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Produção de insumos para o imunodiagnóstico da neosporose / Development of immunochemical assays for the immunodiagnosis of neosporosis

Pacheco, Diene de Borba 21 February 2014 (has links)
Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_diene_de_borba_pacheco.pdf: 1130271 bytes, checksum: e77a03d669b55e89749bb0d6922531eb (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Neosporosis is a disease caused by the apicomplexan parasite Neospora caninum, which is closely related to Toxoplasma gondii. N. caninum infection represents an important cause of reproductive failure in sheep, goats, horses, and cattle worldwide. The diagnosis of neosporosis is based on the detection of pathogen-specific antibodies in animal sera or the presence of tissue cysts. However, morphological similarities and serological cross-reactivity between N. caninum and T. gondii can result in the misdiagnosis. In this study, the N. caninum tachyzoite surface protein Ncp-43 was expressed in a recombinant form to elicit polyclonal antibodies (pAb) response. The pAb was purified and conjugated to horseradish peroxidase (HRP) or fluorescein isothiocyanate (FITC) to detect the recombinant and native Ncp-43 proteins, respectively. The pAb and pAb/HRP were able to recognize rNcp-43 by Dot blot and ELISA, and pAb/FITC immunolabeled the apical complex of tachyzoites. A blocking enzyme-linked immunosorbent assay (b-ELISA) was performed to evaluate pAb/HRP as a diagnostic tool. The mean percent inhibition for the positive and negative serum samples from cattle with neosporosis was significantly different (P < 0.0001). These results suggest that the pAb may bind to the same epitopes of Ncp-43 as anti-N. caninum antibodies in the positive samples tested. The b-ELISA using the pAb/HRP can facilitate diagnostic testing for neosporosis, since fewer steps are involved and cross-reactivity with secondary antibodies is avoided. In summary, this report describes the production of antibodies against N. caninum, and evaluates the potential of these tools for the development of new diagnostic tests for neosporosis. / Neosporose é a doença causada pelo parasito apicomplexa Neospora caninum, o qual é intimamente relacionado a Toxoplasma gondii. A infecção por N. caninum representa uma importante causa de falha reprodutiva em ovinos, caprinos, equinos e bovinos ao redor do mundo. O diagnóstico da neosporose é baseado na detecção de anticorpos específicos contra o patógeno em soros, ou a presença de cistos teciduais em animais. No entanto, as semelhanças morfológicas e a possível reatividade sorológica cruzada entre N. caninum e T. gondii pode resultar no diagnóstico errôneo. Neste estudo, a proteína de superfície Ncp-43 de taquizoítos de N. caninum, foi expressa de forma recombinante em Escherichia coli e utilizada para produção de anticorpos policlonais (pAb). O pAb foi purificado e conjugado a peroxidase (HRP) e isotiocianato de fluoresceína (FITC) para detectar as proteínas recombinantes e nativas Ncp-43, respectivamente. pAb e pAb/HRP foram capazes de reconhecer rNcp-43, o que foi avaliado pelas técnicas de Dot blot e ELISA enquanto pAb/FITC se mostrou eficiente na imunomarcação do complexo apical de taquizoítos. Um ensaio imunoenzimático de bloqueio (b-ELISA) foi realizado para avaliar a performance do pAb/HRP como ferramenta de diagnóstico. A porcentagem de inibição média para as amostras de pool de soros positivos e o pool de negativos de bovinos com neosporose foi significativamente diferente (P <0,0001). Estes resultados sugerem que o pAb pode ligar-se aos mesmos epítopos da Ncp-43 que os anticorpos anti-N. caninum de amostras positivas testadas. O b-ELISA utilizando o pAb/HRP representa uma opção interessante aos testes de diagnóstico disponíveis para a neosporose, uma vez que menos passos estão envolvidos na sua realização e seu formato evita a reatividade cruzada com anticorpos anti-espécie específicos. Em resumo, este trabalho descreve a produção de anticorpos contra N. caninum, e avalia o potencial dessas ferramentas para o desenvolvimento de novos testes diagnósticos para neosporose.
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"Inquerito sorológico de Neospora caninum em rebanhos bovinos leiteiros no município de Parauapebas, mesorregião sudeste do estado do Pará" / Serologic survey of anti-Neospora caninum antibodies in milkmen of Parauapebas county, southeast mesoregion of Pará state

SILVA, Clóvis Laurindo da 29 June 2009 (has links)
Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-01-28T18:04:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_InqueritoSorologicoNeospora.pdf: 2233716 bytes, checksum: f4635514f7396cea5559b87600b8bcd0 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-01-31T13:46:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_InqueritoSorologicoNeospora.pdf: 2233716 bytes, checksum: f4635514f7396cea5559b87600b8bcd0 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-31T13:46:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_InqueritoSorologicoNeospora.pdf: 2233716 bytes, checksum: f4635514f7396cea5559b87600b8bcd0 (MD5) Previous issue date: 2010 / Neospora caninum é um protozoário coccídio que tem ampla difusão e provoca consideráveis prejuízos aos criatórios dos animais. Para levantar a freqüência de ocorrência de anticorpos anti-N. caninum em bovinos leiteiros do município de Parauapebas, Mesorregião Sudeste do Estado do Pará, 465 amostras de soros de bovinos leiteiros de 45 propriedades rurais foram submetidos à reação de imunofluorescência indireta (RIFI), adotando-se como ponto de corte a diluição 1:100; 62 (13,33 %) amostras de soros demonstraram a presença de anticorpos anti-N. caninum, distribuídos pelos seguintes percentuais e títulos 27(43,55 %) na titulação 1:100; 14 (22,58 %) na 1:200; 16 (25,80) na 1:400 e 5 (8,07 %) com título de 1:800. Nenhum animal apresentou título superior a 1:800; não foi observada diferença significativa entre os sexos dos animais, mas, animais com idade igual ou superior a cinco anos apresentaram percentagem maior de soros positivos, proporcionalmente à quantidade coletada em relação aos animais mais jovens. Os resultados demonstram que os bovinos leiteiros no município de Parauapebas tinham com uma considerável freqüência anticorpos anti-N. caninum. Medidas e ações de vigilância sanitária são recomendadas para prevenir a entrada de novas fontes de N. caninum nos rebanhos e controlar a difusão desse agente no criatório regional. / Neospora caninum is a world-wide coccidian protozoa which causes considerable damages at animals breeding. To survey the frequence of anti-N. caninum antibodies in bovine milkmen in Parauapebas county, Southeast Mesoregion of Pará State, Northern Brazil, 465 serum samples coming from 45 farmers were submitted to indirect immunofluorescence reaction (cutting point 1:100); 62 (13,33%) samples have demonstrated the presence of anti-N. caninum antibodies, with the following distribution: 27 (43,55%) in 1:100 dilution; 14 (22,58%) in 1:200 dilution; 16 (25,80%) in 1:400; and 5 (8,07%) in 1:800 dilution. None serum had tittle in over 1:800 dilution. In a high percentage there was only an animal with anti-N. caninum antibodies; the major frequence was observed between females, but was’nt observed significative difference between animal sexes; animals with equal or over five years old presented major percentage of positive serum proporcionaly to number of positives serum of younger animals. The results have demonstrated that bovine milkmen of Parauapebas county had a considerable frequence of anti-N. caninum antibodies. Sanitary surveillance measures are necessary to prevent the entrance of N. caninum and to control the difusion of this protozoa at the regional bovine milkmen.
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Estudo da transmissão vertical de Neospora caninum em ovelhas deslanadas / Vertical transmission study of Neospora caninum in hair sheep

Silva, Carlos Henryque de Souza e 18 November 2005 (has links)
Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-16T11:25:33Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 659479 bytes, checksum: a72044bcb96556303124778af280b069 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-16T11:25:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 659479 bytes, checksum: a72044bcb96556303124778af280b069 (MD5) Previous issue date: 2005-11-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Neospora caninum é um protozoário importante por causar abortamento em bovinos em todo o mundo. O seu ciclo biológico completo foi descrito em 1998, tendo como hospedeiros definitivos os canídeos e entre os hospedeiros intermediários os herbívoros. A principal forma de permanência da infecção nos rebanhos é pela via transplacentária. Ovelhas infectadas experimentalmente são utilizadas como modelo da neosporose bovina e para se estudar a transmissão vertical e a patologia da infecção nas várias gestações subseqüentes, sendo utilizadas sete ovelhas adultas e seus respectivos filhotes de segunda, terceira, quarta e quinta gestações com diferentes idades. Lesões características de neosporose foram encontradas nos animais estudados, compreendendo focos inflamatórios não-supurativos no fígado, cérebro e pulmão, além de infiltrado inflamatório mononuclear perivascular nos mesmos, principalmente nos filhotes da segunda gestação. Além disso, observaram-se cistos teciduais de Neospora caninum na língua e coração de ovelhas adultas. Comprovou-se através de imunofluorescência indireta que todos os animais apresentaram-se positivos à infecção. Estes dados demonstram que o parasita é transmitido verticalmente durante várias gestações, causando lesões características, o que pode em condições naturais manter a infecção no rebanho sem, no entanto, causar a morte fetal. / Neospora caninum is an important protozoan cause of abortion in cattle worldwide. The whole life cycle was described in 1998, had canids as definitive hosts and herbivores as intermediate hosts. The main pattern of persistent infection in herds it is by transplacental route. Sheep experimentally infected are used as a model of bovine neosporosis and to study vertical transmission and the pathology of infection at several subsequent gestations, being used seven ewes and their respective offspring at second, third, fourth and fifth pregnancies with different ages. Typical neosporosis lesions were found in the studied animals, consisting of non- suppurative inflammatory focuses on liver, brain and lungs, besides mononuclear perivascular infiltrate, principally on lambs of second gestation. Moreover, Neospora caninum tissues cysts were observed on the tongue and heart of adult sheep. It was proved by indirect immunofluorescence that all the animals were positives to the infection. These data demonstrate the parasite is vertically transmitted during several pregnancies, causing characteristic lesions, which, in natural conditions, keep the infection in herd without, nevertheless, to induce fetal death. / Não foi encontrado o CPF do autor.
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Epidemiologia das coccidioses em pequenos ruminantes no município de Ibimirim Estado de Pernambuco, Brasil / Epidemiology of coccidiosis in small ruminants from Ibimirim county, Pernambuco state, Brazil

TEMBUE, António Amélia dos Santos Mucalane 18 May 2007 (has links)
Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-01T16:39:12Z No. of bitstreams: 1 Antonio Tembue.pdf: 785696 bytes, checksum: 3f9e9ef8e3f1459afeea01eeed2f71fa (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-01T16:39:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antonio Tembue.pdf: 785696 bytes, checksum: 3f9e9ef8e3f1459afeea01eeed2f71fa (MD5) Previous issue date: 2007-05-18 / Small ruminants production is an important activity specially as a protein source, meat, leather, milk and by-products processing throughout the Brazil. However with the lack of technical support in sheep and goat production systems some parasitic disease has been related including coccidiosis. The goal of this study is describe the epidemiology of some coccidia agents in goats and sheep from Ibimirim County, Pernambuco State, Brazil. A total of 400 animals, being 319 goats and 81 sheep from different farms were studied. First a total of 400 faecal samples were evaluated to identify the eimerian species. Coccidian unsporulated the sporulate oocysts were detected in 95.3% (381/400) and 97.5% (390/400) by using the McMaster technique and aqueous solution of dichromatic (K2Cr2O7) respectively. Eight species of Eimeria were identified: Eimeria arloingi E. ninakohlyakimovae, E. pallida, E. parva, E. intricata, E. ahsata, E. crandallis, E. faurei in goats and E. ahsata, E.crandallis, E. faurei, E. intricata, E. granulosa, E. parva and E. punctata in sheep. The other intestinal coccidia,Cryptosporidium sp oocyst was also identified in 3.7% (3/81), of sheep faeces samples by using Kinyon methodology. On the other hand a serological survey for antibodies to IgG antibodies anti- Toxoplasma gondii and Neospora caninum by Imunofluorescent antibody test were carried out. The results of serology showed the prevalence of 57% (228/400) positive samples to T. gondii, being 58.9% (188/319) and 49.4% (40/81) in goats and sheep respectively. The antibody frequencies according to the age showed that the prevalence was influenced by the age (≤4 years old) of animals in both goats and sheep. The results of imunofluorescent antibody test to Neospora caninum showed 34.3% (137/400) of positive animals, being 26.6% (85/319) in goats and 64.2% (52/81) in sheep. Serologic reactivity was associated with age only in goats (p<0, 01). In conclusion, these results indicate theexposure of small ruminants living in the study area to coccidia of genus Eimeria, Cryptosporidium, Toxoplasma and Neospora. However the frequency of infection of oocysts of Eimeria particularly Eimeria arloingi, E. ninakohlyakimovae em caprinos e Eimeria ahsata e E. crandallis age, and management practices might be consider in order decreasing the effect of these coccidia. In the other hand hygienic management practices should be adopted in these farms in order to prevent the infection of Toxoplasma gondii by the consumption of unpasteurized milk. / A caprinovinocultura é uma importante pecuária atividade, particularmente como fonte de carne, pele, leite e produtos derivados em todo o Brasil. Contudo, com a perda de assistência técnica ao sistema de produção, algumas doenças parasitárias têm sido relatadas, incluindo as coccidioses. Objetivou-se com o presente estudo contribuir no conhecimento da epidemiologia das coccidioses em pequenos ruminantes no Estado de Pernambuco. Um total de 400 animais, sendo 319 caprinos e 81 ovinos,procedentes de diferentes propriedades foram estudados. Inicialmente 400 amostras fecais foram avaliadas pelo método Gordon Whitlock através da técnica de Mc-Master para contagens de oocistos. Foi realizada a esporulação com solução de dicromato de potássio K2Cr2O7 para a identificação das de espécies de gênero Eimeria. Oocistos de coccídios não esporulados e esporulados foram detectados em 95,3% (381/400) e 97, 5% (390/400) pela técnica de McMaster e Solução aquosa de K2Cr2O7. Foram identificadas oito espécies do gênero Eimeria na espécie caprina com as seguintes freqüências relativas por ordem decrescente, Eimeria arloingi; E. ninakohlyakimovae, E. pallida, E. parva, E. intricata, E. ahsata, E. crandallis, E. faurei, enquanto nos ovinos foram encontradas a E. ahsata E.crandallis, E.faurei, E. intricata, E. granulosa, E. parva, e E. punctata. Outro coccídio intestinal, Cryptosporidium spp. oocistos também foi identificado em 3.7% (3/81) das fezes provenientes dos ovinos pelo método de Kinyon. Por outro lado foi realizado um levantamento sorológico de anticorpos IgG anti- Toxoplasma gondii e Neospora caninum através da reação de Imunofluorescencia Indireta. Os resultados revelaram a prevalência de 57% (228/400) de amostras positivas para Toxoplasma gondii, sendo 58,9% (188/319) em caprinos e 49,4% (40/81) em ovinos. A freqüência de anticorpos anti- Toxoplasma gondii foi influenciada com a idade dos animais (≤4 anos) em ambas as espécies animais. O resultado do teste de Imunofluorescencia Indireta para Neospora caninum evidenciou 34,3% (137/400) dos animais foram soropositivoss, sendo 26,6% (85/319) em caprinos e 64,2% (52/81) em ovinos. Com relação à idade, foi observada uma diferença significante somente em caprinos (p<0, 01). De acordo com os resultados obtidos, pode se concluir que os pequenos ruminantes estão expostos à infecção por coccídios de gênero Eimeria, Cryptosporidium, Toxoplasma e Neospora na área estudada. Contudo em função da freqüência de oocistos de gênero Eimeria, observada no presente estudo, particularmente Eimeria arloingi, E. ninakohlyakimovae em caprinos e Eimeria ahsata e E. crandallis em ovinos, medidas higiênico-sanitários devem ser realizadas para minimizar os efeitos produzidos porestes coccídios Não obstante, práticas higiênico-sanitárias devem ser adotadas nas criações para prevenir a infecção de Toxoplasma gondii através do consumo de leite de cabra não pasteurizado.
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Neospora caninum: diagnóstico e caracterização genética em fetos de fêmeas zebuínas abatidas / Neospora caninum: diagnosis and genetic characterization in fetuses of zebu cows slaughtered

FERNANDES, Paula Rogério 26 February 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese paula rogerio fernandes.pdf: 1613821 bytes, checksum: 51e95ba0a0870ec6f2dac8e6b7f10cf8 (MD5) Previous issue date: 2010-02-26 / One of the main causes of reproductive failure in cattle is infection by the protozoan Neospora caninum (Phylum Apicomplexa, Family Sarcocystidae). The bovine neosporosis is characterized by an asymptomatic infection in the non pregnant cow; however, during pregnancy, the vertical transmission of the parasite is responsible for the maintenance of the infection for successive generations. The highest frequency of infection occurs in the dairy production system and in the intensive management of animal breeding, with most of the available data for N. caninum related to Bos taurus, even for beef cattle. Thus, the presence of N. caninum has been little studied in Bos indicus. In Goiás, the prevalence of N. caninum is 29.61% in beef cattle and 30.4% in dairy cattle. As the prevalence of infection in adults should have a positive correlation to the incidence of fetal infection, this study aimed to evaluate the occurrence of vertical transmission of N. caninum in zebuine fetuses of various ages, obtained from females slaughtered in a slaughterhouse in the municipality of Senador Canedo, Goiás. For that, the serological analysis of abdominal fluid and molecular and histopathological analysis in tissue samples (brain, heart and liver) were performed. The fetal age was estimated by the measurement of crown-rump length. A total of 195 fetal fluids was randomly collected and tested by IFAT with a cut-off point of 1:16. 585 tissue samples were submitted to nested-PCR analysis of ITS-1 rRNA region and to histopathology. The results were related to the fetal age (first, second and third stages of pregnancy). Anti-N. caninum antibodies were detected in 12 (6.15%) fetal fluids, with IFAT titers observed at 1:64 (n=1), 1:128 (n=2), 1:512 (n=3), 1:1024 (n=5) and 1:2048 (n=1). The presence of the parasite was detected by PCR in 40 (20.5%) fetuses. On histopathological examination, 82 (42.05%) fetuses had characteristic and consistent lesions, compatible with protozoan infection, characterized by encephalitis, myocarditis and hepatitis with mononuclear cell infiltrates, with or without necrosis. Comparing the different gestational ages, there was a greater number of positive reactions by IFAT, PCR and compatible histopathological lesions in the sixth and seventh month of pregnancy. From the total of 585 tissue samples examined, 56 were positive, being 12 at serology and 44 (35 brains, seven hearts and two livers) at PCR from 45 fetuses. In histopathology, 10 samples (three brains, six hearts and one liver) showed characteristic lesions of protozoan infection such as N. caninum. The DNA from six PCR positive fetuses was analyzed by microsatellite markers for genetic characterization of isolates of N. caninum, demonstrating the existence of genetic profiles different from other isolates of the world and of Brazil infecting zebuine animals. The results confirm the occurrence of vertical transmission of N. caninum, the diagnosis of infection in zebuine fetuses, the need of association of techniques for determining fetal neosporosis and characterization of different regional isolates circulating in zebu herd from Goiás. / Uma das principais causas mundiais de falhas reprodutivas em bovinos é a infecção pelo protozoário Neospora caninum (Filo Apicomplexa, Família Sarcocystidae). A neosporose bovina é caracterizada por infecção assintomática na fêmea não prenhe, no entanto, durante a gestação, a transmissão vertical do parasito é a responsável pela manutenção da infecção por gerações sucessivas. A maior freqüência da infecção ocorre no sistema de produção leiteiro e no manejo intensivo de criação dos animais, sendo a maioria dos dados disponíveis para N. caninum referentes a Bos taurus, mesmo para gado de corte. Assim, a presença de N. caninum tem sido pouco estudada em Bos indicus. Em Goiás, a prevalência de N. caninum é de 29,61% em gado de corte e 30,4% em leite. Como a prevalência da infecção em adultos deve ter correlação positiva com a incidência da infecção fetal, objetivou-se avaliar a ocorrência da transmissão vertical de N. caninum em fetos zebuínos de variadas idades, obtidos de fêmeas abatidas em um frigorífico no município de Senador Canedo, Goiás. Para tanto, realizaram-se análise sorológica em líquidos toráco-abdominais e análises molecular e histopatológica em amostras teciduais (cérebro, coração e fígado). A idade fetal foi determinada a partir da distância entre a região occipital e a base da cauda. Um total de 195 líquidos fetais foi colhido aleatoriamente e testado por RIFI com um ponto de corte de 1:16. Foram submetidas 585 amostras de tecidos à análise pela nested-PCR da região ITS-1 rRNA e à histopatologia. Os resultados encontrados foram relacionados com a idade fetal (primeiro, segundo e terceiro estágios gestacionais). Anticorpos anti-N. caninum foram detectados em 12 (6,15%) líquidos fetais, com titulação observada a 1:64 (n=1), 1:128 (n=2), 1:512 (n=3), 1:1024 (n=5) e 1:2048 (n=1). Foi detectada a presença do parasito por PCR em 40 (20,5%) fetos. No exame histopatológico, 82 (42,05%) fetos apresentaram lesões características e consistentes com infecção por protozoário, caracterizadas por encefalite, miocardite e hepatite com infiltrado mononuclear, com ou sem necrose. Na comparação entre as diferentes idades gestacionais, observaram-se maior número de reações positivas por RIFI, PCR e lesões compatíveis por histopatológico, no sexto e sétimo mês de gestação. Do total das 585 amostras de tecidos examinadas, 56 foram positivas, sendo 12 na sorologia e 44 (35 cérebros, sete corações e dois fígados) na PCR, provenientes de 45 fetos. No histopatológico, 10 amostras (três cérebros, seis corações e um fígado) apresentaram lesões características de infecção por protozoários como o N. caninum. O DNA de seis fetos PCR positivos foi submetido à análise por marcadores microssatélites para a caracterização genética dos isolados de N. caninum presentes, demonstrando a existência de perfis genéticos diferentes de outros isolados do mundo e do Brasil infectando zebuínos. Os resultados obtidos comprovam a ocorrência da transmissão vertical de N. caninum, o diagnóstico da infecção em fetos zebuínos, a necessidade de associação de técnicas para a determinação da neosporose fetal e a caracterização de diferentes isolados regionais circulantes no rebanho zebuíno de Goiás.
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Fatores de risco associados à ocorrência de anticorpos anti-Neospora caninum em fêmeas bovinas leiteiras da microrregião leste do estado de Antioquia - Colômbia / Risk factors and seroprevalence associated to Neospora caninum in female bovines from the eastern Antioquia state, Colombia

Llano, Horwald Alexander Bedoya 27 February 2015 (has links)
Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-05-12T19:22:49Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Horwald Alexander Bedoya Llano - 2015.PDF: 1452271 bytes, checksum: 8c74931380412669cdce1f30153c9558 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-05-13T11:44:03Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Horwald Alexander Bedoya Llano - 2015.PDF: 1452271 bytes, checksum: 8c74931380412669cdce1f30153c9558 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-13T11:44:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Horwald Alexander Bedoya Llano - 2015.PDF: 1452271 bytes, checksum: 8c74931380412669cdce1f30153c9558 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Bovine neosporosis is a parasitic disease distributed worldwide, that causes large economic losses due to abortions, low milk production, neonatal mortality and repeated estrus. Because of the limited information from Colombia’s studies, we aimed to identify the risk factors associated with this infection and to determine its seroprevalence for Antioquia's east region, which is the largest milk producer state of the country. We collected 1,038 blood samples from Holstein, Jersey and crossbred cows from 31 farms in five municipal districts. An epidemiologic questionnaire was applied to the owner of each farm. For the determination of seropositivity we employed indirect ELISA and for titration of positive samples we used the indirect immunofluorescence assay test (cutoff ≥ 1:200). The soropositivity for N. caninum was estimated to be 28.32% (294/1038). All properties had at least one positive animal with frequencies of seropositivity ranging from 5.5% to 50%. Analysis of risk factors was performed by Chi-square test (X²) and multiple logistic regression. The presence of dogs, history of abortion, breed, age, replacement cattle purchase outside the farm, gestation, repetition of estrus, type of milking and the presence of chickens on farms showed significant association with seropositive animals by Chi-square test (X²=P<0.25) and were selected for a final multivariable logistic regression model where the history of abortion (OR = 5.33, p <0.001), age (OR = 1.7, p = 0.038), replacement cattle purchase outside the farm (OR = 1.54 p = 0.008) and manual milking (OR = 1.69, p = 0.0029) were identified as risk factors. These findings record the first report of seroprevalence and risk factors for the region and allow us to conclude that N. caninum is widely distributed in the evaluated properties and significantly associated with these factors. / A neosporose bovina é uma enfermidade parasitária de ampla distribuição mundial, causa de grandes perdas econômicas por abortos, baixa produção de leite, mortalidade neonatal e repetições de serviços. Devido a pouca informação que se tem na Colômbia, objetivou-se identificar os fatores de risco associados à infecção e determinar a sua soroprevalência para a microrregião do leste de Antioquia, que é o Estado de maior produção leiteira do país. Coletaram-se 1.038 amostras de sangue de fêmeas bovinas das raças Holandesa, Jersey e mestiça provenientes de 31 fazendas em cinco municípios. Um questionário epidemiológico foi aplicado ao proprietário de cada fazenda. Para a determinação do soropositividade foi empregado o teste de ELISA indireto (Civtest®) e para titulação das amostras positivas foi empregado o teste de reação de imunofluorescência indireta (ponto de corte ≥ 1:200). A ocorrência total de anticorpos anti-N. caninum foi de 28,32% (294/1038). Cem por cento das propriedades apresentaram ao menos um animal positivo com frequências de soropositividade variando entre 5,5% a 50%. A análise dos fatores de risco foi realizada pelo teste de Quiquadrado (X²) e regressão logística múltipla. A presença de cães, histórico de abortos, raça, idade, compra de animais para reposição, período de gestação, repetição de cios, tipo de ordenha e presença de aves nas fazendas demonstraram associação significativa com animais soropositivos pelo teste Qui-quadrado (X²=P<0,25) e foram selecionadas para um modelo final de regressão logística multivariável onde o histórico de abortos (OR=5,33;p<0,001), idade (OR=1,7;p=0,038), compra de animais para reposição (OR=1,54;p=0,008) e ordenha manual (OR=1,699; p=0,0029) foram identificados como fatores de risco. Esses achados registram o primeiro relato de fatores do risco e soroprevalência para a região e permitem concluir que N. caninum está amplamente distribuído nas propriedades avaliadas e significativamente associado a esses fatores.
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Diagnóstico sorológico e avaliação da ocorrência da transmissão vertical de Neospora caninum nos rebanhos bovinos Curraleiro e Pantaneiro / Serological diagnosis and evaluation of occurrence of vertical transmission of Neospora caninum in Curraleiro and Pantaneiro cattle

GUIMARÃES, Marcelo Sales 24 February 2011 (has links)
Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Marcelo Sales Guimaraes.pdf: 3899079 bytes, checksum: 38f856923d6a5606a0da0a5054c4e8f9 (MD5) Previous issue date: 2011-02-24 / Bovine neosporosis is a parasitic disease of cosmopolitan distribution, caused by the obligatory intracellular cyst forming protozoan Neospora caninum (Phylum Apicomplexa, family Sarcocystidae). It has a strong association with bovine abortion, being N. caninum protozoan considered the most important for this species. The main route of transmission is vertical, determining the endemic-type neosporosis in cattle. Brazilian local breeds as Curraleiro and Pantaneiro present hardiness and resistance to adverse conditions, e.g. poor nutrition and microbiological challenges, as predominant characteristics. The conservation program of such breeds has encouraged studies aiming at a greater knowledge of these animals peculiarities. The purpose of this study was to assess the seroprevalence of these breeds for N. caninum and the occurrence of vertical transmission in herds, evaluating the importance of bovine neosporosis for these herds. Five farms in the state of Goiás and one in the state of Mato Grosso do Sul, with Curraleiro and Pantaneiro herds, respectively, were observed. Blood was collected from females at reproductive age and their offspring before colostrum intake, if possible. If it was not possible, blood was periodically collected from the offspring (five collections) until about ten months of age. A total of 358 animals was examined, 249 (198 females and 51 calves) Curraleiros and 109 (62 females and 47 calves) Pantaneiros. Seropositivity to N. caninum was evaluated by using the indirect immunofluorescence (cutoff &#8805; 1:200) and ELISA (HerdChek® IDEXX Laboratories) (cutoff S/P &#8805; 0.50). The total incidence of seropositives was 47,49% (170/358), 51% (127/249) Curraleiro and 39,45% (43/109) Pantaneiro. One hundred percent of the farms observed presented seropositive animals. The highest titer was 1:25600. The overall vertical transmission rate observed in herds was 51% (95%, CI 37%-64%), being 48% (95%, CI 30%-66%) in Curraleiro and 54% (95%, CI 35%-73%) in Pantaneiro. There was no statistically significant association between breed or titer of the cows and the occurrence of vertical transmission (OR 0,79; CI 0,27-2,34 95%). A low-moderate agreement was found between the two diagnostic techniques used (&#954; = 0.34). Thus, N. caninum is present in Curraleiro and Pantaneiro cattle breeds, with significant rates of seropositivity and vertical transmission. Although widely distributed, N. caninum does not seem to cause problems in Curraleiro and Pantaneiro herds, as abortion problems are rare and females have good fertility, within the constraints of the breed. / A neosporose bovina é uma enfermidade parasitária causada pelo protozoário intracelular obrigatório Neospora caninum (filo Apicomplexa, família Sarcocystidae), formador de cistos. Enfermidade de distribuição cosmopolita, a neosporose apresenta forte associação com o abortamento bovino, sendo N. caninum considerado o protozoário mais importante para essa espécie. A principal rota de transmissão é a vertical determinando a neosporose do tipo endêmica nos rebanhos. Raças locais brasileiras como o gado Curraleiro e Pantaneiro apresentam como características preponderantes a rusticidade e resistência às condições adversas tais como carência nutricional e desafios microbiológicos. O programa de conservação destas raças incentivou estudos que visam o maior conhecimento das particularidades destes animais. A proposta deste trabalho foi avaliar a soropositividade destas raças para N. caninum e a ocorrência de transmissão vertical nos rebanhos, permitindo determinar a importância da neosporose bovina nestes rebanhos. Cinco propriedades criadoras de Curraleiro (estado de Goiás) e uma criadora de Pantaneiro (estado de Mato Grosso do Sul) foram acompanhadas. Foi colhido sangue das fêmeas em idade reprodutiva e de suas crias antes da ingestão do colostro, quando possível. Quando não, foi colhido sangue das crias periodicamente (cinco colheitas) até em torno dos dez meses de idade. Um total de 358 animais foi analisado, sendo 249 (198 fêmeas e 51 bezerros) Curraleiros e 109 (62 fêmeas e 47 bezerros) Pantaneiros. Avaliou-se a soropositividade para N. caninum por meio das técnicas de imunofluorescência indireta (ponto de corte &#8805; 1:200) e ELISA indireto (HerdChek® IDEXX Laboratories) (ponto de corte S/P &#8805; 0,50). A ocorrência total de soropositivos foi 47,49% (170/358), com 51% (127/249) do gado Curraleiro e 39,45% (43/109) do gado Pantaneiro soropositivo. Cem por cento das propriedades acompanhadas apresentaram animais positivos. O maior título encontrado foi de 1:25600. A taxa de transmissão vertical geral observada nos rebanhos foi de 51% (95%, IC 37%-64%), sendo de 48% (95%, IC 30%-66%) no gado Curraleiro e de 54% (95%, IC 35%-73%) no Pantaneiro. Não houve associação estatisticamente significativa entre título ou raça das mães e ocorrência de transmissão vertical (OR 0,79; IC 0,27-2,34 95%). Uma concordância moderada-baixa foi verificada entre as duas técnicas de diagnóstico utilizadas (&#954; = 0,34). Assim, N. caninum está presente nos rebanhos bovinos das raças Curraleiro e Pantaneiro, com consideráveis taxas de soropositividade e transmissão vertical. Embora amplamente distribuído, N. caninum parece não representar problema nos rebanhos Curraleiro e Pantaneiro, visto que problemas de abortamento são raros e as fêmeas apresentam boa fertilidade, dentro das limitações das raças.

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