Orientador: Lourdes Aparecida Martins dos Santos-Pinto / Banca: Roberta Tarkany Basting Hofling / Banca: Maria Cristina Borsatto / Banca: Angela Cristina Cilense Zuanon / Banca: Rita de Cássia Loiola Cordeiro / Resumo: Dentre os instrumentos de corte alternativos aos rotatórios de baixa e alta rotação que foram introduzidos na Odontologia, o uso do ultra-som associado à ponta de diamante CVD (Chemical Vapor Deposition) vem apresentando desempenho positivo, especialmente em relação à preservação da estrutura dentária e à satisfação dos pacientes. Diante de uma tecnologia ainda pouco explorada, o objetivo deste estudo foi avaliar a efetividade da ponta de diamante CVD em ultra-som, buscando evidências científicas que suportem a sua utilização no tratamento odontológico, por meio de 3 artigos seqüenciais. Estes artigos abordaram as implicações desta nova técnica de preparo cavitário na efetividade de corte de esmalte e dentina, na resistência de união por microtração e microinfiltração de restaurações de resina composta e na resposta do complexo dentino-pulpar de dentes humanos, tendo como grupo controle a ponta diamantada convencional associada à turbina de alta rotação. Os resultados evidenciaram que os preparos cavitários em esmalte e dentina confeccionados com ponta de diamante CVD em ultra-som foram mais conservadores do que os preparos com a ponta diamantada em alta rotação. As restaurações em resina composta confeccionadas após o preparo cavitário com a ponta de diamante CVD em ultrasom apresentaram valores de resistência de união significantemente maiores, no entanto, a microinfiltração nas margens em esmalte e dentina não foram diferentes entre os instrumentos de corte. Além disso, não foram observadas características de inflamação nas respostas pulpares após a utilização de ambos os instrumentos de corte, apenas uma discreta a moderada desorganização celular. / Abstract: The CVD (Chemical Vapor Deposition) diamond tip coupled in ultrasound device by means of a specific connector has been an alternative to conventional diamond bur in high-speed. Besides the few scientific evidences, this new technology has been used in dental offices with good results, especially regarding the preservation of dental tissues and patient's satisfaction. The aim of this study was to evaluate the effectiveness of the CVD diamond tip in ultrasound on dental treatment, through 3 sequential articles. These articles evaluated the implications of this new cavity preparation technique in enamel and dentin cutting effectiveness, in microtensile bond strength and microleakage of composite resin restorations, and in dentin-pulp complex response of human teeth, having the high-speed conventional diamond bur as control group. The results showed that the cavity preparations made by CVD diamond tip in enamel and dentin were more conservative than those prepared by conventional diamond bur. The resin composite restorations placed after cavity preparation with CVD diamond tip in ultrasound showed significantly higher bond strength values, however, the microleakage in enamel and dentin margins were similar for both cutting instruments. Besides, pulp response for both instruments did not show inflammatory characteristics, only a discrete or moderate cellular disorganization. / Doutor

O capeamento pulpar direto busca preservar a vitalidade pulpar. Este trabalho apresenta a resposta tecidual de polpas humanas ao capeamento pulpar direto com o Agregado de Trióxido Mineral (MTA) comparado com o hidróxido de cálcio. Foram utilizados 20 pré-molares de dez pacientes com extração indicada para tratamento ortodôntico. Todos os dentes apresentavam vitalidade pulpar e neles foram feitos capeamentos pulpares diretos com MTA ou com o hidróxido de cálcio. Os dentes foram extraídos num período de 14 dias ou 45 dias, estabelecendo os seguintes grupos experimentais: Ca(OH) 14 dias; Ca(OH) 45 dias; MTA 14 dias e MTA 45 dias. Estes dentes foram analisados microscopicamente por dois examinadores treinados. Os dados obtidos foram tabulados, utilizando-se o teste Kappa para observar o grau de concordância entre os examinadores. Para avaliação comparativa entre as respostas citotóxicas dos materiais testados foi aplicado o teste não paramétrico Kruskal-Wallis e o teste de Dunn para comparações individuais e identificação da significância dos achados. Na análise dos resultados não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos nos períodos experimentais de 14 e 45 dias, e nem na resposta inflamatória pulpar frente ao hidróxido de cálcio quando comparado ao MTA. Quanto à espessura e à organização da barreira dentinária reparatória com o hidróxido de cálcio, quando comparado com o MTA também não apresenta diferença estatisticamente significante. Conclui-se que o MTA satisfaz os requisitos de um material capeador pulpar em dentes de humanos, apresentando propriedades físicas e biológicas que o indicam para este tratamento. / The direct dental pulp capping aims to preserve the pulp vitality. This work shows the tissue response from human pulps to that procedure with the Mineral Trioxide Agregate (MTA) compared to calcium hydroxide - Ca(OH)2. Twenty premolars from 10 patients with extraction indicated to orthodontic treatment were used. All teeth showed pulp vitality and were treated with direct dental pulp capping with MTA or with calcium hydroxide. The teeth have been extracted within 14 or 45 days, stablishing the following experimental groups: Ca(OH)2 14 days; Ca(OH)2 45 days; MTA 14 days; and MTA 45 days. These teeth were analyzed under microscopy by two observers trained. The data obtained were put in table using the Kappa test to note the agreement degree between the observers. For the comparative assessment between the citotoxic response from material tested has been applied the non-paired Kruskal-Wallis test, and the Dunns test for individual comparisons and identifying the significance of findings. In the analysis of results there had no statistically significant difference between the groups in experimental periods of 14 days and 45 days, not even in the pulp inflammatory response to calcium hydroxide when compared to MTA. The thickness and arrangement of the healing dentin barrier faced with calcium hydroxide, when compared to MTA, also showed no statistically significant difference. It may be concluded that the MTA fulfils the requirements of pulp capping material in human teeth showing biological and physical properties that indicate it for this treatment.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo destes estudos "in vitro" e "in vivo" foi avaliar uma técnica de tratamento endodôntico de dentes decíduos, minimamente invasiva, utilizando a pasta CTZ (cloranfenicol, tetraciclina e óxido de zinco/eugenol). No estudo "in vitro" foi analisada a ação antimicrobiana da pasta CTZ, sobre microrganismos-padrão (E.coli, S.aureus, S.mutans, E.faecalis e P.aeruginosa), pelos métodos de difusão em ágar e diluição em caldo, comparativamente com o OZE (óxido de zinco e eugenol) e as pastas L&C (hidróxido de cálcio), 3 Mix (metronidazol, ciprofloxacin e minociclina e propileno glicol) e Guedes-Pinto (iodofórmio, paramonoclorofenol e Rifocort). A difusibilidade da atividade antimicrobiana da CTZ através dos túbulos dentinários de raízes dentes decíduos recém extraídos, sobre S.mutans, E.faecalis e P.aeruginosa também foi analisada. No estudo "in vivo" foi avaliado o desempenho clínico da pasta CTZ no tratamento endodôntico de dentes decíduos em comparação com o OZE. Seis crianças, com idades entre 7 e 8 anos, apresentando um dente decíduo posterior inferior com comprometimento pulpar extenso, foram alocadas aleatoriamente em dois grupos, sendo que em um foi utilizada a técnica da pasta CTZ (grupo teste) e no outro o tratamento endodôntico radical com OZE (grupo controle). O acompanhamento clínico e radiográfico foi realizado em intervalos de 2 semanas, 3 e 6 meses. Os resultados dos experimentos "in vitro" demonstraram que a pasta CTZ possui atividade antimicrobiana da comparável a da pasta 3 Mix e superior aos demais materiais sobre todos os tipos de microrganismos, exceto para a P.aeruginosa onde a CTZ apresentou uma atividade menor do que a da pasta 3 Mix apesar de ainda superior as demais. Além disso, a CTZ demonstrou atividade antimicrobiana por difusibilidade sobre o S.mutans e E.faecalis. Os resultados do experimento clínico demonstraram um desempenho similar entre a pasta CTZ e o OZE, especialmente logo após o tratamento. Esses resultados sugerem que a técnica minimamente invasiva empregando a pasta CTZ pode ser um alternativa ao tratamento endodôntico radical evitando a perda precoce de dentes decíduos, com comprometimento pulpar. Porém, um ensaio clinico com tamanho amostral adequado e acompanhamento de longa duração deve ser realizado para que se possa obter evidência conclusiva sobre a efetividade do tratamento clínico com a pasta CTZ. / The aim of these "in vitro" and "in vivo" studies was to evaluate an endodontic treatment for deciduous teeth, minimally invasive, using the CTZ paste (chloramphenicol, tetracycline and zinc oxide/eugenol). In the "in vitro" study the antimicrobial activity of the CTZ paste on standard microorganisms (E.coli , S.aureus, S.mutans, E.faecalis and P.aeruginosa) was evaluated. The agar diffusion and broth dilution methods were used and the CTZ paste was compared to the ZOE (zinc oxide/eugenol), L&C (calcium hydroxide), 3-Mix (minociclyne, ciprofloxacin, metronidazole e propylene glycol) and Guedes-Pinto (iodoform, paramonoclorophenol e Rifocort) pastes. The antimicrobial activity of the CTZ paste, through the dentinal tubules, were tested on S.mutans, E.faecalis and P.aeruginosa. In the study "in vivo" the clinical performance of CTZ paste was acessed. Six children, aged 7 and 8 years, presenting a decayed lower primary molar decayed with pulp pathology were randomly allocated into the test group (CTZ) and in the control group (ZOE). Clinical and radiographic exams were performed after 2 weeks, 3 and 6 months of follow-up. The results of the "in vitro" experiments demonstrated that CTZ paste had an antimicrobial activity similar to the antimicrobial activity of the 3 Mix paste, with the exception of P.aeruginosa, where CTZ paste presented a worse antimicrobial activity than the 3 Mix paste. The antimicrobial activity of CTZ paste was better than the antimicrobial activity of the other tested materials. Moreover, the CTZ showed an antimicrobial activity through the dentine on S.mutans and E.faecalis. CTZ and ZOE presented a similar clinical performance especially immediately after the treatment. These results suggest that the minimally invasive technique employing the CTZ paste can be an alternative to traditional endodontic treatment and may prevent the early loss of deciduous teeth with pulp pathology. Nevertheless, a clinical trial with an adequate sample size and a longer follow-up period should be performed in order to produce conclusive evidence about the clinical effectiveness of the CTZ paste.

O fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) desempenha um papel importante na angiogênese, induzindo a proliferação da célula endotelial, migração e sobrevivência. Com o intuito de promover a formação de novos vasos, e obter uma melhora na circulação colateral, VEGF tem sido utilizado para o tratamento de áreas de isquemia cardíaca, na doença cardiovascular. A manutenção da vitalidade pulpar com VEGF pode melhorar o prognóstico dos dentes que sofreram avulsão, prevenindo a perda precoce do dente. O propósito deste estudo foi desenvolver um modelo para se estudar o processo de revascularização da polpa dentária e avaliar o efeito do VEGF- 165 na angiogênese da polpa humana e na apoptose. Fatias de dente humano foram mantidas in vitro (cultura) com e sem VEGF (50ng/ml) durante 7 dias. Coloração de imuno-histoquímica para o Fator de Von Willebrand (Fator VIII) foi utilizada para quantificar o número de vasos sangüíneos no tecido pulpar. O número de vasos sangüíneos foi significantemente mais alto no grupo do VEGF (média -67.87) comparado ao grupo controle (média- 46.25, p< .05). O teste do Tunel foi usado para determinar o número de células apoptóticas nos grupos com e sem VEGF. Análises da expressão de VEGFR-2 por RT-PCR foram realizadas nas células endoteliais da microvasculatura da derme humana (HDMECs), células pulpares indiferenciadas (OD-21), células tipo odontoblasto de camundongo (MDPC-23) e macrófagos. A expressão de VEGFR-2 foi detectada nas HDMECs, mas não nas outras 3 linhas celulares. Quatro fatias de dente humano por camundongo imunodeprimido foram implantadas na região dorsal, subcutaneamente, pelo período de 7 dias. A vitalidade pulpar foi determinada pelas análises microscópica e imuno-histoquímica. O teste do Tunel foi usado para determinar o número de células apoptóticas. O modelo de angiogênese pulpar utilizando camundongos imunodeprimidos (SCID mouse model of pulp angiogenese) demonstrou ser um modelo viável para se estudar o processo de revascularização da polpa dentária humana. Levando-se em consideração os resultados obtidos neste estudo, sugere-se que o VEGF possa ter um efeito positivo na revascularização de dentes avulsionados. E que o modelo de angiogênese pulpar desenvolvido nesta pesquisa possa ser útil para responder a inúmeras novas questões experimentais na área de Endodontia. / The Vascular endothelial growth factor (VEGF) plays na important role in angiogenesis by inducing endothelial cell proliferation, migration, and survival. To promote new vessel formation and improve collateral circulation, VEGF has been used to treat ischemic heart areas in cardiovascular disease. Maintenance of pulp vitality with VEGF may improve the outcomes of avulsed teeth, preventing premature tooth loss. The purpose of this study was to develop a model system to study the process of dental pulp revascularization, and assess the effect of VEGF-165 in the human pulp angiogenesis and apoptosis. Human tooth slices were maintained in vitro for 7 days +/- VEGF (50ng/mL). Immunohistochemistry staining for Von Willebrand?s factor (Factor VIII) was used to quantify the number of vessels in pulp tissues. There was a significantly higher number of blood vessels in the VEGF group (67.8 Mean) compared to the control group (46.2 Mean, p<0.05). Tunel Assay was used to determine the number of apoptotic cells in +/- VEGF groups. RTPCR analyses of VEGFR-2 transcripts were used on human dermal microvascular endothelial cells (HDMECs), undifferentiated pulp cells (OD-21), mouse odontoblast-like cells (MDPC-23), and macrophages. VEGFR-2 expression was detected in HDMECs but not in the other 3 cell lines. Four tooth slices per mouse were subcutaneously implanted in the dorsal region for 7 days. Pulp vitality was determined by histological and immunohistochemical analysis. Also, Tunel Assay was used to determine the number of apoptotic cells. SCID mouse model of pulp angiogenesis demonstrated to be a good model system to study revascularization of human dental pulps. Taking into account the findings of this study, it is suggested that VEGF could have a positive effect in the revascularization of avulsed teeth. It is hoped that this pulp angiogenesis model be useful to answer a number of new experimental questions in the area of Endodontics.

Orientador: Marines Nobre dos Santos Uchoa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-06T14:54:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Steiner-Oliveira_Carolina_M.pdf: 2452614 bytes, checksum: cd8304b4153cd0bfcc7b167b1691f06e (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A irradiação do esmalte dentário com laser de CO2, especialmente se associada ao flúor, pode aumentar a resistência deste substrato ao desafio ácido. Esta tese, constituída por 2 artigos, teve por objetivos: estabelecer a menor densidade de energia obtida com um laser de CO2 (À=10,6 flm) pulsado, que quando aplicada sobre o esmalte dentário humano, seja capaz de promover mudanças químicas e morfológicas e de reduzir sua suscetibilidade a ácidos, sem causar danos pulpares; avaliar, in vitro, os efeitos combinados de um laser de C02 pulsado (À=10,6 ).lm) e do dentifrício e enxaguatório fluoretados na redução da progressão de lesão de cárie artificial em esmalte dentário humano. No estudo 1, durante a irradiação de terceiros molares inclusos com densidades de energia de 1,5 a 11,5 J/cm2, foram avaliadas as alterações na temperatura pulpar através de um termopar. As modificações químicas e morfológicas da superfície do esmalte induzidas pelo laser foram determinadas, respectivamente, através de espectroscopia FT-Raman e microscopia eletrônica de varredura. Os dentes foram submetidos à ciclagem de pH e a perda mineral foi determinada através de microdureza em corte longitudinal. Os espectros Raman obtidos foram analisados pelo teste t pareado e os resultados das variáveis alteração de temperatura e microdureza, foram analisados estatisticamente pelos testes ANOV A e Tukey, todos com nível de significância fixado em 5%. No seguJ?-do estudo, espécimes de esmalte obtidos de terceiros molares inclusos foram previamente desmineralizados e em seguida aleatoriamente divididos em nove grupos tratados ou não com laser de CO2, com ou' sem dentifrício fluoretado e com ou sem enxaguatório fluoretado, fazendo todas as associações possíveis entre os tratamentos. Após a ciclagem de pH, as concentrações de flúor das soluções des e remineralizadora foram determinadas e os espécimes foram analisados, qualitativamente, por microscopia de luz polarizada e teste de microdureza em corte longitudinal para quantificar mudanças no conteúdo mineral. Os resultados foram analisados estatisticamente pelos testes ANOVA e Tukey, com nível de significância fixado em 5%. No estudo 1, as mudanças de temperatura intrapulpares não excederam 3°C para todos os grupos irradiados. A espectroscopia FT -Raman e a microscopia eletrônica de varredura indicaram que as densidades de energia iguais ou superiores a 6,0 J/cm2 foram suficientes para promover modificações químicas e morfológicas na superficie do esmalte. A redução da desmineralização do esmalte promovida pelo laser foi observada com as densidades de energia a partir de 10,0 J/cm2. No estudo 2, todos os tratamentos foram capazes de reduzir a perda mineral do esmalte, quando comparados ao grupo controle (p<0,05). Todas as terapias combinadas, exceto a associação de laser e enxaguatório, causaram remineralização do esmalte dentário. Concluindo, os resultados desses estudos indicaram que a densidade de energia do laser de C02, que pode ser aplicada sobre o esmalte dentário capaz de produzir efeito na prevenção da desmineralização sem oferecer danos para à polpa dentária, é 10,0 J/cm2 e que o laser de CO2, combinado ou não com flúor, é capaz de reduzir a progressão da desmineralização do esmalte dentário em situações de alto desafio cariogênico in vitro / Abstract: The irradiation of dental enamel by CO2 laser, especialIy if combined with fluoride, can increase the enamel acid resistance. Thus, this thesis, comprised by 2 manuscripts, aimed: to establish the lowest energy fluency of a pulsed 10.6 Ilm C02 laser that, when applied on enamel surface, is able to cause chemical and morphological changes and reduces its acid resistance reactivity, without causing pulpal harm; to assess, in vitro, the combined effects of a 10.6 Ilm CO2 laser, fluoridated dentifrice and fluoridated mouthrinse in the reduction of lesion progression in human carious dental enamel. In study I, during the irradiation of human teeth with 1.5-11.5J/cm2, intrapulpal thermal effects were evaluated by a thermocouple. Moreover, chemical and morphological modifications were assessed on enamel surface, through FT-Raman and MEV analysis, respectively. The teeth were submitted to a pH-cyc1ing model and the enamel mineralloss was determined by crosssectional microhardness. The.Raman spectra obtained were assessed by the paired t test and thermal and microhardness variables were analyzed by ANOV A and Tukey tests, alI with 5% of statistical significance. In study 2, slabs of previously demineralized dental enamel were randomly assigned to nine groups (n = 10) and treated withlwithout CO2 laser and withlwithout fluoridated dentifrice and withlwithout fluoridated mouthrinse, making all possible associations between these treatments. After pH-cyc1ing, fluoride concentrations were determined in the de and remineraliziRg solutions and qualitative polarized light analysis was performed. In addition, cross-sectional microhardness test was dOJ;1e to quantify changes in mineral content. In the first study, for alI irradiated groups, intrapulpal temperature changes were below 3°C. FT-Raman spectroscopy and scanning electron microscopy indicated that fluencies as low as 6.0 J/cm2 were sufficient to induce chemical and morphological changes in enamel. Laser-induced inhibitory effects on enamel demineralization were observed in fluencies of 10.0 and 11.5 J/cm2. In the second study, alI treatments were able to decrease mineralloss when compared to control group (p < 0.05). AdditionalIy, except for the association of laser with fluoridated mouthrinse, all combined treatments have caused enamel remineralization. In conclusion, the results of these studies suggest that the lowest laser fluency capable of producing chemical and morphological changes to reduce acid reactivity of enamel without exposing pulp vitality to danger is 10.0 J/cmZ and that pulsed COz laser irradiation alone or combined with fluoridated products produced an effective protection against demineralization progression in dental enamel in vitro / Mestrado / Odontopediatria / Mestre em Odontologia

Células-tronco adultas podem ser isoladas de vários tecidos, dentre eles a polpa dentária humana, tecido originado na papila dentária do dente em desenvolvimento. Estas linhagens multipotentes podem ser estudadas sob vários aspectos, como na elucidação da histogênese de tumores. O objetivo deste estudo foi inferir a histogênese do mixoma odontogênico, neoplasia odontogênica benigna, analisando a expressão de proteínas da matriz extracelular (MEC) e de metaloproteinases da matriz (MMPs) em células-tronco adultas de polpa dentária humana. Três linhagens diferentes de células-tronco originadas de polpas dentárias humanas IDPSCs (DL-1, DL-2 e DL4) foram utilizadas. As proteínas analisadas foram as mesmas expressas na neoplasia: vimentina, colágeno tipo I, fibronectina, tenascina, ácido hialurônico e MMPs (MMP-1, MMP-2 e MMP-9). Imunofluorescência e ensaios enzimáticos foram utilizados para analisar a presença de proteínas nas células cultivadas e no meio de cultura condicionado por estas células, respectivamente. Todas as linhagens celulares expressaram a vimentina e nenhuma expressou o ácido hialurônico. A linhagem celular DL-1 expressou todas as outras proteínas da matriz extracelular estudadas, enquanto que na linhagem DL-2 apenas não foi observada a expressão do colágeno tipo I. Fibronectina e tenascina não foram observados na linhagem DL-4. Todas as linhagens expressaram todas as MMPs, sendo que a produção de MMP-2 nas três linhagens foi significantemente maior que a de todas outras MMPs. Baseado nas condições deste estudo, é possível concluir que a expressão de proteínas da MEC e de MMPs em células-tronco de polpa dentária humana apresentaram perfil similar àquela apresentada no mixoma odontogênico, exceto pela ausência de marcação do ácido hialurônico em todas as linhagens. A ausência de secreção de ácido hialurônico pelas IDPSCs poderia indicar que o mixoma odontogênico deriva de uma célula mais diferenciada que as células-tronco. / Adult stem cells can be isolated from different tissues including the human dental pulp, a structure originated from the dental papillae. These cell lineages are of importance in a series of studies, as the analysis of tumors histogenesis. The aim of this study was to infer the histogenesis of odontogenic myxoma, a benign odontogenic neoplasia by analyzing the ECM and MMPs molecules expressed in human dental pulp stem cells. Three different lineages of immature dental pulp stem cells (IDPSCs) (DL-1, DL-2 and DL-4) were used. The proteins searched were those expressed by the tumoral cells: vimentin, type I collagen, fibronectin, tenascin and hialuronic acid (HA) and the matrix metalloproteinases (MMP-1, MMP-2 and MMP-9). Immunofluorecence and enzymatic assays were used for analyzing the presence of the proteins in the cells and in the culture media conditioned by the cells, respectively. All the lineages expressed vimentin; however none expressed HA. DL-1 lineage expressed all the other ECM proteins, and the expression of type I collagen was not observed in the DL-2 lineage. Fibronectin and tenascin were not observed in the DL-4 lineage. All the lineages expressed all the MMPs. The release of MMP-2 from all cell lineages was significantly higher than those of all other MMPs. Based on the conditions of this study its possible to conclude that the overall expression of MEC proteins and MMPs in the lineages of human dental pulp stem cells were similar to those found in the odontogenic myxoma, except for the absence of hyaluronic acid. The absence of HA secretion by the IDPSCs could indicate that the odontogenic myxoma tumoural cells derive from a cell more differentiated than the stem cells.

O objetivo deste trabalho foi comparar os efeitos de diferentes densidades de energia e irradiâncias do Laser de Baixa Intensidade (LBI), variando em função do tempo de irradiação e potência, na viabilidade e proliferação de fibroblastos derivados da polpa de dentes decíduos humanos (HPF). HPF foram cultivados em DMEM e usados entre a 4ª e 8ª passagem. Os grupos foram divididos de acordo com diferentes densidades de energia, variando: Tempo de irradiação - Grupo I Ia (1,2 J/cm2 - 5 mW - 10 s), Ib (2,5 J/cm2 - 5 mW - 20 s), Ic (3,7 J/cm2 - 5 mW - 30 s), Id (5,0 J/cm2 - 5 mW - 40 s), e Ie (6,2 J/cm2 - 5 mW - 50 s); ou potência - Grupo II IIa (1,2 J/cm2 - 5 mW - 10 s), IIb (2,5 J/cm2 - 10 mW - 10 s), IIc (3,7 J/cm2 - 15 mW - 10 s), IId (5,0 J/cm2 - 20 mW - 10 s), e IIe (6,2 J/cm2 - 25 mW - 10 s). Células não irradiadas - cultivadas em condições nutricionais regulares - 10% Soro Fetal Bovino (SFB) (If e IIf) e células não irradiadas - cultivadas em déficit nutricional - 1% SFB (Ig e IIg), foram consideradas controles positivos e negativos, respectivamente. A viabilidade e proliferação celular foram avaliadas, repesctivamente, pelas técnicas MTT e Cristal violeta (CV), nos períodos de 24, 48 e 72 horas após a irradiação. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística por ANOVA 2 critérios, seguido pelo teste de Tukey (P<0,05). No ensaio MTT, os controles negativos, Ig e IIg, apresentaram significativamente menor viabilidade em relação aos correspondentes grupos experimentais: IIa e IIb, 24 horas após a irradiação; Ia, Ib, Ie, If e IIf no período de 48 horas; e Ib-If, assim como, IIa-IIf após 72 horas. Nos diferentes períodos de avaliação do ensaio CV, todos os grupos, exceto Ie, IIe e If, exibiram significativamente maior proliferação em comparação aos respectivos controles negativos. Dentro de um mesmo grupo nos diferentes períodos, os grupos If e IIe apresentaram menor viabilidade durante o período de 24 horas em comparação ao período de 72 horas pelo ensaio MTT. Na avaliação intragrupos, o ensaio CV revelou menor proliferação no período de 24 horas em comparação aos períodos de 48 e 72 horas, independente do grupo avaliado. Os diferentes protocolos de irradiação, grupos I e II, não apresentaram diferença estatisticamente significativa na viabilidade e proliferação celular entre densidades de energia iguais com irradiâncias diferentes durante os períodos avaliados. De acordo com os resultados obtidos, as diferentes densidades de energia e irradiâncias propostas não prejudicaram a viabilidade e proliferação de fibroblastos pulpares de dentes decíduos humanos. A variação do protocolo de irradiação LBI, em função do tempo ou da potência, não interferiram nas respostas celulares após a aplicação da mesma densidade de energia com irradiâncias diferentes. / The aim of this study was to compare the effects of Low-level laser (LLL) with different energy densities and irradiances, varying according to the irradiation time and power, on cell viability and proliferation of pulp fibloblasts from human primary teeth (HPF). HPF were culture in DMEM and used between 4th and 8th passages. Groups were divided according to different energy densities, varying: Time of irradiation Ia (1.2 J/cm2 - 5 mW - 10 s), Ib (2.5 J/cm2 - 5 mW - 20 s), Ic (3.7 J/cm2 - 5 mW - 30 s), Id (5.0 J/cm2 - 5 mW - 40 s), and Ie (6.2 J/cm2 - 5 mW - 50 s); or output power - Grupo II IIa (1.2 J/cm2 - 5 mW - 10 s), IIb (2.5 J/cm2 - 10 mW - 10 s), IIc (3.7 J/cm2 - 15 mW - 10 s), IId (5.0 J/cm2 - 20 mW - 10 s), e IIe (6.2 J/cm2 - 25 mW - 10 s). Non-irradiated cells - grown in regular nutritional conditions - 10% Fetal Bovine Serum (FSB) (If and IIf) and non-irradiated cells - grown in nutritional deficit - 1% FBS (Ig and IIg) were considered positive and negative controls, respectively. Cell viability and proliferation were respectively assessed through MTT and Crystal violet (CV) assays at 24, 48 and 72h after irradiation. Data were submitted to statistical analysis by ANOVA 2 criteria, followed by Tukey test (P<0.05). In the MTT assay, the negative controls, Ig and IIg, showed significantly lower viability in relation to the corresponding groups: IIa and IIb 24 hours after irradiation; Ia, Ib, Ie, If and IIf at 48 hours period; and Ib-If, as IIa-IIf, after 72 hours. At different periods of evaluation of CV assay, all groups, except Ie, IIe and If, exhibited significantly higher proliferation compared to the respective negative controls. Within the same group at different periods, groups If and IIe showed lower viability during 24 hours compared to 72 hours period by MTT assay. In the intragroup evaluation, CV assay revealed lower proliferation at 24 hours compared to 48 and 72 hours periods, regardless of the evaluated group. Different irradiation protocols, groups I and II, showed no statistically significant differences on cell viability and proliferation among equals energy densities with different irradiances at the evaluated periods. According to these findings, different LLL energy densities and irradiances proposed did not impair viability and proliferation of pulp fibloblasts from human primary teeth. The variation of the LLL irradiation protocol, by the time or power, did not interfere in cellular responses after the application of the same energy density with different irradiances.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-08-21T13:39:52Z No. of bitstreams: 1 mariziatrevizani.pdf: 1220027 bytes, checksum: 70abc77309c910bd7507cd8ebeed0526 (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: on 2017-08-24T11:31:11Z (GMT) / Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-08-24T15:20:42Z No. of bitstreams: 0 / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-30T14:33:33Z (GMT) No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2017-08-30T14:33:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2017-02-22 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A evolução das técnicas de cultura de células levaram à necessidade de eliminar componentes de origem animal, de modo a evitar a contaminação bacteriana, viral ou priônica. As células-tronco da polpa dentária são células-tronco multipotentes que apresentam alta plasticidade, sendo capazes de se diferenciar em linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica. O presente trabalho tem como objetivo testar a utilização de peptonas vegetais (ervilha, trigo e soja) nas concentrações de 0,5%; 1% e 5% como possíveis substitutos para 10% de soro bovino fetal (SFB) em cultura de CTs. A proliferação celular foi avaliada pelo método de MTT analisado em espectrofotómetro (VarioSkan). Realizou-se a diferenciação osteogênica e empregou-se a coloração Vermelho de Alizarina para testar o suporte de diferenciação. Medimos a concentração de deposição de cálcio ressuspendendo o conteúdo de Vermelho de Alizarina em solução alcoólica e analisando espectrofotometricamente. O ensaio de MTT e ensaios de diferenciação osteogênica permitiram concluir que a peptona de trigo a 1% foi a mais eficiente nas condições empregadas. A concentração de 5% de todas as peptonas utilizadas foi tóxica. Ao analisar os aminogramas das três peptonas, foi possível inferir que a maior eficiência da peptona de trigo pode estar relacionada à maior proporção de prolina e ácido glutâmico. / The evolution of cell culture techniques led to the necessity of eliminating components with animal origin, in order to prevent bacterial, viral or prionic contamination. Deciduous teeth dental pulp stem cells are multi potent stem cells which present high plasticity, being able to differentiate into osteogenic, adipogenic and chondrogenic lineages. The present work aims at testing the utilization of vegetal peptones (pea, wheat and soy) at the concentrations 0.5%; 1%, and 5% as possible substitutes for 10% Fetal Bovine Serum (FBS) in SCs culture. Cell proliferation was assayed by the MTT method analyzed on spectrophotometer (VarioSkan). We performed osteogenic differentiation and employed Alizarin Red staining in order to test the differentiation support. We measured the concentration of calcium deposition by ressuspending the alizarin red content in alcoholic solution and by analyzing spectrophotometrically. MTT and osteogenic differentiation essays allowed to conclude that wheat peptone at 1% was the most efficient in the conditions employed. The concentration of 5% of all the peptones utilized was toxic. Upon analyzing the aminograms of the three peptones, it was possible to infer that the higher efficiency of wheat peptone may relate to the greater proportion of proline and glutamic acid.

O osteossarcoma é um tumor ósseo maligno, de maior ocorrência em cães, possui rápido crescimento e alto potencial metastático. Assim, o cão é um modelo útil para o estudo da doença em humanos, tendo em vista as semelhanças clínicas e histopatológicas que ocorrem em ambas às espécies. Atualmente, os estudos a respeito de células-tronco são promissores considerando seu alto potencial terapêutico. Entretanto, ainda prevalecem muitas dúvidas referentes ao tratamento de tumores utilizando a terapia celular. Este tema é pouco conhecido e estudado, por isso, o objetivo deste trabalho foi avaliar a interação entre células-tronco obtidas da polpa dentária canina com as células derivadas osteossarcoma canino. Foram realizados cocultivos celulares das células derivadas de polpa dentária canina, osteossarcoma canino e derivadas de osso normal canino. Analisou-se os aspectos morfológicos das células cocultivadas e controle, assim como a atividade proliferativa, a morte celular, o potencial elétrico mitocondrial e a expressão gênica. A partir dos resultados obtidos, concluiu-se que a interação entre a célula-tronco da polpa dentária canina imatura e as células de osteosarcoma canino não apresentam alterações morfológicas. Entretanto, as células-tronco derivadas da polpa dentária canina e de osso fetal canino sadio parecem servir de suporte para o crescimento tumoral. Além disso, a cocultura celular, em todos os grupos testados, promove alterações na expressão gênica e proteica. / Osteosarcoma is a malignant bone tumor most frequent in dogs. It has fast growth and high metastatic potential. Thus, the dog is an useful model for the study of human disease, due to the clinical and histological similarities found in both species. Currently, studies about stem cells are promising considering its high therapeutic potential. However, many doubts still exist regarding the treatment of tumors using cell therapy. This theme is little known and studied. Therefore, the aim of this study was to evaluate the interaction between stem cells obtained from canine immature dental pulpstem cells with osteosarcoma cells derived from dogs. Cellular coculture were performed using cells derived from canine dental pulp, canine osteosarcoma and canine normal bone. The morphological aspects of cocultured cells and control were analyzed, as well as proliferative activity, cell death, the mitochondrial membrane electric potential and gene expression. In summary, it was concluded that the interaction between stem cells from canine immature dental pulp and canine osteosarcoma cells did not show morphological changes. However, stem cells derived from canine dental pulp and healthy canine fetal bone serve to support tumor growth. Furthermore, the cell coculture in all groups tested, causes changes in gene and protein expression.

Os tecidos da polpa dentária e vibrissa são dois microambientes celulares que compartilham a mesma origem embrionária. Ambos possuem o seu nicho especifico pós-natal que abrigam células tronco adultas (CTA). O objetivo do trabalho foi investigar a expressão diferencial dos marcadores de células pluripotentes, mesenquimais e neuroepiteliais nas populações de células tronco isoladas das vibrissas (CTV) e polpa de dente (CTPD) de camundongos C57BL-6. Resultados obtidos no presente trabalho, utilizando o método de imunofluorescência, revelaram que as CTA de ambos tecidos expressam um amplo painel de marcadores de pluripotência (Oct4, Nanog e Sox2), mesenquimais (CD73, CD90 e CD105), hematopoiético (CD34), crista neural (CKit), neuronal (Nestina) e epitelial (Integrina &#945;6, LGR5 e LGR6) e indica possível potencial destas células em diversas linhagens celulares. Desta forma, células isoladas destes tecidos podem ser interessantes para serem aplicadas em diversos tratamentos na medicina regenerativa. Portanto, o estudo comparativo da expressão de um amplo painel de marcadores de células tronco em CTV e CTPD pode vir a aumentar o leque de possibilidades de sua utilização na terapia celular. Com isso, as células isoladas de polpa dentária foram submetidas à análise de expressão de marcadores já citados e a outros conhecidamente positivos e específicos para os folículos piloso como Citoqueratina 15 (CK15), LRig1 e Blimp1. Foram realizados ensaios de imunofluorescência, imunohistoquímica, citometria de fluxo e RT-PCR. Os dados obtidos nos permitiram concluir, que as CTA isoladas das ambas as fontes são bastante semelhantes em relação ao seu imunofenótipo, porém as características da sua diferenciação precisam ainda ser analisadas. / The tissues of the dental pulp and vibrissae are two cellular microenvironments that share the same embryonic origin. Both have their postnatal specific niche that keep adult stem cells (ASC). The objective of this study was to investigate the differential expression of pluripotent markers, mesenchymal and neuroepithelial in populations of stem cells isolated from whiskers (WSC) and dental pulp (DPSC) C57BL-6 mice. Results obtained in this study, using immunofluorescence, revealed that the ASC both tissues express a broad panel of pluripotency markers (Oct4, Nanog and Sox2), mesenchymal cells (CD73, CD90 and CD105), hematopoietic (CD34), crest neural (cKIT), neuronal (Nestin) and epithelial (Integrin &#945;6, LGR5 and LGR6) and indicates possible potential of these cells in several cell lines. Thus, isolated cells of these tissues may be interesting for application in various treatments in regenerative medicine. Therefore, the comparative study of the expression of a broad panel of stem cell markers in WSC and DPSC could increase the range of possibilities for their use in cell therapy. Thus, the isolated cells were subjected to the dental pulp marker expression analysis cited above and others known to be positive and specific to hair follicles as Cytokeratin 15 (CK15), and LRig1 Blimp1. Immunofluorescence assays were performed, immunohistochemistry, flow cytometry and RT-PCR. The data allowed us to conclude that the ASC isolated from both sources are quite similar with respect to their immunophenotype, but the characteristics of differentiation remain to be analyzed.