Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-05-31T04:05:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339614.pdf: 2590718 bytes, checksum: 1167194006e4630cfa0a4984aba90e64 (MD5) Previous issue date: 2015 / As proteínas cinases ativadas por mitógenos (MAPKs) representam uma família de serina/treonina cinases ativadas por fosforilação em resposta a sinais extracelulares que incluem ERK 1/2, JNK p54/p46 e p38MAPK. No sistema nervoso central (SNC) estas enzimas medeiam eventos associados ao desenvolvimento e neuroplasticidade. No período inicial do desenvolvimento pós-natal ocorrem alterações significativas na estrutura do cérebro e sinalização intracelular. No hipocampo de roedores as MAPKs têm sido apontadas como proteínas fundamentais na modulação do desenvolvimento neural e plasticidade sináptica. Apesar dessas evidências a ontogenia pós-natal das MAPKs em estruturas específicas, bem como o seu papel, em determinadas fases do desenvolvimento, para o estabelecimento de funções motoras e cognitivas no adulto tem sido pouco caracterizada. A compreensão do padrão de ativação das MAPKs durante o neurodesenvolvimento é essencial, uma vez que pequenas alterações na atividade dessas proteínas em janelas específicas do desenvolvimento podem implicar em alterações funcionais tardias. No presente estudo foi determinado, em uma primeira etapa, o perfil ontogenético da fosforilação e conteúdo total das MAPKs no hipocampo de ratos Wistar machos durante o período pós-natal (PN) 1-60. Para isso a fosforilação e o conteúdo total das MAPKs foram avaliados por western blotting nas idades: PN1, PN4, PN7, PN10, PN14, PN21, PN30 e PN60. Os resultados foram expressos como percentual relativo à PN1 e demonstraram: (1) aumento significativo na fosforilação de p38MAPK de forma bimodal em PN4 e PN10-60; (2) aumento na fosforilação de ERK1 (PN4) e ERK2 (PN14) dependente da idade; (3) variação do conteúdo total de JNKp54 com perfil similar ao da ativação de p38MAPK; 4) ausência de variação na taxa de fosforilação de JNK p54/p46 nas idades analisadas. Em uma segunda etapa foi determinado o papel da atividade de ERK 1/2 durante o desenvolvimento em relação às alterações comportamentais, da estrutura sináptica e na proliferação celular hipocampal na vida adulta do animal. Para isso, foi utilizado um protocolo de inibição de MEK/ERK com U0126 (5 mg/kg; i.p.) durante um período crítico de sinaptogênese (PN7-14). Os resultados mostraram que o tratamento com o U0126 foi efetivo, pois foi observado inibição significativa da fosforilação de ERK 1, avaliada no hipocampo em PN7 e 6 h após a administração do inibidor. Adicionalmente, demonstraram que o tratamento com U0126 em PN7-14, quando comparado ao controle (DMSO 1%), tem consequências relevantes na vida adulta dos animais que incluem: (i) modificações na estrutura sináptica no hipocampo em PN30, com diminuição do diâmetro da densidade pós-sináptica e no número de vesículas no terminal pré-sináptico; (ii) danos permanentes na memória de curta duração; (iii) diminuição na proliferação celular analisado pela quantidade de células positivas para Ki-67 no giro denteado do hipocampo; e (iv) aumento na expressão de GFAP no hipocampo dos ratos quando comparado ao grupo controle (DMSO 1%). Em conjunto os resultados mostram a existência de um perfil específico de atividade das MAPKs durante o desenvolvimento pós-natal de ratos e sugerem que alteração da atividade dessas enzimas, por fatores ambientais diversos, podem acarretar alterações funcionais e estruturais permanentes do SNC.<br> / Abstract : The mitogen-activated protein kinases (MAPK) represent a family of serine/threonine kinases activated by phosphorylation in response to extracellular signals that includes ERK 1/2, JNK p54/p46 and p38MAPK. In the central nervous system (CNS), these enzymes mediate events associated with development and neuroplasticity. The early postnatal development is characterized by significant changes in brain structure, and intracellular signaling. In the hippocampus of rodents MAPKs have been identified as key proteins in the modulation of neural development and synaptic plasticity. Despite these evidences, studies characterizing the postnatal ontogeny of MAPKs in specific structures in the early periods of postnatal development in rodents are scarce. Thus, understanding the pattern of MAPK activation during brain development is critical, since minor changes in the activity of these proteins in specific developmental windows can result in later functional disorders. Accordingly, our study initially determined the profile of phosphorylation and total content of MAPKs in the hippocampus of male Wistar rats during the postnatal period (PN) 1-60. In order to target this aim MAPKs were evaluated by western blotting at ages: PN1, PN4, PN7, PN10, PN14, PN21, PN30 and PN60. The results were expressed as percentage related to PN1 and demonstrated: (1) significant increment in phosphorylation of p38MAPK displayed in two peaks one PN4 and a second at PN10-60; (2) age dependent increase in the phosphorylation of ERK1 (PN4) and ERK2 (PN14); (3) change in the total content JNKp54 with similar profile to that of p38MAPK activation; (4) no variation in the content of JNKp46 nether in the rate of phosphorylation of JNK p54/p46 in the ages analyzed. In a second stage we determined the role of ERK 1/2 activity during development regarding changes in synaptic structure, behavioral and cellular proliferation in the adult life. For this, rats were treated in the developmental period PN7-14 with the MEK/ERK inhibitor U0126 (5 mg/kg; ip). The results showed that the treatment with U0126 was effective, since it was detected a significant inhibition of ERK 1 phosphorylation, evaluated at PN7 and 6 h after the administration of the inhibitor. Moreover, the results demonstrated that the treatment with U0126 at PN7-14, as compared to the control (DMSO 1%), bring consequences for adulthood that include: (i) changes in hippocampal synaptic structure at PN30, decreasing the diameter of postsynaptic density and the number of vesicles in the presynaptic terminal; (ii) permanent damage in short term memory; (iii) a decrease in cell proliferation assessed by the number of cells positive for Ki-67 in the dentate gyrus of the hippocampus); and (iv) increased expression of GFAP in the hippocampus of rats compared with the control group (1% DMSO). Taken together the results show a specific profile of MAPKs activity during the postnatal development of rats and suggest that alteration of the activity of these enzymes by environmental factors may cause permanent functional changes in the CNS.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:01:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo952_1.pdf: 1410890 bytes, checksum: f60bbdcb14b3cd65dda31fe213474f0e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Indigofera suffruticosa Mill, conhecida popularmente por Anil do Campo, é utilizada na Medicina tradicional como agente antiespasmódico, sedativo, diurético e antiinflamatório. O presente estudo teve como objetivo avaliar a ação anticonvulsivante e ansiolítica desta planta através do extrato metanólico de suas folhas. Camundongos albinos Swiss foram submetidos às doses de 100, 300 e 500mg/kg do extrato metanólico. Para investigação da ação anticonvulsivante os animais sofreram a ação dos seguintes convulsivantes: Pentilenotetrazol 100mg/kg, Picrotoxina 10mg/kg, Estricnina 2mg/kg, Pilocarpina 600mg/kg e Lidocaína 200mg/kg. Na avaliação da ação ansiolítica da planta, os camundongos foram submetidos ao Labirinto em Cruz Elevado e ao Teste de Esconder as Esferas. Como droga padrão, utilizou-se em todos os modelos experimentais o Diazepam, nas doses de 2mg/kg para os testes anticonvulsivantes e 1mg/kg para os testes de ansiedade. O extrato metanólico demonstrou ação anticonvulsivante, aumentando o tempo de latência para o início da primeira convulsão em todos os testes realizados, sendo a dose de 300mg/kg considerada ideal. Apesar da comprovação de sua ação anticonvulsivante, e portanto depressora do Sistema Nervoso Central, não foi observada ação ansiolítica em nenhuma das doses testadas. Os resultados desta investigação demonstram que esta é uma planta promissora para estudos futuros no desenvolvimento de novas drogas anticonvulsivantes

Os tumores embrionários do Sistema Nervoso Central (SNC) são os mais comuns em crianças de zero a quatro anos e a principal causa de mortalidade infantil. O tratamento convencional desses tumores malignos resulta em diversas sequelas que afetam significativamente a qualidade de vida dos sobreviventes. Diferentes estudos têm demonstrado que a ativação de genes tipicamente expressos em células-tronco, como o fator de pluripotência OCT4A, confere características mais primitivas e agressivas às células tumorais, frequentemente associadas ao prognóstico clínico desfavorável. Fundamentado na hipótese da existência das células-tronco tumorais (CTT) e sua contribuição na progressão tumoral, o presente estudo pré-clínico teve como objetivo identificar novos biomarcadores moleculares em tumores embrionários agressivos do SNC e avaliar novas abordagens terapêuticas capazes de destruir as CTT. A análise de proteomica e sequenciamento de microRNAs (miRNAs) presentes em microvesículas (MVs) derivadas de quatro linhagens celulares de meduloblastoma (DAOY, CHLA-01-MED, D283-MED e USP13-MED) identificou 464 proteínas e 10 miRNAs comumente expressos nas células tumorais com superexpressão de OCT4A. O estudo global de interação dessas proteínas e miRNAs exclusivamente expressas nas MVs derivadas das células tumorais com maior agressivas revelaram alteração em vias de sinalização como ERK, PI3K/AKT/mTOR, EGF/EGFR, e principalmente vias envolvidas com a auto renovação de células-tronco embrionárias (CTE). Dentre os fatores encontrados expressos nas MVs derivadas de células com superexpressão de OCT4A, quatro proteínas (UBE2M, HNRNPCL2, HNRNPCL3, HNRNPCL4) e cinco miRNAs (miR-4449, miR-500b, miR-3648, miR-1291, miR-3607) não apresentam relatos de expressão em tecidos normais, plasma ou soro sanguíneo. O miR-367, importante para a manutenção do estado pluripotente em CTE, também apresentou aumento dos níveis de expressão nas MVs derivadas de linhagens celulares de tumores embrionários do SNC com superexpressão de OCT4A. A inibição do miR-367 diminuiu significativamente a proliferação e invasão celular, a atividade clonogênica e a capacidade de gerar neuroesferas em todas as linhagens celulares de tumores embrionários do SNC. Em modelo pré-clínico de camundongos Balb/C Nude submetido ao xenoenxerto de tumores embrionários com superexpressão de OCT4A, foi demostrado que injeções seriadas do miR-367 inhibitor diretamente no líquido cefaloraquidiano foram capazes de inibir a progressão tumoral e aumentar significativamente a sobrevida in vivo. Neste mesmo estudo, foi comprovado que o SUZ12, componente do complexo PRC2 envolvido com o silenciamento epigenético de fatores de pluripotência, incluindo o gene POU5F1 que codifica o OCT4A, é alvo direto do miR-367. Por fim, visto que o vírus ZIKA (ZIKV) infecta preferencialmente células progenitoras neurais (NPCs), enquanto neurônios não são susceptíveis a infecção, inibindo a proliferação das células alvo, como também induzindo a diferenciação prematura e morte por apoptose, o efeito oncolítico do ZIKV também foi avaliado em tumores embrionários do SNC cujas células tumorais apresentam propriedades de células-tronco. A ZIKV infectou seletivamente e causou morte celular nas células tumorais de origem neural, porém o mesmo não foi observado nas células oriundas de tumor humanos mais comuns como tumor próstata, colorretal e mama. Em ensaio de cultura 3D, o ZIKV foi capaz de destruir as esferas de tumores embrionários do SNC com mais eficiência quando comparadas com neuroesferas normais formadas a partir de NPCs. Em ensaio in vivo, uma única injeção intracerebroventricular contendo mil partículas virais do ZIKV brasileiro foi capaz de aumentar significativamente a sobrevida de camundongos com tumores embrionários de origem humana, diminuir o tamanho do tumor, os sítios metastáticos, e apresentar remissão completa do tumor em vários animais. Adicionalmente, células tumorais com fenótipo molecular similar às NPCs e com ativação anormal da via de sinalização Wnt apresentaram maior suscetibilidade aos efeitos oncolíticos do ZIKV. Portanto, ao realizar a modulação da via Wnt, foi observado uma alteração significativa na infecção e morte celular causada pelo ZIKV. Deste modo, podemos concluir que diversas proteínas e miRNAs foram encontradas presentes exclusivamente em MVs derivadas de células tumorais com superexpressão de OCT4A e poderiam ser utilizadas como biomarcadores de agressividade em meduloblastoma. Adicionalmente, os ensaios in vitro e in vivo evidenciaram o miR-367, envolvido na regulação da auto renovação de CTE, como oncomiR e possível alvo terapêutico no tratamento de tumores embrionários do SNC. Além disso, o ZIKV demostrou potente e seletivo efeito oncolítico nas células tumorais do SNC com caráter progenitor e apresentou níveis de infecção mais proeminente nas células com alta expressão basal de Wnt/&beta; -catenina. Portanto, os resultados pré-clínicos encontrados no presente estudo evidenciam novos biomarcadores de células tumorais agressivas com perfil de células-tronco, que podem ser explorados em futuras pesquisas translacionais de refinamento do diagnóstico clínico, estratificação de pacientes, detecção precoce de recidiva tumoral, além de revelar novas abordagens terapêuticas direcionadas às CTTs, beneficiando os pacientes afetados com tumores embrionários do SNC cujas terapias convencionais não são efetivas / Embryonal tumors of central nervous system (CNS) are the most fatal pediatric tumors occurring in young children. Treatment of these aggressive CNS tumors may also result in serious long-term sequelae, affecting the patient\'s quality of life. Several studies have demonstrated that activation of genes encoding proteins typically expressed in stem cells, such as the pluripotency factor OCT4A, confers more primitive and aggressive features to tumor cells. These stem-like features in cancer cells are often associated with unfavorable clinical prognosis. The aim of this preclinical study was to identify new molecular markers of aggressive embryonal CNS tumor cells and evaluate new therapeutic approaches capable of killing these stem-like tumor cells of the CNS. The rationale of this study considered the existence of the so called cancer stem cells (CSC) and their contribution to tumor progression. Proteome analysis and miRNA sequencing of microvesicles (MVs) derived from four distinct medulloblastoma cell lines (DAOY, CHLA-01-MED, D283-MED, and USP13-MED) identified a common set of 464 proteins and 10 microRNAs associated with aggressive OCT4A-overexpressing tumor cells. The interactome mapping of these exclusive proteins and miRNAs revealed ERK, PI3K/AKT/mTOR, EGF/EGFR, and embryonic stem cell (ESC) self-renewal as the main oncogenic signaling pathways altered in these aggressive medulloblastoma cells. Of these MV cargos, four proteins (UBE2M, HNRNPCL2, HNRNPCL3, HNRNPCL4) and five miRNAs (miR-4449, miR-500b, miR-3648, miR-1291, miR-3607) have not been previously reported in MVs from normal tissues. The miR-367 was another new ESC-related miRNA found up-regulated in embryonal CNS tumor cells overexpressing OCT4A. Inhibition of miR-367 in these cells significantly reduced their proliferative and invasive behavior, clonogenic activity, and tumorsphere generation capability. Therapeutic targeting of miR-367 in vivo, through direct injections of a specific inhibitor in the cerebrospinal fluid (CSF) of Balb/C Nude mice bearing OCT4A-overexpressing tumor xenografts, inhibited tumor development and improved overall survival. miR-367 was also shown to target SUZ12, one of the core components of the PRC2 complex known to be involved in epigenetic silencing of pluripotency-related genes, including POU5F1 encoding OCT4A. Finally, considering that the Zika virus (ZIKV) prominently infects and kills neural stem and progenitor cells (NPCs), we also tested whether ZIKV would have the same effects in CNS embryonal tumors, given that these tumors are originated from NPC aberrations and are comprised by cells with neural stem cell-like features. When evaluating the oncolytic properties of Brazilian ZIKV strain against human breast, prostate, colorectal and embryonal CNS tumor cell lines, a selective infection of CNS tumor cells, followed by a massive tumor cell death, was verified. Notably, ZIKV was more efficient in destroying embryonal CNS tumorspheres than normal stem cell neurospheres. A single intracerebroventricular injection of ZIKV in BALB/c nude mice bearing orthotopic human embryonal CNS tumor xenografts resulted in significantly longer survival, decreased tumor burden, fewer metastasis and complete remission in some animals. Tumor cells closely resembling neural stem cells at the molecular level and with activated Wnt signaling were more susceptible to ZIKV oncolytic effects. Furthermore, modulation of Wnt signaling pathway significantly affected ZIKV-induced tumor cell death and viral shedding. In conclusion, several proteins and miRNA were identified exclusively in MVs from OCT4A-overexpressing tumor cells, which might serve as biomarkers of aggressive stem-like medulloblastoma cells. The miR-367 involved in ESC self-renewal displayed properties typical of oncomiRs as indicated by in vitro and in vivo assays, supporting its eligibility as a therapeutic target in embryonal CNS tumor cells. Also, ZIKV displayed potent and selective oncolytic effects toward human embryonal CNS tumor cells, at low infection rates. These effects were more prominent in tumors generated by neural stem-like cancer cells with high Wnt/&beta;-catenin basal activity. Altogether, these preclinical findings open opportunities of future translational studies to evaluate new putative biomarkers of aggressive stem-like tumor cells in refining diagnosis, patient stratification, and early detection of relapsed disease, while also revealing novel therapeutic approaches targeting these stem-like tumor cells that could benefit patients affected by CNS tumors lacking effective treatment

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Biologicas / Made available in DSpace on 2012-10-16T11:17:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T20:51:05Z : No. of bitstreams: 1 105627.pdf: 3171900 bytes, checksum: 5058f3926f899d9cd5c6ba0660b79c5c (MD5) / O estudo da origem, trajeto e ramificação da artéria cerebelar caudal, em 40 cães, injetados com solução de Schlesinger. Resultados: em 58,75% das observações, encontramos a artéria cerebelar caudal única e em 41,25% dupla. Em 5,00% dos lados observamos a presença de uma artéria cerebelar caudal acessória. A artéria cerebelar caudal originou-se da artéria basilar em 70,80% dos casos, da artéria vertebral em 26,55% ou de um tronco vértebro-basilar em 2,65%. Correlacionando origem e número da artéria cerebelar caudal verificamos que, quando única, esta teve origem na artéria basilar em 37,50% dos lados, na vertebral em 17,50%, e no tronco vértebro-basilar em 3,75%. Quando dupla, originou-se na artéria basilar em 21,25% e em 20,00% um ramo teve origem na artéria basilar e o outro na artéria vertebral.

O Tabagismo é uma das principais causas de doenças crônicas não transmissíveis, afetando cerca de 1,6 bilhões de pessoas até 2030. Políticas de controle do tabagismo foram criadas para evitar a contaminação de indivíduos não fumantes pela poluição tabagística ambiental. Descritas principalmente no pulmão, pouco se sabe sobre a ação da fumaça do cigarro no sistema nervoso central (SNC). O presente estudo tem como objetivo avaliar os efeitos da exposição à fumaça do cigarro, por 15 dias consecutivos, em um processo de inflamação sistêmica induzida por LPS. Para tanto, camundongos C57BL/6 foram expostos a uma mistura de fumaça central e lateral do cigarro referência 3R4F (Universidade de Kentucky, EUA). No último dia, os animais foram desafiados com LPS iv. (0,1 &#181;g/animal) ou salina, formando os grupos CO &#8211; controle, FU &#8211; fumaça do cigarro, LPS &#8211; desafio com LPS e FPS &#8211; fumaça do cigarro e desafio com LPS. As amostras foram processadas de maneira a realizar as análises de RT-PCR para os primers IL-6, IL-1&#946;, TNF-&#945;, TLR2, TLR4 e iNOS, além da dosagem por ELISA das citocinas IL-6, IL-10, IL-1&#946; e TNF-&#945; e western blot para a proteína P65. Nossos resultados demonstraram um aumento da transcrição dos genes TLR2, TLR4 e iNOS, em todas as estruturas analisadas no período de 2 horas de eutanásia após o desafio com LPS no grupo FPS em relação a todos os outros grupos estudados. Já no período de 4 horas após o desafio foi possível observar um aumento dos genes IL-1&#946; e TNF&#945; em ambos grupos que receberam o desafio com o LPS no hipocampo, estriado, córtex e cerebelo, sugerindo que a influência da fumaça do cigarro se de apenas 2 horas após o desafio, uma vez que no período de 4 horas observamos apenas o efeito do LPS. Os resultados da dosagem de citocinas sugerem que, no período de 4 e 6 horas após o desafio, a citocina anti-inflamatória IL-10 está diminuída no hipocampo e no córtex pré-frontal no grupo FPS em relação a todos os outros grupos estudados. Porém é possível observar um aumento estatisticamente significativo da mesma citocina no cerebelo para o grupo exposto apenas à fumaça do cigarro. Nossos dados sugerem que o processo inflamatório no SNC ocorra de maneira diferenciada dependendo da região estudada, e do período analisado. / Cigarette smoking is a major cause of chronic non-communicable diseases, affecting approximately 1.6 billion people up to 2030. Tobacco control policies were created in order to prevent contamination of non-smokers by environmental tobacco smoke. Described primarily in the lung, little is known about the action of cigarette smoke in the central nervous system (CNS). The present study aims to evaluate the effects of cigarette smoke exposure for 15 consecutive days in a process of systemic inflammation induced by LPS. To this so, C57BL/6 mice were exposed to a mixture of mainstream and sidestream cigarette smoke reference 3R4F (University of Kentucky, USA). In the last day, animals were challenged with LPS iv. (0.1 &#181;g/animal) or saline and divided into the following groups: CO - control, FU - cigarette smoke, LPS - LPS challenge and FPS - cigarette smoke and LPS challenge. The samples were processed in order to perform the RT-PCR analysis for IL-6, IL-1&#946;, TNF-&#945;, TLR2, TLR4 and iNOS primers, ELISA assay of IL-6, IL-10, IL-1&#946; and TNF-&#945; and western blot for p65. Our results showed an increase in transcription of TLR2, TLR4 and iNOS genes in all structures analyzed within 2 hours of euthanasia after LPS challenge in the FPS group compared to all other groups. Beside this 4 hours after challenge was observed an increase of IL-1&#946; and TNF genes in both groups that received the challenge with LPS in the hippocampus, striatum, cortex and cerebellum, suggesting that the influence of cigarette smoke can be observed only 2 hours after the challenge, justified since in a time period of 4 hours we can only observe the effect of LPS. The results suggest that cytokine assay, between 4 and 6 hours after challenge, the anti-inflammatory cytokine IL-10 is decreased in FPS group in the hippocampus and prefrontal cortex. But it is possible to observe a statistically significant increase in the same cytokine in the cerebellum exposed only to cigarette smoke group. Our data suggest that the inflammatory process in the CNS occurs differently depending on the region studied, and the period analyzed.

Agressões nos períodos críticos do crescimento do sistema nervoso podem modificar os eventos de desenvolvimento. Entre os vários fatores nocivos está a anóxia. O organismo do neonato tem suprimento de energia anaeróbica relativamente rica, foi observado que a acidose ocorre com menor facilidade, propiciam sobrevivência. A proteína de astrócitos, S100<font face=\"Symbol\">b, exerce efeitos parácrinos e autócrinos em neurônios e glia. Sua estimulação promove sobrevivência e proteção neuronal, atuando como fator trófico e neurotrófico. Modelo animal de anóxia neonatal desenvolvido em nosso laboratório, nos revelou ativação neural pela expressão de Fos e alterações comportamentais, o que nos instigou a explorar os efeitos da anóxia nas células da glia no Hipocampo e Núcleo do Trato Solitário. Para sua exposição à anoxia, durante 25 minutos, foi utilizada câmara, saturada com nitrogênio gasoso 100%. Grupos P2 e P7 nas condições: Basal (B), sem estimulo; Sham (S) como controle experimental e Anóxia (A) com falta de oxigênio, foram analisados por S100<font face=\"Symbol\">b-IR com técnicas ABC/DAB e Western blot. Observamos significante diferença de S100<font face=\"Symbol\">b-IR no núcleo do trato solitário, somente no grupo P2 A 2 h em relação ao grupo P2 S 2 h. A reatividade glial de S100<font face=\"Symbol\">b na formação hipocampal (CA1, CA3+CA2 e DG), apresentou diferença significante no grupo anoxia de acordo com o estágio de maturação do animal. A técnica por Western blot em toda a formação hipocampal, apresentou aumento de S100<font face=\"Symbol\">b no grupo A em ambos P2 e P7, a avaliação de um todo foi diferente daquela de áreas especificas. / Attacks to the nervous system at critical growth periods can modify developmental events. Among the various harmful factors at is anoxia. The high anaerobic energy supply to the newborn and a less easily acidosis occurrence provides survival. The astrocyte S100<font face=\"Symbol\">b protein exerts paracrine and autocrine effects on neurons and glia. Its stimulation promotes neuronal survival and protection, as a trophic and neurotrophic factor. An animal model of neonatal anoxia improved in our lab revealed neural activation by Fos expression and behavioral changes, which prompted us to explore the anoxia effects on glial cells in the Hypocampus and Nucleus of Solitary Tract. For their exposure to anoxia, a chamber, saturated with 100% nitrogen gas, for 25 minutes were used. Groups with P2 and P7, conditions: Baseline, without stimulation; Sham as the experimental control, and Anoxia with lack of oxygen, were evaluated by S100<font face=\"Symbol\">b-IR by ABC/DAB and Western blot techniques. The nucleus of solitary tract, significant different S100<font face=\"Symbol\">b-IR observed, only in the P2 A 2 h compared to P2 S 2 h. The glial S100<font face=\"Symbol\">b-IR at the hippocampal formation (CA1, CA2 + CA3 and DG) presented significant difference in the anoxic group according to the maturational stage of the animal. Western blot technique of the entire hippocampal formation, showed increase of S100<font face=\"Symbol\">b at the group A at both P2 and P7, the whole evaluation was different from of that of specific areas.

A crescente importância do ciclo silvestre da raiva envolvendo morcegos e mamíferos terrestres demonstra a importância do estudo da epidemiologia do vírus da raiva nessas espécies. Foram estudadas amostras provenientes de diversas espécies de animais silvestres terrestres procedentes de uma área de Mata Atlântica nativa no litoral Norte do Estado de São Paulo. Este estudo pesquisou a presença de anticorpos contra o vírus da raiva por meio dos Testes de RFFIT, SFIMT e ELISA em amostras de soro de animais capturados em uma área desmatada, transpostos e monitorados em uma área de soltura. E ainda a pesquisa do vírus da raiva por meio das técnicas de IFD, IC e RT-PCR em amostras de sistema nervoso central dos animais encontrados mortos na região. A positividade observada foi de 10,8% na RFFIT, 34,0% no SFIMT e 1,13% no ELISA. Todos as amostras submetidas as técnicas de IFD, IC e RT-PCR apresentaram resultados negativos. Os resultados observados demonstram circulação do vírus entre as espécies silvestres da área. / The emergent importance of rabies in terrestrial wild animals demonstrates the importance of epidemiological studies regarding rabies virus in those animal species. Samples from several wild species from a native Rainforest area in the North coast of São Paulo State Brazil were studied. The aim of the present study was the research of anti-rabies antibodies in those animals using the RFFIT, SFIMT and ELISA techniques in animals captured and monitorated in a release área. And also by rabies virus detection using FAT, MIT and RT-PCR techniques in central nervous system samples from animals found dead in the same area. The observed positivity was 10,8% on RFFIT, 34,0% on SFIMT e 1,13% on ELISA. All samples tested by the FAT, MIT and RT-PCR techniques presented negative results. The observed results are an evidence of rabies virus circulation between wild animal species in the studied area.

A ordem Characiformes compreende cerca de 1700 espécies formalmente descritas que habitam a região Neotropical e com três famílias exclusivas da região da Etiópica subsaariana. Possui formas herbívoras, carnívoras e detritívoras, sendo uma ordem com hábitos ecológicos diversos. A classificação formal das famílias da ordem é baseada quase que estritamente em caracteres osteológicos e poucos caracteres de outras naturezas são utilizados para estabelecer hipóteses filogenéticas no grupo. Dessa maneira, o estudo do complexo morfológico encefálico preencheu essa lacuna representada pela ausência de novos caracteres de outra natureza morfológica que contribuam para o melhor entendimento das relações de parentesco entre os Characiformes. O presente estudo teve como objetivos principais a descrição e ilustração da macro morfologia encefálica de representantes das famílias de Characiformes e o levantamento de caracteres filogeneticamente informativos relacionados a esse complexo morfológico. Foram examinados 52 táxons terminais e 42 caracteres encefálicos. Adicionalmente a matriz de dados encefálicos, foram incoporados 126 caracteres osteológicos que definem os principais agrupamentos de Characiformes. O comportamento dos caracteres encefálicos foi mapeado através de uma análise de parcimônia, dessa maneira auxiliando a sustentar vários arranjos filogenéticos. Alguns arranjos filogenéticos novos foram obtidos, tais como, a relação de grupo-irmão entre Hemiodontidae + Chalceidae; Cynodontidae + Acestrorhynchidae como clado-irmão de Erythrinoidea; Gasteropelecidae + Triportheidae + Bryconidae sendo mais relacionados entre si; Crenuchidae como grupo-irmão de Characidae. Além dessas relações, corroborramos a elevação de algumas subfamílias de Characidae para o status de família, como Acestrorhynchidae, Bryconidae, Cynodontidae, Iguanodectidae e Triportheidae. A família Characidae tendo Heterocharacinae como ramo basal e sustentada principalmente por caracteres osteológicos tendo adicionalmente, um caráter exclusivo encefálico. Aphyoditeinae + Aphyocharacinae + Cheirodontinae mais relacionados e a subfamília Characinae como um grupo monofilético. / Characiformes comprises about 1.700 formally described species inhabiting the Neotropical region and three exclusives families of sub-Saharan Etiopic. The species of the order have herbivorous, carnivorous and detritivores feeding habits, being an order of several ecological habits. The formal classification of the families of the order is based almost exclusively on osteological characters and very few of characters of other types are used to establish phylogenetic hypotheses in the group. Thus, the present study of brain morphological complex aims to fill this gap represented by the absence of new morphological characters of another nature that might contribute to a better understanding of the relationships among the Characiformes. Thus, the present study had as main objectives the description and illustration of external brain morphology of representatives of all the families of Characiformes and the searching for phylogenetically informative encephalic morphological characters. For this, 52 terminal taxa and 42 brain characters were examined, in addition of brain data set, have been examined 126 osteological characters that define the main groups of Characiformes. The behavior of brain characters was mapped through a parsimony analysis, thus helping to sustain several phylogenetic arrangements of Characiformes. Some new phylogenetic arrangements were obtained, such as: the sister-group relationship between Hemiodontidae + Chalceidae; Cynodontidae + Acestrorhynchidae as clade-sisters of Erythrinoidea; Gasteropelecidae + Triportheidae + Bryconidae forming a monophyletic group; Crenuchidae as sister group of Characidae. In addition to these relationships, we corroboratethe elevation of some subfamilies of Characidae to family status, such as Acestrorhynchidae, Bryconidae, Cynodontidae, Iguanodectidae and Triportheidae. The Characidae family having Heterocharacinae as the most basal clade and sustained mainly by osteological characters, plus an exclusive character of brain nature. Aphyoditeinae + Aphyocharacinae related to Cheirodontinae and, Characinae subfamily as a monophyletic group.

Alterações na atividade de peptidases no sistema nervoso central (SNC) de adictos a narcóticos, abstinentes dependentes de opióides, diabéticos e indivíduos com desequilíbrio hidrosalino, têm sido achados instigantes no contexto atual dos conhecimentos sobre o balanço energético. Neste sentido, são particularmente interessantes o fenômeno da proteólise irrestrita e o envolvimento de diversos peptídeos do SNC, especialmente no hipotálamo e hipocampo, como as incretinas, neuropeptídeo Y, peptídeo YY, peptídeos derivados da proopiomelanocortina (melanocortinas e beta-endorfinas), somatostatina, vasopressina e angiotensinas. O presente estudo avaliou a hipótese de que aminopeptidases que têm alguns desses peptídeos como substratos, a aminopeptidase neutra (APN) (sensível PSA, e insensível APM/CD13, à puromicina) e a dipeptidil peptidase IV (DPPIV/CD26) (sensível - DPPIV-DS, e insensível - DPPIV-DI à diprotina), poderiam relacionar-se com a obesidade induzida por glutamato monossódico (MSG) e com o estado de privação alimentar. Foram analisadas as expressões gênica e protéica da CD13 e CD26, as atividades enzimáticas de PSA, APM, DPPIV-DS e DPPIV-DI em fração solúvel e de membrana solubilizada, a ativação celular (imuno-reatividade a Fos), a distribuição imuno-histoquímica regional de CD13 e CD26 no hipotálamo e hipocampo e as correlações entre atividades peptidásicas, massa corporal, índice de Lee, massa dos depósitos de gordura periepididimal e retroperitoneal, comprimento naso-anal e glicemia de ratos obesos MSG e normais, sob regime de privação ou alimentação normal. Comparativamente aos controles, os animais MSG apresentaram: (i) aumento da massa absoluta de gordura retroperitoneal, índice de Lee, expressão protéica CD13 membranal do hipocampo, expressão protéica policlonal CD26 membranal do hipotálamo, atividade DPPIV-DI e expressão protéica monoclonal CD26 membranal do hipocampo; e (ii) diminuição da massa corporal absoluta, comprimento nasoanal, expressão gênica de CD13, expressão protéica membranal de CD13, expressão protéica policlonal de CD26 solúvel e membranal, atividades PSA solúvel e DPPIV-DI solúvel e membranal hipotalâmicas e DPPIV-DS membranal do hipocampo. A privação de alimento também influencia alguns destes parâmetros. As correlações entre os parâmetros biométricos confirmaram características deste modelo de obesidade e adicionalmente sugeriram que a deficiência e a sobrecarga relativas de captação de glicose, respectivamente pela gordura periepididimal e retroperitoneal, poderiam estar associadas ao desenvolvimento do diabetes melito tipo 2 no obeso MSG. Confirmou-se a identidade da proteína CD13 com a atividade peptidásica APM. A DPPIV-DI foi identificada como a CD26 canônica. Em geral, o presente estudo evidenciou o envolvimento das atividades PSA, DPPIV-DI e -DS hipotalâmicas (mas não da APM) e das proteínas CD13 e CD26, na regulação endócrina do balanço energético (provavelmente via atuação sobre neuropeptídeo Y, somatostatina e opióides). No hipocampo, o padrão destas alterações foi compatível com efeito deletério sobre memória, aprendizado (PSA e APM) e comportamento emocional (DPPIV-DI e DS). CD13 e CD26 apresentaram ampla distribuição no hipotálamo, a qual, em condições normais, foi coincidente com a imuno-reatividade à Fos nos núcleos supraóptico, periventricular, retroquiasmático e arqueado. Nestas áreas, relacionadas ao controle do balanço energético, ocorreram alterações densitométricas da imuno-reatividade a CD13, CD26 e Fos em função da obesidade MSG e/ou da privação de alimento. Em suma, proteínas com atividades de aminopeptidase neutra 9 ou dipeptidil peptidásica do tipo IV e/ou homólogas à CD13 ou CD26 são fatores fisiopatológicos e alvos farmacológicos potenciais de distúrbios do metabolismo energético. / Alterations of peptidase activity levels in the central nervous system (CNS) in drug addicts, abstinent opioid-dependent, diabetic and subjects with disrupted hydrosaline equilibrium, have been arousing findings in the context of current knowledge about regulatory mechanisms of food intake and energy balance. In this sense, the involvement of leptin, ghrelin, insulin and other peptides in the CNS, including incretins, neuropeptide Y, peptide YY, proopiomelanocortins (melanocortins and _-endorphin), somatostatin and vasopressin, which are susceptible to hydrolysis by aminopeptidases (APs), mainly in the hypothalamus and hippocampus, are particularly interesting. The present work evaluated if aminopeptidase activities involved in the hydrolysis of these peptides, i.e. neutral AP (APN) (sensitive- or insensitive-puromycin AP, PSA or APM/CD13, respectively) and dipeptidyl peptidase IV (DPPIV/CD26) (sensitive- or insensitive-diprotin dipeptidyl peptidase, DPPIV-DS or DPPIVDI, respectively), are associated with monosodium glutamate (MSG) induced obesity and food deprivation. It was analysed the gene and protein expressions of CD13 and CD26, catalytic activities of PSA, APM, DPPIV-DS and DPPIV-DI in soluble and membrane-bound fractions, cellular activation (Fos immunoreactivity) and regional immunohistochemistry distribution of CD13 and CD26, in hypothalamus and hippocampus, and inter-relations among these peptidase activities, body mass, Lee index, mass of epidydimal and retroperitoneal fat pad, naso-anal length and glycemia in normal and obese MSG rats under normal or deprived feeding regimens. Relative to control, MSG presented: (i) increased retroperitoneal mass, Lee index, CD13 protein expression in membrane-bound fraction of hippocampus, CD26 polyclonal protein expression in membrane-bound fraction of hypothalamus, DPPIV-DI activity and CD26 monoclonal protein expression in membranebound fraction of hippocampus; and (ii) reduction of body mass, naso-anal length, CD13 gene expression, CD13 protein expression in membrane-bound fraction, CD26 polyclonal protein expression in soluble and membrane-bound fraction, PSA activity in soluble fraction and DPPIV-DI activity in soluble and membrane-bound fractions of hypothalamus, and DPPIVDS in membrane-bound fraction of hippocampus. Food deprivation also influenced some of these parameters. The correlations between biometric parameters confirmed the characteristics of this obesity model and further suggested that disability and overload on the uptake of glucose, respectively by the epididymal and retroperitoneal fat, could be linked to the development of diabetes mellitus type 2 in obese MSG. CD13 protein identity with APM peptidase activity was confirmed. DPPIV-DI was identified as the canonical CD26 protein. In general, the present work revealed the involvement of PSA, DPPIV-DI and DS hypothalamic activities (but not the APM) and the CD13 and CD26 proteins, in endocrine regulation of energy balance (probably through action on neuropeptide Y, somatostatin and opioids). In the hippocampus, the patterns of these changes were consistent with deleterious effects on memory, learning (PSA and APM) and emotional behavior (DPPIV-DI and DS). CD13 and CD26 presented wide distribution in hypothalamus, which, in normal conditions, is coincident with Fos immunoreactivity in the supraoptic, periventricular, retrochiasmatic and arcuate nuclei. In these areas, related to the control of energy balance, densitometric changes of CD13, CD26 and Fos immunoreactivity occurred according to the obesity MSG and/or food deprivation. Briefly, proteins presenting neutral aminopeptidase or dipeptidyl peptidase IV 11 activities and/or CD13 or CD26 homologous are physiopathological factors and potential pharmacological targets of energetic metabolism disturbances.

A vareniclina é uma substância química sintética utilizada para o tratamento de tabagismo; atua como agonista de receptores colinérgicos nicotínicos, em especial, como agonista parcial em receptores &#945;4&#946;2 e &#945;3&#946;4, e como agonista total do receptor &#945;7. Levando em consideração que há uma tendência de ampliação do uso clínico da vareniclina para o tratamento da dependência à diversas substâncias de padrão abusivo e que há poucos estudos relacionados aos seus efeitos sobre o comportamento, cognição e sistema motor, tornam-se necessários mais estudos sobre essa substância. Assim, no presente trabalho foram estudados os efeitos da exposição prolongada (28 30 dias) de ratos à vareniclina, avaliando-se o consumo de água e de ração, o ganho de peso e o comportamento animal, por meio dos testes de campo aberto, labirinto em cruz elevado, interação social, comportamento estereotipado, labirinto de Barnes e esquiva passiva. Ainda foram feitas as avaliações dos níveis de neurotransmissores e seus metabólitos em diferentes estruturas cerebrais, bem como avaliações hematológicas, bioquímicas séricas, urinárias e estudos anatomopatológicos e histopatológicos. Foram utilizadas três doses de vareniclina: 0,03 (dose terapêutica para o ser humano), 0,1 e 0,3 mg/kg, por via oral (gavagem). Os resultados mostraram que a exposição prolongada de ratos à diferentes doses de vareniclina não provocou toxicidade, uma vez que não houve alteração no consumo médio de água e de ração e no ganho de peso avaliados semanalmente. Quanto às avaliações comportamentais, observou-se leve aumento da atividade geral no campo aberto, bem como diminuição do tempo de interação social, não sendo capaz de alterar parâmetros neuroquímicos, hematológicos, bioquímicos séricos, urinários, anatomopatológicos e histopatológicos de ratos expostos à vareniclina. / Varenicline is a synthetic chemical used for the smoking addiction treatment; it acts as an agonist of nicotinic cholinergic receptors, in particular, as a partial agonist of receptors &#945;4&#946;2 and &#945;3&#946;4 and as a full agonist of the &#945;7 receptor. More studies about this substance are necessary, given that its clinical use is increasingly being applied to the treatment of addiction to a variety of abusive drugs. Moreover, there are few studies on vareniciline effects on behavior, cognition and the motor system. Thus, in this study the effects of prolonged (28-30 days) exposure of rats to varenicline were evaluated. It was analyzed the water and food consumption, the weight gain and the animal behavior, through open field, elevated plus maze, social interaction, stereotyped behavior, Barnes maze and passive avoidance tests. The neurotransmitter levels and their metabolites in different brain structures were measured and hematological, serum biochemistry, urinary evaluations and pathological and histological studies were carried out. We used three doses of varenicline: 0.03 (therapeutic dose for humans), 0.1 and 0.3 mg/kg orally (gavage). The results showed that prolonged exposure of rats to different doses of varenicline did not cause toxicity, since there were no changes in average weekly consumption of water or food nor body weight gain, which were measured weekly. As for behavioral assessments, there was a slight increase in overall activity in the open field as well as decreased time of social interaction. Varenicline was not able to change neurochemical, hematological, serum biochemical, urinary, pathology and histopathology parameters of rats.