As bactérias ácido lácticas (BAL) possuem papel importante em uma ampla variedade de alimentos, incluindo produtos lácteos e cárneos. Neste trabalho foram investigadas as atividades antimicrobiana e antioxidante, do sobrenadante bruto e do extrato intracelular, de 36 BAL isoladas de produtos lácteos e cárneos. Estas bactérias foram identificadas através do seqüenciamento do rRNA da região 16S. A análise através do GenBank BLAST revelou que todos os isolados pertencem ao gênero Enterococcus. Três isolados foram identificados como E. hirae, um isolado como Enterococcus sp., 17 como E. faecium e 15 como E. faecalis. A atividade antimicrobiana frente ao microrganismo indicador Listeria monocytogenes foi observado em 21 isolados, utilizando o sobrenadante bruto, destacando-se com os maiores halos de inibição os isolados IS 196 (10,7 mm) e IS 197 (11,0 mm) e, em 7 isolados, utilizando o extrato intracelular, os maiores halos de inibição foram obtidos com os isolados IS 196 (9,7 mm) e IS 197 (9,3 mm), sendo estes dois isolados identificados como E. faecium. A avaliação da atividade antioxidante foi realizada por três métodos distintos. Os 36 isolados apresentaram atividade antioxidante pela determinação às Substâncias Reativas ao Ácido Tiobarbiturico (TBARS), utilizando tanto o sobrenadante bruto quanto o extrato intracelular. A A capacidade antioxidante também foi verificada pelo seqüestro de radicais livres através do método de ABTS (2,2 azino-bis (3-•+etilbenzotiazolino-6-ácido sulfônico)) e pela captura do radical DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazil). Nestes dois métodos verificou-se que apenas as amostras do sobrenadante bruto demonstraram capacidade antioxidante. A atividade antioxidante mais elevada foi observada nos isolados IS 196 e IS 197. Foi realizado também o enriquecimento das espécies de Enterococcus com selênio (Selenito de Sódio - Se(IV)). Neste estudo, selecionaram-se os isolados que bioacumularam maior concentração de Se(IV) na biomassa, BAL 14 e BAL 18, identificados como E. faecalis e E. faecium, respectivamente. Os isolados tiveram ótimo crescimento à 35ºC por 24 h (DO BAL 14=1,4 e BAL 18=1,5), a remoção 600ótima do selênio foi verificada com o pH inicial de 7,0 e temperatura de 25ºC. Através da curva de crescimento observou-se que após 8 h de incubação, as culturas BAL 14 e BAL 18 apresentaram a maior produção de biomassa (DO=1,42 e 1,41) e bioremoção do Se(IV) (14,89 e 14,79 mg L), 600-1respectivamente. Quantidade considerável de selênio foi detectada na biomassa de E. faecium (0,4599 mg g de peso seco e E. faecalis (0,4759 mg g de peso -1-1seco). Estes resultados mostram que estas bactérias podem auxiliar particularmente na redução ou inibição de microrganismos patogênicos, na inibição da oxidação de alimentos e ração animal, bem como reduzir os danos oxidativos provocados pela produção de radicais livres nos organismos vivos. A absorção significativa de Se(IV) pelas espécies de Enterococcus observados neste estudo, indicam que estes microrganismos podem ser utilizados para estudos posteriores visando à suplementação alimentar animal, através da utilização da biomassa produzida pelos Enterococcus enriquecidos com Se(IV). / The lactic acid bacteria (LAB) have an important role in a wide variety of foods, including dairy products, meat and fermented foods. In this study, antimicrobial and antioxidant activities of culture supernatants and intracellular extracts of 36 LAB isolated from meat and dairy products were investigated. These bacterial were identified by 16S rRNA sequencing. GenBank BLAST analysis revealed that all the isolates belong to the genus Enterococcus. Three isolates were identified as E. hirae, one isolate as Enterococcus sp., 17 as E. faecium and 15 as E. faecalis. Antimicrobial activity against the indicator microorganism Listeria monocytogenes was observed for 21 supernatants culture, it is highlighted with the largest inhibition zones the strains IS196 (10.7 mm) and IS197 (11.0 mm), and 7 strains using cell extracts, showed the highest inhibition zones. Strains IS196 (9.7 mm) and IS197 (9.3 mm) were identified as E. faecium. Evaluation of antioxidant activity was performed by three different methods. The 36 isolates showed antioxidant activity to determination Thiobarbituric Acid Reactive Substances (TBARS) method with supernatant culture and cell-free extract. Antioxidant capacity was also observed for the scavenger of free radicals by the method of ABTS (2,2-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)) and the capture of the •+radical DPPH (2,2-diphenyl-1 - picrylhydrazyl). These two methods showed that only supernatant culture samples had antioxidant capacity. The highest antimicrobial and antioxidant activities were observed by E. faecium, IS196 and IS197. It also was performed the enrichment of Enterococcus species with Selenium (Sodium selenite - Se(IV)). In these study, it was selected the isolates with highest selenium bioaccumulation capacity, LAB 14 and LAB 18, identified as E. faecalis and E. faecium, respectively. The isolates had high growth at 35ºC for 24 h (DO BAL 14=1.4 and BAL 18=1.5), and the Se(IV) removal was maximum 600at inicial pH 7.0 and 25ºC. Time course experiment showed that both LAB 14 and LAB 18 had highest biomass production (OD=1.42 and 1.41) and Se(IV) 600bioremoval (14.89 and 14.79 mg L) respectively -1after 8 h of incubation. Substantial amount of selenium was detected in biomass of E. faecium (0.4599 mg g-1 of dry weight and E. faecalis (0.4759 mg g-1 of dry weight). These results showed that these bacteria can particularly help to reduce or inhibit pathogenic microorganisms, in the inhibition of oxidative spoilage in foods and animal feed, as well as, reduce oxidative damage caused by free radical production in living organisms. The significant uptake of Se(IV) by the Enterococcus species observed in this study, indicate that they can be used to deliver dietary selenium through feed augmentation with Se(IV)-enriched Enterococcus biomass.

Bactérias lácticas probióticas e peptídeos bioativos são importantes componentes de alimentos funcionais. Neste trabalho, bactérias lácticas isoladas de leite ovino cru e de queijo de ovelha foram identificadas por 16S rDNA como pertencentes ao gênero Lactobacillus e avaliadas quanto ao potencial probiótico. Todas as linhagens demonstraram adequada tolerância ao pH 3,0 e a sais biliares em concentrações de até 0,5%. A linhagem LCN 56, quando exposta ao tratamento de pH 2,0 e pepsina, adicionado de leite desnatado, não teve sua viabilidade reduzida durante 4 horas em função do efeito protetor do alimento. Adicionalmente, propriedades de autoagregação e hidrofobicidade, atividades antioxidante e antibacteriana, e ainda, produção da enzima β-galactosidase foram avaliadas em 12 Lactobacillus e em 2 linhagens de referência. Estas características foram bastante variáveis entre as linhagens, mesmo entre aquelas pertencentes à mesma espécie. Nenhuma das bactérias exibiu todas as propriedades desejáveis, porém dois isolados apresentaram conjuntamente o maior número de atributos funcionais, L. brevis SM-B e L. plantarum SM-I. Com relação aos peptídeos com atividade biológica, extratos aquosos de queijos de ovelha maturados foram avaliados e apresentaram propriedades antioxidantes de sequestro do cátion radical 2,2 azino-bis (3-etilbenzotiazolino-6-ácido sulfônico) (ABTS) e atividade quelante de ferro bastante variáveis, enquanto as análises de poder redutor e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) apresentaram similaridade para a maioria dos queijos. A atividade inibitória da enzima conversora de angiotensina foi elevada, em contraste à atividade antibacteriana que não foi encontrada em nenhuma das amostras. Os resultados encontrados podem ser atribuídos a possíveis peptídeos bioativos presentes. O perfil proteico do extrato aquoso correspondente ao queijo Roquefort foi visualizado por SDS-PAGE, por ter sido a amostra com a melhor intensidade das bioatividades. Portanto, os resultados refletem a potencial funcionalidade dos produtos lácteos ovinos. / Probiotic lactic bacteria and bioactive peptides are important components of functional foods. In this work, lactic bacteria isolated from raw ovine milk and cheese were identified by 16S rDNA as belonging to Lactobacillus genus and evaluated for probiotic potential. All strains demonstrated appropriate tolerance to pH 3.0 and bile salts until 0.5% of concentration. The strain LCN 56, when exposed to the treatment of pH 2.0 and pepsin added with skim milk, did not reduce viability during 4 hours due to protective effect of the food. Additionaly, autoaggregation and hydrophobicity properties, antioxidant and antibacterial activities and also β-galactosidase production were evaluated for 12 lactobacilli and for 2 reference strains. These characteristics were quite variable among strains, even among strains belonging to the same species. None of them exhibited all the desired properties, but two strains showed the greatest number of functional attributes together, L. brevis SM-B and L. plantarum SM-I. In relation to peptides with biological activity, water soluble extracts of ewe´s ripened cheeses were evaluated and presented antioxidant properties of scavenging of the cation radical 2,2‘-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) and iron chelating activity quite variable, whereas power reduction and thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) analysis presented similarity for the major of the cheeses. Inhibition of the angiotensin-converting enzyme (ACE) was elevated, in contrast to antibacterial activity that was not found for any sample. The results found can be attributed for the possible presence of bioactive peptides. The protein pattern of water soluble extract corresponding to Roquefort was visualized by SDS-PAGE for being the sample that displayed the best bioativities. Therefore, the results reflect potential functionality of dairy sheep.

Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2018-08-14T18:01:06Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Charlene - VERSÂO Final CD.docx: 1141880 bytes, checksum: 525cb42fb5cb9562edb967f1bbd44c49 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-08-17T12:31:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Charlene - VERSÂO Final CD.docx: 1141880 bytes, checksum: 525cb42fb5cb9562edb967f1bbd44c49 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-17T12:31:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Charlene - VERSÂO Final CD.docx: 1141880 bytes, checksum: 525cb42fb5cb9562edb967f1bbd44c49 (MD5) Previous issue date: 2017-12-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / A procura por bactérias ácido-láticas (BAL) com propriedades benéficas a saúde, melhoria nas características sensoriais, digestibilidade, qualidade nutricional, bem como na preservação dos alimentos tem sido o foco de intensas pesquisas na última década.O isolamento e caracterização de novas espécies são vantajosos para obtenção de linhagens com características taxonômicas, tecnológicas e funcionais diferenciadas. O objetivo deste trabalho foi avaliar fatores de virulência e atividade probiótica do isoladoEnterococcus durans(LAB18s), proveniente de queijo minas frescal, bem como isolar, identificar, caracterizar, avaliar o potencial probiótico e os aspectos de segurança de isolados de BAL, provenientes de queijo ricota, para possível aplicação como cultura probiótica. Verificou-se que o isolado LAB18séhomofermentativo, lipase positiva e gelatinase negativa, possui atividade antagonista contra Salmonella Enteritidis, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus eEscherichia coli. Não foi detectada a presença do operon icaADBC, os quais são relacionados à formação de biofilme,indicando segurança em relação a um possível uso em alimentos. Além disso, o isolado LAB18scarreia dois genes de enterocinas, o gene L50A/B e o gene P. O isolado R7, obtido de queijo ricota, foi identificado molecularmente como Lactococcus lactis subsp lactise apresentou característicasprobióticas nasanálises de tolerância ao pH ácido, sais biliares, suco gástrico simulado e suco intestinal simulado. Além disso, foi sensível aos seis antimicrobianos testados, não forma biofilme, é homofermentativo, bem como não apresentou atividade hemolítica, nem das enzimas DNAse, gelatinase e lipase. O isolado R7 apresentou ainda, capacidade de autoagregação, coagregação e hidrofobicidade, indicando potencial para ser utilizado como probiótico. Da mesma forma, apresentou atividade antagonista contra Salmonella Enteritidis,Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus eEscherichia coli e atividade antioxidante. Por meio dos resultados obtidos conclui-se que, tanto o LAB18s isolado de queijo minas frescal quanto o R7 isolado de queijo ricotaapresentaram características probióticas e aspectos de segurança compatíveis para futura utilização como culturas iniciadoras em alimentos. São resultados promissores, no entanto, há necessidade de pesquisa de genes codificadores de virulência e toxicidade para possível aplicação. / The search for new lactic-acid bacteria (LAB) with beneficial properties has been the focus of intensive research in the current years. The isolation and characterization of new species are advantageous to obtain lineages with different taxonomic, technological and functional properties. The am of this study was to evaluate the virulence and antimicrobial activity of Enterococcus durans (LAB18s) isolated from cheese "minas frescal", as well as to isolate, identify, characterize and evaluate the probiotic potential and safety aspects of a new strain of BAL from Cheese "ricotta type" for the possible application as a probiotic culture. In the results of isolateLAB18s, gelatinase negative, lipase positive, homofermentative activity, antagonistic activity against the Salmonella Enteritidis, Listeria monocytogenes and Staphylococcus aureus were observed in the well diffusion assay by well, and activity against E. coli, S. Enteritidis, L. monocytogenes by the "Spot on the lawn" method. The presence of the icaADBC operon was not detected indicating safety in relation to a possible alimentary use; the presence of two enterocin genes, the L50A/B gene and the P gene werepronounced. The R7 strain isolated from ricotta cheese, identified as Lactococcus lactis subsp lactis, presented probiotic characteristics against tolerance analysis at acid pH, bile salts, simulated gastric juice and simulated intestinal juice. It was classified as sensitive against all antibiotics tested, non-biofilm forming, homofermentative, presented negative activity for analysis of hemolysis, DNAse, gelatinase and lipase. The isolate R7 also presented self-aggregation, coagregation and hydrophobicity capacity indicating potential to be used as probiotic. Likewise, it presented antagonistic activity against Salmonella Enteritidis, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus eEscherichia coli, and antioxidant activity both by the TBARS and DPPH methods. By means of the results obtained, it was concluded that both LAB18s isolated from fresh minas cheese and R7 isolated from ricotta cheese presented probiotic characteristics and safety aspects compatible for future use as starter cultures in foods. There are promising results, however, there is a need for research on genes coding for virulence and toxicity for possible application.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-03-02T18:38:49Z No. of bitstreams: 2 Tese - Andrea de Mello Mobiglia - 2017.pdf: 1228581 bytes, checksum: 4651c264bc6e1dc88ad98290bd0dd413 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-03-03T11:35:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Andrea de Mello Mobiglia - 2017.pdf: 1228581 bytes, checksum: 4651c264bc6e1dc88ad98290bd0dd413 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-03T11:35:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Andrea de Mello Mobiglia - 2017.pdf: 1228581 bytes, checksum: 4651c264bc6e1dc88ad98290bd0dd413 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective was to evaluate the effects of antimicrobial additives and the inclusion of roughage during adaptation period in diet containing whole shelled corn (WSC, 85% WSC + 15% pelleted concentrate) on performance of Zebu bulls (Exp. 1). The Exp. 1 was realized in randomized complete block design with 2x2 factorial and five replicates. A hundred bulls were fed for 105 d with diet containing monensin (MON, 30 mg/kg DM) ou virginiamycin (VM, 25 mg/kg DM) and with or without inclusion of sugarcane bagasse as roughage (ROU or NO-ROU) in adaptation period. The Exp. 2 was parallel conducted in randomized design with two treatments (MON, 30 mg/kg DM or VM, 25 mg/kg DM) and five replicates. Ten fistulated steers were used and fed with the same diet than Exp. 1 without inclusion of roughage. A laboratorial experiment (Exp. 3) was realized at Kansas State University and its objective was to evaluate the capacity of Megasphaera elsdenii (ME) strain 41125 metabolizes a range of alternative substrates as carbon source. The experiment was designed in randomized complete blocks with six replicates. Viable cell counting, pH, and optical density were measured in media containing glucose, fructose, galactose, arabinose, xylose, maltose, sucrose, lactose, lactate, trehalose, raffinose, Fructooligosaccharide, potato starch, soy protein, succinate. In Exp. 1 and Exp. 2, antimicrobial additives, MON and VM, added to diet containing 85% WSC and 15% pellet concentrate had equal results for performance, ruminal fermentation, and apparent total tract digestibility of nutrients (P≥0.05). However, lower intake was observed in animals fed with monensin includes on diet (P≤ 0.027). Although the additive used had no effect on performance on Exp. 1, the inclusion of roughage in adaptation period showed tendentiously greater final body weight, average daily gain, and efficiency (P≤ 0.088; P≤ 0.075 e P≤ 0.094, respectively) for adaptation period (1 to 20 d) and entire feedlot period (1 to 105 d). There were no treatment effects and interactions for carcass characteristics as hot carcass weight, dressing percentage, carcass daily gain (P≥0.05). In Exp. 3, Megasphaera elsdenii was able to metabolize alternative substrates as glucose, maltose, lactate, Fructo-oligosaccharide, and fructose. However, ME had greater growth in media containing fructose, but the viable cell counting did not show consistent results with optical density. Investigations must be done to clarify the ME metabolism when fructose is used as carbon source. Accord to results obtained in this study, a roughage sorce might be included on adaptation period in diet contenting 85% whole flint corn plus 15% concentrate pellete to obtain greater animal performance. Thus, Megasphaera elsdenii is able to use alternative substrates as lactate, glucose, fructose, and maltose, maintaining their population in rumen. / Objetivou-se avaliar os efeitos de aditivos antimicrobianos e a inclusão de volumoso durante a adaptação em dietas contendo alto teor de grão de milho inteiro (85% milho + 15% concentrado peletizado) sobre o desempenho de touros zebuínos (Experimento 1). O Exp. 1 foi conduzido em delineamento de blocos casualizados em esquema fatorial 2x2 e cinco repetições. Foram utilizados 100 touros alimentados durante 105 d com dieta contendo monensina (MON, 30 mg/kg MS) ou virginiamicina (VM, 25 mg/kg MS) e com a inclusão ou não de bagaço de cana-deaçúcar como volumoso (ROU ou NO-ROU) no período de adaptação. Paralelamente foi conduzindo o Experimento 2 com o objetivo de avaliar os efeitos dos aditivos antimicrobianos sobre a fermentação ruminal e digestibilidade dos nutrientes. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado com dois tratamentos (MON, 30 mg/kg MS ou VM, 25 mg/kg MS) e cinco repetições. Dez bois fistulados no rúmen foram utilizados e alimentados com a mesma dieta do Exp. 1 sem a inclusão de volumoso. Experimento laboratorial (Experimento 3) foi conduzido na Kansas State University com o objetivo de avaliar a capacidade da cepa 41125 de Megasphaera elsdenii (ME) em metabolizar uma variedade de substratos como fonte de carbono. O experimento foi delineado em blocos casualizados com seis repetições. Número de células viáveis, pH e densidade ótica foram mensuradas em meios de cultura contendo glicose, frutose, galactose, arabinose, xilose, maltose, sucrose, lactose, lactato, trehalose, rafinose, frutooligossacarídeos, amido de batata, proteína de soja e succinato. No Exp. 1 e Exp. 2 os aditivos antimicrobianos, MON e VM, adicionados a dieta contendo 85% de grão de milho inteiro e 15% de concentrado peletizado tiveram resultados iguais para desempenho, fermentação ruminal, e digestibilidade aparente no trato total dos nutrientes (P≥0,05). Porém foi observado redução no consumo em animais alimentados com dieta contendo monensina (P≤ 0,027). Embora o aditivo utilizado não tenha tido efeito no desempenho no Exp. 1, a inclusão de volumoso na fase de adaptação apresentou tendencialmente um aumento no peso corporal final, ganho de peso diário e eficiência alimentar (P≤ 0,10), tanto na fase de adaptação (1 a 20 d) como para o período total de confinamento (1 a 105 d). Não houve efeito dos tratamentos ou interações entre os fatores para características de carcaça como peso de carcaça quente, rendimento e ganho de carcaça diário (P≥0,05). No Exp. 3 Megasphaera elsdenii foi capaz de metabolizar diferentes substratos, como glicose, maltose, lactato, fruto-oligossacarídeo e frutose. Entretanto, no meio de cultura contendo frutose a ME apresentou melhor curva de crescimento, mas o número de células viáveis não apresentou resultados consistentes com a densidade ótica. Investigações devem ser feitas para esclarecer o metabolismo da ME quando frutose é utilizada como fonte de carbono. Com os resultados obtidos nesta pesquisa, conclui-se que uma fonte de volumoso de baixa qualidade deve ser incluída no período de adaptação à dieta contendo 85% grão de milho inteiro e 15% de pelete proteica concentrado a fim de se obter melhores resultados no desempenho. Ainda, Megasphaera elsdenii é capaz de utilizar diferentes substratos além do lactato como glicose, frutose e maltose, garantindo sua população no rúmen.

O experimento foi realizado na unidade de creche do Laboratório de Pesquisa em Suínos (LPS) da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo (FMVZ-USP), campus de Pirassununga (SP), sendo utilizados setenta e dois leitões recém desmamados (21 dias), com peso médio de 6,5 kg. O delineamento experimental foi em blocos casualizados, num arranjo fatorial 2 x 2, sendo os fatores: probiótico e desafio, os quais definiram os tratamentos: T 1 - emprego do probiótico, com desafio (CPCD); T 2 - emprego do probiótico, sem o desafio (CPSD); T 3 - ausência do probiótico, com desafio (SPCD); T 4 - ausência do probiótico e sem o desafio (SPSD). As faixas de ganho médio de peso diário consideradas foram: dos 21 aos 35 dias (GMPD 35); dos 35 aos 49 dias (GMPD 49); dos 49 aos 63 dias (GMPD 63) e dos 21 aos 63 dias (GMPD Total). Os leitões foram submetidos ao desafio em sala separada, 14 dias após a distribuição nos tratamentos. O desafio foi realizado com uma amostra de E. coli positiva para as toxinas LT e ST b e para as fímbrias K 88 e F 18. A colheita das fezes foi feita após o desafio, em três períodos (35, 42 e 49 dias de idade dos leitões), para contagem de coliformes fecais, sendo analisadas pelo Laboratório de Sanidade Suína da FMVZ-USP, em São Paulo. A ração oferecida aos leitões foi semelhante à empregada comercialmente nas criações, havendo somente suplementação ou não do probiótico. O experimento avaliou o desempenho dos leitões através do ganho de peso diário (GMPD) e peso (P), acrescido da verificação da consistência das fezes e da contagem de coliformes fecais. Os resultados mostraram interação significativa entre probiótico e desafio quanto ao GMPD 49, indicando nesse período, o ponto de inflexão que caracterizou o início da mudança no comportamento desta variável. Com relação à consistência das fezes, o probiótico agiu reduzindo o percentual de fezes cremosas, confirmando sua ação protetora da mucosa intestinal, reduzindo a perda de líquido e, conseqüentemente, a diarréia. Além de atuar melhorando os parâmetros relativos ao desempenho e à consistência das fezes, a utilização do probiótico promoveu uma alteração na contagem de E. coli, reduzindo-a para um valor inferior, 14 dias após o desafio, reforçando assim a sua ação benéfica junto á manutenção da integridade intestinal / The experiment was conducted in the nursery unit at the Swine Research Laboratory from the FMVZ, University of São Paulo, Pirassununga campus, where we used 72 piglets recently weaned (about 21 days) with the average weight of 6,5 kg. The experiment was outlined in random blocks system, 2 x 2 factorial arrangements, being the factors: probiotic and challenge. The treatment was: T1 ? use of the probiotic, with challenge (CPCD); T2 ? use of the probiotic, without the challenge (CPSD); T3 ? no probiotic, with challenge (SPCD); T4 ? no probiotic and no challenge (SPSD). The intervals of weight daily gain considered were 21 to 35 days (GMPD 35); 35 to 49 days (GMPD 49); 49 to 63 days (GMPD 63) and 21 to 63 days (GMPD Total). The piglets were kept in two different rooms. One of the groups was challenged 14 days after the distribution in the treatments, in a separated room and for the challenge we used a sample of E.coli positive for the toxins LT and ST b and also for the pilli K88 and F18. The samples of feces were collected after the challenge in three periods (35, 42 and 49 days of age of the piglets) and sent to the Swine Health Laboratory at the FMVZ-USP, São Paulo campus, where the count of some species of intestinal bacteria was performed. The feed offered to the piglets was the same used in commercial swine herds. The only difference was the use or not of the probiotic. The experiment evaluated the development of the piglets through the amount of weight (AW) they gained and the average daily gain (ADG) of weight, plus the verification of the consistency of the feces and the count of some intestinal bacteria. The results showed a significant interaction between the probiotic and the challenge, as related to GMPD 49, indicating in this period the point of inflexion that characterized the beginning of the change in behavior of this variable. Analyzing the consistency of the feces we have notice that the probiotic has reduced the percentage of creamy feces, confirming its protective action in the intestinal mucus, reducing the loss of liquid and consequently the diarrhea. Together with the positive effect on the performance, the probiotic reduced the abnormal consistency of the feces, specially the creamy ones, as well as decreased the counting of E.coli 14 days after the challenge, keeping the intestinal integrity

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Sandro.pdf: 259492 bytes, checksum: 9e24465090764a22ac75d827ad8af255 (MD5) Previous issue date: 2008-08-27 / The effect of a probiotic on the immune response of cattle immunized with one dose of rabies vaccine was evaluated in this study. The Nelore bovines (N=75) were divided randomly into 5 groups: four groups fed with a diet supplemented with the 2, 3, 4 and 8 g the probiotic (Proenzime®)/bovine/day, groups G2, G3, G4 and G8, respectively, for 60 days. The 5th group was used as control. All the animals were immunized with a single dose of rabies vaccine on the first day of the experiment (day 0). The antibody titers were measured on days 0, 30 and 60 by RFFIT test. The results show the significant interaction was found between the probiotic level and vaccination time. There was also a significant difference among rabies titers in groups Gc, G2, G3, G4 and G8 on both days 30 and 60. In group G4, titers of rabies antibody in cattle decreased significantly on day 60. A significant difference (p<0.05) between the frequency of immunized animals in the control group and the other treatments was found on both days 30 and 60. On day 60, the control group did not differ from G2. However, no significant difference (p<0.05) was found among the treatments which were supplemented with probiotic. In addition, no significant difference (p<0.05) between the frequency of immunized animals on days 30 and 60 was found in control (Gc) or any other treatment (G2, G3, G4 or G8). In conclusion, the probiotic (Proenzime®) increase the humoral immune response of bovine immunized with rabies vaccine. / Foi avaliado o efeito do probiótico sobre a resposta imune de bovinos imunizados com uma dose de vacina anti-rábica. Utilizaram-se bovinos Nelore (N=75) divididos randomicamente em 5 grupos: quatro grupos foram suplementados com 2, 3, 4 e 8 g probiótico (Proenzime®)/bovino/dia, grupos G2, G3, G4 e G8, respectivamente, por 60 dias. O 5º grupo foi controle. Todos os animais foram imunizados com uma dose de vacina anti-rábica no dia zero do experimento. Os títulos de anticorpos anti-rábicos foram mensurados nos dias 0, 30, 60 por meio do teste de RFFIT. Os resultados mostraram interação significativa entre concentração de probiótico e tempo de vacinação. Também teve aumento significativo nos títulos de anticorpos anti-rábicos nos grupos Gc, G2, G3, G4 e G8 nos dias 30 e 60. No grupo G4 os títulos de anticorpos anti-rábicos reduziram significativamente no dia 60. Houve diferença significativa (p<0,05) entre a freqüência de animais imunizados entre os grupos controle e tratados nos dias 30 e 60. No dia 60, o grupo controle não diferiu do G2. Além disso, não houve diferença significativa (p<0,05) na freqüência de animais nos dias 30 e 60, no grupo controle ou nos grupos tratados (G2, G3, G4 e G8). Conclui-se que o probiótico (Proenzime®) aumentou a resposta imune humoral em bovinos imunizados com vacina anti-rábica.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao Luciana Alvares Calvo Penha.pdf: 262652 bytes, checksum: c5d5a66986ee73998c29be43156901d5 (MD5) Previous issue date: 2009-11-23 / This study evaluated the effect of probiotic supplementation on both weight gain and serum cortisol concentration in cattle. Forty Nelore calves around 18 months old were randomly assigned to one of two groups (N=20 calves each) which received only mineral mixture (GC) or mineral mixture supplemented with 4.0 g probiotic Proenzime® per animal per day (GP). The cattle were subjected to handling stress by the usual weighing practices in the corral as well as blood sampling on days 0, 75 and 150. Live weight gain increased in GP (8.20 Kg; 17.07%) from day 0 to 75 (P<0.05); no weight differences were detected from day 76 to 150 (P>0.05). Cortisol concentration increased in GC cattle on day 150 (P<0.05). In GP cattle serum cortisol was constant over the experiment (P>0.05). On day 150, cortisol concentration were higher in GC as compared to GP. No correlations were detected between live weight gain and serum cortisol on days 75 (r= -0.005ns) and 150 (r= -0.007ns). These results indicate that: probiotic administration enhances weight gain in cattle for 75 days but not longer; and day 150 probiotic supplementation can lower cortisol concentration in cattle that are frequently stressed by handling and weighing practices in the corral. / Este estudo avaliou o efeito da suplementação com probiótico no cortisol sérico e no ganho de peso em bovinos. Quarenta bezerros Nelore com cerca de 18 meses de idade foram distribuídos aleatoriamente para um dos dois grupos (N = 20 bezerros cada) que receberam apenas mistura mineral (GC) ou mistura mineral suplementado com 4,0g de probiótico Proenzime® (GP) por animal por dia. Os bovinos foram submetidos ao estresse pela prática da manipulação habitual de pesagem no curral, bem como amostragem sangue nos dias 0, 75 e 150. O ganho de peso vivo aumentou no GP (8,20 kg; 17,07%) do dia 0 aos 75 (P < 0,05) e no ganho de peso não foram detectadas diferenças a partir do dia 76 a 150 (P > 0,05). A concentração do cortisol aumentou nos bovinos do GC no dia 150 (P < 0,05) e nos bovinos do GP o cortisol sérico foi constante ao longo do experimento (P > 0,05). No dia 150 as concentrações de cortisol foram maiores no GC em comparação com o GP. Não foram detectadas correlações entre ganho de peso vivo e cortisol sérico nos dias 75 (r =-0.005ns) e 150 (r =-0.007ns). Estes resultados indicam que a administração de probiótico aumentou o peso nos bovinos nos primeiros 75 dias, e no dia 150 a suplementação diminuiu a concentração sérica de cortisol do qual se encontram freqüentemente submetidos a movimentação e a prática da pesagem no curral.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Sandro.pdf: 259492 bytes, checksum: 9e24465090764a22ac75d827ad8af255 (MD5) Previous issue date: 2008-08-27 / The effect of a probiotic on the immune response of cattle immunized with one dose of rabies vaccine was evaluated in this study. The Nelore bovines (N=75) were divided randomly into 5 groups: four groups fed with a diet supplemented with the 2, 3, 4 and 8 g the probiotic (Proenzime®)/bovine/day, groups G2, G3, G4 and G8, respectively, for 60 days. The 5th group was used as control. All the animals were immunized with a single dose of rabies vaccine on the first day of the experiment (day 0). The antibody titers were measured on days 0, 30 and 60 by RFFIT test. The results show the significant interaction was found between the probiotic level and vaccination time. There was also a significant difference among rabies titers in groups Gc, G2, G3, G4 and G8 on both days 30 and 60. In group G4, titers of rabies antibody in cattle decreased significantly on day 60. A significant difference (p<0.05) between the frequency of immunized animals in the control group and the other treatments was found on both days 30 and 60. On day 60, the control group did not differ from G2. However, no significant difference (p<0.05) was found among the treatments which were supplemented with probiotic. In addition, no significant difference (p<0.05) between the frequency of immunized animals on days 30 and 60 was found in control (Gc) or any other treatment (G2, G3, G4 or G8). In conclusion, the probiotic (Proenzime®) increase the humoral immune response of bovine immunized with rabies vaccine. / Foi avaliado o efeito do probiótico sobre a resposta imune de bovinos imunizados com uma dose de vacina anti-rábica. Utilizaram-se bovinos Nelore (N=75) divididos randomicamente em 5 grupos: quatro grupos foram suplementados com 2, 3, 4 e 8 g probiótico (Proenzime®)/bovino/dia, grupos G2, G3, G4 e G8, respectivamente, por 60 dias. O 5º grupo foi controle. Todos os animais foram imunizados com uma dose de vacina anti-rábica no dia zero do experimento. Os títulos de anticorpos anti-rábicos foram mensurados nos dias 0, 30, 60 por meio do teste de RFFIT. Os resultados mostraram interação significativa entre concentração de probiótico e tempo de vacinação. Também teve aumento significativo nos títulos de anticorpos anti-rábicos nos grupos Gc, G2, G3, G4 e G8 nos dias 30 e 60. No grupo G4 os títulos de anticorpos anti-rábicos reduziram significativamente no dia 60. Houve diferença significativa (p<0,05) entre a freqüência de animais imunizados entre os grupos controle e tratados nos dias 30 e 60. No dia 60, o grupo controle não diferiu do G2. Além disso, não houve diferença significativa (p<0,05) na freqüência de animais nos dias 30 e 60, no grupo controle ou nos grupos tratados (G2, G3, G4 e G8). Conclui-se que o probiótico (Proenzime®) aumentou a resposta imune humoral em bovinos imunizados com vacina anti-rábica.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao Luciana Alvares Calvo Penha.pdf: 262652 bytes, checksum: c5d5a66986ee73998c29be43156901d5 (MD5) Previous issue date: 2009-11-23 / This study evaluated the effect of probiotic supplementation on both weight gain and serum cortisol concentration in cattle. Forty Nelore calves around 18 months old were randomly assigned to one of two groups (N=20 calves each) which received only mineral mixture (GC) or mineral mixture supplemented with 4.0 g probiotic Proenzime® per animal per day (GP). The cattle were subjected to handling stress by the usual weighing practices in the corral as well as blood sampling on days 0, 75 and 150. Live weight gain increased in GP (8.20 Kg; 17.07%) from day 0 to 75 (P<0.05); no weight differences were detected from day 76 to 150 (P>0.05). Cortisol concentration increased in GC cattle on day 150 (P<0.05). In GP cattle serum cortisol was constant over the experiment (P>0.05). On day 150, cortisol concentration were higher in GC as compared to GP. No correlations were detected between live weight gain and serum cortisol on days 75 (r= -0.005ns) and 150 (r= -0.007ns). These results indicate that: probiotic administration enhances weight gain in cattle for 75 days but not longer; and day 150 probiotic supplementation can lower cortisol concentration in cattle that are frequently stressed by handling and weighing practices in the corral. / Este estudo avaliou o efeito da suplementação com probiótico no cortisol sérico e no ganho de peso em bovinos. Quarenta bezerros Nelore com cerca de 18 meses de idade foram distribuídos aleatoriamente para um dos dois grupos (N = 20 bezerros cada) que receberam apenas mistura mineral (GC) ou mistura mineral suplementado com 4,0g de probiótico Proenzime® (GP) por animal por dia. Os bovinos foram submetidos ao estresse pela prática da manipulação habitual de pesagem no curral, bem como amostragem sangue nos dias 0, 75 e 150. O ganho de peso vivo aumentou no GP (8,20 kg; 17,07%) do dia 0 aos 75 (P < 0,05) e no ganho de peso não foram detectadas diferenças a partir do dia 76 a 150 (P > 0,05). A concentração do cortisol aumentou nos bovinos do GC no dia 150 (P < 0,05) e nos bovinos do GP o cortisol sérico foi constante ao longo do experimento (P > 0,05). No dia 150 as concentrações de cortisol foram maiores no GC em comparação com o GP. Não foram detectadas correlações entre ganho de peso vivo e cortisol sérico nos dias 75 (r =-0.005ns) e 150 (r =-0.007ns). Estes resultados indicam que a administração de probiótico aumentou o peso nos bovinos nos primeiros 75 dias, e no dia 150 a suplementação diminuiu a concentração sérica de cortisol do qual se encontram freqüentemente submetidos a movimentação e a prática da pesagem no curral.

[EN] Human milk contains a large number of oligosaccharides, either free or bound to proteins and lipids, and their physiological role is mostly unknown. These oligosaccharides are resistant to host gastrointestinal digestion and therefore, a significant proportion reaches the infant colon, where they can be substrates for the resident microbiota. Lacto-N-biose (LNB) and galacto-N-biose (GNB) are the core type-1 sugar structures in HMO and mucin glycoproteins, respectively. They are fermented by species of the genus Bifidobacterium, but, there is no data about their utilization by the genus Lactobacillus. There is also no information for this genus about the metabolism of N-acetyllactosamine (LacNAc), which constitutes the type-2 sugar core in HMO, and lacto-N-triose, which forms part of the structure of lacto-N-tetraose, one of the most abundant HMOs. Lactobacillus casei is a lactic acid bacteria isolated from several environmental niches such as milk, meat, and reproductive and gastrointestinal tracts of animals and humans. In addition, some strains are used as starter cultures in the dairy industry and also as probiotics. The capability of L. casei species to survive in the gastrointestinal tract would depend in part of its ability to metabolize the available carbohydrates. In this Thesis we have shown that this strain is able to grow using LNB, GBN, LacNAc, and lacto-N-triose as carbon sources, and we have characterized the corresponding metabolic pathways. L. casei contains a gene cluster, gnbREFGBCDA, involved in the metabolism of GNB, LNB and also N-acetylgalactosamine. Transcriptional analysis showed that the gnb operon is regulated by substrate-specific induction mediated by the transcriptional repressor GnbR. Upstream of the gnb operon, there are two genes, bnaG and manA, encoding a b-N-acetylglucosaminidase precursor and a mannose-6P isomerase. It has been shown that BnaG is an extracellular wall-attached enzyme and that it is involved on lacto-N-triose metabolism. ManA enzyme is involved in the utilization of the mannose moiety of 3'-N-acetylglucosaminyl-mannose, which is a carbon source for L. casei BL23. Finally, in this strain, LacNAc is transported and phosphorylated by the lactose PTS and it is intracellularly hydrolyzed by the phospho-b-galactosidase LacG into galactose-6P and GlcNAc. Transcriptional analysis showed that the lac operon, in addition to lactose, is also induced by LacNAc. In an effort to better understand the metabolism and bioactive potential of HMO, sufficient quantities are required. In order to have enough amounts of LNB and GNB to test their biological activities, both disaccharides have been synthesized in vitro using the transglycosylation activity of the GnbG glycosyl hydrolase isolated from L. casei. Transglycosylation reactions were scaled and the resulting products were purified, and the yields obtained were 10.7 ± 0.2 g/L of LNB and 10.8 ± 0.3 g/l of GNB. Both disaccharides were used in vitro to determine their potential prebiotic properties using 33 Lactobacillus strains corresponding to 13 different species. It was determined that 21 strains, corresponding to the species L. casei, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus zeae, Lactobacillus gasseri and Lactobacillus johnsonii were able to metabolize both GNB as LNB. Recently, some scientific evidences suggest an immunomodulatory function for HMO. In vitro analyses to assay this function have been performed for LNB and GNB, and for two fucosyloligosaccharides (Fuc-a-1,3-GlcNAc and Fuc-a-1,6-GlcNAc) previously synthesized in our laboratory. The four disaccharides were able to significantly increase IFN-g production in Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC). Fuc-a-1,6-GlcNAc was also able to significantly reduce the production of IL13. These results suggest a stimulatory effect on the immune system, and in the particular case of Fuc-a-1,6-GlcNAc, a polarizing effect of immune response Th1 / Th2 towards Th1 populations. / [ES] La leche humana contiene una gran cantidad de oligosacáridos, libres o unidos a lípidos y proteínas, y su función fisiológica es mayoritariamente desconocida. Estos oligosacáridos son resistentes a la digestión y una gran proporción llega al intestino del lactante, donde pueden ser substratos para la microbiota. La lacto-N-biosa (LNB) y la galacto-N-biosa (GNB) son las estructuras tipo-1 que forman el núcleo de los oligosacáridos de la leche humana (OLH) y de las glicoproteínas de la mucina, respectivamente. Los dos azúcares son fermentados por especies del género Bifidobacterium, pero no hay datos acerca de su utilización por el género Lactobacillus. Tampoco hay información para este género acerca del metabolismo de la N-acetil-lactosamina (LacNAc), que constituye la cadena de azúcar tipo-2 en los OLH, y de la lacto-N-triosa, que forma parte de la estructura de la lacto-N-tetraosa, uno de los OLH más abundantes. La capacidad de Lactobacillus casei, de prevalecer en el sistema gastrointestinal dependerá en parte de su versatilidad metabólica para utilizar los carbohidratos disponibles. En la presente Tesis Doctoral se ha demostrado que la cepa L. casei BL23 se puede cultivar en presencia de LNB, GBN, LacNAc, y lacto-N-triosa como fuentes de carbono. En el metabolismo de la LNB, GNB y también N-acetilgalactosamina (GalNAc) está implicado el operon gnbREFGBCDA. Análisis transcripcionales demostraron que el operon gnb está regulado por inducción del substrato mediada por el represor transcripcional GnbR. Por encima del operon gnb, hay dos genes bnaG y manA, que codifican para el precursor de una b-N-acetilglucosaminidasa y una manosa-6P isomerasa. Se ha demostrado que BnaG es un enzima extracelular unido a la pared celular y que está implicado en el metabolismo de la lacto-N-triosa. El enzima ManA está implicada en el metabolismo de la manosa presente en el disacárido 3'-N-acetilglucosaminil-manosa, el cual es también una fuente de carbono para L. casei BL23. Por último, en esta cepa se ha demostrado que la LacNAc es transportada y fosforilada por el PTS de la lactosa e hidrolizada intracelularmente por la fosfo-b-galactosidasa LacG en galactosa-6P y GlcNAc. Análisis transcripcionales demostraron que el operon lac, además de por lactosa, está también inducido por LacNAc. Para intentar comprender mejor el metabolismo y potencial bioactivo de los OLH se necesitan cantidades adecuadas de éstos. Con el objeto de disponer de LNB y GNB en cantidad suficiente para ensayar su actividad biológica, se han sintetizado in vitro ambos disacáridos utilizando para ello la capacidad de transglicosidación de la glicosil hidrolasa GnbG aislada de L. casei. Las reacciones de transglicosidación se escalaron, los productos resultantes se purificaron, y se obtuvieron rendimientos de 10.7 ± 0.2 g/l de LNB y 10.8 ± 0.3 g/l de GNB. Ambos disacáridos fueron utilizados in vitro para determinar sus propiedades prebióticas potenciales con 33 cepas de Lactobacillus correspondientes a 13 especies diferentes. Se determinó que 21 de las cepas, correspondientes a las especies L. casei, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus zeae, Lactobacillus gasseri y Lactobacillus johnsonii fueron capaces de metabolizar tanto GNB como LNB. Existen evidencias científicas recientes que les atribuyen a los OLH propiedades inmunomoduladoras, así que se han determinado éstas in vitro para LNB y GNB, y para dos fucosiloligosacáridos (Fuc-a-1,3-GlcNAc y Fuc-a-1,6-GlcNAc) sintetizados anteriormente en nuestro laboratorio. Se ha demostrado que los cuatro disacáridos son capaces de incrementar significativamente la producción de IFN-g en Células Mononucleares de Sangre Periférica. El Fuc-a-1,6-GlcNAc además fue capaz de reducir significativamente la producción de IL13. Estos resultados sugieren un efecto estimulante del sistema inmune y en el caso particular del Fuc-a-1,6-GlcNAc un efecto polarizador de la respuesta inmune Th1/Th2 / [CAT] La llet humana conté una gran quantitat d'oligosacàrids, lliures o conjugats amb lípids o proteïnes i la seua funció fisiològica és majoritàriament desconeguda. Aquests oligosacàrids són resistents a la digestió i una gran proporció arriba a l'intestí dels lactants, on poden ser substrat per a la microbiota. La lacto-N-biosa (LNB) i la galacto-N-biosa (GNB) són les estructures tipus-1 que conformen el nucli dels oligosacàrids de la llet humana (OLH) i de les glicoproteïnes de la mucina, respectivament. Els dos sucres són fermentats per espècies del gènere Bifidobacterium, però no existeixen dades sobre l'ús pel gènere Lactobacillus. Tampoc no hi ha informació per a aquest gènere sobre el metabolisme de la N-acetil-lactosamina (LacNAc), que cosntitueix la cadena de sucre tipus-2 als OLH i de la lacto-N-triosa, que forma part de l'estructura de als OLH tipus-1 i 2. La capacitat de L. casei, una bactèria làctica aïllada de múltiples nínxols ambientals, de prevaler al sistema gastrointestinal dependrà en part de la seua versatilitat metabòlica per a utilitzar els carbohidrats disponibles. A la present tesi doctoral s'ha demostrat que la soca L. casei BL23 es pot cultivar en presència de LNB, GBN, LacNAc i lacto-N-triosa com a fonts de carboni. Al metabolisme de la LNB, GNB i també de la N-acetilgalactosamina (GalNAc) està implicat l'operó gnbREFGBCDA. Anàlisi transcripcionals demostraren que l'operó gnb està regulat per inducció del substrat mitjançant el repressor transcripcional GnbR. A sobre de l'operó gnb, hi ha dos gens bnaG i manA, que codifiquen per al precursor d'una b-N-acetilglucosaminidasa i una manosa-6P isomerasa. S'ha demostrat que BnaG és un enzim extracel·lular unit a la paret cel·lular i que està implicat en el metabolisme de la lacto-N-triosa. Aquesta és hidrolitzada per BnaG en lactosa i N-acetilglucosamina (GlcNAc). L'enzim ManA està implicada en el metabolisme de la manosa present al disacàrid 3-N-acetilglucosaminil-manosa, el qual també representa una font de carboni per a L. casei BL23. Per concloure, en aquesta soca s'ha demostrat que la LacNAc és transportada i fosforilada pel PTS de la lactosa i hidrolitzada intracel·lularment per la fosfo-b-galactosidasa LacG en galactosa-6P i GlcNAc. Anàlisi transcripcionals demostraren que l'operó lac, a més de per lactosa està induït per LacNAc. Per intentar comprendre millor el metabolisme i potencial bioactiu dels OLH es necessiten quantitats adequades d'aquests. A fi de disposar de LNB i GNB en quantitats suficients per a assajar la seua activitat biològica, s'han sintetitzat in vitro ambdós disacàrids utilitzant per a tal la capacitat de trasglicosidació de la glicosil hidrolasa GnbG aïllada de L. casei. Les reaccions de transglicosidació s'escalaren, els productes resultants es purificaren i s'obtingueren rendiments de 10.7 ± 0.2 g/l de LNB y 10.8 ± 0.3 g/l de GNB. Ambdós disacàrids foren utilitzats in vitro per a determinar les seues propietats prebiòtiques potencials amb 33 soques de Lactobacillus corresponents a 13 espècies diferents. Es determinà que 21 de les soques, corresponents a les espècies L. casei, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus zeae, Lactobacillus gasseri i Lactobacillus johnsonii foren capaces de metabolitzar tant GNB com LNB. Existeixen evidències científiques recents que atribueixen als OLH propietats immunomoduladores, així que s'han determinat aquestes in vitro per a LNB i GNB i per als dos fucosiloligosacàrids (Fuc-a-1,3-GlcNAc y Fuc-a-1,6-GlcNAc) sintetitzats anteriorment al nostre laboratori. S'ha demostrat que els quatre disacàrids són capaços d'incrementar significativament la producció de IFN-g en Cèllules Mononuclears de Sang Perifèrica. El Fuc-a-1,6-GlcNAc a més, fou capaç de reduir significativament la producció de IL13. Aquests resultats suggereixen un efecte estimulant del sistema immune i en el cas particular del Fuc-a-1,6-GlcNAc un efecte pol / Bidart Costoya, G. (2016). Metabolismo y síntesis de oligosacáridos de la leche humana mediante la utilización de enzimas glicosil hidrolasas de Lactobacillus casei [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/70898 / TESIS