed to assess the prognostic value of metalloproteinases 2 and 9 in premalignant and malignant conditions of the cervix.

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