Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-09-18T13:52:18Z No. of bitstreams: 1 Eder Silva dos Anjos. Caracterização...2013.pdf: 1214899 bytes, checksum: 285b9e9fed3b500c66d7173ea5a7c440 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-18T13:52:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eder Silva dos Anjos. Caracterização...2013.pdf: 1214899 bytes, checksum: 285b9e9fed3b500c66d7173ea5a7c440 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / O advento das vacinas pneumocócicas conjugadas veio contribuir de forma decisiva para a redução da incidência dos casos de doença invasiva por S. pneumoniae em vários países do mundo. Em contrapartida, tem-se verificado um aumento de casos decorrentes de sorotipos não vacinais, que escapam da vacina e reduzem o seu efeito a partir da expansão de clones pré-existentes com consequente substituição de sorotipos e/ou do fenômeno de troca capsular (capsular switching). No Brasil, a vacina conjugada 10-valente (PCV10) foi introduzida no calendário nacional de imunização a partir de 2010. Este estudo teve como objetivo caracterizar através de técnicas fenotípicas e moleculares os sorotipos não-vacinais (SNVT) de S.pneumoniae, isolados de pacientes com meningite nos períodos anterior (janeiro/2008 - junho/2010) e posterior (julho/2010 - dezembro/2012) à implementação da vacina pneumocócica conjugada 10-valente (PCV10), na cidade de Salvador, Bahia. Os isolados de S. pneumoniae foram identificados através de métodos microbiológicos clássicos e a determinação do tipo capsular foi realizada através da técnica de Multiplex-PCR e/ou reação de Quellung. A sensibilidade a oito antimicrobianos foi realizada através da técnica de microdiluição em caldo e a caracterização genotípica por intermédio das técnicas de PFGE e MLST. Foram identificados 170 casos de meningite pneumocócica durante a vigilância epidemiológica realizada no Hospital Couto Maia, em Salvador, com 148 apresentando cultura positiva para S. pneumoniae a partir do líquor e/ou hemocultura. A incidência da meningite pneumocócica reduziu de 0,9/100.000 habitantes (2008) para 0,36/100.000 habitantes (2012). No período pré-vacinal, os SNVT mais frequentes foram: 3 (n=6; 12%), 19A (n=4; 8%), 6A (n=4, 8%); no período pós-vacinal os SNVT 12F (n=6; 22,2%), 10A (n=3; 11,1%), 15B (n=2; 7,4%) e 18B (n=2; 7,4%) foram os mais frequentes. Cerca de 78% dos isolados apresentaram resistência a um ou mais antibióticos. A não susceptibilidade à penicilina foi encontrada nos sorotipos 19A (3 isolados), 9N (1 isolado) e 12F (1 isolado). Por PFGE, foi observada uma grande diversidade genética com a maioria (66,2%) dos isolados pertencendo a grupos não clonais. O grupo clonal X foi composto por dois isolados do sorotipo 19A (ST2878), do período pré-vacinal, não susceptível à penicilina. A técnica de MLST realizada em 26 isolados permitiu a identificação de quatro novos STs e apresença de STs (ST180, ST193 e ST218) genotipicamente semelhantes aos clones mundiais Netherlands3-31, Greece21-30 e Denmark12F-34. É necessária a continuidade da vigilância epidemiológica da meningite pneumocócica, visando avaliar os efeitos benéficos da vacinação e a dinâmica da distribuição de sorotipos em nossa região. / The licensure and subsequent widespread use of pneumococcal conjugate vaccines have contributed for the reduction in the overall incidence of invasive pneumococcal disease worldwide. However, the emergence of Streptococcus pneumoniae nonvaccine serotypes (SNVT), which escape from the vaccine by the expansion of pre-existing clones following serotype replacement and/or by capsular switching is a matter of concern. In 2010, Brazil introduced the 10-valent conjugate pneumococcal vaccine (PCV10) into its routine National Immunization Program. Our aim was to characterize the phenotypic and genotypic profile of S. pneumoniae non-vacine serotypes (SNVT) isolated from patients with meningitis before (January 2008 – June 2010) and after (July 2010 – December 2012) the introduction of PCV10 in Salvador, Bahia. The pneumococcal isolates were identified by classical microbiological methods and submitted to capsular deduction by multiplex-PCR and/or Quellung reaction. The antimicrobial susceptibility was performed the broth microdilution method. The genotypic profile was assessed by PFGE and MLST. We identified 170 cases of pneumococcal meningitis during the epidemiological surveillance at the Hospital Couto Maia, in Salvador, with 148 showing positive culture for S. pneumoniae from the cerebrospinal fluid and/or blood culture. The incidence of pneumococcal meningitis decreased from 0.9/100.000 (2008) to 0.36/100.000 inhabitants (2012). In the pre-vaccine period the most frequent SNVT were: 3 (n=6, 12%), 19A (n=4, 8%), 6A (n=4, 8%). In the post-vaccine period, the SNVT 12F (n=6, 22.2%), 10A (n=3, 11.1%), 15B (n=2, 7.4%) and 18B (n=2, 7.4%) were the most prevalent. About 78% of the isolates were resistant to one or more antibiotics. The non-susceptibility to penicillin was found among serotypes 19A (3 isolates), 9N (1 isolate) and 12F (1 isolate). By PFGE, a wide genetic diversity was found with the majority of the isolates (66.2%) belonging to non-clonal groups. The clonal group X comprised two isolates of the serotype 19A (ST2878) from the pre-vaccine period presenting non-susceptibilty to penicillin. MLST assay performed in 26 isolates allowed the identification of four new STs and the presence of STs (ST180, ST193 and ST218) with genotipic similarities of the worldwide clones Netherlands3-31, Greece21-30 and Denmark12F-34. Continued surveillance studies are necessary to evaluate the benefits of vaccination and the serotype dynamics in our region

Submitted by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2015-08-26T20:29:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Avaliação da relação da densidade de vetores e da presença de A.aegypti infectados com a ocorrência de dengue na cidade de Vitória.pdf: 1488499 bytes, checksum: 862637f184216da84704652db2813d9f (MD5) / Approved for entry into archive by Morgana Andrade (morgana.andrade@ufes.br) on 2015-11-17T17:28:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Avaliação da relação da densidade de vetores e da presença de A.aegypti infectados com a ocorrência de dengue na cidade de Vitória.pdf: 1488499 bytes, checksum: 862637f184216da84704652db2813d9f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-17T17:37:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Avaliação da relação da densidade de vetores e da presença de A.aegypti infectados com a ocorrência de dengue na cidade de Vitória.pdf: 1488499 bytes, checksum: 862637f184216da84704652db2813d9f (MD5) Previous issue date: 2013 / A dengue é uma doença febril aguda causada pelo DENV, o qual agrupa quatro sorotipos distintos. Sua transmissão se dá pela picada de fêmeas de mosquitos do gênero Aedes, sendo o Aedes aegypti o principal vetor de importância epidemiológica. O controle do vetor e a vigilância epidemiológica são as principais ferramentas para a contenção de novas epidemias. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a correlação entre densidade de vetores e presença de A. aegypti infectados com a ocorrência de dengue em Vitória, durante a epidemia de 2011. Para isso, foram analisados casos confirmados laboratorialmente e notificados no SINAN, bem como os dados fornecidos pelo programa MI – DENGUE. Para a identificação dos sorotipos circulantes, foram realizados ensaios de RT – PCR. Foi também realizado o geoprocessamento, por bairro, dos casos humanos, da densidade de vetores e das armadilhas contendo A. aegypti infectados. Os resultados mostraram uma ligeira predominância do sexo feminino na amostra analisada e que 64,18% dos casos ocorreram em pessoas acima de 18 anos. A maioria dos casos de dengue observados foi classificada como dengue clássica, enquanto cerca 10% foram classificados como as formas mais graves de dengue, como “dengue com complicações” ou “febre hemorrágica da dengue”. Em 8,23% dos casos houve a ocorrência de internação e dois óbitos foram contabilizados durante o período. Por meio da análise temporal, foi visto que o aumento da densidade de vetores ocorreu nas épocas mais quentes e chuvosas, e precedia o aumento do número de casos humanos. Não foi encontrada correlação entre a densidade de vetores e a incidência de dengue nos bairros (p=0.848) porém foi visto que os bairros onde foram encontrados mosquitos infectados possuíam maior incidência de dengue que os bairros sem mosquitos infectados (p=0.009). O principal sorotipo circulante em Vitória, em 2011, foi o DENV-1 seguido pelo o DENV-2. Portanto, este estudo demonstra que, tão importante quanto monitorar a densidade de vetores, é investigar a presença de vetores infectados nas cidades com o objetivo de predizer possíveis epidemias de dengue. / Dengue is an acute febrile disease caused by dengue virus (DENV), which groups four serotypes. It is transmitted by the bite of female mosquitoes of the gender Aedes, being the Aedes aegypti the principal vector with epidemiologic importance. Vector control and epimiological surveillance are the principal tools for epidemic’s contention. So, the objective of this study was to observe the relationship between vector density or infection of the vectors by DENV with the cases of dengue in Vitória. Confirmed and notified cases on SINAN and data from the programme MI –Dengue were analised. For the identification of virus serotypes, it was made RT-PCR. Also, it was described the spatial distribution of human cases of dengue, as well the spatial distribution of vector’s density and the traps where infected mosquitoes were found. As a result, it was found a small predominance of women in the sample analised (54,27%) and 64,18% of the cases occurred in people with more than 18 years old. 90,74% were classified as dengue fever, while 6,60% were classified as “dengue with complications” and 2,66% as “dengue haemorrhagic fever”. In 8,23% of the cases, there was the necessity of hospitalization and 2 deaths were contabilized during the period. Trough the temporal analysis, it was observed that the increase in vector’s density occurred in the warm and rainy times, and it preceeded the increase in human cases. During all the year of 2011, A. aegypti’s density in the city was considered as “moderate” or “critical”. It was not observed a correlation between vector’s density and incidence of dengue in the neighborhoods (p = 0.848), but the neighborhoods where it was found infected mosquitoes had greater incidence of dengue than the neighborhoods without infected vectors (0.009). By the RT-PCR assay, it was observed that the major serotype found in human samples and in vector samples was DENV-1 (96,56% e 82,35%, respectively). DENV-2 was also found in circulation, but in smaller rates.

Ovinos são considerados reservatórios de Escherichia coli produtora da toxina Shiga (STEC). Este estudo pesquisou amostras de 100 carneiros no Estado de São Paulo. PCR foi empregada para detecção de stx1, stx2, eae, ehx, e intiminas. RFLP-PCR foi realizado para identificação das variantes de stx1/stx2 e fliC. Cinco isolados eae+stx- de sorotipos O128:H2, O145:H2, O153:H7 e O178:H7 apresentaram intiminas b, g e e. Cinqüenta e seis STEC foram obtidos e os genótipos foram stx1cstx2d-O118 (56,1%), stx1c (33,3%), stx2d-O118 (7,6%), e stx1cstx2dOX3a (3%). Os sorotipos mais freqüentes foram ONT:H8, ONT:H-, O75:H-, O174:H8 e O5:H-. Gene fliC codificando para H2, H8, H14, H16, H19, H21 ou H28 foi identificado em 25/33 isolados. ehx foi detectado em três/cinco EPEC Atípicas e em 38 (57,6%) STEC. Sensibilidade aos antimicrobianos foi observada em 77,2% dos isolados STEC. A análise da similaridade genética por PFGE revelou 24 perfis entre 40 isolados STEC e EPEC atípicas. O estudo demonstrou que ovinos saudáveis podem se comportar como reservatórios de STEC e EPEC atípica. / Lambs are reported as carriers of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) worldwide. This study surveyed 100 sheep in São Paulo, Brazil. PCR was used for detection of stx1, stx2, eae, ehx, and intimins. RFLP-PCR investigated the stx1/stx2 variants and flagellar antigen (fliC). Five isolates were eae+/stx-, belonging to serotypes O128:H2, O145:H2, O153:H7 and O178:H7, harboring b, g and e intimins. Fifty-six STEC isolates were recovered, and stx genotypes were stx1cstx2d-O118 (56.1%), stx1c (33.3%), stx2d-O118 (7.6%), and stx1cstx2dOX3a (3%). A diversity of STEC serotypes was observed, but most frequent were ONT:H8, ONT:H-, O75:H-, O174:H8 and O5:H-. fliC gene coding for H2, H8, H14, H16, H19, H21 or H28 was identified in 25/33 isolates. ehx gene was detected in three Atypical EPEC and in 38 (57,6%) STEC. Fifty-one (77.2%) STEC were susceptible to antimicrobials tested. Pulsed field gel electrophoresis (PFGE) revealed 24/40 profiles. The study showed that healthy ovine can be carrier of STEC and atypical EPEC in Brazil.

A Periodontite Agressiva (PA), que atualmente pertence ao grupo das Periodontites estágios 3 e 4, distingue-se dos demais tipos de doença periodontal por seu início precoce, agregação familiar dos casos e por afetar pacientes sistemicamente saudáveis. Além disso, pode ser subclassificada em duas formas, localizada (PAL) e generalizada (PAG), em função de sua extensão. Muitas vezes, os depósitos de biofilme bacteriano são desproporcionais à quantidade de destruição óssea e perda de inserção que o paciente apresenta, independente da subclassificação. O microrganismo mais relacionado à etiopatogênese da doença é o Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A. actinomycetemcomitans), incluindo os seus principais sorotipos a, b e c, amplamente estudados. Associado a estas condições, A. actinomycetemcomitans apresenta alguns fatores de virulência como uma leucotoxina, principalmente ligada ao sorotipo b - clone JP2 (que é altamente leucotóxico) e proteínas de membrana externa (OMPs), especialmente Omp29. A resposta de imunoglobulina G (IgG) sérica contra este patógeno foi anteriormente associada à ambas as formas de PA, porém, são escassos os estudos que avaliaram longitudinalmente a resposta sérica frente a variáveis como estas. Dessa maneira, o objetivo desse estudo foi avaliar a resposta sérica, de 27 pacientes com PA e 10 pacientes periodontalmente saudáveis, contra Omp29 e sorotipos de A. actinomycetemcomitans, através de um ensaio ELISA, correlacionando com o número de cópias de JP2 (obtidos por qPCR em tempo real) e parâmetros clínicos, a partir de dados anteriormente coletados por nosso grupo. Todos os dados foram obtidos antes do início do tratamento e um ano após seu término. O tratamento consistiu de orientações de higiene bucal, tratamento mecânico e antibioticoterapia. Os dados resultantes do estudo mostraram que em ambas as formas de PA houve uma redução significativa na profundidade clínica de sondagem (PCS)(p<0,001), nível clínico de inserção (NCI)(p<0,001) e na resposta sérica contra Omp29 e sorotipo c de A. actinomycetemcomitans(p>0,005). Após 1 ano, os valores de densidade óptica (D.O.) normalizados para Omp29 e sorotipos de A. actinomycetemcomitans, bem como o número de cópias do clone JP2 tornaram-se similares aos níveis encontrados nos controles. A redução no número de cópias do clone JP2 foi correlacionada com redução da PCS em PAL(r=0.80,p=0.0042) e valores de D.O. normalizados de Omp29 em PAG(r=0.66,p=0.005). O estudo concluiu que o tratamento periodontal foi eficaz em alterar a resposta sérica contra Omp29 e sorotipos de A. actinomycetemcomitans, além de reduzir o número de cópias do clone JP2 e melhorar os parâmetros clínicos. / Aggressive Periodontitis (AP), which currently belongs to the group of Periodontites stages 3 and 4, is distinguished from other types of periodontal disease due to its early onset, familial aggregation of cases and to affect systemically healthy patients. In addition, it can be sub classified into two forms, localized (PAL) and generalized (PAG), depending on its extent. Often, bacterial biofilm deposits are disproportionate to the amount of bone destruction and loss of insertion that the patient presents, regardless of sub classification. The most important microorganism related to the etiopathogenesis of the disease is Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A. actinomycetemcomitans), including its main serotypes a, b and c, widely studied. Associated with these conditions, A. actinomycetemcomitans presents some virulence factors such as leukotoxin, mainly linked to serotype b - clone JP2 (which is highly leukotoxic) and outer membrane proteins (Omp\'s), especially Omp29. Serum immunoglobulin G (IgG) response against this pathogen was previously associated with both forms of BP; however, there are few studies that longitudinally evaluated the serum response to variables such as these. Thus, the objective of this study was to evaluate the serum response of 27 patients with AP and 10 periodontally healthy patients against Omp29 and A. actinomycetemcomitans serotypes by an ELISA, correlating with the number of copies of JP2 (obtained by qPCR in real time) and clinical parameters, from data previously collected by our group. All data were obtained prior to initiation of treatment and one year after its completion. The treatment consisted of oral hygiene guidelines, mechanical treatment and antibiotic therapy. Data from the study showed that in both forms of BP there was a significant reduction in clinical depth of sampling (PCS) (p<0,001),, clinical level of insertion (NCI)(p<0,001) and serum response against Omp29 and serotype c of A. actinomycetemcomitans(p>0,005). After 1 year, normalized optical density (O.D.) values for Omp29 and A. actinomycetemcomitans serotypes, as well as the number of copies of clone JP2 became similar to the levels found in the controls. The reduction in copy number of clone JP2 was correlated with reduction of PCS in PAL(r=0.80,p=0.0042) and O.D. normalized from Omp29 to PAG(r=0.66,p=0.005). The study concluded that periodontal treatment was effective in altering the serum response against Omp29 and A. actinomycetemcomitans serotypes, in addition to reducing the number of copies of clone JP2 and improving clinical parameters.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:26:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseCristyaneBenicio2010.pdf: 531193 bytes, checksum: 9a3d68036fe340ca60db84cb20f7066b (MD5) Previous issue date: 2010-02-18 / Objectives (i) Present review article focusing on pneumococcal vaccines and carriage; (ii) to validate sequential multiplex PCR for identifying pneumococcal capsular serotypes from children attending day-care centers; (iii) determine the multilocus sequence typing; (iv) to identify the capsular types of multiple colonies of S. pneumoniae isolates from a single sample of nasopharyngeal secretions of children attending day-care centers in Goiânia. Materials and Methods S. pneumoniae was obtained from health children less than 5 years old attending 62 day care centers of Goiânia. The laboratory procedures were performed according to WHO recommendations. Were selected 217 isolates (penicillin resistant and sensitive) for capsular typing by multiplex PCR technique. MLST was performed for 55 isolates representing the serotypes detected and the different susceptibility patterns for penicillin. Quellung reaction was used for typing isolates serotypes 6A, 6B, 18C and the isolates not typed by multiplex PCR. For 28 presumptive pneumococcal positive NP swabs, 3 colonies were picked to acess possible serotype diversity. Eighty four pneumococci were identified by conventionally procedure and multiplex PCR was performed. Results Serotypes were deduced for 177/217 (81.6%) of the pneumococcal. The most frequent serogroups/serotypes were 14, 6, 23F, 19F and 18. Multiple serotypes were detected in 13 specimens. Were found 19 MLST types and two new ST. Forty (18.4%) were not serotyped by the multiplex PCR and quellung reaction. The analysis of three colonies from the same NP permitted the detection of differente serotypes in 7/28 (25%) NP samples. Conclusion (i) The multiplex PCR is simple and cost-effective method for detecting multiple serotypes in nasopharyngeal isolates; (ii) and thus might be useful for the monitoring of pneumococcal colonization over time; (iii) the use of multiplex PCR can further broaden our understanding of the dynamics of pneumococcal carriage, including multiple serotypes, the effect of vaccination on carriage, and transmission, as well as surveillance of IPD and co-colonization. / Objetivos: (i) Apresentar uma revisão focando as vacinas pneumocócicas e o portador de S. pneumoniae na nasofaringe; (ii) realizar a tipagem capsular de pneumococos colonizadores de nasofaringe de crianças de creches pela técnica de multiplex PCR; (iii) identificar o perfil MLST dos pneumococos isolados na nasofaringe; (iv) identificar os tipos capsulares de múltiplas colônias de S. pneumoniae isolados de uma única amostra de secreção da nasofaringe de crianças que frequentam creches do município de Goiânia pela técnica de multiplex PCR. Material e Métodos: Um estudo de prevalência de portador de pneumococo foi conduzido de agosto a dezembro de 2005, em crianças de dois a 59 meses de idade, atendidas em 62 creches em Goiânia. Os procedimentos laboratoriais para isolamento e identificação dos pneumococos foram realizados de acordo com as técnicas recomendadas pela Organização Mundial de Saúde. Foram selecionados 217 isolados (resistentes e sensíveis à penicilina) para a tipagem capsular pela técnica de multiplex PCR. O perfil MLST foi realizado para 55 isolados, representando os sorotipos detectados e os diferentes perfis de suscetibilidade à penicilina. A reação de Quellung foi usada para tipar os sorotipos 6A, 6B e 18C e os isolados não tipados pelo multiplex PCR. Para a análise de múltiplas colônias de S. pneumoniae, utilizou-se 28 amostras positivas para pneumococo, das quais se recuperou 3 colônias de cada placa de ágar sangue, totalizando 84 colônias, que foram submetidas aos testes de tipagem fenotípica e caracterização capsular pela técnica de multiplex PCR. Resultados: Cento e setenta e sete sorotipos em duzentos e dezessete (177/217), totalizando 81,6% dos pneumococos foram tipados. Os sorotipos mais freqüentes foram 14, 6, 23F, 19F e 18. Foram identificadas múltiplas colônias em 13 amostras de nasofaringe. Foram observados 19 tipos MLST e dois novos tipos de seqüência (ST). Quarenta (18,4%) dos isolados não foram tipados pelo multiplex PCR e todos não tipados pela reação de Quellung. A análise de múltiplas colônias de S. pneumoniae pela técnica de multiplex PCR permitiu a detecção de mais de um tipo em 25% (7/28) das amostras. Conclusões: (i) O método de multiplex PCR mostrou-se seguro e simples na detecção de diferentes tipos capsulares incluídos na reação, além de mais barato; (ii) representou uma valiosa ferramenta em investigações de vigilância de pneumococos; (iii) Aplicação da técnica multiplex PCR permitiu o conhecimento da diversidade genética de pneumococos colonizadores da nasofaringe, detectando a dinâmica da colonização desta bactéria na população, incluindo a colonização por múltiplos sorotipos; a substituição ou mudança de sorotipo como resultado da vacinação; como também vigilância das doenças pneumocócicas invasivas.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-09T13:25:07Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Tainá Carvalho Guerreiro - 2015.pdf: 1793254 bytes, checksum: b06a919b2f95dde4661fe77445d3668c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-09T13:27:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Tainá Carvalho Guerreiro - 2015.pdf: 1793254 bytes, checksum: b06a919b2f95dde4661fe77445d3668c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-09T13:27:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Tainá Carvalho Guerreiro - 2015.pdf: 1793254 bytes, checksum: b06a919b2f95dde4661fe77445d3668c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-07-08 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Streptococcus pneumoniae remains as a major cause of childhood morbidity and mortality worldwide, especially in developing countries. Nasopharyngeal colonization is the key of the development of pneumococcal diseases as well as for horizontal spread of this pathogen in the community. Children are the main reservoir of S. pneumoniae and act as vectors in the transmission chain of this microorganism. Pneumococcal conjugate vaccines protect against pneumococcal disease caused by vaccine serotypes, also contributes to the protection against colonization by the same serotypes. In 2010, PCV10 was introduced in the childhood immunization program of Brazil. This is a population-based study that was conducted immediately after the introduction of the vaccine in order to determine the carriage rate of this pathogen in children attending in day care centers in Goiania. These data may be used as a predictor for evaluating the dynamic of the circulating serotypes into the community after the vaccine introduction. Between October and November 2010, nasopharyngeal swabs were collected from 853 children ranging from 36 to 59 months attending in day care centers in Goiania. Isolation and identification of S. pneumoniae were done after the incubation step on broth-enriched for 6 h and posterior plating on blood agar. Isolates that were α-haemolytic, optochin-sensitive and soluble in bile were identified as S. pneumoniae. The isolates were serotyped by cmPCR. The database had been built with the statistical program SPSS (Chicago, IL, USA) version 18.0. The possible risk factors were assessed by multivariate Poisson regression. The level of probability of 0.05 (two-tailed) was used to determine statistical significance. The prevalence of pneumococcus carrier was 57.6% (CI95%: 54.2% - 60.9%). According to the multivariate Poisson regression analysis, children aged 36-47 months (IRR: 1.117; CI95%: 1.007-1.238; p: 0.035) and children in whose houses had four or more residents (IRR: 1.1214; CI95%: 1.078-1.368; p 0.001) were considered risk factors independently associated to pneumococcal colonization. The variable family income equal to or greater than three minimum wages was considered a protective factor independently associated to pneumococcal colonization (IRR: 0.787; CI95%: 0.627-0.990; p 0.041). The most prevalent serotypes and serogroups founded were 6A/6B/6C/6D (n=80; 16.3%), 14 (n=47; 9.6%), 23F (n=46; 9.4%), 19F (n=43; 8.8%), 15B/15C (n=30; 6.1%), 11A/11D (n=28; 5.7%), 3 (n=22; 4.5%) and 19A (n=16; 3.3%). Our results showed a high prevalence of pneumococcal colonization among the study population, indicating that colonization by this microrganism is common among children, especially in environments that favor crowding. The main serotypes/serogroups are cover by PCV10. / Streptococcus pneumoniae é o patógeno responsável pelas maiores taxas de morbidade e mortalidade em crianças, principalmente em países em desenvolvimento. A colonização da nasofaringe é a chave para o desenvolvimento das doenças pneumocócicas, bem como para a transmissão horizontal desse patógeno na comunidade. Crianças são o principal reservatório de S. pneumoniae e atuam como vetores dentro da cadeia de transmissão desse microrganismo. As vacinas pneumocócicas conjugadas (PCV) protegem contra as doenças pneumocócicas causadas pelos sorotipos vacinais, atuando também na proteção contra a colonização pelos mesmos sorotipos. Em 2010, o Brasil introduziu a PCV10 no programa de imunização infantil. Este trabalho é um estudo de base populacional que foi conduzido imediatamente após a introdução da PCV10 para determinar a taxa de portador desse patógeno em crianças não vacinadas que frequentam creches no município de Goiânia. Esses dados poderão ser utilizados como linha de base epidemiológica para avaliação da dinâmica dos sorotipos circulantes na comunidade após a introdução da vacina. Foram coletados, nos meses de outubro e novembro de 2010, 853 swabs de secreção da nasofaringe em crianças entre 36 a 59 meses que frequentavam creches no município de Goiânia. Para o isolamento e identificação de S. pneumoniae as amostras foram incubadas por 6 h em caldo enriquecido e semeadas em ágar sangue. Colônias α-hemolíticas sensíveis à optoquina e à bile foram identificadas como S. pneumoniae. Os isolados foram sorotipados por PCR multiplex convencional. A base de dados foi construída com o programa estatístico SPSS (Chicago, IL, USA) versão 18.0. Os possíveis fatores de risco foram avaliados por regressão de Poisson multivariada. O nível de probabilidade de 0,05 (bi-caudal) foi utilizado para determinar a significância estatística. A prevalência de portador do pneumococo foi de 57,6% (IC95%: 54,2% - 60,9%). De acordo com a análise multivariada crianças com idade entre 36-47 meses de idade (IRR: 1,117; IC95%:1,007 – 1,238; p= 0,035) e crianças em cujos domicílios haviam quatro ou mais pessoas residentes (IRR: 1,1214; IC95%: 1,078 – 1,368; p= 0,001) foram considerados fatores de risco independentemente associados para a colonização pneumocócica. A variável renda familiar igual ou superior a três salários mínimos foi considerada um fator protetor independentemente associado para a colonização pneumocócica (IRR: 0,787; IC95%: 0,627 – 0,990; p= 0,041). Os sorotipos/sorogrupos mais prevalentes foram 6A/6B/6C/6D (n=80; 16,3%), 14 (n=47; 9,6%), 23F (n=46; 9,4%), 19F (n=43; 8,8%), 15B/15C (n=30; 6,1%), 11A/11D (n=28; 5,7%), 3 (n=22; 4,5%) e 19A (n=16; 3,3%). Nossos resultados mostraram uma alta prevalência de colonização por pneumococo entre a população estudada, indicando que a colonização por esse microrganismo é comum entre crianças, principalmente em ambientes que favorecem a aglomeração. Os principais sorotipos/sorogrupos encontrados são contemplados pela PCV10.

A modelagem epidemiológica é uma importante ferramenta que auxilia os órgãos de saúde no controle de doenças infecciosas, pois permitem analisar e comparar diversas estratégias que facilitam a tomada de decisões e definições de protocolos. A dengue é atualmente a doença viral humana com maior número de casos. Possui índice de mortalidade baixo, entretanto, é endêmica em mais de 100 países e 40% da população mundial está em risco de contrair a infecção. Através dos dados de notificação de dengue no Brasil, evidenciamos que os surtos são sazonais, que há alternância de sorotipos ao longo dos anos e mostramos que a doença é diferente em cada localização, e que somente com uma normalização adequada é possível sugerir um agrupamento coerente de municípios. Neste trabalho, as informações obtidas a partir dos dados são usadas para a estruturação dos modelos matemáticos e para a estimação de parâmetros que validam estes modelos. Comparamos a dinâmica de transmissão de dengue do modelo com um sorotipo, com modelos que permitem a interação de dois, três e quatro sorotipos simultaneamente, além da possibilidade de até quatro infecções sequenciais. Os modelos com múltiplos sorotipos são expandidos do modelo básico que categoriza hospedeiros dentro de uma população como suscetíveis (S), infectados (I) e recuperados (R) e acoplado à dinâmica dos vetores suscetíveis (V) e infectados (Vi). Nossos modelos incluem: um período de imunidade cruzada de forma que o indivíduo adquire imunidade permanente para o sorotipo que já foi infectado e imunidade temporária para os demais; uma forçante de sazonalidade na taxa de nascimento dos vetores; uma assimetria com taxas de transmissão diferentes para cada sorotipo; e o compartimento dos vacinados, com uma vacina tetravalente que confere diferentes imunidades para cada sorotipo. Os resultados mostram que para a reprodução de surtos anuais é necessário a inclusão da forçante de sazonalidade na taxa de nascimento dos vetores, e que o modelo com quatro sorotipos é o que melhor reproduz os dados de incidência de dengue, sendo o mais adequado para analisar estratégias de vacinação com uma vacina tetravalente. Comparamos duas estratégias de vacinação: vacinação aleatória na população e vacinação direcionada para faixas etárias. Neste caso, os resultados demonstram a superioridade da estratégia direcionada e que as escolhas das faixas etárias devem ser definidas por município e não por um protocolo nacional. / Epidemiological modelling is an important tool that assists the health agencies in the control of infectious diseases, since it allows analysing and to compare several strategies that facilitate decision-making and protocol definitions. Dengue is currently the most important vector-borne disease. The mortality rate of dengue is low, however, it is endemic in more than 100 countries and about 40% of the world\'s population is at risk of contracting the infection. Through the dengue notification data in Brazil, we emphasize that the outbreaks are seasonal, there is serotypes alternation over the years and we show that the disease is different in each locality, and that only with a suitable standardization it is possible to propose an appropriate grouping of municipalities. In this work, we use the data information to formulate the mathematical models and for the parameter\'s estimation in order to validate these models. We compare the dynamics of dengue of the one serotype model with the models that allow interaction of two, three and four serotypes simultaneously, including the possibility of at most four sequential infections.The multi-strain models are expanded from the basic model which categorizes the host population as susceptible (S), infected (I), and recovered (R) and coupled with the dynamics of the susceptible (V) and infected (Vi) vectors. Our models include: a period of cross-immunity which means permanent immunity to the serotype of the infection and temporary immunity to the other serotypes; a seasonal forcing in the mosquitoes birth rate; different transmissions rates, so that the models are asymmetric; and the compartment of vaccinated individuals with a tetravalent vaccine which confers different immunities for each serotype. The results show that to reproduce yearly outbreaks it is necessary to include the seasonal forcing in the birth rate of the vectors, and that the four serotypes model is the one that best reproduces the dengue incidence data, being the most suitable model to analyse vaccination strategies with a tetravalent vaccine. We compare two vaccination strategies: random vaccination and vaccination targeted at age groups. In this case, the results demonstrate the superiority of the targeted strategy and that the choices of the age groups should be defined by municipality and not by a national protocol.

Listeria monocytogenes é um patógeno intracelular facultativo responsável por listeriose, uma doença de origem alimentar. Dentre os 13 sorotipos de L. monocytogenes existentes, o sorotipo 4b é o mais freqüentemente isolado de humanos, enquanto os sorotipos 1/2a, 1/2b e 1/2c são mais freqüentes em alimentos e amostras ambientais. O estudo da variabilidade de virulência de quatro cepas de L. monocytogenes recentemente isoladas (1/2B - alimento; 1/2C e 4BENV - ambiente de processamento de alimento; 4BCLIN - sangue), além de duas outras cepas de casos de listeriose (P14 e P14A), foi o objetivo deste trabalho. Avaliou-se a capacidade de invasão, proliferação intracelular, citotoxicidade, disseminação intercelular, polimerização de filamentos de actina e transcrição gênica dos genes de virulência actA, plcA e plcB das cepas em modelos celulares eucarióticos MDBK, HeLa e L929. A cepa de origem alimentar 1/2B apresentou características de invasão, taxa de multiplicação (IGC), assim como a disseminação intercelular, semelhantes às cepas clínicas P14 e 4BCLIN em células HeLa. As cepas de origem ambiental (1/2C e 4BENV), apesar da baixa capacidade de invasão em todas linhagens celulares empregadas, apresentaram IGC superior às demais cepas estudadas e disseminação intercelular superior ou similar às cepas clínicas, dependendo da célula eucariótica. As cepas de origem clínica 4BCLIN, P14, P14A tiveram maiores porcentagens de invasão nas linhagens MDBK e L929, porém, em relação à população intracelular (UFC/mL), as cepas 4BCLIN e P14A foram superiores às demais. Estas últimas também foram citotóxicas às células HeLa, induzindo à liberação de LDH e à morte por necrose. Já as cepas de origem alimentar, ambiental e a cepa clínica P14 não foram citotóxicas às células HeLa e MDBK. Em relação à polimerização dos filamentos de actina não houve diferença estatística entre as cepas. Todos os genes de virulência estudados apresentaram maior número de transcritos para as cepas de origem não clínica (1/2B, 1/2C e 4BENV). Sendo assim, todas as cepas de L. monocytogenes estudadas possuem potencial patogênico, por apresentar pelo menos duas características relacionadas à virulência da espécie. Alimentos possivelmente contaminados com estas cepas representam risco à saúde pública. / Listeria monocytogenes is a facultative intracellular pathogen responsible for listeriose, a foodborne disease. Amongst the 13 serotypes of L. monocytogenes, the serotype 4b is more frequently isolated from clinical samples while the serotypes 1/2a, 1/2b and 1/2c are associated with food and food processing environment. The study of the virulence variability of four L. monocytogenes strains recently isolated (1/2B - food; 1/2C and 4BENV - food processing environment; 4BCLIN blood), as well as two strains of listeriosis (P14 and P14A) was the aim of this work. Eukaryotic cellular models HeLa, MDBK and L929 were used to evaluate the invasion capacity, intracellular proliferation, cytotoxicity, intercellular dissemination and polymerization of actin tails of L. monocytogenes strains. Gene transcription of the virulence genes actA, plcA and plcB was also conducted. The food isolate 1/2B presented invasion characteristics, multiplication index (IGC), as well as the intercellular dissemination, similar to the clinical strains P14 and 4BCLIN in HeLa cells. Environmental strains (1/2C and 4BENV), although showing a low capacity of invasion in all cellular models, had the highest IGC comparing to the other isolates. They also showed similar to or higher intercellular dissemination than the clinical ones, depending on the cell line used. The clinical strains 4BCLIN, P14, P14A presented greater invasion capacity in MDBK and L929 cells than all other isolates. However, in relation to the intracellular population (CFU/mL) the isolates 4BCLIN and P14A showed superior results. These strains were also cytotoxic to HeLa cells, inducing LDH release and death due to necrosis. The food, environmental and P14 isolates were not cytotoxic to HeLa and MDBK cells. There was no statistical difference in actin tail polymerization between the strains. The non-clinical isolates (1/2B, 1/2C and 4BENV) presented higher number of transcripts for than the clinical ones. In conclusion, all L. monocytogenes strains studied showed pathogenic potential, based on expression of at least two characteristics related to the virulence of the species. The presence of these strains in food represents public health risk.

A modelagem epidemiológica é uma importante ferramenta que auxilia os órgãos de saúde no controle de doenças infecciosas, pois permitem analisar e comparar diversas estratégias que facilitam a tomada de decisões e definições de protocolos. A dengue é atualmente a doença viral humana com maior número de casos. Possui índice de mortalidade baixo, entretanto, é endêmica em mais de 100 países e 40% da população mundial está em risco de contrair a infecção. Através dos dados de notificação de dengue no Brasil, evidenciamos que os surtos são sazonais, que há alternância de sorotipos ao longo dos anos e mostramos que a doença é diferente em cada localização, e que somente com uma normalização adequada é possível sugerir um agrupamento coerente de municípios. Neste trabalho, as informações obtidas a partir dos dados são usadas para a estruturação dos modelos matemáticos e para a estimação de parâmetros que validam estes modelos. Comparamos a dinâmica de transmissão de dengue do modelo com um sorotipo, com modelos que permitem a interação de dois, três e quatro sorotipos simultaneamente, além da possibilidade de até quatro infecções sequenciais. Os modelos com múltiplos sorotipos são expandidos do modelo básico que categoriza hospedeiros dentro de uma população como suscetíveis (S), infectados (I) e recuperados (R) e acoplado à dinâmica dos vetores suscetíveis (V) e infectados (Vi). Nossos modelos incluem: um período de imunidade cruzada de forma que o indivíduo adquire imunidade permanente para o sorotipo que já foi infectado e imunidade temporária para os demais; uma forçante de sazonalidade na taxa de nascimento dos vetores; uma assimetria com taxas de transmissão diferentes para cada sorotipo; e o compartimento dos vacinados, com uma vacina tetravalente que confere diferentes imunidades para cada sorotipo. Os resultados mostram que para a reprodução de surtos anuais é necessário a inclusão da forçante de sazonalidade na taxa de nascimento dos vetores, e que o modelo com quatro sorotipos é o que melhor reproduz os dados de incidência de dengue, sendo o mais adequado para analisar estratégias de vacinação com uma vacina tetravalente. Comparamos duas estratégias de vacinação: vacinação aleatória na população e vacinação direcionada para faixas etárias. Neste caso, os resultados demonstram a superioridade da estratégia direcionada e que as escolhas das faixas etárias devem ser definidas por município e não por um protocolo nacional. / Epidemiological modelling is an important tool that assists the health agencies in the control of infectious diseases, since it allows analysing and to compare several strategies that facilitate decision-making and protocol definitions. Dengue is currently the most important vector-borne disease. The mortality rate of dengue is low, however, it is endemic in more than 100 countries and about 40% of the world\'s population is at risk of contracting the infection. Through the dengue notification data in Brazil, we emphasize that the outbreaks are seasonal, there is serotypes alternation over the years and we show that the disease is different in each locality, and that only with a suitable standardization it is possible to propose an appropriate grouping of municipalities. In this work, we use the data information to formulate the mathematical models and for the parameter\'s estimation in order to validate these models. We compare the dynamics of dengue of the one serotype model with the models that allow interaction of two, three and four serotypes simultaneously, including the possibility of at most four sequential infections.The multi-strain models are expanded from the basic model which categorizes the host population as susceptible (S), infected (I), and recovered (R) and coupled with the dynamics of the susceptible (V) and infected (Vi) vectors. Our models include: a period of cross-immunity which means permanent immunity to the serotype of the infection and temporary immunity to the other serotypes; a seasonal forcing in the mosquitoes birth rate; different transmissions rates, so that the models are asymmetric; and the compartment of vaccinated individuals with a tetravalent vaccine which confers different immunities for each serotype. The results show that to reproduce yearly outbreaks it is necessary to include the seasonal forcing in the birth rate of the vectors, and that the four serotypes model is the one that best reproduces the dengue incidence data, being the most suitable model to analyse vaccination strategies with a tetravalent vaccine. We compare two vaccination strategies: random vaccination and vaccination targeted at age groups. In this case, the results demonstrate the superiority of the targeted strategy and that the choices of the age groups should be defined by municipality and not by a national protocol.

Listeria monocytogenes é um patógeno intracelular facultativo responsável por listeriose, uma doença de origem alimentar. Dentre os 13 sorotipos de L. monocytogenes existentes, o sorotipo 4b é o mais freqüentemente isolado de humanos, enquanto os sorotipos 1/2a, 1/2b e 1/2c são mais freqüentes em alimentos e amostras ambientais. O estudo da variabilidade de virulência de quatro cepas de L. monocytogenes recentemente isoladas (1/2B - alimento; 1/2C e 4BENV - ambiente de processamento de alimento; 4BCLIN - sangue), além de duas outras cepas de casos de listeriose (P14 e P14A), foi o objetivo deste trabalho. Avaliou-se a capacidade de invasão, proliferação intracelular, citotoxicidade, disseminação intercelular, polimerização de filamentos de actina e transcrição gênica dos genes de virulência actA, plcA e plcB das cepas em modelos celulares eucarióticos MDBK, HeLa e L929. A cepa de origem alimentar 1/2B apresentou características de invasão, taxa de multiplicação (IGC), assim como a disseminação intercelular, semelhantes às cepas clínicas P14 e 4BCLIN em células HeLa. As cepas de origem ambiental (1/2C e 4BENV), apesar da baixa capacidade de invasão em todas linhagens celulares empregadas, apresentaram IGC superior às demais cepas estudadas e disseminação intercelular superior ou similar às cepas clínicas, dependendo da célula eucariótica. As cepas de origem clínica 4BCLIN, P14, P14A tiveram maiores porcentagens de invasão nas linhagens MDBK e L929, porém, em relação à população intracelular (UFC/mL), as cepas 4BCLIN e P14A foram superiores às demais. Estas últimas também foram citotóxicas às células HeLa, induzindo à liberação de LDH e à morte por necrose. Já as cepas de origem alimentar, ambiental e a cepa clínica P14 não foram citotóxicas às células HeLa e MDBK. Em relação à polimerização dos filamentos de actina não houve diferença estatística entre as cepas. Todos os genes de virulência estudados apresentaram maior número de transcritos para as cepas de origem não clínica (1/2B, 1/2C e 4BENV). Sendo assim, todas as cepas de L. monocytogenes estudadas possuem potencial patogênico, por apresentar pelo menos duas características relacionadas à virulência da espécie. Alimentos possivelmente contaminados com estas cepas representam risco à saúde pública. / Listeria monocytogenes is a facultative intracellular pathogen responsible for listeriose, a foodborne disease. Amongst the 13 serotypes of L. monocytogenes, the serotype 4b is more frequently isolated from clinical samples while the serotypes 1/2a, 1/2b and 1/2c are associated with food and food processing environment. The study of the virulence variability of four L. monocytogenes strains recently isolated (1/2B - food; 1/2C and 4BENV - food processing environment; 4BCLIN blood), as well as two strains of listeriosis (P14 and P14A) was the aim of this work. Eukaryotic cellular models HeLa, MDBK and L929 were used to evaluate the invasion capacity, intracellular proliferation, cytotoxicity, intercellular dissemination and polymerization of actin tails of L. monocytogenes strains. Gene transcription of the virulence genes actA, plcA and plcB was also conducted. The food isolate 1/2B presented invasion characteristics, multiplication index (IGC), as well as the intercellular dissemination, similar to the clinical strains P14 and 4BCLIN in HeLa cells. Environmental strains (1/2C and 4BENV), although showing a low capacity of invasion in all cellular models, had the highest IGC comparing to the other isolates. They also showed similar to or higher intercellular dissemination than the clinical ones, depending on the cell line used. The clinical strains 4BCLIN, P14, P14A presented greater invasion capacity in MDBK and L929 cells than all other isolates. However, in relation to the intracellular population (CFU/mL) the isolates 4BCLIN and P14A showed superior results. These strains were also cytotoxic to HeLa cells, inducing LDH release and death due to necrosis. The food, environmental and P14 isolates were not cytotoxic to HeLa and MDBK cells. There was no statistical difference in actin tail polymerization between the strains. The non-clinical isolates (1/2B, 1/2C and 4BENV) presented higher number of transcripts for than the clinical ones. In conclusion, all L. monocytogenes strains studied showed pathogenic potential, based on expression of at least two characteristics related to the virulence of the species. The presence of these strains in food represents public health risk.