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O mercado de terras e as transforma??es na sociedade agr?ria, na regi?o de Cruz Alta R/S, a partir do avan?o da produ??o de gr?os, entre os anos 1990 a 2004Maroso, Gilmar Mantovani 27 March 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-03-27 / O presente estudo tem como objetivo, analisar o mercado de terras e as transforma??es na sociedade agr?ria na regi?o de Cruz Alta R/S, a partir do avan?o da produ??o de gr?os, entre os anos de 1994 a 2004. Visa elucidar a problem?tica das mudan?as na estrutura fundi?ria, com o estabelecimento de um mercado de terra que provoca transforma??es na sociedade agr?ria regional. A hip?tese b?sica afirma que as mudan?as no espa?o agr?rio regional s?o estudadas pelas din?micas e caracter?sticas de uso e apropria??o da terra, e de seu fluxo de compra, pelo fato do adquirente buscar estabelecer uma maior escala de produ??o, com amplia??o de ?rea sob seu dom?nio. Para a compreens?o da din?mica da hist?ria agr?ria regional, o recorte hist?rico foi entre os anos de1990 a 2004, per?odo de mudan?as das pol?ticas econ?micas e agr?cola do governo Collor. Metodologicamente quanto aos fins, a pesquisa foi descritiva e explicativa, j? em rela??o aos meios, utilizou-se referencial bibliogr?fico, documental e pesquisa de campo. A pesquisa de campo foi realizada no munic?pio de Peju?ara R/S, nos meses de fevereiro a julho de 2008, utilizou-se do m?todo de entrevista, com 28 perguntas semiestruturadas, com amostra de 30 produtores/propriet?rios que representou 10,9 % do universo. A tese apresenta uma nova abordagem, com objetivo de contribuir na reflex?o a respeito das quest?es fundi?rias. Sua interpreta??o busca resgatar o passado contido no presente, atrav?s da forma??o socioespacial. Mas o ineditismo reside na pesquisa local, sua interpreta??o a partir do estudo dos processos de coloniza??o, moderniza??o, transforma??es e perman?ncias da classe de propriet?rios rurais. O estudo permitiu identificar a renda fundi?ria e suas possibilidades de apropria??o, al?m de demonstrar que a renda ? um fator determinante no pre?o da terra. Revelou que, em 1983, um hectare de terra para o cultivo, valia o equivalente a 50 sacas de soja; 80 sacas no ano de 1988 e 250 sacas em 1991. No ano de 1996 atinge a cota??o de 480 sacas de soja o hectare, mesmo recuando para 250 no ano de 2000, volta a subir para 310 sacas no ano de 2002, chegando novamente ao patamar de 480 sacas por hectare no ano 2006. Dos produtores pesquisados, 40 % consideram a compra de terras um investimento excelente e 57 % consideram um bom investimento, e dotada de um valor simb?lico e de muita signific?ncia, pois segundo eles ? meio de sobreviv?ncia, patrim?nio para o futuro e alta valoriza??o. O n?vel do pre?o da terra ? o resultado das expectativas: rendas produtivas decorrentes da propriedade do ativo; custo de manuten??o; pr?mio de liquidez e ganho patrimonial. Essa realidade induz a jun??o do propriet?rio fundi?rio e o capitalista arrendat?rio numa s? figura social, como forma de minimizar as perdas de renda absoluta, diferencial e at? mesmo a renda agr?cola. Essa nova configura??o, mesmo sendo uma tend?ncia, aponta para o surgimento de novos atores sociais e um novo modelo agr?cola.
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Gera??o de energia limpa e diversifica??o da matriz energ?tica : a viabilidade da produ??o de g?s natural a partir do armazenamento geol?gico de CO2 na jazida de CharqueadasHoppe, Let?cia 22 January 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-01-22 / O presente trabalho de pesquisa, ? composto por um conjunto de tr?s artigos, que apesar de serem independentes, est?o diretamente ligados ao mesmo tema geral da pesquisa, voltado ao desenvolvimento sustent?vel e ao armazenamento geol?gico de CO2 em camadas de carv?o como uma nova alternativa para a redu??o de emiss?es de gases de efeito estufa. [...] o artigo 1, apresenta uma breve discuss?o a respeito da evolu??o da tem?tica do meio ambiente no ?mbito mundial, al?m das ferramentas criadas para que os problemas advindos da interfer?ncia antr?pica fossem minimizados. O artigo destaca ainda como a tem?tica meio ambiente e desenvolvimento sustent?vel ganharam dimens?es mundiais, bem como estas se materializaram em forma de tratados, conven??es e protocolo para que efetivamente viessem a combater o aquecimento global. No artigo 2, buscou-se trazer para discuss?o as novas tecnologias que vem sendo adotadas, principalmente pelos pa?ses desenvolvidos, no combate ao aquecimento global. Dentre estas novas tecnologias, destacou-se o armazenamento geol?gico de CO2 , visto sua elevada potencialidade de seq?estrar o CO2 que seria liberado na atmosfera. [...] O artigo 3, baseado nas informa??es compiladas no artigo 2, delimitou como local de potencialidade para execu??o de ECBM-CO2 no estado do Rio Grande do Sul, o munic?pio de Triunfo, o qual utilizar? para o armazenamento geol?gico de CO2 e posterior extra??o de g?s, a jazida de Charqueadas. Sendo assim, elaborou-se um estudo de viabilidade econ?mico-financeira de execu??o de projeto de ECBM-CO2 de acordo com as caracter?sticas da Jazida de Charqueadas, dentre elas sua capacidade de gera??o de energia, a qual ? embasada no volume de carv?o contido na jazida, al?m das limita??es no fornecimento do insumo b?sico a sua implementa??o: o CO2
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An?lise da efici?ncia da agropecu?ria do estado do Rio Grande do Sul 1995/96 e 2006Schwade, Alice Cristina 31 May 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010-05-31 / Este estudo teve como objetivo analisar a efici?ncia t?cnica das microrregi?es do Rio Grande do Sul. Tamb?m foi objetivo identificar as microrregi?es ineficientes em sua produ??o, identificando os fatores pelas quais ocorre tal inefici?ncia. Atrav?s do m?todo Data Envelopment Analysis (DEA) pressupondo retornos constantes de escala com orienta??o ao produto e tamb?m analisando vari?veis limitadas, o estudo determinou a efici?ncia t?cnica, proje??es para outputs do modelo e a participa??o dos produtos no total. Atrav?s do m?todo Logit, o estudo determinou os fatores que influenciam na efici?ncia das microrregi?es, tendo por base a produtividade dos fatores. Os resultados evidenciam a import?ncia dos fatores para maximiza??o do produto das microrregi?es para maximiza??o da produtividade e conseq?ente efici?ncia desejada.
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An?lise de pol?ticas p?blicas para o desenvolvimento da orizicultura do Rio Grande do Sul no ?mbito do MercosulOliveira, Camilo Feliciano de 30 March 2007 (has links)
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Previous issue date: 2007-03-30 / O trabalho teve como o objetivo desenvolver um modelo anal?tico capaz de simular um mercado em competi??o perfeita, possibilitando verificar a influ?ncia de determinadas pol?ticas p?blicas adotadas para o mercado oriz?cola no ?mbito do Mercosul. Para isso, procedeu-se a simula??o das seguintes hip?teses: (a) libera??o do fluxo comercial intra-bloco de m?quinas, equipamentos e insumos agr?colas, necess?rios a produ??o de arroz no Brasil; (b) concess?o, por parte do governo estadual ga?cho, de cr?dito fiscal para a produ??o de arroz no Rio Grande do Sul; (c) equaliza??o da al?quota do Impostos sobre Circula??o de Mercadorias e Servi?os (ICMS), em todas as Unidades da Federa??o brasileira, nas faixas de 7%, 4% e 0%; (d) imposi??o de quotas a importa??o brasileira de arroz, oriunda de pa?ses do Mercosul. Todos os cen?rios simulados foram comparados com a conjuntura atual de mercado, no per?odo de 2006 e 2020. Como resultados para a orizicultura ga?cha o estudo identificou que as simula??es em que foram impostas quotas ? importa??o de arroz, obedi?ncia ? legisla??o tribut?ria vigente e igualdade em todo o territ?rio brasileiro da al?quota de ICMS em 7%, apresentaram maiores rentabilidades aos produtores ga?chos. Enquanto isso, as simula??es que tornou nula a al?quota de ICMS em todo o Brasil, liberalizou a aquisi??o de insumos agr?colas, m?quinas e equipamentos em todo o Mercosul e manteve o cen?rio atual de mercado constante, apresentaram os menores pre?os para os consumidores de arroz no Rio Grande do Sul.
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Flash po?tico: uma experi?ncia de leitura e produ??o de haicais e fotografias na perspectiva do letramento liter?rioDantas, Walm?ria Oliveira 24 November 2016 (has links)
Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2017-08-15T21:18:19Z
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Previous issue date: 2016-11-24 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The present master's thesis (PROFLETRAS) is based on the qualitative research, focusing on the action research, presents as a proposal of intervention a didactic work based on the discursive genres (BAKHTIN, 2003), according to National Curricular Parameters guidelines (BRASIL, 1997) , With activities of reading and production of haiku and photographs, that approach the teaching of the language from the theoretical orientation of study of the genres, within a proposal sociointeractionist of the language. It seeks to contribute to the promotion of literacy levels and literacy of a group of seventh-year primary school students. The data of the research were collected through participant observation concomitant to the notes in the researcher's logbook, videotapes, questionnaires and testimonials of the participants. This work searches in the vast literature on literacy (KLAIMAN, 2007, SOARES, 2002), literary literacy (COSSON, 2014), haiku (FRANCHETTI, 2014, GOGA, 1988; PAZ, 1999), photography (BARTHES, 1984; FLUSSER, 1985) and didactic sequence (DOLZS, NOVERRAZ and SCHNEUWLY, 2004), among others, find ways to enable the student to develop reading skills and language skills so necessary for the exercise of citizenship. The analysis of the data evidences the importance of teacher mediation in the formation of the student reader and shows that the Didactic Sequence can be an efficient methodology to assist teachers in the motivation of their students, with a view to the promotion of literary literacy. / A presente disserta??o de mestrado (PROFLETRAS) baseia-se na pesquisa qualitativa, com foco na pesquisa-a??o, apresenta como proposta de interven??o um trabalho did?tico fundamentado nos g?neros discursivos (BAKHTIN, 2003), segundo orienta??es dos Par?metros Curriculares Nacionais (BRASIL, 1997), com atividades de leitura e produ??o de haicais e fotografias, que abordam o ensino da l?ngua a partir da orienta??o te?rica de estudo dos g?neros, dentro de uma proposta sociointeracionista da linguagem. Busca contribuir para a promo??o dos n?veis de leitura e letramento liter?rio de uma turma de alunos do s?timo ano do Ensino Fundamental. Os dados da pesquisa foram coletados por meio da observa??o participante concomitante ?s anota??es no di?rio de bordo da pesquisadora, v?deo grava??es, question?rios e depoimentos dos sujeitos participantes. Esse trabalho busca na vasta literatura existente sobre letramento (KLAIMAN, 2007; SOARES, 2002), letramento liter?rio (COSSON, 2014), haicais (FRANCHETTI, 2014; GOGA, 1988; PAZ, 1999), fotografia (BARTHES, 1984; FLUSSER, 1985) e sequ?ncia did?tica (DOLZS, NOVERRAZ e SCHNEUWLY, 2004), dentre outros, encontrar caminhos que possibilitem ao aluno, o desenvolvimento das habilidades de leitura e capacidades de linguagem t?o necess?rias para o exerc?cio da cidadania. A an?lise dos dados evid?ncia a import?ncia da media??o do professor na forma??o do aluno leitor e mostra que a Sequ?ncia Did?tica pode ser uma metodologia eficiente para auxiliar professores na motiva??o de seus alunos, com vistas ? promo??o do letramento liter?rio.
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Representa??es sociais da produ??o do cuidado ao idoso (re)veladas pelos profissionais da Estrat?gia de Sa?de da Fam?liaRibeiro, Amanda Maria Villas B?as 29 September 2017 (has links)
Submitted by Jadson Francisco de Jesus SILVA (jadson@uefs.br) on 2018-01-29T22:59:21Z
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Previous issue date: 2017-09-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The aging process is a progressive and natural phenomenon that implies biological, psychological and social changes in the individual, repercussions in multiple dimensions, including the health-disease process and ways of seeing and being in the world. The Family Health Strategy is the privileged locus for the production of integral health care, in view of its proximity to the social reality of the subjects and the bond with the community. The production of care is related to the ways of knowing and doing in daily health, maintaining direct relationships with the work process, permeating human relations, subjectivities, social values and the horizontal worker-user relationship. The social representations of the professionals about in the production of care to the elderly are revealed through decision-making and their daily practice in health, since their senses, social and cultural values direct their practice. This is a qualitative research, exploratory approach, a single case study, with the objective of understanding the social representations of the production of health care to the elderly in the perspective of the professionals of the Family Health Strategy, having as theoretical framework The Theory of Social Representations of Moscovici. The study was submitted to the Ethics Committee in Research involving Human beings, being evaluated and approved. The study participants were thirteen health professionals included in the Family Health Strategy in the City of Feira de Santana-BA. The technique of data collection was the semi-structured interview. The methods used for data analysis were similarity analysis, with the help of IRAMUTEQ software, and Bardin content analysis. The categories seized after data analysis and interpretation, were: "Being old" in the conception of professionals of the Family Health Strategy; Looks at the production of care for the elderly: the subject as the "object" of intervention or "center" of health care ?; Interface between a family and a family health team: Possibilities to (re) signify the health care practices of the elderly. The social representations of health professionals of the ESF seized in the study allow say that the production of care for the elderly is anchored in the technicist perspective of treatment production in detriment of care, which requires intersubjectivity and relational technologies. In order to transform care production into something familiar, ESF health professionals construct concepts and manifest them in practices based on the hegemonic biomedical model, which values hard and light-hard technologies rather than light technologies, disregarding the intersubjectivity of subjects. / O processo de envelhecimento ? um fen?meno progressivo e natural que implica modifica??es biol?gicas, psicol?gicas e sociais no indiv?duo, repercutindo em m?ltiplas dimens?es, inclusive no processo sa?de-doen?a e modos de ver e estar no mundo. A Estrat?gia de Sa?de da Fam?lia ? o l?cus privilegiado para a produ??o do cuidado integral em sa?de, tendo em vista sua aproxima??o com a realidade social dos sujeitos e o v?nculo com a comunidade. A produ??o do cuidado relaciona-se aos modos de saber e fazer no cotidiano em sa?de, mantendo rela??es diretas com o processo de trabalho, perpassando pelas rela??es humanas, subjetividades, valores sociais e uma rela??o horizontal trabalhador-usu?rio. As representa??es sociais dos profissionais acerca da produ??o do cuidado ao idoso s?o reveladas atrav?s das tomadas de decis?es e do seu fazer cotidiano em sa?de, visto que os seus sentidos, valores sociais e culturais direcionam a sua pr?tica. Trata-se de uma pesquisa qualitativa, de abordagem explorat?ria, do tipo estudo de caso ?nico, com o objetivo de compreender as representa??es sociais da produ??o do cuidado em sa?de do idoso na ?tica dos profissionais da Estrat?gia de Sa?de da Fam?lia, tendo como marco te?rico a Teoria das Representa??es Sociais de Moscovici. O estudo foi submetido ? aprecia??o do Comit? de ?tica em Pesquisa envolvendo Seres Humanos, no qual foi avaliado e aprovado. Os participantes do estudo foram treze profissionais de sa?de inseridos na Estrat?gia de Sa?de da Fam?lia na cidade de Feira de Santana-BA. A t?cnica de coleta de dados foi a entrevista semi-estruturada. Os m?todos utilizados para an?lise de dados foram an?lise de similitude, com aux?lio do software IRAMUTEQ, e a t?cnica de an?lise de conte?do de Bardin. As categorias apreendidas ap?s an?lise e interpreta??o dos dados foram: ?Ser idoso? na concep??o dos profissionais da Estrat?gia de Sa?de da Fam?lia; Olhares sobre a produ??o do cuidado ao idoso: o sujeito como ?objeto? da interven??o ou ?centro? do cuidado em sa?de?; Interface entre a fam?lia e a equipe de Sa?de da Fam?lia: Possibilidades de (re)significar as pr?ticas de cuidado ? sa?de do idoso. As representa??es sociais dos profissionais de sa?de da ESF apreendidas neste estudo permitem afirmar que a produ??o do cuidado ao idoso est? ancorada na perspectiva tecnicista de produ??o de procedimentos em detrimento do cuidado, que demanda a intersubjetividade e tecnologias relacionais. No intuito de transformar a produ??o do cuidado em algo familiar, os profissionais de sa?de da ESF constroem conceitos e os manifestam em pr?ticas baseadas no modelo biom?dico hegem?nico, que valoriza as tecnologias duras e leve-duras em detrimento das tecnologias leves, desconsiderando a intersubjetividade dos sujeitos.
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O perfil e a influ?ncia do mentor na produ??o de escritores / The profile and mentor influence in the writer?s productionBragotto, Denise 07 February 2006 (has links)
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Previous issue date: 2006-02-07 / The purpose of this work was to investigate mentor?s profiles and their influence on Brazilian writers literary production. Personal characteristics and blocks to literary production in writers with mentor and without mentor. The sample was composed of 37 Brazilian?s writers, both gender; ages rangins from 20-89 years coming from different socio-economic levels.The instrument were: inventory and interviews with the writers. Answers to the inventory were submited to content analysis and qualitative evaluation. The results showed that the mentor is the person who has professional ability, technical knowledge, creative spirit, high ethics and moral values, affectivity and does his work with pleasure. The mentor is the guider and behavior?s inspirator in the informal mentoring, and has influence on the style refinament, faciliting the comprehension of methods to the literary creation, technical excellence, encourages the mentee to take risks, to be open for new experiences and to believe in its potential. The mentor contributes to raise contact with mentee?s literary circle. The personal characteristics which mostly contributed to the literary production were: sensibility, own?s writing pleasure, technical knowledge, curiosity, persistence and the belief in its own potential. The internal blocks to literary production were: fear of exposing and critical attitude, economical trouble and related to publishing. / O trabalho investigou o perfil dos mentores e sua influ?ncia na produ??o liter?ria de escritores brasileiros, verificando as caracter?sticas pessoais e as barreiras ao processo de produ??o liter?ria de escritores com mentores e sem mentores. A amostra foi composta por 37 escritores brasileiros, de ambos os sexos, na faixa et?ria de 20 a 89 anos de v?rios n?veis s?cio-econ?micos. Os instrumentos foram: question?rio e entrevistas livres. As respostas ao question?rio foram submetidas ? an?lise de conte?do e avalia??o qualitativa. Os resultados mostraram que o mentor possui compet?ncia profissional, conhecimento t?cnico, esp?rito criativo, elevados valores ?ticos e morais, afetividade e realizam com prazer sua atividade. O mentor ? um orientador inspirador de conduta e exerce influ?ncia no refinamento do estilo, facilitando a compreens?o dos m?todos de cria??o liter?ria e na busca da excel?ncia t?cnica, encorajando o mentoreado a correr riscos, a abrir-se para o novo, incrementando a auto-estima e a ousadia e ampliando o contato com o meio liter?rio. As caracter?sticas pessoais que mais contribuem para o desenvolvimento da produ??o liter?ria s?o: sensibilidade, prazer pela atividade, conhecimento t?cnico, curiosidade, persist?ncia e a cren?a no pr?prio potencial. As barreiras ? produ??o liter?ria s?o: o medo de se expor e o senso cr?tico, as dificuldades econ?micas e as relativas ? publica??o.
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Di?logos com quem ousa educar, educando-se: a forma??o de educadores a partir de uma experi?ncia de educa??o popular / Dialogues with teachers who educate by learning-educators education from an experience on Popular Education programsCampos, Ana Maria de 04 February 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-02-04 / The present narrative investigation aims at studying an experience in the development of educators carried out in the city of Campinas-SP through 2003-2004. Its relevance is justified by the analysis of narratives and documents such as autobiographies, letters, diaries, poetry and chronicles written by popular educators who have been participating in the literacy programs of young and adults, including this researcher educator. These sources have proven very powerful in providing insights from the movements of re-creating knowledge along life. The reflexive and autobiographic notes written a posteriori the live experiences reveal the understanding of the personal history deeply involved in the personal histories of the individuals/object. The educators attitude as a writer manifested in the texts and in their life choice as educators indicates that the emancipating conception of the production of knowledge experienced in the Popular Education gives rise to the development of the intellect, of creative energies, and of solidarity in overcoming the social constraints and restrictive conditions. The written texts also give rise to a new meaning of life as a work of art still to be finished and open to new experiences. This investigation amplifies the voices that have been silenced in the official culture and in the academy, and brings light to other versions for discussions and new propositions to be worked out in the social contexts where educational practices take place. This work was developed in line with the Research of Pedagogical Practices and the Educators Education, within the ICCON Research Group (Interdisciplinary and Knowledge Production Group) of the Post Graduation Program of the Pontif?cia Universidade Cat?lica de Campinas with grant from CAPES. / A presente investiga??o narrativa tem como objetivo estudar uma experi?ncia de forma??o de educadores realizada na cidade de Campinas-SP, no per?odo de 2003-2004. Sua relev?ncia ? atestada ao se utilizar como instrumentos de an?lise narrativas autobiogr?ficas, cartas, di?rios, poesias e cr?nicas produzidas por educadoras populares participantes do projeto de alfabetiza??o de jovens e adultos, incluindo a pr?pria educadora-pesquisadora. As fontes s?o potentes para dar a ver os movimentos de recria??o de saberes constru?dos ao longo da vida. As anota??es reflexivas e autobiogr?ficas, escritas a posteriori da experi?ncia vivida, revelam a compreens?o da hist?ria pessoal imbricada na hist?ria social dos sujeitos/objetos. A atitude autoral manifesta nos textos e nas op??es de vida das educadoras sinalizam que a concep??o emancipat?ria da produ??o do conhecimento experienciada na Educa??o Popular favorece o desenvolvimento da intelig?ncia, das energias criativas e da solidariedade para a supera??o dos estigmas e condicionamentos sociais. A ressignifica??o da vida como uma obra de arte, inconclusa e aberta pode ser vislumbrada nos registros autorais. Com esse percurso investigativo se amplifica as vozes silenciadas na cultura oficial e nos discursos acad?micos, trazendo ? luz outras vers?es para dialogar e problematizar os contextos sociais em que se d?o as pr?ticas educativas. Este trabalho foi desenvolvido na Linha de Pesquisa Pr?ticas Pedag?gicas e Forma??o do Educador, junto ao Grupo de Pesquisa ICCON (Interdisciplinaridade e Constru??o do Conhecimento) do Programa de P?s-Gradua??o em Educa??o da Pontif?cia Universidade Cat?lica de Campinas e contou com financiamento da CAPES.
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Dire??o de atores no cinema brasileiro realizado no Rio Grande do SulVargas, Gilson Padilha de 29 August 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012-08-29 / The present text shows the theme of actors direction in cinema, with two parameters: the temporal framing, localizing the subject after the Return of Brazilian Cinema (Retomada do Cinema Brasileiro), until the actual moment, and the regional framing, prioritizing and focusing the complexity of the theme on the state of Rio Grande do Sul (Brazil). For that, five of the most actives brazilian directors based on Rio Grande do Sul have been interviewed. We also research support of theory in authors like Jean-Jacques Roubine, Richard Boleslavski and in Constantin Stanislavsky. The work begins with a brief introduction, explaining the sparks who motivate the incursion in the present theme; then, the work makes a approximation about the relation between director and actor in the cinema and also presents an approach about the pragmatic actions during the process of directing actors. It also approach the regional framing, at the directors and space of work chapter and finishes with some brief considerations. / O presente texto aborda a quest?o da dire??o de atores para cinema, com dois vetores de corte: o par?metro temporal, priorizando a an?lise da quest?o e seus desdobramentos ap?s o per?odo da chamada Retomada do Cinema Brasileiro at? o momento atual e o par?metro regional, priorizando e focando a problematiza??o do tema no estado do Rio Grande do Sul. Para tanto, foram entrevistados cinco dos mais ativos diretores brasileiros sediados no Rio Grande do Sul, n?o obstante o apoio te?rico de autores como Jean-Jacques Roubine, Richard Boleslavski e Constantin Stanisl?vski. O trabalho inicia com uma introdu??o, que explana as motiva??es do autor na incurs?o ao tema; em seguida, faz abordagem sobre a busca pela verdade em cena, apan?gio secular do ator; estabelece uma abordagem sobre a rela??o do diretor com o ator no cinema; refere a pragm?tica do diretor no processo de dire??o de atores e passa ao recorte local no cap?tulo sobre diretores e espa?o de trabalho e encerra com considera??es finais.
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Express??o e purifica????o do alvo molecular Rim8 visando o desenvolvimento de novas drogas antif??ngicasVieira, Lucas Luiz 14 April 2016 (has links)
Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-09-04T20:22:35Z
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Previous issue date: 2016-04-14 / Invasive fungal infections are a major public health problem in the world, since they increase
morbidity and patients??? hospitalization time. In Brazil, the highest mortality rate among the
systemic mycoses is caused by an endemic disease named paracoccidioimycosis, which the
etiologic agent is the dimorphic fungus Paracoccidioides spp. The worldwide increased
resistance to the commercially available antifungal agents, their limited spectrum of activity
against some fungal pathogens and concerns with their toxic side effects are reasonable
evidence of the necessity of novel therapeutic strategies, especially the development of new
antifungal agents. Thus, the essential gene rim8 was identified by comparative genomics as an
orthologous sequence in the genome of human pathogenic fungi absent in the human genome.
In filamentous fungi and yeasts, gene expression regulation by the ambient pH involves
components of a signaling pathway that mediate proteolytic activation of the transcription
factor PacC/Rim101 in response to alkaline environmental pH. The rim8 gene in yeasts, also
called palF in filamentous fungi, performs an essential step in this signaling pathway. It is
important for host-pathogen interaction, leading to increased virulence and pathogen survival.
Thus, Rim8 is a very interesting and promising drug target. The aim of this work is to
optimize heterologous expression and purification of Rim8 protein from P. luzii to further
perform its structural and functional characterization and also, to use it as a molecular target
for drugs development. The rim8 gene was chemically synthesized with a histidine tag and
cloned into a pET-21a vector. Heterologous expression of the gene was made using two
strains of E. coli, obtaining the best conditions using LB medium with 0.5% glucose at 30 ??C
for 2 hours and 0.25 mM IPTG and adding protease inhibitor cocktail. The Rim8 heterologous
protein was purified using a nickel affinity chromatography column. Expression and
purification results were analyzed by SDS-PAGE and in some cases, confirmed by western
blot. Immunization of BALB/c mice was performed with the purified protein to obtain anti-
Rim8 antibodies. The antibody production was confirmed by ELISA test. The protein
immunocitolocalization in P. lutzii cells showed a difuse protein-plasma membrane
association at acidic pH. At neutral pH the fluorescence pattern is showed as localized foci in
plasma membrane and later, with extracellular alcalinization, it migrates into the cytosol.
Thus, it can be inferred that this work gives some contribution to the development of new
antifungal drugs, but still must undergo further production steps, proteolysis reduction and
protein purification to allow structural and functional characterization of Rim8. / Infec????es f??ngicas invasivas s??o um problema de sa??de p??blica no mundo, j?? que aumentam a
morbidade e o tempo de interna????o de pacientes. A micose sist??mica com o maior ??ndice de
mortalidade no Brasil, onde ?? considerada end??mica, ?? a paracoccidioidomicose, causada pelo
fungo dim??rfico Paracoccidioides spp. A tend??ncia global de aumento da resist??ncia aos
agentes antif??ngicos dispon??veis comercialmente, o espectro limitado de atividade contra
alguns fungos patog??nicos e a preocupa????o com a toxicidade s??o evid??ncias da necessidade
de novas estrat??gias terap??uticas, sobretudo do desenvolvimento de novas drogas
antif??ngicas. Nesse sentido, o gene essencial rim8 foi identificado por gen??mica comparativa
como uma sequ??ncia ort??loga no genoma de fungos patog??nicos humanos e ausente em
humanos. Em fungos filamentosos e leveduras, a regula????o da express??o g??nica pelo pH
envolve componentes de uma via de sinaliza????o que levam ?? ativa????o proteol??tica do fator de
transcri????o PacC/Rim101 em resposta ?? alcaliniza????o do pH externo. O gene rim8 em
leveduras ou palF em fungos filamentosos possui um papel essencial nessa cascata de
sinaliza????o, sendo importante para a intera????o pat??geno-hospedeiro, aumento de virul??ncia e
sobreviv??ncia do pat??geno. Por isso, Rim8 ?? um alvo molecular promissor e bastante
interessante para o desenvolvimento de drogas. O objetivo deste trabalho ?? otimizar a
express??o heter??loga e purifica????o da prote??na Rim8 de P. lutzii, visando realizar a
caracteriza????o estrutural e funcional da prote??na para futuramente utiliz??-la como alvo
molecular para o desenvolvimento de drogas. O gene rim8 foi sintetizado quimicamente com
cauda de histidinas e foi clonado em vetor pET-21a. A express??o heter??loga do gene foi
padronizada usando duas estirpes de E. coli, obtendo as melhores condi????es para purifica????o
com o uso de meio LB contendo 0,5% de glicose a 30??C por 2 h e 0,25 mM de IPTG e
coquetel de inibidores de proteases. Os resultados da express??o e purifica????o foram analisados
por SDS-PAGE e/ou confirmados por western blot. Realizou-se a imuniza????o de
camundongos BALB/c com a prote??na purificada para obten????o de anticorpos anti-Rim8. A
produ????o dos anticorpos foi confirmada por ELISA. A imunocitolocaliza????o em c??lulas de P.
lutzii mostrou que a prote??na se encontra associada ?? membrana plasm??tica de forma difusa
em pH ??cido, em seguida apresenta focos localizados em resposta a um pH pr??ximo da
neutralidade e, por fim, migra para o interior da c??lula em pH alcalino. Sendo assim, pode-se
inferir que o trabalho apresenta contribui????es para o desenvolvimento de novas drogas
antif??ngicas, al??m de auxiliar o entendimento do processo biol??gico no qual a prote??na RIM8
est?? envolvida.
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