D'acord amb el comitè de nomenclatura gènica (HGNC) de l'organització del genoma humà (HUGO), es defineix com a proteïna HERC tota aquella proteïna que conté com a mínim i de forma conjunta un domini HECT i un domini RCC1 like (RLD) en la seva seqüència. En l'actualitat s'han identificat 6 membres per aquesta família de proteïnes d'entre les quals la proteïna HERC1 és la primera que es va identificar i el membre fundador de la família. La identificació d'aquesta proteïna va tenir lloc mitjançant la búsqueda de seqüències oncogèniques humanes a partir de cèl·lules de càncer de mama, i tot i que s'ha observat la seva sobrexpressió en diferents càncers, i que s'ha descrit la seva interacció amb difererents proteïnes involucrades amb processos de tràfic de membrana, a dia d'avui no es coneix encara quina es la seva funció fisiològica. L'objectiu principal d'aquesta tesi ha estat l'estudi del paper de la proteïna HERC1 en la via de senyalització de mTOR. Amb l'objectiu de facilitar aquest estudi vàrem idear en primer lloc un sistema per a l'estudi de proteïnes gegants per PAGE/SDS que al mateix temps ens permetés l'anàlisi de proteïnes amb pesos moleculars menors en un sol gel. Aquest sistema el vàrem anomenar LAG gel (Low Acrylamide Gradient gel), i consisteix en un gel que combina de forma contínua un gel de poliacrilamida de baix percentatge d'acrilamida (4%) i una proporció menor de l'habitual d'acrilamida:bisacrilamida (80:1) (que permet l'entrada de les proteïnes gegants al gel) amb un gel en gradient del 6 al 15% amb una proporció acrilamida/bisacrilamida de 40:1. Hem comprobat que aquest sistema permet separar proteïnes des de 5 KDa fins a proteïnes gegants en únic gel, amb els avantatges que això comporta pel que fa al estalvi de temps i de reactius. A l'any 2006, en col·laboració amb el nostre laboratori, es va descriure que HERC1 interacciona amb la tuberina (TSC2), una proteïna que juntament amb l'hamarina (TSC1) forma el complex de l'esclerosi tuberosa (TSC). Aquest complex actua com a regulador negatiu de la via de senyalització de mTOR, estimulant l'activitat GTPasa de Rheb a través del domini GAP de TSC2. En aquest treball hem comprovat que HERC1 s'associa als dos components de l'esclerosi tuberosa (tuberina i hamartina) estabilitzant aquest complex. A més a més, hem observat com aquesta interacció té lloc en menor grau amb els mutants de TSC2 identificats en pacients d'esclerosi tuberosa R611Q i R905Q, és independent de la inhibició de la via de señalización de mTOR induïda por dejuni o de la seva activació mitjançant aminoàcids o insulina. En canvi, tot i aquestes interaccions, HERC1 no sembla participar en la fosforilació de proteïnes involucrades en la via de mTOR com les p70 S6K, 4EBP1, Akt o S6, ni tampoc en la regulació del procés de l'autofàgia. En canvi, si que afecta a un altre procés mTOR dependent com és la biogénesi de ribosomes. En aquest sentit hem pogut comprovar mitjançant experiments de silenciació del gen d'HERC1 que la disminució dels nivells d'HERC1 provoca disminucions significatives dels nivells d'ADN ribosomal 18S així com de l'actividad del promotor d'aquest gen.La realització d'experiments d'activació amb aminoàcids per a l'estudi del paper de la proteïna HERC1 en la via de senyalització de mTOR ens va permetre observar que el tractament amb aminoàcids indueix la fosforilació de una proteïna de 80-90 KDa, però no de la isoforma p70 de la S6K1. Aquesta observació ens va portar a l'estudi de l'activació de la p70 S6K1 en resposta a aminoàcids, observant que en respuesta a aquests nutrients es produeix l'activació de les proteïnes quinasa activades por MAPKs (MKs), RSK y MSK. A més a més, hem vist que l'activació d'ambdues quinases té lloc en resposta a la activació de les MAPKs, Erk o p38, a través d'un mecanisme compensatori en el qual quan la Erk es troba inhibida, l'activació de la RSK i MSK té lloc a través de p38 i viceversa. / According to the Human Genome Organization (HUGO) Gene Nomenclature Committee (HGNC), HERC proteins are defined as those proteins containing both RLD and HECT domains in their amino acid sequence. Currently, six HERC proteins have been identified. The physiological role of HERC1, the founding member of the family, still remains to be clarified. The main objective for this thesis has been the study of HERC1 role in the mTOR signalling pathway. First, we created a new system to study giant and smaller proteins by means of PAGE/SDS in a unique gel. We called it LAG gel (Low Acrylamide Gradient gel) and is formed by the combination of a low percentage acrylamide gel (4% and a ratio Acrylamide/Bisacrylamide 80:1) and a gradient gel (6-15%, A/B 80:1). This system permits to analyze simultaneously giant and smaller proteins in a unique gel obtaining good separation ressolutions for all proteins and to save time and reactants. It's been described that HERC1 is able to interact with TSC2 (tuberin), a protein which together with TSC1 (hamartin) constitutes the tuberous sclerosis complex (TSC). This complex acts as a negative regulator of the mTOR signalling pathway through the stimulation of Rheb GTPase activity by TSC2 GAP domain. We have proved that HERC1 interacts with both TSC members (tuberin and hamartin) stabilizing it. Furthermore, we have observed that this interaction is lower with TSC2 mutants identified from tuberous sclerosis patients, R611Q and R905Q and is independent of mTOR signalling pathway inhibition by starving or activation by aminoacids or insulin. Despite these interactions, HERC1 isn't involved in the phosphorylation of some mTOR signalling pathway proteins such as p70 S6K, 4EBP1, Akt, S6, nor in the regulation of Autophagy. However, HERC1 is involved in the mTOR dependent process of ribosome biogenesis. We have proved that the HERC1 gene knock down causes a significant decrease of the 18S ribosomal DNA as well as a reduction of the activity of the promoter of this gene.The performance of activation assays with aminoacids in the study of the HERC1 role in the mTOR signalling pathway permitted us to observe that this cell treatment induce the phosphorylation of a 90 KDa protein and a 110 KDa protein, but not the p70 isoform of S6K1. We have seen that these 90 and 110 KDa bands correspond to the kinases activated by MAPKs (MKs), RSK and MSK. Furthermore, we have proved that the activation of both kinases takes place in response of the activation of the MAPKs, Erk or p38 through a compensatory mechanish in which when Erk is not active, the RSK and MSK activation is induced by p38 and viceversa.

Tesi realitzada a l'Institut d'Investigació Biomèdica de Sant Pau / Diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) is a clinically and genetically heterogeneous disease, accounting for 30% of all non-Hodgkin lymphoma cases. Although the addition of rituximab to standard treatment (CHOP: cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine, and prednisone) has increased survival of DLBCL patients, 30-40% of patients still relapse. Moreover, 1-10% of the relapsed patients show central nervous system (CNS) involvement which is almost always a fatal condition. Consequently, further studies are needed to understand the molecular mechanisms involved in the disease and to develop novel therapies to improve the patients’ outcome. In this regard, modeling the disease in mice has reached a great relevance and it is necessary to develop novel models that represent the clinical features of the disseminated disease. In addition, novel biomarkers are needed to predict DLBCL outcome. Accumulating data have emerged about the correlation of CXCR4 receptor with disease dissemination and aggressiveness in several neoplasms. This receptor has also been described to play a role in the migration and trafficking of B cells and some hematological malignancies. However, no data are available about its involvement in DLBCL dissemination or its relevance as a prognostic marker in this disease. The goals of the current thesis were: 1) To develop bioluminescent mouse models of disseminated DLBCL which reflect this human pathology. 2) To evaluate the in vivo antitumor effect of a new inhibitor of focal adhesion signaling, E7123, in a model of DLBCL with central nervous system (CNS) involvement. And, 3) To study the role of CXCR4 receptor in the migration and dissemination of DLBCL cells and evaluated the expression of the receptor in lymph node biopsies of DLBCL patients and its prognostic value. We have developed bioluminescent xenograft models of disseminated DLBCL that derive from DLBCL cell lines and that reflect this human pathology. These models can be used to study cell dissemination and the effect of novel antitumor drugs against DLBCL. In fact, the focal adhesion inhibitor E7123 was tested in a disseminated DLBCL model with CNS involvement; this drug delayed the growth of DLBCL metastasis to the CNS and increased mouse survival time. These findings suggest that E7123 was able to cross the blood brain barrier and thus could be effective for the treatment of DLBCL patients with CNS involvement. However, further preclinical development and clinical assays will be necessary to evaluate E7123 antitumor effect in relapsed DLBCL patients. In addition, we observed that the level of membrane CXCR4 expression in DLBCL cell lines correlated positively with in vitro migration towards SDF-1α chemokine and this migration was inhibited by the CXCR4 antagonist, AMD3100. Expression of the receptor was also associated with increased engraftment and dissemination, and decreased survival time in DLBCL NOD/SCID mouse models. Moreover, the subcutaneous preconditioning of DLBCL cells produced changes in the levels of membrane CXCR4 that correlated with aggressiveness of the models; higher levels of CXCR4 led to shortened mouse survival and enhanced lymphoma dissemination. Furthermore, administration of the AMD3100 antagonist to a xenograft DLBCL model decreased dissemination of the tumor cells. Thus, AMD3100 could potentially be used in the treatment of DLBCL. We also evaluated the prognostic value of CXCR4 and found that the receptor is an independent prognostic factor associated with a decreased progression-free survival of patients. These results show that CXCR4 mediates dissemination of DLBCL cells and define for the first time its value as an independent prognostic marker in patients. This novel prognostic marker requires further studies and validation in an independent cohort of DLBCL patients to be used as a potentially clinical tool. / El linfoma difuso de célula grande B (LDCGB) es el tipo de linfoma no-Hodgkin más común en la población y representa un 30% de los casos. La incorporación de rituximab al tratamiento estándar CHOP (ciclofosfamida, doxorubicina, vincristina y prednisona) ha aumentado la supervivencia de los pacientes. Aún así, un elevado porcentaje de pacientes recaen y es necesario desarrollar nuevos fármacos. Para ello es importante obtener modelos animales que reproduzcan las características clínicas observadas en pacientes y que permitan estudiar su mecanismo patogénico y evaluar nuevos tratamientos. Por otro lado, también es necesario obtener nuevos biomarcadores capaces de predecir el pronóstico en pacientes de LDCGB. Las proteínas implicados en señalización y tráfico celular son de gran interés; entre ellas el receptor de quimioquinas CXCR4 que ha sido descrito en el tráfico de linfocitos B tumorales y en la diseminación de varias neoplasias. El principal objetivo de esta tesis es generar modelos animales bioluminiscentes de LDCGB para el estudio de la patología y para la evaluación de nuevas terapias. También evaluamos el efecto antitumoral del inhibidor de adhesiones focales E7123 en un modelo de LDCGB con afectación del sistema nervioso central. Por último, estudiamos la implicación de CXCR4 en diseminación y su valor pronóstico en biopsias ganglionares de pacientes con LDCGB. En esta tesis conseguimos desarrollar modelos murinos bioluminiscentes de LDCGB diseminado que derivan de líneas celulares de linfoma humano y que reflejan las características clínico-patológicas de la enfermedad. Además, observamos que E7123, presenta efecto antitumoral en un modelo de LDCGB con afectación del sistema nervioso central. También, describimos una correlación positiva entre los niveles de expresión del receptor CXCR4 y la migración in vitro de las células de LDCGB inducida por la quimioquina SDF-1α. Esta correlación entre niveles de expresión y agresividad se mantiene en los modelos xenógrafos de LDCGB generados; las células de linfoma con mayor expresión de CXCR4 presentan mayor tasa de injerto, diseminación y un menor tiempo de supervivencia en los ratones inyectados. Además, el pre-condicionamiento subcutáneo de las líneas celulares modifica la expresión de CXCR4 y estos cambios de expresión también correlacionan con la agresividad de las células. Por último, describimos el valor pronóstico de CXCR4 como predictor del riesgo de recaída en pacientes con LDCGB; la presencia de CXCR4 en membrana está asociada con un mayor riesgo de recidiva.

Aquest és el primer informe que demostra que l'autofàgia està mecànicament vinculat al manteniment de les cèl•lules tumorals que expressen alts nivells de CD44 i baixos nivells de CD24, que són típics de les cèl•lules mare del càncer de mama. Els nostres resultats actuals proporcionen una nova visió de com la divisió mitocondrial s'integra a la xarxa de la transcripció impulsada per factors de reprogramació, especifica de la pluripotència única de les cèl•lules mare. L'autofàgia pot controlar la refractarietat de novo de carcinomes de mama amb el gen HER2 amplificat per l'anticòs monoclonal trastuzumab (Herceptin). Per tant, el tractament de combinació amb trastuzumab i cloroquina, com a fàrmac anti-malàric i inhibidor de l’autofàgia, suprimeix radicalment el creixement del tumor en un xenoempelt de tumor completament refractari a trastuzumab en un model murí. L’addició de cloroquina amb els règims amb trastuzumab pot, per tant, millorar els resultats en les dones amb càncer de mama HER2. Aquesta és una àrea molt emocionant i molt prometedora de la investigació del càncer, com la modulació farmacològica de l'autofàgia sembla augmentar l'eficàcia dels règims contra el càncer disponibles en l'actualitat i s'obre el camí per al desenvolupament de noves estratègies terapèutiques combinatòries que s'espera que contribueixin a l'eradicació del càncer. / This is the first report demonstrating that autophagy is mechanistically linked to the maintenance of tumor cells expressing high levels of CD44 and low levels of CD24, which are typical of breast cancer stem cells. Our current findings provide new insight into how mitochondrial division is integrated into the reprogramming of the factors-driven transcriptional network that specifies the unique pluripotency of stem cells. Autophagy may control the de novo refractoriness of HER2 gene-amplified breast carcinomas to the monoclonal antibody trastuzumab (Herceptin). Accordingly, treatment with trastuzumab and chloroquine, as antimalarial drug and inhibitor of autophagy, radically suppresses tumor growth in a tumor xenograft completely refractory to trastuzumab in a mouse model. Adding chloroquine to trastuzumab-based regimens may therefore improve outcomes among women with autophagy-addicted HER2-positive breast cancer. This is a very exciting and highly promising area of cancer research, as pharmacologic modulation of autophagy appears to augment the efficacy of currently available anticancer regimens and opens the way to the development of new combinatorial therapeutic strategies that will hopefully contribute to cancer eradication.

Tesi realitzada a l'Institut de Recerca Biomèdica de Barcelona (IRBB) / Network and systems biology disciplines could revolutionize the study of complex diseases by taking proteins back to their context, considering a much broader perspective of their environment without losing the molecular details. Cancer is an extremely complex disease, as innumerable proteins are involved in its development, thus network and systems biology disciplines could revolutionize its study. The objectives of the current thesis were (1) the systematic characterization of novel interactions between causative and associated breast and colorectal cancer genes to unveil the molecular mechanisms involved in tumor biology and (2) the prediction and initial validation of novel drug targets and drug combinations for breast cancer. We first collected genes related to breast and colorectal cancers onset and development and we selected two groups of genes from our starting pool: (1) driver/causative genes (genes key in breast and colorectal cancers, genes that cause genetic predisposition to the disease or key genes in important cancer pathways), and (2) associated genes (genes related to the disease that do not interact with causative genes and that are poorly studied). Then we performed several high-throughput yeast two-hybrid screenings (a pair-wise and a library screen for each cancer type) to detect novel interactions among these two groups of genes. Overall, we identified 599 non-redundant interactions between 49 drivers and 150 associated proteins in the BC study and 622 novel interactions among 42 drivers and 65 associated proteins for CRC. To contextualize the 599 novel BC-related interactions that our study had revealed, we integrated them with all the interaction data reported in the literature to build a comprehensive interactome associated to BC, obtaining a network of 11,226 interactions among 2,019 proteins. We next studied the structure of this network to detect the presence of potential functional modules, defined as groups of proteins that are densely interconnected and that are functionally homogenous. These modules were merged by similar functions to build subnetworks, so each subnetwork contains all the modules that share a biological function. We next focused our attention in the DNA repair subnetwork and in 15 associated genes that had been never related to this function. To know if these BC candidate genes are indeed regulating DNA repair, we carried out clonogenic assays and foci formation assays. Overall, six genes showed a relationship to cell survival after DNA damage, illustrating the power of our approach to generate novel mechanistic hypothesis. In the second part of the thesis we took into account functional redundancy and pathway crosstalk to predict novel drug targets and drug combinations for breast cancer. We predicted novel putative drug targets that resembled not only the functional but also the topological characteristics of known breast cancer targets. Eight candidate drug targets were experimentally tested by MTT assays and, interestingly, the inhibition of four out of the eight targets tested yielded a clear and consistent effect in the survival of breast cancer cells, while other two were slightly inhibiting the grow of some subtypes of BC cells. Next, we wanted to evaluate the applicability of the crosstalk inhibition metric for inferring novel breast cancer drug combinations. Overall, we predicted hundreds of promising novel drug-drug or novel target-drug combinations that either exceeded the crosstalk inhibition threshold of approved drug combinations or showed a synergistic/additive behavior. We carried out MTT assays to test a selected subset of 10 drug-drug combinations and 13 novel target-drug combinations. Overall, the detailed percentages of the results obtained were (1) 44% of drug combinations were synergistic (DCI50 ≤ 0.85), (2) 39% were of additive nature (0.85 < DCI50 ≤ 1.2) and (3) 17% were antagonistic (DCI50 > 1.2). In conclusion, the strategies presented in this thesis offer a global perspective to explore the molecular mechanisms underlying complex disease beyond individual genes and proteins, and can be easily applied to other cancer types and complex diseases. / En este proyecto, caracterizamos sistemáticamente nuevas interacciones entre genes causantes y genes asociados a los cánceres de mama y colorrectal, con el objetivo de dar a conocer los mecanismos moleculares implicados en la biología del tumor. En total, presentamos 599 y 622 nuevas interacciones relacionadas con el cáncer de mama y colorrectal, respectivamente. A continuación, contextualizamos las interacciones descubiertas integrándolas con todos los datos de interacción disponibles en la literatura, construyendo el interactoma más completo asociado a cáncer de mama. Por último, ofrecemos validaciones iniciales sobre la alteración de la respuesta al daño del ADN como consecuencia de interacciones específicas, lo que sugiere nuevos roles de RFN20 y FAM84B, entre otros, como potenciadores de los mecanismos de reparación del ADN. En el segundo capítulo de la tesis precedimos nuevas dianas terapéuticas para el cáncer de mama basándonos en su similitud funcional y topológica con dianas de fármacos ya aprobados. A continuación medimos la redundancia y el solapamiento de vías o rutas de señalización con el fin de predecir nuevas combinaciones de fármacos para el cáncer de mama. Por último, realizamos una validación inicial y comprobamos que, por un lado, la inhibición de seis de las ocho dianas produce una disminución de la supervivencia de las células del cáncer de mama. Por otra parte, un 44% de las 23 nuevas combinaciones predichas interactúan de manera sinérgica entre sí. En conclusión, las estrategias presentadas en esta tesis ofrecen una perspectiva global para explorar los mecanismos moleculares que subyacen en enfermedades complejas, más allá del estudio de genes individuales.

Objetivos: Los objetivos principales del estudio fueron: 1) Estudiar la estabilidad fisicoquímica, en condiciones de uso, de cuatro mezclas estandarizadas triple intratecales (TIT) de metotrexato, citarabina e hidrocortisona conservadas a temperatura ambiente y en refrigeración. 2) Evaluar la toxicidad de la administración de tratamiento triple intratecal estandarizado como profilaxis y tratamiento de la enfermedad leptomeníngea en pacientes adultos y pediátricos. Metodología: La estabilidad química de la muestra se midió por triplicado mediante cromatografía líquida de alta eficacia a las 0, 3, 6, 12 y 24 horas y 2, 4, 5, 6 y 7 días de las mezclas conservadas a temperatura ambiente y bajo refrigeración, se determinó también a esos tiempo el pH y la osmolaridad de las mezclas. La concentración de fármacos a tiempo 0 se definió como el 100% y se consideró que los fármacos eran estables químicamente si la concentración era igual o mayor al 90% de la inicial. Los valores de pH y osmolaridad aceptados como válidos fueron cercanos al rango fisiológico del líquido cefalorraquídeo, considerándose las mezclas triple intratecales estables si el rango de pH y osmolaridad era de 7–7,5 y de 280–310 mOsm/kg, respectivamente. La evaluación de la toxicidad se realizó de forma prospectiva en todos los pacientes adultos y pediátricos a los que se les administró quimioterapia TIT estandarizada para el tratamiento o la profilaxis de la enfermedad leptomeníngea en el Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca desde el 1 de enero de 2013 hasta el 31 de Julio de 2014 (18 meses). Se realizó un seguimiento de todos los pacientes desde la administración de la primera TIT del estudio hasta el 31 de Julio de 2014, excepto exitus. Los eventos adversos fueron detectados por el médico responsable del paciente y registrados por el investigador principal. La definición y gradación de los eventos adversos se realizó según la escala CTCAE v.4.0. Conclusiones: 1) Las concentraciones de metotrexato sódico, citarabina e hidrocortisona fosfato sódico de las cuatro mezclas triple intratecales estandarizadas, conservadas a 25ºC y 2-8ºC no variaron más del 10% respecto a las concentraciones iniciales a ninguno de los tiempos de medida, considerándose estables químicamente durante, al menos, 7 días. La osmolaridad de las mezclas se mantuvo durante los 7 días de estudio, mientras que el pH se situó dentro de rango de estudio durante 5-7 días en las mezclas refrigeradas y 48-96 horas en las conservadas a temperatura ambiente, en función de la mezcla. 2) En los pacientes pediátricos, se ha observado toxicidad en el 56,1% de los pacientes y el 16,7% de las administraciones y en los pacientes adultos se ha observado toxicidad en el 70% de los pacientes y el 39,3% de las administraciones. La toxicidad mayoritaria en los pacientes pediátricos fue la emesis, seguida de cefalea y dolor lumbar y en los adultos la cefalea, seguido de la emesis y la aparición de vértigos. La mayoría de los eventos adversos detectados durante el periodo de estudio, en la población global, fueron de grado 1-2. La frecuencia de aparición de toxicidad grado 3 fue del 4,9% en pacientes pediátricos y 3,2% en adultos. No se detectaron reacciones adversas de grado 4-5. / The main objectives of the study were: 1) Study the physicochemical stability of four standard triple intrathecal (TIT) mixtures of methotrexate, cytarabine and hydrocortisone stored at room temperature and refrigerated. 2) Evaluate the toxicity of intrathecal administration of standard triple therapy for prophylaxis and treatment of leptomeningeal disease in adults and pediatric patients. Methodology: The chemical stability of the sample was measured in triplicate by high-performance liquid chromatography at 0, 3, 6, 12 and 24 hours and 2, 4, 5, 6 and 7 days preserving the samples at room temperature and under refrigeration, pH and osmolarity of the mixtures were also determined at such time. The drug concentration at time 0 was defined as 100% and the drugs were considered chemically stable if the concentration was equal or greater than 90% of the initial. The pH and osmolarity were accepted as valid close to the physiological range of cerebrospinal fluid, considered stable triple mixtures intrathecal if the range of pH and osmolality was 7-7,5 and 280-310 mOsm/ kg, respectively. The toxicity evaluation was performed prospectively in all adult and pediatric patients who were administered chemotherapy TIT standardized for the treatment or prophylaxis of leptomeningeal disease at the University Arrixaca Hospital from 1st of January 2013 to 31st of July 2014 (18 months). The monitoring of all patients was performed from the administration of the first TIT study until 31st of July 2014, except for death. Adverse events were detected by the attending physician and recorded by the principal investigator. The definition and grading of adverse events was performed according to CTCAE v.4.0 scale. Conclusions: 1) The concentrations of sodium methotrexate, cytarabine and hydrocortisone sodium phosphate of the four triple intrathecal standardized mixtures, preserved at 25 ° C and 2-8ºC did not vary more than 10% compared to the initial concentrations any of the measured times, considering chemically stable for at least 7 days. Osmolarity mixtures remained during the 7 day of the study, while the pH was within range study for 5-7 days in refrigerated mixtures and 48-96 hours in room temperature ones, depending on the mixture. 2) In pediatric patients, toxicity has been observed in 56,1% of patients and 16,7% of administrations while in adult patients toxicity has been observed in 70% of patients and 39,3 % of administrations. The major toxicity in pediatric patients was emesis, followed by headache and low back pain and in adults was headache, followed by the appearance of emesis and dizziness. Most adverse events detected during the study period, in the overall population, were grade 1-2. The frequency of grade 3 toxicity was 4.9% in pediatric patients and 3.2% in adults. No grade 4-5 adverse reactions were detected.

La hipótesis del ganglio centinela formula que la diseminación de los tumores sólidos a través del sistema linfático no se produce al azar, sino que sigue un orden o patrón, específico para cada individuo. Si somos capaces de detectar cuál es el primer ganglio receptor, podremos biopsiarlo selectivamente sin tener que llevar a cabo la linfadenectomía regional completa, ya que éste es el ganglio con las máximas probabilidades de albergar una metástasis inicial y, si es negativo, también lo serán el resto de ganglios. El concepto fue propuesto formalmente por R. Cabañas (Cancer 1977) en relación al cáncer de pene. En 1992, D. Morton, cirujano de Santa Mónica, California, aplicó el mismo concepto a la diseminación linfática del melanoma cutáneo y utilizó colorantes quirúrgicos Arch Surg 1992). En 1993 Alex y Krag introdujeron el uso de coloides de tecnecio y de una sonda detectora (Surg Oncol 1993). Giuliano, publicó una primera serie en pacientes con cáncer de mama (Ann Surg 1994). El propio Giuliano describió la posibilidad de re-estadificar gracias a la detección de una frecuencia considerable de micrometátasis en el ganglio centinela (Ann Surg 1995).HIPÓTESIS: El Ganglio Centinela predice con eficacia el estado de diseminación linfática regional en pacientes con cáncer de mama y, por tanto, su biopsia selectiva puede usarse para ahorrar el vaciado axilar. Además, la técnica permite mejorar la estadificación por reconversión N0 a N1. OBJETIVOS: 1. Comprobar la aplicabilidad de la biopsia del ganglio centinela en Nuestro medio. 2.Plantear la biopsia del ganglio centinela como alternativa a la linfadenectomía axilar convencional 3. Constatar la mejora de la estadificaciónPOBLACIÓN Y MÉTODOS: se estudiaron 132 pacientes, con edades entre 32 y 86 años (media 60,3).El 26,5% era lesiones no palpables y en el 58% se hizo cirugía conservadora. En estas pacientes se llevó a cabo la biopsia del ganglio centinela mediante la inyección peritumoral de coloides de tecnecio-gelatina, de 2 a 18 horas antes de la intervención. Se realizó linfogammagrafía prequirúrgica, en la que se identificó el ganglio centinela y se marcó el acceso cutáneo directo. Se practicó el vaciado axilar completo .Se calcularon los valores de verdaderos positivos (VP), verdaderos negativos (VN) y falsos negativos (FN) y los parámetros de sensibilidad (S) y valor predictivo negativo (VPN). Se calcularon los intervalos de confianza del 95% para estas proporciones (Diamon Am J Cardiol 1989). Además se llevó a cabo un meta-análisis de acuerdo con las recomendaciones de Irwing (Ann Intern Med 1994).RESULTADOS: Se biopsiaron 2,0"1,4 ganglios centinela por paciente y 12,6 " 5,1en el resto del vaciado axilar. La tasa de detección del ganglio centinela fue del 96,2%. La localización de los ganglios centinela fue: 73% nivel I, 21% mamaria interna, 6% otros. Se observaron 48 VP, 77VN y 2 FN. La S fue del 96% (IC 85-99) y el VPN del 97,3% (IC 94 -100). Hubo 7 casos de restadificación. En el meta-análisis se identificaron 18 series de más de 50 pacientes, a las que se añadió la nuestra. Se aplicó el modelo de "pooled data analysis"; con 2.569 pacientes, la S fue del 91% (IC 89 - 93). El área bajo la curva SROC fue 0,9967.CONCLUSIONES: La hipótesis del Ganglio Centinela es válida en pacientes con cáncer de mama; la biopsia del ganglio centinela es predictora de la diseminación linfática. Tomando el vaciado axilar como estándar de referencia, los resultados indican un alto rendimiento diagnóstico. La biopsia del Ganglio Centinela comporta una marcada "Curva de Aprendizaje"y un proceso de validación local. No debe abandonarse la práctica del vaciado axilar convencional en tanto no se cumplan estos requisitos. La Biopsia del Ganglio Centinela constituye un método superior de estadificaciónen pacientes con cáncer de mama, abriendo la posibilidad de llegar a una verdadera microestadificación. / Under the sentinel lymph-node hypothesis, dissemination of tumors through the lymphatic system does not happen randomly, but rather it is an orderly process that is given by a specific pattern of progression for each subject. The sentinel node is the regional lymph-node with the highest probability of harbouring an initial mestastasis. If we detect the first draining node, then it can be selectively excised without the need for a complete lymph node dissection. The sentinel node concept was formally proposed by R. Cabañas (Cancer 1977). In 1992, D. Morton took this concept to the field of the lymphatic spread of cutaneous melanoma, and used for first time a blue dye during surgery for that purpose (Arch Surg 1992). The use of technetium-colloids associated with a surgical gamma probe was introduced by Alex and Krag in 1993 (Surg Oncol 1993). Giuliano, reported the first impact series of sentinel node biopsy in breast cancer patients (Ann Surg 1994). Again, Giuliano stressed the upstaging effect of the technique by an increased detection rate of micrometastases in the sentinel node (Ann Surg 1995).HYPOTHESIS: The sentinel node can effectively predict lymph-node status in breast cancer patiens, therefore sentinel node biopsy can be used to spare axillary dissection. Furthermore, this technique affords a better staging by a significant Stage I-to-Stage II shift. OBJECTIVES: 1. To test the feasability of sentinel lymph-node biopsy in our own clinical setting. 2.To propose the sentinel node biopsy as an alternative to axillary dissection. 3 To show an increased staging power of the technique.PATIENTS AND METHODS: included were 132 patients, aged 32 to 86 years (mean 60,3 years) . 26,5% of them presented with non-palpable lesions. In 58% of the patients breast conserving surgery was performed. Sentinel node biopsy was done after peritumoral injection of technetium colloids, 2 to 18 hours before surgery. Presurgical lymphoscintigraphy was always performed. The sentinel node was then identified and a sking marking was done for a direct surgical access. The sentinel node was excised with the aid of a 14 mm gamma probe. A full axillary dissection then ensued .The following values were calculated: true positives (TP), true negatives (TN), and false negatives (FN), as well as sensitivity (S) and negative predictive value (NPV). 95% confidence intervals were also calculated (Diamon Am J Cardiol 1989). A meta-analysis of data reported in english-written literature was done according to the recommendations by Irwing (Ann Intern Med 1994).RESULTS: 2,0"1,4 sentinel nodes were harvested per patient, as well as 12,6 " 5,1 in the rest of the axillary dissection. Our sentinel node detection rate was 96,2%. Sentinel nodes were located as follows: 73% at level I, 21% at the internal mammary chain, 6% other. The following values were obtained: 48 TP, 77 TN and 2 FN. The S was 96% (CI 85-99) and the NPV 97,3% (CI 94 -100). There were 7 upstaged cases. In the meta-analysis, 18 series were identified containing more than 50 patients each, to which we added our own. A model of "pooled data analysis" was applied. With 2.569 patients, S was 91% (CI 89 - 93). The area under the SROC curve was 0,9967. CONCLUSIONS: The sentinel node hypothesis applies in breast cancer patients. Sentinel node biopsy is predictive of the lymph-node status. Taking the axillary dissection as the gold standard, our results show a high diagnostic performance of the technique. Sentinel node biopsy is associated with a considerable "learning curve" and needs a local validation process. Axillary dissection must not be abandoned before such goals have been achieved at the local level. Sentinel node biopsy is a superior method for staging in early breast cancer patients, and leads the way for the true patient microstaging

El melanoma cutani humà és un dels càncers més agressius i mortals que existeixen un coparribada la fase de metàstasi. Actualment, s'intenta establir teràpies novedoses que tenen com a diana antígens associats a la progressió del melanoma maligne. Un d'aquests antígens és laintegrina alpha-v beta 3, molt expressada en el melanoma cutani i considerada com una diana preferent.En aquesta tesi doctoral es van utilitzar dos antagonistes de la integrina alpha-v beta 3 per a la caracterització del seu funcionament in vitro en cèl·lules de melanoma humà: un anticòsmonoclonal contra la subunitat alpha-, el mAb 17E6 desenvolupat pel Laboratori deBioinvestigació, Merck Farma y Química S.A (Barcelona,Espanya) i el pentapèptid cíclic Arggly-Asp-D-Phe-MeVal o cyclo-RGDfVMet, desenvolupat en Merck KgaA (Darmstad, Alemanya).Prèviament a l'inici d'aquest estudi s'havia caracteritzat la seva afinitat per les diferentsintegrines alpha-v, la seva capacitat de bloquejar l'adhesió mitjançada per aquestes integrines dediferents línies de melanoma i carcinoma i la de reduir la mida de tumors in vivo. El presentestudi intenta comprovar si aquests antagonistes també tenen la capacitat d'induir ladesadhesió de les cèl·lules de melanoma humà un cop formades les unions cèl·lula-matriuextracel·lular (ECM) i determinar quins mecanismes estarien implicats.Els resultats obtinguts van demostrar que tant el mAb 17E6 com el pèptid cRGDfVMet induïen ladesadhesió de les cèl·lules de melanoma humà sobre una matriu de vitronectina (VN), en unprocés dosi- i temperatura dependent en el que també estan implicats la senyalitzacióintracel·lular mitjançada per calci i el citoesquelet d'actina. A més, la desestabilització de la unió alpha-v beta 3-VN induïda pels antagonistes provocava la deslocalització de la integrina ?v?3 de lesadhesions focals (FAs) i la seva redistribució a la membrana cel·lular. L'acció dels antagonistestambé induïa el desengalzament de les FAs i la conseqüent de deslocalització les proteïnesque les formen així com del citoesquelet d'actina.En el darrer apartat d'aquesta tesi doctoral es van caracteritzar els processos mitjançant elsquals aquests dos antagonistes podien ser internalitzats per les cèl·lules de melanoma. Així, els resultats obtinguts indicaven que mentre que el pèptid cRGDfVMet era endocitat de manera no específica i independent de la integrina alpha-v beta 3 per les cèl·lules de melanoma, el mAb 17E6 seguia una internalització mitjançada per receptor internalitzant-se conjuntament amb la integrina alpha-v beta 3.Conseqüentment, el mAb 17E6 però no el pèptid cRGDfVMet, redueix el número d'integrinesalpha-v beta 3 funcionals a la superfície de les cèl·lules de melanoma, ja que s'uneix de manera estable a la subunitat alpha-v i internalitza l'heterodímer.

Se realiza el análisis de la producción científica a través de la revista Rehabilitación durante el periodo comprendido entre 1967 y diciembre de 1995.

Las células malignas deben adquirir un potencial de replicación ilimitado (inmortalidad celular) para la formación de tumores avanzados. La adquisición de inmortalidad celular depende de la reactivación de la telomerasa, una enzima que permite compensar el problema de replicación terminal del ADN asociado a cada división celular. En una serie de estudios presentados en esta tesis, se demuestra:1. La telomerasa es una enzima regulable en células tumorales humanas.2. Los tumores humanos expresan actividad telomerasa y su expresión se asocia a estadío tumoral, índice proliferativo y diferenciación3. La telomerasa es una diana antitumoral atractiva. / Malignant cells have to acquire a limitless replicative potential (immortality) to be able to form an advanced tumor. The acquisition of cellular imortality is linked to the reactivation of telomerase, an enzyme that has the potential to overcome the DNA end replication problem that occurs during each round of cell división. In a series of studies presented in this thesis, it has been shown:1. Telomerase is a regulable enzyme in human tumor cells.2. Human tumors express telomerase activity and this expresión is asóciate to tumor stage, proliferative index and maturation.3. Telomerase is an attractive anticancer targe._

El tabaquismo es la principal causa de morbimortalidad evitable en todo el mundo desarrollado y en los países en vías de desarrollo, y constituye una verdadera epidemia de nuestro tiempo (Warner, 1993). Tanto en Europa, como en otras partes del mundo, desde hace tiempo se vienen llevando a cabo programas de lucha antitabáquica, con el objetivo de reducir la prevalencia de éste hábito y disminuir sus consecuencias sobre la salud de la población.El presente estudio trata de describir la incidencia de abstinencia continuada a largo plazo de una cohorte de pacientes seguida durante un año y evaluar qué factores están asociados a la recaída. Se ha estructurado en dos partes fundamentales. Una primera parte donde se describe la epidemiología del tabaquismo y sus características junto con la metodología utilizada en la realización del estudio y la segunda, donde se describen los hallazgos y se discuten en relación a estudios precedentes.A pesar de que se trata de un estudio de base hospitalaria, dada la extensa serie estudiada durante este período, la identificación de los principales factores que pueden influir en la probabilidad de recaída de un fumador que deja el hábito justifica el esfuerzo realizado ya que de esta forma se contribuye a mejorar la salud general de la población.