Orientador: Eunice Oba / Coorientador: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Cezinande de Meira / Banca: Gilson Hélio Toniollo / Resumo: A contaminação bacteriana do útero após o parto é um evento quase unânime em vacas, em que a Escherichia coli (E. coli) é o principal micro-organismo encontrado. Apesar disto, a ativação de mecanismos de defesa local e sistêmica eliminam gradualmente os contaminantes ao longo do puerpério fisiológico. Porém, algumas bactérias possuem fatores de virulência, que facilitam sua instalação e permanência no tecido hospedeiro, propiciando o desenvolvimento de infecções uterinas. Embora o mecanismo não esteja completamente elucidado, certifica-se que a presença de E. coli nos primeiros dias pós-parto favorece o crescimento de Trueperella pyogenes num período mais tardio, bactéria frequentemente associada à infecção uterina. Com isto, objetivou-se estabelecer a dinâmica e perfil da microbiota uterina relacionando os fatores de virulência das E. coli isoladas do útero das vacas, 24 horas após a parição, com a presença bacteriana no ambiente uterino na segunda semana pós-parto. O estudo foi conduzido em 75 vacas holandesas preto e branca (HPB) com parto e puerpério isento de complicações. Decorridas 24 horas do parto (Momento 1) foi realizada avaliação ginecológica através da palpação retal, observada a coloração da mucosa vaginal e aferição da temperatura retal. Destes animais foram coletadas, em condições de assepsia, amostras da secreção loquial visando-se o cultivo microbiológico, antibiograma e a citologia uterina. O período pós-parto foi monitorado quanto às intercorrências e alterações da esfera reprodutiva e produtiva. No 14º dia pósparto (Momento 2), foram realizados os mesmos procedimentos, além da ultrassonografia transretal. Amostras de sangue foram coletadas, em ambos os momentos, para a caracterização da capacidade fagocítica dos neutrófilos pelo teste do nitroblue tetrazolium (NBT) estimulado (ES) e não estimulado (NE) e realização de hemograma. Nas E. coli isoladas foram ... / Abstract: Bacterial contamination of the uterus after delivery is almost an unanimous event in cows, in which the Escherichia coli (E. coli) is the main micro-organism found. Despite this, the activation of local and systemic defense mechanisms gradually eliminate contaminants throughout the physiological puerperium. However, some bacterias possess virulence factors that facilitate its installation and remain in the host tissue, leading to the development of uterine infections. Although the mechanism is not fully elucidated, it is certified that, the presence of E. coli in the first days postpartum favors the growth of Trueperella pyogenes in a later period, bacteria often associated with uterine infection. Thus, aimed to establish the dynamics and profile of uterine microbiota relating the virulence factors of E. coli isolated from the uterus of cows 24 hours after calving, with the bacterial presence in the uterine environment in the second postnatal week. The study was conducted on 75 Holstein cows with normal delivery and postpartum without complications. After 24 hours of parturition (Moment 1), gynecological evaluation was performed by rectal palpation, observed staining of the vaginal mucosa and measurement of rectal temperature. Samples of secretion loquial were collected aseptically of these animals, aiming the microbiological culture, antibiogram and uterine cytology. The postpartum period was uneventful and monitored for changes in the reproductive and productive sphere. On the 14th day postpartum (Time 2), the same procedures were were performed, apart from transrectal ultrasonography. Blood samples were collected at both moments, to characterize the phagocytic ability of neutrophils by the nitroblue tetrazolium test (NBT) stimulated (S) and unstimulated (US) and hemogram. In E. coli isolates were investigated different genes associated with virulence factors (VF) by PCR. Rapid uterine involution, characterized by diameter of the ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-25Bitstream added on 2014-06-13T21:00:40Z : No. of bitstreams: 1 pires_dl_me_jabo.pdf: 2181256 bytes, checksum: 1c7c0de488fc5a788e922d6932500dc1 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Foram avaliados os parâmetros hematológicos de pintos submetidos à inoculação de microbiota intestinal de aves adultas poedeiras e de corte. Para isso, foi feito um experimento para testar o efeito da técnica de inoculação via esofágica. E este não afetou os parâmetros hematológicos. Num segundo experimento, foram utilizados pintos machos recém eclodidos (linhagem COBB). O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado, seguindo fatorial 3 x 4, sendo 3 tratamentos [sem inoculação (Controle), inoculação de microbiota intestinal de frangos de corte (IMIFC), inoculação de microbiota intestinal de aves de postura adultas criadas em gaiola (IMIP)] e 4 períodos (1º, 3º, 5º e 7º dia pós-inoculação). A cada período, cinco aves por tratamento foram pesadas e sacrificadas para análise dos seguintes parâmetros: contagem total de eritrócitos (RBC, x106/mm3), hemoglobina (HGB, g/dL), hematócrito (HCT, %), volume corpuscular médio (MCV, μm3), contagem total e diferencial de leucócitos e relação heterófilo:linfócito. Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo Teste de Tukey. Houve resposta temporária dos pintos que receberam inóculo independente do tipo de microbiota. Essa resposta foi observada através do aumento do RBC, HCT e HGB que durou até o 3º dia. Não ocorreu depressão do sistema imune, apenas variação da porcentagem de heterófilos e linfócitos na circulação. / Two experiments were conducted to determine if the technique of esophageal inoculation (Experiment I) and the esophageal inoculation of intestinal microbiota evaluated of adult birds influence the haematological parameters of male broiler chicks. In experiment I, technique of inoculation had no significant effects on haematological parameters [erythrocytes (RBC), hemoglobin (HGB), hematocrit (HCT), mean corpuscular volume (MCV), counting total and differential leukocyte and the rate heterophil: lymphocyte]. In experiment II, the experimental design was entirely randomly, following factorial 3 x 4, [3 treatments: no inoculation (Control), inoculation of intestinal microbiota of broiler chickens (IIMBC), inoculation of intestinal microbiota of layer hens (IIMLH); 4 periods: 1, 3, 5 and 7 days post-inoculation]. Inoculation of intestinal microbiota caused a increase in the RBC, HCT and HGB already in the 1 st day post-inoculation. This effect remained until the 3 rd day, but only in the chicks of the treatment IIMBC. In the 3 rd day, an increase in the heterophil percentage and a reduction in the lymphocyte percentage were also observed. The results showed that inoculation of intestinal microbiota caused an immediate and temporary heamatological response.

Defensinas são peptídeos antimicrobianos produzidos na mucosa intestinal e fazem parte da imunidade inata, agindo sobre vários microrganismos luminais. Deficiência na expressão de defensinas tem sido relatada em doenças inflamatórias intestinais (DII), no entanto a contribuição de cada tipo de defensina, num cenário de polimorfismo genético, mantém alguma controversa. Βeta-defensinas humanas (HBDs) têm atividade antimicrobiana contra uma ampla variedade de fungos, bactérias e vírus e têm também, um papel na ligação entre a imunidade inata e adaptativa atuando como quimiotáticos. O gene DEFB1 (8p23), codificando a beta-defensina humana 1 (HBD-1), é expresso normalmente por células epiteliais de uma série de tecidos, mas sua expressão pode variar entre indivíduos e pode ser modificada durante processo inflamatório. Produção deficiente de defensinas parece contribuir para a patogênese de DII, e uma diminuição na expressão de HBD-1 tem sido relatada na mucosa de pacientes com doença de Crohn (DC) e retocolite ulcerativa (RCU). Nós avaliamos a possível associação de três polimorfismos do gene DEFB1 com a suscetibilidade a DII, RCU e DC, em 149 pacientes, 79 com DC e 70 com RCU; e 200 controles saudáveis do sul do Brasil. No nosso estudo não se observou diferença estatisticamente significativa entre a distribuição das frequências alélicas para DEFB1 SNPs -52G>A. -44C>G e -20G>A entre o total de pacientes com DII e controles. Porém, quando pacientes com DC foram estratificados de acordo com a localização anatômica, o alelo -20G>A foi mais frequente em pacientes com DC colônica do que em controles (65 % VS 44 %, p=0,048). De forma similar, o genótipo A/A foi mais frequente em pacientes com DC colônica do que em controles (36 % VS 16 %), mas neste caso, a diferença não foi estatisticamente significativa (p=0,07). Embora não se achou uma clara e forte associação entre os SNPs 5’-UTR DEFB1 e suscetibilidade/proteção à doença inflamatória intestinal, nossos resultados sugerem possível envolvimento do gene DEFB1 nestas enfermidades, especialmente com a localização colônica da doença de Crohn. Estudos com amostras maiores e populações diversas serão úteis para avaliar a tendência observada no nosso grupo. / Defensins are antimicrobial peptides produced by the intestinal mucosa and are part of the innate immune system, playing a protective role against various intestinal microorganisms. Deficiency in the expression of defensins has been reported in inflammatory bowel diseases (IBD), however there is some controversy over the contribution of each type of defensine, in a setting of great genetic polymorphism. Beta-defensins (HBDs) have an antimicrobial activity against a great variety of fungi, bacteria and viruses, and also have a role in connecting the innate and the adaptive immunity, acting as a chemostatic agent. Deficient production of defensins appears to contribute to the pathogenesis of IBD, and the lower expression of HBD-1 has been reported on the mucosa of Ulcerative colitis (UC) and Crohn’s disease (CD) patients. We evaluated a possible association of three polymorphisms of gene DEFB1 with susceptibility to develop IBD, UC and CD in 149 patients, 79 with CD and 70 with UC; and 200 healthy controls from the south of Brazil. The gene DEFB1 (8p23), which codifies human beta-defensin 1 (HBD-1), is constitutivelly expressed by epithelial cells of several tissues, but its expression may vary among different individuals and may be modified by inflammation. In our study we did not find a statistically significant difference between the distribution of the allelic frequencies for DEFB1 SNPs -52G>A, -44C.G and -20G>A between the total number of patients and controls. However, when patients were stratified according to the anatomic location, the allele -20G>A was more frequent in patients with colonic CD than in contros (65% VS 44%, p=0,048). Similarly, the genotype A/A was more frequent in patients with colonic CD than in controls (36% vs 16%), however, in this case, the difference wasn’t statistically significant (p=0,07). Although we did not find a clear and strong association between the 5’-UTR DEFB1 SNP and susceptibility to IBD, our results suggest a possible involvement of the DEFB1 gene and these diseases, particularlly colonic CD. Further studies with larger samples and diverse populations will be usefull to evaluate the trend observed by our group.

Este estudo teve o objetivo de avaliar a eficiência do probiótico em manter o equilíbrio da microbiota intestinal de aves submetidas à antibioticoterapia e as associações com o desempenho. Os tratamentos dietéticos consistiram de uma dieta basal única, à base de milho e farelo de soja, à qual foi acrescido ou não o probiótico Bacillus subtillis (100 g/ton de ração), na concentração de 10? UFC/g. Por 3 dias consecutivos a partir de 21 dias de idade, as aves foram submetidas à antibioticoterapia via água de bebida consistindo de 200 ppm de bacitracina metileno dissacilato (efeito em bactérias Gram-positivas ) e 1000 ppm de sulfato de neomicina (efeito em bactérias Gram-negativas). O experimento foi conduzido com frangos de corte no período de 1 a 42 dias, sendo que de 1 a 21 dias as aves receberam somente o tratamento dietético, e, a partir de 21 dias, as aves receberam os tratamentos dietético e terapêutico. Aos 2, 4 e 6 dias após a antibioticoterapia, 3 aves de cada unidade experimental foram sacrificadas para coleta do conteúdo do intestino delgado e do ceco e obtidos \"pools\" dos conteúdos intestinais em cada unidade experimental para constituir uma repetição. O experimento foi realizado com 4 tratamentos, obedecendo a esquema fatorial 2×2 para as variáveis de desempenho (com e sem probiótico × com e sem antibioticoterapia) com 9 repetições e 2×2×3 para as análises da microbiota intestinal (com e sem probiótico na dieta × com e sem antibioticoterapia × 2, 4 e 6 dias após a antibioticoterapia) com 3 repetições. O DNA total foi extraído dos conteúdos do intestino delgado e ceco para o isolamento da região 16S rRNA e análise das comunidades bacterianas. As técnicas moleculares utilizadas foram a de fingerprinting Terminal Restriction Length Polymorphism (T-RFLP), PCR em tempo real (qPCR) e o sequenciamento, sendo que, para todas as técnicas, a região alvo foi o gene 16S rRNA. Os fatores dietético e terapêutico modularam a microbiota intestinal de forma independente. Houve efeito dos fatores probiótico e antibioticoterapia nos grupos predominantes do conteúdo do intestino, desde a classificação taxonômica filo até a classificação gênero. Alguns grupos filogenéticos foram igualmente afetados pelos 2 fatores em estudo, enquanto que outros grupos foram alterados de forma específica em função do probiótico ou antibioticoterapia. A antibioticoterapia, assim como o probiótico dietético, reduziu o número de unidades taxonômicas operacionais (OTUs) no conteúdo do ceco. O melhor desempenho observado nas aves alimentadas com dietas com probiótico provavelmente está relacionado às alterações observadas na estrutura das comunidades intestinais e grupos filogenéticos, como o acréscimo de Lactobacillus e redução de Clostridiales. A antibioticoterapia modificou a estrutura da comunidade bacteriana, entretanto não provocou queda no desempenho das aves. A comunidade bacteriana do intestino das aves medicadas e suplementadas com probiótico apresentou alta similaridade com a comunidade das aves que receberam apenas probiótico dietético, indicando a possível recuperação da microbiota intestinal aos 6 dias após a antibioticoterapia. / The purpose of this study was to verify the ability of a probiotic in the feed to maintain the stability of gut microbiota in chickens after antibiotic therapy and associations with the performance. The dietary treatments consisted of a cornsoybean meal basal diet that was supplemented or not with a probiotic (Bacillus subtilis) in the concentration of 3×109 cfu/kg of feed. Starting on day 21, the birds were submitted to the antibiotic therapy consisting of 200 ppm of bacitracin methylene disalicylate (for Gram-positive bacteria) and 1,000 ppm of neomycin sulfate (for Gram-negative bacteria) in the drinking water, during 3 days. The trial was conducted with broiler chickens from 1 to 42 days of age, however, from 1 to 21 days, the chickens received only the dietary treatment, and after of the 21 days, the birds received the dietary and therapeutic treatments. At 2, 4 and 6 days after the antibiotic therapy, three chickens from each experimental unit were euthanized and the contents of the small intestine and ceca were collected and pooled by pen. The trial was conducted in a completely randomized design with 4 treatments and 9 replicates in a 2×2 factorial arrangement for performance characteristics (with and without probiotic × with and without antibiotic therapy), and in a 2×2×3 factorial arrangement for gut microbiota (with and without probiotic × with and without antibiotic therapy × 2, 4 and 6 days after of the antibiotic therapy) with 3 replicates per treatment. The DNA was extracted from the contents of the small intestine and ceca to isolate the 16S r RNA and study of the bacterial communities. The molecular techniques used were the terminal restriction fragment length polymorphism (TRFLP), quantitative PCR (qPCR) and sequencing, considering the 16S rRNA -genetargeted. The dietary and therapeutic factors modulated the gut microbiota independently. The probiotic and antibiotic therapy affected the main groups within of the gut content from the phylogenetic classification at the phylum level until the phylogenetic classification at the genera level. Some phylogenetic groups were equally affected by the two factors while other groups were changed in a distinct form depending on of the probiotic or antibiotic therapy. The antibiotic therapy and dietary probiotic decreased the number of taxonomic operational unit (OTUs) in cecal content. The improved performance observed in birds supplemented with probiotic was probably related to changes in the structure of intestinal bacterial communities and phylogenetic groups such as higher Lactobacillus and decreased Clostridiales. Antibiotic therapy modified the bacterial community structure; however it did not cause loss of broiler performance. The gut bacterial community in birds medicated and supplemented with probiotic had high similarity with the gut community of birds that received dietary probiotic only, indicating the possible recovery of the gut bacterial community 6 days after the antibiotic therapy.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-03-29T14:52:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_BARBARA COSTA PAULINO_Agosto2016.OFICIAL.pdf: 2162827 bytes, checksum: e76b8cfadd5a941840853d352a5bc159 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-29T14:52:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_BARBARA COSTA PAULINO_Agosto2016.OFICIAL.pdf: 2162827 bytes, checksum: e76b8cfadd5a941840853d352a5bc159 (MD5) Previous issue date: 2016-05-20 / CNPQ / A dieta ocidentalizada, rica em lipídeos, açúcar, sódio e alimentos processados e ultra processados tem sido apontada como um dos mais relevantes fatores associados ao excesso de peso/obesidade, comorbidades e distúrbios fisio-metabólicos observados em estudos epidemiológicos e experimentais em animais. O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos do soro de leite de cabra sobre o estado nutricional, microbiota, histologia intestinal e parâmetros bioquímicos de ratas e filhotes alimentados com dieta ocidentalizada. Foram utilizados 8 machos e 24 fêmeas da linhagem Wistar (da colônia do Departamento de Nutrição da Universidade Federal de Pernambuco) para o acasalamento dos animais. Ratas gestantes foram divididas em quatro grupos experimentais de acordo com a dieta: Controle ou Ocidentalizada e a suplementação ou não com soro de leite de cabra. Evolução ponderal e consumo alimentar das ratas seguiram por todo experimento. Ao desmame, as ratas e metade da prole de machos de cada ninhada foram eutanasiados para análise dos parâmetros bioquímicos, histologia intestinal, micro-organismos fecais. Metade dos filhotes foi submetida aos mesmos acompanhamentos e eutanasiados aos 45 dias de vida. A suplementação com soro de leite de cabra modificou poucos parâmetros nas ratas com exceção da alteração da quantidade de lactobacilos totais, que nos grupos controles com solução salina apresentaram uma média de 7,34±0,08 log.UFC/g-1 e 6,43±0,31 log.UFC/g-1 e no suplementado 7,79±0,30 log.UFC/g-1 e 6,94±0,45 log.UFC/g-1 para ratas com dieta ocidentalizada e padrão, respectivamente. Nos filhotes, a suplementação com soro de leite de cabra promoveu redução no ganho de peso e dos depósitos de gordura abdominal, alteração bioquímica, aumentou em 15% a contagem de lactobacilos e em 13% as enterobactérias. Além disso, minimizou o desgaste de células intestinais, limitando o processo inflamatório observado nos alimentados com dieta ocidentalizada. Dessa forma, pode-se sugerir que o soro de leite teve potencial efeito na microbiota fecal e morfologia intestinal, e que esses efeitos parecem depender da idade e do período de suplementação. / The westernized diet rich in fat, sugar, sodium and processed foods and processed ultra has been identified as one of the most important factors associated with overweight / obesity, comorbidities, and physiological and metabolic disorders observed in epidemiological and experimental studies in animals. The aim of this study was to investigate the effects of serum of goat milk on the nutritional status, microbiota, intestinal histology and biochemical parameters of rats and offispring fed westernized diet. Were used 8 male and 24 female Wistar (the colony of the Department of Nutrition at the Federal University of Pernambuco) for mating of animals. Pregnant rats were divided into four groups according to the diet: control or Westernized and supplemented or not with serum from goat milk. weight gain and food consumption of rats followed throughout the experiment. At weaning, rats, half male offspring in each litter were sacrificed for analysis of biochemical parameters, intestinal histology, faecal micro-organisms. Half of the pups was subjected to the same accompaniments and euthanized at 45 days of life. Supplementation with goat whey modified few parameters in rats with the exception of changing the amount of total lactobacilli that in control groups with saline had a mean of 7,34 ± 0,08 log.UFC/g-1 and 6, 43 ± 0,31 log.UFC/g1 and supplemented 7,79±0,30 log.UFC/g-1 and 6,94 ± 0,45 log.UFC/g-1 to rats with westernized diet and standard, respectively. In puppies, supplementation with goat whey promoted reduction of 200% in weight gain and deposits of abdominal fat, biochemical change, increased by 15% to lactobacillus count and 13% enterobacteria. In addition, minimized wear of intestinal cells by limiting the inflammatory process observed in fed westernized diet. Thus, it can be suggested that the whey had potential effect on fecal microbiota and intestinal morphology, and that these effects appear to depend on the age and supplementation period.

Introdução: A Síndrome do Intestino Curto (SIC) é definida como um conjunto de sinais e sintomas conseqüentes de alterações nutricionais e metabólicas secundária a insuficiência intestinal funcional e/ou orgânica, como nos casos de grandes ressecções do intestino delgado. Ressecções intestinais eliminam sítios de colonização, alteram a área de absorção e, o uso freqüente de antibióticos devido a infecções recorrentes, presença de alimentos não digeridos no cólon, trânsito acelerado e diarréia, nestes mesmos pacientes, podem contribuir para a alteração da microbiota intestinal. Objetivo: Caracterizar a microbiota intestinal de pacientes portadores da Síndrome do Intestino Curto atendidos na Unidade Metabólica e do HCFMRP/USP. Casuística e Métodos: Foram recrutados os pacientes portadores de síndrome do intestino curto atendidos na Unidade Metabólica do HCFMRP/USP (uso de terapia nutricional parenteral). Para o grupo controle foram recrutados indivíduos sadios e eutróficos da comunidade e pareados segundo sexo e idade. Foram avaliadas amostras de fezes e exames bioquímicos, estes últimos foram somente dos pacientes. A avaliação do consumo alimentar foi feita por meio do inquérito Diário Alimenta e a avaliação do estado nutricional a partir de medidas antropométricas. Para detecção de cepas patogênicas foram realizados cultivos e testes bioquímicos específicos em meio aeróbio para determinação de espécies da família Enterobacteriaceae. Em cada cepa de E. coli isolada foram aplicados anti-soros para determinação de possível patogenicidade. Metodologia molecular também foi utilizada para determinação do perfil da microbiota intestinal bacteriana: sequenciamento de bibliotecas de DNAr 16S e PCR para detecção de genes característicos de cepas patogênicas de E. coli. Resultados: Verificou-se a presença de subnutrição protéico-calórica no grupo Paciente mesmo com terapia nutricional para recuperação deste estado nutricional. Quanto a microbiota, observou-se maior diversidade de Gram negativas, porém menor quantidade por grama de fezes da família Enterobacteriaceae em pacientes com SIC. Porém a análise molecular mostrou a manutenção na proporção de espécies bacterianas, equivalente a microbiota intestinal saudável. Conclusão: Apesar da subnutrição, retirada maciça do intestino delgado, uso freqüente de antibióticos, depressão do sistema imune, presença de alimentos não digeridos no trato gastrintestinal e transito intestinal acelerado, a relação e proporção entre as espécies bacterianas intestinais permanecem similares à normalidade. / Introduction The short bowel syndrome (SBS) is defined as a set of signs and symptoms resulting from nutritional and metabolic changes after major small bowel resections. Intestinal resections eliminate colonization sites and alter the absorption area. Besides, the frequent use of antibiotics due to recurrent infections, the presence of undigested food remaining in the intestinal tract, rapid transit and diarrhea in these same patients may contribute to the change of intestinal microbiota. Objective: To characterize the intestinal microbiota of patients with short bowel syndrome treated at the Metabolic Unit and HCFMRP / USP. Materials and Methods: We recruited all the patients with short bowel syndrome treated at the Metabolic Unit of HCFMRP / USP (use of parenteral nutrition therapy). The control group was composed by healthy individuals matched by age and sex. Samples of feces and biochemical tests from the patient group were evaluated. The control group had no biochemical tests, only feces samples to be analysed. The nutritional status was evaluated through anthropometric measurements and the assessment of food intake through food diary survey. The pathogenic strains from Enterobacteriaceae were detected by cultivation and specific biochemical tests in aerobic environment. In each strain of isolated E. coli antisera were applied for determination of pathogenicity. PCR analysis was also used to determine the profile of intestinal bacterial microbiota: sequencing libraries of 16S rDNA and PCR for detection of genes characteristic of pathogenic strains of E. coli. Results: Although receiving periodic parenteral nutrition the Patient group had protein-calorie malnutrition. In regards to the microbiota there was greater diversity, but lower concentration of the family Enterobacteriaceae in patients with SBS. However, the molecular analysis showed the a proportion of bacterial species equivalent to the intestinal flora from the control group. Conclusion: Although the protein-calorie malnutrition, massive resection of the small intestine, frequent use of antibiotics, immune system depression, presence of undigested food in the gastrointestinal tract and rapid intestinal transit rate, the ratio and the proportion of the intestinal bacterial species remain similar to normal.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-05-11T14:59:51Z No. of bitstreams: 2 Tese_Andrelisse Arruda_2017.pdf: 5916961 bytes, checksum: d3d6f3dd277d94f02ba45cb40e90dc81 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-05-11T15:00:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese_Andrelisse Arruda_2017.pdf: 5916961 bytes, checksum: d3d6f3dd277d94f02ba45cb40e90dc81 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-11T15:00:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese_Andrelisse Arruda_2017.pdf: 5916961 bytes, checksum: d3d6f3dd277d94f02ba45cb40e90dc81 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-10-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Microrganisms living in insects’ midgut have been isolated and identified for developing biotechnological tools to fight vector-born diseases. In this context, the mosquitoes Anopheles from different regions around the world have been studied about their midgut microbiota focused on paratransgenesis. However, information about microrganisms living in neotropical mosquitoes midgut are scarce. And, specially about Anopheles darlingi, the main malaria vector in the Brazilian Amazon, still this study, there were not any report about culturable microrganisms associated to this insect. The first step for paratransgenesis is to isolate culturable microrganisms naturally associated to the insect vector, and thus amenable to experimentation in laboratory. The objectives of this work were to isolate and to identify culturable bacteria and yeasts isolated from feces of Anopheles darlingi, the main vector of malaria in Brazil; to estimate the species richness and frequency distribution of the sampled bacteria and yeasts and to characterize and to select the sampled bacteria and yeasts isolated from feces of An. darlingi with potential for paratransgenesis. The female mosquitoes of An.darlingi were captured in two rural places of Porto Velho, Rondônia, Brasil. For improving the bacterial growth, mosquito feces were collected on LB agar medium and cultivated at 37 ºC for 24 hours, and for improving the yeast growth, mosquito feces were collected on YPD agar medium with Chloramphenicol and cultivated at 30 ºC for 48 hours. Sixty pure bacteria colonies and sixty pure yeast colonies were sampled. The isolates were preserved in -80 ºC freezer. PCR reactions with genomic DNA from each isolate were perfomed using the primers of 16S rRNA genes for bacteria and 26S and ITS for yeasts. From 60 bacterial isolates, 55 samples were identified. From 60 yeast isolates, 27 samples were identified. The fragments were sequenced with the Sanger method and the sequences with similarities above of 97% with sequences in reference database were deposited in Genbank (NCBI). For bacteria, MALDI-TOF, VITEK®2 and BBL Crystal were also used as a complementar protocols to identify the isolates. The identified bacteria fall into 8 genera, Enterobacter, Klebsiella, Cedecea, Pantoea, Serratia, Acinetobacter, Burkholderia and Staphylococcus. The identified yeast fall into 7 genera, Pseudozyma, Papiliotrema (Cryptococcus), Meyerozyma (=Pichia), Rhodotorula, Candida, Hanseniaspora and Metschnikowia. As candidates to paratransgenesis to control of malaria in An. darlingi are those bacteria belonging to the genera Pantoea and Serratia and the yeasts belonging to the genera Meyerozyma (=Pichia), Pseudozyma, Hanseniaspora and Metschnikowia. / Microrganismos contidos no trato digestório de insetos vem sendo isolados e identificados com o intuito de desenvolver ferramentas biotecnológicas para o controle de doenças transmitidas por insetos. Nesse contexto, mosquitos Anopheles de diferentes partes do globo têm sua microbiota investigada com foco em paratransgênese. No entanto, a informação sobre microrganismos associados aos anofelinos neotropicais é escassa. Tratando-se de Anopheles darlingi, o principal vetor de malária no Brasil, até o presente trabalho, não havia informações sobre microrganismos cultiváveis associados a esse vetor. Os objetivos deste trabalho foram isolar e identificar bactérias e leveduras cultiváveis isoladas das fezes de An. darlingi, o principal vetor da malária no Brasil; estimar riqueza e distribuição de frequência das bactérias e leveduras amostradas, e caracterizar e selecionar bactérias e leveduras isoladas das fezes de An. darlingi com potencial para paratransgênese. Os mosquitos An. darlingi fêmeas foram coletados em duas localidades rurais de Porto Velho, Rondônia, Brasil. Para favorecer o crescimento de bactérias, fezes dos mosquitos foram coletadas em meio LB ágar e cultivadas à 37°C por 24 horas, e para propiciar o crescimento de leveduras, fezes dos mosquitos foram coletadas em meio YPD ágar com cloranfenicol e cultivadas à 30°C por 48 horas. Sessenta colônias bacterianas e 60 colônias leveduriformes foram amostradas. Os isolados foram preservados em freezer -80 °C. Foram realizadas PCR utilizado DNA genômico dos isolados com iniciadores para a região do DNA ribossomal 16S para bactérias e 26S e ITS para leveduras. Todas as 60 bactérias isoladas foram identificadas. Das 60 leveduras isoladas, 27 foram identificadas. Os fragmentos foram sequenciados pelo método Sanger e as sequências com similaridades superiores a 97% frente a sequências disponíveis em bancos de dados foram depositadas no GenBank. Para bactérias, MALDI-TOF, VITEK®2 e BBL Crystal foram utilizados como métodos complementares para identificação dos isolados. As bactérias identificadas pertencem a 8 gêneros: Staphylococcus, Burkholderia, Cedecea, Enterobacter, Klebsiella, Pantoea, Serratia e Acinetobacter. As leveduras identificadas pertencem a 7 gêneros: Candida, Meyerozyma (=Pichia), Metschnikowia, Hanseniaspora, Rhodotorula, Papiliotrema (=Cryptococcus) e Pseudozyma. São candidatas à paratransgênese para o controle da malária em An. darlingi as bactérias do gênero Pantoea e Serratia e as leveduras dos gêneros Meyerozyma (Pichia), Metschkowia, Hanseniaspora e Pseudozyma.

Atualmente muitas espécies nativas de pássaros são consideradas raras no Brasil, pois são capturadas de forma indiscriminada por traficantes de animais e são então comercializadas, fazendo com que sejam encontradas cada vez mais em menor quantidade em seus habitats naturais. Animais confiscados do tráfico têm sido submetidos a programas de soltura ou relocação, atentando-se para que os mesmos não representem risco à população nativa. Passeriformes silvestres, saudáveis ou doentes, podem carrear uma grande diversidade de microorganismos e, portanto, o conhecimento sobre o status sanitário de animais apreendidos do tráfico que serão submetidos a programas de soltura, permite uma avaliação quanto à possibilidade destes animais atuarem como portadores de agentes patogênicos bem como atua como elemento esclarecedor da epidemiologia de doenças transmissíveis, aspecto fundamental para a preservação da saúde animal e também humana. O presente estudo procurou avaliar a ocorrência e frequência de bactérias aeróbias e anaeróbias facultativas bem como de fungos em suabes obtidos de cloacas de passeriformes silvestres apreendidos do tráfico e que serão submetidos a programas de soltura. Foram realizados testes de suscetibilidade in vitro dos isolados de E. coli frente a diferentes antimicrobianos utilizando-se o método de disco difusão, bem como a pesquisa de diversos genes codificadores de fatores de virulência nos mesmos através reação em cadeia da polimerase. A maior parte dos passeriformes (62,5%) avaliados apresentou uma microbiota cloacal constituída por bactérias aeróbias e/ou anaeróbias facultativas e/ou fungos, sendo que os microorganismos mais frequentemente isolados foram Staphylococcus spp. (15,0%), Micrococcus spp. (11,5%), Escherichia coli (10,7%) e Klebsiella spp. (10,7%). Observou-se uma maior ocorrência de bactérias Gram positivas seguidas por bactérias Gram negativas e fungos. A frequência de bactérias Gram negativas (28,4% do total de amostras coletadas) foi bastante representativa. Foram isolados 14 gêneros de bactérias, 03 gêneros de leveduras e 04 de fungos filamentosos. As 27 estirpes de E.coli isoladas apresentaram multirresistência aos antimicrobianos, sendo que ampiclina e amoxicilina+ácido clavulânico foram os antimicrobianos frente os quais observou-se maior índice de resistência (100%) por parte dos isolados, enquanto que cloranfenicol foi o antimicrobiano frente o qual observou-se maior índice de sensibilidade (100%). Somente um dos isolados de E.coli foi positivo para presença do gene codificador de fímbria S (sfa), podendo ser compatível com perfil de E. coli patogênica aviária (APEC) ou E. coli uropatogênica (UPEC). Nenhum dos isolados apresentou características condizentes com E.coli enteropatogênica (EPEC). Considerando-se a reduzida ocorrência dos genes codificadores de fatores de virulência estudados pode-se concluir que os passeriformes apreendidos do tráfico representam baixo risco potencial no tocante à transmissão de estirpes de EPECs, APECs e UPECs para outros animais ou mesmo para o ser humano. Por outro lado deve-se considerar o risco potencial de transmissão intra ou interespécies de E. coli multirresistentes aos antimicrobianos bem como a introdução destes micro-organismos no ambiente. Os riscos de disseminação de Salmonella spp., Cryptococcus spp e Candida spp. são pouco prováveis quando considerados programas de soltura. / Currently, many native bird species are considered rare in Brazil, once they are indiscriminately captured by animal traffickers and then are sold, which makes them increasingly found in smaller quantities in their natural habitats. Confiscated animals have been submitted to relocation programs attempting to ensure that they do not pose a risk to the native population. Wild passerines, healthy or sick, may carry a wide variety of microorganisms and therefore, knowledge on health status of confiscated animals which will be relocated, allows an assessment as to whether these animals act as carriers of pathogens to native populations as well as clarifies the epidemiology of diseases, which is fundamental to the preservation of animal and human health. This study aimed to investigate the occurrence and frequency of aerobic and facultative anaerobic bacteria and fungi in cloacal swabs of wild confiscated passerines which will be submitted to relocation programs. In vitro susceptibility testing of E. coli strains to differet antimicrobials as well as an investigation of the presence of virulence genes in these isolates using the polymerase chain reaction were performed. Most of the animals investigated (62.5%) presented a cloacal microbiota composed by aerobic and/or facultative anaerobic bacteria and/or fungi. The microorganisms most frequently isolated were: Staphylococcus spp. (15.0%), Micrococcus spp. (11.5%), Escherichia coli (10.7%) and Klebsiella spp. (10.7%). The frequencies of isolations of Gram positives bacteria were higher (P <0.05) than those of Gram negatives and also higher (P <0.05) than fungi. The frequencies of isolations of Gram negatives bacteria (28.4% from the total of samples) were very representative. Fourteen genera of bacteria, 03 genera of yeasts and 04 of filamentous fungi were isolated. The occurrence of multidrug resistance was observed for 100% of the E. coli isolates. All ,E. coli strains were resistant to ampicillin and amoxicillin plus clavulanic acid and were sensitive to chloramphenicol. One E.coli isolate was positive for the presence of the gene encoding S fimbriae (sfa), may be a strain profile compatible with UPEC or APEC. None of the E. coli isolates resembled EPEC. Considering the reduced occurrence of genes encoding virulence factors it was concluded that confiscated passerines represent low potential risk regarding the transmission of EPECs, APECs or UPECs strains to other animals or even humans. Furthermore, the potential risk of intra or interspecies transmission of E. coli multiresistant to antimicrobials must be considered as well as the introduction of these micro-organisms in the environment. The risks regarding dissemination of Salmonella spp., Cryptococcus spp and Candida spp. are unlikely when relocation programs are considered.

Considerando-se que a leptospirose pode ser transmitida pela inseminação artificial e a existência de possíveis falhas na Instrução Normativa vigente do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento-MAPA, quanto ao controle desta enfermidade em touros em serviço reprodutivo em Centrais de lnseminação Artificial -CIA, e ainda pelas baixas taxas na FIV em vista da presença de microbiota autóctone no sêmen industrializado, o presente trabalho propôs avaliar: l-a microbiota autóctone presente nas amostras de muco prepucial e sêmen quanto a sazonalidade e a idade (&lt;4 e &ge;4 anos) de touros de uma CIA; 2-0 efeito do tratamento com protocolos antibióticos adicionados ao extensor: A - gentamicina (250 ug/ml.), tilosina (50 ug/rnl.); lincomicina (150 ug/ml.), espectinomicina (300 ug/ml.; B -penicilina (500 UI), estreptomicina (500 UI), lincomicina (150 ug/ml.), espectinomicina (300 ug/ml.); CI- sulfato de amicacina (500 ug/rnl.); C2 - sulfato de amicacina (1500 ug/ml. ) e C3 - sulfato de amicacina (2500 ug/ml.) sobre a microbiota presente nas amostras de sêmen; 3-0 efeito dos protocolos de antibióticos (A, B, C I, C2, C3) sobre esperrnatozóide através do teste de integridade de membrana.; 4-0 efeito bactericida dos protocolos A, B e C2 adicionados ao extensor, sobre o sêmen experimentalmente contaminado com Leptospira spp. sorovares Hardjo (estirpes Hardjoprajitno e Hardjobovis) e Wolffi (estirpe 3705), pelo cultivo microbiológico e Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), comparando-as entre si. Das amostras de sêmen e muco prepucial de oito touros de uma CIA, observou-se correlação entre os gêneros bacterianos detectados no cultivo bacteriológico das amostras de muco prepucial e sêmen na mesma colheita, não houve diferença entre a microbiota quanto à idade dos animais e a sazonalidade das colheitas; os protocolos antibióticos (A, B, Cl , C2, C3) não interferiram na integridade de membrana citoplasmática dos espermatozóides; protocolos A e C3 mostraram maior redução na microbita do sêmen, embora sem significado estatístico; PCR foi mais sensível que o cultivo na detecção de Leptospira spp. de amostras de sêmen experimentalmente contaminadas, entretanto a diminuição na freqüência de resultados positivos na PCR, em amostras de sêmen contaminadas com três estirpes de Leptospira spp e tratadas com os protocolos A, B ou C2, está relacionada a fatores intrínsecos da técnica e não ao efeito bactericida dos antibióticos empregados. O cultivo bacteriológico revelou baixa sensibilidade no isolamento de estirpes de Leptospira spp em sêmen experimentalmente contaminado com 106 bactérias/mL. A transmissão de leptospiras pelo sêmen industrializado de touros doadores em ClA é principalmente dependente da concentração de leptospiras excretadas no momento da colheita. A PCR confirma ser uma ferramenta fundamental na detecção da presença de leptospiras no sêmen de touros doadores em Centrais de Inseminação Artificial, devendo ser empregada em pelo menos duas colheitas na quarentena, e posteriormente no monitoramento do animal / Considering that leptospirosis can be transmitted by the artificial insemination route and the existence of possible fails on current Normative Instruction of the Ministerio de Agricultura, Pecuária e Abastecimento- MAPA, for the control of this disease in bulls in reproductive service in Artificial Insemination Centers-AIC, and still for the low rates due to the presence of autoctone microbiota in the industrialized semen affecting the production of embryos by in vitro fertilization, the present study aimed to evaluate the autoctone microbiota presented in preputial mucus and semen samples according to season (falls and dry) and bull ages (&lt;4 e &ge;4 years) from the AIC; the effect of the treatment with antibiotic protocols added to the semen extensor: A- gentamicine (250 ug/rnl.), tilosine (50 11gim L); lincomicine (150 ug/rnl.); espectinomicine (300 11gim L; B- penicillin (500 UI); estreptomicine (500 UI); lincomicine (150 ug/ml.); espectinomicine (300 ug/ml.); C 1 amicacine sulphate (500 ug/ml.); C2- amicacine sulphate (1500 ug/rriL) and C3- amicacine sulphate (2500 ug/ml.) on microbiota presents in the semen samples; the effect of the antibiotic protocols (A, B, C I, C2, C3) on spermatozoa by the test of membrane integrity; the bactericidal effect of the antibiotic protocols A, B and C2 added to the extensor, on the semen experimentally contaminated with Leptospira spp. serovars Hardjo (strains Hardjoprajitno and Hardjobovis) and Wolffi (strain 3705), for the bacteriological culture and polimerase chain reaction (PCR), comparing themselves. Of the samples of preputial mucus and semen samples of eight bulls of an AlC it was observed correlation among bacterial Genera detected by the bacteriological culture of preputial mucus and semen in the same collection; but it was not observed difference relative to animal age groups and seasons of the year. The antibiotic protocols (A, B, Cl, C2, C3) had no effect on the integrity of cytoplasmic membrane of the spermatozoa. C3 showed greater reduction on semen microbita, but no statistically significant. PCR was more sensible than the bacteriological culture in the detention of Leptospira spp. from semen samples experimentally contaminated, however the reduction on the frequency of positive results by PCR was not related to bactericidal effect of the antibiotic protocols, maybe it was due to intrinsic factors of this method. The bacteriological culture showed very low sensitivity to isolate Leptospira spp. from experimental contaminated semen with 106 bacterias/mL. The transmission of leptospires by industrialized semen from donor bulls of AlC depend mainly on the concentration of leptospires excreted at the moment of the semen collection. The PCR confirms to be a fundamental tool for the detention of leptospires in the semen of donor bulls in AlC, and must be used at least twice during the quarantine, and for the animal monitoring during service time

Em muitas partes do mundo o aumento na demanda de água tem estimulado pesquisas relacionadas às práticas de reuso sustentáveis. Dentre as atividades humanas, a irrigação agrícola se revela como uma das práticas de maior consumo de recursos hídricos naturais. Uma alternativa para minimizar este problema é o reuso de efluentes gerados por sistemas biológicos de tratamento de esgotos. O objetivo desta pesquisa foi avaliar os efeitos da irrigação com esgoto tratado na dinâmica do carbono (C) e nitrogênio (N) e na atividade microbiana de um solo sob pastagem. O estudo foi conduzido em uma pastagem de capim-Bermuda Tifton 85 (Lins-SP), onde o delineamento experimental foi o de blocos completos com seis tratamentos: SI (sem irrigação e sem fertilização), A100 (água potável + 520 kg de N ha-1 ano-1); E0, E33, E66 e E100 (irrigação com esgoto tratado + 0, 33, 66 e 100% de 520 kg de N ha-1 ano-1). Os tratamentos receberam entre 420 a 1500 mm de esgoto tratado e água por ano, correspondendo a uma entrada pelo esgoto tratado de 640 a 2300 kg ha-1 ano-1 de C e de 135 a 480 kg ha-1 ano-1 de N. Utilizando como referência os estoques de C e N de SI, o menor decréscimo de C ocorreu em E33 (1,2 Mg ha-1) e o maior em A100 (7,9 Mg ha-1). Alterações no estoque de N do solo ocorreram após quatro anos de irrigação, onde A100 apresentou decréscimo de cerca de 450 kg de N ha-1. Os estoques de N dos tratamentos irrigados com esgoto tratado não foram afetados. A entrada de C e N orgânicos pelo esgoto tratado não afetaram a composição isotópica do C (\'delta\' 13C) e do N (\'delta\' 15N) da fração estável da matéria orgânica do solo (MOS) do solo. A alteração de \'delta\' 13C nos solos dos tratamentos irrigados (-0,7 a -1,2%o ), em relação a SI, foi resultante da mineralização do carbono orgânico remanescente do solo (plantas C3). Os valores de \'delta\' 15N do N da MOS (0 a 5 cm) foram significativamente maiores (+2,2%o) nos tratamentos irrigados com esgoto tratado do que em SI e A100, refletindo diferenciadas taxas e processos de ciclagem de N. A abundância natural de 15N nas folhas do capim-Bermuda refletiu a composição isotópica do N do solo, com enriquecimento de +2,5%o e +4,9%o em relação a A100 e SI, respectivamente. As taxas líquidas de mineralização e nitrificação negativas ou nulas nas épocas Seca-04, Chuvas-05 e Seca-05 indicaram predominância de processos de imobilização do N pela microbiota em virtude uma alta relação C:N da MOS. Nas épocas de Chuvas-06 e Seca-06 as taxas tornaramse positivas indicando a diminuição da relação C:N da MOS, término do efeito priming e, portanto, ciclagem interna de N. Os solos dos tratamentos apresentaram baixo consumo (-0,1kg de C ha-1 sem-1) ou pequena emissão média de CH4 (+0,8 kg de C ha-1 sem-1). A disponibilidade de N e a umidade do solo não representaram fatores limitantes nos tratamentos, assim as emissões de CO2 não diferiram entre si na maior parte das datas de coleta (médias de 14,7 e 12,2 Mg de C ha-1 para épocas de chuvas e seca, respectivamente). Os maiores fluxos de CO2 relacionaram-se com os períodos de maior precipitação e/ou irrigação do que com os tratamentos. Os maiores fluxos de N2O foram observados após a aplicação de N mineral nos tratamentos irrigados com esgoto tratado, sendo proporcionais as maiores quantidades de N adicionado. As relações médias entre o C da biomassa microbiana e o C orgânico total (Cmic:COT) dos tratamentos variaram de 2,3 a 3,8% ao longo das épocas, indicando boa resiliência do agroecossistema, onde os microrganismos apresentaram variações temporárias de biomassa. Interferências positivas do manejo (corte do capim e fertilização com N mineral) resultando em aumento de Cmic foram observadas no 1º ano hidrológico e Seca-06, como resultado da maior umidade do solo e com isso condições mais favoráveis para a disponibilização de C. Na Seca-04, com o aumento da atividade metabólica, e Chuvas-05, sem alteração deste parâmetro, ao longo do manejo, o quociente metabólico (qCO2) apresentou um cenário de eficiente conversão de C-CO2 em biomassa microbiana. No 2º ano hidrológico, com a diminuição das lâminas de irrigação os tratamentos irrigados e fertilizados apresentaram decréscimo de Cmic e respiração mantida (Seca-05) ou aumentada (Chuvas-06) após o manejo, os valores de qCO2 indicaram condições desfavoráveis a microbiota. Com a pouca interferência dos tratamentos, os indicadores eco-fisiológicos não foram suficientemente sensíveis para mostrar o manejo com menor impacto na qualidade do solo, revelando apenas cenários do metabolismo microbiano ao longo das práticas agrícolas. A quantidade de C exportada por E33, como biomassa (15,2 Mg de C ha-1 ano-1) não diferiu das maiores produções, a alteração em seu estoque de C foi inferior aos demais tratamentos irrigados, sugerindo ser o manejo mais sustentável, em termos de C, utilizando esgoto tratado como irrigação. Os tratamentos E100 (Seca-04) e E66 (Chuvas-05) representaram os manejos com as maiores exportações de N, respondendo linearmente até 940 ha-1 de N ano-1. De acordo com as variáveis avaliadas, o manejo com maior sustentabilidade produtiva e ambiental foi o tratamento E100, situação onde as saídas de N não superaram as entradas / In many parts of the world, the increasing demand and, especially in arid regions the natural scarcity of water has stimulated researches in terms of sustainable water reuse practices. Within human activities, common agricultural irrigation reveals one of the most consumptive practices of natural water resources. One alternative to minimize this problem represents the reuse of effluent generated by biological sewage treatment systems. The objective of this study was to investigate the impact of treated wastewater application in the dynamic of carbon (C) and nitrogen (N), and microbial metabolism of a soil under pasture. The study was carried out at Lins, São Paulo State, Brazil on a Tifton 85 bermudagrass pasture irrigated with secondary treated sewage effluent using a randomized complete block design with six treatments: SI (control, without irrigation and fertilization), W100 (potable water irrigation + 520 kg of N ha-1 year-1); E0, E33, E66 and E100 (treated wastewater irrigation + 0, 33, 66 and 100% of 520 kg of N ha-1 year-1). Samples of treated effluent/water, soil, plant (litter fall), and gases were taken from January 2004 through October 2007 and the treatments were kept under irrigation management receiving between 420 and 1,500 mm of water and treated sewage corresponding to an input of 640 to 2,300 kg ha-1 yr-1 of C and 135 to 480 kg ha-1 year-1 of N . Soil C stocks decreased slightly in the E33 treatment (-1.3 Mg ha-1) and a larger decrease was observed in W100 (-7.9 Mg ha-1). The inputs of organic C by the treated sewage did not affect the soil carbon isotopic composition (\'delta\' 13C), and in the irrigated treatments measured shifts in the isotopic signature (-0,7 a -1,2%o ) were caused by the mineralization of the remaining soil organic matter (SOC) (C3 plants). After 4 years of irrigation the only significant changes in soil N stocks were found in the W100 treatment (-450 kg de N ha-1). The \'deta\' 15N signature of the soil organic matter (0-5 cm depth) in the treatments irrigated with treated sewage was significantly higher (+2,2%o) than WI and W100, this suggests higher nitrogen cycling. The \'delta\' 15N signature of grass was enriched relative to the soil of W100 and WI +2,5%o and +4,9%o respectively). Negative or null rates of mineralization and nitrification occurred in the dry season of 2004, rainy and dry season of 2005 indicated an immobilization by the microorganisms, as a result of a high C:N ratio in the SOC. In the dry and wet seasons of 2006, mineralization and nitrification rates became positive suggesting a decrease of the C:N ratio, and the end of both priming effect and, thus the beginning of N cycling in the soil organic matter. Soils in the treatments showed low CH4 consumption rates (-0.1 kg de C ha-1 semester-1) and in some cases low emissions (+0.8 kg de C ha-1 emester-1). Nitrogen availability and soil moisture did not appear to be limiting factors for the treatments, thus CO2 emissions did not differ from each other over the collections (averages of 14.7 e 12.2 Mg of C ha-1 for wet and dry season, respectively). The highest CO2 fluxes were more related to periods of high precipitation and/or irrigation than to the applied treatments. The highest emissions of nitrous oxide were observed after the application of mineral N to the treatments irrigated with treated sewage, and the emissions were straightly related to the N addition. Values of Cmic:TOC (microbial C : Total Organic C) in the treatments averaged between 2.3 and 3.8 % through the seasons which means a significant resilience of the ecosystem, indicating that soil microbial community varied seasonally in their Cmic. Addition of mineral nitrogen and grass cutting practices influenced positively resulting in increase of Cmic in the first hydrological year and in the dry season in 2006, as well as an increase of soil moisture resulting in good conditions for C availability. With the increase metabolic activity in the dry season of 2004 and a continuous metabolic activity in the rainy season in 2005, the metabolic quotient (qCO2) resulted in an efficient scenario of conversion of C-CO2 into microbial biomass. In the second year, with a decrease of the irrigation depths and an increase in salts concentration after fertilization, the treatments irrigated with treated sewage and fertilizers presented decrease of Cmic with stable respiration (dry season 2005) or increase respiration (wet season 2006) after the management, and as a result qCO2 indicated inappropriate conditions for the microorganisms. In the dry season (2006) the physiological profile of the soil remained instable with no stress and Cmic increased and soil respiration remained inaltered. According to these results, the microbial indicators were not efficiently sensitive for revealing the more impacting management to the soil. The co-physiological indicators showed only the regular microbial metabolism along the agricultural practices. Carbon biomass exported by the grass in the E33 (15.2 Mg C ha-1 yr-1) did not differ from the biomass produced in the other treatments and the alterations in its C stocks were low compared to the other treatments. As a result, E33 seems to be the more sustainable and efficient practice for treated sewage use. Both the E66 and E100 treatments had high measured rates of N export, responding linearly up to 940 kg of N ha-1 yr-1. Thus, according to the variables studied, the management with highest sustainability was E100 where N outputs did not surpass the inputs