O objetivo desta tese foi avaliar o efeito de distintos eventos agressivos, pertinentes ao contexto fisiopatológico da Paralisia Cerebral, na gênese de um modelo animal capaz de reproduzir as alterações anatômicas, bioquímicas e funcionais a fim de que se obtenha um fenótipo comportamental e neuropatológico mais semelhante à doença. Para isso, foram realizados três experimentos. No primeiro, foram examinados os efeitos de baixas doses da endotoxina bacteriana (lipopolissacarídeo, LPS), associada ou não com a anóxia perinatal (AP), nos parâmetros inflamatórios e de estresse oxidativo no córtex cerebral de filhotes de ratos Wistar machos recém nascidos. Foram avaliadas os níveis de TNF-α, IL-1, IL-4, SOD, CAT e DCF. Outros animais foram submetidos à avaliação dos marcos do desenvolvimento do dia 1º ao 21º dia de vida (P1 - P21). O comportamento motor também foi avaliado no P29 utilizando-se o campo aberto e o Rotarod. O LPS e a AP sozinhos obtiveram impactos diferentes na atividade de SOD e nos níveis de IL-1, TNF-α e radicais livres acompanhados com leve impacto no desenvolvimento e desempenho motor. Quando o LPS e a AP foram combinados, as mudanças nos parâmetros inflamatórios e de estresse oxidativo foram maiores. Adicionalmente, na combinação dos eventos, maiores limitações no desenvolvimento motor e na coordenação foram observadas. No segundo e terceiro experimentos, investigamos parâmetros de plasticidade morfológica na medula espinal de ratos submetidos à restrição sensório-motora (RS), associada ou não à estimulação locomotora. Ratos Wistar machos foram expostos à RS do P2 ao P28. Ratos controle e experimentais foram submetidos ao treinamento de estimulação locomotora em esteira com duração de três semanas (do P31 até P52). Foram determinadas a área de secção transversal (AST) de motoneurônios ao nível da lombar (L5), assim como de fibras nervosas mielinizadas do nervo isquiático (segundo experimento). Também, foram avaliadas a imunorreatividade à sinaptofisina e à caspase-3 no corno ventral da medula espinal (L5; terceiro experimento). Após a RS, a área média do soma dos motoneurônios foi reduzida, acompanhada pela redução da AST média das fibras nervosas do nervo isquiático. Adicionalmente, houve redução na imunorreatividade à sinaptofisina, associada a um aumento na expressão de caspase-3. Essas alterações foram revertidas, alcançando níveis do grupo controle, quando os animais submetidos à RS foram expostos à estimulação locomotora. Nossos resultados sugerem que, em ratos, infecções/inflamação, asfixia perinatal e a inatividade no início da vida pós-natal podem criar substratos para reproduzir um fenótipo clínico relevante e similar aos observados na PC. / The aim of this thesis was to evaluate the effect of different aggressive events, relevant to pathophysiological context involved in Cerebral Palsy (CP), in the genesis of an animal model able to reproduce the anatomical, biochemical and functional alterations in order to obtain a behavioral and neuropathological phenotype more similar to CP. For this, we made three experiments. In the first one, the effects of maternal exposure to low doses of bacterial endotoxin (lipopolysaccharide, LPS) associated or not with perinatal anoxia (PA) on oxidative stress and inflammatory parameters which were examined in cerebral cortices of newborns Wistar male pups. Concentrations of TNF-α, IL-1, IL-4, SOD, CAT and DCF were measured. Other newborn rats were assessed for neonatal developmental milestones from day 1 to 21 (P1 – P21). Motor behavior was also tested at P29 using openfield and Rotarod. LPS and PA alone had different impacts on SOD activity and IL-1, TNF- α and free radicals levels accompanied with slight impact on development and motor performance. When LPS and PA were combined, changes in inflammatory and oxidative stress parameters were greater. In addition, greater motor development and coordination impairments were observed. In the second and third experiments, we investigated morphologic parameters of spinal cord plasticity in rats that undergone through sensorimotor restriction (SR), associated or not to locomotor stimulation. Male Wistar rats were exposed to SR from P2 to P28. Control and experimental rats underwent locomotor stimulation training in a treadmill for three weeks (from P31 to P52). The cross-sectional area (CSA) of spinal motoneurons at lumbar level (L5) as well of myelinated fibers from ischiatic were determined. Also, the intensity of the synaptophysin and caspase-3 immunoreaction was assessed within ventral horn of spinal cord (L5; third experiment). After SR, the mean motoneuron soma size was reduced accompanied by a reduction in the mean fiber and axon CSA of ischiatic nerve. In addition, there was a synaptophysin immunoreactivity reduction accompanied by an increased caspase-3 immunoreactivity. Those alterations were reversed and reached the control levels when animals submitted to SR were exposed to locomotor stimulation. Our results suggest that, in rodents, infections/inflammation, perinatal anoxia and inactivity during early postnatal life could play an important role by creating substrates for the pathological behavior thus, contributing to reproduce clinically relevant phenotype similar to those observed in CP.

Orientador: Leticia Helena Theodoro / Coorientador: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Leonardo Perez Faverani / Banca: Edilson Ervolino / Banca: Cassius Carvalho Torres Pereira / Banca: Mark Wainwright / Resumo: O presente estudo avaliou pela primeira vez "in vivo" os efeitos de três concentrações do butyl azul de toluidina (BuTB) como agente fotossensibilizador na terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT), como terapia coadjuvante a raspagem e alisamento radicular (RAR), para o tratamento de periodontite experimental (PE) em ratos. A PE foi induzida por meio da instalação de um fio de algodão ao redor do primeiro molar inferior esquerdo. Posteriormente os animais foram aleatoriamente distribuídos em 7 grupos com 15 animais cada, através de uma tabela gerada por computador, de acordo com os seguintes tratamentos: RAR (n=15) - RAR seguido de irrigação local de solução salina fisiológica; BuTB-0,1 (n=15) - RAR seguido de aplicação local de BuTB na concentração de 0,1 mg/mL; aPDT-0,1 (n=15) - RAR seguido da aplicação local de BuTB na concentração de 0,1 mg/mL e irradiação com laser de diodo (LD) de InGaAlP (660 nm, 40 mW, 60 s, 2,4 J); BuTB-0,5 (n=15) - RAR seguido de aplicação local de BuTB na concentração de 0,5 mg/mL; aPDT-0,5 (n=15) - RAR seguido da aplicação local de BuTB na concentração de 0,5 mg/mL e irradiação com LD; BuTB-2,0 (n=15) - RAR seguido de aplicação local de BuTB na concentração de 2 mg/mL; aPDT-2,0 (n=15) - RAR seguido da aplicação local de BuTB na concentração de 2 mg/mL e irradiação com LD. Decorridos 7, 15 e 30 dias pós-tratamento, 5 animais de cada grupo foram submetidos à eutanásia. A área de furca dos molares foi submetida às análises histológica, histométrica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study evaluated for the first time the effects of three concentrations of butyl toluidine blue (BuTB) as a photosensitizing agent on antimicrobial photodynamic therapy (aPDT), as adjuvant therapy to scaling and root planing (SRP), for the treatment of experimental periodontitis (EP) in rats. EP was induced by placing a cotton thread around the lower left first molar. Subsequently, the animals were randomly distributed into seven groups with 15 animals each, through a computer generated table, according to the following treatments: SRP (n = 15), SRP followed by local irrigation of physiological saline solution; BuTB-0.1 (n = 15), SRP followed by local application of 0.1 mg/mL BuTB; aPDT-0.1 (n = 15), SRP followed by local application of BuTB at 0.1 mg/mL concentration and irradiation with InGaAlP diode laser (DL) (660 nm, 40 mW, 60 s, 4 J); BuTB-0.5 (n = 15), SRP followed by local application of BuTB at 0.5 mg/mL concentration; aPDT-0.5 (n = 15), SRP followed by local application of BuTB at 0.5 mg/mL concentration and DL irradiation; BuTB-2.0 (n = 15), SRP followed by local application of BuTB at 2 mg/mL concentration; aPDT-2.0 (n = 15), SRP followed by local application of BuTB at 2 mg/mL concentration and DL irradiation. The animals (n=5) from each group were submitted to euthanasia at 7, 15 and 30 days post-treatment. The furcation area of the first lower molar was submitted to histological, histometric and immunohistochemical analyses to identify TGF-ß1, OCN an... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

OBJETIVO: analisar, por meio de morfometria digital, a reação intimal presente na artéria carótida de suínos submetidos à angioplastia isoladamente e à angioplastia seguida de implante de stent de cromo - cobalto. MATERIAIS E MÉTODOS: em oito suínos sadios foi realizada a angioplastia isolada da artéria carótida comum (ACC) direita e angioplastia com implante de um stent de cromo – cobalto expansível por balão na artéria carótida comum esquerda. Após período de quatro semanas, os animais foram submetidos à eutanásia para a retirada de amostras de tecido arterial e preparo de lâminas histológicas divididas do seguinte modo: grupo 1, segmento médio da artéria carótida comum direita (angioplastia isolada); grupo 2, segmento médio da artéria carótida comum esquerda em localização “intra stent”. As imagens das lâminas foram digitalizadas e analisadas por programa de morfometria digital com cálculo da área luminal, área da camada íntima e área da camada média dos cortes histológicos. A análise estatística foi realizada através da média e desvio padrão das áreas em cada grupo, utilizando-se Teste t de Student. O valor de p<0,05 foi considerado significativo. RESULTADOS: na análise das médias das áreas obtidas, foi encontrada maior hiperplasia em resposta ao implante de stent e diferença estatisticamente significativa quando realizada a comparação entre a área do lúmen (5,841 x 106μm2 X 1,287 x 106μm2), da lâmina elástica interna (6,566 x 106μm2 X 1,287 x 106μm2) e lâmina elástica externa (9,832 x 106μm2 X 4,559 x 106μm2) dos dois grupos (ATP + STENT X ATP; medidas em micrômetros quadrados). Não se observou diferença significativa do ponto de vista estatístico quando se realizou a comparação entre as camadas médias dos dois grupos (3,266 x 106μm2 X 3,271 x 106μm2). CONCLUSÃO: o implante de stent de cromo-cobalto expansível por balão na ACC do suíno gerou um espessamento intimal maior do que aquele produzido apenas pela angioplastia, porém este não foi suficiente para afetar o lúmen arterial. / OBJECTIVE: to analyze, through digital morphometry, the intimal reaction in the carotid artery of pigs submitted to isolated angioplasty and angioplasty followed by implantation of cobalt-chromium stent. MATERIALS AND METHODS: eight healthy pigs had their common carotid artery (CCA) submitted to isolated angioplasty in the right side and angioplasty plus stenting in the left side. Four weeks latter, all animals were submitted to euthanasia for arterial tissue sampling and preparation of histological blades sorted as follows: group 1, middle segment of common right carotid artery (isolated angioplasty); group 2, middle segment of common left carotid artery (intra-stent). Blade images were scanned and analyzed through a digital morphometry program with calculation of luminal, intimal and media layers area in the histological sections. The statistical analysis was performed through mean values and standard deviations of the areas in each group, using the Student’s t-Test. The value of p<0.05 was considered significant. RESULTS: When compare to angioplasty alone, the stent group showed greater hyperplasia in response to implantation regarding the lumen area (5.841 x 106μm2 X 1.287 x 106μm2), the internal elastic lamina area (6.566 x 106μm2 X 1.287 x 106μm2) and the external elastic lamina area (9.832 x 106μm2 X 4.559 x 106μm2). No statistically significant difference was observed when comparing the media layers of both groups (3.266 x 106μm2 X 3.271 x 106μm2). CONCLUSION: angioplasty followed by the implantation of a cobalt-chromium balloon expandable stent in the CCA of the pig creates more intimal thickening than angioplasty alone. Nevertheless intimal thickening was not enough to affect the luminal area thanks to a positive elastic remodeling effect.

A utilização de plantas com fins medicinais, para o tratamento, a cura e a prevenção de doenças é uma das formas mais antigas de prática medicinal da humanidade. A espécie Croton cajucara BENTH (CcB) é uma planta nativa e endêmica da região Amazônica, onde é popularmente conhecida como “sacaca”. É muito utilizada na medicina popular, sob a forma de chás da casca e de folhas no tratamento de diversas doenças, como o diabetes. Estudos experimentais e clínicos sugerem que o estresse oxidativo esteja envolvido na patogênese e na progressão do diabetes. Este estudo tem como objetivos avaliar os efeitos do extrato aquoso da casca do CcB sobre as alterações hepáticas, os níveis plasmáticos de glicose, triglicerídeos (TG) e colesterol, os efeitos genotóxicos, o estresse oxidativo, a concentração de nitritos e nitratos e a ativação da subunidade p65 do fator de transcrição nuclear Kappa B em fígado de animais diabéticos induzidos por estreptozotocina (STZ). Foram utilizados ratos machos Wistar, divididos em seis grupos com dez animais cada: controle (CO); controle com tratamento durante cinco dias com CcB (CcB5D); controle com tratamento durante 20 dias com CcB (CcB20D); diabéticos (DM); diabéticos com tratamento durante cinco dias com CcB (DM5D); e diabéticos com tratamento durante 20 dias com CcB (DM20D). O DM foi induzido por administração intraperitonial de STZ na dose de 70mg/Kg. O extrato aquoso (EA) foi preparado com 5g da casca do CcB/100mL H2O e administrado na dose de 1,5mL intragástrica. Após 60 dias, foi coletado sangue do plexo retro-orbital para as análises das enzimas séricas: AST, ALT, FA e dosagem de glicemia, triglicerídeos e colesterol. Para avaliar a atividade genotóxica do extrato, foi utilizado o teste de micronúcleos (MN) em medula óssea. O homogeneizado do fígado foi utilizado para avaliação de lipoperoxidação (LPO) através das substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e para avaliação da atividade das enzimas antioxidantes SOD, CAT, GPx e GSH, avaliação dos metabólitos do óxido nítrico (nitritos e nitratos totais) e a expressão nuclear da subunidade p65 do NF-kB. A análise das enzimas séricas mostrou que houve aumento de ALT e FA nos animais DM em relação aos grupos CO, e que a ALT apresentou-se diminuida nos animas DM tratados durante cinco e 20 dias. O tratamento com CcB não diminuiu os níveis da glicemia e do colesterol, houve, porém, redução significativa nos níveis de TG nos animais diabéticos tratados durante cinco e 20 dias. O tratamento com CcB não diminuiu os níveis da glicemia e do colesterol, houve, porém, redução significativa nos níveis de TG nos animais diabéticos tratados durante cinco e 20 dias. O EA do CcB mostrou-se destituído de ação genotóxica. Houve aumento no TBARS e na SOD em animais DM e diminuição significativa nos animais diabéticos tratados durante cinco e 20 dias. Por outro lado, verificou-se aumento de TBARS e da atividade da SOD no grupo CO20D. A atividade da CAT e da GPx não apresentaram diferenças significativas entre os grupos estudados. A GSH apresentou-se diminuída nos animais diabéticos em relação aos controles e ao grupo DM5D. Os animais diabéticos apresentaram aumento nos níveis dos metabólitos do óxido nítrico em relação aos animais controles, e a administração do EA do CcB não reverteu essa situação. Houve ativação da expressão nuclear do p65 nos animais diabéticos que foi atenuada nos animais que receberam o EA do CcB. O tratamento dos ratos diabéticos com o EA de CcB parece melhorar os níveis de TG, não reduziu, no entanto, a glicemia e o colesterol, provavelmente por se tratar de um modelo de diabetes crônico. O tratamento diminuiu a LPO e a atividade da SOD, provavelmente devido à atividade antioxidante do EA do CcB como varredor de radicais ânion superóxido. Os resultados mostram que, em situações onde não há estresse oxidativo, o uso prolongado de CcB comporta-se como pró-oxidante e, em situações onde existe estresse oxidativo, o tratamento com o CcB pode possuir ação antioxidante varredora de radicais livres. Além disso, os resultados parecem sustentar a hipótese de que o estresse oxidativo presente do DM estimula a expressão do NF-kB e que administração do EA do CcB reduz essa expressão. / The use of plants for medical purposes in the treatment, cure and prevention of diseases is one of the oldest medical practices of mankind. Croton cajucara BENTH (CcB) is a vegetal species that is native and endemic in the Amazonian region, where it is popularly known as “sacaca”. Bark and leaf infusions of sacaca are widely used in folk medicine to treat many diseases, such as diabetes. Experimental and clinical studies suggest that oxidative stress is involved in the pathogenesis and progress of diabetes. The present study was designed to evaluate the effects CcB aqueous extracts (AE) on hepatic changes, plasma levels of glucose, triglycerides (TG) and cholesterol, genotoxic effects, oxidative stress, nitrites and nitrates levels, and on activation of the p65 subunit of nuclear Kappa B transcription factor (NF-B) in the livers of animals made diabetic by streptozotocin (STZ) administration. Six groups of 10 male Wistar rats each were used as follows: controls (CO); controls with 5-day treatment with CcB (CcB5D); controls with 20- day treatment with CcB (CcB20D); diabetics (DM); diabetics with 5-day treatment with CcB (DM5D); and diabetics with 20-day treatment with CcB (DM20D). DM was induced by intraperitoneal administration of STZ (70mg/Kg). The aqueous extract was obtained using 5g of CcB bark for 100ml H2O and intragastrically administered at a dose of 1.5mL. After 60 days retro orbital blood samples were obtained for analysis of serum enzymes AST, ALT, FA and glucose, triglyceride and cholesterol levels determination. The genotoxic activity was evaluated using the micronucleus assay (MN) in bone marrow. The liver homogenates were used for evaluation of lipoperoxidation (LPO) through thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), antioxidant enzymes SOD, CAT, GPx and GSH, nitric oxide metabolites (total nitrites and nitrates) and nuclear expression of p65 of NF-kB. The analysis of serum enzymes showed that there was an increase in ALT and AP in DM animals as compared to CO groups, and ALT was decreased in DM animals treated for 5 and 20 days. The treatment with CcB did not reduce the glycemia and cholesterol level, but there was a significant reduction in the TG levels in DM animals treated for 5 and 20 days. The CcB aqueous extract failed to show any genotoxic action. TBARS and SOD were increased in DM animals and significantly decreased in diabetic animals treated for 5 and 20 days. On the other hand, TBARS and SOD activity were increased in the CcB20D group. CAT and GPx activities were not significantly different across the studied groups. GSH was decreased in the diabetic animals as compared to controls and the DM5D group. The diabetic animals presented an increase in the metabolite levels of nitric oxide as compared to controls, and the administration of CcB AE failed to reverse this situation. There was activation of p65 nuclear expression in the diabetic animals, which was attenuated in the animals receiving the CcB AE. The treatment of diabetic rats with CcB appears to improve TG levels, but it did not reduce glycemia and cholesterol levels, probably because the study dealt with a chronic diabetes model. The treatment decreased LPO and SOD activity, probably because of CcB’s antioxidant activity as scavenger of superoxide anion radicals. The results show that in situations where there is no oxidative stress the extended use of CcB behaves acts as a pro-oxidant and in situations where there is oxidative stress the treatment with CcB may be an antioxidant scavenger of free radicals. Furthermore, the results seem to support the hypothesis that the oxidative stress seen in DM stimulates NF-B expression and that CcB AE administration reduces such expression.

O uso de tetracloreto de carbono (CCl4) em ratos é um modelo experimental de dano ao tecido hepático, desencadeando fibrose e, a longo prazo, cirrose. Seu metabolismo ocorre no fígado pelo citocromo P450, resultando na produção de radicais livres e estimulação da lipoperoxidação, que induz um processo de necrose, inflamação e maior progressão da fibrose. Vários antioxidantes, entre eles os flavonoides, têm sido referidos como eficazes para diminuir a fibrose em modelos animais. Este estudo pretende avaliar a ação antioxidante da quercetina (Q) em um modelo experimental de cirrose induzida por CCl4 inalatório. Foram utilizados 25 ratos Wistar machos, com peso médio de 250g, divididos em 3 grupos: Controle (CO), CCl4 e CCl4+Q. Os ratos foram submetidos a inalações de CCl4 (2x/semana), durante 16 semanas, recebendo fenobarbital na água de beber na dose de 0,3g/dl, como indutor enzimático. A Q (50mg/Kg) via intraperitoneal foi iniciada na 10ª semana de inalação, perdurando até o final do experimento. A análise estatística foi ANOVA, seguida de Student Newmann Keuls (Média±SEM), considerando-se diferença estatisticamente significativa quando p<0,05. Após o tratamento com quercetina, observamos uma melhora na integridade hepática, diminuição da fibrose, do conteúdo de colágeno e re-estabelecimento nos níveis dos metabólitos do óxido nítrico, comparado ao grupo CCl4. Constatou-se também redução do dano oxidativo, verificada pela diminuição das substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS), assim como aumento na atividade das enzimas antioxidantes e da relação GSH/GSSG. A partir desses dados, sugerimos que o emprego da quercetina possa ser promissor como terapia antioxidante nas complicações hepáticas. / Carbon tetrachloride (CCl4) is a classic experimental model of oxidative damage to liver tissue, causing long-term fibrosis and cirrhosis. Metabolism in the liver via cytochrome P450 results in the stimulation of lipid peroxidation and production of free radicals, which induce a process of necrosis, inflammation and greater progression of fibrogenesis. Various antioxidants and flavonoids have been identified as effective in reducing fibrosis in animal models. This study aimed to assess the antioxidant activity of quercetin (Q) in an experimental model of cirrhosis induced by CCl4 inhalation. We used 25 male Wistar rats (250g) that were divided into 3 groups: control (CO), CCl4 and CCl4 + Q. The rats were subjected to CCl4 inhalation (2x/week) for 16 weeks, and they received phenobarbital in their drinking water at a dose of 0.3 g/dl as a P450 enzyme inducer. Q (50 mg/Kg) was initiated intraperitoneally at 10 weeks of inhalation and lasted until the end of the experiment. Statistical analysis was by ANOVA Student-Newman Keuls (mean ± SEM), and differences were considered statistically significant when p <0.05. After treatment with quercetin, we observed an improvement in liver integrity, decreased fibrosis, as analyzed by picrosirius for the quantification of collagen, and restored levels of nitric oxide metabolites compared with the CCl4 group. It also reduced oxidative stress, as confirmed by the decrease of substances reacting to thiobarbituric acid (TBARS), the increased activity of antioxidant enzymes and the reduced glutathione ratio and glutathione disulfide (GSH/GSSG). From these data, we suggest that the use of quercetin might be promising as an antioxidant therapy in liver complications.

A fenilcetonúria (PKU) é causada pela deficiência severa da atividade da fenilalanina hidroxilase (PAH), enzima responsável pela conversão de fenilalanina (Phe) em tirosina (Tyr), levando ao aumento dos níveis sanguíneos e teciduais de Phe, bem como de seus metabólitos fenilpiruvato (PPA), fenilactato (PLA) e fenilacetato (PAA). Os pacientes com PKU apresentam disfunção neurológica severa, manifestando convulsões, retardo mental e psicomotor, sintomas que estão associados ao acúmulo desse aminoácido e seus metabólitos. A restrição dietética, que faz parte do tratamento da PKU, nem sempre é mantida pelos pacientes e pode afetar o status antioxidante devido à restrição de nutrientes. Estudos recentes em ratos e com pacientes fenilcetonúricos mostram que o estresse oxidativo (EO) pode estar envolvido na neurofisiopatologia dessa doença, possivelmente devido ao aumento na produção de espécies reativas, e diminuição das defesas antioxidantes. O cérebro, órgão afetado na doença, é extremamente sensível ao EO devido a baixas defesas antioxidantes, alta concentração de ferro e lipídeos insaturados. Aparentemente o fígado não é afetado na PKU, mas é um importante órgão de detoxificação e reservatório de GSH (tripeptídeo antioxidante). O ácido lipoico (AL) é um potente antioxidante facilmente adquirido da dieta, absorvido pelo organismo e tem sido sugerido em estudos para o tratamento e prevenção de EO em modelos de doenças neurodegenerativas. Um estudo recente demonstrou um efeito protetor do AL contra o EO gerado por uma concentração tóxica de Phe em cérebro de ratos jovens. O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito do AL na prevenção do EO gerado em um modelo crônico de PKU induzido por injeções diárias de Phe e α-metilfenilalanina (inibidor da PAH). No presente trabalho, o modelo de hiperfenilalaninemia (HPA) causou, no cérebro, aumento de dano a lipídeos, proteínas e DNA; aumento da atividade da superóxido dismutase e diminuição da atividade da catalase, além de mostrar que essas enzimas podem ter um papel importante neste processo, uma vez que suas atividades são afetadas diretamente pela presença de Phe e seus metabólitos. Também foi possível descrever algumas espécies reativas específicas geradas no processo oxidativo envolvido na HPA, como de H2O2, NO• e O2 •-. E ainda, identificou-se que o EO não está restrito ao cérebro e que o fígado pode ter um papel importante em defesa ao EO encontrado na doença. As enzimas glutationa peroxidase, glutationa redutase, glicose-6-fosfato desidrogenase e o conteúdo total de GSH foram diminuídos pela HPA em cérebro dos animais e a atividade da glutamato cisteína ligase foi aumentada. Já no fígado, todas as enzimas relacionadas ao metabolismo da GSH foram aumentadas pela HPA. O tratamento com AL foi capaz de prevenir as alterações enzimáticas além de impedir o dano a biomoléculas. O AL também preveniu o aumento da produção de H2O2 e NO• no cérebro dos animais submetidos ao tratamento de HPA. Quanto ao metabolismo da GSH, o AL foi capaz de manter as atividades enzimáticas aos níveis do controle além de restaurar a produção de GSH no cérebro dos animais afetados pela HPA. De acordo com os resultados, é possível que um tratamento com antioxidantes seja eficaz na manutenção da homeostasia redox nos pacientes servindo como uma abordagem terapêutica inovadora e adicional ao tratamento dietético já aplicado aos pacientes de PKU. / Phenylketonuria (PKU) is caused by a severe deficiency of phenylalanine hydroxylase (PAH), the enzyme responsible for the conversion of phenylalanine (Phe) to tyrosine (Tyr), leading to increased blood and tissue levels of Phe and its metabolites phenylpyruvate (PPA), phenylactate (PLA) and phenylacetate (PAA). Patients with PKU have severe neurological dysfunction, characterized by seizures, mental retardation and psychomotor symptoms that are associated with the accumulation of this amino acid and its metabolites. A restrict diet important for PKU treatment, is not always maintained by patients and this can affect the antioxidant status due to nutrient limitation. Recent studies in rats and patients with PKU show that oxidative stress may be involved in the neuropathophysiology of this disease, possibly due to increased production of reactive oxygen species and decreased antioxidant defenses. The brain, organ affected in the disease, is extremely sensitive to oxidative stress due to low antioxidant defenses and high concentrations of Fe and unsaturated lipids. Apparently, the liver is not affected in PKU, but it is an important organ of detoxification and GSH reservoir (tripeptide antioxidant). Lipoic acid (LA) is a potent antioxidant easily acquired from the diet, absorbed by the body and has been suggested for the treatment and prevention of oxidative stress in different neurodegenerative diseases in many studies. A recent study showed a protective effect of LA against the oxidative stress generated by a toxic concentration of Phe in the brain of young rats. The aim of this study was to evaluate the effect of LA in preventing the oxidative stress generated in a chronic model of PKU induced by daily injections of Phe and α-methylphenylalanine (PAH inhibitor) for 7 days. The hyperphenylalaninemia (HPA) model caused in brain an increase of damage to lipids, proteins and DNA; increased superoxide dismutase activity and decreased catalase activity, showing that these enzymes may play an important role in this process, since their activities are directly affected by the presence of Phe and its metabolites. It was also reported some specific reactive species generated in the oxidation process involved in HPA as H2O2 , NO• and O2 • -. In addition, it was found that oxidative stress is not restricted to the brain, and the liver may play an important role in defense to oxidative stress found in the disease. Activities of glutathione peroxidase, glutathione reductase, glucose-6-phosphate dehydrogenase and total content of GSH were decreased by the HPA in the brain of animals and the activity of GCL was increased. In the liver, all enzymes related to GSH metabolism were increased by the HPA. Treatment with LA was able to prevent the enzymatic changes in addition to preventing damage to biomolecules. The overproduction of H2O2 and NO• by HPA model was inhibited by LA treatment. Regarding to GSH metabolism, LA was able to maintain enzyme activities and GSH production at control levels in the brain of animals affected by HPA. According to our results, it is possible that a treatment with antioxidants is effective in maintaining redox homeostasis in patients and may be a novel therapeutic approach additional to dietary treatment already applied to PKU patients.

Objetivo: Desenvolver um modelo experimental de aneurisma cerebral em artéria de suínos. Secundariamente, avaliar o processo de organização do trombo e de formação de tecido fibrocelular dentro do aneurisma com o tratamento endovascular utilizando molas revestidas (Matrix) comparadas às sem revestimento (GDC). Materiais e Métodos: Em 10 suínos sadios, com peso variando entre 16 e 20 kg, sendo 6 machos e 4 fêmeas, foi realizada a cirurgia de formação de aneurisma nas carótidas bilateralmente, através de arteriotomia e anastomose término-lateral com segmento de veia jugular. O diâmetro médio dos aneurismas era de 3 mm (variação de 2 a 4mm). Procedia-se então ao tratamento endovascular dos aneurismas divididos do seguinte modo: grupo I, embolização do aneurisma da carótida esquerda com mola de platina (GDC); grupo II, embolização do aneurisma da carótida direita com mola de platina revestida com copolímero - PGLA 90/10 (Matrix). Após 14 dias, eram retiradas as lesões e analisadas microscopicamente, comparando-se a formação de trombo recente ou trombo organizado no interior de cada aneurisma. Para isso, foi criada uma escala de caracterização das fases do processo de trombose (Escores de 1 a 4). O Escore 1 era definido como a presença de trombo inicial ou recente; o Escore 2 era categorizado como a presença de leucócitos em diferenciação contendo fibrina e absorção das hemácias e plaquetas, porém intercalados com zonas contendo trombo recente. No Escore 3, observavase a presença de leucócitos em diferenciação contendo fibrina e no Escore 4, a presença de tecido fibrocelular contendo fibras de colágeno. A análise estatística foi realizada de modo pareado, através do Teste de Wilcoxon, sendo os dados processados no programa SPSS 12.0. O nível de significância mínimo adotado foi de 5%. Resultados: Um animal (macho) foi excluído do estudo devido à formação de abscesso cervical, restando, portanto, 9 animais (18 aneurismas para avaliação). Na análise do processo de organização do trombo, utilizou-se a graduação por escores, obtendo-se no grupo I, 88,8% de casos de trombo recente (Escore 1) e 11,1% de casos de trombo em organização ainda contendo coágulo (Escore 2). No grupo II, obteve-se 11,1% de casos com escore 1 , 11,1% com escore 2, 55,5% de casos de trombo organizado com tecido fibrocelular frouxo (Escore 3) e 22,2% de casos de tecido fibrocelular denso contendo colágeno (Escore 4). Houve diferença estatística a favor do grupo II, por meio do Teste de Wilcoxon (p=0,008). Conclusão: O modelo experimental de aneurisma de pequenas dimensões utilizado neste estudo foi adequado e permitiu a realização do tratamento endovascular testando dois tipos de molas. Por meio da análise histológica baseada em escala criada para avaliar a organização do trombo, pôde-se verificar diferença significativa a favor das molas com revestimento de copolímero. / Background and Objectives: To develop an experimental model in a pig that could be used for analysis of patency of cerebral aneurysms is the goal of this study. Adictionaly, it aims to evaluate the degree of thrombosis after embolization with two types of coils: copolymer-coated coils (Matrix) and uncoated platinum coils (GDC). Method: In a total of 10 Large-White pigs, small aneurysms (with a mean diameter of 3 mm) were created in both carotid arteries (6 males and 4 females) weighing 16 to 20 kg (mean: 18 kg). Embolization was performed with GDC platinum coils on the left side and with a coil coated with Matrix polymer on the right side. After 14 days, angiography was performed to confirm exclusion of the aneurysm. Before euthanasia with a lethal dose of potassium chloride, the carotid artery was removed in one piece, including the aneurysm. The specimens were cut into sections, including the mid portion of the aneurysm and the artery above and below the aneurysm, and stained with hematoxylin- eosin for histological analysis. A graduated scale with progressive scores ranging from 1 to 4 was used to evaluate the organization of the thrombus. Score 1 indicated clusters of platelets, white blood cells, and red blood cells; Score 2 showed the presence of differentiating white blood cells containing fibrin and absorption of red blood cells and platelets, interspersed with zones containing a recent thrombus; Score 3 corresponded to the presence of differentiating white blood cells containing fibrin, which characterized a loose fibrocellular tissue; and Score 4 indicated the presence of fibrocellular tissue containing collagen fibers, which characterized an incipient dense fibrocellular tissue The data were described as frequency and percentage using the Wilcoxon test for findings involving thrombosis scores. The data were analyzed using the SPSS 12.0 software, and the minimum significance level was set at 5%. Results: One animal (male) was excluded from the study due to abscess formation near the anastomosis. Therefore, 9 animals (18 aneurysms) were assessed. A score was used for analyzing the organization of the thrombus. In group I, 88.8% had score 1, 11.1% score 2, but no cases showed scores 3 and 4. In group II, 11.1% had score 1, 11.1% score 2, 55.5% score 3, and 22.2% score 4. The Wilcoxon test was applied, revealing a significant difference (p=0.008) between the scores for group I and group II in the course of 14 days. Conclusion: The experimental aneurysm developed in this study was suitable for assessing the patency of small aneurysms (measuring, on average, 3 mm) after coil embolization. The organization of the intra-aneurysmal thrombus after 14 days was verified using the progressive score, which indicated a significant difference between the group treated with the Matrix coil and that treated with GDC.

A sepse é um conjunto complexo de interações moleculares e celulares mediado pela estimulação de receptores celulares envolvidos na inflamação. O controle desta rede de sinalização é compensado pela resposta pró- e antiinflamatória do organismo. Os desequilíbrios inflamatórios induzidos alteram o estado fisiológico de diversos órgãos. No cérebro, observam-se diversas modificações que envolvem desde o aumento na permeabilidade da barreira hematoencefálica (BHE), morte de células neurais por apoptose ou necrose, redução do fluxo sanguíneo e aumento do estresse oxidativo, resultando no desenvolvimento do delirium associado à sepse. O delirium associado à sepse é um conjunto de disfunções neurológicas induzidas por uma resposta inflamatória sistêmica. Assim, é possível que diferentes mecanismos compensatórios estejam envolvidos durante a sepse. Este estudo objetivou analisar a influência do modelo de ligação cecal e punção (CLP), na excreção de ligantes do receptor para produtos finais de glicação avançada (RAGE) e as modificações ocasionadas no cérebro pela inflamação sistêmica decorrente da sepse. Nossos resultados demonstraram que os níveis séricos de TNF-α aumentaram após a indução da CLP, confirmando o estado inflamatório dos animais CLP, ocorrendo um aumento nos níveis de proteínas carboniladas, HSP70 e HMGB-1 no soro desses animais, indicando um aumento de estresse oxidativo nesses animais e liberação de proteínas associadas a manutenção e estabilização intracelular. Entretanto, encontramos uma redução no imunoconteúdo de destas proteínas no hipocampo e córtex, possivelmente por aumento nos níveis de necrose/lise celular ou por eliminação durante o período de disrupção da BHE. Assim, concluímos que durante a sepse ocorre uma aumento expressivo nos níveis séricos de proteínas associadas a resposta inflamatória crônica, além de alterações nos níveis destas proteínas relacionadas a proteção intracelular no hipocampo e córtex, que pode ter relação com as alterações observadas em pacientes e modelos animais. / Sepsis is a complex whole of molecular and cellular interactions mediated stimulation of cellular receptors involved in inflammation. The control of this system is compensated by pro and anti-inflammatory response in organism. The imbalance induced inflammatory alters the physiological state of different organs. In the brain, there are various modifications that involve from the increase in permeability of the blood-brain barrier (BBB), neural cell death by apoptosis or necrosis, reduced blood flow and increased oxidative stress, resulting in the development of sepsis-associated delirium. Sepsis-associated delirium is a whole of neurological dysfunctions induced a systemic inflammatory response. Thus, it is possible that different compensatory mechanisms are involved during sepsis. The aim of the study was to analyze the influence of the model cecal ligation and puncture (CLP), in the excretion of agonists for receptor advanced glycation end products (RAGE) and alterations in the brain caused by systemic inflammation caused by sepsis. Our results showed that serum levels of TNF-α increased after the induction of CLP, confirming the inflammatory status of CLP animals, which results in increased levels of carbonylated proteins, HSP70 and HMGB-1 in the serum of these animals, indicating an increase of stress oxidative these animals and release of proteins associated with maintaining and stabilizing intracellular. However, happened a reduction in immunocontent these proteins in the hippocampus and cortex, possibly by increased levels of necrosis/lysis cell or by removal during the period of disruption of the BBB. Therefore, concluded that during sepsis occurs a significant increase in serum proteins associated with chronic inflammatory response and changes in levels of proteins related to intracellular protection in the hippocampus and cortex, which may be related to the changes observed in patients and models animals.

Classicamente o testículo tem sido descrito com um órgão não-responsivo aos hormônios tireoidianos. Entretanto, nos últimos anos, diversos estudos têm demonstrado que os hormônios tireoidianos desempenham um papel crítico para o desenvolvimento e função testicular. Trabalhos realizados pelo nosso grupo identificaram a presença da desiodase tipo 2 (D2), enzima envolvida na conversão do T4 no hormônio ativo T3, no testículo de camundongos adultos e sua regulação pelo status tireoidiano. No entanto, a localização da D2 nos diferentes tipos celulares nesse órgão não foi estabelecida. O presente trabalho avaliou a expressão e atividade da D2 nas frações germinativa e somática do testículo, bem como sua atividade nos demais órgãos do aparelho reprodutor de ratos adultos. Para os ensaios de Real Time-PCR e determinação de atividade enzimática, os testículos de ratos controles e hipotireoideos (tratados com metimazol 0,03% por 4 semanas) foram removidos e imediatamente tratados enzimaticamente para isolamento de frações somática e germinativa. Os demais tecidos foram removidos e congelados para posterior utilização. Para os ensaios de hibridização in situ, os animais foram preparados, e os testículos, removidos e analisados. Os sinais de hibridização in situ, confirmados pela determinação dos níveis de mRNA da D2 através da técnica de Real Time-PCR, demonstraram a presença de transcritos da D2 em níveis significativamente maiores nas células germinativas quando comparado às células somáticas (P=0,001). A atividade enzimática da D2 nessas células foi de 0,23 ± 0,003 fmol/min.mg prot. As células tubulares somáticas, bem como as células intersticiais, foram virtualmente negativas para a presença da D2. Nos demais tecidos avaliados, a atividade da D2 foi detectada apenas na próstata (0,03 fmol/min.mg prot). A indução do hipotireoidismo aumentou significativamente a atividade da D2 na fração germinativa (p=0,03), e também na próstata (p=0,007). Este trabalho demonstra, pela primeira vez, a expressão da D2 nas células germinativas do testículo adulto, sugerindo um efeito do hormônio tireoidiano sobre o processo de espermatogênese.

O carcinoma epidermóide do esôfago é neoplasia com alta taxa de mortalidade e distribuição geográfica peculiar. O estudo da célula tumoral ou suas diferenciações pré-tumorais, demonstraram ter por análise imunohistoquímica e genética, inúmeros determinantes que podem ajudar no tratamento. Neste trabalho foi avaliada a expressão imunohistoquímica de p53 e ki-67 na carcinogênese esofágica induzida quimicamente através do uso de dietilnitrosamina, em um grupo de 100 camundongos fêmeas. O estudo experimental foi realizado com 4 grupos de animais, onde os grupos I e II foram considerados controles, sendo diferenciados por gavagem esofágica, uma vez semana, com água fria (temperatura ambiente) ou quente (60º-70ºC). E os grupos III e IV foram considerados estudos, os quais receberam dietilnitrosamina por 3 dias consecutivos semanalmente, também sendo diferenciados por gavagem, uma vez por semana, com água fria ou quente. O estudo apresentou data progressiva de sacrifícios com colheita de peças esofágicas, que iniciava aos 30 dias de experimento e terminava aos 150 dias. Demonstrou-se que não houve diferença na incidência tumoral quando foi acrescida a variável temperatura da água; provavelmente devido ao episódio único semanal que era adicionado ao animal em experimentação. A análise imunohistoquímica do p53 não evidenciou diferença estatística durante a evolução da carcinogênese até 150 dias, porém quando analisado a relação com alterações patológicas demonstra-se que apresenta significância em relação à patologia baixo grau de displasia, alto grau e carcinoma. A análise imunohistoquímica do ki-67 demonstrou diferença estatística durante a evolução da carcinogênese a partir do dia 120 de experimento e quando analisada a relação com alterações patológicas demonstrou-se que apresenta significância também em relação à lesão intraepitelial de alto grau e carcinoma.