O presente trabalho foi realizado em duas etapas experimentais. O objetivo do Experimento 1 foi avaliar o perfil de produção de anticorpos anti-eCG em novilhas Bos taurus e Bos indicus tratadas uma, duas ou três vezes, com 400 e com 2000UI de eCG. O experimento foi realizado em duas réplicas com o mesmo desenho experimental, porém com padrões raciais distintos. Os animais foram divididos em 6 grupos: os grupos eCG2000UI_1x (n = 5), eCG2000UI_2x (n = 5) e eCG2000UI_3x (n = 5) receberam, respectivamente, um, dois e três tratamentos com 2000 UI de eCG, enquanto os grupos eCG400UI_1x (n = 5), eCG400UI_2x (n = 5) e eCG400UI_3x (n = 5) receberam os mesmos tratamentos porém com 400 UI de eCG. Foram realizadas coletas de sangue semanais por um período de 63 dias, em seguida o intervalo entre as coletas foi de 30 e 60 dias totalizando um período de 300 dias. A dosagem dos anticorpos anti-eCG foi realizada por teste ELISA. O número de tratamentos não influenciou a produção de anticorpos anti-eCG; a produção de anticorpos foi maior em fêmeas Bos taurus que em Bos indicus, e a aplicação de 2000 UI de eCG resultou em maiores concentrações de anticorpos que a aplicação de 400 UI nos primeiros 21 dias após o tratamento e na resposta tardia. O objetivo do Experimento 2 foi avaliar a memória imunológica celular e humoral de fêmeas Bos taurus previamente tratadas com 400 e 2000 UI de eCG, e verificar a influência dessa possível memória imunológica na atividade biológica da molécula de eCG. Além dos animais utilizados no experimento anterior, no Experimento 2 foram incluídos outros nove animais sem tratamento prévio com eCG: eCG2000UI_Controle (n = 5) e eCG400UI_Controle (n = 4). No D0 os animais receberam 2 mg de benzoato de estradiol e um dispositivo intravaginal de progesterona (DIB). Quatro dias mais tarde, as fêmeas dos grupos eCG2000UI_1x, eCG2000UI_2x, eCG2000UI_3x e eCG2000UI_Controle receberam 2000 UI de eCG, enquanto as fêmeas dos grupos eCG400UI_1x, eCG400UI_2x, eCG400UI_3x e eCG400UI_Controle receberam 400 UI de eCG. No momento da retirada do DIB (D8) os animais receberam PGF2 e 1 mg de cipionato de estradiol. Foram realizadas coletas de sangue semanais por 32 dias para dosagem de anticorpos, e duas coletas para avaliação da atividade celular proliferativa no D0 e D32. No momento da retirada do DIB as novilhas foram submetidas a exame ultrassonográfico para avaliação da resposta superestimulatória (no. de folículos > 6 mm) e para mensuração do diâmetro do maior folículo nas fêmeas tratadas com 2000 e 400 UI de eCG, respectivamente. O tratamento prévio não gerou memória imunológica humoral, independente da dose e do número de tratamentos realizados. No entanto, foi observada memória imunológica celular, sendo que esta memória foi maior nos animais submetidos a maior número de tratamentos prévios. Foi observada tendência de efeito de réplica na resposta superestimulatória, e correlação negativa entre a concentração de anticorpos e o número de folículos > 6 mm. O tratamento com 400 UI de eCG não mostrou os mesmos efeitos no diâmetro folicular. / The present study was carried out in two experimental steps. Experiment 1 was designed to evaluate the anti-eCG antibodies production in Bos taurus and Bos indicus heifers, in response to 400 and 2000UI of eCG, employed once, twice or three times. This experiment was performed in two identical experimental designs, however, using distinct genetic groups. Animals where randomly divided in six groups: eCG2000UI_1x (n = 5), eCG2000UI_2x (n = 5) and eCG2000UI_3x (n = 5) were respectively treated with one, two and three injections of 2000 UI of eCG. Groups eCG400UI_1x (n = 5), eCG400UI_2x (n = 5) and eCG400UI_3x (n = 5) were submitted to the same treatment protocol aforementioned; however, eCG dose was 400UI. Animals where then submitted to weekly blood sampling during a 63 days period, and then samples were collected within intervals ranging from 30-60 days, totalizing a period of 300 days. Anti-eCG dosage assay was performed by ELISA. Antibody production was not affected by the number of doses; however, was higher in Bos taurus females. Moreover, higher antibodies levels in the first 21 days after treatment and in the late response were observed when 2000 UI of eCG was applied. The Experiment 2 was focused on the evaluation of cellular and humoral immunological memory of Bos Taurus females previously treated with 400 and 2000 UI of eCG, as well as to figure out influence of the possible immunological response on biological activity of eCG molecule. Besides the animals that were used in the first experiment, nine additional heifers were included in the second trial, which were eCG2000UI_Control (n = 5) and eCG400UI_Control (n = 4). The treatment protocol was: on Day 0 (D0) all heifers received 2 mg of estradiol benzoate and one intravaginal progesterone device (DIB). Four days later, groups eCG2000UI_1x, eCG2000UI_2x, eCG2000UI_3x and eCG2000UI_Control received an injection of 2000 UI eCG, while groups eCG400UI_1x, eCG400UI_2x, eCG400UI_3x and eCG400UI_Control received 400 UI. By the time of DIB withdrawal (D8), animals were treated with PGF2 plus 1 mg of estradiol cipionate treatment. Afterwards, weekly blood samples were collected during 32 days for antibodies assay. Two additional blood samples were performed on day D0 and D32 to evaluate the cellular proliferative activity in response to eCG. In order to evaluate the ovarian stimulatory response (number of follicles > 6mm) in heifers treated with 2000 UI of eCG as well as the size of the largest follicle in those heifers treated with 400UI, ultrasound examination was carried by the time of DIB withdrawal. Humoral immunological memory response was not observed in animals previously treated with 400 or 2000 UI of eCG, regardless the number of treatments. Otherwise, cellular immunological memory response was observed and was higher in animals subjected to an increased number of treatments. A tendency of replicate effect in follicle numbers (> 6mm) was observed, as well as a high negative correlation between antibodies concentration and the number of follicles > 6mm. Same results were not observed when 400 UI of eCG treatment was performed.

O aumento dos níveis plasmáticos de glicocorticoides com concomitante diminuição de níveis plasmáticos de andrógenos em resposta a estressores é comumente observado em diversos vertebrados. Adicionalmente, os glicocorticoides, bem como os andrógenos, exercem importantes efeitos imunomodulatórios. Populações naturais de anfíbios respondem a agentes estressores de maneiras variadas, incluindo aumento dos níveis plasmáticos de corticosterona (principal glicocorticoide em anfíbios - CORT), alterações na resposta imune e a diminuição dos níveis plasmáticos de testosterona (T). Utilizando o cativeiro como um agente estressor para populações naturais de anfíbios, investigamos os efeitos da manutenção em cativeiro sobre os níveis plasmáticos de CORT e T, resposta imune (capacidade bactericida do plasma - CBP e fagocitose de células peritoneais) e condição corpórea de indivíduos machos de Rhinella schneideri e R. icterica, a partir de indivíduos coletados em populações naturais e mantidos em cativeiro por 60 e 90 dias, respectivamente. Machos adultos foram amostrados em campo, para coleta de dados basais, transportados e mantidos em cativeiro, onde amostras foram coletadas após 7, 30, 60 e 90 dias. Inicialmente, foi realizada a padronização da metodologia do ensaio de fagocitose das células peritoneais em sapos. Nossos resultados demonstraram que a o ensaio de fagocitose e a análise por citometria de fluxo por imagem resultam em um método confiável e preciso para a análise de atividade fagocítica de células peritoneais de sapos. Em resposta ao cativeiro, ambas as espécies (R. schneideri e R. icterica) apresentaram aumento dos níveis plasmáticos de CORT, diminuição dos níveis plasmáticos de T e resposta imune (CBP e fagocitose), indicando uma condição de estresse crônico. Indivíduos da espécie R. schneideri apresentaram uma acentuada perda da condição corpórea em resposta ao cativeiro, enquanto os indivíduos da espécie R. icterica mantiveram a condição corpórea ao longo do tempo em cativeiro. A CBP esteve positivamente correlacionada com a CORT plasmática quando não houve variação da condição corpórea (R. icterica), enquanto que em R. schneideri, os indivíduos que perderam massa ao longo do tempo apresentaram níveis elevados de CORT plasmática e menores valores de CBP. Adicionalmente, os níveis plasmáticos de T estavam positivamente correlacionados com a fagocitose em ambas as espécies estudadas. Estes resultados indicam que a manutenção em cativeiro pode ser considerada um estressor crônico para sapos, uma vez que promove o aumento de CORT e diminuição de T e resposta imune nestes animais. De maneira associada, a variação da resposta imune em resposta à manutenção em cativeiro depende do parâmetro avaliado e tempo de resposta (dias em cativeiro). Nossos resultados ainda sugerem que a imunomodulação nas condições de cativeiro em sapos pode estar associada às variações de CORT e T plasmática, dependendo de sinalização da condição corpórea do animal / Increased plasma glucocorticoid levels with concomitant decrease in plasma androgen levels in response to stressors are commonly observed in several vertebrates. In addition, glucocorticoids, as well as androgens, plays important immunomodulatory effects. Natural populations of amphibians respond to stressors in different ways, including increased corticosterone (main glucocorticoid in amphibians - CORT) plasma levels, changes in immune responses, and decreased plasma testosterone (T) levels. Given that captivity is a stressor for amphibian natural populations, we investigated the effects of captivity maintenance on plasma CORT and T levels, immune response (plasma bacterial killing ability - BKA and phagocytosis of peritoneal cells) and body condition of male individuals of Rhinella schneideri and R. icterica, from individuals collected in natural populations and kept in captivity for 60 and 90 days, respectively. Adult males were sampled in the field for baseline measurements, transported and kept in captivity, where samples were collected after 7, 30, 60 and 90 days. Initially, we standardized the phagocytosis of peritoneal cells assay for toads. Our results demonstrated that the phagocytosis assay and the imaging flow cytometry analysis result in a reliable and accurate method for the analysis of phagocytic activity of peritoneal cells of toads. In response to captivity, both species (R. schneideri and R. icterica) showed increased plasma CORT, decreased plasma T levels and immune response (BKA and phagocytosis), indicating a chronic stress condition. Individuals of R. schneideri showed accentuated body condition loss in response to captivity, while individuals of R. icterica displayed sustained body condition over time in captivity. BKA was positively correlated with plasma CORT when there was no change in body condition (R. icterica), whereas in R. schneideri, individuals showing the highest body mass loss over time, also presented the highest CORT levels and the lowest BKA values. Additionally, plasma T levels were positively correlated with phagocytosis in both studied species. These results indicate that captivity maintenance can be considered a chronic stressor for toads, promoting increased CORT and decreased T and immune response in these animals. Moreover, the variation in immunity in response to captivity maintenance depends on the evaluated parameter and time (days in captivity). Our results further suggest that immunomodulation in captivity conditions in toads may be associated with changes in plasma CORT and T, depending on the individual\'s body condition. Keywords: Stress, corticosterone, testosterone, immune response, body condition

Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2017-09-04T15:40:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_ivania_deliberalli.pdf: 709384 bytes, checksum: faef8c8ebde38dfcf18e902b5a0410ad (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-09-13T17:55:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_ivania_deliberalli.pdf: 709384 bytes, checksum: faef8c8ebde38dfcf18e902b5a0410ad (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-09-13T17:55:50Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_ivania_deliberalli.pdf: 709384 bytes, checksum: faef8c8ebde38dfcf18e902b5a0410ad (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-13T17:56:13Z (GMT). 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Os antígenos protéicos da membrana externa parecem ser a melhor alternativa para substituir as vacinas atualmente disponíveis, porém, após diversos estudos, nenhum apresentou resultados satisfatórios. O objetivo deste trabalho foi avaliar antígenos recombinantes e preparações vacinais, capazes de conferir proteção de amplo espectro, em hamsters (Mesocricetus auratus). Neste estudo, quatro novas proteínas recombinantes de Leptospira spp foram obtidas e testadas no modelo de leptospirose aguda em hamster para avaliar vacinas experimentais. A análise in silico do genoma de L. interrogans sorogrupo Icterohaemorrhagie sorovar Copenhageni cepa FIOCRUZ L1-130 foi realizada para identificar genes alvo potenciais para o desenvolvimento de vacinas de subunidade. Quatro genes foram selecionados para expressão de proteínas recombinantes em sistema de expressão heteróloga em Escherichia coli: lic10260, lic10365, lic11207 e lic11360, que codificam para prováveis lipoproteína de membrana externa. Os genes foram amplificados a partir do DNA genômico de L. borgpeterseni sorogrupo Ballum cepa 4E. Os procedimentos de clonagem resultaram nos vetores recombinantes pAE/lic10260, pAE/lic10365, pAE/lic11207 e pAE/lic11360. As proteínas recombinantes foram eficientemente expressas nesse sistema de expressão e posteriormente, utilizadas na imunização de hamsters que foram subsequentemente desafiados com dose letal de L. borgpeterseni sorovar Ballum 4E. A resposta imune humoral induzida pelas proteínas foi avaliada por ensaio imunoenzimático (ELISA) e verificou-se que, pelo menos uma das formulações vacinais para cada proteína produziu resposta humoral significativa estatisticamente (p < 0,05). As proteínas rLIC10260, rLIC10365, rLIC11207 e rLIC11360 mostraram-se imunogênicas, tornando promissora sua utilização como vacinas contra leptospirose. / Leptospirosis is a widespread zoonosis caused by spirochetes from genus Leptospira. The disease is considered a problem in both public health and veterinary areas, affecting mainly tropical and subtropical developing countries. In veterinarian medicine, leptospirosis is an important disease for both clinic and production sectors due to the public health risks, reproductive failures and death, culminating in considerable economic losses for the area. Animal vaccination is taken as a prevention measure, however the acquired protection by the vaccines is, in most cases, weak and allows the spreading of the disease. The outer membrane antigens seems to be the best alternative to substitute the currently available vaccines, however, after several studies, none of them presented satisfactory results. The aim of the present work was the production and evaluation of four recombinant antigens in order to elicit broad spectrum protection in hamster, the susceptible experimental model (Mesocricetus auratus). An in silico analysis in L. interrogans serogroup icterohaemorrhagie serovar Copenhageni strain FIOCRUZ L1-130 was run in order to identify potential genes for subunit vaccine development. Four genes were selected, amplified, cloned into vectors and expressed in Escherichia coli: lic10260, lic10365, lic11207, lic11360. These gene products are potential outer membrane lipoproteins and were amplified from L. borgpeterseni serugroup Ballum strain 4E. The cloning procedures resulted in the recombinant vectors pAE/LIC10260, pAE/LIC10365, pAE/LIC11207 and pAE/LIC11360 and its purified products were inoculated in hamsters and their humoral response was evaluated per Enzyme-linked Immunossorbent Assay (ELISA). It was possible to verify that at least one of the vaccinal preparations for each protein was able to induce statistically significant humoral response (p < 0.05). The four obtained proteins showed immunogenic response, making them promising recombinant antigens for use against leptospirosis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-04-20Bitstream added on 2014-06-13T18:41:14Z : No. of bitstreams: 1 junqueira_mep_dr_botfm.pdf: 683998 bytes, checksum: e97592029abff7e2b2e4961aed2d337c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Gap / Nossos estudos objetivaram caracterizar as respostas imune inata e específica induzidas pelas peçonhas do muco e do ferrão do bagre Cathorops agassizii . A coleta dos espécimes foi realizada no complexo Baía-Estuário de Santos e São Vicente, localizado no litoral sul do Estado de São Paulo. As peçonhas (do Muco e do Ferrão) apresentaram perfil eletroforético similar entre si. Induzida a inflamação aguda em um modelo experimental murino, as peçonhas apresentaram igualmente a capacidade de induzir aumento da permeabilidade vascular e também edema de pata. A detecção de Leucotrieno B4 e Prostaglandina E2 no lavado da cavidade peritoneal dos camundongos injetados, com ambas as peçonhas, corroboram esta hipótese. Nossos resultados através da microscopia intravital mostraram que as peçonhas induzem um grande número de leucócitos rolantes nas vênulas pós-capilares com focos de extravasamento leucocitário, principalmente de neutrófilos seguido pelo influxo de macrófagos. Além disso, a peçonha do Ferrão induziu uma resolução mais rápida do influxo leucocitário ao contrário da peçonha do Muco que manteve o infiltrado macrofágico por até 7 dias. De maneira interessante, somente a citocina IL-6 foi detectada no lavado peritoneal induzida principalmente pela peçonha do Muco e as quimiocinas KC e MCP-1, por ambas as peçonhas, expressando naquele momento, a participação destes mediadores no recrutamento de neutrófilos e macrófagos para o sítio da lesão. As peçonhas foram eficazes ao induzir uma produção primária e secundária de anticorpos das classes IgM e IgG anti-venenos. Observamos ainda, uma especificidade dos anticorpos produzidos para os componentes das próprias peçonhas e também uma reatividade antigênica cruzada entre elas. / Our studies aimed to characterize the innate and specific immune responses induced by poisons of the mucus and sting of the catfish Cathorops agassizii. The collection of specimens was accomplished in the complex Bay-Estuary System of Santos and São Vicente located in the south coast of the São Paulo State. Poisons of the Mucus and Sting presented similarities in their electrophorectical profiles. In basis of an Induced process of inflammation throughout an experimental murine model, both poisons equally showed the capacity to increase the vascular permeability and also paw edema. The Leucotrien B4'S and Prostaglandine E2 detection in washings of mice peritoneal cavity injected with both poisons corroborates this hypothesis. Our results through an intravital microscopy procedure also showed that the poisons induced a great number of rolling leukocytes in the post-capillary venules with focus on the leukocyte overflow mainly neutrophiles followed by macrophage influx. Besides, the sting poison Sting induced a faster resolution of the leukocyte influx, as well as, the Mucus poison unlike maintained a macrophage infiltrated for up to 7 days. In an interesting way, only the cytokine IL-6 was detected in peritoneal washings induced mainly by the Mucus poison although Quimiokinins KC and MCP-1 were for both poisons, expressing on that moment the participation of these mediators in the neutrophile and macrophage recruitment for the lesion site. The poisons were also effective in the induction of a primary and secondary production of IgM and IgG classes of antibodies. In this research we still observed a specificity of the antibodies produced for the components of the own poisons and also a crossed antigenic reactivity among them.

Orientador: Antonio Celso Pezzato / Banca: Dirlei Antonio Berto / Banca: Manoel Garcia Neto / Resumo: O presente estudo objetivou avaliar os efeitos da suplementação de diferentes níveis de metionina digestível nas dietas de frangos de corte de 1 a 21 dias de idade, sobre o desempenho animal e o rendimento de carcaça, pelo do método tradicional de dose-resposta, e utilizar a técnica de isótopos estáveis através do turnover tecidual para certificar este procedimento de exigência nutricional. Foram realizados dois ensaios em delineamento inteiramente casualizado, com sete tratamentos que consistiram de níveis de metionina digestível para as fases pré-inicial e inicial, respectivamente: 70% (0,320 e 0,307), 80% (0,360 e 0,331), 90% (0,410 e 0,380), 100% (0,450 e 0,417), 110% (0,500 e 0,460), 120% (0,540 e 0,510) e 130% (0,591 e 0,540) de metionina digestível correspondentes às exigências preconizadas por Rostagno et al. (2011). No ensaio I foram utilizados 875 pintos de corte de um dia de idade alojados em 35 unidades experimentais e avaliou-se o desempenho e o rendimento de carcaça. No ensaio II foram alojados 567 pintos de corte de um dia de idade e avaliou-se o turnover do 13C no músculo peitoral e fígado. Todos os animais foram submetidos à dieta a base de arroz e farelo de soja do primeiro aos 21 dias de idade. No ensaio I foi verificado melhora no desempenho de 1 a 7 dias de idade nos tratamentos 100% e 120% para peso corporal e ganho de peso e de 1 a 21 dias de idade nos tratamentos 100%, 110%, 120% para ganho de peso e peso corporal. Observou-se melhora na conversão alimentar com os tratamentos 100%, 110%, 120% e 130%. Os tratamentos 100% e 120% apresentaram melhora no rendimento de peito, o 110% para gordura abdominal e o 120% para o peso do fígado aos 21 dias de idade. No ensaio II foi verificado diminuição da meia-vida e aumento da taxa metabólica para o músculo peitoral no tratamento 130% e para o fígado no tratamento 80%. Pode-se observar que os tratamentos 100%, 11 ... / Abstract: The present study aimed to evaluate the effects of different levels of digestible methionine in broiler diets on performance, carcass yield through the traditional method of dose-response, and use the stable isotopic of tissue turnover to certificate this procedure of nutritional requirement. Two trials were conducted in a completely randomized design with seven treatments that consisted in levels of digestible methionine to pre-starter and initial phase, respectively: 70% (0,320 e 0,307), 80% (0,360 e 0,331), 90% (0,410 e 0,380), 100% (0,450 e 0,417), 110% (0,500 e 0,460), 120% (0,540 e 0,510) e 130% (0,591 e 0,540) of digestible methionine corresponding to the requirements recommended by Rostagno et al. (2011). In the first trial, 875 one day old chicks were housed in 35 pens to evaluate the performance and carcass yield. In the second trial, 567 one day old chicks were housed to determinate the turnover of carbon-13 in the pectoral muscle and liver. All birds were fed a diet based on rice and soybean meal (predominantly C3) for the first 21 days of life. In the first trial was verified improved performance at 7 days old on treatments 100% and 120% for body weight and weight gain and at 21 days old on treatments 100%, 110% and 120% for body weight and weight gain. It was noted improving on feed conversion with treatments 100%, 110%, 120% and 130%. The treatments 100% and 120% showed improvement on breast yield, the 110% to fat abdominal and the 120% for liver weight at 21 days old. In the second trial was verified reduction of half-life and increase of metabolic rate to the breast muscle on treatment 130% and for liver on treatment 80%. It could be noted that treatments 100%, 110% and 120% improvement the animal performance / Mestre

Orientador: José Maurício Sforcin / Banca: Marjorie de Assis Golim / Banca: Maria Angélica Ehara Waranabe / Banca: Ângela M. V. Campos Soares / Banca: Robson Francisco Carvalho / Resumo: Células dendríticas (DCs) são essenciais para o reconhecimento de patógenos e apresentação de seus antígenos aos linfócitos T, desempenhando papel fundamental no elo entre as respostas imunes inata e adaptativa. A própolis é um produto resinoso, elaborado pelas abelhas a partir de diversas partes das plantas, e tem despertado a atenção dos pesquisadores em virtude de suas inúmeras propriedades biológicas, destacando sua ação imunomoduladora. Assim, o presente projeto de pesquisa teve como objetivo investigar o efeito da própolis sobre a maturação e função de DCs humanas. Foi analisado o efeito da própolis na ativação do NF-кB, expressão de micro-RNAs e marcadores de superfície celular (TLR-4, MHC-II, CD80, CD86 e CD40), produção de citocinas (TNF-, IL-6, IL-10 e IL-12), e atividade bactericida das DCs humanas contra Streptococcus mutans. Tomados em conjunto, os dados sugerem o perfil ativador da própolis em DCs, visto que este produto apícola manteve a ação induzida por LPS tanto na ativação do fator de transcrição NF-кB como na produção de TNF-α, IL-6 e IL-10. Ademais, a inibição na expressão de hsa-miR-148a e hsa-miR-148b aboliu o efeito inibitório dos mesmos sobre a expressão de HLA-DR e também pode ter favorecido a produção de citocinas pró-inflamatórias. O aumento na expressão de hsa-miR-155 pode estar correlacionado ao aumento na expressão de TLR-4 e CD86, além de manter a ativação induzida pelo LPS de HLA-DR e CD40. Estes parâmetros podem estar envolvidos com o aumento na atividade bactericida de DCs contra Streptococcus mutans. Estes dados sugerem que a própolis pode modular positivamente a maturação e função de DCs / Abstract: Dendritic cells (DCs) represent a heterogeneous population of professional antigen presenting cells (APCs) and are essential for recognition and presentation of pathogens to T cells. Propolis, a resinous material produced by bees from various plant sources, exhibits numerous biological properties, highlighting its immunomodulatory action. Here, we assayed the effects of propolis on the maturation and fuction of human DCs, assessing the activation of the transcription factor NF-kB, micro-RNAs and cell markers expression (TLR-4, HLA-DR, CD80, CD86, CD40), cytokines production (TNF-α, IL-6, IL-10, IL-12), and the bactericidal activity against Streptococcus mutans. DCs were generated from monocytes treated with IL-4 and GM-CSF and incubated with propolis and LPS. NF-κB in nuclear extract and cytokines were determined by ELISA. microRNAs expression was analysed by RT-qPCR and cell markers by flow cytometry. Colony-forming units were counted to assess the bactericidal activity of propolis-treated DCs. Propolis activated human DCs, inducing the NF-kB signaling pathway and TNF-, IL-6 and IL-10 production. The inhibition of hsa-miR-148a and hsa-miR-148b abolished the inhibitory effects on HLA-DR and pro-inflammatory cytokines. The increased expression of hsa-miR-155 may be correlated to the increase in TLR-4 e CD86 expression, maintaining LPS-induced expression of HLA-DR and CD40. Such parameters may be involved in the increased bactericidal activity of DCs against Streptococcus mutans. These studies are particularly important to develop DC-based modulation strategies for the identification of promising sources for drug discovery / Doutor

O interesse em efeitos sinérgicos ou antagônicos através de experiências com associações cresceu imensamente nas últimas décadas. Com o objetivo de estudar a associação de dois herbicidas inibidores da ALS (sulfometuron-methyl e chlorimuron-ethyl) em Digitaria insularis, empregou-se dos métodos estatísticos fornecidos por meio das curvas dose-resposta e isobologramas. O conceito de curvas dose-resposta tem sido amplamente utilizado para avaliar os resultados das experiências com herbicidas. No entanto, a abordagem estatística em torno das curvas deve ser cuidadosa; cosiderar as curvas dose-resposta semelhantes quando elas não são pode influenciar muito na comparação entre as moléculas e afetar o cálculo da potência relativa. A potência relativa ajuda a entender qual é a relação de potência entre as moléculas, esse conhecimento é fundamental para os estudos com os herbicidas em associação. Sabendo-se disso foram conduzidos experimentos do tipo dose-resposta em dois tipos de substratos utilizando Digitaria insularis como planta daninha indicadora. Os experimentos foram conduzidos em casa de vegetação do Centro de Pesquisa e Desenvolvimento da DuPont em Paulínia (SP). Para cada molécula foram aplicadas, em pré-emergência, oito doses com quatro repetições cada e quatro plantas testemunha nos diferentes substratos. O substrato A é somente substrato comercial (marca Tropstrato HT&reg;) puro; E o substrato B é uma mistura de solo arenoso, peneirado e livre de contaminação mais substrato comercial na proporção 3:1 v/v. Neste caso ficou evidente a maior capacidade do sulfometuronmethyl em reduzir a biomassa da espécie, as curvas dose-resposta foram descritas pelo modelo log-logístico com os valores de ED50 e as declividades de cada curva variando livremente, pois as hipóteses testadas nos diferentes substratos de curvas paralelas foram rejeitadas. O valor calculado da potência relativa para o nível de resposta de 50% entre os herbicidas CLASSIC&reg; (chlorimuron-ethyl) e CURAVIAL&reg; (sulfometuron-methyl) nas condições desse estudo foi de 8,596 e 44,047 nos Substrato A e B respectivamente. A partir dessa informação foram utilizadas as mesmas condições do experimento anterior para o experimento com as isoboles dos herbicidas em associação, cinco curvas dose-resposta, foram propostas, duas curvas para os produtos isolados e três curvas para as associações em diferentes proporções [(25% : 75%); (50% : 50%); (75% : 25%)] chlorimuron-ethyl / sulfometuron-methyl, totalizando 144 parcelas. Vários modelos isoboles foram testados, o modelo de Concentração Aditiva foi significativamente descartado, mas foi levado em consideração para testar teoricamente o grau de sinergia ou antagonismo que modelos mais complexos podiam fornecer. O modelo de isobole proposto por Hewlett e Plackett (1959) teve ajuste significativo e parâmetro de interação menor que um (&lambda;=0,33). O modelo que mais se ajustou aos dados foi o proposto por Vølund e os resultados também mostraram que nessas condições a associação de sulfometuron-methyl com chlorimuron-ethyl foi antagônica; as isoboles são potentes ferramentas para capturar e descrever associações de herbicidas. Entretanto a literatura mostra que associar duas moléculas e testar em um sistema biológico complexo sofrendo variações das diferentes condições ambientais possíveis pode gerar respostas variáveis, portanto esses resultados devem ser repetidos em outras condições para validar as conclusões ou então serem executados em condições controladas de laboratório e usar organismos vivos de menor complexidade como bioindicador. / The interest in synergistic or antagonistic effects through experiences with associations has immensely grown in recent decades. In order to study the association of two ALS inhibitor herbicides (sulfometuron-methyl and chlorimuronethyl) in Digitaria insularis, the statistical methods provided by the dose-response curves and isobolograms were used. The concept of dose-response curves has been widely used to evaluate the results of herbicide experiments. However, the statistical approach around curves must be careful; considering the dose-response curves when they are not can greatly influence the comparison between molecules and affect the calculation of relative potency. Relative potency helps to understand what the power ratio is between molecules, this knowledge is fundamental for studies with herbicides in association. Knowing this, dose-response experiments were conducted on two types of substrates using Digitaria insularis as an indicator weed. The experiments were conducted in a greenhouse of the DuPont Research and Development Center in Paulínia (SP). For each molecule were applied, in pre-emergence, eight doses with four replicates each and four control plants on different substrates. Substrate A is pure commercial substrate (brand Tropstrato HT&reg;); and substrate B is a mixture of sandy soil, sifted and contamination-free plus commercial substrate in the ratio 3:1 v/v. In this case it was evident the greater capacity of the sulfometuron-methyl to reduce the biomass of the species, the dose-response curves were described by the log-logistic model with the values of ED50 and the slopes of each curve varying freely, since the hypotheses tested in the different substrates of parallel curves were rejected. The calculated value of relative potency for the 50% response level between CLASSIC&reg; (chlorimuron-ethyl) and CURAVIAL&reg; (sulfometuron-methyl) herbicides under the conditions of this study was 8.596 and 44.047 on Substrate A and B respectively. From this information the same conditions of the previous experiment for the isoboles of the herbicides in association were used, five doseresponse curves were proposed, two curves for the isolated products and three curves for the associations in different ratios [25% : 75%); (50% : 50%); (75% : 25%)] chlorimuron-ethyl / sulfometuron-methyl, totaling 144 plots. Isoboles models were tested, the Concentration Additive model was significantly discarded, but was taken into account to theoretically test the degree of synergy or antagonism that more complex models could provide. The isobole model proposed by Hewlett and Plackett (1959) had a significant adjustment and interaction parameter smaller than 1 (&lambda; = 0.33). The model that best fit the data was the one proposed by Vølund and the results also showed that under these conditions the association of sulfometuronmethyl with chlorimuron-ethyl was antagonistic; isoboles are potent tools for capturing and describing herbicide associations. So these results must be repeated in other conditions to validate the conclusions or to be executed in controlled laboratory conditions and to use living organisms of lesser complexity as a bioindicator.

Em testes nos quais uma quantidade considerável de indivíduos não dispõe de tempo suciente para responder todos os itens temos o que é chamado de efeito de Speededness. O uso do modelo unidimensional da Teoria da Resposta ao Item (TRI) em testes com speededness pode nos levar a uma série de interpretações errôneas uma vez que nesse modelo é suposto que os respondentes possuem tempo suciente para responder todos os itens. Nesse trabalho, desenvolvemos uma análise Bayesiana do modelo tri-dimensional da TRI proposto por Wollack e Cohen (2005) considerando uma estrutura de dependência entre as distribuições a priori dos traços latentes a qual modelamos com o uso de cópulas. Apresentamos um processo de estimação para o modelo proposto e fazemos um estudo de simulação comparativo com a análise realizada por Bazan et al. (2010) na qual foi utilizada distribuições a priori independentes para os traços latentes. Finalmente, fazemos uma análise de sensibilidade do modelo em estudo e apresentamos uma aplicação levando em conta um conjunto de dados reais proveniente de um subteste do EGRA, chamado de Nonsense Words, realizado no Peru em 2007. Nesse subteste os alunos são avaliados por via oral efetuando a leitura, sequencialmente, de 50 palavras sem sentidos em 60 segundos o que caracteriza a presença do efeito speededness. / In tests where a reasonable amount of individuals does not have enough time to answer all items we observe what is called eect of Speededness. The use of a unidimensional model from Item Response Theory (IRT) in tests with speededness can lead us to erroneous interpretations, since this model assumes that the respondents have enough time to answer all items. In this work, we propose a Bayesian analysis of the three-dimensional item response models (IRT) proposed by Wollack and Cohen et al (2005) considering a dependency structure between the prior distributions of the latent traits which is modeled using Copulas. We propose and develop a MCMC algorithm for the estimation of the model. A simulation study comparing with the analysis in Bazan et al (2010), wherein an independent prior distribution assumption was presented. Finally, we apply our model in a set of real data from EGRA, called Nonsense Words, held in Peru in 2007, where students are evaluated for their performance in reading.

Neste trabalho são apresentados diversos métodos de localização de vazamentos, desde as técnicas e equipamentos mais elementares, como a inspeção visual e o geofone mecânico, até o uso dos sofisticados armazenadores de ruídos e de modelação computacional. Algumas dessas técnicas são amplamente difundidas e largamente utilizadas pelas empresas de saneamento, outras porém, constituem-se em ótimas promessas para o aperfeiçoamento do controle das perdas físicas nos sistemas de abastecimento. É dada ênfase na utilização do diagrama de resposta em freqüência para localizar e quantificar vazamentos, com especial aplicação às adutoras de água tratada. A técnica de utilização da resposta em freqüência desenvolvida por Lee et al. (2005) é esmiuçada, inclusive acerca do impacto que um vazamento impõe ao diagrama de resposta em freqüência. São abordadas as formas de obtenção do referido diagrama, tanto do ponto de vista do modelo matemático e computacional, quanto dos ensaios de campo necessários. / This work presents some methods for leak location, from de most elementary techniques and equipments, as visual inspection and mechanical geophone, until using sophisticated noise data-logger and computational modeling. Some of these techniques are very well issued and largely used by water companies, but others play excellent promises for the improvement of leak control in systems of water supply. The pattern of the frequency response diagram is used for leak location and quantification, with special application in drinking water pipelines. The frequency response technique developed by Lee et al. (2005) is studied in details, including the impact produced by the leak on the frequency response diagram. The ways to obtain the frequency response diagram, by using mathematical and computational models or necessary field data survey, are also discussed.

Redes Bayesianas são estruturas que combinam distribuições de probabilidade e grafos. Apesar das redes Bayesianas terem surgido na década de 80 e as primeiras tentativas em solucionar os problemas gerados a partir da não resposta datarem das décadas de 30 e 40, a utilização de estruturas deste tipo especificamente para imputação é bem recente: em 2002 em institutos oficiais de estatística e em 2003 no contexto de mineração de dados. O intuito deste trabalho é o de fornecer alguns resultados da aplicação de redes Bayesianas discretas e mistas para imputação. Para isso é proposto um algoritmo que combina o conhecimento de especialistas e dados experimentais observados de pesquisas anteriores ou parte dos dados coletados. Ao empregar as redes Bayesianas neste contexto, parte-se da hipótese de que uma vez preservadas as variáveis em sua relação original, o método de imputação será eficiente em manter propriedades desejáveis. Neste sentido, foram avaliados três tipos de consistências já existentes na literatura: a consistência da base de dados, a consistência lógica e a consistência estatística, e propôs-se a consistência estrutural, que se define como sendo a capacidade de a rede manter sua estrutura na classe de equivalência da rede original quando construída a partir dos dados após a imputação. É utilizada pela primeira vez uma rede Bayesiana mista para o tratamento da não resposta em variáveis quantitativas. Calcula-se uma medida de consistência estatística para redes mistas usando como recurso a imputação múltipla para a avaliação de parâmetros da rede e de modelos de regressão. Como aplicação foram conduzidos experimentos com base nos dados de domicílios e pessoas do Censo Demográfico 2000 do município de Natal e nos dados de um estudo sobre homicídios em Campinas. Dos resultados afirma-se que as redes Bayesianas para imputação em atributos discretos são promissoras, principalmente se o interesse estiver em manter a consistência estatística e o número de classes da variável for pequeno. Já para outras características, como o coeficiente de contingência entre as variáveis, são afetadas pelo método à medida que se aumenta o percentual de não resposta. Nos atributos contínuos, a mediana apresenta-se mais sensível ao método. / Bayesian networks are structures that combine probability distributions with graphs. Although Bayesian networks initially appeared in the 1980s and the first attempts to solve the problems generated from the non-response date back to the 1930s and 1940s, the use of structures of this kind specifically for imputation is rather recent: in 2002 by official statistical institutes, and in 2003 in the context of data mining. The purpose of this work is to present some results on the application of discrete and mixed Bayesian networks for imputation. For that purpose, we present an algorithm combining knowledge obtained from experts with experimental data derived from previous research or part of the collected data. To apply Bayesian networks in this context, it is assumed that once the variables are preserved in their original relation, the imputation method will be effective in maintaining desirable properties. Pursuant to this, three types of consistence which already exist in literature are evaluated: the database consistence, the logical consistence and the statistical consistence. In addition, the structural consistence is proposed, which can be defined as the ability of a network to maintain its structure in the equivalence class of the original network when built from the data after imputation. For the first time a mixed Bayesian network is used for the treatment of the non-response in quantitative variables. The statistical consistence for mixed networks is being developed by using, as a resource, the multiple imputation for evaluating network parameters and regression models. For the purpose of application, some experiences were conducted using simple networks based on data for dwellings and people from the 2000 Demographic Census in the City of Natal and on data from a study on homicides in the City of Campinas. It can be stated from the results that the Bayesian networks for imputation in discrete attributes seem to be promising, particularly if the interest is to maintain the statistical consistence and if the number of classes of the variable is small. Features such as the contingency tables coefficient among variables, on the other hand, are affected by this method as the percentage of non-response increases. The median is more sensitive to this method in continuous attributes.