Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-10T11:11:21Z No. of bitstreams: 1 Edvaldo Cavalcanti de LIma Neto.pdf: 1484364 bytes, checksum: 176b6dea99569a96a24729551d8d6cab (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-10T11:11:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Edvaldo Cavalcanti de LIma Neto.pdf: 1484364 bytes, checksum: 176b6dea99569a96a24729551d8d6cab (MD5) Previous issue date: 2006-02-20 / Viruses are among the most harmful pathogens found in aquaculture and are the most numerous and diverse of the pathogenic agents described to crustaceans. The knowledge about genes associated to immunity viral response, as well as the relationships between pathogen and host still very incomplete. Moreover, shrimp cell lines are not available, thus limiting primary systems of cellular culture to assist searches in genomic expression. The Expressed Sequence Tags (ESTs) analyses have become a common tool used to identify genes involved in some specific biological functions, particularly in organisms in which genomic data are not available. The Laboratory of Applied Genetics (LAGA) of the Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) is one of the members of the Shrimp EST Genome Project (ShEST), assisting on sequencing and search for genes related to shrimp immune response against the viral infections. Libraries of different tissues (muscle, hepatopancreas, ocular peduncle)and different larval stages of Litopenaeus vannamei were sequenced using BigDye Terminator Sequencing Kit (Applied Biosystems) or ET-Dye Terminator (Amersham/GE Healthcare) and M13 universal primer (5'-TGTAAAACGACGGCCAGT-3'). The sequences were analyzed in automated sequencers MegaBace1000 (Amersham/GE Healthcare) and Applied Biosystems 377 (ABI377). These sequences were analyzed using the Basic Local Alignment Search Tool (BLAST). The results presented homology with interferon system proteins, like 2’,5’-Oligoadenylate binding protein, Toll like receptors, JAK/STAT and Interferon like protein. The 2’,5’-Oligoadenylate binding protein would be the first protein related to interferon system described in shrimps. A lot of sequences are still need to be investigated to complete the whole genome of Litopenaeus vannamei, nevertheless there are indications that this animal has a complex antiviral defense system, similar to interferon. / Os vírus estão entre os patógenos mais danosos encontrados na aqüicultura e são os mais numerosos e diversificados descritos para os crustáceos. O conhecimento sobre os genes associados à resposta imune viral, bem como a relação entre patógenos e hospedeiro ainda é escasso. Além disso, não há disponibilidade de linhas de célula para camarões, o que limita os sistemas primários de cultura celular, que por sua vez subsidiam pesquisas voltadas à expressão gênica. A análise de Seqüências Expressas Identificadas Expressed Sequence Tags (ESTs) tem se tornado uma prática comumente utilizada para identificar genes envolvidos em funções biológicas específicas, especialmente em organismos onde os dados genômicos ainda não estão disponíveis. O Laboratório de Genética Aplicada (LAGA) da Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) é um dos participantes do projeto genoma EST do camarão Litopenaeus vannamei (ShEST) auxiliando no seqüenciamento e busca de genes de L. vannamei que atuam na resposta imune dos camarões contra as infecções virais. Foram seqüenciadas bibliotecas de diferentes tecidos (músculo, hepatopâncreas, pedúnculo ocular, etc) e diferentes fases larvais de Litopenaeus vannamei usando BigDye Terminator Sequencing Kit (Applied Biosystems) ou ET-Dye Terminator (Amersham/GE Healthcare) e o primer M13 universal (5'-TGTAAAACGACGGCCAGT-3'). As seqüências foram analisadas em seqüenciadorores automáticos MegaBace1000 (Amersham/GE Healthcare) e Applied Biosystems 377 (ABI377). Estas seqüências foram analisadas usando-se a Basic Local Alignment Search Tool (BLAST). Os resultados obtidos apresentaram homologia com proteínas do sistema interferon, como 2’,5’-Oligoadenylate binding protein, Toll like receptors (TLRs), JAK/STAT e interferon like protein (IntlP). A 2’,5’-Oligoadenylate binding protein pode ser a primeira proteína descrita para camarões que está relacionada ao sistema interferon. Muitas seqüências ainda precisam ser processadas para completar o genoma de Litopenaeus vannamei, contudo já há indícios de que este tenha um complexo sistema de defesa contra vírus, semelhante ao sistema interferon.

O Trypanosoma cruzi, parasita causador da doença de Chagas, apresenta isolados virulentos e de baixa virulência. Exploramos o envolvimento do sistema imune nos baixos níveis de parasitemia de camundongos infectados com parasitas de baixa virulência Sylvio X10/4. Camundongos C57Bl/6 WT não apresentam parasitemia patente após 24 horas da infecção, e a análise da carga parasitária revelou que a maioria dos parasitas vão para o fígado e baço. O envolvimento dos anticorpos naturais foi descartado, e uma pequena participação do sistema complemento sugerida. Já camundongos IFN-<font face=\"Symbol\">gKO infectados apresentaram parasitemia intermitente nas primeiras semanas, e isto não pôde ser atribuído à deficiência na produção de proteínas de fase aguda. Anticorpos específicos parecem cruciais para o controle do parasita; além disso, animais que apresentam apenas IgM são resistentes à infecção. Assim, sugerimos que a rápida saída que segue a inoculação do Sylvio X10/4 é um processo de remoção ativa e, em longo prazo, não somente a IgG, mas a IgM tem um papel importante na proteção. / Trypanosoma cruzi, the parasite responsible for Chagas´ disease, displays virulent isolates and low-virulence ones. We explored the involvement of the immune system in the low level parasitemia of mice infected with low-virulence Sylvio X10/4 parasites. C57BL/6 WT mice do not show patent parasitemias after 24 hours after infection and the parasite load revealed that most parasites go to the liver and spleen. The involvement of natural antibodies was discarded and a small participation of the complement system was suggested. However, infected IFN-<font face=\"Symbol\">gKO mice showed intermittent patent parasitemias in the first weeks of infection and this can not be attributed to deficiency in the production of acute phase proteins. Parasite-specific antibodies seem crucial for parasite control, in addition, animals that have only IgM are resistant to infection. Thus, we suggest that the rapid clearance that follows Sylvio X10/4 inoculation is an active removal process and, at the long run, not only IgG, but also IgM play an important role in protection.

Linfócitos T CD4+ tem a capacidade de diferenciação em várias subpopulações, como Th1, com habilidades distintas para o combate das infecções. Uma vez que estas células exerceram suas funções efetoras, é necessária a retração das populações para restauração da homeostase do sistema imunológico, o que pode acorrer por morte celular induzida por ativação (AICD). Baseado em dados obtidos anteriormente por nosso grupo de pesquisa, o presente estudo buscou investigar se a PGE2 protegeria linfócitos T CD4+ diferenciados in vitro, da mesma forma que protegeu hibridomas DO11.10 da AICD. Para isso, utilizamos linfócitos T CD4+ de baço total ou purificados de camundongo C57Bl/6 selvagem e polarizados para Th1, na presença de anti-CD3, anti-CD28 e citocina IL-12 por 4 dias. Observamos que, tanto em células CD4+ purificadas quanto CD4+ de baço total, as células Th1 não foram protegidas do processo de AICD pela PGE2, sugerindo que uma proteção não seja vantajosa quando a célula já se encontra em estágios avançados de seu ciclo, evitando o desenvolvimento de autoimunidades. / CD4+ T cells have the ability to differentiate into several subsets, such as Th1, with distinct abilities to fight infections. Once these cells exerted their effector functions, their elimination is necessary to restore the immune system homeostasis, which may occur by activation-induced cell death (AICD). Based on data previously obtained by our research group, this study aimed to investigate whether PGE2 protects in vitro differentiated CD4+ T cells, the same way that it protected DO11.10 hybridomas from AICD. To assess this, we used CD4+ T cells from total splenocytes or purified CD4+ T lymphocytes from C57Bl/ 6 wildtype mice, polarized to Th1 in the presence of anti-CD3, anti-CD28 and IL-12 for 4 days. We observed that the generated Th1 cells, in both conditions of purified CD4+ T cells or the ones from total splenocytes, were not protected from the process of AICD by PGE2, suggesting that this protection is not advantageous when these cells are already in advanced stages of their life cycle, thus avoiding the development of autoimmune diseases.

O câncer cervical é o segundo mais comum em mulheres em países em desenvolvimento, sendo causado por infecção persistente por Papilomavírus Humano (HPV). Quando esta persistência ocorre, entre outros fatores, está relacionada a mecanismos de evasão do sistema imune apresentados pelo vírus. A frequência de macrófagos aumenta com a progressão da lesão cervical e há aumento de células mielóides no baço de camundongos com tumor. Este trabalho tem como objetivo observar os efeitos sistêmicos de tumores associados ao HPV sobre a proliferação e recrutamento de células do sistema imune e identificar fatores que tenham papel nesses mecanismos. Utilizando modelos de tumor in vivo, observou-se que tumores associados ao HPV recrutam mais células para o tumor e induzem maior proliferação celular. Também avaliamos o perfil de expressão de citocinas nas linhagens tumorais e o perfil geral de expressão de proteínas através de eletroforese 2D. Com isto, demonstramos que linhagens tumorais positivas para HPV apresentam maior expressão de IL-6, IL-8, CXCL1, sICAM e Serpina E1. / Cervical cancer is the second most common type of cancer in women in developing countries. Its main etiologic factor is persistent infection with high risk human papillomavirus (HPV). This persistence occurs only in some cases and, among other factors, is related to mechanisms of immune evasion displayed by the virus. There is an increase in the frequency of macrophages proportional to cervical intraepithelial lesion grade and an increase of myeloid cells in the spleen of tumor bearing mice. This work aims to observe the systemic effects of HPV associated tumors on the proliferation and recruitment of immune cells, and identify factors that have a role in these mechanisms. Using in vivo tumor models, we found that HPV positive tumors recruit a higher percentage of cells and induce cellular proliferation. We also studied cytokine expression profiles of tumor cell lines, and performed proteomic assay with tumor cells transduced with HPV oncogenes. Our data shows that HPV associated tumor cell lines display higher expression of IL-6, IL-8, CXCL1, sICAM and Serpin E1.

Pteridium aquilinum, conhecida popularmente como &quot;samambaia-do-campo&quot; ou simplesmente &quot;samambaia&quot;, é considerada uma das plantas tóxicas mais importantes no mundo, não só pela sua distribuição cosmopolita e intoxicação de rebanhos em diversas partes do mundo, mas também pelo seu alto potencial carcinogênico observado em animais e seres humanos que se alimentam com esta planta. Por outro lado, não havia dados na literatura a respeito dos possíveis efeitos tóxicos desta planta sobre o sistema imune, o qual se sabe, tem papel fundamental não só para o controle de doenças infecciosas, como também, para impedir a proliferação de células mutantes e, conseqüentemente o desenvolvimento de câncer. Assim, o presente estudo avaliou os efeitos da P. aquilinum sobre as respostas imune inata e adaptativa em camundongos, através dos seguintes protocolos: produção e titulação de anticorpos T - dependente, proliferação de linfócitos T e B, resposta de hipersensibilidade tardia, fenotipagem linfocítica e citotoxicidade de células NK. Além disso, foram feitas a avaliação histológica e a contagem da celularidade dos órgãos linfóides. Resultados mostraram diminuição da resposta de hipersensibilidade tardia (resposta celular) nos grupos tratados com 10 e 30 g/kg de samambaia, redução da citotoxicidade das células NK, redução da polpa branca do baço, diminuição da camada celular do timo e desorganização dos folículos linfóides nos linfonodos mesentéricos e placas de Peyer dos camundongos tratados com a dose de 30 g/kg de samambaia e diminuição na celularidade da medula óssea em todos os grupos tratados com a samambaia, por 14 dias. Os dados obtidos na presente pesquisa permitem sugerir que a diminuição da resposta imune celular foi decorrente do efeito tóxico da P. aquilinum sobre as células NK e não um efeito tóxico direto sobre os linfócitos Th1. / Pteridium aquilinum, known popularly as \"bracken fern\" is considered one of the more important toxic plants in the world, not only for its cosmopolite distribution and poisoning of flocks in diverse parts of the world, but also for its high potential carcinogenicity observed in animals and human that feed with this plant. On the other hand, there are not data available in the literature regarding the possible toxic effects of this plant on the immune system that is fairly known to be important not also for the control of infectious illnesses but also to hinder the proliferation of mutant cells and, consequently cancer development. Thus, the present study evaluated the effect of the P. aquilinum on the innate and acquired immune responses in mice, through the following protocols: production and titer of T - dependent antibody, proliferation of T and B lymphocytes, delayed-type hypersensitivity, lymphocyte subset analysis and natural killer-cell activity. Moreover, histophatological evaluation and cellularity of the lymphoid organs were performed. Results showed reduction of the delayed-type hypersensitivity (cellular immune response) of the mice treated with 10 and 30 g/kg of bracken fern. Besides, it was observed reduction of the natural killer-cell cytotoxicity, decrease of white pulp of spleen and of the cellular layer of the thymus, disorganization of the lymphoid follicle in the mesenteric lymph nodes and Peyer?s patches of the mice treated with 30 g/kg. It was also observed decrease of bone marrow cellularity of all animals treated with bracken fern up to 14 days. Thus, these data found here permit to suggest that P. aquilinum produced reduction of the cellular immune response by a direct toxic effect on the natural-killer cells and not on the Th1 lymphocytes.

Os efeitos causados pelo tratamento em conjunto da insulina e do colecalciferol em indivíduos diabéticos não estão completamente elucidados. O presente trabalho avaliou o efeito de ambos os hormônios nos rins, no fígado, no coração e nos parâmetros hematológicos de camundongos machos (C57BL/6) sadios e diabéticos, bem como a ação do colecalciferol (in vitro) na resposta imunológica desenvolvida pelas células RAW 264.7 e pelos macrófagos peritoneais (MP) após estímulo com lipopolissacarídeo (LPS). Após dez dias da administração da aloxana (60 mg/kg), animais diabéticos exibiram redução do ganho de peso corporal e hiperglicemia quando comparados aos animais que receberam salina. No sétimo dia do período experimental, foi verificado que animais diabéticos que não receberam nenhum hormônio, em relação aos não diabéticos, exibiram redução do peso corporal, dos níveis de hemoglobina (Hb), hematócrito, hematimetria, insulina, TNF-&#945; e IL-6 (coração) e aumento da glicemia, da relação peso corpóreo/peso rim esquerdo, das concentrações séricas de ureia, creatinina, Fosfatase Alcalina (FAL), Lactato desidrogenase (LDH) e lactato, fator de necrose tumoral (TNF)-&#945;, interleucina (IL)-6 e IL-10 (no rim); o tratamento com insulina (1 UI/300 mg/dL glicemia), em relação aos animais diabéticos não tratados, promoveu aumento do peso corporal, das concentrações séricas de insulina e redução da glicemia, das concentrações séricas de ureia e da razão TNF-&#945;/IL-10 (coração); o tratamento com colecalciferol (800 UI/dia), em relação aos animais diabéticos não tratados, promoveu aumento das concentrações séricas de 25-hidroxicolecalciferol [25(OH)D], Hb, hematócrito, hematimetria, IL-10 (coração) e reduziu IL-6, IL-10, TNF-&#945; e EPO (rim); os animais diabéticos tratados com insulina, em relação aos animais diabéticos suplementados com colecalciferol apresentaram aumento do peso corpóreo, de ureia sérica, IL-6 e TNF-&#945; (coração) e redução da glicemia, das concentrações séricas de lactato, de IL-6, TNF-&#945;, IL-10 e EPO (rim); os animais -que receberam ambos os hormônios, em relação aos animais tratados com insulina, apresentaram aumento sérico de insulina e lactato; os animais diabéticos que receberam ambos os hormônios, em relação aos animais diabéticos tratados com colecalciferol, exibiram aumento sérico de 25(OH)D, de insulina, além da redução das concentrações de IL-10, da razão de TNF-&#945;/IL-10 e TNF-&#945;/IL-6 (coração); animais diabéticos que receberam ambos os hormônios, em relação aos diabéticos não suplementados com colecalciferol, exibiram: aumento de insulina sérica e redução das concentrações séricas de ureia e das razões renal e hepática de TNF-&#945;/IL-6; células RAW 264.7 estimuladas pelo LPS e tratadas com 100 nM colecalciferol exibiram maior expressão da CYP27B1 e redução na liberação de mediadores inflamatórios quando comparadas ao grupo estimulado pelo LPS. Entretanto, não foi observado o mesmo efeito nos MP. Em conjunto, os resultados sugerem que: 1) em animais diabéticos, o colecalciferol pode modular parâmetros hematológicos e que a insulina pode melhorar a função renal, bem como a recuperação do peso corporal; 2) o colecalciferol pode ser metabolizado pelas células RAW 264.7 e modular a resposta imunológica desencadeada pelo LPS. / The effects caused by the treatment of insulin and cholecalciferol in diabetic subjects are not completely elucidated. The present study evaluated the effect of both hormones on the kidneys, liver, heart and hematological parameters of healthy and diabetic male mice (C57BL/6), as well as the action of cholecalciferol (in vitro) on the immune response developed by the cells RAW 264.7 and peritoneal macrophages (MP) after stimulation with lipopolysaccharide (LPS). After ten days of alloxan administration (60 mg/kg), diabetic animals exhibited a reduction in body weight gain and hyperglycemia when compared to animals that received saline. On the seventh day of the experimental period, it was verified that diabetic animals that did not receive any hormones, in relation to non-diabetics, showed reduction of body weight, hemoglobin (Hb), hematocrit, hematimetry, insulin, TNF-&#945; and IL- 6 (heart) and increased glycemia, body weight / left kidney weight, serum urea, creatinine, Phosphatase Alkaline, lactate dehydrogenase (LDH) and lactate levels, tumor necrosis factor (TNF) interleukin (IL) -6 and IL-10 (in the kidney); diabetic mice treated with insulin (1 IU / 300 mg/dL glycemia) in relation to untreated diabetic animals promoted increased body weight, serum insulin levels and blood glucose lowering, serum urea levels and TNF-&#945; ratio / IL-10 (heart); diabetic animals treated with cholecalciferol (800 IU/day), in relation to untreated diabetic animals, exhibited increased serum levels of 25-hydroxycholecalciferol [25 (OH) D], Hb, hematocrit, hematimetry, IL-10 (heart) and reduced IL-6, IL-10, TNF-&#945; and EPO (kidney);insulin-treated diabetic animals compared to diabetic animals supplemented with cholecalciferol exhibited an increase of body weight, serum urea, IL-6 and TNF-&#945; (heart) and a reduction of glycaemia, serum lactate levels, IL-6, TNF- &#945;, IL-10 and EPO (kidney); animals that received both hormones, compared to animals treated with insulin exhibited an increase of insulin and lactate serum levels; diabetic animals that received both hormones, compared to diabetic animals treated with cholecalciferol, exhibited an increase of 25(OH)D and insulin serum levels, and a reduction of IL-10, TNF-&#945;/IL-10 and TNF-&#945;/IL-6 ratios (heart); diabetic animals that received both hormones, compared to diabetic animals not supplemented with cholecalciferol, exhibited an increase of insulin and reduced urea serum levels and reduced renal and hepatic TNF-&#945;/IL-6 ratios; LPS-stimulated RAW 264.7 cells and treated with 100 nM cholecalciferol exhibited greater CYP27B1 expression and reduced release of inflammatory mediators when compared to the LPS-stimulated group. However, the same effect was not observed in PM. Taken together, the results suggest that: 1) in diabetic animals, cholecalciferol may modulate hematological parameters and that insulin may improve renal function as well as recovery of body weight; 2) cholecalciferol can be metabolized by RAW 264.7 cells and modulate the immune response triggered by LPS.

A hemoglobina possuí um grande potencial antimicrobiano, sendo os peptídeos antimicrobianos (AMPs) derivados de proteínas contêm o grupamento heme denominados hemocidinas. O carrapato bovino Rhipicephalus (Boophilus) microplus é capaz de adquirir e processar grandes quantidades de sangue para seu metabolismo. Neste trabalho, purificamos hemocidinas produzidas no tubo digestório do carrapato. Identificamos 10 fragmentos da hemoglobina bovina que possuem atividade contra Candida albicans (Hb 1-94, 3-94, 1-87, 93-141, 102-141, 103-141, 107-141, 104-141 e 98-114 e Hb\"beta\" 127-145). Determinamos que todos os peptídeos apresentam um alto conteúdo de aminoácidos básicos, além de uma estrutura secundária em \"alfa\"-hélice, características encontradas em outros AMPs. Verificamos também que as duas principais proteases que atuam na produção das hemocidinas são uma cisteíno- e uma aspártico-proteinase. A identificação de diversas hemocidinas, no tubo digestório de R. (Boophilus) microplus, indica uma possível participação das hemocidinas na proteção contra microorganismos / The hemoglobin posses a great potential as an antimicrobial, being denominated hemocidins the antimicrobial peptides (AMPs) derived from heme containing proteins. The cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus is capable of processing large amounts of blood to its own metabolism. In this work we purified the hemocidins that are produced in the tick gut. We identified 10 fragments from bovine hemoglobin that presents activity towards Candida albicans (Hb 1-94, 3-94, 1-87, 93-141, 102-141, 103-141, 107-141, 104-141 e 98-114 e Hb\"beta\" 127-145). We determined that all the peptides presents a high content of basic amino acids, besides a secondary structure in \"alfa\"-helix conformation, characteristics found in other AMPs. We also verified that a cistein- and an aspartic-protease are the two main proteases involved on the production of these hemocids. The identification of several hemocidins in the gut of R. (Boophilus) microplus, suggests that these AMPs may play a role in the defense of the tick against microorganisms

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T05:55:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 195296.pdf: 2670800 bytes, checksum: c49992a8a9b75af144b3c2287202d155 (MD5) / A agricultura moderna tem se tornado cada vez mais dependente da mecanização e do uso de insumos como os agrotóxicos. A utilização destes produtos em larga escala, combinada às diferentes formas pelas quais o ser humano pode ser exposto aos mesmos, tem resultado em freqüentes contaminações humanas e ambientais. A literatura científica tem associado a exposição crônica aos agrotóxicos com conseqüências para a saúde humana, tais como alterações hematológicas, imunológicas e o desenvolvimento de neoplasias. O glifosato é um herbicida sistêmico, pós-emergente e não seletivo, derivado da glicina, amplamente utilizado no Brasil para o controle de cerca de 70 espécies de plantas daninhas perenes e 80 espécies de anuais e normalmente é comercializado na forma de sal de isopropilamina. Toxicologicamente é classificado como produto da Classe IV - Pouco Tóxico, sendo sua DL50 para ratos de 4.870 mg/kg de peso corporal. Quanto a periculosidade ambiental pertence a Classe III - Produto Perigoso. Dados da literatura referentes aos efeitos deste produto sobre a saúde humana são contraditórios e em alguns aspectos como o imunológico, escassos. Em consonância com o exposto o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da exposição crônica ao glifosato sobre o fígado, sangue periférico, medula óssea e sistema imunológico, em ratos. Para isso três grupos de animais receberam o agrotóxico por via oral em doses equivalentes a 1/1000, 1/100 e 1/10 da DL50 do produto, em intervalos de 48 horas, por um período de 75 dias. No grupo controle foi administrado água. Ao término do período foram coletadas amostras de sangue, fígado, medula óssea e linfonodos. Foram realizadas as seguintes análises: controle do ganho de peso, hemograma; dosagem de uréia, medida da atividade sérica das enzimas aspartato aminotranferase (AST) e alanina aminotransferase (ALT); análises histológicas do fígado e da medula óssea; contagem de células CD4+ e CD8+ no sangue periférico e linfonodos. Os animais tratados apresentaram redução no ganho de peso, alterações no hemograma, aumento dos níveis séricos das enzimas e da uréia, aumento da reticulina e do número de células de Kupffer no fígado, redução de células CD4+ e CD8+ no sangue periférico, redução de células CD4+ e aumento de células CD8+ no linfonodo e redução da relação CD4+/CD8+ neste último, o qual apresentou-se hipertrofiado. Os resultados demonstraram que a exposição ao glifosato compromete vários parâmetros do sangue periférico, a função hepática e o sistema imune.

Submitted by LUANA CAMARGO SOUSA null (luanacamargo.bio@hotmail.com) on 2016-03-15T18:50:34Z No. of bitstreams: 1 005-2016 - Luana Camargo Sousa - DISSERTAÇÃO MESTRADO.pdf: 1321578 bytes, checksum: 0580f4bb0e26158d5c269f87473f2dad (MD5) / Approved for entry into archive by Sandra Manzano de Almeida (smanzano@marilia.unesp.br) on 2016-03-15T19:35:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sousa_lc_me_ilha.pdf: 1321578 bytes, checksum: 0580f4bb0e26158d5c269f87473f2dad (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-15T19:35:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sousa_lc_me_ilha.pdf: 1321578 bytes, checksum: 0580f4bb0e26158d5c269f87473f2dad (MD5) Previous issue date: 2016-01-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho tem como objetivo avaliar a influência de dietas com diferentes níveis de proteína (P) e carboidratos (CH) na resposta imunológica e nos índices zootécnicos de juvenis de surubim (Pseudoplatystomasp.). O experimento foi conduzido no Laboratório de Aquicultura da Unesp – Campus de Dracena, distribuído em um delineamento inteiramente casualizado com seis tratamentos e quatro repetições (38P/22CH; 38P/26CH; 38P/30CH; 42P/22CH; 42P/26CH; 42P/30CH). Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e as médias comparadas pelo Teste de Duncan (5%), através do programa estatístico SAS, versão 9.0. Não foram observadas diferenças significativas entre as dietas para os parâmetros de desempenho: ganho em biomassa, taxa de crescimento específico, conversão alimentar e taxa de eficiência protéica. Os grupos alimentados com a dieta 38P/22CH obtiveram melhor desempenho para comprimento padrão, peso final e ganho de peso. Não foram observadas diferenças significativas em albumina, atividade respiratória dos leucócitos e atividade hemolítica complemento. A dieta 38P/30CH obteve valores médios significativamente maiores para as concentrações de proteína, globulina e lisozima. Para os parâmetros hematológicos, entre as dietas, não houve diferença significativa para as concentrações de eritroblasto, linfócito, eosinófilo, volume corpuscular médio e hemoglobina corpuscular média. Após serem desafiados, os peixes apresentaram uma resposta significativa na concentração de hemoglobina, e uma redução no hematócrito, em resposta ao estresse causado pelo desafio. A melhor resposta produtiva foi observada nos peixes que receberam a dieta 38P/22CH. As condições fisiológicas não foram comprometidas mostrando a capacidade dos peixes em responder ao desafio com LPS. / This study aimed to evaluate the influence of diets with different protein levels (P) and carbohydrates (CH) in the immune response and growth performance of juvenile surubim (Pseudoplatystoma sp.). The experiment was conducted in the Aquaculture Laboratory - Unesp Dracena, distributed in a completely randomized design with six treatments and four replications (38P/22CH; 38P/26CH; 38P/30CH; 42P/22CH; 42P/26CH; 42P/30CH). The results were submitted to analysis of variance (ANOVA) and the means were compared by Duncan test (5%), through the SAS statistical software, version 9.0. No significant differences were observed among diets regarding the growth performance parameters: weight gain, specific growth rate, feed conversion and protein efficiency ratio. Fish fed diets with 38P/22CH diet performed better for standard length, body weight and weight gain. There were no significant differences in albumin, respiratory activity of leukocytes and complement hemolytic activity. The 38P/30CH diet achieved significantly higher average values for the concentrations of protein, globulin and lysozyme. For hematological parameters, there were no significant difference in the concentrations of erythroblast, lymphocytes, eosinophils, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin. After being challenged fish showed a significant response in hemoglobin concentration, and a decrease in hematocrit in response to stress caused by challenge. The best productive response was observed in fish fed diet 38P / 22CH. Physiological conditions were not compromised showing the ability of fish to respond to LPS challenge. / FAPESP: 2014/26723-1

O Vírus Respiratório Sincicial humano (hRSV human Respiratory Syncytial Virus) está entre os principais causadores de doenças do trato respiratório. O hRSV pertence à família Paramyxoviridae. Os sintomas da infecção podem variar de simples estado gripal a doença respiratória grave, e eventualmente levar a óbito. Atualmente não há vacina licenciada ou droga eficaz contra esse vírus. Anteriormente foram obtidos, em nosso laboratório, vetores com genes otimizados. Com essas ferramentas a proteína M foi produzida e purificada tendo sido possível obter anticorpos policlonais específicos e eficientes na sua detecção. Com esses anticorpos confirmamos a interação da proteína M com as proteínas celulares tropomiosina e nucleofosmina. Também foi demonstrado por imunofluorescência e por western blotting que a proteína M quando expressa fora do contexto de infecção apresenta localização nuclear e citoplasmática. Foram feitos testes de imunização com a proteína M purificada ou com um vetor eucariótico que a expressa (DNA). A imunização com proteína M resultou apenas em resposta humoral, enquanto com a vacina de DNA obtivemos apenas resposta celular. Nenhum desses imunógenos, entretanto, foi capaz de conferir proteção contra hRSV. / The human Respiratory Syncytial Virus (hRSV) is among the main causes of respiratory tract diseases, hRSV belongs to the Paramyxoviridae family. The symptoms of the infection can range from simple flulike state to severe respiratory disease eventually leading to death. Currently there is no licensed vaccine or effective drug against this virus. Vectors with genes optimized for of the hRSV Matrix protein (M) expression in bacteria and in eukaryotic cells were previously obtained in our lab. With these tools the M protein was produced and purified. Specific and efficient polyclonal antibodies could then be obtained and used for its detection. Using these antibodies we confirmed M interaction with cellular proteins tropomyosin and nucleophosmin. It was also demonstrated by immunofluorescence and western blotting that protein M when expressed out of viral infection context, presents cytoplasmic and nuclear localization. Immunization tests were made with the purified M protein or with a eukaryotic vector that expresses it (DNA). Immunization with M protein resulted only in humoral response, while with the DNA vaccine only cellular response was obtained. None of these antigens, however, was able to confer protection against hRSV.