Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-11-06T17:08:52Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 612821 bytes, checksum: 4da851159b540f467ff6da78f1b09a1c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-06T17:08:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 612821 bytes, checksum: 4da851159b540f467ff6da78f1b09a1c (MD5) Previous issue date: 2018-02-21 / A palma de óleo (Elaeis guineensis) conhecida no Brasil como dendê, é uma espécie nativa da África equatorial. Seu fruto possui um alto teor de óleo, que é o seu principal produto. Devido a seu uso industrial, alimentício e sua alta produtividade, o dendê se tornou a maior produtora de óleo vegetal do mundo, sendo responsável pela produção de 35% de todo óleo produzido a nível mundial. Embora sua reprodução seminífera seja eficiente e bastante difundida, do ponto de vista do melhoramento vegetal, a propagação seminífera apresenta desvantagens devido à alta heterozigosidade da espécie. Assim, a micropropagação do dendê é uma opção atrativa e vantajosa para a reprodução desta cultura. No entanto, a micropropagação do dendê apresenta baixo rendimento na multiplicação e regeneração de embriões somáticos. O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito do pH do meio de cultura in vitro, no crescimento e desenvolvimento de massas pró-embriogênicas de dendê em meio de cultura tamponado com MES hidratado. Cinco clones de Elaeis guineensishibrido, Tenera, AM21 (Kigoma), AM23 (Deli x Lame Embrapa), AM24 (Deli x Lame), PL10 (Deli x Lame) e PL26 (Deli x Lame) foram cultivados em meio de cultura Y3 (Euweens, 1973) modificado por Carvalho (2009), em seis pHs (6.0, 5.5, 5.0, 4.5 e 4.0) e tamponadoscom 25 mM de MES hidratado,menos o tratamento testemunha (sem tampão) no qual o pH foi de 5,7. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado (DIC) em esquema fatorial 5x6 com cinco clones, seis níveis de pH com cinco repetições. Após 60 dias na ausência de luz, foram avaliadas as massas pró-embriogênicas resultantes, sendo separadas em embriogênicas e não embriogênicas. Observou-se que massas pró-embriogênicas de dendê se multiplicam melhor em pHs mais baixos, sendo a máxima multiplicação observada entre 4.5 e 5.0. No entanto, o PL 26 apresentou melhor taxa de multiplicação em meio de cultura sem tamponamento.Para monitorar e avaliar o efeito dos tratamentos, massas pró-embriogênicas obtidas dos tratamentos foram subcultivadas em meio de regeneração. Após 45 dias, o clone AM23 obteve o maior número de embriões regenerados em massas pró-embriogênicas obtidas por subcultivo, em meio de multiplicação com pHs ajustados para 4.5 e 5.0. Para os clones AM21, AM24 e PL26 os tratamentos não foram diferentes com p> 0,05. No entanto, o clone PL10 obteve maior número de embriões em massas pró-embriogênicas obtidas por subcultivo em meio de multiplicação com pHs ajustados para 4.5, 6.0 e no tratamento testemunha. / The oil palm (Elaeis guineensis) known in Brazil as Dendê, is a species native to equatorial Africa. Its fruit has a high oil content, which is its main product. Due to its industrial use, food and its high productivity, palm oil has become the largest producer of vegetable oil in the world, being responsible for the production of 35% of all oil produced worldwide. Although it’s seminiferous reproduction is efficient and widespread, from the standpoint of plant breeding, seminiferous propagation has disadvantages due to the high heterozygosity of the species. Thus, the micropropagation of palm oil is an attractive and advantageous option for the reproduction of this culture. However, the micropropagation of palm oil presents low yield in the multiplication and regeneration of somatic embryos. The objective of this work was to study the effect of the pH of the culture medium in vitro on the growth and development of pro-embryogenic dendê masses in culture medium buffered with hydrated MES. Five clones of Elaeis guineensis hybrid, Tenera, AM21 (Kigoma), AM23 (Deli x Lame Embrapa), AM24 (Deli x Lame), PL10 (Deli x Lame) and PL26 (Deli x Lame) were grown in Y3 culture medium Euweens, 1973) modified by Carvalho (2009), at six pHs (6.0, 5.5, 5.0, 4.5 and 4.0) and buffered with 25 mM hydrated MES, minus the control treatment (without buffer) in which the pH was 5.7. The experiment was conducted in a completely randomized design (DIC) in a 5x6 factorial scheme with five clones, six pH levels with five replicates. After 60 days in the absence of light, the resulting pro-embryogenic masses were evaluated, being separated into embryogenic and non-embryogenic. It was observed that pro-embryogenic dendê masses multiply better at lower pHs, with maximum multiplication observed between 4.5 and 5.0. However, PL 26 showed a better multiplication rate in culture medium without buffering. To monitor and evaluate the effect of the treatments, pro-embryogenic masses obtained from the treatments were subcultured in regeneration medium. After 45 days, clone AM23 obtained the highest number of embryos regenerated in pro-embryogenic masses obtained by subculture, in medium of multiplication with pHs adjusted to 4.5 and 5.0. For the AM21, AM24 and PL26 clones the treatments were not different at p> 0.05. However, clone PL10 obtained a larger number of embryos in pro-embryogenic masses obtained by subculture in medium of multiplication with pHs adjusted to 4.5, 6.0 and in the control treatment.

Orientador: Simone Liliane Kirszenzaft Shepherd / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T22:35:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kajiki_FatimaOdahara_D.pdf: 9625534 bytes, checksum: b759904477dc5eb6981456b7e7a086a2 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Várias espécies do gênero Baccharis têm sido usadas na medicina popular. Efeitos farmacológicos de muitas delas já foram comprovados, e, nos últimos anos, os compostos químicos de mais de 60 espécies foram identificados. No entanto, são raros os estudos biotecnológicos em espécies deste gênero. B. tridentata e B. dracunculifolia são plantas nativas, aromáticas e produzem óleo essencial, no qual os sesquiterpenos em maior concentração são: nerolidol, espatulenol e b-cadineno. Recentemente, foi comprovado o efeito inibitório do nerolidol no crescimento de Plasmodium falciparum, o mais perigoso agente causador da malária. Devido a alta mortalidade causada por esta doença e ao fato deste parasita estar se tomando resistente aos medicamentos convencionais, pesquisas com plantas que apresentam potencial terapêutico são importantes. Com a finalidade de obter rapidamente um grande número de plantas com as mesmas características da planta mãe, foram desenvolvidos protocolos de micropropagação para as duas espécies. A micropropagação de B. tridentata foi estabelecida através de ápices caulinares de uma única planta, permitindo a formação de um banco de plantas homogêneas (done) que foram utilizadas como fonte de explantes para os experimentos posteriores. Foi desenvolvido o protocolo de aclimatação para esta espécie, com 80% de sobrevivência das plantas deste done no ambiente ex-vitro. Já para B. dracunculifolia, devido a intensa oxidação dos explantes, a micropropagação foi possível somente através da germinação de sementes. A forte recalcitrância ao cultivo in vitro dificultou o prosseguimento dos experimentos com esta espécie. A espécie B. tridentata cresce em pequenas cavidades nas superficies rochosas do Planalto do ltatiaia. A peculiaridade deste habitat levou-nos a realizar alguns estudos fisiológicos in vitro, visando contribuir para a compreensão de alguns mecanismos de adaptação desta espécie, além de permitir o aperfeiçoamento do protocolo de micropropagação. Foram avaliados os efeitos da variação do pH inicial, da fonte preferencial de nitrogênio e da concentração de alguns macronutrientes no crescimento. Após 31 dias de cultivo, o crescimento das plantas resultou em acidificação do meio, com pH final de 3,5. Este clone apresentou maior crescimento (altura e massa de matéria seca) com fonte de nitrogênio constituída de mistura de NO3-+NH/, quando comparado com NO3- ou NH/ fornecidos isoladamente. O aumento do peso seco das raízes foi favorecido pela diminuição da concentração de magnésio no meio. Estudos recentes têm demonstrado que as culturas de partes aéreas podem constituir fonte viável de compostos secundários úteis, principalmente aqueles produzidos em estruturas altamente diferenciadas, como os tricomas glandulares (TG). Entretanto, plantas cultivadas in vitro apresentam, em geral, menor produção destes compostos, quando comparadas com aquelas cultivadas em campo. Esta baixa produção do cultivo in vitro tem sido relacionada com o menor grau de diferenciação. Este presente trabalho investigou os efeitos de alguns fatores microambientais, nutricionais e fitohormonais na diferenciação de algumas estruturas foliares, especialmente os TG, de um clone de B. tridentata cultivado in vitro. As plantas cultivadas in vitro apresentaram TG morfologicamente semelhantes aos da planta da casa de vegetação e do clone aclimatado. A utilização do tampão de algodão no frasco de cultura (em substituição ao PVC utilizado comumente como vedação) resultou em maior diferenciação das células paliçádicas do mesofilo. Neste tratamento, foi observado espaço subcuticular formado pela distensão da cutícula dos TG, sugerindo a secreção de material. O uso da vedação de algodão alterou o microambiente do frasco de cultura (diminuição da umidade e alteração das trocas gasosas) e provavelmente, favoreceu a diferenciação destas estruturas foliares. Outra alternativa para aumentar a produção de compostos acumulados nos TG é através do aumento da densidade destas estruturas (número de TG/mm2). Desta forma, investigamos o efeito dos mesmos fatores microambientais, nutricionais e fitohormonais, acima mencionados na densidade dos tricomas, em folhas adultas do clone de B. tridentata cultivado in vitro. Plantas cultivadas em casa de vegetação e clone aclimatado apresentaram maior densidade de TG do que o clone cultivado in vitro. Nos três casos a densidade dos TG foi maior na epiderme superior. Entre os tratamentos aplicados às plantas cultivadas in vitro, foi constatada interação altamente significativa da concentração de sacarose e fotoperiodo. A maior densidade foi favorecida pela luz contínua e 3% de sacarose. Embora o número de TG/mm2 (otimizado) obtido in vitro tenha sido menor do que o apresentado pelas plantas cultivadas em casa de vegetação e pelo done adimatado, ele foi significativo, principalmente se considerarmos o curto tempo de cultivo (31 dias). Portanto, há possibilidade de melhorar estes resultados, aumentando o tempo de exposição aos tratamentos / Abstract: Several species of the genus Baccharis have been used in folk medicine. Pharmacological effects of many of them were confirmed, and, in the last years more than 60 species have been investigated chemically. However, biotechnological studies are rare. B. tridentata Vahl. and B. dracunculifolia De. are native, aromatic plants and they produce essential oil, in which nerolidol, sphatulenol and b-cadinene are major sesquiterpenes. Recently, was demonstrated the inhibitory effect of nerolidol on the growth of Plasmodium falciparum, the most dangerous species that causes malaria. Due the high mortality caused by this disease and the fact of this parasite is becoming resistant to conventional drugs, researches with plants that present therapeutic potential are very important. With the purpose of obtaining a great number of plants with the same characteristics of parents plants, and quicky, micropropagation protocols were developed. The micropropagation of B. tridentata was stablished through shoot apex of a single plant, allowing the formation of homogeneous plant bank (done), with served as explant sources for later experiments. The acc1imatization of micropropagated plants was successful with 80 % of survival in the ex-vitro environrnent. For B. dracunculifolia, due to intense oxidation of explants, the micropropagation was only possible through the germination of seeds. The strong recalcitrant behaviour to the in vitro culture hindered to following the experiments ofthis species. Plants of B. tridentata grow in small cavities on the rocky surfaces of the Itatiaia Plateau. The peculiarity of this habitat took us to accomplish some in vitro physiological studies, seeking understanding adaptation mechanisms of this species, besides allowing the improvement of the micropropagation protocol. We verified the effects of the initial pH variation, the preferential nitrogen source and the concentration of some macronutrients on the growth. After 31 days of in vitro culture, the growth of done resulted in media acidification, with final pH as 3,5. The clone presented larger growth (heigth and dry matter) with NO3 +NH/ mixture, when compared with NO3- or NH4 -r supplied separately. The decrease of magnesium concentration in the culture media favoured the increment of dry matter by roots. Recent studies have demonstrated that shoot cultures can be a viable source of useful secondary compounds, mainly those produced in highly differentiated structures, as glandular trichomes (TG). However, in vUro cultured plants present, in general, smaller production compared with greenhouse grown plants. The lower production feature of in vitro cultured plants has been related with little differentiation degree. This present work investigated some microenvironrnentals, nutritional and phytohormonals factors in the differentiation of clone leaf structures, especially glandular trichomes. TG of tissue cultured plants were morphologically similar to that of greenhouse grown plants and acc1imated clone. The use of cotton lid in the culture vessel (in substitution to pvc closure) resulted in larger differentiation of palisade mesophyll cells. In this treatment, a subcuticular space formed by the detachment of cuticle were observed on the glandular trichomes, suggesting the production of secretory material. The use of cotton lid changes the vessel microenvironrnent (decrease of the humidity and increase of gaseous exchange) and probably, enhanced the leaf structures differentiation. Another altemative to increase the production of TG produced compounds is through the increase of the density of these structures (number of TG/mm2). This way, we investigated the effect of the same microenvironrnentaI, nutritional and phytohormonals factors, in the density of trichomes, in adult leaves of tissue cultured clone. Greenhouse grown plants and acc1imated clone presented larger density of TG than in vitro cultured plants. The density of TG was always larger in adaxial epidermis. Among the treatments applied to the in vitro cultured clone, there was highly significant interation of the sucrose concentration and photoperiod on the trichomes number. The largest density was favoured by the continuous light and 3% of sucrose. Although the best results of TG density obtained in the tissue cultured plants has been smaller than greenhouse grown plants and acclimated clone, the in vitro results were significant, mainly, if consider the short time of culture (31 days). Thus, there is possibility to improve these results increasing the time of exposure to the treatment / Doutorado / Doutor em Biologia Vegetal

Orientador: Kathia Fernandes Lopes Pivetta / Coorientador: Ricardo Tadeu de Faria / Coorientador: Wagner Aparecido Vendrame / Banca: Renata Gimenes / Banca: Marcos Vieira Ferraz / Banca: Paulo Hercilio Viegas Rodrigues / Banca: Claudia Fabrino Machado Mattiuz / Resumo: As plantas da família Orchidaceae são muito apreciadas pelo potencial ornamental, ecológico e econômico. O domínio de técnicas para a domesticação e propagação em massa das espécies é extremamente importante, visto que, possibilita diminuir a coleta predatória, além de reduzir o custo de produção das plantas. O cultivo in vitro é uma técnica que permite produzir grande número de plantas; entretanto, ocorrem muitas perdas durante o período de aclimatização (ex vitro). O aprimoramento dos métodos de conservação de recursos genéticos por meio de criopreservação de sementes em desenvolvimento é uma importante estratégia para a conservação de germoplasma e programas de melhoramento genético de plantas desta família. Este trabalho teve como objetivos avaliar o desenvolvimento in vitro de plântulas em meio de cultura alternativo e diferentes ambientes das orquídeas Amblostoma amblostomoides e Cattleya percivaliana, bem como, diferentes protocolos para a criopreservação de sementes da orquídea Ionopsis utricularioides. Nos experimentos sobre desenvolvimento in vitro de plântulas em meio de cultura alternativo e diferentes ambientes, para cada espécie, o delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado. Inicialmente foram seis tratamentos (T1 - meio MS (Murashige e Skoog) + sala de crescimento - Controle; T2 - MCA (meio de cultura alternativo) + sala de crescimento; T3 - MCA + tela preta com 70% de sombreamento; T4 - MCA + tela azul com 50% de sombreamento; T5 - MCA + tela preta com 50% de sombreamento e T6 - MCA + tela vermelha com 50% de sombreamento) e quatro repetições com 10 plântulas por parcela avaliando-se porcentagem de sobrevivência; para avaliação dos dados biométricos, em razão do alto índice de mortalidade, foram avaliados quatro tratamentos para A. amblostomoides e três tratamentos para C. percivaliana, com 12 repetições para ambas as espécies, sendo uma plântula... / Abstract: Orchids are well appreciated by ornamental, ecological and economic potential. The improvement of genetic resources conservation methods through seeds and protocorms cryopreservation is an important strategy for the conservation of germplasm and plant breeding programs of this family. The domain of techniques for domestication and mass propagation of species is very important because, enables decreasing predation and reduce the cost of production of plants. The in vitro culture is a technique that allows the production of a large numbers of plants; however, there are many losses during the acclimatization period (ex vitro). This work aimed to evaluate different protocols for cryopreservation of Ionopsis utricularioides seeds, as well as the in vitro development of seedlings in alternative culture media and different environments of the orchids, Amblostoma amblostomoides and Cattleya percivaliana. In experiments on cryopreservation of seeds for each species, the experimental design was completely randomized with eight treatments and four replications each. The treatments were: T1) seeds without cryopreservation (control 1); T2) seeds cryopreserved without cryoprotectants (Control 2); T3) glycerol + PVS2; T4) glycerol + PVS2 + phloroglucinol; T5) sucrose + PVS2; T6) sucrose + PVS2 + phloroglucinol; T7) glycerol + sucrose + PVS2; and T8) + sucrose + glycerol + PVS2 + phloroglucinol and 10 repetitions. The variables analyzed were germination percentage, number of seedlings and protocorms and development of the seedlings formed. In the experiments on in vitro development of seedlings in an alternative culture media and in different environments, the experimental design was completely randomized for each species. There were six treatments [T1: MS medium (Murashige e Skoog) - under laboratory conditions; T2: ACM (Alternative Culture Medium) - under laboratory conditions; T3: MCA - black net with 50% shading; T4: MCA - black net with ... / Doutor

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-05-08T13:14:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 143104 bytes, checksum: e10cdeabc002cbd306bcf6dff0777353 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-08T13:14:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 143104 bytes, checksum: e10cdeabc002cbd306bcf6dff0777353 (MD5) Previous issue date: 2003-12-11 / O presente trabalho teve por objetivo aprimorar o protocolo para multiplicação in vitro de videira Vitis aestivalis (Michx.) cv. Norton, sendo dividido em três etapas: seleção de formulações salinas; definição de doses de BAP; e teste do DMSO. As formulações MS, MS 50%, C2D, C2D 50%, B5, NN e Knudson C foram testadas em meio de cultura contendo 4 μM de BAP. Às formulações C2D e C2D 50% foram testados diferentes níveis de BAP (0, 2, 4, 8 e 16 μM), num fatorial 2 x 5. O DMSO foi testado em dois experimentos, constituídos de três tratamentos: 2 e 4 μM de BAP dissolvido em 2 e 4 mL de DMSO, respectivamente; 2 e 4 μM de BAP dissolvido em HCl 1N; e 2 e 4 μM de BAP dissolvido em HCl 1N, com adição de alíquotas de DMSO correspondentes ao primeiro tratamento. O delineamento estatístico foi o de Blocos Casualizados, com seis repetições, nas três etapas. A unidade experimental consistiu de um frasco de cultivo com cinco explantes. O meio de cultura foi constituído de 10 mL L-1 de vitaminas de Staba, 100 mg L-1 de mio-inositol, 30 g L-1 de sacarose, com pH ajustado para 5,70 ± 0,01, acrescido de 10 g L-1 de ágar. Distribuíram-se 30 mL de meio em frascos de vidro de 320 mL, diâmetros externo e interno de 68 mm e 65 mm, e 125 mm de altura, fechados com tampa de polipropileno e filme de PVC, que foram esterilizados em autoclave à 121oC e 1,5 atm, por 20 minutos. Em câmara de fluxo laminar, os explantes foram inoculados verticalmente no meio de cultura. Os frascos foram dispostos em sala de cultura à 27 ± 2oC, umidade relativa de 60 a 70 %, fotoperíodo de 16/8 horas e irradiância de 90 μmol m-2 s-1. A avaliação foi feita aos 30 dias, quanto ao peso fresco de calo, número e comprimento de brotos. As formulações salinas C2D e C2D 50% foram as melhores, destacando-se C2D com maior taxa de multiplicação, brotosm alongados e reduzido peso fresco de calo. A taxa de multiplicação aumentou linearmente nestas formulações, sendo os maiores comprimentos de brotos, 12,10 mm e 7,80 mm, respectivamente, obtidos com 6,14 μM e 5,13 μM. Níveis elevados de BAP reduziram a qualidade dos brotos, aumentando o índice de hiperhidricidade. A dissolução de BAP em DMSO aumentou significativamente o número de brotos. A presença do DMSO como componente do meio de cultura aumentou tanto a massa fresca de calo para ambas as doses, quanto o número de brotos para 4 μM de BAP. O comprimento ideal de brotos na multiplicação in vitro de videira é de, no mínimo 10 mm, para tanto recomenda-se 12,5 μM de BAP para o cv. Norton, nível no qual são obtidos 5,63 brotos/explante, com reduzida formação de calo. / The purpose of this work was to improve a protocol for in vitro multiplication of grape Vitis aestivalis (Michx.) cv. Norton, realized into three stages: salt constitution selection; citokinins (BAP) levels effective determination; and DMSO test on in vitro culture. The salt constitution MS, MS 50%, C2D, C2D 50%, B5, NN and Knudson C were evaluated on medium culture containing 4 μM BAP. Different BAP levels (0, 2, 4, 8 and 16 μM), were evaluated on C2D and C2D 50% salt constitution, in a 2 x 5 factorial. DMSO was evaluated in two experiments with three treatments: 2 and 4 μM BAP dissolved in 2 and 4 mL DMSO, concerning; 2 and 4 μM BAP dissolved in HCl 1N; and 2 and 4 μM BAP dissolved in HCl 1N, adding the same DMSO quantity concerning at first treatment. A randomized complete-block design with six blocks was used in all stages. The experimental unit consisted of a flask containing five explants. The culture medium was composed by 10 mL L-1 Staba vitamins, 100 mg L-1 mio-inositol, 30 g L-1 sucrose, pH adjusted to 5,70 ± 0,01, with 10 g L-1 agar-agar increased. Flasks with 320 mL capacity, 2.68 and 2.56 inches external and intern diameter, 4.92 inch height, containing 30 mL culture medium, were stoppered with polipropilen top and PVC film, and after were sterilized at 121 oC and 1.5 atm, during 20 minutes. In sterile chamber, explants were vertical inoculated in culture medium. Flasks were placed in a growth room at 27 ± 2oC, under a 16-h light//8-h dark photoperiod and a photon flux density of 90 μmol m-2 s-1. Estimation was made at 30 days, for callus fresh weight, shoot number and length. C2D and C2D 50% salt constitution were the best, with higher multiplication rate, length shoots and smaller callus fresh weight in C2D salt. Multiplication rate linear increased in these salt constitutions, with greater shoot length, 0.48 and 0.31 inches, concerning, obtained at 6.14 μM and 5.13 μM. Higher BAP levels caused shoots quality reducing, with hyperhidricity index increase. BAP dissolution in DMSO expressive increased shoot number. Culture medium containing DMSO how a component increased both callus fresh weight in both levels, and shoot number at 4 μM BAP. Ideal shoot number on in vitro multiplication of grape is the least 0.39 inches, for which recommend 12.5 μM BAP to cv. Norton, level which obtains 5.63 shoots/explant, with reducing callusing. / Não foram localizados o cpf e o currículo lattes do autor.

LIMA, M. L. B. Organogênese in vitro em Jatropha curcas L. 2013. 81 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia/Fitotecnia) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-07-24T19:23:27Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_mlblima.pdf: 2070906 bytes, checksum: 6347f9a61364f62036417d36a995ac0d (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-08-06T21:05:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_mlblima.pdf: 2070906 bytes, checksum: 6347f9a61364f62036417d36a995ac0d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-06T21:05:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_mlblima.pdf: 2070906 bytes, checksum: 6347f9a61364f62036417d36a995ac0d (MD5) Previous issue date: 2013 / The physic nut (Jatropha curcas L.) is considered a potential source for the biofuel production, because of its high productivity and oil quality extracted from the seeds. However, its use is unfeasible for human and animal food due to antinutritional factors like the curcin protein and specially the secondary metabolites – phorbol esters. The application of biotechnological tools, like tissue culture, can be used to overcome these limitations. In this context, the aim of this work was to propagate whole plants in vitro using shoot cultures obtained from physic nut seeds germinated in vitro and in vivo; to determine the reproducibility of a regeneration protocol available in the literature, and to define through histological studies, the origin of the regenerated plant in vitro. For the in vitro propagation, shoots were used as explants sources, which were placed on MS medium supplemented with the cytokinins BAP (6- benzylaminopurine), KIN (kinetin) e 2-iP (2- isopentenyl adenine), 2,0 mg.L-1. BAP showed the best results in the development of the shoots. This regulator was used alone or in association with gyberelins for the elongation of the shoots. The indole-3-butyric-acid was used for the rooting. The supplementation of the medium culture with BAP was efficient in the development of the shoots and the elongation was superior with the use of GA3 alone. The rooting was achieved with AIB. To determine the reproducibility of an organogenesis protocol, cotyledons from physic nut seeds germinated in vitro were placed on MS medium supplemented with BAP and AIB for the promotion of aerial which were elongated with BAP and rooting with AIB. The cotyledonary explants were placed with the abaxial and adaxial face in contact with the medium to establish the best position of it in the in vitro regeneration. Whole plants of J. curcas L. were obtained using the protocol tested. The best position of the cotyledonar segment was the adaxial face in contact with the medium, where 56% of the explants formed shoots. The histological analysis was made with cotyledonary explants collected in sequential intervals of 0, 5, 10, 15 e 25 days of permanency in the regeneration medium. The anatomical study allowed the accompaniment of the organogenesis in physic nut, where parenchymal cells next to the adaxial region of the cotyledonar explants were divided and formed the shoots. The data obtained from this work showed that both protocols used, from shoots tips and cotyledonar explants, were efficient in the regeneration process; the histological analysis suggests that regeneration occurs via direct organogenesis and possibly presents multicellular origin. / O pinhão manso (Jatropha curcas L.) é considerado uma fonte potencial para a produção de biocombustíveis, tendo por base a alta produtividade e qualidade do óleo extraído de suas sementes. Entretanto, seu uso é inviabilizado para alimentação humana e animal devido à presença de fatores antinuticionais como a curcina e, em especial, os ésteres de forbol. A utilização de ferramentas biotecnológicas, como a cultura de tecidos, pode vir a minimizar ou solucionar essas limitações. Nesse contexto, o objetivo desse trabalho foi propagar in vitro plantas inteiras via cultivo de ápices caulinares obtidos a partir de sementes de pinhão manso germinadas in vivo e in vitro; determinar a reprodutibilidade de um protocolo de regeneração disponível na literatura e definir, através de estudos histológicos, a origem da planta regenerada in vitro. Para a propagação in vitro utilizou-se ápices caulinares, como explantes, que foram colocados em meio MS suplementado com as citocininas BAP (6-benzilaminoprina), KIN (cinetina) e 2-iP (2-isopenteniladenina) na concentração de 2,0 mg.L-1. O BAP apresentou os melhores resultados no desenvolvimento dos ápices caulinares. Este e a giberelina foram utilizados juntos no mesmo meio ou separados, para a indução do alongamento dos mesmos. O ácido indol-3-butiríco (AIB) foi usado para o enraizamento. A suplementação do meio de cultura com BAP foi eficiente no desenvolvimento dos ápices caulinares e o alongamento apresentou êxito com o uso do GA3 individualmente. O enraizamento com o AIB foi conseguido. A fim de determinar a reprodutibilidade do protocolo de organogênese, cotilédones de sementes de pinhão manso germinadas in vitro foram colocados em meio MS suplementado com BAP e AIB para a indução da formação de partes aéreas, estas foram alongadas com BAP e enraizadas com AIB. Além disso, os explantes cotiledonares foram colocados com a face abaxial e adaxial em contato com o meio de cultivo a fim de estabelecer a melhor posição do mesmo na regeneração in vitro. Plantas inteiras de J. curcas L. foram obtidas a partir da utilização do protocolo testado. A melhor posição do segmento cotiledonar foi a face adaxial em contato com o meio, onde 56% dos explantes formaram partes aéreas. A análise histológica foi feita com a coleta de explantes cotiledonares em intervalos sequenciais de 0, 5, 10, 15 e 25 dias de permanência do meio de regeneração. O estudo anatômico possibilitou o acompanhamento da organogênese do pinhão manso, no qual células parenquimáticas próximas à região adaxial do explante cotiledonar se dividiram e formaram as partes aéreas. Os dados obtidos nesse trabalho mostraram que ambos os protocolos utilizados, a partir de ápices caulinares e de explantes cotiledonares, foram eficientes no processo de regeneração; as análises histológicas sugerem que a regeneração ocorre via organogênese direta e possivelmente apresenta origem multicelular.

Submitted by Maykon Nascimento (maykon.albani@hotmail.com) on 2015-07-13T21:22:04Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Cultivo in vitro de Crambe abyssinica Hochst. germinação, micropropagação, estabilidade genética e anatomia foliar.pdf: 1623266 bytes, checksum: 2418289d7e06cfc5f1456182850c229e (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2015-08-12T14:08:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Cultivo in vitro de Crambe abyssinica Hochst. germinação, micropropagação, estabilidade genética e anatomia foliar.pdf: 1623266 bytes, checksum: 2418289d7e06cfc5f1456182850c229e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-08-12T14:08:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Cultivo in vitro de Crambe abyssinica Hochst. germinação, micropropagação, estabilidade genética e anatomia foliar.pdf: 1623266 bytes, checksum: 2418289d7e06cfc5f1456182850c229e (MD5) Previous issue date: 2014 / Capes / Crambe (Crambe abyssinica) pertence à família Brassicaceae, originário da Etiópia e principalmente destinado à produção de forragem (30 a 32% de proteína bruta). Atualmente, tem sido bastante cultivado visando à extração de óleo vegetal. Com os atuais incentivos à busca de fontes de energias renováveis, o cultivo de crambe vem ganhando papel de destaque na produção de biodiesel por suas diversas vantagens, como: (a) rápido ciclo de vida (colhida em torno de 90 dias); (b) alta produção de biomassa; (c) alta produtividade de sementes (1000 e 1500 kg ha-1); (d) menor custo de produção em relação a outras fontes oleaginosas, como, canola, girassol e soja; (e) um percentual de óleo total na semente entre 32 e 38%, superando, por exemplo, a soja; (f) potencial de fitorremediação, eficiente na descontaminação de arsênio, cromo e outros metais pesados; e (g) elevado percentual de ácido erúcico (50 a 60%) sendo útil na indústria de plástico e lubrificante. Devido aos poucos trabalhos realizados com crambe, abre-se um vasto campo de investigações científicas que tenham como objetivo desenvolver as potencialidades dessa cultura e, consequentemente, melhorar os aspectos agronômicos e tecnológicos para seu emprego na indústria de biodiesel. Nesse contexto, as técnicas de cultivo in vitro foram importantes tanto para a propagação massal, quanto como ferramenta para uma possível aplicação de outras técnicas biotecnológicas, contribuindo para uma produção homogênea, fiel e em larga escala. Portanto, este trabalho teve como objetivo geral avaliar as condições mais favoráveis à germinação, estabelecimento in vitro e micropropagação de Crambe abyssinica Hochst., além de verificar possíveis alterações genéticas e anatômicas, possibilitando a regeneração e produção de plântulas viáveis. Para a germinação e estabecimento in vitro de crambe, as condições mais favoráveis foram em meio B5 ou WPM, na presença ou ausência de pericarpo e na presença de luz. Na micropropagação dessa espécie, uma frequência satisfatória de regeneração de brotos foi obtida a partir de segmentos apicais utilizados como explante em meio contendo 5 μM de BAP (6- benzilaminopurina), e o alongamento foi satisfatório com 1 μM de GA3 (ácido giberélico). Os marcadores moleculares ISSR (Inter-Simples Sequence Repeats) utilizados para a análise da estabilidade genética indicaram que o segmento apical de crambe é um explante confiável para a micropropagação de plantas geneticamente verdadeiras (true-to-tipe), ou seja, mantém a estabilidade genética. As diversas fontes de citocininas e concentrações utilizadas neste trabalho não promoveram mudanças, no sentido de alterar a organização e/ou a espessura em relação ao controle, e as alterações observadas na estrutura e espessura das folhas dos tratamentos de aclimatização prejudicaram o processo de estabelecimento da plântula ex vitro. Contudo, existe a necessidade de um enraizamento e aclimatização eficiente para completa propagação in vitro de crambe. Portanto, este protocolo de regeneração de plantas in vitro de crambe pode ser útil no processo de criação e desenvolvimento de novas cultivares em um tempo mais curto e no melhoramento genético usando explantes apicais. / Crambe (Crambe abyssinica) belongs to the Brassicaceae family, originally from the Ethiopia and primarily designed for forage production (30-32% crude protein). Currently, it has been largely cultivated for extraction of vegetable oil. With the current incentives to the search for renewable energy sources, the cultive of crambe has gained a prominent role in the production of biodiesel for its various advantages, such as: (a) rapid life cycle (harvested around 90 days); (b) high biomass production; (c) high seed crop (1000 and 1500 kg ha-1); (d) lower production cost compared to other oil sources, such as, canola, sunflower and soybean; (e) a percentage of total seed oil between 32 and 38%, surpassing, for example, the soybean; (f) potential for phytoremediation, effective in the decontamination of arsenic, chrome and other heavy metals; and (g) a high percentage of erucic acid (50 to 60%) being useful in lubricant and plastic industry. Because of the few studies with crambe opens up a vast camp of scientific research that aim to develop the potential of this crop and, hence, improve the agronomic and technological aspects to its use in the biodiesel industry. In this context, the techniques of in vitro culture were important for mass propagation, and as a tool for a possible application of other biotechnological techniques, contributing to a homogeneous, true and large scale production. Therefore, this study aimed to evaluate the general conditions more favorable for Crambe abyssinica Hochst. germination, establishment in vitro and micropropagation. To investigate possible genetic and anatomical changes enabling regeneration and production of viable seedlings. For in vitro germination and establishment of crambe, the most favorable conditions were in B5 or WPM medium, in the presence or absence of the pericarp and in the presence of light. In micropropagation of this species, a satisfactory frequency of shoot regeneration was obtained from shoot tip used as explants in medium containing 5 μM BAP (6- benzylaminopurine), and the elongation was satisfactory with 1 μM of GA3 (gibberellic acid). The ISSR (Inter-Simples Sequence Repeats) molecular markers used for genetic analysis indicated that the stability shoot tip crambe is a reliable explant for micropropagation of plants genetically true-to-tipe, maintains genetic stability. The various sources of cytokinins and concentrations used in this study did not cause changes, in way to change the organization and/or thickness compared to control, and that the observed changes in the structure and thickness of the leaves of acclimatization treatments hindered the process ex vitro establishment of seedlings. However, there is a need for an efficient rooting and acclimatization for full in vitro propagation of crambe. Therefore, this protocol for in vitro plant regeneration of crambe may be useful in the process creation and development of new cultivars in a shorter time and in genetic improvement using shoot tips explants.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-06T00:21:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 318764.pdf: 3238245 bytes, checksum: edb0ab063851e305267cd79d0944fd97 (MD5) Previous issue date: 2013 / O Bioma Mata Atlântica é um dos ecossistemas mais ricos em diversidade biológica, contudo é o mais ameaçado do planeta. O processo de devastação causado nesse bioma reduziu sua biodiversidade, afetando suas populações e comunidades como também a flora epifítica. As espécies utilizadas nessa pesquisa são epífitas pertencentes à família Orchidaceae, do gênero Cattleya Lindl., que estão diminuindo suas populações devido à fragmentação deste ecossistema. A conservação ex situ tem sido uma importante ferramenta para a conservação das espécies ameaçadas e a micropropagação permite a conservação destes recursos genéticos vegetais. No presente trabalho foram propostas três investigações relacionadas a morfo-histodiferenciação de orquídeas do gênero Cattleya. Com o objetivo de compreender os estádios referentes a germinação e formação de protocormo até a fase de plântula, estudou-se a germinação assimbiótica de sementes de orquídeas de Cattleya amethystoglossa Linden & Rchb. f. ex Warner in vitro, caracterizando a diferenciação morfológica e histológica durante os processos de germinação e desenvolvimento dos protocormos até o estádio de plântula. Sementes C. amethystoglossa passaram pelo processo de desinfestação e foram inoculadas em meio de cultura MS/2. As análises revelaram que o embrião após intumescimento rompe a testa, caracterizando a germinação e constitui o protocormo, o qual, no desenvolvimento, apresenta-se com primórdios foliares, no ápice, e rizóides, na base. No estádio que surge a primeira raiz passa a constituir a plântula. Nesse estádio em que o protocormo passa a ser uma plântula e esta constituído pelas primeiras folhas, pode-se induzir a formação das estruturas semelhantes a protocormos (ESPs). Utilizando este processo, no capítulo II, foi objetivado investigar através de estudos morfológicos e histológicos a etapa de obtenção das ESPs utilizando o processo de indução de explantes foliares de Cattleya tigrina A. Rich. ex Beer. Como explantes foram utilizados folhas jovens de C. tigrina cultivadas in vitro, inoculadas com a face abaxial em contato com o meio de cultura baseado em MS e suplementado com a metade das concentrações de macro e micronutrientes, suplementado com 20 µM de TDZ para induzir a formação das ESPs. A regeneração destas estruturas teve origem epidérmica, iniciando na face abaxial da folha inoculada. A região basal dos explantes foi a que apresentou maior quantidade de regeneração das ESPs. Estas ESPs apresentavam rizóides, na sua base, com a função de obtenção de nutrientes. A proliferação destas ESPs aconteceu gradativamente e em estádios mais avançados foram mais numerosas e mais volumosas. Estas ESPs foram selecionadas e subcultivadas em meio de cultura isento de fitoreguladores. Com a obtenção destas ESPs, objetivou-se estudos relacionados a morfo-histodiferenciação das ESPs, sob diferentes concentrações de giberelina e sacarose, para regeneração ou desenvolvimento de C. tigrina. As análises revelaram que as ESPs submetidas ao tratamento suplementado com 5 g.L-1 de sacarose e 5 µM ácido giberélico (S5G5) apresentaram uma melhor resposta morfológica e histológica de diferenciação em relação aos outros tratamentos. Estas ESPs permaneceram com a coloração verde, com alongamento caulinar e primórdios foliares. Os tratamentos submetidos com 20 g.L-1 de sacarose (S20G0) e 20 g.L-1 de sacarose e 5 µM giberelina (S20G5), não foram eficientes na regeneração de plantas, observando necrose total e ou parcial das ESPs. Para isso foi proposto realizar análises bioquímicas, verificando o teor de amido, carboidratos totais, clorofila a e b, e carotenóides totais. A partir dos resultados foi constatado que o tratamento S20G0 apresentou as concentrações mais elevadas de teores de carboidrato e amido, remetendo para alta concentração de sacarose no meio. Os teores de clorofila a, b, total e carotenóides nos tratamentos S20G5 e S5G5 apresentaram diferenças significativas quando comparadas com o tratamento S20G0. Sugere-se que a alta concentração de sacarose no meio de cultura pode ter ocasionado redução nos teores de clorofila e consequentemente na fotossíntese. De acordo com os resultados obtidos, foi possível concluir que as ESPs suplementadas com 5 g.L-1 de sacarose e 5 µM de ácido giberélico estiveram mais aptas a formar plantas, pois apresentaram parte aérea alongada, com primórdios foliares. Com estes resultados foi possível elucidar processos de desenvolvimento de C. amethystoglossa, a partir da germinação, e de C. tigrina, a partir da indução para obtenção de ESPs. Análises comparativas das ESPs submetidas a diferentes concentrações de sacarose e giberelina mostraram que elevados níveis de sacarose, para regeneração das ESPs, podem vir a ocasionar necrose das ESPs. O meio suplementado com 5 g.L-1 de sacarose e 5 µM de ácido giberélico, através das análises morfo-histológicas e bioquímicas, revelou ser o mais eficiente para obtenção de plantas. <br> / Abstract: The Atlantic Forest biome is one of the richest ecosystems in biological diversity, yet it is the most endangered in the world. Devastation of this biome has diminished its biodiversity, affecting its populations and communities as well as the epiphytic flora. The species used in this research are epiphytic belonging to the Orchidaceae family, genus Cattleya Lindl., whose populations have declined due to the fragmentation of this ecosystem. Ex situ preservation has been an important tool for managing the preservation of endangered species, and micropropagation enables the preservation of plant genetic resources. In the present work, three investigations were proposed for the morpho and histodifferentiation of orchids of the genus Cattleya. Aiming to understand the stages relating to the germination and formation of protocorm until reaching the plantlet phase, nonsymbiotic in vitro germination of seeds of orchids Cattleya amethystoglossa Linden & Rchb. f. ex Warner was studied, characterizing the morphological and histological differentiation during the processes of germination and development of protocorms until the seedling stage. Seeds of C. amethystoglossa were disinfected and inoculated in a MS/2 culture. The analyses revealed that the embryo after swelling breaks the testa cell, characterizing germination, and constitutes the protocorm, which, during development, presents leaf primordia at the apex and rhizoids at the base. At the stage when the first root emerges, it becomes a plantlet. In this stage, in which the protocorm becomes a seedling and is constituted by the first leaves, one can induce the formation of protocorm-like bodies (PLBs). Using this process, in Chapter II, the objective was to investigate via morphological and histological studies the stage of PLBs development, using the process of induction of leaf explants of Cattleya tigrina A. Rich. ex Beer. As explants, young leaves of C. tigrina cultured in vitro were inoculated with the abaxial surface in touch with the MS medium and supplemented with half of the concentrations of macro and micro nutrients, supplemented with 20 µM of TDZ to induce the PLBs development. The regeneration of such structures had epidermal origin, starting on the abaxial surface of the inoculated leaf. The basal region of the explants presented the greatest PLBs regeneration. Such PLBs had rhizoids at their bases, with the function of obtaining nutrients. Proliferation of the PLBs occurred gradually and in the most advanced stages they were more numerous and voluminous. Such PLBs were selected and sub-cultured in culture medium free of plant growth regulators. Upon the development of the PLBs, the goal was to study the morpho and histodifferentiation of the PLBs under different concentrations of gibberellin and sucrose, for regeneration or development of C. tigrina. The analyses showed that the PLBs undergoing treatment supplemented with 5 g.L-1 of sucrose and de 5 µM of gibberellin acid (S5G5) presented the best morphological and histological differentiation response compared with other treatments. Such PLBs remained with a green color, with elongation of the shoots with leaf primordia. Treatments with 20 g.L-1 of sucrose (S20G0) and 20 g.L-1 of sucrose and 5 µM of gibberellin (S20G5) were not effective in the plants regeneration, and total or partial necrosis of the PLBs was found. As a result, it was suggested to conduct biochemical analyses to determine the concentrations of starch, total carbohydrates, chlorophyll a, b, total and carotenoids. The results showed that treatment S20G0 had the highest concentrations of carbohydrates and starch, attributable to the high concentration of sucrose in the medium. The levels of chlorophyll a, b, total and carotenoids in treatments S20G5 and S5G5 showed significant differences when compared with treatment S20G0. It is suggested that the high sucrose concentration in the culture medium might have caused the reduced amount of chlorophyll and, as a consequence, in photosynthesis. According to the results obtained, it was possible to conclude that the PLBs supplemented with 5 g.L-1 of sucrose and 5 µM of gibberellin acid were more efficient in forming plants, because they showed an elongated shoot with leaf primordia. With these results, it was possible to elucidate the development processes of C. amethystoglossa from germination and of C. tigrina from induction to develop PLBs. Comparative analyses of PLBs with different concentrations of sucrose and gibberellin showed that high levels of sucrose for PLBs regeneration might cause necrosis of the same. The morphological and histological analyses showed that the medium supplemented with 5 g.L-1 of sucrose and 5 µM of gibberellin acid was the most effective for the plants development.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Curso de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais / Made available in DSpace on 2012-10-19T16:25:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Estudo da micropropagação do gênero Prunus, com ênfase à avaliar o comportamento genotípico de diferentes porta-enxertos e a otimização de tipos e concentrações de reguladores de crescimento nas fases de cultura de embriões, estabelecimento, multiplicação, enraizamento e aclimatização das plantas. Busca de um método para a propagação clonal de plantas deste gênero, visando a captura, fixação de genótipos superiores e ganho genético.

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:55:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-31. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:53Z : No. of bitstreams: 1 000859876_20160630.pdf: 471050 bytes, checksum: b283e5cdd6fee1565d98e89bf93e40b0 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-07-01T13:02:23Z: 000859876_20160630.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:03:18Z : No. of bitstreams: 1 000859876.pdf: 729708 bytes, checksum: 0c3f9644fb91e37bed700362170aae04 (MD5) / As plantas da família Orchidaceae são muito apreciadas pelo potencial ornamental, ecológico e econômico. O domínio de técnicas para a domesticação e propagação em massa das espécies é extremamente importante, visto que, possibilita diminuir a coleta predatória, além de reduzir o custo de produção das plantas. O cultivo in vitro é uma técnica que permite produzir grande número de plantas; entretanto, ocorrem muitas perdas durante o período de aclimatização (ex vitro). O aprimoramento dos métodos de conservação de recursos genéticos por meio de criopreservação de sementes em desenvolvimento é uma importante estratégia para a conservação de germoplasma e programas de melhoramento genético de plantas desta família. Este trabalho teve como objetivos avaliar o desenvolvimento in vitro de plântulas em meio de cultura alternativo e diferentes ambientes das orquídeas Amblostoma amblostomoides e Cattleya percivaliana, bem como, diferentes protocolos para a criopreservação de sementes da orquídea Ionopsis utricularioides. Nos experimentos sobre desenvolvimento in vitro de plântulas em meio de cultura alternativo e diferentes ambientes, para cada espécie, o delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado. Inicialmente foram seis tratamentos (T1 - meio MS (Murashige e Skoog) + sala de crescimento - Controle; T2 - MCA (meio de cultura alternativo) + sala de crescimento; T3 - MCA + tela preta com 70% de sombreamento; T4 - MCA + tela azul com 50% de sombreamento; T5 - MCA + tela preta com 50% de sombreamento e T6 - MCA + tela vermelha com 50% de sombreamento) e quatro repetições com 10 plântulas por parcela avaliando-se porcentagem de sobrevivência; para avaliação dos dados biométricos, em razão do alto índice de mortalidade, foram avaliados quatro tratamentos para A. amblostomoides e três tratamentos para C. percivaliana, com 12 repetições para ambas as espécies, sendo uma plântula... / Orchids are well appreciated by ornamental, ecological and economic potential. The improvement of genetic resources conservation methods through seeds and protocorms cryopreservation is an important strategy for the conservation of germplasm and plant breeding programs of this family. The domain of techniques for domestication and mass propagation of species is very important because, enables decreasing predation and reduce the cost of production of plants. The in vitro culture is a technique that allows the production of a large numbers of plants; however, there are many losses during the acclimatization period (ex vitro). This work aimed to evaluate different protocols for cryopreservation of Ionopsis utricularioides seeds, as well as the in vitro development of seedlings in alternative culture media and different environments of the orchids, Amblostoma amblostomoides and Cattleya percivaliana. In experiments on cryopreservation of seeds for each species, the experimental design was completely randomized with eight treatments and four replications each. The treatments were: T1) seeds without cryopreservation (control 1); T2) seeds cryopreserved without cryoprotectants (Control 2); T3) glycerol + PVS2; T4) glycerol + PVS2 + phloroglucinol; T5) sucrose + PVS2; T6) sucrose + PVS2 + phloroglucinol; T7) glycerol + sucrose + PVS2; and T8) + sucrose + glycerol + PVS2 + phloroglucinol and 10 repetitions. The variables analyzed were germination percentage, number of seedlings and protocorms and development of the seedlings formed. In the experiments on in vitro development of seedlings in an alternative culture media and in different environments, the experimental design was completely randomized for each species. There were six treatments [T1: MS medium (Murashige e Skoog) - under laboratory conditions; T2: ACM (Alternative Culture Medium) - under laboratory conditions; T3: MCA - black net with 50% shading; T4: MCA - black net with ...

A regeneração de plantas de Eucalyptus viminalis Labill. Foi obtida através da micropropagação de segmentos nodais de mudas. O desenvolvimento da técnica consistiu da adequação das fases de desinfestação dos explantes e multiplicação, alongamento e enraizamento de brotações sob condições assépticas e controladas de incubação. O meio de cultura básico foi o de MURASHIGE & SKOOG (MS), suplementado com 2% (P/V) de sacarose e solidificado com 0,8 % (P/V) de ágar , além das vitaminas descritas por GAMBORG & WETTER. Segmentos modais com aproximadamente 1 cm de comprimento, obtidos de mudas de 1 ano, foram desinfestados em solução de 1 ou 2% de hipoclorito de sódio durante 5, 10 ou 15 minutos. Tais explantes foram cultivados em meio MS com metade da concentração sais, com adição de BAP e ANA, ambos na concentração de 0,1 mg.l-1 . Na multiplicação empregou-se a combinação de BAP e ANA. Na fase de alongamento, efetuou-se a combinação de concentrações de sais no meio de cultura com adição suplementar de nitrogênio e regimes de luz, além da combinação de carvão ativado com GA3 e AIB. No enraizamento, empregaram-se diferentes concentrações de AIB combinadas com cinetina, em meio MS ou MS/2. Explantes tratados com solução de 1% de hipoclorito de sódio por 10 min. Apresentaram menores taxas de contaminação e oxidação e maior sobrevivência em relação aos demais tratamentos. Múltiplas brotações foram induzidas pela adição de 0,2 mg.l-1 de BAP e 0,1 mg.l-1 de ANA ao meio MS. No alongamento, o uso do carvão ativado, isoladamente, no meio MS, resultou no maior crescimento em altura das brotações. O uso do GA3 mostrou-se detrimental para o alongamento. O melhor enraizamento foi obtido no meio MS/2 suplementado com 0,5 mg.l-1 de AIB. Nesta fase, o meio MS/2 foi mais eficaz que o MS na formação das raízes. Na micropropagação de Eucalyptus viminalis a máxima taxa de multiplicação obtida foi de 5 a 6 brotações por explante, a cada 8 semanas, com percentagem de enraizamento de 66,6 %. Considerando-se o aspecto das brotações, a taxa ótima de multiplicação foi de 4,6 brotações por explante.