A osteoporose, uma doença óssea progressiva, é considerada um grave problema de saúde pública, sendo uma das condições mais importantes associadas ao envelhecimento e que afeta milhões de pessoas no mundo. Esta doença multifatorial é caracterizada pela densidade óssea reduzida e deterioração da microarquitetura óssea. O objetivo deste trabalho foi investigar as mudanças comportamentais em células mesenquimais da medula óssea e células osteoblásticas da calvária de ratas induzidas à osteoporose. Após aprovação da Comissão de Ética no Uso de Animais, 18 ratas Wistar foram utilizadas e divididas em grupos controle e ovariectomizadas. Após 150 dias, as ratas de ambos os grupos foram sacrificadas para coleta dos fêmures e fragmentos da calvária. As células recolhidas a partir da medula óssea e calvária foram cultivadas em placas de 24 poços (n = 5) para avaliação da proliferação e viabilidade celular, atividade de fosfatase alcalina (ALP), detecção e quantificação de nódulos mineralizados e análise da expressão gênica por meio de PCR em tempo real. Os dados foram submetidos ao testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney, com nível de significância de 5%. As células da medula óssea do grupo controle (MC) mostraram uma diminuição significativa na proliferação quando comparado com as células do grupo controle da calvária (CC) em todos os períodos (p < 0,05). Por outro lado, as células da medula óssea de ratas com osteoporose (MO) revelaram um aumento significativo na taxa de proliferação após 7 e 10 dias (p < 0,01) em comparação às células da calvária de ratas ovariectomizadas (CO). A viabilidade celular foi maior em todos os períodos estudados dos grupos CC e CO em relação aos grupos MC e MO (p < 0,05). A atividade de fosfatase alcalina não foi significativamente diferente após 7 dias de cultura entre os grupos estudados; por outro lado, após 10 e 14 dias, observou-se uma diminuição da sua atividade no grupo MC quando comparado ao grupo CC (p < 0,01). Nas ratas com osteoporose, as células da medula óssea mostraram um aumento desta atividade quando comparada às células de calvária (p < 0,01). A análise dos nódulos mineralizados após 14 e 21 dias revelou que os grupos controle CC e MC não apresentaram diferenças significativas, ao passo que no grupo MO observou-se um aumento da mineralização quando comparado ao grupo CO nos mesmos períodos experimentais. Os resultados obtidos na análise de expressão gênica mostraram que para os genes Runx2, Oc, Alpl, Rank-l e Er&alpha; a expressão no grupo MO foi maior que no grupo MC (p < 0,05), enquanto que para as células da calvária, CC teve maior expressão gênica que CO (p < 0,05). Os genes Opg e Er&beta; apresentaram variações de acordo com o grupo avaliado. Frente aos resultados obtidos, sugere-se que existam alterações no metabolismo das células progenitoras e células diferenciadas após a indução da osteoporose e que as células da medula óssea apresentam um aumento da sua função como uma resposta compensatória neste modelo animal ovariectomizado. / Osteoporosis, a progressive bone disease, is considered a serious public health problem, being one of the most important conditions associated with aging, affecting millions of people worldwide. This multifactorial disease is characterized by reduced bone density and deterioration of bone microarchitecture. The objective of this work was to investigate the behavioral changes in mesenchymal cells from bone marrow and osteoblastic cells from calvaria bone of female rats induced to osteoporosis. After institutional review board approval, 18 Wistar female rats were used and divided into control and ovariectomized groups. After 150 days, the rats of both groups were sacrificed for collection of femurs and calvariae fragments. The cells collected from bone marrow and calvaria were cultured in 24-well plates (n=5) for the assessment of cell proliferation and viability, alkaline phosphatase (ALP) activity and detection and quantification of mineralized nodules. The data were submitted to Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests, with significance level set at 5%. The cells from bone marrow control group (MC) showed a significantly decrease in proliferation when compared to the cells from calvaria bone control group (CC) in all periods evaluated (p < 0,05). On the other hand, bone marrow cells from osteoporotic rats (MO) revealed a significant increase in their proliferation rate after 7 and 10 days (p < 0,01) compared to calvaria cells from ovariectomized rats (CO). Cell viability was higher in all investigated periods of CC and CO groups compared to MC and MO groups (p < 0,05). Alkaline phosphatase activity was not significantly different after 7 days of culture among the studied groups; in spite of that, after 10 and 14 days, there was a decrease in its activity in MC group when compared to CC (p < 0,01). In the osteoporotic rats, bone marrow cells showed an increase in this activity when compared to calvaria cells (p < 0,01). The analysis of mineralized nodules after 14 and 21 days revealed that control groups (CC and MC) did not have significant differences, whereas it was observed in MO group an increase in the mineralization when compared to CO in the same experimental periods. The data obtained in the analysis of gene expression showed that for Runx2, Oc, Alpl, Rank-l and Er&alpha; genes, the expression in MO group was higher than in MC (p < 0,05), whereas for the calvaria cells, CC group had higher gene expression than CO group (p < 0,05). The Opg and Er&beta; genes showed variations according to the evaluated group. Thus, it is suggested that there are changes in the metabolism of progenitor and differentiated cells after osteoporosis induction and that bone marrow cells present an enhancement of their function as a compensatory response in this ovariectomized rat model.

Neste estudo foi utilizado o modelo de hipertensão arterial pulmonar (HAP) induzida por monocrotalina (MCT), que mimetiza esta doença grave e progressiva, a qual tem início com o aumento da resistência pulmonar, com subsequente prejuízo da função ventricular direita. Sabe-se que o estresse oxidativo está envolvido na patogênese desta doença e que existe uma diferença de gênero na sua prevalência. No entanto, os mecanismos envolvidos nesta diferença não são claros. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar o estresse oxidativo em pulmão e ventrículo direito de ratas Wistar ovariectomizadas ou não, na presença ou não da MCT. Para esse fim, foram realizados dois experimentos utilizando ratas ovariectomizadas ou com simulação deste procedimento, bem como, com indução ou não da HAP por dose única de MCT (60 mg/Kg i.p), avaliando parâmetros funcionais, morfométricos, bioquímicos e moleculares 21 dias após. Isto permitiu realizar a avaliação dos mecanismos relacionados ao objetivo desta pesquisa. No experimento I, referente ao pulmão, a ovariectomia produziu aumento do estresse oxidativo induzido pela MCT, visto que foi verificada elevação do dano oxidativo e aumentada produção de radical superóxido: inferida pelo desacoplamento da enzima óxido nítrico sintase e pelo acréscimo na atividade da superóxido dismutase. Além disso, a análise histológica mostrou que a interação entre a MCT e a ovariectomia determinou um pronunciado remodelamento neste grupo, conferido pelo aumento de infiltrado inflamatório e deposição de colágeno perivascular. No experimento II, referente ao ventrículo direito, foi observado que a ovariectomia não produziu um incremento do estresse oxidativo induzido pela MCT. Esta resposta concorda com o fato de não ter havido um aumento adicional da resistência vascular pulmonar e consequente alteração da função ventricular direita. É proposto que a adaptação das defesas antioxidantes nãoclássicas heme oxigenasse 1 e tioredoxina 1 contribuíram para esta preservação funcional através da ativação do receptou de estrogênio B. Desta forma, foi demonstrado que o insulto produzido pela MCT, relativo ao estresse oxidativo e a falta do estrogênio no pulmão, não foi capaz de gerar danos adicionais ao ventrículo direito, fato este que pode ser determinado pela proteção oferecida pelo sistema de defesa antioxidante induzido pelo estrogênio. / In this study, it was utilized the model of pulmonary arterial hypertension (PAH) induced by monocrotaline (MCT), that mimics this serious and progressive disease, which initiates with an increase in pulmonary resistance, and subsequent impairment of right ventricle function. It is known that oxidative stress is involved in the pathogenesis of this disease and that there is a gender difference in its prevalence. However, the mechanisms involved in this difference are still unclear. By this way, the aim of this study was to evaluate oxidative stress in lung and right ventricle of female Wistar rats ovariectomized or not, in the presence or absence of MCT. For this aim, it were performed two experiments using ovariectomized rats or with a simulation of this procedure, as well as with the induction or not of PAH by means a single dose of MCT (60 mg/kg i.p.), evaluating functional, morphometric, biochemical and molecular parameters 21 days after. This permitted to evaluate the mechanisms related to the objectives of this research. In the experiment I, related to lung, ovariectomy produced increase of the oxidative stress induced by MCT, since it was verified enhancement of oxidative damage and increased production of superoxide radical: inferred by the uncoupling of the nitric oxide synthase enzyme and by the elevation in the activity of superoxide dismutase. Besides that, histological analysis has shown that the interaction between MCT and ovariectomy determined a pronounced remodeling in this group, conferred by the increase in inflammatory infiltrate and perivascular collagen deposition. In the experiment II, related to right ventricle, it was observed that ovariectomy has not produced an increment in the oxidative stress induced by MCT. This answer agrees with the fact that it doesn´t happened an additional increase in pulmonary vascular resistance and consequent alteration in the right ventricle function. It is proposed that the adaptation of the non-classic antioxidant defenses hemeoxygenase and thioredoxin has contributed to this functional preservation, through the activation of the estrogen receptor . By this way, it was demonstrated that the insult produced by MCT, related to oxidative stress and lack of estrogen in lungs, it was not capable to produce additional damage to the right ventricle, fact that can be determined by the protection offered by antioxidant defense induced by estrogen.

Baseado na hipótese de o que tratamento com 17b-Estradiol, reduz a modulação simpática, o estresse oxidativo e a participação do sistema renina angiotensina sobre o sistema cardiovascular, propomos estudar o balanço simpatovagal e o equilíbrio entre o óxido nítrico (NO) e as espécies reativas ao oxigênio (EROS) em ratas Wistar ovariectomizadas. Além disso, buscamos verificar a efetividade do 17b-Estradiol no controle da PA e na proteção cardiovascular contra os danos causados pelo estresse oxidativo usando doses menores do que as convencionais. Para isso, desenvolvemos três protocolos, usando ratas ovariectomizadas como um modelo experimental de menopausa, onde avaliamos parâmetros morfométricos, funcionais e bioquímicos que permitem a avaliação dos mecanismos relacionados ao objetivo deste trabalho de pesquisa. No primeiro protocolo (I) demonstramos o efeito do estrogênio, em uma dose alta, equivalente àquela praticada na clínica (5mg%), em melhorar o balanço autonômico para o sistema cardiovascular, provavelmente devido a uma melhora no equilíbrio entre as forcas vasodilatadoras, representadas pelo NO, e as forcas vasoconstritoras, representadas pelas EROS vasculares. O estudo também mostra uma forte associação entre o sistema nervoso simpático e a atividade da enzima NADPH oxidase neste modelo animal. No segundo protocolo (II) buscamos testar se 40% da dose convencional de estrogênio seria tão eficaz quanto a dose alta na melhora do controle da pressão arterial e estresse oxidativo cardíaco. Verificamos uma redução significativa na PA e nas concentrações de EROS, como ânion superóxido e peróxido de hidrogênio, um aumento das defesas antioxidantes não enzimáticas, avaliadas através do balanço redox e antioxidantes totais, e das enzimáticas, avaliadas pelas atividades das enzimas superóxido dismutase e catalase. Finalmente, realizamos o terceiro protocolo (III). Através deste testamos se uma dose de estrogênio ainda mais baixa, apenas 10% da dose convencional, seria tão eficaz quanto uma dose elevada para melhorar o controle da pressão arterial e diminuir o estresse oxidativo vascular. Verificamos que independente da dose usada, o estrogênio foi eficaz para reduzir a atividade da enzima NADPH oxidase, a concentração de peróxido de hidrogênio e a pressão arterial. Além de aumentar a concentração plasmática de nitritos totais e o estado redox. Dessa forma, demonstramos que uma dose baixa de estrogênio é tão eficaz como uma dose farmacológica para promover a proteção cardiovascular. / In this thesis was studied the sympathovagal and the nitric oxide (NO)/reactive oxygen species (ROS) balances in ovariectomized female rats. It was verified the effectiveness of 17b-estradiol in the blood pressure (BP) control and cardiovascular oxidative stress using low doses of estrogen. Then, we developed three protocols to evaluate morphometric, hemodynamic and biochemical parameters. In the first protocol (I), we demonstrate the estrogen effects with a pharmacological dose (5 mg%) to improve cardiovascular system autonomic balance. This result was probably due to an improvement in the balance between the vasodilator forces , represented by NO, and vasoconstrictive forces represented by vascular ROS. The study also showed a strong association between the sympathetic nervous system and the NADPH oxidase enzyme activity in this animal model. In the second protocol (II), we tested whether 40% of estrogen conventional dose would be as effective as a high dose in improving the control of blood pressure and oxidative stress. We found a significant reduction in BP and in ROS concentrations such as superoxide anion and hydrogen peroxide, an increase in non-enzymatic antioxidant defenses, as measured by the redox balance and total antioxidants, and enzymes, as assessed by the activities of superoxide dismutase and catalase. Finally, we performed the third protocol (III), which allowed us to test if a low estrogen dose (10% of conventional one), would be as effective as a high dose to improve the control of blood pressure and decrease the vascular oxidative stress. We found that estrogen was effective in reducing the activity of NADPH oxidase, the concentration of hydrogen peroxide and blood pressure in all dose used. Moreover, estrogen increased the total nitrite plasma concentration and redox state. Thus, we have demonstrated that a low dose of estrogen is as effective as a pharmacological dose to promote cardiovascular protection.

A privação dos hormônios sexuais em fêmeas contribui para o aparecimento de distúrbios metabólicos e endócrinos devido à ausência de estrógenos. Nesse estudo foi avaliado o efeito da castração e da suplementação com DHEA sobre aspectos metabólicos em ratas. A ovariectomia aumentou a adiposidade e o consumo de ração, diminuiu o consumo hídrico, além de promover resistência à insulina e intolerância à glicose, e o uso do DHEA reduziu a sensibilidade à insulina. Ainda, a castração levou a redução nos níveis plasmáticos de DHEA, estradiol, VLDL-c e triacilglicerol, albumina, uréia e creatinina, e o tratamento com DHEA restaurou parcialmente a concentração de estradiol no grupo OVX+DHEA. E por fim, a ooforectomia reduziu a expressão proteica do IRb, IRS1, PI3K e AKT no fígado, músculo gastrocnêmio ou coração, além diminuir o grau de fosforilação em tirosina da pp185 (IRS1/2). Deste modo, concluímos que a castração promoveu resistência à insulina e intolerância à glicose associada à obesidade, e neste modelo, o uso do DHEA piorou a sensibilidade à insulina nos animais. / Deprivation of sex hormones in females contributes to the onset of metabolic and endocrine disorders due loss of estrogen. In this study the effect of castration and supplementation with DHEA on metabolic aspects in rats was evaluated. Ovariectomy increased adiposity and food consumption, decreased water consumption, besides promoting insulin resistance and glucose intolerance, and the use of DHEA reduced insulin sensitivity. Furthermore, castration led to decreasing of DHEA plasma levels, estradiol, VLDL-c and triacylglycerol, albumin, urea and creatinine, and DHEA treatment partially restored the concentration of estradiol in OVX+DHEA group. Finally, ovariectomy reduced the protein expression IRb, IRS1, PI3K and AKT in the liver, gastrocnemius muscle or heart. Indeed, decrease tyrosine phosphorylation status of pp185 (IRS1/2) was observed. Thus, we conclude that castration promoted insulin resistance and glucose intolerance associated with obesity, and in this model, the use of DHEA impairs insulin sensitivity in animals.

O treinamento físico aeróbico induz atenuação de disfunções cardiometabólicas que acometem mulheres menopausadas e/ou diabéticas. Entretanto, estudos envolvendo treinamento resitido ou combinado (aeróbio + resistido) são escassos e controversos. Dessa forma, os objetivos do presente estudo foram avaliar os efeitos metabólicos, cardiovasculares e autonômicos da privação dos hormônios ovarianos na presença ou não de diabetes induzido por estreptozotocina em ratas, bem os efeitos do treinamento físico aeróbio dinâmico, resistido dinâmico, ou combinado nesta condição. Ratas Wistar (200-220g) foram dividas em um grupo controle sedentário (ES), um grupo diabético sedentário (DS) e 5 grupos ooforectomizados (retirada bilateral dos ovários) (n=8), sendo um euglicêmico sedentário (EOS) e os demais diabéticos (estreptozotocina, 50 mg/kg, iv): sedentário (DOS), submetido a treinamento físico (TF) aeróbio em esteira (DOTA), a TF resistido em escada (DOTR), ou a TF combinado, em escada e esteira em dias alternados (DOTC). Após as 8 semanas de TF, a função e a morfometria cardíaca foram avaliadas pelo ecocardiograma e, no dia seguinte, os animais foram canulados para registro da pressão arterial (PA) e avaliação da sensibilidade barorreflexa (SB). A análise da variabilidade da frequência cardíaca (FC) e da PA sistólica (PAS) foi realizada no domínio do tempo e da frequência. Os resultados demonstraram aumento de 9% no peso corporal e 10% na PA, e redução de SB (21% nas respostas taquicárdicas) no grupo EOS. Os animais diabéticos apresentaram redução de 19% no peso corporal e na capacidade física (22% no teste máximo em esteira e 19% na carga máxima na escada); redução de 8% na massa e 18% na espessura relativa da parede do ventrículo esquerdo (VE), aumento de 11% na cavidade do VE, de 31% no tempo de relaxamento isovolumétrico e 34% no índice de desempenho miocárdico; além de redução de na PA, na FC, na SB e na banda AF-IP. A associação de diabetes com ooforectomia induziu exacerbação de algumas disfunções, como aumento de 9% na glicemia e de 20% no índice de desempenho miocárdico (IDM); redução de 14% na velocidade de encurtamento do VE e 14% na FC (DOS vs. DS). O treinamento induziu aumento de 77% na capacidade de corrida no grupo DOTA, aumento de 60% na carga máxima no DOTR, e aumento em ambos os parâmetros no DOTC (75% na corrida e 58% na carga máxima). Todos os animais treinados apresentaram reversão da hipotensão e da bradicardia de repouso, associadas a aumento na VAR-IP (DOTA: 79%, DOTR: 79%, DOTC: 65%), normalização da banda de BF-IP, e redução no índice de desempenho miocárdico (DOTA: 16%, DOTR: 15%, DOTC: 31%) (vs. DOS). Os grupos DOTA e DOTC (mas não o DOTR) apresentaram maior SB (respostas taquicárdicas e bradicárdicas), atenuação das alterações morfométricas do VE, e na variabilidade da PA sistólica (vs. DOS). Além disso, o grupo DOTR apresentou aumento de 14% na massa, e redução de 14% na velocidade de encurtamento do VE e de 15% no IDM em relação ao grupo DOS. O grupo DOTC demonstrou redução adicional de 18% no IDM e em relação ao DOTA. A mortalidade foi maior no grupo DOS em comparação aos grupos treinados. Concluindo, os resultados evidenciam que o treinamento físico dinâmico aeróbio, resistido ou combinado induziu benefícios na capacidade física, cardíacos, hemodinâmicos e autonômicos após a privação dos hormônios ovarianos em ratas diabéticas. No entanto, o treinamento físico combinado promoveu efeitos adicionais em relação aos treinamentos aeróbio ou ao resistido nesta condição. / Aerobic exercise training induces attenuation of cardiometabolic disorders that affect postmenopausal and/or diabetic women. However, there few and controversial studies involving resistance or combined training (aerobic + resistance) in these conditions. Thus, the objectives of this study were to evaluate the metabolic, cardiac, hemodynamic and autonomic effects of ovarian hormones deprivation in the healthy and streptozotocin-induced diabetic rats, as well as the effects of dynamic aerobic, resistance or combined exercise training in this condition. Female Wistar rats (200-220g) were divided into (n = 8 each group) a sedentary control group (ES), a sedentary diabetic group (SD) and 5 ovariectomized groups (bilateral ovaries removal): sedentary euglycemic (EOS), sedentary diabetic (DOS), trained diabetic by an aerobic protocol on a treadmill (DOTA), by a resistance protocol in ladder (DOTR), or by a combined protocol in ladder+treadmill on alternate days (DOTC). After 8 weeks of training, cardiac morphometric and function were evaluated by echocardiography. On the next day, the animals were cannulated to arterial pressure (AP) recording and baroreflex sensitivity (BS) evaluation. Heart rate (HR) and systolic AP variability were analyzed in the time and frequency domains. The results showed increased of 9% in body weight and 10% in AP, and BS (21% in tachycardic responses) reduction in the EOS group. Diabetic animals showed a reduction of 19% in body weight and in physical capacity (22% in the maximal test on a treadmill and 19% in the maximum load on the ladder), reduction of 8% in mass and of 18% in relative wall thickness of the left ventricle (LV), increase of 11% in LV cavity, 31% in the isovolumetric relaxation time and 34% in myocardial performance index (MPI); in addition to reduction in AP, in HR, BS, and in PI-HF band. The association of diabetes with ovariectomy induced exacerbation of some dysfunctions, such as increased of 9% in blood glucose and 20% in MPI, reduction of 14% in the LV velocity of shortening and 14% in HR (DOS vs. DS). Exercise training induced an increase of 77% in the run capacity in the DOTA group, 60% in the maximum load in DOTR group, and increases in both parameters in DOTC (75% in run and 58% in the maximum load). All trained animals showed reversal of hypotension and bradycardia at rest DOTA: 79%, DOTR: 79%, DOTC: 65%), associated with increased HR variance and normalization of the LF band of pulse interval (PI), and reduced MPI (DOTA: 16%, DOTR: 15%, DOTC: 31%) (vs. DOS). The DOTA and DOTC groups (but not DOTR) had higher BS (tachycardic and bradycardic responses), and attenuation in the LV morphometric changes and in SAP variability (vs. DOS). Furthermore, the DOTR group showed an increase of 14% in mass and a reduction of 14% in LV velocity of shortening and of 15% in MPI in relation to DOS group. The DOTC group showed additional reduction of 18% in MPI and in relation to DOTA. Mortality was higher in DOS group when compared to trained group. In conclusion, the results showed that dynamic aerobic, resistance or combined exercise training induced benefits in physical capacity, cardiac, hemodynamic and autonomic parameters after ovarian hormone deprivation in diabetic rats. However, the combined exercise training promoted additional effects than aerobic or resistance training in this condition.

Introdução: A doxiciclina, membro da família das tetraciclinas, é uma droga utilizada como antibiótico (posologia de 100 mg/dia) e como inibidora de metaloproteinases de matriz - MMPs - (posologia de 20 mg duas vezes ao dia), uso que tem efeito de droga anti-inflamatória. A doxiciclina é quelante de cálcio e portanto interfere na remodelação óssea. Objetiva-se neste trabalho avaliar ação do medicamento doxiciclina no controle da osteopenia. Materiais e métodos: 63 ratas Wistars obtidas no biotério central da Universidade de São Paulo campus de Ribeirão Preto foram divididas em 9 grupos com n=7 cada, sendo estes: grupo Controle com doxiciclina 10mg/kg/dia (C10), Controle com doxiciclina 30 mg/kg/dia (C30) e Controle (C), Grupo Ovariectomizado com doxiciclina 10mg/kg/dia (OVX10), Ovariectomizado com doxiciclina 30mg/kg/dia (OVX30) e Ovariectomizado com água (OVX), Grupo Sedentarismo 10mg/kg/dia (Se10), Sedentarismo 30mg/kg/dia (Se30) e Sedentário com água (Se). Todos os grupos tiveram seus modelos de indução a osteopenia por 90 dias. Em seguida, os grupos que receberam o medicamento, foram submetidos as doses diárias (10mg/kg/dia e 30mg/kg/dia) por 60 dias. As amostras dos fêmures esquerdos foram destinadas para densitometria óssea enquanto as amostras de fêmures direitos foram submetidos a análises de microscopia de luz. As amostras de tíbia direita foram destinadas à quantificação química de cálcio, magnésio, zinco e fósforo e, amostras de soro total foram submetidos a análises de quantificação de cálcio e colesterol total. O peso das ratas foi aferido em balança de precisão no próprio biotério. O fêmur esquerdo foi posteriormente seco em estufa a 37 graus Celsius e pesado em balança de precisão e o comprimento destes ossos fêmures foram aferidos com auxílio de um paquímetro digital para medição dos ossos em seu longo eixo. Foi empregada análise estatística modelo linear geral, multivariado e as análises de TRAP foram submetidas a teste de normalidade e em seguida à teste não paramétricos com Kurskal Wallis com análise de variância, havendo diferenças o post-test de Dunn foi realizado para especificar as diferenças ambas com significância de p<=0,05. Resultados: Foram encontradas diferenças estatisticamente significantes entre Se vs. Se10 e Se30 para BMC, quantificação de Magnésio e quantificação do trabeculado ósseo por Tricromo de Masson na porção distal, OVX vs. OVX10 para densitometria óssea e Cálcio em soro, OVX vs. OVX10 e OVX30 para quantificação de trabeculado ósseo por Tricromo de Masson na porção proximal e distal e Se vs. Se30 e OVX vs. OVX30 para imunomarcação por TRAP, todos os resultados com p<=0,05. Conclusão: Neste modelo experimental a doxiciclina teve um papel chave no transporte sanguíneo do quelato de cálcio (dados comprovados pela maior presença de cálcio no soro do grupo OVX30) e contribuiu positivamente em ossos de ratas acometidas pela osteopenia induzida por ovariectomia bilateral e sedentarismo, dados comprovados por densitometria, quantificação do trabeculado ósseo de fêmur porção distal, análise qualitativa por imunomarcação por TRAP e quantificação de Mg no osso. / Introduction: Doxycycline, a member of the tetracycline family, is a drug used as an antibiotic (100 mg / day dosage) and as an inhibitor of matrix metalloproteinases - MMPs (20 mg twice daily), a use that has anti-inflammatory effect. Doxycycline is a calcium chelator and therefore interferes with bone remodeling. The main objective of this study was to evaluate the action of the drug doxycycline in the control of osteopenia. Materials and methods: Sixty-three Wistars rats obtained from the USP, campus Ribeirão Preto, were divided into 9 groups with n = 7 each, being: Control group with Doxycycline 10 mg/kg/day (C10), Control with Doxycycline 30 mg/kg/day (OVX10), Ovariectomized with Doxycycline 30mg/kg/day (OVX30) and Ovariectomized with water (OVX), Sedentarism Group 10mg/kg/day (C30) and Control (C30), Ovariectomized Group with Doxycycline 10mg/kg/day (Se10), sedentarism 30mg/kg/day (Se30) and Sedentarism with water (Se). All groups had their induction models to osteopenia for 90 days. Subsequently, the groups receiving the medication were submitted to daily doses (10mg/kg/day and 30mg/kg/day) for 60 days. The left femur samples were assigned to Bone Densitometry, right femur samples were subjected to light microscopy, right tibia samples for chemical quantification of calcium, magnesium, zinc and phosphorus, and total serum samples were submitted to quantification of calcium and total cholesterol. The weight of the rats was measured on a precision scale at the animal house. The left femur was dried at 37 degrees Celsius on dried oven and then weighed on a precision scale, and the length of these femur bones were measured using a digital caliper to measure the bones along its long axis. Statistical analysis was used for linear general model, multivariate analysis and the TRAP analyzes were submitted to normality test and then to non-parametric test with Kurskal Wallis with analysis of variance, having differences a Dunn post-test was performed to specify the differences both with significance of p<=0.05. Results: Statistically significant differences were found between Se vs. Se10 and Se30 for BMC, quantification of Magnesium and quantification of bone trabeculation by Masson trichrome in the distal portion, OVX vs. OVX10 for bone densitometry and Calcium in serum, OVX vs. OVX10 and OVX30 for quantification of bone trabeculation by Masson trichrome in the proximal and distal portion and Se vs. Se30 and OVX vs. OVX30 for TRAP immunostaining, all results with p<=0.05. Conclusion: At this experimental model, doxycycline played a key role in the blood transport of calcium chelate (data evidenced by the higher presence of calcium in the serum of the OVX30 group) and contributed positively to bone from rats affected by osteopenia induced by bilateral ovariectomy and sedentary lifestyle, supporting data of bone densitometry, quantification of bone trabeculation of the distal femur, qualitative analysis by TRAP immunostaining and quantification of Mg in the bone.

Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Fernanda Cristina Alcântara dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T11:48:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Shinohara_FilipeZardini_M.pdf: 6449198 bytes, checksum: a8c73825ded0555e83a4ee262c264de8 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital quando liberada / Abstract: The abstract is available with the full electronic document when available / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Fernanda Cristina Alcântara Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-20T07:20:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_DiegoAugustoLopesda_M.pdf: 2979999 bytes, checksum: 9599710cd18bf699e32f5e46a65eb134 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A próstata feminina é uma glândula funcionalmente ativa encontrada em diversas espécies de mamíferos, incluindo humanos e roedores. Em fêmeas adultas de gerbilos, a próstata apresenta localização parauretral, exibindo íntimo contato com a parede da uretra média e distal. Esta glândula é homóloga a próstata ventral de roedores machos, sendo formada por um conjunto de glândulas e ductos inseridos em um estroma fibromuscular. O estudo da morfofisiologia prostática nas fases do ciclo estral tem demonstrado que a próstata feminina é influenciada pelas oscilações nos níveis séricos de estradiol e progesterona. Assim, tornam-se necessários estudos que avaliem o efeito da exposição ao estradiol em longo prazo, com o objetivo de observar como este esteróide atua no desenvolvimento de lesões prostáticas. Além disso, de igual importância é avaliar a interação dos estrógenos com outros esteróides circulantes, a fim de se avaliar quais associações hormonais são necessárias para manter o equilíbrio homeostático da próstata feminina do gerbilo. A partir do proposto, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da administração prolongada de estradiol, e de estradiol + testosterona, sobre a próstata de fêmeas ovariectomizadas. Para isso, as fêmeas adultas foram submetidas à intervenção cirúrgica para remoção dos ovários e, após 10 dias de recuperação, foram submetidas à administração de estradiol, e de estradiol + testosterona. Após trinta dias de tratamento, os animais foram sacrificados e as glândulas prostáticas submetidas a análises morfológicas, morfométrico-estereológicas e sorológicas. Alterações morfológicas e fisiológicas foram observadas em todos os grupos experimentais. A restrição hormonal resultante da ovariectomia causou grande regressão glandular e diminuição da atividade secretora, aspectos revertidos pela exposição dos animais ao estrógeno isolado e conjugado à testosterona. Entretanto, esses hormônios não foram capazes de reestabelecer a histoarquitetura normal do tecido. Foram observadas, inclusive, algumas lesões presentes principalmente nos grupos tratados, tais como inflamações e neoplasias intraepiteliais. A imunorreação para o ER-? foi reduzida nos núcleos do estroma prostático após castração e foi recuperado com os tratamentos. Já a localização de ER-? no núcleo das células epiteliais mostrou-se muito semelhante em todos os grupos. Sugere-se, ainda, uma atuação do estradiol na regulação dos níveis séricos de prosgesterona e testosterona. Sendo assim, conclui-se que a histoarquitetura normal da glândula nas fêmeas está relacionada ao equilíbrio entre os hormônios ovarianos e que, dentre eles, o estradiol e a testosterona desepenham papel importante na homeostasia prostática desses animais / Abstract: The female prostate is a functional gland found in several mammal species, including humans and rodents. In adult female gerbils, the prostate shows paraurethral localization, exhibiting intimate contact with medial and distal urethra wall. This gland is homologous to ventral prostate in male rodents, composed by a group of acini and ducts inserted into a fibromuscular stroma. Prostate morphophysiology estudies during estrous cycle have shown that female prostate is influenced by estradiol and progesterone serum levels oscillations. Thus, studies which evaluate the effect of long-term exposure to estradiol become necessary, in order to observe the way this steroid acts by on prostate lesions development. Furthermore, it is also important to evaluate hormonal interaction among estradiol and other serum steroids with the aim of evaluating which hormonal associations are necessary to maintain the homeostatic balance of gerbil female prostate. Hence, this study role was to evaluate the effect of estradiol and estradiol plus testosterone long-term exposure on the prostate of ovariectomized females. To make it possible, adult females underwent to surgical intervention to remove both ovaries and, after 10 days recovering, they received estradiol or estradiol plus testosterone doses. After 30 days of treatment, the animals were euthanized and de prostate glands were submitted to morphological, morphometric-estereological and serological analysis. Morphological and physiological alterations were observed in all experimental groups. Hormonal deprivation caused by castration brought glandular atrophy and decreased secretory activity. These aspects were reverted by animals exposure to isolated estrogen and estrogen plus testosterone conjugation. However, these hormones were not able to reestablish the tissue normal histoarchitecture. Some lesions were even observed mainly in tratment groups, like inflammations and intraepithelial neoplasias. The imunoreaction for ER-? decreased in prostate stroma nuclei after castration and was restablished with treatments. On the other hand, the epithelium ER-? expression was similar in all groups. It also seems that there is a role played by estradiol in testosterone and progesterone serum levels regulation. In conclusion, normal histoarchitecture of gerbil female prostate is related to ovarian hormones balance and estradiol and testosterone play an important role in prostatic homeostasis in these animals / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

A osteoporose é um enfraquecimento progressivo dos ossos, que ficam cada vez mais sujeitos a fraturas. Embora possa acometer ambos os sexos, ela é mais freqüente nas mulheres após a menopausa devido à diminuição dos hormônios femininos, os estrógenos. É uma doença que avança lentamente, sem sintomas, geralmente sem ser percebida até que aconteça uma fratura. Uma vez instalada a osteoporose, tem que se evitar maior perda óssea para prevenir fraturas. O objetivo deste trabalho é analisar o quadro de instalação de osteopenia em ossos corticais de ratas ovariectomizadas. Foi utilizado um modelo de osteopenia em 29 ratas Wistar ovarectomizadas com massa corpórea de 250 gramas. Os animais foram divididos em 6 grupos experimentais e eutanaziados em períodos diferentes: o primeiro grupo foi eutanaziado 30 dias após a cirurgia, que corresponde ao tempo de início da osteopenia, e a partir daí, os demais grupos foram eutanaziados numa seqüência de 15 dias até o 105º dia. A avaliação do quadro de instalação foi realizada através de medidas antropométricas e de propriedades mecânicas dos fêmures (ensaio de flexão de três pontos). Cada um dos itens obtidos foram comparados utilizando-se o programa GraphPad InStat 3. O teste t-Student foi aplicado para checar a variação do peso corporal com p < 0,05. Aplicaram-se os testes ANOVA e Student-Newmam-Keuls com coeficiente de variação também menor que 5% para os demais itens analisados. Observou-se um aumento significativo no comprimento dos fêmures durante o primeiro mês de experimento, assim como na carga máxima aplicada. Os resultados obtidos neste estudo sugerem que a ovariectomia é um fator que não causa grandes alterações mecânicas e geométricas na região cortical dos fêmures de ratas no período analisado / Osteoporosis is a progressive weakness of bones, which are more and more subjects to fractures. Although it happens to men and women, it is more frequent in postmenopausal women due to a decrease of female hormones. It is a disease without symptoms and it is usually noticed only after a fracture. Once the osteoporosis is installed, a bigger bone loss must be avoided in order to prevent a fracture. This study aims to analyze the osteopenia installation process in cortical bones of ovariectomized rats. An osteopenia model was used in 29 ovariectomized Wistar female rats with body weight of 250 g. Animals were divided in 6 experimental groups, the first group was sacrificed 30 days after the surgery and, the other groups, every 15 days on until the 105th day. The evaluation of installation process was made through anthropometrics and mechanical proprieties of femur (three-point bending test). Program GraphPad InStat 3 was used in order to compare the observed items. T-student test was used to check the body weight variation with p < 0,05 and tests ANOVA and Student-Newmam-Keuls were applied to the other items (p < 0,05). A significant increase in femur length and in maximum bending load were obtained. The found results in this research suggest that ovariectomy is a factor that does not cause significant mechanical and geometric alterations on cortical region of femurs in female rats during the analyzed period

Avaliamos as propriedades mecânicas, obtidas através de ensaios de flexo-compressão de fêmures e flexão em 3 pontos de tíbias de ratas adultas ovariectomizadas e submetidas à atividade física. Para realização do experimento foram utilizadas 30 ratas divididas aleatoriamente em 3 grupos: Grupo 1 – controle. Grupo 2: constituído por animais ovariectomizados e não submetidos à atividade física. Grupo 3: os animais deste grupo foram treinados em uma gaiola giratória por cinco dias consecutivos, em seguida foram submetidos a ovariectomia, permanecendo em repouso por 24 horas. Foram colocados para prática de atividade física por 30 minutos, 5 dias por semana durante 9 semanas com velocidade de aproximadamente 0,31 m/s. Os fêmures tiveram a porção distal incluída em resina acrílica para que fosse efetuado o ensaio de flexo-compressão. As tíbias foram submetidas ao ensaio de flexão em 3 pontos. Através dos resultados obtidos foram elaborados gráficos de carga versus deformação que evidenciaram que os fêmures das ratas ovariectomizadas apresentaram redução estatisticamente significativa nas propriedades mecânicas de carga no limite máximo e de deformação no limite máximo. Os fêmures do grupo ovariectomizado e submetido à prática de atividade física apresentaram valores de carga no limite máximo e de deformação no limite máximo superiores aos do grupo apenas ovariectomizado, no entanto, sem significância estatística. As tíbias não apresentaram alterações significativas em nenhuma das propriedades mecânicas estudadas. A atividade física aplicada por 30 minutos, 5 dias por semana durante 9 semanas a 0,31 m/s não foi suficiente para corrigir as alterações biomecânicas do tecido ósseo provocadas pela ovariectomia / We evaluated the mechanical properties, obtained by essays of flexion-compression of femurs and flexion in 3 points of tibiae of adult female ovariectomized rats and exposed to physical activity. To perform this experiment 30 rats divided randomly in three groups were used: Group 1 – control. Group 2: formed by ovariectomized animals, not submitted to physical activity. Group 3: the animals in this group were trained in a treadmill for 5 consecutive days and then submitted to the ovariectomy, remaining in rest for 24 hours. They were submitted to physical activity for 30 minutes with a velocity of 0,31 m/s, five days a week during 9 weeks. The femurs had their distal portion included in acrilic resinous so that the essay of flexion-compression could be done. And the tibiae were submitted to the flexion essay in 3 points. Based on the results, graphics on the cargo versus deformation, which showed that the femurs of the ovariectomized rats presented a statisticaly significant reduction in its mechanical properties of maximun cargo and maximun deformation. The femurs of the ovariectomized group and submitted to the physical activity presented higher values of maximun cargo and maximun deformation, than the group that was just ovariectomized, however, with no statistical importance. The tibiae did not present significant alterations in any of the mechanical properties studied. The physical activity applied for 30 minutes, 5 days a week during 9 weeks with a velocity of 0,31 m/s was not enought to correct the biomechanical alterations of the bone tissue caused by the ovariectomy