Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-01-30T12:53:53Z No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 658528 bytes, checksum: ffd305cbccb6b8d7a75431c6f5b47b01 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-30T12:53:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 658528 bytes, checksum: ffd305cbccb6b8d7a75431c6f5b47b01 (MD5) Previous issue date: 2016-03-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Phenolic compounds are one of the major classes of secondary metabolites of plants and can be categorized into several classes, including phenolic acids, flavonoids and tannins. Several phenolic compounds have shown antimicrobial properties and capability to inhibit the biofilm formation by pathogenic bacteria, including Staphylococcus aureus. This study evaluated the efficacy of phenolic compounds in inhibiting biofilm formation of S. aureus. Flavonoids have been tested hesperetin, hesperidin, myricetin, myricitrin, phloretin, phloridzin and the tannins tannic acid. RN4220 and S. aureus AS-119B strains, which overexpress efflux protein genes were used as test strain. The S. aureus ATCC259233 strain which does not overexpress genes related to efflux proteins was used in tests. The minimum inhibitory concentration (MIC) of phenolic compounds was determined by the microdilution in broth method, while the minimum concentration for biofilm inhibition (MICB50) was determined by the microdilution in broth method with quantification of biofilm formation by absorbance at 595 nm. The tested phenolic compounds at 512 μg ml-1 showed no inhibitory activity on the growth of the strains tested; however, at lower concentrations showed inhibitory effects on biofilm formation by these same strains, the MBIC50 values varying between 1 to 256 μg ml-1, with lower values (1 and 2 μg ml-1) being observed against S. aureus RN-4220. Aglycone flavonoids showed lower MICB50 values than their respective glycone forms. Myricetin, hesperetin, phloretin and tannic acid exhibited biofilm formation inhibition > 70% for S. aureus RN- 4220. The results indicate that the tested phenolic compounds have the potential of inhibiting biofilm formation by S. aureus strains that overexpress efflux pumps. / Os compostos fenólicos formam uma das principais classes de metabólitos secundários de plantas e podem ser categorizados em várias classes, incluindo os ácidos fenólicos, flavonoides e taninos. Diversos compostos fenólicos têm demonstrado propriedades antimicrobianas e de inibição da formação de biofilmes por bactérias patogênicas, incluindo Staphylococcus aureus. Este estudo avaliou a eficácia de compostos fenólicos na inibição da formação de biofilmes por S. aureus. Foram testados os flavonoides hesperidina, hesperetina, miricitrina, miricetina, floredzina, floretina e o tanino ácido tânico. As cepas S. aureus RN4220 e S. aureus AS-119B que superexpressa genes para proteínas de efluxo foram utilizadas como cepas teste. Ainda, a cepa S. aureus ATCC259233, que não superexpressa genes conhecidos relacionados à bomba de efluxo, foi utilizada nos ensaios. A concentração inibitória mínima (CIM) dos compostos fenólicos foi determinada por meio do método de microdiluição em caldo, enquanto a concentração mínima inibitória do biofilme (MBIC50) foi determinada por meio do método de microdiluição em caldo seguida de quantificação da formação de biofilme a 595 nm. Os compostos fenólicos testados não apresentaram atividade antimicrobiana em concentrações igual ou inferiores a 512 μg.ml-1 frente as cepas testadas. Entretanto, esses mesmos compostos apresentaram capacidade de inibição da formação de biofilme por parte das cepas testadas, com os valores de MBIC50 variando de 1 a 256 μg.ml-1, onde os valores mais baixos (1 e 2 μg.ml-1) foram observados frente a S. aureus RN-4220. Os flavonoides agliconas apresentaram menores valores de MBIC50 que suas respectivas formas glicosiladas. Miricetina, hesperetina, floretina e ácido tânico apresentaram percentual de inibição da formação de biofilme > 70% para S. aureus RN- 4220. Os resultados mostram que os compostos fenólicos testados apresentam potencial de inibição da formação de biofilme em cepas de S. aureus que superexpressam genes para proteínas de efluxo.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1115803 bytes, checksum: ef0f3b1a323ecbe3d163791baa7accb5 (MD5) Previous issue date: 2012-02-15 / Pyoderma is one of the most common skin disorders in dogs and Staphylococcus pseudintermedius is the bacterium that is most often isolated from lesions. During recent years a major concern in veterinary dermatology has been the increasing number of methicillin resistant Staphylococcus spp. isolates, that are resistant to several antimicrobials used in dermatological clinic. Infections caused by these resistant bacteria are a major cause of morbidity in pets and can be a source of transmission to humans. The objectives of this work are to review the literature on Staphylococcus pseudintermedius and the resistance in these bacteria. It is also to isolate and identify through biochemical and molecular biology tests, bacteria that causes canine pyoderma, determining their resistance profile to antimicrobials commonly used for this condition by antimicrobial susceptibility test and by the presence of the resistance gene, mecA. Seventy five bacterial isolates were obtained from the 25 animals selected to this study. A total of 97.3% of the isolates submitted to conventional phenotypic tests and API Staph Kit and 96% of those submitted to PCR were identified as Staphylococcus pseudintermedius. Of the 72 isolates submitted to PCR for the identification of the mecA gene, only four did not have this resistance gene. This study alerts to the high number of resistant Staphylococcus pseudintermedius in Brazil, and to the need of performing antimicrobial susceptibility tests to determine the best therapeutic approach, preventing the emergence of multi-resistant bacteria. / As piodermites são uma das afecções dermatológicas mais comumente encontradas nos cães sendo que o Staphylococcus pseudintermedius é a bactéria mais frequentemente isolada das lesões. Durante os últimos anos uma das maiores preocupações na dermatologia veterinária tem sido o crescente número de isolados de Staphylococcus spp. resistentes a meticilina ou seja, resistentes a vários antimicrobianos utilizados na clínica dermatológica. As infecções por estas bactérias resistentes são uma causa importante de morbidade em animais de companhia e podem ser fonte de transmissão para humanos. Objetivou-se com este trabalho rever a literatura acerca de Staphylococcus pseudintermedius e sobre a resistência nestas bactérias. Também foram objetivos isolar e identificar através de testes bioquímicos e de biologia molecular as bactérias causadoras da piodermite canina, determinando o perfil de resistência aos antimicrobianos comumente utilizados para esta afecção através de antibiograma e da presença do gene de resistência, mecA. Dos 25 animais selecionados para o estudo foram obtidos 75 isolados bacterianos. Ao todo, 97,3% dos isolados avaliados pelos testes fenotípicos convencionais e pelo Kit API Staph e 96% dos avaliados pelo PCR Foram identificados como Staphylococcus pseudintermedius. Dos 72 isolados submetidos ao PCR para a identificação do gene mecA apenas quatro não apresentaram o gene de resistência. O presente estudo alerta para o alto número de Staphylococcus pseudintermedius resistentes no Brasil e para a necessidade de se realizar antibiogramas a fim de determinar a melhor abordagem terapêutica, evitando o aparecimento de bactérias multi resistentes.

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1728060 bytes, checksum: 29c473da9426832816bbcb073e84e4f1 (MD5) Previous issue date: 2014-10-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Bacterial resistance to drugs can happen due to different mechanisms. Among these, efflux bombs highlights and these structures are integrant part of membran cell. The increasing incidence of resistant bacteria has undermined the therapeutic value of available antibacterials, creating the necessity, increasingly, the search for alternatives that can reverse or decrease the resistance, as the search for inhibitors of resistance mechanisms. In order to resolve this problem, products from plants (extracts, essencial oils and phytoconstituents) rise as rich research source on drug resistance modulators , that is, drugs that increase antibiotics activity or even revert bacterial resistance. In this work, we investigated how modifiers of antibiotic activity act in Staphylococcus aureus strains that are efflux bombs carriers. The essencial oils used were extracted from Rosmarinus officinalis L., Illicium verum Hook., Cananga odorata, Eucalytus globulus, Pelargonium graveolens , Citrus paradisi, Cymbopogon flexuosus, Melaleuca alternifolia, Mentha Spicata, Origanum vulgare, Cymbopogon Martini, and their major constituents used were 1,8-cineol, Anetol, Trans-Caryophyllene, Citronelol, Limoneno, Citral, Terpenen-4-ol, L-carvone, Carvacrol and Geraniol. Our results show that the natural products evaluated, in general, present significant antibacterial activity, and probably they operate as modifiers of antibiotic activity, strains through reduction of CIM of tested antibiotics (tetracycline, erythromycin and norfloxacin) from 2 to16 fold. The results show that natural products from plants are in fact potential antibiotics adjuvants. / A resistência bacteriana a drogas pode ser ocasionada por diferentes mecanismos. Dentre esses, podemos destacar as chamadas bombas de efluxo as quais são partes integrantes da membrana plasmática. A crescente incidência de bactérias resistentes tem minado o valor terapêutico dos antibacterianos existentes, criando a necessidade, cada vez maior, da busca por alternativas capazes de reverter ou diminuir a resistência. Na tentativa de encontrar uma solução para esse problema, os produtos de origem vegetal (extratos, óleos essenciais e fitoconstituintes) surgem como uma rica fonte de pesquisa na busca de potenciais moduladores da resistência à droga , ou seja, drogas que aumentam a atividade de certos antibióticos ou mesmo revertem a resistência bacteriana. Neste trabalho, avaliamos o efeito modificador da atividade antibiótica em linhagens de Staphylococcus aureus - portadoras das bombas de efluxo - o óleo essencial de Rosmarinus officinalis L., Illicium verum Hook., Cananga odorata, Eucalytus globulus, Pelargonium graveolens , Citrus paradisi, Cymbopogon flexuosus, Melaleuca alternifólia, Mentha Spicata, Origanum vulgare, Cymbopogon Martini e seus constituintes majoritários, 1,8 cineol, Anetol, Trans-Caryophyllene, Citronelol, Limoneno, Citral, Terpinen-4-ol, L-carvone, Carvacrol e Geraniol. Como resultado, observou-se que os produtos naturais avaliados, de maneira geral, apresentaram significativa atividade antibacteriana e podem atuar como modificadores da atividade antibiótica ao reduzirem a CIM dos antibióticos testados (tetraciclina, eritromicina e norfloxacina) de 2 a 16 vezes. Os resultados indicam que produtos naturais de origem vegetal são, de fato, potenciais adjuvantes de antibióticos.

Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-31. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:16:58Z : No. of bitstreams: 1 000860328.pdf: 2119034 bytes, checksum: 0a3650234ea27f17dac36f4e7529cbfd (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Pneumonia associada a ventilação mecânica (PAV) ocorre em pacientes em unidades de tratamento intensivo (UTI) com grande frequência sendo ocupando o primeiro lugar dentre infecções adquirida em sistemas de saúde. Os agentes mais frequentes isolados de PAV são Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter baumannii, os quais variam em frequência de acordo com o centro de estudo. A resistência a oxacilina (MRSA - Methicillin Resistant S. aureus) é amplamente disseminada em hospitais, além dessa espécie carrear diversos fatores de virulência. Dessa forma esse trabalho teve como principal objetivo verificar a influência dos fatores do hospedeiro bem como fatores microbiológicos no desfecho pneumonia com ênfase no estudo genético de S. aureus. Assim foi realizado uma coorte prospectiva de pacientes nas primeiras 48 horas da ventilação mecânica. Foram realizadas duas visitas semanais por até oito semanas para a coleta de aspirado traqueal e dados clínicos. Nos isolados de S. aureus foi traçado o perfil de resistência, clonal por PFGE, tipo sequencial por MLST, virulência, expressão de proteína A e alfa toxina por Western Blot, caracterização e quantificação de PMSs. S. aureus foi a espécie mais isolada na UTI onde 66% desses isolados participaram de eventos infecciosos do sistema respiratório, seguido por Pseudomonas spp. e Acinetobacter spp. MRSA foi isolado numa frequência de 43% classificados como SCCmec tipos I (4%), II (78%) e IV (17%), sendo que 45% desses foram isolados de pacientes com PAV. Os fatores de virulência mais frequentes foram icaA, hla e hld. A análise por PFGE das amostras de pacientes com PAV revelou a presença de grande diversidade clonal. Os tipos sequenciais mais frequentes foram ST105, ST5 e ST398. Fatores de risco independentes para o desfecho PAV por S. aureus foram a produção de PSMbeta 2, gene sea e presença de neoplasia sólida, enquanto os genes hlb e sea estavam... / Ventilator associated pneumonia (VAP) is the first cause of hospital acquired infections in patients in Intensive Care Units (ICU). The most frequent infectious agents isolated in VAP are Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii, which vary according to the hospital. S. aureus methicillin resistant (MRSA) is frequently found in hospital environment, additionally this specie carry several virulence factors responsible to tissue invasion. Thereby, the aim of this work was verify the influence of host factors as well as the microbiologic factors in pneumonia outcome with emphasis in S. aureus genetic study. The study design was a cohort study including patients in the first 48 hours of mechanical ventilation and followed up twice a week for up to 8 weeks. More profound analysis was conducted for S. aureus isolates accessing the resistance profile, clonal characteristics by PFGE, sequence type by MLST, virulence by PCR, protein A and alpha toxin expressions by Western Blot, HPLC for PSM expressions. S. aureus was the most isolated specie in ICU and 66% of the isolates were causing respiratory infections. The frequency of MRSA in our ICU was 43% and the SCCmec types were I (4%), II (78%) e IV (17%). The most frequent virulence factors were icaA, hla e hld. The clonal profile of strains isolated from VAP showed a variety of strains not clustered. The most frequent sequence types in this study were ST105, ST5 and ST398. Independent risk factors for S. aureus VAP were PSMbeta 2 production, the presence of sea gene and solid cancer, while the presence of hlb and sea genes were associated to death. Trauma was the only predictor factor associated to VAP. Regarded to the stratification according to pathogen type, we found that trauma was a risk factor to S. aureus VAP and also for Enterobacteriacea, which also included belonging to female gender and presenting central nervous system disease. Age and steroids usage ...

Made available in DSpace on 2015-04-17T15:02:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 786983 bytes, checksum: eac9b468ba5f066caa74a9a3589e7b0c (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Staphylococcus aureus is widespread in nature and is the bacteria most often found in skin infections, although it is able to colonize many organ in the human body. This pathogen can also to contaminate food and staphylococcal food poisoning is one of foodborne diseases more common around the world. This study aimed to isolate and characterize samples of S. aureus isolates from surface preparation of meat and vegetables in public hospitals located in the city of João Pessoa - Paraíba - Brazil, as the production of lipase, protease, antibiotic resistance profile and detection of mecA. Further, evaluation was made in the production of lipase strains of S. aureus isolated from animals (udder and nasal cavities), food (cottage cheese) and infected human wounds (hospital). It was observed lipase production in isolates from human wounds (43/50) animals (16/30), cheese (34/41), bench preparation of meat (24/24) and surface preparation plant (22 / 24). All isolates surface preparation of meat, vegetables and cheese produced protease precipitation with zones of diameters ranging from <0.5 to 4 mm. Among the 48 S. aureus isolates from food processing surfaces tested, 100% were sensitive to chloramphenicol, norfloxacin and methicillin. Twelve isolates were resistant to erythromycin and tetracycline, whereas all isolates were resistant to penicillin and streptomycin. The fragment corresponding t the mecA gene was not identified among isolates. The lipolytic and proteolytic activities, as well as antibiotic resistance (even those already with no therapeutic value) constitute important epidemiological and genetic markers may contribute to the characterization of samples environment or host-specific, and, if performed periodically to distinguish those new strains endemic. / Staphylococcus aureus está disseminado na natureza de forma variável, e apresenta-se como a bactéria mais frequentemente encontrada em infecções de pele, todavia é capaz de colonizar quase todos os órgãos do corpo humano. Esse patógeno também pode contaminar alimentos. Intoxicação alimentar estafilocócica é uma das doenças veiculadas por alimentos mais comuns em todo o mundo. Este estudo teve como objetivo isolar e caracterizar amostras de S. aureus isolados de superfícies de preparo de carne e vegetais de hospitais públicos situados na cidade de João Pessoa Paraíba Brasil, quanto a produção de lipase, protease, perfil de resistência a antimicrobianos e detecção de gene mecA. Ainda, foi realizada a avaliação da produção de lipase de cepas de S. aureus isoladas de animais (úbere e fossas nasais), alimentos (queijo ricota) e de feridas humana infectadas (ambiente hospitalar). Foi observada a produção de lipase nos isolados de feridas humanas (43/50), animais (16/30), queijo (34/41), bancada de preparo de carne (24/24) e bancada de preparo de vegetais (22/24). Todas as cepas isoladas de bancada de corte de carne, vegetais e de queijo produziram protease com zonas de precipitação de diâmetros variando de < 0,5 a 4 mm. Dentre 48 S. aureus isolados de superfícies de processamento de alimentos testados, 100% foram sensíveis a clorafenicol, norfloxacina e meticilina. Doze isolados foram resistentes a eritromicina e tetraciclina, enquanto todos os isolados foram resistentes à estreptomicina e penicilina. Nas reações de amplificação não foi identificado o fragmento correspondente ao gene mecA entre os isolados avaliados. As atividades lipolítica e proteolítica, bem como resistência a antibióticos (mesmo para aqueles já sem valor terapêutico) se constituem em importantes marcadores genéticos e epidemiológicos podendo contribuir para a caracterização de amostras ambiente ou hospedeiro-específicas, bem como, se realizada periodicamente, para se distinguir novas linhagens daquelas endêmicas.

Made available in DSpace on 2015-04-17T15:03:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1426849 bytes, checksum: b6c01a1f2fb0576dc2e9444cd722636c (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The development of tolerance in S. aureus when exposed to sublethal stress conditions used in food preservation has been observed. Despite the use of the essential oil from Origanum vulgare L. (OVEO) as a preservative in food be considered a promising alternative, there is a lack of scientific studies about its ability to induce the development of direct tolerance and cross-tolerance by food-borne pathogen bacteria. The aim of this study was to investigate the capability of the OVEO to inhibit the growth of Staphylococcus aureus strains isolated from foods, and to evaluate the development of direct tolerance and/or cross-tolerance to salts and organic acids typically used by the food industry after habituation in sublethal amounts of OVEO. Four strains of S. aureus (FRI-S-6; FRI-196-3; FRI-326; ATCC 13565) producing enterotoxins A, B, D and E were used as test-organisms. The values of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of OVEO, sodium chloride (NaCl), potassium chloride (KCl), acetic acid (AA) and lactic acid (LA) were determined by the microdilution method. The ability of strains of enterotoxigenic S.aureus to develop direct tolerance and/or cross-tolerance to NaCl, KCl, AA and LA was evaluated after the exposure of these strains to sulethal amounts (½ MIC and ¼ MIC) of OVEO in Brain Heart Infusion broth (BHI) for 72 hours, followed by the determination of the MIC values of the tested antimicrobial agents. The induction of direct tolerance and/or cross-tolerance was assessed by comparing the MIC values of the antimicrobials against the tested strains before and after the habituation treatment with sublethal amounts of OVEO. The assays were performed in triplicate and the results were expressed in modal value. MIC values of OVEO, NaCl, KCl, AA and LA against the test strains were 2,5-10 &#956;L.mL-1, 200 mg.mL-1, 300 mg.mL-1, 2,5 &#956;L.mL-1e 10 &#956;L.mL-1, respectively. After the exposure of the strains to sublethal concentrations (½ MIC and ¼ MIC) of OVEO, MIC values of this essential oil against the habituated cells were maintained the same or decreased up to five-fold when compared to the non-habituated cells, revealing no induction of direct tolerance. The OVEO not induced the development of cross-tolerance to NaCl, KCl, AA and LA, since the MIC values of these antimicrobials against test strains habituated to sublethal amounts (½ MIC and ¼ MIC) of OVEO were the same or up to six-fold lower when compared to those obtained against the non-habituated cells. These data suggest that sublethal concentrations of OVEO can be applied in food preservation safely, since this essential oil did not induced direct tolerance or cross-tolerance to the tested S. aureus strains. / O desenvolvimento de tolerância em S. aureus frente a condições de estresse subletal aplicadas na conservação dos alimentos tem sido observado. Apesar do uso do óleo essencial de Origanum vulgare L. (OEOV) como conservante em alimentos ser considerado uma alternativa promissora, poucos estudos científicos têm avaliado sua capacidade de induzir o desenvolvimento de tolerância direta e cruzada em bactérias patogênicas de origem alimentar. O objetivo desse estudo foi investigar a capacidade do OEOV em inibir o crescimento de cepas de Staphylococcus aureus isoladas de alimentos, bem como avaliar o desenvolvimento de tolerância direta e/ou cruzada a sais e ácidos orgânicos comumente utilizados pela indústria alimentícia após a exposição das cepas a concentrações subletais do OEOV. Foram utilizadas quatro cepas de S. aureus (FRI-S-6; FRI-196-3; FRI-326; ATCC 13565) produtoras de enterotoxinas. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) do OEOV, cloreto de sódio (NaCl), cloreto de potássio (KCl), ácido acético (AA) e ácido láctico (AL) foi determinada através do método de microdiluição em caldo. A capacidade das cepas enterotoxigênicos de S. aureus desenvolverem tolerância direta e/ou cruzada ao NaCl, KCl, AA e AL foi observada mediante a exposição dessas cepas a quantidades subletais (½ CIM e ¼ CIM) do OEOV em caldo Brain Heart Infusion (BHI) durante 72 horas e posterior determinação da CIM dos agentes antimicrobianos ensaiados. A indução de tolerância bacteriana direta e/ou cruzada foi avaliada através da comparação dos valores de CIM dos antimicrobianos contra as cepas teste antes e após sua habituação às quantidades subletais do OEOV. Os ensaios foram realizados em triplicata e os resultados foram expressos em valores de moda. Os valores de CIM do OEOV, NaCl, KCl, AA e AL contra as cepas de S. aureus testadas foram 2,5 - 10 &#956;L.mL-1, 200 mg.mL-1, 300 mg.mL-1, 2,5 &#956;L.mL-1e 10 &#956;L.mL-1, respectivamente. Após a exposição das cepas às concentrações subletais (½ CIM e ¼ CIM) do OEOV, os valores de CIM desse óleo essencial frente às células habituadas se mantiveram os mesmos ou reduziram até cinco vezes quando comparados aos das células não habituadas, revelando que não houve indução de tolerância direta. O OEOV não induziu o desenvolvimento de tolerância cruzada ao NaCl, KCl, AA e AL, uma vez que os valores de CIM desses antimicrobianos contra as cepas teste habituadas ao OEOV foram iguais ou até seis vezes menores comparados àqueles obtidos contra as células não habituadas. Estes dados sugerem que concentrações subletais do OEOV podem ser aplicadas na conservação de alimentos de forma segura, uma vez que esse óleo essencial não induziu o desenvolvimento de tolerância direta ou cruzada sobre as cepas de S. aureus testadas.

Made available in DSpace on 2015-04-17T15:03:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3546652 bytes, checksum: 8e9dbee6579c5859b11ab942573194a3 (MD5) Previous issue date: 2011-03-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study aimed to evaluate the ability of adhesion, the kinetics of separation, the pattern of biofilm formation of strains of S. aureus isolated from different Food and Nutrition Services from João Pessoa - PB, when cultured in meat-based broth and vegetable-based broth, and incubated at temperatures of 28ºC and 7°C for an extended time (24 72 h). Still, we evaluated the effect of applying sanitizers sodium hypochlorite (250 mg/L) and peracetic acid (30 mg/L) at inactivating bacterial cells in the biofilm matrix formed previously. These experiments were used as coupons (2 x 2 cm) of polypropylene and stainless steel AISI 304, whereas these materials are widely used in the composition of surfaces, equipment and / or utensils used in various types of food services. The results showed a high adhesion capacity of the strains tested in meat-based broth and vegetable-based broth with counts above 5 log CFU/cm2, regardless of surface type and incubation temperature. The detachment of cells on the surface was at least 103 during the first 6 CFU/cm2 contact with agar for both types of substrate used, featuring a high persistence over a prolonged incubation time (24 to 72h). There was not a clear influence from the surface and the temperature used to evaluate the adhesion. In general, for both types of substrate was shown a similar pattern of biofilm formation when strains were subjected to different combinations of surface types and growth temperatures. The number of cells (105-107 CFU/cm2) required for biofilm formation was observed in all experimental systems already after 3 days of incubation followed by a linear decrease after the 6th day, with the exception of strain S28 grown in vegetablebased broth, which showed values around 104 CFU/cm2 the first 24 hours of incubation. A range from 2.6 to 3.7 log CFU/cm2 for strains incubated meat-based broth and 2.0 to 3.3 log CFU/cm2 for strains incubated in vegetable-based broth was observed in reducing cells in the matrix of the biofilm caused by peracetic acid while the sodium hypochlorite reduction was about 2.1 to 2.7 log CFU/cm2 and 1.5 to 2.1 CFU/cm2 for strains grown in meat-based broth and vegetables, respectively. From the results obtained, it can be concluded that the strains tested showed a high capacity for adhesion and biofilm formation on food contact surfaces when exposed to different culture media and environmental characteristics. Furthermore, the sanitizers used, although reducing the number of adhered cells, demonstrate a certain ineffectiveness in removing cells from the biofilm matrix considering the number of remaining cells found after the process of applying sanitizers. / O presente estudo teve como objetivo avaliar a capacidade de adesão, a cinética de separação, a formação de biofilmes de cepas de S. aureus isoladas de diferentes Serviços de Alimentação e Nutrição da cidade de João Pessoa PB, quando cultivadas em caldo substrato base carne e caldo substrato base vegetais, e incubadas em temperaturas de 28ºC e 7ºC por um tempo prolongado (24 72 h) além de avaliar o efeito da aplicação dos sanitizantes hipoclorito de sódio (250 mg/L) e ácido peracético (30 mg/L) em inativar células bacterianas na matriz do biofilme previamente formado. Nestes experimentos foram utilizadas como superfícies-testes minisuperfícies (3 x 3 cm) de polipropileno e de aço inoxidável AISI 304, visto que tais materiais são amplamente utilizados na composição de superfícies, equipamentos e/ou utensílios utilizados nos variados tipos de serviços de alimentação. Os resultados mostraram uma alta capacidade de adesão das cepas avaliadas em caldo substrato base carne e em caldo substrato base vegetal com contagens superiores a 5 log UFC/cm2, independente do tipo de superfície e a temperatura de incubação. O descolamento das células nas superfícies foi de pelo menos 103 UFC/cm2 durante os 6 primeiros contatos com o ágar para os dois tipos de substrato utilizados, caracterizando uma alta persistência durante um tempo prolongado de incubação (24 a 72h). Não foi encontrada uma clara influência em relação à superfície e a temperatura utilizada na avaliação da capacidade de adesão. Em geral, para os dois tipos de substratos utilizados foi demonstrado um padrão de formação de biofilme semelhante, ao final de 15 dias de incubação, quando as cepas foram submetidas às diferentes combinações de tipos de superfícies e temperaturas de crescimento. O número de células (105 107 UFC/cm2) necessários para a formação do biofilme foi observado em todos os sistemas experimentais já após 3 dias de incubação seguidos de uma redução linear após o 6º dia, com exceção da cepa S28 cultivada em caldo substrato base vegetais, que apresentou valores em torno de 104 UFC/cm2 nas primeiras 24h de incubação. Um intervalo de 2,6 3,7 log UFC/cm2 para as cepas incubadas em caldo substrato base carne e de 2,0 3,3 log UFC/cm2 para as cepas incubadas em caldo substrato base vegetal foi observado na redução das células na matriz do biofilme causado pelo ácido peracético enquanto que pelo hipoclorito de sódio a redução foi da ordem de 2,1 2,7 log UFC/cm2 e de 1,5 2,1 UFC/cm2 para cepas cultivadas em caldos substrato base carne e vegetais, respectivamente. A partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que as cepas testadas evidenciam uma elevada capacidade de adesão e formação de biofilme em superfícies de contato de alimentos quando expostas a diferentes meios de cultura e características ambientais. Alem disso, os sanitizantes utilizados, apesar de reduzirem o número de células aderidas às superfícies, demonstraram ineficácia na remoção de células da matriz do biofilme tendo em vista o número de células viáveis encontradas após o processo de aplicação dos sanitizantes.

Orientador: Maria Stella Gonçalves Raddi / Banca: Lourdes Botelho Garcia / Banca: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: Fernando de Sá Del Fiol / Banca: Luiz Marcos da Fonseca / Resumo: O efeito de amoxicilina e ciprofloxacino, agentes antimicrobianos com diferentes mecanismos de ação, sobre alguns fatores relacionados à sua virulência em Staphylococcus aureus ATCC 25923 foi comparado. Efeito pós-antimicrobiano, atividade hemolítica para hemácias de carneiro, atividade de citolisinas extracelulares para células McCoy, susceptibilidade à fagocitose dependente e não dependente de opsonização, por neutrófilos de Rattus albinus norvegicus, foram avaliados em bactérias crescidas na presença de concentração subinibitória (½ CIM) do antimicrobiano e a capacidade de induzir estresse oxidativo foi determinada diretamente sobre as células bacterianas através da detecção da produção de ânion superóxido. Amoxicilina e ciprofloxacino demonstraram efeito sobre o crescimento de S. aureus estatisticamente significativo em relação ao controle, sendo maior para amoxicilina. A atividade hemolítica foi diminuída na presença de amoxicilina e ambos antimicrobianos induziram aumento na atividade de citolisinas extracelulares. A técnica de quimiluminescência dependente de luminol, utilizada para avaliar susceptibilidade à fagocitose através do burst oxidativo de polimorfonucleares neutrófilos, demonstrou que amoxicilina influenciou positivamente a fagocitose dependente de opsoninas e ciprofloxacino estimulou a fagocitose não opsonizada. Visto o burst oxidativo ser um método indireto para a demonstração de fagocitose, a confirmação de células bacterianas fagocitadas/aderidas foi realizada através da observação de esfregaços corados em microscopia ótica comum (1000 x). Apesar de ambos antimicrobianos induzirem aumento de ânion superóxido intracelular, detectado em ensaios de redução de nitroblue tetrazolium (NBT), o ciprofloxacino induziu maior quantidade que a amoxicilina. A demonstração de que diferentes antimicrobianos possam atuar sobre...( Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Amoxycillin and ciprofloxacin are antimicrobials with dissimilar mechanisms of action against bacteria. This is a comparative study of how each of these agents affects some of the factors related to the virulence of the pathogenic strain of Staphylococcus aureus ATCC 25923. The post-antibiotic effect, hemolytic activity against sheep erythrocytes, cytolysin activity against McCoy cells and susceptibility to opsonin-dependent and independent phagocytosis by neutrophils from Rattus albinus norvegicus were assessed in bacteria grown in a subinhibitory concentration (½ MIC) of each agent. Induction of oxidative stress was observed directly by detecting superoxide production in response to the bacteria. Both the antimicrobials exerted effect on the growth of S. aureus, which was significantly different from the growth of controls, though amoxycillin had the stronger effect. Hemolytic activity was diminished in the presence of amoxycillin, but both agents induced an increase in the activity of secreted cytolysins. By employing luminol-dependent chemiluminescence to assess the susceptibility of the bacteria to phagocytosis by detecting the respiratory burst in polymorphonuclear neutrophils, it was shown that amoxycillin had a positive effect on opsonin-dependent phagocytosis, while ciprofloxacin stimulated non-opsonized phagocytosis. Since detection of the respiratory burst is an indirect demonstration of phagocytosis, direct observation of stained slides under the light microscope at 1000 × magnification was used to confirm the presence of bacteria ingested by and adhering to neutrophils. While both agents induced a rise in the intracellular level of superoxide, assayed by nitroblue tetrazolium reduction, ciprofloxacin produced the stronger response. The demonstration that distinct antimicrobials... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Banca: Carlos Magno Castelo Branco Fortaleza / Banca: Ricardo de Souza Cavalcante / Banca: Antnio Carlos Campos Pignatari / Resumo: Pneumonia associada a ventilação mecânica (PAV) ocorre em pacientes em unidades de tratamento intensivo (UTI) com grande frequência sendo ocupando o primeiro lugar dentre infecções adquirida em sistemas de saúde. Os agentes mais frequentes isolados de PAV são Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter baumannii, os quais variam em frequência de acordo com o centro de estudo. A resistência a oxacilina (MRSA - Methicillin Resistant S. aureus) é amplamente disseminada em hospitais, além dessa espécie carrear diversos fatores de virulência. Dessa forma esse trabalho teve como principal objetivo verificar a influência dos fatores do hospedeiro bem como fatores microbiológicos no desfecho pneumonia com ênfase no estudo genético de S. aureus. Assim foi realizado uma coorte prospectiva de pacientes nas primeiras 48 horas da ventilação mecânica. Foram realizadas duas visitas semanais por até oito semanas para a coleta de aspirado traqueal e dados clínicos. Nos isolados de S. aureus foi traçado o perfil de resistência, clonal por PFGE, tipo sequencial por MLST, virulência, expressão de proteína A e alfa toxina por Western Blot, caracterização e quantificação de PMSs. S. aureus foi a espécie mais isolada na UTI onde 66% desses isolados participaram de eventos infecciosos do sistema respiratório, seguido por Pseudomonas spp. e Acinetobacter spp. MRSA foi isolado numa frequência de 43% classificados como SCCmec tipos I (4%), II (78%) e IV (17%), sendo que 45% desses foram isolados de pacientes com PAV. Os fatores de virulência mais frequentes foram icaA, hla e hld. A análise por PFGE das amostras de pacientes com PAV revelou a presença de grande diversidade clonal. Os tipos sequenciais mais frequentes foram ST105, ST5 e ST398. Fatores de risco independentes para o desfecho PAV por S. aureus foram a produção de PSMbeta 2, gene sea e presença de neoplasia sólida, enquanto os genes hlb e sea estavam... / Abstract: Ventilator associated pneumonia (VAP) is the first cause of hospital acquired infections in patients in Intensive Care Units (ICU). The most frequent infectious agents isolated in VAP are Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii, which vary according to the hospital. S. aureus methicillin resistant (MRSA) is frequently found in hospital environment, additionally this specie carry several virulence factors responsible to tissue invasion. Thereby, the aim of this work was verify the influence of host factors as well as the microbiologic factors in pneumonia outcome with emphasis in S. aureus genetic study. The study design was a cohort study including patients in the first 48 hours of mechanical ventilation and followed up twice a week for up to 8 weeks. More profound analysis was conducted for S. aureus isolates accessing the resistance profile, clonal characteristics by PFGE, sequence type by MLST, virulence by PCR, protein A and alpha toxin expressions by Western Blot, HPLC for PSM expressions. S. aureus was the most isolated specie in ICU and 66% of the isolates were causing respiratory infections. The frequency of MRSA in our ICU was 43% and the SCCmec types were I (4%), II (78%) e IV (17%). The most frequent virulence factors were icaA, hla e hld. The clonal profile of strains isolated from VAP showed a variety of strains not clustered. The most frequent sequence types in this study were ST105, ST5 and ST398. Independent risk factors for S. aureus VAP were PSMbeta 2 production, the presence of sea gene and solid cancer, while the presence of hlb and sea genes were associated to death. Trauma was the only predictor factor associated to VAP. Regarded to the stratification according to pathogen type, we found that trauma was a risk factor to S. aureus VAP and also for Enterobacteriacea, which also included belonging to female gender and presenting central nervous system disease. Age and steroids usage ... / Doutor

Submitted by Viviane Lima da Cunha (viviane@biblioteca.ufpb.br) on 2015-05-26T15:04:31Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1017420 bytes, checksum: bb1f5f1df7d6abdcf38a42cb7bbe0d9d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-26T15:04:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1017420 bytes, checksum: bb1f5f1df7d6abdcf38a42cb7bbe0d9d (MD5) Previous issue date: 2015-04-01 / Phenolic compounds are a major class of plant secondary metabolites synthesized for plant and adaptation to environmental stress defense. Are divided into three groups: phenolic acids, flavonoids and tannins. Have been proposed as having a variety of biological effects on human health and microorganisms such as S. aureus. Cases of infections caused by strains of S. aureus multi drug resistant (MDR) has increased over the years. Among the strategies to combat resistance of S. aureus to antibiotics, is the discovery of so-called modifiers resistance (Resistance-Modifying Agents - RMA). In this study, we evaluated the potential modulator and synergistic effect of flavonoids, tannins and phenolic acid on antibiotic activity norfloxanina (NOR), tetracycline (TET) and erythromycin (ERI) in strains of S. aureus. Six flavonoids have been tested - O-glycoside and C-glycoside - and their aglycone derivatives, two tannins (gallotannin and ellagitannin), phenolic acids (hydroxydiphenic acid and cinnamic acid derivatives). The compounds tested showed no antimicrobial activity at 128 μg/mL (MIC between 256 and 512 μg/mL). In the modulation test, the O-glycosylated flavonoids showed no reducing effect of the MIC of antibiotics tested, however, its aglycone derivatives reduced the MIC in the NOR sixteen fold (8 to 128 μg/mL), in contrast, the Cglycosylated flavonoids, quercetin and myricetin, reduced the MIC in the NOR up to four fold (32 to 128 μg/mL) and their aglycone derivatives showed no reducing effect MIC of the tested antibiotics; the hexahydroxydiphenic acid (gallic acid) showed no reducing effect of MIC of the tested antibiotics; among the cinnamic acid derivatives tested, only 3-methoxycinnamic acid, 3,4-dimethoxycinnamic acid and 3,4,5-trimethoxycinnamic acid reduced the MIC in the NOR (64 to 128 μg/mL), while the 3-methoxycinnamic acid presented reducing effect of tetracycline MIC (64 to 32 μg/mL); the ellagitannin (ellagic acid) showed no reducing effect of MIC of antibiotics tested, already the gallotannin (tannic acid - TA) reduced thirty-two fold the MIC NOR (128 to 4 μg/mL), the test checkerboard TA had effect synergistic when applied in combination with NOR (FICI = 0.15) TA MIC decreased from 512 to 64 μg/mL (eight fold) while the MIC of NOR decreased from 128 to 4 μg/mL (thirty-two fold). The results demonstrate that the phenolic compounds have a potential application as an adjunct to antibiotics, particularly when in combination with NOR. / Os compostos fenólicos constituem uma das principais classes de metabólitos secundários de plantas, sintetizados para a defesa vegetal e adaptação ao estresse ambiental. Estão subdivididos em três grupos: ácidos fenólicos, flavonoides e taninos. Têm sido propostos como tendo uma variedade de efeitos biológicos na saúde humana e sobre microrganismos como S. aureus. Casos de infecções provocadas por cepas de S. aureus multi droga resistentes (MDR) têm aumentando ao longo dos anos. Dentre as estratégias de combate à resistência de S. aureus a antibióticos, está a descoberta dos chamados agentes modificadores da resistência (RMA- resistance-modifying agents). Neste estudo, avaliamos o potencial modulador e efeito sinérgico de flavonoides, taninos e ácido fenólicos sobre a atividade antibiótica de norfloxanina (NOR), tetraciclina (TET) e eritromicina (ERI) em linhagens de S. aureus. Foram testados seis flavonoides - O-glicosídeo e C-glicosídeo - e seus derivados aglicona, dois taninos (galotanino e elagitanino), ácidos fenólicos (ácido hidroxidifênico e derivados do ácido cinâmico). Os compostos testados não apresentaram atividade antimicrobiana a 128 μg/mL (CIM entre 256 e 512 μg/mL). No teste de modulação, os flavonoides O-glicosilados não apresentaram efeito redutor da CIM dos antibióticos testados, no entanto, seus derivados aglicona reduziram a CIM da NOR em até dezesseis vezes (128 para 8 μg/mL), em contra partida, os flavonoides C-glicosilados, miricetrin e quercetrin, reduziram a CIM da NOR em até quatro vezes (128 para 32 μg/mL) e os seus derivados aglicona não apresentaram efeito redutor da CIM dos antibióticos testados; o ácido hexahidroxidifênico (ácido gálico) não apresentou efeito redutor da CIM dos antibióticos testados; dentre os derivados do ácido cinâmico ensaiados, apenas o ácido 3-metoxicinâmico, ácido 3,4-dimetoxicinâmico e ácido 3,4,5-trimetoxicinâmico reduziram a CIM da NOR (128 para 64 μg/mL), enquanto o ácido 3- metoxicinâmico, apresentou efeito redutor da CIM da tetraciclina (64 para 32 μg/mL); o elagitanino (ácido elágico) não apresentou efeito redutor da CIM dos antibióticos testados, já o galotanino (ácido tânico – AT) reduziu trinta e duas vezes a CIM da NOR (128 para 4 μg/mL), no teste checkerboard o AT apresentou efeito sinérgico quando aplicado em combinação com NOR (ICIF = 0,15) CIM do AT diminuiu de 512 para 64 μg/mL (oito vezes), enquanto a CIM da NOR diminuiu de 128 para 4 μg/mL (trinta e duas vezes). Os resultados obtidos demonstram que compostos fenólicos, possuem um potencial de aplicação como adjuvante de antibióticos, particularmente quando em uso combinado com NOR.