Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2015-03-25T13:46:03Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Adenilda Queirós Santos Deiró.pdf: 1416205 bytes, checksum: 530840a5c3123deb34c6aab50fc5cead (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-25T13:46:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Adenilda Queirós Santos Deiró.pdf: 1416205 bytes, checksum: 530840a5c3123deb34c6aab50fc5cead (MD5) / CAPES;FAPESB / A obesidade é uma doença multifatorial que tem em sua origem fatores genéticos, psicossociais, nutricionais, metabólicos e endócrinos. A obesidade e a sepse em conjunto, são uma causa de crescente preocupação no mundo ocidental e o aumento da morbidade e mortalidade têm sido relatados em pacientes obesos criticamente enfermos. O mecanismo exato para este fenômeno ainda não está esclarecido. O presente trabalho teve como objetivo avaliar eventuais conseqüências da obesidade sobre aspectos da resposta imune inata de ratos submetidos à sepse polimicrobiana. No primeiro artigo foram avaliadas as conseqüências da sepse em ratos obesos através da análise do leucograma e da histologia do pulmão. Neste trabalho encontramos aumento de leucócitos totais tanto nos ratos submetidos à cirurgia de indução da sepse (CLP) quanto aqueles sham-operados nos tempos de 4 e 24 horas após os procedimentos. Os ratos obesos sépticos apresentam maior lesão pulmonar após 24h da sepse do que os outros grupos. No segundo artigo avaliou-se a função de macrófagos alveolares de ratos obesos frente à sepse polimicrobiana. Foram analisados o índice de aderência, a taxa de fagocitose, a produção de óxido nítrico e a produção de citocinas IFN-γ e IL-12 de ratos normais e obesos sépticos ou sham-operados nos tempos de 4 e 24 horas. Os resultados desse trabalho mostraram que os ratos obesos sépticos produziram maior quantidade de NO após 4h e 24h da cirurgia de indução da sepse (CLP) em relação aos demais grupos. Assim, o resultado deste trabalho demonstrou que a obesidade em situações de estresse orgânico como a sepse pode exacerbar a resposta imune inata deixando o indivíduo susceptível à piora do quadro clínico comprometendo a sobrevivência do indivíduo nesta situação.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Ciência da Computação, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-04-04T04:13:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 344611.pdf: 8724507 bytes, checksum: d25115e51366567567ee4e2b83dbfac9 (MD5) Previous issue date: 2016 / Redes definidas por software tem suas origens em necessidades acadêmicas, mas foram bem aceitas pela indústria. Esse tipo de rede separa o plano de controle do plano de dados e atribui a responsabilidade de definir a comutação de mensagens à um software externo, o controlador. Esse conjunto de fatores além de fornecer novos recursos na configuração desse tipo de ambientes, impulsiona a evolução da rede, pois inovações que antes dependiam de versões de firmware ou novos produtos do fornecedor passam a depender do algoritmo executado pelo controlador. A sepse é uma reação inflamatória que começa com uma doença infecciosa cuja taxa de mortalidade é maior do que a de câncer de mama, câncer de próstata e HIV juntos. O diagnóstico precoce e agilidade na implementação de um protocolo é fundamental para garantir a eficácia do tratamento. O conceito de redes definidas por software(SDN) é interessante de ser aplicado para garantir a urgência exigida pelo problema de Sepse, pois é uma tecnologia emergente que torna o gerenciamento de redes mais dinâmico e centralizado em um controlador que possue regras definidas em mais alto nível disponibilizando recursos que a aplicação pode utilizar para garantir o QoS exigido. Esta dissertação de mestrado apresenta uma abordagem para gestão de Qualidade de Serviço (QoS) que visa proporcionar serviços de consciência da urgência no diagnóstico da sepse. O modelo propõe um ambiente não-concorrente para prestação de serviços em que a aplicação sepse vai garantir QoS utilizando recursos de SDN. A implementação do modelo proposto mostra-se viável e funcional e evitará dados simultâneos na entrega de serviços com a aplicação sepse.<br> / Abstract : Software defined networking has its origins in academic needs, but were well accepted by the industry. This type of network separates the data plane from the control plane and assigns the responsibility to set the message switching to an external software, the controller. This set of factors in addition to providing new features in the configuration of this type of environments, drives the evolution of the network as innovations that once relied firmware versions or new vendor products come to depend on the algorithm executed by the controller. Sepsis is an inflammatory reaction that starts with an infectious condition whose mortality rate is bigger than that of breast cancer, prostate cancer and HIV together. Early diagnosis and agility in the implementation of a protocol is crucial to ensure the effectiveness of the treatment. The concept of software-defined networks is interesting to be applied to ensure the urgency required by Sepsis problem because it is an emerging technology that makes the management more dynamic and centralized networks on a controller. This controller have rules defined at the highest level providing resources the application can use to ensure the QoS required. The model proposes a non-concurrent environment for services delivery where the sepsis application will guarantee QoS using Software Defined Network (SDN) resources. The implementation of the proposed model shows to be feasible and functional and will avoid concurrent data in the delivering of services with the sepsis application.

É bem estabelecido que respostas imunes possam ser influenciadas pelo sistema nervoso. O neuropeptídeo, peptídeo liberador de gastrina (GRP) tem sido detectado na produção e liberação de citocinas, em modelo animal e em humanos com doenças inflamatórias e sabe-se que o antagonista do receptor de GRP, RC-3095 modula a resposta de citocinas pro-inflamatórias em macrófagos ativados por lipopolissacarídeo (LPS) molhando a sobrevivência em modelo animal de sepse induzida por ligação e perfuração cecal (CLP). Neste contexto, neste estudo avaliamos o efeito modulatório de GRP em modelos animais de doenças inflamatórias agudas: injúria pulmonar associada à pleurisia induzida por carragenina e sepse induzida por CLP e adicionalmente, em pacientes sépticos através da correlação dos seus níveis com o desfecho clínico. Para esta proposta, no Capítulo 1 avaliamos em pleurisia induzida por carragenina os seguintes parâmetros: migração celular, atividade da lactato desidrogenase, conteúdo de proteínas totais, concentração de nitrito/nitrato e níveis de TNF-α e IL- β no exsudato pleural e atividade da mieloperoxidade e marcadores de dano oxidativo em lipídios e proteínas no tecido pulmonar. Assim, o RC-3095 exibiu significante ação anti-inflamatória através da inibição do influxo de leucócitos e bloqueio da mieloperoxidade, conteúdo de nitrito/nitrato e níveis de citocinas. Além disso, os resultados mostraram que RC-3095 exerce ação contra o dano oxidativo em lipídios e proteínas, bem como o aumento na viabilidade celular. Isto sugere que RC- 3095 tem propriedades anti-inflamatórias que podem estar relacionadas com a redução do dano oxidativo. No Capítulo 2, entretanto, nós seguimos no modelo animal de sepse onde buscamos o entendimento do papel protetor que exerce o RC-3095. Vários estudos sugerem o envolvimento de TLR-4 como um importante elemento de defesa do hospedeiro durante a infecção, e importantes eviências indicam que esses receptores também possuem um papel na patofisiologia da sepse, onde camundongos deficientes de TLR-4 não apresentam falência na migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal durante a sepse polimicrobiana induzida por CLP letal, e como conseqüência, foram mais resistentes para sepse que controles. Nossos resultados indicam que este efeito protetor pode ser atribuído para uma atenuação de sinalização de TLR-4 em cultura de células RAW 264.7 estimuladas por LPS e tecido pulmonar em ratos CLP, levando a uma diminuição de citocinas proinflamatórias as quais a via de ativação de GRPR mostra seletividade como verificado no Capítulo 3, possibilitando a explicação dos baixos níveis de citocinas pro-inflamatórias em pacientes sépticos tratados com RC-3095. Esta atenuação favorece a infiltração de neutrófilos, resultando na diminuição de bacteremia preservando o controle da infecção no local melhorando o desfecho da sepse. Nossos resultados ainda mostram que níveis plasmáticos de GRP podem predizer o desfecho na sepse, mas não em pacientes SIRS sugerindo que GRP exerce funções diferenciais nas duas condições e sugere que o antagonismo de GRPR modula a inflamação incontrolada por agir em respostas mediadas por TLR-4 e funcionalidade imunoregulatória. Em conclusão, os presentes resultados indicam que o antagonista de GRPR exerce um papel na inflamação aguda e pode ser utilizado como uma nova terapia alternativa para sepse bacteriana Gram-negativa. / It is well established that immune responses may be influenced by the nervous system. The neuropeptide gastrin-releasing peptide (GRP) has been detected on the production and release of cytokines, both in animal models and humans with inflammatory diseases and reported that the GRP receptor antagonist RC-3095 modulates the response of proinflammatory cytokines in activated macrophages by lipopolysaccharide and improved the survival in an animal model of sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP). Within this context, in this work we evaluate the GRP modulatory effect in animal models of acute inflammatory illnesses: lung injury associated with carrageenan-induced pleurisy, and in CLP-induced sepsis and additionally in septic patients through the correlations of its levels with the clinical outcome. For this purpose, in Chapter 1 we evaluated in carrageenan-induced pleurisy the following parameters: cell migration, lactate dehydrogenase activity, total protein content, nitrite/nitrate concentration, TNF-α and interleukin-1β (IL-1β) levels in pleural exudates; myeloperoxidase activity and lipid and protein oxidative damage markers in lung tissue. Thus, RC-3095 exhibited pronounced anti-inflammatory actions by inhibition of leukocyte influx and blockade of myeloperoxidase, nitrite/nitrate content and cytokine levels. Moreover, the results showed that RC-3095 elicits action against oxidative damage in lipids and proteins, as well as increases cell viability. These suggest that RC-3095 has anti-inflammatory properties that can be related with the reduction of oxidative damage. In Chapter 2, however, we follow the animal model of sepsis where we search the agreement of the protective role that RC-3095 exerts. Increasing evidences suggest the evolvement of TLR-4 as an important element of host defense during an infection, a growing body of evidence indicates that these receptors also may play a role in the pathophysiology of sepsis where TLR-4 defective mice did not present failure of neutrophil migration to the peritoneal cavity during polymicrobial sepsis induced by lethal CLP, and as consequence, they were more resistant to sepsis than controls Our results further indicate that this protective effect can be attributed to an attenuation of TLR-4 signaling in RAW 264.7 cell culture stimulated by LPS and lung tissue in CLP rats, leading to a decrease of release of proinflammatory cytokines which the pathway of activation of GRPR shows selectivity as verified in Chapter 3, and can additionally explain the lower levels of the proinflammatory cytokine in RC-3095-treated septic patients. This attenuation favors neutrophil infiltration, resulting in decreased bacteremia preserving the control of infection in situ improving sepsis outcome. Our finding still show that plasma GRP levels could predict outcome in sepsis but not SIRS patients suggesting that GRP plays different roles in the two conditions and suggest that GRPR antagonism modulates uncontrolled inflammation by targeting TLR-4-mediated responses and immunoregulatory functionality. Taken together, the present results indicate that a GRPR antagonist plays a role in acute inflammation and could be developed as a new alternative therapy for Gram-negative bacterial sepsis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-26Bitstream added on 2014-06-13T18:43:12Z : No. of bitstreams: 1 martin_jg_dr_botfm.pdf: 229557 bytes, checksum: 8ac04c0bae3f323bc75baa932f60ad46 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Problemas com diagnóstico de sepse são indicativos da necessidade de enfocar mediadores bioquímicos capazes, não somente de distinguir as diferentes causas de inflamação, mas também de indicar a gravidade dos pacientes. Avaliar o comportamento da Interleucina-12 (IL-12), proteína C-reativa (PCR), e procalcitonina (PCT) e sua utilidade em diferenciar crianças com sepse e quadros correlatos. Crianças sépticas foram incluídas prospectivamente e divididas em dois subgrupos: sepse (GS; n=46) e choque séptico (GCS; n=41). IL-12, PCR e PCT foram medidas à admissão (T0) e 12 horas mais tarde (T12h). Valores de PCT foram classificados como: sepse improvável, sepse possível, infecção bacteriana complicada por inflamção sistêmica e choque séptico. A gravidade da doença foi medida pelo escore PRISM. Em T0, houve uma maior frequência de crianças com choque séptico com níveis mais elevados de PCT, quando comparados com o grupo sepse [GCS: 30 (69,7%) > GS: 14 (29,8%); p < 0,05], o mesmo ocorrendo em T12h. PRISM foi maior para os pacientes do GCS do que do GS. Em T12h, os níveis de IL-12 foram maiores no GCS [T12: 1,32 (0-61.0) > T0: 0,24 (0-226,43; p= 0,018]. Os níveis de PCR não foram diferentes entre os grupos ou tempos de coleta. PCT parece ser útil no diagnóstico precoce de sepse e choque séptico, sendo relacionada com a gravidade da doença. PCR e IL-12 não diferenciaram sepse e choque séptico. / Problems with sepsis diagnosis are indications of the need to focus on biochemical mediators capable not only of distinguishing the different causes of inflammation, but also of indicating the severity of patients. Objectives: To examine the behavior of interleukin-12 (IL-12), C-reactive protein (CRP), and procalcitonin (PCT) and the utility of them to differentiate children with septic conditions. Methods: Septic children, prospectively enrolled, were divided into sepsis (SG; n = 47) and septic shock (SSG; n = 43) groups. IL-12, PCT and CRP were measured at admission (T0) and 12 hours later (T12). Values of PCT were ranked as: unlikely sepsis; possible sepsis; systemic inflammation; septic shock. Disease severity was assessed by PRISM score. Results: At T0, there was a higher frequency of SSG with higher PCT compared with SG [SSG: 30 (69.7%) > SG: 14 (29.8%); p < 0.05], similarly at T12h. PRISM was higher for SSG patients with higher PCT than SG patients. At T12, IL-12 levels were higher in SSG [T12: 1,32 (0 – 61,0) > T0: 0,24 (0 – 226,43); p = 0,018]. CRP levels were not different for groups and moments. Conclusions: PCT appears to be helpful in early diagnosis of pediatric septic conditions, being related to disease severity. CRP and IL-12 did not differentiate septic conditions.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T19:04:16Z : No. of bitstreams: 1 bentlin_mr_dr_botfm.pdf: 810873 bytes, checksum: 830e8baa1a9b44778883a83210feaf9d (MD5) / A sepse neonatal tardia é importante causa de morbidade e mortalidade em recém-nascidos prematuros. Os sinais e sintomas são inespecíficos, o que dificulta o diagnóstico. As citocinas são potentes mediadores inflamatórios que desempenham importante papel na patogênese da infecção. Níveis séricos aumentados de citocinas são observados durante infecções. A Interleucina 8 (IL-8) tem função de atrair e ativar neutrófilos, mantendo o processo inflamatório. O objetivo deste estudo foi determinar os níveis séricos e urinários da IL-8 em recém-nascidos prematuros com sepse tardia confirmada por culturas (sangue, urina ou líquor) ou associada com meningite, e avaliar se os níveis urinários de IL-8 podem ser utilizados como teste diagnóstico da sepse neonatal tardia. Amostras de sangue e urina foram coletadas de 36 RN prematuros com suspeita clínica de sepse tardia e os exames foram repetidos após 48 horas do início do estudo. Os valores séricos e urinários da IL-8 foram determinados pelo método de ELISA e a IL-8 urinária foi ajustada pelo valor da creatinina urinária. Dois grupos foram constituídos: Grupo séptico: 19 RN com sepse confirmada por culturas ou associada a meningite, idade gestacional (IG) de 31 ± 2,5 semanas, peso de nascimento (PN) de 1350 ± 420g, idade pós-natal (IPN) de 9,7 ± 5,3 dias e Grupo não infectado: 17 RN nos quais o diagnóstico de sepse foi excluído, IG 31 ± 2,1 sem, PN 1510 ± 380g, IPN 6,9 ± 4,1 dias. A mediana dos níveis séricos da IL-8 não diferiu estatisticamente entre os grupos séptico e não infectado (929 x 624 pg/ml; p=0,079) mas os níveis urinários (IL-8 ur/cr) foram significativamente maiores no grupo séptico (249 x 41,7; p<0,001). O ponto de corte ótimo da IL-8 sérica foi de 304 pg/ml com sensibilidade de 84% (IC 95%: 60 a 95%) e especificidade de 47% (IC 95%: 23 a 72%)... / Late onset sepsis (LOS) is an important cause of morbidity and mortality in preterm infants. However, the diagnosis of LOS is difficult. Elevated serum levels of cytokines have been found during infections and this plays a critical role in the pathogenesis of infections. Interleukin 8 (IL-8) attracts and activates neutrophils which is crucial for the maintenance of the inflamatory process. The aim of this study was to determine serum and urine IL-8 levels in preterm infants with clinical LOS and positive culture (blood, urine ou cerebrospinal fluid) or meningitis and to evaluate if IL-8 levels can be a useful test for the diagnosis of LOS. Blood and urine were obtained from 36 premature babies with clinical signs of LOS and the collection of the samples were repeated after two days. Serum and urine IL-8 levels were determined by ELISA and the urine IL-8 concentration was corrected with the urine creatinine level. Nineteen preterm infants with sepsis (positive cultures or meningitis) - LOS Group: gestational age (GA) 31 ± 2.5wk, Birth Weight (BW) 1.35 ± 0.42 Kg, postnatal age(PNA) 9.7 ± 5.3 days and 17 noninfected - Control Group: GA 31 ± 2.1wk, BW 1.51 ± 0.38, PNA 6.9 ± 4.1 days, were studied. The medium serum IL-8 levels were not statistically different between groups (LOS vs Control, 929 x 624 pg/ml; p=0,079) but urine IL-8 levels were significantly higher in the LOS group when compared with the noninfected (249 x 41,7 p<0,001). The optimal cut-off point was 304pg/ml for serum IL8 with 84% sensitivity (95% CI: 60-95%) and 47% specificity (95% CI: 23-72%). The cut-off point for urine IL-8 was 89 with 100% sensitivity (95% CI: 82-100%) and 100% specificity (95%CI:81-100%). Two days after of clinical signs of LOS, urine IL-8 levels decreased in LOS group (p<0,001). The decrease in serum IL-8 levels in the LOS group was not statistically different (p=0,123)... (Complete abstract, click electronic address below)

Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense – UNESC, para obtenção do título de Doutora em Ciências da Saúde. / The present study aimed to evaluate neurochemical and behavioral parameters in early and late phases in male Wistar rats (60 days old, 250-300g) subjected to an animal model of sepsis induced by cecal ligation and perforation. This work was divided in 3 steps: in the Experiment I, the animals were divided into groups Sham (control), Sepsis 30 days or Sepsis 60 days, with n=12. After, were dissected the prefrontal cortex, hippocampus, striatum and cortex in order to evaluate thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) levels; carbonyl groups; activities of complexes I, II, II-III and IV of the mitochondrial respiratory chain and creatine kinase (CK). The cerebrospinal fluid was collected for quantification of TNF-, IL-1 and IL-6 cytokines, with n=5. In the Experiment II, the animals were divided into groups Sham, Sepsis and Sepsis+Sodium butyrate (SB), for (24 hours and 10 days), with n=12. SB or artificial cerebrospinal fluid were injected in the lateral ventricle in the brain of animals. After 24 hours or 10 days were dissected prefrontal cortex, hippocampus, striatum and cortex for histone deacetylase (HDAC) activity analysis. The inhibitory avoidance test was performed after 10 days of sepsis induction. In Experiment III, the animals were subjected to sham or sepsis 24 hours and 10 days, with n=5. After, the hippocampus was dissected for quantification of the phosphorylation levels of proteins ERK1/2, JNK1/2 and p38MAPK by Western blotting. The results of Experiment I showed increased levels of IL-6 in the sepsis group (30 days); increased levels of TNF- in the sepsis group (60 days); increased levels of TBARS in the prefrontal cortex and decreased in the hippocampus, striatum and cortex in the sepsis group (30 days); decreased carbonyl groups in the prefrontal cortex and the striatum and increased in the sepsis group (30 days); decreased levels of TBARS in the hippocampus in the sepsis group (60 days); increased carbonyl groups in the striatum in sepsis group (60 days); increased complex IV activity in the hippocampus in the sepsis group (30 days); decreased complex I activity in the prefrontal cortex, hippocampus and striatum in the sepsis group (60 days) and no statistical difference of CK activity in all analyzed brain structures. All data were analyzed by comparing the sepsis group (30 and 60 days) with the sham group. The results of Experiment II showed a decrease in latency in the animals of sepsis group (10 days) in the inhibitory avoidance test and the administration of SB reversed the cognitive damage observed in these animals. There was also an increase in HDACs activity in hippocampus and cortex in the sepsis group (24 hours) and prefrontal cortex and hippocampus in sepsis group (10 days). Moreover, the administration of SB inhibited HDAC activity in the prefrontal cortex and hippocampus of animals from sepsis group (10 days). All data were analyzed by comparing the sepsis group (24 hours and 10 days) with the sham group. The results of Experiment III showed no statistical difference between the sham and sepsis groups on the levels of phosphorylation of proteins ERK1/2, JNK1/2 and p38MAPK in 24 hours and 10 days after sepsis induction. Taken together, the results of the present study may contribute for comprehending the cognitive damage observed in sepsis survivor rats, providing new insights that might have clinical relevance. / O objetivo deste estudo foi avaliar parâmetros neuroquímicos e comportamentais em fases iniciais e tardias em ratos submetidos ao modelo animal de sepse induzido por ligação e perfuração cecal. No experimento I, ratos Wistar machos (60 dias, 250-300g) foram divididos entre os grupos Sham (controle), Sepse 30 dias e Sepse 60 dias, com n=12. Após, foram retirados o córtex pré-frontal, hipocampo, estriado e córtex para análises dos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS); conteúdo de grupos carbonila; atividade dos complexos I, II, II-III e IV da cadeia respiratória mitocondrial e da enzima creatina quinase (CK). O fluido cerebrospinal foi coletado para quantificação das citocinas TNF-, IL-1 e IL-6, com n=5. No experimento II, os animais foram divididos entre os grupos Sham, Sepse e Sepse+Butirato de sódio (SB) (24 horas e 10 dias), com n=12. Por meio de cirurgia estereotáxica, SB ou fluido cerebroespinal artificial foram injetados no ventrículo lateral cerebral dos animais. Em 24 horas e 10 dias após, foram retirados o córtex pré-frontal, hipocampo, estriado e córtex, para análise da atividade de histonas desacetilases (HDAC). O teste de esquiva inibitória foi realizado 10 dias após a indução de sepse. No experimento III, os animais foram divididos entre os grupos sham e sepse 24 horas e 10 dias, com n=5. Após, o hipocampo foi retirado para quantificação dos níveis de fosforilação das proteínas ERK1/2, JNK1/2 e p38MAPK por Western blotting. Os resultados do Experimento I mostraram um aumento nos níveis de IL-6 no grupo sepse (30 dias); aumento nos níveis de TNF- no grupo sepse (60 dias); um aumento nos níveis de TBARS em córtex pré-frontal e uma diminuição destes níveis em hipocampo, estriado e córtex no grupo sepse (30 dias); uma diminuição do conteúdo de grupos carbonila em córtex pré-frontal e um aumento em estriado no grupo sepse (30 dias); uma diminuição nos níveis de TBARS em hipocampo no grupo sepse (60 dias); aumento do conteúdo de grupos carbonila em estriado no grupo sepse (60 dias). Também houve um aumento na atividade do complexo IV em hipocampo no grupo sepse (30 dias); uma diminuição na atividade do complexo I em córtex pré-frontal, hipocampo e estriado no grupo sepse (60 dias) e nenhuma diferença estatística na atividade da CK entre as estruturas cerebrais analisadas. Todos os dados foram analisados comparando o grupo sepse (30 e 60 dias) com o grupo sham. Já os resultados do Experimento II mostraram uma diminuição no tempo de latência nos animais do grupo sepse (10 dias) no teste de esquiva inibitória e a administração de SB reverteu o dano cognitivo observado nestes animais. Também foi observado um aumento na atividade de HDACs em hipocampo e córtex no grupo sepse (24 horas) e em córtex pré-frontal e hipocampo no grupo sepse (10 dias). Além disso, a administração de SB inibiu a atividade de HDACs em córtex pré-frontal e hipocampo dos animais do grupo sepse (10 dias). Todos os dados foram analisados comparando o grupo sepse (24 horas e 10 dias) com o grupo sham. Por fim, os resultados do Experimento III mostraram que não houve diferença significativa entre os grupos sham e sepse nos níveis de fosforilação das proteínas ERK1/2, JNK1/2 e p38MAPK em 24 horas e 10 dias após a sepse. Tomados em seu conjunto, os dados deste estudo podem contribuir para a compreensão do dano cognitivo observado em ratos sobreviventes à sepse, proporcionando novos conhecimentos que possam ter relevância clínica.

Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense – UNESC, para obtenção do título de Doutor em Ciências da Saúde. / Sepsis is defined as a systemic inflammatory response syndrome in response to an infection and may be involved as a risk factor for the development of psychiatric disorders. However, it is not yet well understood its pathophysiological and behavioral mechanism. Therefore, this study aimed to evaluate septic animals in the models of psychiatric disorders such as schizophrenia, depression and mania, assessing the neurotrophin levels, oxidative damage in lipids and protein carbonylation in brain structures and behavior as locomotor activity, social interaction , stereotyped movements, and anhedonia aversive memory. In this study adult male Wistar rats were used. The animals were submitted to the model of sepsis by cecal ligation and puncture (CLP), the animal model of schizophrenia by administration of ketamine intraperitoneally (ip) at different doses (5, 15, 25mg / kg) to the animal model mania, varied by chronic stress protocol (ECV) and the animal model of mania by administration of m-AMPH (ip) at several dose levels (0.25, 0.5, 1 mg / kg). In this study it was found that animals in the animal model of sepsis and administered ketamine at a dose 25 mg / kg showed an increase in locomotor activity and increased latency to first contact in the social interaction test. With the dose of 15 mg / kg ketamine animals showed an increase in stereotyped movements. As for the aversive memory, the animals administered ketamine learned, but less than in the control group. Septic animals submitted to ECV showed no anedônico behavior. The CLP animals when subjected to ECV protocol does not show decreased levels of BDNF, NGF and GDNF in hippocampus. Only in the hippocampus, the ECV decreased the damage to proteins in the CLP group. While the animals subjected to sepsis are not responding to effective dose of 1 mg / kg which induces hyperlocomotion in control animals. It was observed that the dose of 0.25 mg / kg of AMPH-m elevated NGF levels in the hippocampus in sham and CLP. Furthermore, the dose of 0.5 mg / kg of AMPH-m CLP group showed an increase in NGF levels in hippocampus. The dose of 0.25 and 0.5 mg / kg of AMPH-m showed an increase in GDNF protein levels when compared to the group receiving saline PLC. The dose of 1 mg / kg of AMPH-m did not increase the damage to lipids and proteins in the evaluated structure. Doses of 0.25 and 1 mg / kg of AMPH-m damage decreased in the striatum proteins. It was therefore concluded that these animal models of psychiatric disorders, sepsis predisposes the animal model of schizophrenia behaviorally, while depressive disorders and mania did not occur, though in some chemistries, such as neurotrophin levels, we suggest that sepsis predisposes to these disorders. / Sepse é definida como a síndrome da resposta inflamatória sistêmica em resposta a uma infecção, podendo estar envolvida como fator de risco para o desenvolvimento de transtornos psiquiátricos. No entanto, ainda não está bem esclarecido seu mecanismo fisiopatológico e comportamental. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar animais sépticos submetidos a modelos de transtornos psiquiátricos, como esquizofrenia, depressão e mania, também foram avaliados os níveis de neurotrofinas, dano oxidativo em lipídeos e carbonilação de proteínas em estruturas cerebrais. Também foram avaliados os parâmetros comportamentais tais como a atividade locomotora a interação social, os movimentos estereotipados, a memória aversiva e a anedonia. Neste estudo foram utilizados ratos Wistar machos adultos. Os animais foram submetidos ao modelo de sepse, através da ligação e perfuração cecal (CLP), em modelo animal de esquizofrenia, através da administração de cetamina intraperitoneal (i.p) em diferentes doses ( 5; 15; 25mg/kg). No modelo animal de mania, através do protocolo de estresse crônico variado (ECV), já no modelo animal de mania o mesmo foi realizado através da administração de m-AMPH (i.p.) em diferentes doses (0,25; 0,5; 1mg/kg). Nesse estudo verificou-se que os animais submetidos ao modelo animal de sepse, com a administração de cetamina na dose 25mg/kg, apresentaram aumento na atividade locomotora e aumento no tempo de latência ao primeiro contato no teste de interação social. Na dose de 15mg/kg de cetamina os animais apresentaram aumento nos movimentos estereotipados. Quanto à memória aversiva, os animais administrados com cetamina aprenderam, porém menos, em relação ao grupo controle. Os animais sépticos submetidos ao ECV não mostraram comportamento anedônico. Os animais do grupo CLP quando submetidos ao protocolo de ECV não apresentaram diminuição dos níveis de BDNF, NGF e GDNF em hipocampo. Somente em hipocampo, o ECV diminuiu o dano a proteínas no grupo CLP. Enquanto que os animais submetidos à sepse, não responderam na dose efetiva de 1mg/kg que induz hiperlocomoção nos animais controles. Observou-se que a dose de 0,25 mg/kg de m-AMPH elevou os níveis de NFG no hipocampo no grupo sham e no grupo CLP. Além disso, a dose de 0,5 mg/kg de m-AMPH no grupo CLP apresentou aumento dos níveis de NGF em hipocampo. A dose de 0,25 e 0,5 mg/kg de m-AMPH apresentou um aumento dos níveis proteicos de GDNF quando comparados ao grupo CLP que recebeu salina. A dose de 1mg/kg de m-AMPH não aumentou o dano a lipídeos e proteínas nas estruturas avaliadas. As doses de 0,25 e 1 mg/kg de m-AMPH diminuíram o dano a proteínas em estriado. Concluiu-se então, que nesses modelos animais de transtornos psiquiátricos, a sepse, pré dispõe no modelo animal de esquizofrenia somente a alterações comportamentais, enquanto que no transtorno depressivo e na mania isso não ocorreu. Porém em algumas análises bioquímicas, como nos níveis de neurotrofinas sugere-se que a sepse predispõe a estes transtornos.

Dissertação de mestrado apresentado ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / As respostas inflamatórias e imunológicas evocadas durante a sepse podem criar uma disfunção cerebral aguda e de longo prazo. O estresse crônico moderado (ECM) pode ocasionar a mudanças neuroquímicas e comportamentais, e seus impactos necessitam ser compreendidos, sobretudo na sepse que é uma patologia com alto índice de mortalidade e co-morbidade. O objetivo deste estudo foi avaliar o impacto do ECM sobre parâmetros comportamentais e bioquímicos em ratos submetidos à sepse. Foram utilizados ratos Wistar machos, adultos, procedentes do biotério da UNESC. Os animais foram divididos entre os grupos experimentais: controle e ECM e, em seguida, iniciou-se ao protocolo de ECM. Após 40 dias da indução do estresse crônico, os animais foram submetidos ao teste de anedonia (durante sete dias). Ao final do teste, os animais foram submetidos à sepse por CLP e divididos em quatro grupos experimentais: Controle+Sham, Controle+CLP, ECM+Sham, e ECM+CLP. Imediatamente após a indução da sepse foi realizada a avaliação do sickness behavior e o controle da mortalidade. Em 10 dias após a sepse, os animais foram submetidos aos testes de habituação ao campo aberto, splash test e nado forçado. Em seguida foram retirados o córtex frontal e hipocampo para análise dos níveis de citocinas (IL1β, IL6 e TNF-α) e de estresse oxidativo (TBARS e carbonilação de proteínas). O grupo ECM apresentou um comportamento anedônico, e após a sepse, foi observada uma maior mortalidade e uma diminuição das atividades locomotora e exploratória nos grupos ECM+CLP e Controle+CLP. Ocorreu uma diminuição de grooming no grupo controle+CLP e ECM+sham. Os níveis de TBARS estavam aumentados no córtex frontal, nos grupos Controle+CLP e ECM+CLP e no hipocampo, no grupo ECM+CLP. Também foi observado em córtex frontal o aumento dos níveis das proteínas carboniladas nos grupos Controle+CLP, ECM+Sham e ECM+CLP, e no hipocampo, nos grupos Controle+CLP e ECM+CLP. Os níveis de TNF- apresentaram um aumento em córtex frontal e hipocampo no grupo Controle+CLP comparados ao grupo Controle+Sham. Os níveis de IL-1 estavam aumentados no grupo Controle+CLP comparado ao grupo Controle+Sham no hipocampo. Os níveis de IL-6 estavam aumentados no córtex frontal dos animais dos grupos Controle+CLP e ECM+Sham, e no hipocampo no grupo Controle+CLP, comparado ao grupo Controle+Sham. Os dados do presente estudo sugerem que o estresse anterior, causado pela indução da ECM, pode diminuir a inflamação cerebral e o comportamento depressivo de longo prazo induzido pela sepse grave.

The importance of reactive oxygen species in the pathophysiology of sepsis is well established. But not yet has an effective antioxidant therapy for use in these patients. It is known that mitochondria from different organs have different resistances to oxidative damage. In a first step, we evaluated the effect on mortality at 10 days of various doses of diphenyl diselenide (PhSe)2 (10 mg / kg, 50 mg / kg, 100 mg / kg) following induction of sepsis in an animal model for Cecal Ligation and puncture (CLP) in relation to the model CLP + vehicle and sham. The dose of 50 mg / kg (PhSe)2 was the one that caused a significant reduction of mortality compared to the sham group (30% vs 70% respectively). In a second phase, we evaluate the action of (PhSe)2 50 mg / kg on protein carbonylation, 12 and 24 hours after induction of sepsis in the same animal model CLP. Male Wistar rats (250-300g) were divided into 3 groups (sham, vehicle + CLP and CLP + 50 mg / kg (PhSe)2). The antioxidant was administered 1 and 12 hours after the surgical procedure. Since the animals were sacrificed 12 and 24 hours after surgery, with subsequent removal of the liver, spleen, lung, heart, kidney and quadriceps for analysis of protein carbonylation. At 12 hours later, the presence of protein carbonyls in the liver, spleen and kidneys of rats subjected to CLP showed significantly higher compared to the sham group. The addition of (PhSe)2 caused a significant reduction in protein carbonylation in the liver, heart and kidney. After 24 hours of evolution, the presence of carbonyl protein remained significantly higher in the liver, spleen and kidneys, in addition to show elevated in heart and quadriceps of rats subjected to CLP. In late evaluation, the addition of (PhSe)2 caused a reduction of carbonyl protein only in the heart and quadriceps. Despite the reduction in mortality, the analysis of individual organs showed discrepant with antioxidant activity of (PhSe)2 only in some organs. / Submitted by Rogele Pinheiro (rogele.pinheiro@unisul.br) on 2017-10-23T17:16:42Z No. of bitstreams: 1 106765_Charles.pdf: 829490 bytes, checksum: 2f2f96b37deef85e95f33d0723e38d91 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Correa da Cruz (caroline.cruz@unisul.br) on 2017-10-23T20:16:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 106765_Charles.pdf: 829490 bytes, checksum: 2f2f96b37deef85e95f33d0723e38d91 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-23T20:16:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 106765_Charles.pdf: 829490 bytes, checksum: 2f2f96b37deef85e95f33d0723e38d91 (MD5) Previous issue date: 2013-03-18 / A importância das espécies reativas de oxigênio (ERO) na fisiopatologia da sepse encontra-se bem estabelecida. Porém ainda não se dispõe de uma terapia antioxidante eficaz para a utilização nestes pacientes. Sabe-se que as mitocôndrias, dos diversos órgãos, apresentam resistências diferentes ao dano oxidativo. Em uma primeira fase, avaliamos o efeito sobre a mortalidade em 10 dias de diversas doses do disseleneto de difenila (PhSe)2 (10 mg/Kg, 50 mg/Kg, 100 mg/Kg) após indução de sepse em um modelo animal por ligação e perfuração cecal (CLP – do inglês Cecal Ligation and Puncture) em relação ao modelo CLP + veículo e sham. A dose de 50 mg/Kg de (PhSe)2 foi a única que acarretou uma redução significativa da mortalidade em relação ao sham (30% versus 70% respectivamente). Em uma segunda fase, avaliamos a ação do (PhSe)2 50 mg/Kg sobre a carbonilação de proteínas, 12 e 24 horas após a indução de sepse no mesmo modelo animal de CLP. Ratos Wistar adultos (250-300g) foram divididos em 3 grupos (sham, CLP + veículo e CLP + 50 mg/Kg de (PhSe)2). O antioxidante foi administrado 1 e 12 horas após o procedimento cirúrgico. Sendo que os animais foram eutanasiados 12 e 24 horas após a cirurgia, com posterior remoção do fígado, baço, pulmão, coração, rim e quadríceps para análise da carbonilação de proteínas. Com 12 horas de evolução, a presença de proteínas carboniladas no fígado, baço e rins dos ratos submetidos à CLP demonstrou-se significativamente maior quando comparado ao grupo sham. A adição do (PhSe)2 acarretou uma redução significativa da carbonilação protéica no fígado, coração e rim. Com 24 horas de evolução, a presença das proteínas carboniladas manteve-se significativamente mais elevada no fígado, baço e rim, além de se mostrar elevada no coração e quadríceps dos ratos submetidos à CLP. Na avaliação tardia, a adição do (PhSe)2 acarretou redução das proteínas carboniladas apenas no coração e quadríceps. Apesar da redução da mortalidade demonstrada na primeira fase do estudo, a análise individual dos órgãos na fase seguinte mostrou-se discrepante, com atividade antioxidante do (PhSe)2 apenas em alguns órgãos.

Sepsis is characterized by physiological abnormalities arising from an infectious and inflammatory response. During sepsis, the central nervous system (CNS) is rapidly affected, resulting in sepsis-associated encephalopathy (SAE). Studies demonstrate the relevance of physical exercise as an intervention to improve the cognitive function and health of the CNS, in view of its effects on neurogenesis and neuroplasticity. Thus, this study aimed at comparing the sensitivity to SAE under neuroinflammatory and neurochemical parameters in sedentary rats and rats submitted to aerobic physical conditioning. Adult male Wistar rats were randomly assigned to the sham+ Sedentary (S) (n = 7), sham+ Trained (T) (n = 7), cecal ligation and perforation (CLP)+S (n = 10) and CLP+T (n = 10) and subjected to treadmill training for 21 days. Twenty-four hours after the last training session, the animals were submitted to sepsis induction by the CLP model. Forty-eight hours later the animals suffered assisted painless death by thiopental overdose followed by guillotine decaptation and the prefrontal cortex was harvested to determine the levels of TNF-α, IL-6 and IL-10 , neutrophil infiltrate, oxidative damage to lipids and proteins and antioxidant enzymes SOD and CAT. Sepsis increased the levels of TNF-α, IL-6 and neutrophil infiltrate, as well as damage to lipids and carbonylated proteins, while reduced IL-10 levels, the integrity of sulfhydryl groups and the activity of SOD and CAT. Aerobic physical conditioning prevented the increase of TNF-α, reduced neutrophil infiltrate and the damage to lipids and sulfhydryl groups, while increased SOD and CAT activity. In conclusion, aerobic physical conditioning exerted positive effects on neuroinflammatory and neurochemical parameters in the prefrontal cortex of rats with polymicrobial sepsis. Keywords: sepsis, brain dysfunction, oxidative stress, sedentarism, physical exercise. / Submitted by Judite Filgueiras Rodrigues (judite.rodrigues@unisul.br) on 2017-10-24T01:18:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertaçao Judite Rodrigues.pdf: 1468299 bytes, checksum: aee72a3f0be1573a61db62a091e43e1f (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Correa da Cruz (caroline.cruz@unisul.br) on 2017-10-24T13:15:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertaçao Judite Rodrigues.pdf: 1468299 bytes, checksum: aee72a3f0be1573a61db62a091e43e1f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-24T13:15:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertaçao Judite Rodrigues.pdf: 1468299 bytes, checksum: aee72a3f0be1573a61db62a091e43e1f (MD5) Previous issue date: 2017-09-28 / A sepse é caracterizada por anormalidades fisiológicas decorrentes de um processo infeccioso e inflamatório. Durante a sepse, o sistema nervoso central (SNC) é um dos primeiros sistemas a ser afetado, e isto se manifesta como encefalopatia associada à sepse (EAS). Estudos comprovam a relevância do exercício físico como uma intervenção para melhorar a função cognitiva e saúde do SNC, tendo em vista seus efeitos sobre a neurogênese e neuroplasticidade. Sendo assim, este trabalho objetivou comparar a sensibilidade à encefalopatia séptica sob parâmetros neuroinflamatórios e neuroquímicos em ratos sedentários e ratos submetidos ao pré-condicionamento físico aeróbio. Ratos Wistar machos adultos foram randomizados nos grupos experimentais sham+Sedentario (S) (n = 7), sham+Treinado (T) (n = 7), Ligação e Perfuração Cecal (CLP)+S (n = 10) e CLP+T (n = 10) e submetidos ao protocolo de treinamento de corrida durante 21 dias. Quarenta e oito horas após o último dia de treinamento, os animais foram submetidos ao modelo de indução de sepse por CLP. Vinte e quatro horas após, os animais sofreram morte indolor assistida por overdose de tiopental seguida por decaptação em guilhotina para a coleta do córtex pré-frontal e dosagem de citocinas TNF-α, IL-6 e IL-10, infiltrado de neutrófilos, dano oxidativo a lipídeos e proteínas, além de enzimas antioxidantes SOD e CAT. Observou-se que a sepse aumentou os níveis de TNF-α, IL-6, o infiltrado de neutrófilos, bem como o dano aos lipídeos e às proteínas carboniladas, enquanto reduziu os níveis de IL-10, a integridade de grupamentos sulfidrilas e a atividade da SOD e CAT. O condicionamento físico aeróbio preveniu o aumento de TNF-α, reduziu o infiltrado de neutrófilos, o dano aos lipídeos e grupamentos sulfidrilas, além de aumentar a atividade da SOD e CAT. Conclui-se que o pré-condicionamento físico aeróbio exerceu efeitos positivos sobre parâmetros neuroinflamatórios e neuroquímicos em ratos com sepse polimicrobiana. Descritores: sepse, disfunção cerebral, estresse oxidativo, sedentarismo, exercício físico.