CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / In search for a better understanding of the biology of tumors, molecular markers related to proliferation, resistance and apoptosis have been intensively studied in the different types of cancer. These markers can help on the elucidation of more specific therapeutic targets for the treatment of various tumors. It was observed that stomach cancer is the second most frequent cause of death in the world. In Brazil, this tumor is among the five major causes of death by cancer and the adenocarcinomas are held responsible for about 95% of all cases. For that matter, the expression of KI-67, PCNA, p53, bcl-2 and c-myc were evaluated independently and in a combined form in stomach adenocarcinomas. Thus, KI-67 and PCNA were confronted in order to determine which one would pose as a better cellular proliferation marker. Finally, a DNA extraction tecnique using CTAB was implemented on tumor tissue as well as the molecular analysis of the p53 gene by SSCP. The positive results were compared with those obtained by the imonohistochemistry analysis. The tumors were collected in surgical procedure, processed and classified histopathologically. The markers were detected by the imunohistochemical method SABP. The DNA was extracted by the CTAB method and the exons 5, 7 and 8/9 of the p53 gene analyzed by SABP. Some of the samples were obtained from biopsy arquives. The age range of the patients was between 61 and 70 years, with 48,1% of the tumors presenting an intestinal origin, 40,7% were diffuse and the other 11,2% were mixed. According to the location, 50% of the tumors were found to be proximal. 41,1% of the tumors were found to be in a low stage (I â IIIA), 44,8% in a high stage (IIIB â IV) and 13,8% were not staged. The imunohistochemical results indicated that KI-67 is the best marker to estimate cellular proliferation in stomach adenocarcinomas. In an independent manner, the tumors showed an 89,3% positivity for KI-67, 62,5% for PCNA, 50% for p53, 60,7% for bcl-2 e 66,7% for c-myc. According to the staging, the difference was significant only to p53 (p = 0,02), with a 66,7% positivity to the tumors in low stage and 16,7% for the ones on a high stage. When evaluated in a combined form, the associations of KI-67+/p53- (p=0,012) (66,67%) and c-myc+/p53- (p=0,02) (63,64%) both for the high stage tumors, were found to be significant. The DNA extraction technique applied to the tumor tissue was found to be satisfactory. For the SSCP analyses, five patients had mutation on the exon 5 (3) and on the exon 7 (2). Based on that, we may conclude that KI-67 is the best marker to access the proliferation of the stomach adenocarcinomas and that there are two proliferation activation pathways: one being dependent and the other independent of the p53 gene. / Na busca de um melhor entendimento da biologia dos tumores, marcadores moleculares relacionados à proliferaÃÃo, resistÃncia e apoptose tÃm sido intensamente pesquisados nos diferentes tipos de cÃncer. Estes marcadores podem auxiliar no estudo de alvos terapÃuticos mais especÃficos para cada tipo de tumor. O cÃncer de estÃmago à a segunda causa de Ãbito mais observado no mundo. No Brasil, este tumor està entre as cinco localizaÃÃes primÃrias mais comuns de Ãbitos por cÃncer, sendo os adenocarcinomas responsÃveis por 95% dos casos. Dessa forma, foi avaliada a expressÃo dos marcadores KI-67, PCNA, p53, bcl-2 e c-myc de forma independente e combinada em adenocarcinomas gÃstricos. TambÃm foi avaliado qual dos marcadores, KI-67 ou PCNA, era mais indicado para acessar a proliferaÃÃo celular. AlÃm disso, foi implantada a tÃcnica de extraÃÃo de DNA de tecido tumoral com CTAB e anÃlise molecular pelo SSCP do gene p53, sendo os resultados positivos comparados com os resultados da imunohistoquÃmica. Os tumores foram coletados em cirurgia, processados e classificados histopatologicamente. Os marcadores foram detectados pelo mÃtodo de imunohistoquÃmica SABP. Foi realizada a extraÃÃo de DNA pelo mÃtodo do CTAB, sendo os Ãxons 5, 7 e 8/9 do gene p53 analisados por SSCP. Algumas amostras foram obtidas de arquivo de biopsia. A faixa etÃria dos pacientes encontrava-se entre 61 e 70 anos de idade, com 48,1% dos tumores do tipo intestinal, 40,7% difusos e 11,2% mistos e com 50% localizados no sÃtio proximal. Em relaÃÃo ao estadiamento, 41,4% dos tumores apresentavam-se no grau baixo (I â IIIA), 44,8% no altorisco (IIIB â IV) e 13,8% sem estadiamento. De acordo com os achados imunohistoquÃmicos, os resultados sugerem que o marcador mais indicado para estimar a proliferaÃÃo celular nos adenocarcinomas gÃstricos à o KI-67. De forma independente os tumores apresentaram positividade em 89,3% para KI-67, 62,5% para PCNA, 50% para p53, 60,7% para bcl-2 e 66,7% e para c-myc. De acordo com o estadiamento, a diferenÃa foi significativa apenas para p53 (p = 0,02), com positividade de 66,7% nos tumores de baixo risco (I â IIIA) e 16,7% nos de altorisco. Quando avaliadas de forma combinada, as associaÃÃes significativas foram entre KI-67+/p53- (p=0,012) nos tumores de alto risco (66,67%) e c-myc+/p53- (p=0,02) tambÃm nos tumores de altorisco (63,64%). A tÃcnica aplicada para a extraÃÃo do DNA do tecido tumoral foi satisfatÃria. Para o SSCP, cinco pacientes apresentaram mutaÃÃo para o Ãxon 5 (3) e Ãxon 7 (2). Com isso, concluÃmos que o marcador mais indicado para acessar a proliferaÃÃo à o KI-67 e que existem duas vias de ativaÃÃo da proliferaÃÃo nos adenocarcinomas gÃstricos: uma dependente de p53 e outra independente de p53.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / INTRODUÃÃO: Recentemente nÃs demonstramos que o sildenafil tem efeito protetor contra a lesÃo gÃstrica induzida por AINEs em ratos, atravÃs de uma diminuiÃÃo na aderÃncia de leucÃcitos e aumento do fluxo sanguÃneo gÃstrico (Santos CL et al, BJP, 2005). O etanol induz lesÃo hemorrÃgica gÃstrica em ratos atravÃs de um aumento na produÃÃo de radicais livres e diminuiÃÃo da concentraÃÃo de glutationa na mucosa. OBJETIVOS: O objetivo deste trabalho foi investigar se o sildenafil possui efeito protetor contra a lesÃo induzida por Ãlcool, e avaliar o papel da via NO/GMPc/KATP no efeito gastroprotetor do sildenafil. MÃTODOS: O sildenafil (0.1, 0.3, 1, ou 3 mg/Kg, v.o) foi administrado 30 min antes do etanol 100% (4 ml/Kg, v.o). Depois de 1 h, os ratos foram sacrificados e os estÃmagos abertos para determinaÃÃo da Ãrea da lesÃo usando planimetria computadorizada. AlÃm disso, fragmentos de tecidos foram removidos para anÃlise microscÃpica e dosagem de glutationa e hemoglobina (teste colorimÃtrico - Bioclin). Os outros grupos foram tratados com L-NAME (1 ou 3 mg/kg, i.p), L-NAME (3 mg/kg, i.p) + L- Arg (200mg/kg, ip), ODQ (10 mg/Kg, v.o), glibenclamida (0.1, 0.3, 1 ou 3 mg/Kg, v.o), glibenclamida (1 mg/Kg) + diazÃxido (3mg/Kg, i.p) ou salina. ApÃs 30 min os ratos receberam sildenafil (1mg/kg) e depois de mais 30 min etanol 100% (4ml/kg, v.o), com o sacrifÃcio ocorrendo 1 h depois. RESULTADOS: O etanol 100% causou lesÃo gÃstrica (158.9 Â 9.3 mm2), hemorragia na mucosa (3787.0 Â 512.9 Âg/100mg) e reduÃÃo da concentraÃÃo de glutationa (78.7 Â 9.5 Âg/g). O Sildenafil protegeu, de forma dose-dependente, a mucosa gÃstrica do efeito do Ãlcool, com o efeito mÃximo na dose de 1 mg/Kg (44.5 Â 7.7 mm2). O sildenafil tambÃm reverteu a diminuiÃÃo da glutationa (143.6 Â 15.7 Âg/g) induzida por etanol. O L-NAME sozinho (151.1 Â 20.9 mm2), o ODQ (137.9 Â 41.6 mm2) e a glibenclamida sozinha (137.1 Â 16,7 mm2) reverteram a proteÃÃo do sildenafil. Mas, nos animais tratados com L-NAME + L-arginina (30.9 Â 10.5 mm2) ou glibenclamida + diazÃxido (60.3 Â 2.0 mm2) nÃo houve mudanÃas no efeito do sildenafil. CONCLUSÃES: O sildenafil protege a mucosa gÃstrica contra a lesÃo induzida por Ãlcool, atravÃs da ativaÃÃo da via NO/GMPc/KATP e por um aumento dos nÃveis de GSH no estÃmago / INTRODUCTION: Recently, we demonstrated that sildenafil has protective effects against NSAID- induced gastric damage in rats, by a decrease in leukocytes adherence and increase in gastric blood flow (Santos CL et al, BJP, 2005). Ethanol induced gastric hemorrhagic damage in rats, by an increase in free radical production and decrease in mucosal glutathione concentration. AIMS: Aim of was work is to investigate if sildenafil has a protective effect against ethanol- induced gastric damage and the role of the way NO/cGMP/KATP in this event. METHODS: Sildenafil (0.1, 0.3, 1, or 3 mg/Kg, p.o) was administrated 30 min before ethanol 100% (4 ml/Kg, p.o). After 1 hour, rats were sacrificed and the stomachs opened along the greater curvature and the mucosal lesion area was measured by computer planimetry program. Furthermore, pieces of gastric mucosal were removed for microscopic analysis and glutathione measure, and hemoglobin concentrations (colorimetric test Bioclin). Other groups had been dealt with L-NAME (1 or 3 mg/kg, i.p), L-NAME (3 mg/kg, i.p) + L- Arg (200mg/kg, i.p), ODQ (10 mg/Kg, p.o), glibenclamide (0.1, 0.3, 1 ou 3 mg/Kg, p.o), glibenclamide (1 mg/Kg) + diazÃxide (3mg/Kg, i.p) ou saline. After 30 min the rats had received sildenafil (1mg/kg), and after more 30 min ethanol 100% (4ml/kg, p.o), with the sacrifice occurring 1 h later. RESULTS: Absolute ethanol induced gastric damage (158.9 Â 9.3 mm2), and gastric mucosal hemorrhage (3787.0 Â 512.9 Âg/100mg) and reduced gastric glutathione concentration (78.7 Â 9.5 Âg/g). Sildenafil protected, in a dose dependent manner, the ethanol- induced gastric damage , with the maximum effect in the dose of 1 mg/Kg (44.5 Â 7.7 mm2). Sildenafil also reversed the decreased in gastric glutathione (143.6 Â 15.7 Âg/g) induced by ethanol. Alone L-NAME (151.1 Â 20.9 mm2), ODQ (137.9 Â 41.6 mm2) and glibenclamide alone (137.1 Â 16,7 mm2) reverted the protection of the sildenafil. But, in the animals trated with L-NAME + L-arginine (30.9 Â 10.5 mm2), or glibenclamide + diazÃxido (60.3 Â 2.0 mm2) did not have changes in the effect of the sildenafil. CONCLUSION: Sildenafil had a gastric protective effect against ethanol- induced gastric damage through the activation of the NO/cGMP/KATP pathway, at least in part through a increase in stomach GSH

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A gastrectomia com linfadenectomia ampliada ainda à o padrÃo ouro para o tratamento curativo do cÃncer de estÃmago (CaE), embora este procedimento possa levar a alto Ãndice de morbidade ou mortalidade, principalmente nos pacientes que nÃo apresentem disseminaÃÃo linfÃtica da doenÃa. A pesquisa do linfonodo sentinela (LS), jà consagrada nos tumores iniciais de mama e nos melanomas, apresenta-se cada vez mais freqÃente no trato digestÃrio, em especial no CaE com resultados animadores. Estudos iniciados nos meados do ano 2000 retratam busca crescente e bastante prÃspera para esclarecimento desta questÃo. O objetivo deste trabalho à elaborar um modelo experimental que possa demonstrar tecnicamente, em laboratÃrio, a viabilidade da pesquisa do LS no antro gÃstrico da cadela. Foram estudadas 25 cadelas com peso aproximado de 11 Kg e idade de 01 a 02 anos, sem raÃa definida (SRD), clinicamente saudÃveis, proveniente do Centro de Controle de Zoonoses do MunicÃpio de Fortaleza (CCZ) que tinham programaÃÃo para eutanÃsia. Com escolha aleatÃria, estes animais foram estudados individualmente e semanalmente. Utilizou-se, separadamente, TecnÃcio (99mTc) com traÃador/colÃide Fitato e corante vital azul patente V Guerbert 2,5 % (AP) injetados a 01 cm do piloro, na pequena curvatura no antro gÃstrico da cadela e analisados nos tempos zero, 05, 10, 15 e 20 minutos. ApÃs este perÃodo realizou-se pesquisa âin vivoâ do local de injeÃÃo do marcador e linfonodos encontrados e âex-vivoâ destes linfonodos. Para o estudo com o 99mTc utilizou-se o aparelho Gamma Probe modelo Nuclearlab DGC-II - detector para cirurgia radioguiada e sonda captadora de irradiaÃÃo acoplada com unidade de contagem e rastreamento sonoro e para o AP, visÃo direta. Para a anÃlise estatÃstica utilizou-se o teste de McNemar e o Coeficiente de ConcordÃncia de Kappa. Foi estabelecido em 5% o nÃvel de significÃncia (p≤0,05). Com o uso do 99mTc isolado foi identificado a presenÃa do LS em 20 animais (80%). Quando se utilizou o corante AP isolado a presenÃa do LS foi identificada em 24 animais (96 %). NÃo houve significÃncia estatÃstica quanto ao uso destes marcadores para a pesquisa do LS no antro gÃstrico da cadela. Concluiu-se que (1) O estÃmago da cadela à adequado para modelo experimental de pesquisa âin vivoâ do linfonodo sentinela e (2) O tecnÃcio (99mTc) e corante vital â azul patente V Guerbert 2,5 % (AP) sÃo eficientes como marcadores de linfonodo sentinela do antro gÃstrico da cadela. / The gastrectomy with extensive lymphadenectomy still is the gold standard for the dressing treatment of the gastric cancer (GC), even so these procedures can take high index of morbidity or mortality, mainly in the patients who do not present lymphatic dissemination of the illness. The research of sentinel lymph node (SLN), already consecrated in the initial tumors of breast and the melanomas, presents each time more frequent for upper gastrointestinal cancers, specially in GC with encouraging results. Studies initiated in the middles of 2000 portray increasing and sufficiently prosperous search for clarification of this question. The objective of this work is to elaborate an experimental model that can demonstrate technically, in laboratory, the research viability of SLN in gastric antrum of the dog. 25 female dogs had been studied with approach weight of 11 kg and age of 01/02 years, without definite race (WDR), healthful clinically, proceeding from the Control Center of Zoonosis of Fortaleza City with programming for euthanasia. With random choice, these animals had been studied individually and weekly. It was used, separately, radioisotopic 99mtechnetium labeled phytate and patent blue dye (V Guerbert 2.5%) injected at 01 cm above the piloro, on the small bending in the antrum gastric of the dog and analyzed in the times zero, 05, 10, 15 and 20 minutes. After this period, the injection place of the markers and gastric lymph nodes were appraised âin vivoâ (in the animal) and the gastric lymph nodes âex vivoâ (out of the animal). For the study with the 99mtechnetium it was used the device Gamma Probe model Nuclearlab DGC-II (radioguiada surgery with sounding lead of irradiation connected to unit of counting and sonorous tracking) and for the patent blue dye, direct vision. For the analysis statistics were used the test of McNemar and the Quantify agreement with Kappa. The level of significance was established in 5% (p≤0,05). When the radioisotopic 99mtechnetium labeled phytate was used single, the LS was identified in 20 animals (80%). With the patent blue dye single, in 24 animals (96%). There is no statistic significance with the use of those markers for the LS research in the gastric antrum of the dog. The conclusions are (1) The stomach of the dog is adjusted for experimental model in alive research of the sentinel lymph node (2) The radioisotopic 99mtechnetium labeled phytate and patent blue dye (V Guerbert 2.5%) are efficients as markers of sentinel lymph node of the dogâs gastric antrum.

Made available in DSpace on 2015-09-25T12:18:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antonio Gomes da Silva Neto.pdf: 1267974 bytes, checksum: 4cab0411656335816923aefc7520dd34 (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mugil curema Valenciennes, 1836, is a species of great economic importance, it occurs mainly in estuarine and coastal areas which they are used for food. These areas are subjected to strong anthropogenic impacts. This study aimed to deepen the knowledge on the feeding of M. curema and the influence of physical-chemical variables on diet these animals.In the state of Paraíba, Rio Paraíba do Norte suffers due to the continuing impact of human activities, it may interfere with the behavioe and life cicle of various species on site. The water quality and substrate is critical for maintaining the base bodies of foof chains, as well as the fis themselves in their initial stages ontogenetic particulary susceptible to environmental unbalance and mortality. Thys study tested hypothesis that the high loads os nutrients in the stuary the increase od algae communities due to eutriphication, positively influencing the diet and abundance of M. curema. It was developed in Paraíba do Norte River estuary, through monthly samplings from July 2010 to June 2011, on four sampling stations. Phytoplankton sampling and water for physical-chemical analysis were also performed. We sampled 130 individuals of M. curema, whose stomachs were analyzed. Cyclotella and Coscinodiscus were the main phytoplankton resources in the diet of M. curema. The analyses indicate the possibility that the individuals may picky on the some food items, because even with high density of some species in the water, they did not occur in stomachs examined. The rainfall on the drainage basin in the Paraíba do Norte River has great influence on water quality in the estuary, both in nutrients carried and in the salinity reduction. It was concluded that the diet of M. curema was basically of Bacillariophyceae, Coscinodiscophyceae, Cyanobacteria and sediment, and that both young and adults mullets use the estuary for feeding. / Mugil curema Valenciennes, 1836, uma espécie de grande importância econômica, ocorre principalmente em áreas costeiras e estuarinas, as quais utiliza para alimentação. Essas áreas, por sua vez, sofrem grandes impactos antropogênicos. Esse estudo objetivou aprofundar o conhecimento sobre a alimentação de M. curema e a influência das condições ambientais sobre esses peixes, associado às variações físico-químicas da água. No estado da Paraíba, o Rio Paraíba do Norte sofre impacto contínuo decorrente de atividades antrópicas, isso possivelmente interfere no comportamento e no ciclo biológico de diversas espécies no local. A qualidade da água e do substrato é fundamental para a manutenção de organismos na base das cadeias tróficas, assim como a dos próprios peixes em seus estágios ontogenéticos iniciais, particularmente mais suscetíveis a desequilíbrios ambientais e à mortalidade. Este trabalho testou a hipótese de que as elevadas cargas de nutrientes no estuário favorecem o aumento da comunidade algal, devido ao processo de eutrofização, influenciando positivamente na dieta e abundância de M. curema. A pesquisa foi desenvolvida no Estuário do Rio Paraíba do Norte, por meio de amostragens mensais, de julho de 2010 a junho de 2011, em quatro pontos do estuário. Foram também realizadas coletas qualitativas e quantitativas de fitoplâncton e de água para análise físico-química. Foram coletados 130 indivíduos de M. curema, cujos estômagos foram analisados. Cyclotella e Coscinodiscus foram os principais recursos fitoplanctônicos da dieta de M. curema. As análises apontam a possibilidade de que os indivíduos sejam seletivos quanto aos itens alimentares, pois mesmo havendo alta densidade de algumas espécies na água, elas não ocorreram nos estômagos analisados. A pluviosidade da bacia de drenagem do Estuário do Rio Paraíba do Norte exerce grande influencia sobre sua qualidade de água, tanto nos nutrientes carreados como na redução da salinidade. Concluiu-se que a dieta de M. curema constituiu-se basicamente de Bacillariophyceae, Coscinodiscophyceae, Cianobactérias e sedimento, e que tanto tainhas jovens, quanto adultas utilizam o estuário como área de alimentação.

O clado de Passeriformes denominado, atualmente, Furnariida é endêmico da região Neotropical e muito diversificado; ele é representado por cerca de 623 espécies alocadas em 134 gêneros, distribuídas nas seguintes famílias: Furnariidae, Dendrocolaptidae, Thamnophilidae, Formicariidae, Conopophagidae e Rhinocryptidae. As aves deste grupo são, em geral, encontradas em bandos mistos de espécies e/ou podem seguir formigas de correição, fenômenos que são conspícuos entre aves de florestas tropicais. Os representantes de Furnariida são considerados insetívoros, embora possam consumir, ocasionalmente, pequena quantidade de frutos ou sementes e pequenos vertebrados. Este trabalho teve como objetivo descrever a dieta de espécies representantes dos Furnariida que ocorrem em diferentes regiões da Amazônia, além de estimar o número de presas e de biomassa bruta consumida. Para tal, foi analisado o conteúdo estomacal de 476 espécimes de aves Furnariida, dos quais 51 pertencem à família Furnariidae, 139 à Dendrocolaptidae, 280 à Thamnophilidae, 3 à Formicariidae e 3 à Conopophagidae. Foram utilizados dois métodos diferentes para avaliar a contribuição da biomassa de presas consumidas pelos Dendrocolaptidae. O método da biomassa parcial apresentou-se muito incerto e, neste estudo, considerou-se a biomassa estimada como o método mais confiável para comparar o número total de itens e sua biomassa correspondente. As principais presas consumidas por estes pássaros foram Coleoptera, Orthoptera e Araneae. No entanto, Orthoptera foi o item que contribuiu com a maior biomassa ingerida, seguido de Coleoptera e Vertebrata. A alta biomassa de Orthoptera no ambiente poderia explicar o maior consumo, ou preferência desses insetívoros por tal item. Os vertebrados foram consumidos por alguns espécimes de Dendrocolaptidae e de Thamnophilidae e a maior parte do material ingerido pelos dendrocolaptídeos corresponde a Gonatodes humeralis, um pequeno lagarto escansorial; já os vertebrados consumidos pelos tamnofilídeos não foram identificados. A predação de vertebrados pode ser ocasional e, em geral, é considerada oportunística. Nas famílias de Furnariida, com número representativo de espécimes, Orthoptera e Araneae tiveram maior frequência de ocorrência em Furnariidae, enquanto Coleoptera e Orthoptera em Thamnophilidae e Coleoptera em Dendrocolaptidae, o que pode estar relacionado aos hábitos de forrageamento das espécies nelas incluídas / The clade Furnariida of the Passeriformes is endemic to the Neotropical region, and is very diverse: it is represented by around 623 species in some 134 genera distributed in the following families: Furnariidae, Dendrocolaptidae, Thamnophilidae, Formicariidae, Conopophagidae e Rhinocryptidae. Commonly the birds of this group are found in mixed-species flocks and/or as army-ant-followers, features that are common amongst birds of the tropical forests. Members of the Funariida are considered to be insectivores although they may occasionally eat small quantities of fruit or seeds, or small vertebrates. The objective of this study was to describe the diet of representative species of the Funariida that occur in different Amazonian regions, and also estimate the numbers of prey and total biomass consumed. To do this the stomach contents of 476 specimens of the Furnariida were analyzed, of which, 51 belonged to the family Funariidae, 139 to the Dendrocolaptidae, 280 to the Thamnophilidae, and 3 each to the Formaricariidae and Conopophagidae. Two methods were used to evaluate the contribution of the biomass of the preys consumed by the Dendrocolaptidae. The partial biomass method was found to be very unreliable and so, in this study, the estimated biomass method was found to be the most appropriate to compare the total number of items in the corresponding biomass. The main types of prey eaten by these birds were Coleoptera, Orthoptera and Araneae. Nevertheless, Orthoptera were the group that made the biggest contribution to the ingested biomass, followed by Coleoptera and Vertebrata. The high biomass of Orthoptera in the environment would explain the high consumption and preference for these insects as prey. The vertebrates were consumed by some specimens of Dendrocolaptidae and Thamnophilidae, and in the case of the dendrocolaptids these were all the small scansorial lizard Gonatodes humeralis; those consumed by the thamnophilids were not identified. Predation on vertebrates seems to be occasional and is probably opportunistic. In the families of the Furnariida, represented by numbers of specimens, Orthoptera and Aranae had the highest frequency of occurrence in the Funariidae, with Coleoptera and Orthoptera in the Thamnophilidae, and Coleoptera in the Dendrocolaptidae, which can be related to the foraging habits of the species in these families

Orientador: Marcelo Lima Ribeiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T02:53:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alvarez_MarisaClaudia_D.pdf: 3342763 bytes, checksum: ef7082f8bb653fcdcf965415a79b4d30 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A infecção por Helicobacter pylori e usualmente adquirida durante a infância e persiste durante toda a vida caso não seja tratada. A bactéria induz uma resposta inflamatória crônica, que esta associada com alterações hipergenéticas em oncogenes, genes supressores tumorais, e genes de reparo ao DNA. O Objetivo deste estudo foi avaliar a influencia da infecção por H. pylori no padrão de metilação de genes envolvidos na carcinogenese gástrica. O perfil de metilação de 106 genes foi caracterizado em biopsias provenientes de 5 pacientes adultos (1 Helicobacter pylori negativo, 3 com gastrite crônica infectados com linhagens de diferentes toxicidades e 1 com câncer gástrico) e em DNA proveniente de células epiteliais gástricas infectadas por H. pylori. Para estas analises foram utilizados o Promoter methylation array system, e o Gastric Cancer Methyl--Profiler DNA PCR Array. Os resultados destas análises mostraram que 20 % dos genes se encontravam metilados na amostra de câncer gástrico e 16 % dos genes na amostra de gastrite crônica, entretanto a analise comparativa entre estas amostras mostrou que compartilhavam 8,5 % dos genes metilados. A analise de metilação apos cocultura mostrou 12% dos genes metilados. Entre estes genes foram selecionados os seguintes: THBS1, HIC1, GATA--4, GATA--5 e MLH1 e MGMT, os quais foram avaliados em 239 amostras de biopsias gástricas, provenientes de 50 crianças e 97 adultos infetados ou não pela bactéria e de 92 adultos com câncer gástrico. O padrão de metilação foi avaliado por metilação PCR especifica (MSP--PCR). Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que não houve metilação da região promotora de MLH1, MGMT e HIC1, nas amostras provenientes de crianças, independente do estado de infecção. Os maiores níveis de metilação entre as amostras oriundas de adultos com gastrite crônica infectados foram observados em GATA--4 e THBS1 (p<0.05), MGMT e GATA--5 (p<0.001). Nos pacientes com câncer gástrico os maiores níveis de metilação foram observados em MGMT e GATA--5 (p<0.05, p<0.001, respectivamente). Foi verificado um aumento da instabilidade microssatelites nas amostras de câncer gástrico (p<0.03) e o mesmo foi associado com um aumento nos níveis de metilação de MLH1 e sua consequente diminuição de RNAm. Foi realizado in vitro a analise de expressão de GATA--5 e TFF1 apos cocultura de diferentes linhagens de H. pylori e células AGS, que revelou um aumento nos níveis de RNAm de GATA--5 as 6, 24 e 48h apos infecção, e aumento de TFF1 apos 48h. Estes aumentos foram independentes da presença de cag PAI. O aumento na expressão de GATA--5 foi observado em camundongos C57BL/6 apos 6 meses de infecção. Foi observado in vivo que nas amostras metiladas em GATA--5 apresentavam níveis diminuídos de TFF1. Estes resultados nos permitem sugerir que a metilação acontece precocemente na mucosa gástrica dos pacientes pediátricos e esta associada com a infecção por H. pylori. Entretanto alguns loci como MGMT e MLH1 a metilação parece ser dependente do tempo de infecção. Foi observado que os níveis de metilação aumentaram conforme a idade dos pacientes sugerindo que o maior tempo de exposição induz maiores níveis de metilação / Abstract: Helicobacter pylori infection is usually acquired in childhood and persists into adulthood if untreated. It is known that the bacterium induces a chronic inflammatory response, which is associated with epigenetic alterations in oncogenes, tumor suppressor genes and DNA repair genes. The aim of this study was to evaluate the influence of Helicobacter pylori infection on the methylation pattern of genes related to gastric carcinogenesis. The methylation pattern of 106 genes was characterized in gastric biopsies samples from 5 adult patients (1 H. pylori negative, 3 chronic gastritis infected with strains of different toxicities, and 1 gastric cancer) and DNA extracted from co--cultured cells infected with H. pylori. These analyses were performed with Promoter methylation array system, and Gastric Cancer Methyl--Profiler DNA PCR Array. The results showed that 20 % of genes were methylated in gastric cancer mucosa and 16% were hyper methylated in the mucosa of the chronic gastritis patients. The comparative analysis showed that 8,5 % of genes were methylated in both samples. The results from the co culture showed that 12% of genes were methylated. Among them the following genes were selected: THBS1, HIC1, GATA--4, GATA--5 e MLH1 e MGMT and evaluated in 239 gastric biopsies samples from 50 children and 97 adults infected or uninfected by H. pylori, and 92 adults with gastric cancer. The methylation pattern was analyzed by methylation specific PCR (MSP--PCR). The results from pediatric samples showed no methylation for MLH1, MGMT and HIC1 genes, independent of the infection status. Among the infected adults samples the higher levels of methylation were observed for GATA--4 e THBS1 (p<0.05), MGMT e GATA--5 (p<0.001). Higher levels of methylation were observed for MGMT e GATA--5 (p<0.05, p<0.001, respectively) in gastric cancer samples. It was observed an increase in microsatellite instability among gastric cancer samples, related to hyper methylation of MLH1. The expression levels of GATA--5 and TFF1 was analyzed in vitro. The results from infected cells showed an up regulation at 6, 24, and 48 for GATA-5 and at 48 h for TFF1. This increase was independent of cagPAI status. In an animal model an up regulation of GATA--5 was observed after six months of infection. A decrease in TFF1 mRNA levels was observed in infected children and adults samples methylated in GATA--5 promoter region. These data suggest that promoter hyper methylation occurs in gastric mucosa of children in association with H. pylori infection, however for some loci as MGMT and MLH1 this event seems to be dependent on the time of exposure. Furthermore it was observed an increase in methylation frequencies in adults samples compared to pediatric samples suggesting that the duration of the infection is related to methylation levels / Doutorado / Genetica Animal e Evolução / Doutora em Genética e Biologia Molecular

As atividades enzimáticas e isoenzimáticas da CK e da LD foram determinadas nos tecidos gástricos neoplásico e da margem de ressecção e no soro de indivíduos com adenocarcinoma de estômago, submetidos à gastrectomia. O tecido gástrico neoplásico aapresentou índices CKBB/Cktotal e LD5/LD1, bem como atividade da LD5, superiores aos da margem de ressecção correspondente. No pré-operatório, os indivíduos estudados apresentaram elevação da atividade sérica da CK BB (100%) e da CK MB (69%). Este fato, possivelmente, resultou da liberação dessas isoenzimas pelo próprio neoplasma ou, também pelo tecido normal adjacente. As atividades séricas das isoenzimas da LD apresentaram-se dentro dos valores de referência, nesse período. Após a gastrectomia, houve aumento significativo das atividades isoenzimáticas séricas da CK e da LD relação àquelas do pré-operatório, notadamente, no 1º período pós-operatório. Tais alterações foram atribuídas à liberação dessas isoenzimas pelos tecidos lesados durante o ato cirúrgico. / Abstract not available

O Callithrix penicillata (sagui-de-tufo-preto) mesmo sendo utilizado em algumas pesquisas e também mantido tanto em zoológicos como animal de estimação, possui ainda diversas lacunas acerca de sua anatomia. Assim, utilizamos 10 animais somente para o estudo da topografia, do padrão de irrigação vascular e de alguns índices biométricos do estômago, e outros cinco animais para estudos microscópicos. Ambos tendo com o objetivo caracterizar a anatomia do estômago e comparar as variações entre os sexos e eventualmente com outras espécies. Para o padrão vascular realizamos injeção de neoprene látex corado na aorta torácica com posterior dissecação dos ramos abdominais e no caso do estudo biométrico o mesmo foi realizado com o uso de um paquímetro digital, fita métrica e transferidor. E procedimentos tanto para a microscopia de luz com colorações de Hematoxilina-Eosina e Tricrômio de Masson quanto para a microscopia eletrônica de varredura foram efetuados. Com base no estudo ora realizado verificamos que o estômago localizava-se medialmente da 9° a 12° costelas e os aspectos biométricos revelam os padrões primários para este órgão, não se registrando diferenças entre machos e fêmeas. A artéria celíaca surge como o primeiro ramo da aorta abdominal, ocorrendo maior prevalência (70%) de trifurcação a partir desta artéria, com a emissão da artéria lienal, artéria gástrica esquerda e artéria hepática. A artéria lienal acompanhou a curvatura maior do estômago dando origem à artéria gastroepiplóica esquerda. A artéria gástrica esquerda no seu trajeto acompanhava a região da cárdia e do esôfago abdominal, cedendo-lhes contribuições. Já a artéria hepática originava a artéria gástrica direita e a artéria gastroduodenal. E esta por sua vez fornecia a artéria gastroepiplóica direita e a artéria pancreático-duodenal. Quanto aos aspectos microscópicos observamos a presença de quatro camadas: mucosa, submucosa, muscular e serosa e a presença de pregas da mucosa. Desta forma nesta oportunidade visamos contribuir para o estudo da anatomia comparativa, o que procuramos por vezes realizar neste trabalho, a fim também de oferecer subsídios indispensáveis em procedimentos clínico-cirúrgicos nesta espécie. / The Callithrix penicillata (black-tufted-ear-marmoset), have being used in some research and also kept both in zoos and pet. There are still many questions to be answered about their anatomy. Then to study the topography, the vascular pattern of irrigation and some biometric indices of the stomach, we used 10 animals and five other animals to microscopic studies. Both group of animals were studied in order to characterize the anatomy of the stomach and compare the variations between the sexes and possibly other species. To perform the vascular standard thoracic aorta was stained with injection of neoprene latex. Subsequently, we performed the dissection of the abdominal branches and in the case of the same biometric study was conducted using a digital caliper, tape measure and protractor. Procedures for both light microscopy with hematoxylin-eosin staining and Massons Trichrome as for scanning electron microscopy were perfomed. Based on our study we verified that the stomach was located medially from 9° to 12° ribs and biometric aspects reveal the primary standards body for this, not registering differences between males and females. The celiac artery arises as the first branch of the abdominal aorta, causing a higher prevalence (70%) from the trifurcation of the artery, originating the lienal artery, left gastric artery and the hepatic artery. Lienal artery accompanied the greater curvature of the stomach giving rise to the left gastroepiploic artery. The left gastric artery in its course follow and irrigate the region of the abdominal esophagus and cardia, originating new branches for that region. In its turn the hepatic artery originated the right gastric artery and gastroduodenal artery which gives rise to the right gastroepiploic artery and pancreatic-duodenal artery. In regards to the microscopic aspects we observed the presence of four layers: mucosa, submucosa, muscle and serosa and the presence of mucosal folds. Thus we aim to contribute to the study of comparative anatomy, in order to offer indispensable subsidies in clinical and surgical procedures in this specie.

A neuropatia autonômica que se manifesta em animais portadores de diabetes mellitus (DM) compromete vários órgãos. A nível gastrointestinal pode acarretar diarréia, constipação, estase e dilatação gástrica, levando a anorexia, perda de peso e vômito. Embora os mecanismos que desencadeiam esses distúrbios não estejam totalmente esclarecidos, parece que alterações do plexo mioentérico estão envolvidas. O estresse oxidativo juntamente com o aumento do sorbitol resultante das alterações metabólicas presentes no DM resultam em edema e lesão neuronal e, entre as conseqüências desta lesão, tem sido descrita alterações nos neurônios mioentéricos. O ácido ascórbico (AA) além da ação antioxidante pode reduzir a concentração de sorbitol atuando, desse modo, como neuroprotetor. O presente trabalho teve como objetivos investigar possíveis alterações no número e no tamanho dos neurônios mioentéricos NADH-diaforase reativos (NADH-dr) do estômago de ratos diabéticos e o efeito da suplementação com AA (1g/L de água) nos referidos parâmetros. Para tanto, 15 ratos (Rattus norvegicus) foram separados em três grupos (n = 5): controle (C); diabético (D); e diabético suplementado com AA (DS). O DM foi induzido por estreptozootocina (35 mg/kg de peso corporal). Após 120 dias de experimento, os animais foram anestesiados, sacrificados e seus estômagos retirados. Os neurônios mioentéricos foram evidenciados pelo método da NADH-diaforase. Por meio de microscópio de luz foram contados os neurônios NADH-dr e, pelo programa computadorizado para análise de imagens, foi mensurado o perfil do corpo celular (PCC) desses neurônios. As regiões aglandular e glandular do estômago foram analisadas separadamente. O número de neurônios NADH-dr foi maior (P<0,05) na região glandular do grupo DS quando comparado com o grupo D. A média dos PCCs foi maior (P<0,05) para os neurônios dos grupos D e DS do que para o grupo C. Ocorreu aumento na incidência de neurônios com PCC superior a 200 &micro;m2 no grupo D quando comparada aos grupos DS e C. Os resultados sugerem que a suplementação com AA teve efeito neuroprotetor sobre os neurônios mioentéricos NADH-dr representado pelo aumento no número de neurônios e diminuição de neurônios grandes na região glandular do grupo DS. / The autonomous neuropathy present in animals with diabetes mellitus (DM) compromises several organic systems. On the gastrointestinal tract it may provoke diarrhea, constipation, estase and gastric dilation, leading to anorexia, weight loss and vomit. Although the triggering mechanisms of these disturbances are not completely clear, it seems that alterations of the myenteric plexus may be involved. The oxidizing stress - together with the sorbitol increase resulting from the metabolic alterations due to dm - results in an edema and in a neuronal lesion. Among the consequences of this lesion, alterations in the myenteric neurons have been described. The ascorbic acid (AA), besides its antioxidant effect, may also reduce the sorbitol concentration working as a neuroprotector. The aims of the present work were to investigate the possible alterations in the number and size of nadh-dr stained myenteric neurons of the stomach of diabetic rats and the effect of the aa-supplementation (1g/l of water). In order to do so, 15 rats (rattus norvegicus) were divided into three groups (n = 5): controls (C); diabetic (D); and diabetic supplemented with AA (DS). DM was induced by streptozotocin (35 mg/kg of body weight). 120 days later, the animals were sacrificed for obtaining their stomachs. The myentric neurons were stained employing the nadh-diaforase method. We counted the nadh-dr neurons employing the light microscope and we measured the cellular body profile (CBP) using an image analysis software. The aglandular and glandular areas of the stomach were analyzed separately. The number of neurons nadh-dr was larger (p <0,05) in the glandular area of group ds when compared to group d. The average of cbps was larger (p <0,05) for neurons of groups d and ds than for group c. There was an increase in the incidence of neurons with cbps over 200 mm2 in group D when compared to groups DS and C. The results suggest that the AA supplementation had a neuroprotetor effect on the nadh-dr myenteric neurons represented by the increase in the number of neurons and the decrease of big neurons in the glandular area of group DS.

Biological invasions by new species can potentially cause widespread changes in the ecological structure of a reef community including competition with indigenous species. Although their native ranges occur in the western Pacific and Indian Oceans, the red lionfish (Pterois volitans) and the devil firefish (Pterois miles) currently comprise an invasive lionfish species complex ranging from the Greater Caribbean seasonally to Maine. We focused on dietary description of Pterois sp. in Broward County, Florida due to limited information on the current invasion in the southeastern Florida reef system. Stomach contents were collected from individuals collected within a 6 km area off the coast. Dietary preference was determined using percent number, percent occurrence and percent weight, as well as the composite index of relative abundance. A shift in depth preference of lionfish was also recorded. Seasonal variance was studied and a shift in prey preference was discovered throughout the four quarterly sampling periods. A high percent teleost diet was documented during the third quarter (July-September) and a high crustacean diet in the fourth quarter (October-December). There was a 38% change in the amount of teleost prey present between the sampling events. We observed an ontogenetic shift from a mainly crustacean diet to one consisting of mainly teleost fishes: the smallest size group (5-10 cm) had a 100% crustacean diet, whereas the largest size group (35-40 cm) had a 77% teleost and 23% crustacean diet. This trend was also found to be independent of depth. This change in trophic preference in relation to size was the first documentation of this trend in Broward County, Florida.