Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-07-08T14:16:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Urbino da Rocha Tunes.pdf: 1098875 bytes, checksum: ac782c32d15adc75a543331375ca0baf (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2016-08-23T15:50:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Urbino da Rocha Tunes.pdf: 1098875 bytes, checksum: ac782c32d15adc75a543331375ca0baf (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-23T15:50:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Urbino da Rocha Tunes.pdf: 1098875 bytes, checksum: ac782c32d15adc75a543331375ca0baf (MD5) / FAPESB;FBDC;LABIMUNO/ICS/UFBA / Periodontite é uma doença multifatorial que se inicia e é mantida pela agressão das bactérias periodontopatogênicas do biofilme dental subgengival, cuja forma de manifestação clínica é dependente do tipo de resposta imuno-inflamatória provocada pela complexa interação patógenohospedeiro. Dentre essas bactérias, a Porphyromonas gingivalis tem sido associada com o início e progressão da DP, principalmente em indivíduos adultos. Ademais, há evidências de que variações na resposta imune do hospedeiro estão, em parte, sob controle genético. Diante disto, foram objetivos do presente trabalho: ① identificar a presença de Porphyromonas gingivalis no biofilme subgengival; ② avaliar a produção de IL-10 e IFN-g em cultura de células de sangue total (CCST) sob estímulo com extrato dessa bactéria, bem como a produção de IgA, IgG e subclasses (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4); ③ avaliar os polimorfismos dos genes das citocinas IL-1b+3953C/T, TNFa-308G/A, IL-6-174G/C, TGF-b1códons 10T/C e 25G/C, IFN-γ+874T/A e IL-10-1082G/A,-819C/T,-592C/A, e do HLA-DR, -DQ, associando esses achados com a periodontite crônica severa. Oitenta e quatro indivíduos não-fumantes, idade de 30 a 50 anos, de ambos os gêneros, foram selecionados para o estudo: 43 pacientes com periodontite crônica severa constituíram o grupo caso (PCS) e 41 pacientes sem periodontite, o grupo controle (NP). Parâmetros clínicos periodontais foram avaliados. Amostras do biofilme subgengival foram coletadas para identificação da presença de P.gingivalis, usando-se a técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR). Para identificação dos polimorfismos citados, foi extraído o DNA genômico de amostras de sangue periférico, sendo a genotipagem realizada também pela PCR. Dos voluntários selecionados, levando em conta o leucograma respectivo, CCST foi realizada com amostras sangüíneas de 35 indivíduos, 18 do grupo PCS e 17 do grupo NP, estimulada com antígenos bacterianos. As concentrações das citocinas nos sobrenadantes e das imunoglobulinas séricas foram determinadas utilizando-se o teste ELISA. A análise estatística foi realizada usando os testes t-student, Mann- Whitney, Teste de Correlação de Spearman e Teste Exato de Fisher. Foi detectada a presença de P.gingivalis em 29 (67,4%) dos pacientes do grupo PCS enquanto que a presença deste periodontopatógeno não foi observada em nenhum dos indivíduos do grupo NP. Os antígenos testados induziram altas concentrações de IL-10, e baixa de IFN-γ, especialmente P.gingivalis. CCST do grupo PCS apresentou significativamente (p<0,05) maior produção de IL-10, do que do grupo NP, quando foi estimulada com LPS de E.coli e extrato de P.gingivalis. Quanto à resposta imune humoral, os níveis séricos de IgG, IgG1, IgG4 (p£0,001) e IgG2 (p£0,05) anti-P.gingivalis foram significantemente mais elevados no grupo PCS em comparação ao grupo NP. Nos polimorfismos estudados foram encontradas diferenças estatisticamente significativas nas freqüências alélicas, genotípicas e fenotípicas entre os indivíduos do grupo PCS e NP em relação ao gene da IL-1b+3953(C/T); o genótipo homozigoto para o alelo 1 (CC), fenótipo previsto como baixo produtor, teve freqüência significativamente maior (p=0,03) no grupo NP (81,48%) do que no PCS (65%); inversamente, e com tendência de significância estatística (p=0,08), o alelo 2 da IL-1b+3953(T), fenótipo previsto como alto produtor, estava associado mais ao grupo PCS (21,25%) do que ao NP (10,53%). Foi também observada uma freqüência significativamente maior (p<0,05) do alelo HLA-DQB1*05 nos indivíduos do grupo NP em relação ao grupo PCS. A produção elevada de IL-10 e baixa de IFN-γ na CCST estimulada com extrato bruto de P.gingivalis dos pacientes do grupo PCS, bem como elevados níveis de IgG4 anti-Pg, podem sugerir que este periodontopatógeno desvia a resposta imune para um perfil Th2. Por sua vez, os resultados dos polimorfismos sugerem que o genótipo homozigoto para o alelo 1 (CC) da IL-1b+3953(C) pode ser um fator de proteção, assim como o alelo HLA-DQB1*05, e que o alelo 2 IL-1b+3953(T) pode ser um fator de risco para o desenvolvimento da periodontite crônica severa, em mestiços brasileiros.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia / Made available in DSpace on 2012-10-22T15:33:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 224660.pdf: 451595 bytes, checksum: 3e0c71af98b488467aeb316ddc597ae0 (MD5) / Vacinas contra HIV que estimulem resposta imune de mucosas, especialmente no trato genital feminino, podem ser mais eficazes na prevenção ou contenção da infecção pelo HIV. Adenovírus humano (Ad) do sorotipo 5, que têm sido utilizados como vetores de vacinas contra HIV, apresentam como limitação a pré-existência de anticorpos neutralizantes na população. Para superar este problema foi desenvolvido um Ad recombinante a partir de um vírus de origem símia - AdC6gag. Este estudo avaliou a resposta imune celular específica contra HIV em sítios sistêmicos e de mucosa após a imunização intravaginal de camundongos BALB/c com AdC6gag. Demonstrou-se que imunização intravaginal foi capaz de induzir células T CD8+ Gag-específicas no trato genital, linfonodos ilíacos e baço. A resposta imune avaliada através da marcação intracelular de IFN- produzido por células T CD8+ estimuladas por 5 horas com peptídeo contendo Gag foi demonstrada utilizando-se diferentes doses do vetor, mas a dose de 105 PFU de AdC6gag foi capaz de induzir a melhor resposta no trato genital e linfonodos ilíacos 14 dias após a imunização intravaginal. 105 e 104 PFU de AdC6gag induziram a melhor resposta no baço 7 dias após a imunização. A imunização intravaginal com AdC6gag induziu melhor resposta de células T CD8+ no trato genital e linfonodos ilíacos que as imunizações intranasal e intramuscular. As freqüências de células T CD8+ Gag-específicas estimuladas no trato genital pela imunização intravaginal IV (3,8%) e intranasal IN (0,94%) aumentaram com uma estratégia de dose-reforço IN-IV (27,46%) quando se utilizou 105 PFU de AdC6gag. A resposta de células T CD8+ Gag-específicas induzidas com AdC6gag no trato genital e baço é de longa duração, podendo ser detectada 90 dias após a imunização. AdC6gag aumentou a população de células T no trato genital após imunização intravaginal com diferentes doses. As mulheres constituem hoje 50% dos indivíduos infectados e 70 a 80 % dos novos casos de HIV ocorrem através de transmissão heterossexual. A indução de células T CD8+ específicas na mucosa pode ser importante, uma vez que estas células estão implicadas no controle da replicação viral. Este estudo sugere que AdC6gag pode induzir eficientemente células T CD8+ no trato genital, e que estas freqüências podem pode ser aumentadas com uma estratégia de dose reforço com vias de mucosa distintas.

Variações em genes de resposta imune têm sido associadas com a progressão à AIDS. Após a infecção pelo HIV a proteína sérica MBL é capaz de reconhecer N-glicanos presentes na glicoproteína viral gp120. Além disso, TLRs reconhecem diferentes moléculas antigênicas do vírus presentes no interior da célula, como o ssRNA viral reconhecido pelo TLR7 e o DNA proviral reconhecido pelo TLR9. O presente estudo investigou a influência de polimorfismos nos genes MBL2, TLR7 e TLR9 na progressão à AIDS em uma população com ancestralidade Europeia e Africana. A partir da investigação retrospectiva de 3.300 prontuários médicos de pacientes HIV+ em atendimento regular, 107 indivíduos foram classificados quanto à progressão para a AIDS (20 progressores rápidos, 29 progressores lentos e 58 outros). Através de técnicas de biologia molecular, polimorfismos na região promotora (H/L, rs11003125 e X/Y, rs7096206) e no exon-1 (R52C, rs5030737; G54D, rs1800450; G57E, rs1800451) do gene MBL2 foram determinados, assim como do gene TLR7 (Gln11Leu, rs179008) e do gene TLR9 (T-1237C, rs5743836 e G1635A, rs352140). Para avaliar a influência dos genótipos na progressão para AIDS, testes estatísticos como Análise de Sobrevivência (Kaplan-meier), regressão de Cox e regressões logísticas binárias foram realizados; além disso, a presença dos alelos CCR5del32 e HLA27/HLA57 foram utilizados como fator de correção. Foram observadas diferenças significativas na composição étnica dentro das categorias de progressão, 58,6% dos pacientes com progressão lenta eram Afrodescendentes (p<0.05). A Análise de Sobrevivência para o polimorfismo -1237T/C no TLR9 revelou uma associação significativa entre os portadores do alelo C e um tempo mediano maior (10 anos) de progressão à AIDS, quando comparado com os portadores do alelo A (6 anos). Além disso, esta associação também foi reproduzida na regressão multivariada de Cox (0,616 Hz, 95% CI 0,379-1,003, p <0,05), incluindo idade e etnia como variáveis. No entanto, ajustando o modelo para a presença dos alelos CCR5del32 e HLA-B27/57 a associação foi perdida. Já para o polimorfismo +1635G/A no TLR9, ao analisar a variação dentro dos grupos étnicos, encontramos uma associação significativa do alelo A com a progressão rápida para AIDS em Eurodescendentes. Nenhum resultado significativo foi encontrado para as variantes investigadas nos genes TLR7 e MBL2. Nossos resultados sugerem que o background genético é importante na progressão à AIDS, embora todos os genes e variantes responsáveis por este comportamento ainda não estejam identificados. Além disso, os dados indicam uma relação entre os polimorfismos -1237T/C e +1635G/A no gene TLR9 e progressão para a AIDS. / Variations in innate immune response genes have been associated with different AIDS progression. In HIV infection MBL (mannose-binding lectin) recognizes N-glycans present in the viral glicoprotein gp120, and TLRs (toll-like receptors) recognizes different HIV molecules present inside the infected cell; ie TLR7 recognizes to viral RNA and TLR9 to proviral DNA. The present study investigated the influence of MBL2, TLR7 and TLR9 polymorphisms in AIDS progression in a population with European and African ancestry in patients from Southernmost Brazil. From 3,300 medical records of HIV+ patients, 107 were classified according to AIDS progression (20 rapids, 58 chronics and 29 slows AIDS progressors). Promoter region (H/L, rs11003125 e X/Y, rs7096206) and exon-1 region (R52C, rs5030737; G54D, rs1800450; G57E, rs1800451) polymorphisms in the MBL2 gene were determined, as well as in TLR7(Gln11Leu, rs179008) and TLR9 (T-1237C, rs5743836 e G1635A, rs352140). To evaluate the influence of genotypes in the progression to AIDS, statistical tests as Survival Analysis, Cox regression and binary logistic regressions were performed. Significant differences were observed in the ethnic composition within progression categories, 58.6% of slow-AIDS progressors patients were African-derived (p<0.05). Kaplan-Meier curves applied to polymorphism -1237T/C in TLR9 revealed a significant association between C allele carriers and longer time (10 years) for AIDS progression when compared with A allele carriers (6 years). Moreover, this association was also reproduced in the multivariate Cox regression (0.616 Hz, 95% CI 0.379 to 1.003, p <0.05), including age and ethnicity as variables. However, adjusting the model to the presence of the alleles CCR5del32 and HLA-B27/57 the association was lost. For the polymorphism +1635G/A in TLR9 gene, when analyzing the variation within ethnic groups, an statistically significant association of allele A (1.966 HZ, 95% CI 1.052 3.674, p<0.05) with rapid AIDS progression was observed in European-derived patients. No significant results for MBL2 and TLR7 polymorphism and AIDS progression were shown. Our data highlights a relationship between the investigated polymorphisms in TLR9 gene and progression to AIDS. In addition, the results suggests the genetic background is important in HIV-1 infection, although several genes and variants responsible by this behavior remain to be identified.

As populações nativas americanas apresentam uma maior prevalência de doenças infecciosas do que as populações não nativas que habitam o mesmo ambiente. Evidências sugerem que essa maior prevalência seja o resultado de uma maior suscetibilidade às doenças infecciosas. Há uma gama de fatores que são responsáveis por essa maior suscetibilidade, sendo a habilidade de desenvolver uma resposta imune adequada aos patógenos intracelulares o principal deles. Essa habilidade é influenciada, em parte, por fatores genéticos. Vários são os genes relacionados com a diferenciação das células Th0 em Th1 ou Th2. Esses subconjuntos celulares desencadeiam padrões de resposta imune bastante diferenciados que são responsáveis pelo combate aos diferentes antígenos. Estudos que analisaram a suscetibilidade das populações nativas às doenças infecciosas demonstraram uma predominância de um padrão Th2 de resposta imune nesses grupos. Com o objetivo de investigar a variabilidade em genes de resposta imune em ameríndios, neste estudo foram analisados 32 polimorfismos em 18 genes envolvidos com a resposta imune identificados com resistência/suscetibilidade às doenças infecciosas (VDR, SP110, P2X7, PTPN22, IL1β, IL12α, IL12β, IL12Rβ1, IFNγ, IFNγR1, TNFα, TNFR1, IL2, IL4R, IL4, IL8, IL10 e IL6). A amostra foi composta por 98 indivíduos da etnia Aché, 72 indivíduos Guarani-Ñandeva, 72 indivíduos Guarani-Kaiowá e 72 indivíduos Kaingang. A população Kaingang foi polimórfica para todas as variantes analisadas, enquanto que as demais populações apresentaram uma freqüência do alelo menos freqüente (MAF) abaixo de 0,1 em diversos SNPs. As variantes com essa baixa variabilidade foram nos genes SP110, PTPN22, TNF-α, IL-6, IL12Rβ1, IL-10, IFN-γ, TNF-αR1 e IL-12α, associados com um padrão Th1 de resposta imune. O grau de variabilidade dessas populações parece se correlacionar com miscigenação, a população Kaingang é a mais miscigenada e a mais variável, enquanto que a população Aché é não miscigenada e a menos variável. A relação entre baixa diversidade genética em Th1 e predominância de um padrão Th2 poderia explicar, ao menos parcialmente, a alta suscetibilidade das populações ameríndias às doenças infecciosas. A baixa variabilidade observada nesses grupos pode ser o resultado de um efeito fundador, de uma alta taxa de endocruzamento associado com o isolamento durante o processo de formação das tribos ou de seleção natural. Estudos com outras populações ameríndias são necessários para um completo entendimento dos processos evolutivos que moldaram o sistema imune nessa etnia. / The Native Americans have a higher prevalence of infectious diseases than non-native populations living in the same environment. This highest prevalence is the result of a higher susceptibility to infectious diseases. There are several factors that are responsible for this higher susceptibility and the ability to develop adequate immunity to intracellular bacterial pathogens is the main factor. This ability is partly influenced by genetics. There are many genes associated with the Th0 differentiation in Th1 or Th2. These cells subsets trigger differentiated immune response patterns, which are responsible to combat different antigens. Studies that investigated native populations’ susceptibility to infectious diseases showed that they have a predominance of Th2 immune response pattern. The aim of this study was to investigate the variability in response immune genes in Amerindians, considering 32 polymorphisms in 18 genes involves in the immune response, previously identified with resistance/ susceptibility to infectious diseases (VDR, SP110, P2X7, PTPN22, IL1β, IL12α, IL12β, IL12Rβ1, IFNγ, IFNγR1, TNFα, TNFR1, IL2, IL4R, IL4, IL8, IL10 and IL6). The sample was composed by 98 individuals from the Aché population, 72 individuals from Guarani-Ñandeva, 72 individuals from Guarani-Kaiowá and 72 individuals from Kaingang populations. The Kaingang population was polymorphic for all variants investigated. The variants in SP110, PTPN22, TNF-α, IL-6, IL12Rβ1, IL-10, IFN-γ, TNF-αR1 and IL-12α genes showed minor allele frequencies lower than 0.1, which demonstrates that they are not polymorphic in these populations. Overall reduced variability was observed in these genes mainly in those associated with a Th1 immune pattern. degree of variation was associated with admixture; the Kaingang the most admixed population showed more variability than the Aché where no admixture was detected. The relationship between low genetic diversity and Th2 predominance could explain at least partially the high susceptibility of these populations to infectious diseases. The low genetic variability in these genes could be explained through a founder effect or by high inbreeding associated with isolation during the tribalization process. The possibility also exists that these differences might be due to a restricted immune system shaped by natural selection. More Amerindian populations should be investigated to disclose the full spectrum of variation of these immune response genes in Amerindians before a conclusion could be reached.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-14T17:04:39Z No. of bitstreams: 1 TESE-TATIANE SANTANA SALES.pdf: 2251188 bytes, checksum: 871fe88b233e8e23e585f22cc3a33431 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-03-23T12:58:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE-TATIANE SANTANA SALES.pdf: 2251188 bytes, checksum: 871fe88b233e8e23e585f22cc3a33431 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T12:58:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE-TATIANE SANTANA SALES.pdf: 2251188 bytes, checksum: 871fe88b233e8e23e585f22cc3a33431 (MD5) / FAPESB / Na caprino-ovinocultura do nordeste brasileiro observa-se alta prevalência da infecção por Corynebacterium pseudotuberculosis que resulta na Linfadenite Caseosa, gerando prejuízos econômicos significativos. O nematódeo gastrointestinal Haemonchus contortus também infecta os pequenos ruminantes, resultando em prejuízos econômicos e produtivos. Dessa forma, é importante a compreensão da interferência da infecção pelo H. contortus na possível modulação imune contra C. pseudotuberculosis em caprinos. Uma vez que a infecção por C. pseudotuberculosis desenvolve uma resposta Th1 predominante e que o H. contortus, induz uma expressiva estimulação Th2. O presente estudo avaliou a indução de resposta imune humoral e celular contra o Corynebacterium pseudotuberculosis em caprinos co-infectados pelo nematóide Haemonchus contortus. Assim, nos diferentes grupos experimentais, caprinos foram inoculados ou não com 107 UFC de uma linhagem de alta virulência (C57) de C. pseudotuberculosis, por via subcutânea, e com aproximadamente 10.000 larvas infectante L3 de H. contortus por via oral. Foram acompanhados por um período de oito meses até serem necropsiados. Utilizou-se o teste ELISA e westen blotting para o acompanhamento da cinética da resposta e da reatividade específica por anticorpos da classe IgG e a dosagem de IFN- para avaliação da reatividade in vitro, em culturas de sangue periférico estimuladas com antígenos destes dois patógenos. A técnica parasitológica de OPG e a morfométrica das células inflamatórias na mucosa abomasal foram realizadas para avaliação in loco da infecção pelo nematódeo. Os resultados evidenciaram expressivos níveis de anticorpos e uma reduzida produção da citocina IFN- contra o C. pseudotuberculosis nos animais co-infectados, que manifestaram lesões nos linfonodos internos e em algumas vísceras e alta carga parasitária. Ainda nos animais co-infectados observou-se níveis menos expressivos de IgG anti-H. contortus. Quanto ao reconhecimento antigênico através do wesrtern blotting, identificou-se oito proteínas de C. pseudotuberculosis e cinco proteínas do helminto. A ocorrência da resposta imune inata foi observada através da análise morfométrica da mucosa abomasal, onde foram identificados os linfócitos, eosinófilos, plasmócitos e macrófagos em todos os grupos; e uma população de mastócitos expressiva nos grupos infectados com este verme. Com os resultados obtidos conclui-se que as respostas imunes inata e adaptativa contra o H. contortus implicam numa significativa estimulação de mecanismos Th2. Os resultados também sugerem que tal estimulação module negativamente a resposta Th1 contra o C. pseudotuberculosis, entretanto, torna-se necessário novos estudos para a melhor compreensão desta modulação. / In goat and sheep breeding in northeastern Brazil, observed a high prevalence of infection with Corynebacterium pseudotuberculosis resulting in caseous lymphadenitis, causing significant economic losses. Gastrointestinal nematode Haemonchus contortus also infect small ruminants, resulting in economic and production losses. Thus, it is important to understand the interference of infection with H. contortus in possible immune modulation against C. pseudotuberculosis in goats. Once infection with C. pseudotuberculosis develops a predominantly Th1 response and H. contortus, induces a significant stimulation of Th2. This study evaluated the induction of humoral and cellular immune response against Corynebacterium pseudotuberculosis in co-infected goats by Haemonchus contortus. Thus, the different experimental groups, goats were inoculated with or without 107 CFU of a highly virulent strain (C57) of C. pseudotuberculosis, subcutaneously, and approximately 10.000 infective larvae L3 H. contortus orally. They were followed by a period of eight months before being necropsied. We used ELISA and Westen blotting for monitoring the response kinetics and specific reactivity of antibodies of the IgG and IFN- dosage for evaluation of in vitro reactivity in peripheral blood cultures stimulated with antigens of these two pathogens. The parasitological technique OPG and morphometric of inflammatory cells in the abomasal mucosa were performed to on-site evaluation of nematode infection. The results showed significant levels of antibodies and a reduced production of IFN- cytokine against C. pseudotuberculosis in co-infected animals, which showed lesions in lymph nodes and internal in some viscera and high parasite load. Also in co-infected animals there was less significant levels of IgG anti-H.contortus. As for the antigen recognition by westen blotting, it identified eight proteins of C. pseudotuberculosis and five proteins helminth. The occurrence of the innate immune response was observed using the morphometric analysis of the abomasal mucosa were identified where lymphocytes, eosinophils, plasma cells and macrophages in all groups; and a population of mast cells in significant with this worm groups infected. With the results obtained it is concluded that the innate and adaptive immune responses against H. contortus imply a significant stimulation of Th2 mechanisms. The results also suggest that such stimulation negatively modulates the Th1 response against C. pseudotuberculosis, however, it is necessary to further studies to better understand this negative regulation.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-14T19:10:47Z No. of bitstreams: 1 tese Danielle versão impressão.pdf: 1369230 bytes, checksum: 604c9e73ccec35bb56dba2e4a42c429b (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-07T13:17:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 tese Danielle versão impressão.pdf: 1369230 bytes, checksum: 604c9e73ccec35bb56dba2e4a42c429b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-07T13:17:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese Danielle versão impressão.pdf: 1369230 bytes, checksum: 604c9e73ccec35bb56dba2e4a42c429b (MD5) / FAPESB / Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente causador da linfadenite caseosa em caprinos e ovinos caracterizado por formação de granulomas nos linfonodos superficiais e em órgãos internos. Diversas tentativas já foram realizadas para o desenvolvimento de candidatos vacinais que sejam capazes de induzir uma resposta imune protetora eficaz. O presente estudo avaliou indicadores da resposta imune inata e adaptativa em ovinos inoculados com uma linhagem de baixa virulência de C. pseudotuberculosis e a seus antígenos secretados. Cinco ovinos foram inoculados com a dose 109 UFC de uma linhagem de baixa virulência (T1) de C. pseudotuberculosis, cinco com 250μg de antígenos secretados em um meio quimicamente definido (MQD) e três animais foram utilizados para compor o grupo controle. Os animais foram desafiados com uma dose de 2x105 UFC de uma linhagem virulenta de C. pseudotuberculosis, e posteriormente necropsiados. Foram utilizados testes ELISA para identificação de IgM e IgG específica, e dosagem de IFN- para avaliação dos mecanismos humoral e celular. A técnica de PCR em tempo real foi utilizada para avaliação da expressão do RNAm de TNF-α, IL-1β e dos TLRs 2, 4, 9 em células de linfonodos inguinais. Com este experimento, conclui-se que o aumento na produção de IgG e uma maior expressão de RNAm de TNF-α e dos TLRs 2,4 e 9 em células de linfonodos inguinais podem estar associados a uma menor chance de surgimento de lesões em animais inoculados com a cepa de baixa virulência (T1). Os níveis de IFN- estiveram associados à progressão clínica da enfermidade no grupo MQD. / Corynebacterium pseudotuberculosis is the causative agent of caseous lymphadenitis in goats and sheep, which induces the formation of caseous lesions in subcutaneous lymph nodes and in internal organs. Several attempts have already been made for the development of vaccine candidates capable of inducing an effective protective immune response. The present study aimed to evaluate indicators of innate and adaptive immune response in sheep inoculated with a strain of low virulence of C.pseudotuberculosis and their secreted antigens. Five animals were inoculated with a dose 109 CFU of C. pseudotuberculosis of low virulence strain (T1), five with 250μg of secreted antigens in a chemically defined medium (CDM) more 1,5 mg saponins from Quillaja saponaria saponin as adjuvant and three animals were used to compose the control group. Animals were challenged with a dose of 2x105 CFU of virulent strain of C. pseudotuberculosis, and later necropsied. ELISA tests for identification of specific IgM and IgG and dosage of IFN -  were used to evaluate the humoral and cellular response. The technique of real-time PCR was used to evaluate the mRNA expression of TNF - α , IL - 1β and TLRs 2 , 4 , 9 . In this experiment, it was concluded that the increase in IgG production and increased mRNA expression of TNF- α and TLRs 2,4 and 9 may be associated with a lower chance of lesions in animals inoculated with a strain of low virulence of C.pseudotuberculosis. The levels of IFN -  were associated with clinical progression of the disease in MQD group.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-03-03T14:25:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_Med_ Kiyoshi Ferreira Fukutani.pdf: 4159106 bytes, checksum: ca6c9303a7e5ece45bdabcb3ca7d843b (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-07T13:28:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Med_ Kiyoshi Ferreira Fukutani.pdf: 4159106 bytes, checksum: ca6c9303a7e5ece45bdabcb3ca7d843b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-07T13:28:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Med_ Kiyoshi Ferreira Fukutani.pdf: 4159106 bytes, checksum: ca6c9303a7e5ece45bdabcb3ca7d843b (MD5) / CNPq;FAPESB;CAPES; / Introdução: Infecções respiratórias agudas (IRA) apresentam uma elevada morbidade e representam um problema de saúde pública. Objetivos: Detectar , via a presença de RNA, os agentes virais e bacterianos presentes em aspirado nasofaríngeo (ANF) de crianças com idades entre 6-23 meses, portadoras de IRA e detectar o perfil de resposta imune associados. Metodologia: ANF foram submetidos à extração de RNA e esse foi utilizado em ensaios de nCounter empregando sondas desenhadas para a detecção viral e bacteriana e empregando sondas padrão para a detecção da resposta imune. Resultados: na coorte de 60 ANFs obtidos de crianças com IRA, detectamos transcritos de Parainfluenza (1-3), Vírus Sincicial Respiratório (A e B) (21%), Metapneumovirus humanos (5%), Bocavírus, Coronavírus e Vírus Influenza A (3%), Rinovírus (2%), Staphylococcus aureus (77%), Haemophilusinfluenzae (69%), Streptococcuspneumoniae (26%), Moraxellacatarrhalis (8%), Mycoplasmapneumoniae (3%) e Chlamydophilapneumoniae (2%). Dentre os 60 pacientes, 28 apresentaram infecção bacteriana única, 22 pacientes apresentaram a presença de bactérias e vírus, e cinco pacientes apresentaram infecção viral apenas. Em cinco pacientes, a detecção dos transcritos ficou abaixo do ponto de corte e esses foram considerados negativos. Também observamos uma modulação diferencial de genes imunes em ANFs; o número de genes modulados foi reduzido por redução de dimensões. Encontramos 30 genes diferencialmente expressos. Para avaliar as associações entre todas as variáveis, utilizamos a rede Bayesiana e observamos uma associação entre marcadores da resposta imune com carga microbiana. Conclusão: O nCounter é uma técnica sensível para identificar o transcriptoma de ANF, tendo como alvo tanto a resposta imune quanto os patógenos. A análise integrada dos dados revelou um subconjunto de genes relacionados à resposta que interagem diretamente com a carga microbiana e com os sintomas clínicos.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7846_DISSERTAÇÃO FINAL - CORREÇÕES + Ficha + Parecer _Reparado_2.pdf: 1750239 bytes, checksum: 6771fcd952a5a0a0f802782437acdc1c (MD5) Previous issue date: 2014-07-11 / O dimetil dioctadecil amônio (DDA) é um composto quaternário de amônio, formado por um lípido anfifílico sintético ligado a duas cadeias hidrofóbicas de alquilo de 18 carbonos, que mostrou efetivo efeito adjuvante, promovendo respostas imunes humoral e celular contra diversos agentes patogênicos, incluindo Mycobacterium tuberculosis e Chlamydia trachomatis. Neste presente trabalho, nós investigamos a capacidade do adjuvante CAF associado a antígenos totais de Leishmania amazonenses (LaAg) em induzir respostas imunogênicas e protetoras no desafio contra L. chagasi. Assim, camundongos BALB/c foram imunizados por via intranasal com 25 mg de LaAg livre ou associado a 150 mg de CAF em 2 doses intervaladas por 15 dias. A dosagem de transaminases e creatinina no soro dos animais demonstraram a biocompatibilidade e segurança da associação LaAg/CAF. Além disso, observamos significativas produções de IFN-g e NO por esplenócitos estimulados com antígenos do parasito, além de significativas respostas linfoproliferativas e maior percentagem de células de memória (TCD4+ CD44+ CD62L+). Níveis aumentados de IgG total e das subclasses específicas (IgG1 e IgG2a) também foram observadas no grupo vacinado com LaAg associado ao CAF, quando comparado aos controles. De forma semelhante, camundongos vacinados com a formulação e desafiados 15 dias após o reforço com L. chagasi, apresentaram uma significativa diminuição da carga parasitária no baço e fígado, associada a uma maior produção de IFN-g, respostas linfoproliferativas significativamente aumentadas. Juntos, nossos dados demonstraram pela primeira vez viabilidade da vacinação intranasal com LaAg associado ao CAF, como um efetivo mecanismo para a vacinação contra a leishmaniose visceral. Palavras chave: L. chagasi, imunização intranasal, LaAg, CAF, resposta imune.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-09-29T20:14:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BiomarcadoresResistênciaSuscetibilidade.pdf: 3171580 bytes, checksum: def3e8b602b44b6105f51a992438faa6 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-11-07T13:09:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BiomarcadoresResistênciaSuscetibilidade.pdf: 3171580 bytes, checksum: def3e8b602b44b6105f51a992438faa6 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-07T13:09:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BiomarcadoresResistênciaSuscetibilidade.pdf: 3171580 bytes, checksum: def3e8b602b44b6105f51a992438faa6 (MD5) Previous issue date: 2013 / A leishmaniose visceral (LV) tem grande impacto na saúde pública e cães são considerados os principais reservatórios domésticos do parasito. Estudos longitudinais em área endêmica tem demonstrado que a história natural da LV canina (LVC), pode manifestar-se num amplo espectro clínico, desde infecção assintomática até a forma sintomática. Nos últimos anos tem sido observado que cães assintomáticos e soronegativos podem apresentar-se PCR positivo e, estes animais são classificados como CA-I. Interessantemente estes cães apresentam um perfil de resposta imune diferenciado em comparação aos assintomáticos soropositivos (CA-II). Neste contexto, a busca de biomarcadores de progressão clínica é essencial para uma melhor compreensão dos mecanismos imunológicos associados a um perfil de resistência e/ou suscetibilidade na LVC. Neste trabalho, 159 cães de área endêmica, naturalmente infectados por L. infantum, foram distribuídos em quatro grupos de acordo com a forma clínica e os resultados do diagnóstico sorológico e molecular: (i) cães assintomáticos soronegativos/PCR+ para L. infantum (CA-I); (ii) cães assintomáticos soropositivos (CA-II); (iii) cães sintomáticos soropositivos (CS) e (iv) grupo controle (CN) cães sem sinais clínicos com resultados sorológicos e moleculares negativos. Além dos parâmetros hematológicos, uma análise detalhada da resposta celular, através da citometria de fluxo, no contexto ex vivo, foi realizada. Linfócitos T (CD5+, CD4+ e CD8+), células B (CD21+) e monócitos (CD14+) circulantes foram os fenótipos celulares investigados. Adicionalmente, foram realizados estudos in vitro empregando-se biomarcadores de resistência e suscetibilidade para a LVC, relacionados à produção intracitoplasmática de IFN- e IL-4+ por neutrófilos, eosinófilos e linfócitos T (CD4+ e CD8+). Nossos resultados confirmam que a progressão da doença induz anemia, caracterizada pela redução de hemácias, hemoglobina e hematócrito. Já na série branca, foi observado aumento na população de neutrófilos bastonetes e redução de eosinófilos, monócitos e linfócitos. A investigação da resposta imune, baseada no perfil imunofenotípico de células mononucleares do sangue periférico (CMSP), mostrou uma redução no número absoluto de linfócitos T CD5+, e suas subpopulações (CD4+ e CD8+), bem como uma queda no número dos linfócitos B CD21+ e monócitos CD14+ nos animais soropositivos (CA-II e CS). Neutrófilos quando estimulados com antígeno solúvel de L. infantum (ASLi), aumentaram a síntese de IFN-γ+ nos grupos CA-II e CS e diminuíram a produção de IL-4+ no grupo CA-I. Já nos grupos CA-II e CS, as subpopulações de linfócitos T (CD4+ e CD8+), tanto na cultura controle quanto na estimulada com ASLi, também apresentaram uma maior síntese de IFN-γ+ e IL-4+. Estes resultados sugerem que os animais dos grupos CA-II e CS apresentam um perfil imunológico misto (Tipo 1 e 2). Por outro lado, os animais do grupo CA-I não diferem dos animais do grupo CN conferindo a este grupo um perfil de resistência, uma vez que não ocorre queda em nenhuma das populações avaliadas, bem como não há ativação do Tipo 2 com produção de IL-4+. Já os animais do grupo CA-II e principalmente do grupo CS apresentam uma imunossupressão, que acomete tanto o compartimento T como B, além de queda de monócitos circulantes, concomitante a presença de IFN-γ+ e IL-4+ produzidas por neutrófilos e linfócitos T tornando-os incapazes de controlar a replicação parasitária. ____________________________________________________________________ / ABSTRACT: Visceral leishmaniasis (VL) has great impact on public health and dogs are considered the main domestic reservoir of the parasite. Longitudinal studies in endemic areas have shown that the natural history of canine VL (CVL) can manifest itself in a wide clinical spectrum, from asymptomatic to symptomatic form. In recent years it has been observed that asymptomatic and seronegative dogs can present positive PCR, and these animals are classified as AD-I. Interestingly these dogs have a profile of differential immune response compared to asymptomatic seropositive dogs (AD-II). In this context the search for biomarkers of clinical progression is essential for better understanding of the immunological mechanisms associated with a profile of resistance and/or susceptibility in CVL. In this study, 159 animals from an endemic area naturally infected by L. infantum, were divided into four groups according to their clinical forms and the results of serological and molecular diagnosis: (i) asymptomatic dogs seronegative/PCR+ for L. infantum (AD-I), (ii) asymptomatic dogs seropositive (AD-II), (iii) symptomatic dogs seropositive (SD) and (iv) control group (CD) dogs without clinical results with serologic and molecular negative. In addition to the haematological parameters, a detailed analysis of the cellular response by flow cytometry, ex vivo context was performed. T cells (CD5+, CD4+ and CD8+), B cells (CD21+) and monocytes (CD14+) circulating cell phenotypes were investigated. Additionally, in vitro studies were conducted employing biomarkers of resistance and susceptibility to CVL, intracytoplasmic related to production of IFN-γ and IL-4 by neutrophils, eosinophils and T lymphocytes (CD4+ and CD8+). Our results confirm that the progression of the disease induces anemia, characterized by the reduction of red blood cells, hemoglobin and hematocrit. In the white blood cells, we observed an increase in the population of rod neutrophils and reduction of eosinophils, monocytes and lymphocytes. The investigation of immune response, based on the immunophenotypic profile of mononuclear cells from peripheral blood (PBMC) showed a reduction in the absolute number of T lymphocytes CD5+, and their subsets (CD4+ and CD8+) and one drop of B lymphocytes CD21+ and CD14+ monocytes in positive animals (AD-II and SD). Neutrophils when stimulated with soluble antigen of L. infantum (SLA), increased synthesis of IFN-γ in AD-II and SD groups, and presents a decreased production of IL-4 in the AD-I group. In the AD-II and SD groups, subpopulations of T lymphocytes (CD4+ and CD8+) in control and culture stimulated in the with SLA also exhibited greater synthesis of IFN-γ+ and IL-4+. These results suggest that the animals of AD-II and SD groups exhibit a mixed immune profile (Type 1 and 2). In contrast, animals of AD-I group do not differ from the animals of CN group conferring this group a resistance profile, since no resistance fall occurs in any of the populations, and there is no activation of the Type 2 producing IL-4+ cells. The animals of AD-II and SD group mainly exhibit a immunosuppression, which affects both the compartment T and B, besides the decrease of circulating monocytes with the concomitant presence of IFN-γ+ and IL-4+ produced by neutrophils and lymphocytes T making them unable to control parasite replication.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-28Bitstream added on 2014-06-13T19:13:53Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_rk_me_botfm.pdf: 1449236 bytes, checksum: 7642944fe5ad7bf06d645c01bd3ea971 (MD5) / O fungo Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da Paracoccidioidomicose, uma micose sistêmica, endêmica na América Latina. As células dendríticas (DCs) desempenham papel crucial na detecção de patógenos, desencadeamento de uma resposta inicial do hospedeiro, assim como na instrução da resposta imune adaptativa. Mediadores liberados pelas DCs, de uma forma autócrina, modulam as suas funções. Entre esses, destacamos as prostaglandinas e leucotrienos. Assim, avaliamos se DCs humanas produzem PGE2 e LTB4 em resposta ao fungo, a participação de receptores de reconhecimento de padrões moleculares (PRRS) nessa produção, assim como o papel modulador desses eicosanóides sobre a maturação fenotipica dessas células e a produção das citocinas IL-6, IL-10, IL-12, IL-23 e TNF-α. DCs humanas imaturas (CD14- / CD1ahigh / CD83 low) obtidas a partir da diferenciação de monócitos cultivados com GM-CSF e IL-4 (7 dias) liberaram substanciais concentrações de PGE2 e LTB4 que aumentaram significativamente, no caso da PGE2, com incubação com LPS durante 1h, 2h, 4h, 8h, 12h, 18h, 24h ou 48h. No entanto, os níveis de PGE2 e LTB4 foram significativamente inibidos após o desafio com as duas cepas do fungo. Ensaios de bloqueio dos PRRS mostraram que o processo de inibição de PGE2 envolveu o receptor de manose. Adicionalmente, ensaios de fenotipagem mostraram que após o desafio com o fungo, as DCs não alteraram o seu fenótipo de imaturas para o de células maduras. Assim, detectamos uma clara associação entre inibição da produção de PGE2 e LTB4 e a incapacidade do fungo em induzir a maturação de DCs. Ensaios utilizando PGE2 ou LTB4 exógenos confirmaram essa associação. Estas células ainda produzem altos níveis de IL-6... / The fungus Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of paracoccidioidomycosis, a systemic mycosis, endemic in Latin America. Dendritic cells (DCs) play a crucial role in the detection of pathogens, triggering an initial response from the host as well as the instruction of the adaptive immune response. Mediators released by DCs, by an autocrine way, modulate their functions. Among these, we highlight the prostaglandins and leukotrienes. We therefore assessed whether human DCs produce PGE2 and LTB4 in response to fungus, the participation of recognition receptors of molecular patterns (PRRS) in this production, as well as the modulating role of these eicosanoids on phenotypic maturation of these cells and the production of the cytokines IL-6, IL-10, IL-12, IL-23 e TNF-α. Human immature DCs (CD14-/ CD1ahigh/CD83low) derived from the differentiation of monocytes cultured with GMCSF and IL-4 (7 days) released substantial concentrations of PGE2 and LTB4 which increased significantly in the case of PGE2, with incubation with LPS for 1h, 2h, 4h, 8h, 12h, 18h, 24h or 48h. However, the levels of PGE2 and LTB4 were significantly inhibited after challenge with two different strains of the fungus. Trials have shown that blockade of PRRS process involved the inhibition of PGE2 mannose receptor. Additionally, phenotyping assays showed that after challenge with the fungus, DCs did not change their phenotype of immature cells to mature ones. Accordingly, we detected a clear association between inhibition of the production of PGE2 and LTB4 fungus and inability to induce maturation of DCs. Assays using exogenous PGE2 and LTB4 confirmed this association. These cells also produce high levels of IL-6 in response to fungus, which, however, were not associated with inhibition of the production of eisosanóides. Rather than that, these DCs do not produce... (Complete abstract click electronic access below)