El presente trabajo de investigación se enfoca en un tema muy empleado en marketing como es el posicionamiento de producto o marca, así como la importancia del uso de estrategias idóneas para conseguir el posicionamiento esperado. El caso relata la historia de dos amigos y colegas de trabajo, Hans Wilson y Jorge Borges, con años de experiencia en el sector de banano en el área de investigación y desarrollo en la empresa Frutidol, se encargaban de buscar soluciones contra los reclamos de calidad; en esa búsqueda encontraron un producto flexible y de consistencia plástica llamado Protexfilm, usado en la industria farmacéutica y de laboratorio para proteger el instrumental de vidrio y su contenido de las sustancias externas del medio ambiente; llevándolo luego de un periodo de prueba a ser usado en la industria del banano para la protección de las coronas del fruto y evitar que tengan contacto con el oxígeno del medio ambiente, evitando de esta manera que el banano se madure prematuramente o se pudra por la acción de hongos y bacterias. Por muchos años Protexfilm fue la única alternativa de solución para esos casos; sin embargo ante la falta de un adecuado trabajo de posicionamiento por parte de Frutidol, los clientes no lo reconocían por su nombre comercial sino lo llamaban “Plastidol”, ello en relación a su consistencia plástica y el nombre de la empresa que lo comercializaba. Después de una serie de cambios en Frutidol, Hans y Jorge son cesados de sus cargos, por lo que deciden formar la empresa Frutorgánica e iniciar el reto de encontrar un sustituto ideal a Protexfilm, que sea exclusivo para uso en protección de corona de banano orgánico y que brinde además mejores ventajas y beneficios que el producto innovador. Después de años de búsqueda, investigación y desarrollo consiguen diseñar y lanzar al mercado un producto llamado Paraseal, con una serie de ventajas y beneficios superiores a la competencia, sobre todo en seguridad, rendimiento y precio; además de ser el único con certificaciones internacionales para uso en productos orgánicos. El caso se centra en el análisis de la empresa Frutorgánica y el problema inesperado relacionado al posicionamiento de Paraseal en el mercado peruano, ya que tampoco era reconocido por su nombre comercial siendo llamado por clientes y usuarios como “el nuevo plastidol”. Ante esos sucesos Hans y Jorge se ven en la necesidad de rediseñar las estrategias de marketing con el objetivo de conseguir el posicionamiento esperado con Paraseal, que permita a su vez cumplir con los objetivos planteados por la empresa. / This research work focuses on a topic very used in marketing such as the positioning of a product or brand, as well as the importance of using appropriate strategies to achieve the expected positioning. The case tells the story of two friends and coworkers, Hans Wilson and Jorge Borges, with years of experience in the banana sector in the area of research and development in the company Frutidole, where they were responsible of finding solutions against quality complaints ; during that search they found a flexible and plastic consistency product called Protexfilm, which was used in the pharmaceutical and laboratory industry to protect glassware and its contents from external substances in the environment; taking it after a trial period to be used in the banana industry for the protection of the crowns of the fruit and avoid having contact with the oxygen of the environment, thus preventing the banana from ripening prematurely or rotting by the action of fungi and bacteria. For many years Protexfilm was the only alternative solution for those cases; However, in the absence of adequate positioning work by Frutidole, customers did not recognize it by its commercial name but called it "Plastidol", in relation to its plastic consistency and the name of the company that sold it. After a series of changes in Frutidole Hans and Jorge are dismissed from their positions, so they decide to start the company Frutorgánica and initiate the challenge of finding an ideal substitute to Protexfilm, which is exclusive for use in crown protection of organic bananas and that also offers better advantages and benefits than the innovative product. After years of research, research and development, they manage to design and launch a product called Paraseal, with a series of advantages and benefits superior to the competition, above all in safety, performance and price; besides being the only one with international certifications for use in organic products. The case focuses on the analysis of the company Frutogánica and the unexpected problem related to the positioning of Paraseal in the Peruvian market, since it was not recognized by its commercial name being called by customers and users as "the new plastidol". Faced with these events Hans and Jorge are in need of redesign new marketing strategies, in order to achieve the expected positioning with Paraseal, which in turn allows to meet the objectives set by the company.

Esta es una investigación de alcance descriptivo y explicativo, que tiene como objetivo identificar si las empresas de la industria del plástico en el Perú con Sistema de Gestión de Calidad (SGC) tienen un mayor nivel de calidad comparado con aquellas que no tienen un SGC. Para ello se diseñó un estudio de enfoque cuantitativo, aplicando el cuestionario TQM, diseñado por Benzaquen (2013, 2014), a una muestra de 52 empresas, a partir de una población de 93 empresas, lo cual implica un error estadístico del 11.55%. Una vez que los datos fueron recopilados, se tabularon y analizaron utilizando el software estadístico SPSS, encontrándose que los resultados son altamente confiables. Es así que se probó la hipótesis y se concluyó que sí existen diferencias estadísticamente significativas entre las empresas que cuentan con un SGC y aquellas que no lo han implantado. A nivel de los nueve factores de la calidad, se tiene que esta diferencia existe en los siguientes factores: (a) alta gerencia, (b) planeamiento de la calidad, (c) auditoría y evaluación de la calidad, (d) control y mejoramiento de procesos, (e) educación y entrenamiento, (f) círculos de calidad, y (g) enfoque hacia la satisfacción del cliente. Pero en los factores de la calidad: Diseño del producto y gestión de la calidad del proveedor, se encontró que la diferencia no era estadísticamente significativa. Sin embargo, en los nueve factores del TQM el valor promedio siempre fue mayor para las empresas con SGC, por lo que se recomienda su implementación en toda la industria, recordando que esto permite satisfacer los requerimientos de los clientes, siendo eficientes en el uso de los recursos de las empresas. / This is a research with descriptive and explanatory scope, which aims to identify if companies in the plastics industry in Peru with the Quality Management System (QMS) have a higher level of quality compared to those without a QMS . In order to complete this study, researchers used the TQM questionnaire designed by Benzaquen (2013, 2014), which belongs a quantitative approach, and was applied to a sample of 52 companies, from a total population of 93 companies, involving a statistical error of 11.55%, that is considered correct for a study like this one. Once the data was collected, it was tabulated and analyzed using SPSS statistical software, finding that the results are highly reliable. Thus, the hypothesis was tested and it was concluded that there are significant differences between companies with a QMS and those that have not implemented this kind of sytems. At the level of the nine quality factors, this difference is present in the following factors: (a) senior management, (b) quality planning, (c) audit and quality assessment, (d) control and process improvement, (e) education and training, (f) quality circles, and (g) approach to customer satisfaction. But the quality factors: Product design and quality management of the supplier, it was found that the difference was not statistically significant. However, in the nine factors of TQM the average value was always higher for companies with SGC. So its implementation is recommended throughout the industry, noting that it can help to satisfy customer’s requirements, while companies are highly efficient in the use of their resources.

En la ciudad Lima, Perú, enfrenta un importante desafío ambiental debido a la generación diaria de 886 toneladas de residuos plásticos, que representa el 46% del total nacional. Estos residuos son desechados en botaderos informales, ríos y playas, causando un grave impacto negativo en la salud, la fauna, la flora y el medio ambiente en general. No obstante, la falta de una industria sólida en el manejo de residuos plásticos dificulta la implementación de soluciones a gran escala. A pesar de contar con algunos puntos de reciclaje y plantas de tratamiento, estas iniciativas son aún incipientes. No han logrado fomentar una cultura nacional de reciclaje, lo que se refleja en el bajo porcentaje del 1.9% de residuos sólidos reciclados. Contribuyendo al aumento de la contaminación. Para abordar esta problemática, se propone una innovadora idea de negocio enfocada en la producción y comercialización de útiles de escritorios ecológicos, fabricados con materiales reciclados como cartones y papeles. Esta iniciativa está dirigida a personas de 18 a 50 años, incluidos empleados de oficina, estudiantes de institutos y universidades, y personas que adoptan prácticas ecológicas, pertenecientes a los segmentos socioeconómicos de clase media y alta. El objetivo es fomentar el uso de productos sostenibles y reducir la dependencia de plásticos convencional. El objetivo principal es contribuir al logro del Objetivo de Desarrollo Sostenible (ODS) número 11.6 y 12.5, que busca reducir el impacto ambiental negativo per cápita de las ciudades y mejorar la gestión de desechos municipales. Al promover el uso de materiales reciclados en la fabricación de productos de escritorios, se busca reducir significativamente la cantidad de plástico desechado. Esto, a su vez, contribuye a disminuir la contaminación generada por estos residuos. / The daily generation of 886 tons of plastic waste in Lima, Peru, accounting for 46% of the national total, poses a significant environmental concern. Improper disposal of these waste materials in informal dumpsites, rivers, and beaches has led to adverse impacts on public health, wildlife, flora, and the overall environment. The lack of a well-developed plastic waste management industry hinders large-scale innovation. Despite the presence of some recycling points and treatment facilities, these initiatives remain in their infancy and have failed to cultivate a nationwide recycling culture. The minimal 1.9% recycling rate of solid waste has contributed to escalating pollution levels. In response to this challenge, a business concept emerges: the production and sale of eco- friendly office supplies manufactured from recycled materials, specifically using discarded cardboard and papers. The initiative is aimed at people aged 18 to 50, including office workers, institute and university students, and individuals who adopt eco-friendly practices, belonging to the middle and upper socioeconomic segments, with the goal of promoting the use of sustainable products. The main objective is to contribute to the achievement a Sustainable Development Goal 11.6 & 12.5, which aim to reduce the per capita environmental impact of cities and improve municipal waste management. By promoting the use of recycled materials in the manufacturing of desk products, the goal is to significantly reduce the amount of discarded plastic and, consequently, decrease the pollution generated by these wastes. This thesis presents a concrete solution to address Lima's pollution, while also fostering a recycling culture within educational institutions. It is envisioned that this initiative could serve as a model for other cities, ultimately contributing to more sustainable solid waste management practices nationwide.

El mundo empresarial hoy en día no solo busca generar ingresos económicos, el bienestar del personal, la calidad de sus productos y/o servicios; sino que también se está dando mucho énfasis en el cuidado del medio ambiente sobre todo por el gran impacto negativo que genera la contaminación de residuos plásticos y ciclo limitado de reutilización. El sector minero es partícipe activo de la búsqueda de una correcta segregación y reciclaje de sus residuos generados en sus empresas por lo que buscan reducir su huella de carbono reutilizando sus residuos plásticos como una alternativa a este objetivo a alcanzar. La propuesta de solución planteada es generar fibra sintética fabricada a base de residuos plásticos obtenidos de las minas, empresas recicladoras, personas recicladoras, municipalidades y zonas residenciales. De esta manera se contribuirá a la reducción de residuos plásticos dándole un nuevo uso final que servirá como un insumo para la preparación del concreto lanzado en unidades mineras subterráneas. El modelo de negocio propuesto cuenta con viabilidad y factibilidad desde el punto de vista económico, social y técnico ya que se realizó consultas a profesionales expertos en el tema quienes dieron su opinión positiva a esta iniciativa de negocio al ser enfocada en el cuidado del medio ambiente y en la mejora de la calidad y seguridad en el proceso de lanzado de concreto en mineras subterráneas. El modelo de negocio propuesto estima alcanzar en cinco años un VAN de S/ 6’182,085.78, un VANS de S/ 1’127,512.32 y un IRS de 18.60%, por lo cual la implementación de este negocio será rentable económicamente y sobre todo se impactará de forma positiva en el cuidado del medio ambiente mediante la cultura de reducir, reciclar y reutilizar. / The business world today not only seeks to generate economic income, the well-being of staff, the quality of their products and/or services; but there is also a lot of emphasis being placed on caring for the environment, especially due to the big negative impact generated by plastic waste pollution and a limited reuse cycle. The mining industry is an active participant in the search for correct segregation and recycling of the waste generated in their companies, which is why they seek to reduce their carbon footprint by reusing their plastic waste as an alternative to this objective to be achieved. The proposed solution is to generate synthetic fiber made from plastic waste obtained from mines, recycling companies, people dedicated to recycling, municipalities and residential areas. In this way, it will contribute to the reduction of plastic waste by giving it a new final use that will serve as an input for the preparation of shotcrete in underground mining. The proposed business model has viability and feasibility from an economic, social and technical point of view since consultations were carried out with expert professionals on the subject who gave their positive opinion to this business initiative as it is focused on caring for the environment and in improving quality and safety in the shotcrete process in underground mines. The proposed business model estimates reaching a VAN of S/ 6”182,085.78 in five years, a VANS of S/ 1’127,512.32 and an IRS of 18.60% , so the implementation of this business will be economically profitable and, above all, it will have a positive impact on the care of the environment through the culture of reducing, recycling and reusing.

El alto número de productos defectuosos ha sido condición suficiente para proyectar una situación de mejora buscando su reducción, la cual impacta directamente en el proceso de producción de una empresa de plásticos dedicada a la fabricación de envases para los diferentes sectores de la industria. Diferentes indicadores guiaron el desarrollo del presente trabajo, siendo el de ‘defectuosidad en remolido’ el más ácido, llegando a alcanzar aproximadamente el 20% del total de material remolido en la línea de soplado. Este material es un remanente del proceso productivo obtenido luego de la extrusión de la materia prima en las máquinas de soplado; sin embargo, al tener que ‘moler’ a causa de envases fallados deja de ser parte natural del proceso y representa una pérdida de tiempo, recursos y un sobrecosto. Debido a esto se propuso disminuir la situación actual al 5%. Las metodologías utilizadas fueron el ciclo de Deming o PDCA y las 5S. La empresa estudiada no había desarrollado proyectos bajo estos métodos, por lo cual fue necesario que personas capacitadas guiaran y acompañaran el despliegue funcional de cada una de ellas. Asimismo, algunas de las herramientas asociadas a cada fase o etapa fueron el Diagrama de Pareto, Diagrama Causa Efecto, SIPOC, DOE, Polivalencia, etc. Luego de las mejoras implementadas, se recogieron los datos y se evidenció la efectividad de la propuesta, la cual incluso superaba la meta establecida del 5% para el indicador de defectuosidad en remolido. Posteriormente se llevó a cabo la evaluación económica del planteamiento obteniendo resultados que avalaban la realización del proyecto. A continuación, el texto detalla la secuencia utilizada para lograr la reducción de productos defectuosos. / The high number of defective products has been a sufficient condition to project an improvement situation seeking its reduction, which directly impacts the production process of a plastics company dedicated to the manufacture of packaging for the different sectors of the industry. Different indicators guided the development of the present work, being that of "mailfunction of grinding" the most acidic, reaching approximately 20% of the total ground material in the blowing line. This material is a remnant of the production process obtained after extrusion of the raw material in the blowing machines; However, having to "grind" a cause of failed packaging ceases to be a natural part of the process and represents a waste of time, resources and an extra cost. Due to this, it was proposed to reduce the current situation to 5%. The methodologies used were the Deming or PDCA cycle and the 5S. The company studied had not developed projects under these methods, so it was necessary for trained people to guide and accompany the functional deployment of each of them. Also, some of the tools associated with each phase or stage were the Pareto Diagram, Cause Effect Diagram, SIPOC, DOE, Polyvalence, etc. After the improvements implemented, the data was collected and the solution of the proposal was evidenced, which even exceeded the established 5% target for the malfunction indicator. Subsequently, the economic evaluation of the approach was carried out, obtaining results that supported the realization of the project. Then, the text details the sequence used to achieve the reduction of defective products. / Tesis

La presente investigación busca estudiar la gestión de riesgos en emprendimientos ambientales que utilizan la economía circular como diferencial o ventaja competitiva, a través de un caso de estudio específico nacional, Killa Vive Verde. Para alcanzar el objetivo de la investigación se desarrollaron cinco capítulos. En el primer capítulo, se presenta el tema a investigar con sus elementos principales: pregunta principal y preguntas secundarias de investigación, así como sus objetivos correspondientes. En el segundo capítulo, se desarrolla el marco teórico de la investigación, donde se presentan los tres ejes de la misma: en primer lugar, la economía circular y sus distintos elementos que generan ventajas competitivas a las empresas o emprendimientos, en segundo lugar, los emprendimientos ambientales y sus características de desarrollo y crecimiento, y, en tercer lugar, la gestión de riesgos y sus diferentes teorías de aplicación. En el tercer capítulo, se presenta el marco contextual del caso de estudio elegido. En esta sección se muestra el panorama del tema estudiado a nivel mundial, a nivel regional y a nivel de caso de estudio. Respecto a este último, se desarrollan las características y trayectoria específica de este emprendimiento para, posteriormente, ser analizado bajo diferentes elementos de la gestión de riesgos. En el cuarto capítulo, se presenta el marco metodológico de la investigación, las herramientas y métodos elegidos para el desarrollo de la secuencia de investigación diseñada. Asimismo, se presenta en esta sección los diferentes actores e involucrados que han participado de la recolección de información valiosa para entender y comprender los elementos alrededor del caso de estudio que afecten directa o indirectamente en su desarrollo. Por último, se presentan las limitaciones que tuvo la investigación a causa de la pandemia COVID-19. Finalmente, el último capítulo presenta los hallazgos recolectados y estudiados según las diferentes etapas y secciones de investigación estudiadas. Posteriormente, se indican las conclusiones y recomendaciones que se plantearon para el caso de estudio con el fin de aportar a la generación de mejoras prácticas internas para el aprovechamiento de las oportunidades que se les están presentando y disminuir al máximo los riesgos negativos en afectación del emprendimiento.

Os plásticos são moléculas poliméricas de cadeia longa. O plástico é versátil, leve, flexível, resistente à umidade, forte e economicamente viavel. Essas qualidades atraentes levam a um consumo excessivo de bens plásticos. No entanto, eles são duráveis e muito dificeis de degradar pelo que os materiais plásticos que são usados na fabricação de tantos produtos se tornam resíduos com poder de permanência. Nossa tremenda atração pelo plástico, juntamente com uma propensão inegável de consumir cada vez mais, descartar, jogar lixo e, assim, poluir, tornou-se uma combinação de natureza letal. A produção anual de plásticos duplicou nos últimos 15 anos, alcançando 245 milhões de toneladas, portanto, uma grande quantidade de plásticos é acumulada no meio ambiente gerando problemas ecológicos. O objetivo do presente estudo foi isolar bactérias de um aterro sanitário e de uma amostra de água contaminada com diesel com potencial para degradar o polietileno e outros plásticos, como o polivinil e o poliuretano. Essas bactérias foram isoladas em Ribeirão Preto, SP, utilizando filmes dos três tipos de plástico como fonte de carbono e meio mínimo de sais (MMS). Após a extração do DNA genômico foi utilizada a técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar o gene alkB e as bactérias que apresentaram esse gene foram identificadas e incubadas com os filmes dos plásticos (polietileno, poliuretano e policloreto de vinil) e o meio MMS (90mL) por 6 meses. Após a incubação foram realizadas as análises de perda de peso, dos espectros obtidos por Espectroscopia de Infravermelho com Transformada Fourier (EIVTF) e das micrografias obtidas por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) para avaliar a capacidade de biodegradação dos isolados. Foram realizados também testes de suscetibilidade antimicrobiana para conhecer o perfil de resistência dos isolados. Dois isolados bacterianos apresentaram o gene alkB e foram identificados como Paenibacillus sp. S5 e Bacillus cereus A1, respectivamente, utilizando o sequenciamento do gene 16S rDNA. Após o período de incubação foi detectada uma diferença significativa no peso final em relação ao peso inicial para os 3 tipos de plástico e também foram observadas alterações químicas pela EIVTF, como o aparecimento de novos grupos funcionais e rupturas de ligações, sendo essas alterações mais evidentes para os filmes de polietileno. Através da MEV foram visualizadas mudanças físicas, como formação de poros e fissuras, e colonização bacteriana na superfície plástica em todos os casos, especialmente nos filmes de polietileno. Os resultados mais promissores foram obtidos com o isolado Paenibacillus sp. S5, na biodegradação dos três plásticos testados. Esse isolado apresentou suscetibilidade a todos os antibióticos testados, exceto para amicacina e B. cereus A1 foi resistente a 7 dos 12 antibióticos testados. Portanto, as bactérias do presente estudo, especialmente o Paenibacillus sp. S5 podem ser utilizadas em processos de biodegradação para a eliminação de plásticos do meio ambiente. / Plastics are man-made long chain polymeric molecules. Plastic is versatile, lightweight, flexible, moisture resistant, strong, and relatively inexpensive. Those are the attractive qualities that lead us, around the world, to such a voracious appetite and over-consumption of plastic goods. However, durable and very slow to degrade, plastic materials that are used in the production of so many products all, ultimately, become waste with staying power. Our tremendous attraction to plastic, coupled with an undeniable behavioral propensity of increasingly over-consuming, discarding, littering and thus polluting, has become a combination of lethal nature. The annual production of plastics has doubled over the past 15 years to 245 million tons due to their great physical and chemical properties, thus a large amount of plastic gets accumulated in the environment generating plastic waste ecological problems. The purpose of this study was to isolate bacteria from a waste disposal area and also from diesel contaminated water with potential to degrade polyethylene and other plastics as polyvinyl and polyurethane. These bacteria were isolated in Ribeirão Preto, SP, Brazil using plastic discs as a carbon source and a minimal salt medium (MSM). After genomic DNA extraction, PCR reactions were performed to detect the alkB gene and bacteria that showed this gene were identified and incubated with plastic discs (polyethylene, polyurethane and polyvinyl chloride 5cm discs) and MSM (90mL) for 6 months. After incubation, lose weight measurement analysis, Fourier Transforms Infra-red (FT-IR) analysis, Scanning Electron Microscopy (SEM) analysis and antimicrobial susceptibility tests were performed to evaluate the biodegradation capacity and the resistance profile of the isolates. Five bacteria were isolated from soil however, only one showed the alkB gene. From water just one bacterium was isolated which presented the alkB gene. These bacteria were identified as Paenibacillus sp. S5 and Bacillus cereus A1 respectively using the 16S rDNA gene sequencing. A significant difference in final weight compared to initial weight was assessed for the 3 types of plastic in both cases. Chemical changes were observed by FTIR. The appearance of new functional groups and bond scissions were more evident for polyethylene films. SEM visualized physical changes, such as formation of pits and cracks, and bacterial colonization on the plastic surface in all cases especially for polyethylene films. Biodegradation experiments demonstrated the best results for Paenibacillus sp. S5 for the three plastics tested. Paenibacillus sp. S5 showed susceptibility to all antibiotics tested except to amikacin and B. cereus A1 was resistance to seven from 12 antibiotics tested. Hence these bacteria, especially Paenibacillus sp. S5 can be used for biodegradation process as a promising tool for the elimination of plastic from the environment

Burkholderia sacchari é uma nova espécie bacteriana do solo brasileiro que tem a capacidade de crescer em sacarose e acumular grânulos intracelulares de poliésteres pertencentes à família dos polihidroxiaIcanoatos (PHA). Quando cultivado em sacarose, o homopolímero poli-3¬hidroxibutirato é acumulado por esta bactéria, que é usado como um plástico biodegradável e biocompatível. Quando sacarose e ácido propiônico são fornecidos como fontes de carbono, as células de B. sacchari acumulam o copolímero poli-3-hidroxibutirato-co-3-hidroxivalerato (P3HB-co-3HV). Entretanto, uma pequena porcentagem do ácido propiônico fornecido é convertido a unidades 3HV devido à eficientes vias catabólicas que convertem este substrato preferencialmente a biomassa, CO2 e água, reduzindo portanto a eficiência da produção do polímero. Ao menos duas vias do catabolismo de propionato foram previamente propostas em B. sacchari: a-oxidação e ciclo do 2-metilcitrato (2MCC), sendo somente a última confilmada no nível molecular. Mutantes UV, obtidos anteriormente, foram incapazes de crescer em propionato (prp) e também apresentaram fenótipo afetado no crescimento em intermediários da a-oxidação. No presente trabalho, após uma busca em bibliotecas genômicas de B. sacchari, uma delas construída também no presente trabalho, três diferentes fragmentos de DNA presentes nos clones AI, PI e P2 foram capazes de restaurar o fenótipo prp+ aos mutantes. Experimentos quantitativos revelaram que AI somente restaurou parcialmente a conversão de propionato a unidades 3HV aos mutantes. PI foi capaz de restaurar a capacidade de crescimento em propionato, e em outros intermediários da a-oxidação, a um dos mutantes. Um DNA de 1.2 Kb, subfragmento de PI, ainda capaz de complementar mutantes prp, foi subclonado e seqüenciado, demonstrando similaridade a seqüências de DNA codificadoras de reguladores transcricionais do tipo LysR de várias bactérias, incluindo espécies de Bllrkholderia. Regiões adjacentes a LysR em diferentes genomas de Burkholderia são anotados como codificadores de acil-CoA desidrogenases, ao lado de proposta acil-CoA transferases/carnitina desidrogenases e de uma permease do facilitador maior da superfamília MFS-l. Após confirmação das mesmas regiões adjacentes em B. sacchari e também a sua específica deleção, será possível provar a presença da via do catabolismo de propionato indicada neste trabalho. / Burkholderia sacchari is a new bacterial species from brazilian soil, able to grow in sucrose, accumulating intracellular granules of polyester belonging to the polyhydroxyalkanoate family (PHA). When cultivated on sucrose, the homopolymer poly-3-hydroxybutyrate is accumulated by this bacterium, which is used as biodegradable and biocompatible plastic. When sucrose and propionic acid are supplied as carbon sources, B. sacchari cells accumulate the copolymer poly-3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate (P3HB-co-3HV). However, a small percentage ofthe propionic acid supplied is converted to 3HV units, because efficient catabolic pathways convert this substrate preferentially to biomass, CO2 and water, thus reducing the efficiency of polymer production. At least two propionate catabolic pathways have been previously indicated in B. sacchari: a-oxidation and the 2-methylcitric acid (2MCC), the latter confirmed at molecular leveI. UV mutants previously obtained were unable to grow in propionate (prp) and also showed the phenotype affected concerning grow on intermediates of propionate a-oxidation. In the present work, after a screening in B. sacchari genomic libraries, one ofthem constructed also in the present work, the prp + phenotype was restored to the mutants by three different DNA fragments harbored by dones A), PI and P2. Quantitative experiments revealed that AI restored only partially the quantitative conversion of propionate to 3HV units to the mutants. PI restored the ability to grow in propionate and in other intermediates of a-oxidation to one prp mutant. A DNA 1.2 Kb subfragment of PI, still able to complement prp mutants, was subcloned and sequenced, showing similarity to DNA sequences encoding to LysR-type transcriptional regulators of various bacteria, including BlIrkholderia species. Adjacent regions to LysR in different genomes of BlIrkholderia are annotated as encoding to acyl-CoA dehydrogenases, neighboring a predicted acyl-CoA transferases/carnitine dehydratase and a permease ofthe major facilitator superfamily MFS-1. After confirmation ofthe same adjacent regions in B. sacchari and also their especific deletion, it will be possible to prove the presence of the pathway indicated here in the catabolism of propionate.

Resíduos lignocelulósicos são substratos proeminentes para a produção sustentável de polihidroxialcanoatos (PHAs) e etanol. A xilose é um dos principais componentes da lignocelulose, mas o aproveitamento eficiente desse açúcar ainda representa uma barreira técnica. O objetivo desse trabalho foi obter linhagens bacterianas mais eficientes no consumo desse açúcar. Foi introduzido maior número de cópias dos genes do catabolismo (xylAB) e transporte (xylFGH) de xilose, nas linhagens Escherichia coli KO11, produtora de etanol, e Burkholderia sacchari LFM 101, produtora de poli-3-hidroxibutirato (PHB). Os recombinantes foram avaliados quanto ao consumo de xilose e produção na presença e ausência de glicose. Para B. sacchari LFM 101 essa estratégia não incrementou o consumo desse açúcar. Para E. coli KO11 xylAB reduziu o tempo de consumo de xilose e aumentou a produção final de etanol em 30%, mas esse efeito foi prejudicado pela repressão catabólica; enquanto xylFGH foi deletério ao reduzir para quase zero o crescimento e produção de etanol por essa linhagem. / Lignocellulosic residues are remarkable substrates for the sustainable production of polyhydroxyalkanoates (PHAs) and ethanol. Xylose is one of the most important lignocelullose component but its efficient utilization still represents a technical barrier. The aim of this work was to obtain bacterial strains more efficient in the xylose consumption. Multiple copies of the catabolism (xylAB) and transport (xylFGH) genes of xylose were introduced in the ethanol producer Escherichia coli KO11 strain and the poly-3-hydroxybutyrate (PHB) producer Burkholderia sacchari LFM 101. The recombinants strains were evaluated for their production and xylose consumption in the presence and absence of glucose. This strategy did not increase xylose consumption in B. sacchari strains. The xylAB gene improved xylose consumption and increased the ethanol production about 30% in E. coli KO11, but this effect was impaired by catabolite repression; while xylFGH gene was deleterious to reduce the growth and ethanol production by this strain.

O objetivo desse trabalho foi descobrir melhores estratégias de controle de perdas em silagens de cana-de-açúcar, utilizando combinações de aditivos químicos e microbianos ou estratégias de vedações. No primeiro experimento o intuito foi estudar estratégias de controle de clostrídios em silagens de cana-de-açúcar aditivadas com cal virgem. Os tratamentos foram: 1) controle; 2) 1,5% cal virgem (Cal); 3) 1,5% cal virgem + 5×105 ufc/g Lactobacillus plantarum Ma 18/5U (Cal+LP); 4) 1.5% cal virgem + 5×105 ufc/g Lactobacillus buchneri 40788 (Cal+LB); 5) 1,5% cal virgem + 0,07% nitrito de sódio (Cal+Nitrito); 6) 1,5% cal virgem + 0,15% benzoato de sódio (Cal+Benzoato). Como silos experimentais foram utilizados baldes plásticos com capacidade de 20 L. A cal não foi eficiente em diminuir perdas em relação ao controle (20,6% e 19,1%, respectivamente) já as combinações cal+Benzoato, cal+Nitrito, cal+LB e cal+LP, diminuíram perdas, apresentando os valores de 11,2%, 14,1%, 14,1% e 13,9%, respectivamente. A estabilidade aeróbia das silagens tratadas com cal (172 h), cal+Benzoato (155 h) e cal+Nitrito (223 h), foram maiores em comparação às tratadas com cal+LB (49 h), cal+LP (48,4 h) e controle (51,9 h). A silagem controle apresentou menores contagens de clostrídios (3,26 log ufc/g) e os tratamentos Cal e Cal+LB apresentaram as contagens mais altas (6,74 log ufc/g e 5,96 log ufc/g, respectivamente), enquanto Cal+nitrito (5,24 log ufc/g), Cal+LP (4,63 log ufc/g) e Cal+benzoato (4,41 log ufc/g) apresentaram contagens intermediárias. Nenhum tratamento imposto foi capaz de controlar o crescimento de clostrídios estimulado pela cal virgem. No segundo ensaio o objetivo foi comparar filmes plásticos na vedação de silagens de cana-de-açúcar. Os tratamentos impostos foram: 1) filme de poliamida 45?m, recoberta com manta de polietileno para proteção contra raios ultravioleta e danos físicos (PA45+M); 2) filme de polietileno coextrusado com poliamida, dupla face, 125?m (PA125); 3) filme de polietileno, dupla face, 200?m (DF). Três silos tipo trincheira foram preenchidos simultaneamente e durante o abastecimento a cana-de-açúcar picada foi tratada com benzoato de sódio na dose 0,15% da matéria natural. Decorridos 90 dias de armazenamento, os silos foram abertos e as silagens utilizadas como ingredientes para alimentação de vacas em lactação. Quinze vacas Holandesas (615 kg PV) foram alocadas aleatoriamente em três Quadrados Latinos 3x3, com períodos de 18 dias. O consumo de matéria seca (CMS). Amostras de leite foram coletadas para análises de proteína, gordura, lactose, caseína, ácidos graxos livres, sólidos totais, Nuréico e contagem de células somáticas. O óxido de cromo foi utilizado como marcador externo para estimar a produção fecal. As diferentes estratégias de vedação não influenciaram a qualidade das silagens e, consequentemente, não afetaram o CMS 19,9 kg/dia, a produção 25,1 kg/dia e a composição do leite (gordura 3,5%, proteína 3,3%, lactose 4,4%), das vacas. As diferentes estratégias de vedação utilizadas não influenciam a qualidade das silagens de cana-de-açúcar e o desempenho de vacas leiteiras e se mostraram efetivas para vedação de silos horizontais. No presente estudo, tanto a utilização de aditivos como a adoção de estratégias de vedação não foram efetivas em controlar perdas em silagens de cana-de-açúcar. / The aim of this study was to discover the best strategies to control losses in sugarcane silages, using combinations of chemical and microbial additives or covering strategies. In the first trial the aim was to compare strategies to prevent clostridium grow in sugarcane silages added with lime. Treatments were Control: no additives; L: 1.5% lime; L + LP: 1.5% lime + Lactobacillus plantarum Ma 18/5U (5×105 cfu/g fresh forage); L + LB: 1.5% lime + Lactobacillus buchneri 40788 (5×105 cfu/g fresh forage); L + N: 1.5% lime + 0.07% sodium nitrite; L + B: 1.5% lime + 0.15% sodium benzoate. As experimental silos were used plastic buckets with a capacity of 20 L. Mini bags were prepared with the following treatments 1) control, 2) 1.5 % of lime and 3) 1.5 % of lime + 5 × 105 cfu/g of L. plantarum, in order to analyze the pH drop at the onset of fermentation. The lime was not effective in decreasing losses compared to control silages (20.6% and 19.1%, respectively) however the treatments lime+Benzoate, lime+nitrite, lime+LP and lime+LB, decreased losses, showing lower values: 11.2%, 14.1%, 14.1% and 13.9%, respectively. The aerobic stability of silages treated with lime (172 h), lime+Benzoate (155 h) and lime+Nitrite (223 h) were higher compared to those treated with lime+LB (49 h), lime+LP (48.4 h) and control (51.9 h). The control treatment showed the lowest counts of clostridia (3.26 log cfu/g) and treatment with lime and lime+LB had the highest counts (6.74 log cfu/g and 5.96 log cfu/g, respectively), while lime+nitrite (5.24 log cfu/g), lime+LP (4.63 log cfu/g) and lime+benzoate (4.41 log cfu/g) showed intermediate counts of clostridia. None of additives combined with lime were able to provide butyric acid free silages. In the second trial the aim was to compare plastic films for sealing sugarcane silages. Treatments were: 1) polyamide film 45?m plus a protection against physical damage and ultraviolet light (PA45 + P), 2) polyethylene film coextruded with polyamide, black-on--white, 125?m (PA125), 3) polyethylene film, blackon- white 200?m (BW). Three trench silos were filled out simultaneously with chopped sugarcane treated with 0.15% of sodium benzoate (as fed basis). After 90 days of storage, the silos were opened and silages fed to lactating cows as total mixed rations. . Fifteen Holstein cows (615 kg BW) were randomly allocated into 3x3 Latin square with periods of 18 days. Dry matter intake, diet apparent digestibility, milk yield and milk composition were evaluated on days 14 to 18 in each period. Chromium oxide was used as external marker to estimate fecal excretion. Sealing strategies had no influence on silage quality and cows performance. Dry matter intake (19.9 kg /day), milk yield (25.1 kg/day), and milk composition (fat 3.5%, 3.3% protein, and 4.4% lactose) were quite similar across treatments. The different sealing strategies do not affect sugarcane silage quality and dairy cows performance and proven effective for sealing horizontal silos. In the present study, neither additives nor covering strategies were effective in reducing losses in sugarcane silages.