A compensação da dosagem gênica entre fêmeas XX e machos XY em mamíferos é adquirida através de um complexo mecanismo epigenético que resulta na inativação de grande parte de um dos cromossomos X nas células femininas. O processo de inativação do cromossomo X (XCI) se inicia cedo durante a embriogênese, concomitantemente à diferenciação celular, e envolve a aquisição de modificações epigenéticas características do cromossomo X inativo (Xi). Uma estabelecido, o padrão de inativação é estavelmente mantido através de todas as mitoses celulares subsequentes e por toda a vida do organismo (exceto para células germinativas que sofrem reativação do Xi). Os mecanismos envolvidos na iniciação e estabelecimento da XCI foram extensivamente estudados, especialmente em camundongos. Embora algumas características epigenéticas associadas à manutenção da XCI tenham sido descritas, a identidade e modo específico de ação de fatores envolvidos durante essa fase da XCI são aspectos ainda não bem compreendidos. Além disso, o processo de XCI apresenta diferenças importantes entre humanos e camundongos e estudos direcionados para a identificação de novos componentes envolvidos na manutenção da XCI em humanos tornam-se de fundamental importância. Triagens funcionais genômicas por bibliotecas de shRNAs constituem uma ferramenta poderosa para a identificação de genes envolvidos em diferentes mecanismos celulares e vias bioquímicas. Sendo assim, utilizamos essa ferramenta para triar genes envolvidos na manutenção da XCI em humanos. Células somáticas femininas primárias HPRT+/-/HPRT- foram transduzidas com uma biblioteca lentiviral de shRNAs e posteriormente tratadas em meio de cultura contendo a droga HAT para seleção de células HPRT+ nas quais esperava-se que o cromossomo Xi presente tivesse sofrido reativação em decorrência do knockdown de genes envolvidos na manutenção da XCI. Essa estratégia nos permitiu identificar 20 novos genes candidatos a estarem envolvidos na manutenção da XCI. Esses candidatos deverão ser avaliados individualmente para confirmar seu papel no processo de controle epigenético do cromossomo X / Transcriptional dosage compensation between mammalian XX females and XY males is acquired through a complex epigenetic mechanism that leads to the inactivation of most part of one of the X chromosomes in the female cells. The X chromosome inactivation (XCI) process takes place early during embryogenesis and involves the acquisition of epigenetic modifications that are characteristic of the inactive X chromosome (Xi). Once silencing is established, the inactivation pattern is maintained in through all the subsequent mitosis and the same X chromosome remains stably silenced in all the descendant cells and throughout the life of the organism (except for the germ line cells that undergo X chromosome reactivation). The initiation of XCI has been studied extensively, especially in mice. Although some epigenetic features associated with the maintenance of XCI have already been described, the identity and specific mode of action of the factors involved in this phase of XCI are largely unknown. Moreover, the XCI process presents important differences between mice and humans, and studies directed to the identification of new players involved in the maintenance of human XCI are fundamentally important. Functional genome-wide screens using multiplex shRNA libraries are a powerful tool for the identification of genes involved in different cellular mechanisms and biochemical pathways. In order to screen for genes involved in the maintenance of XCI in humans, a population of HPRT+/-/HPRT- primary somatic female cells were transduced with a multiplex lentiviral shRNA library and subsequently treated in HAT medium to select for HPRT+ cells in which we expected that the Xi would undergo reactivation as a result of the knockdown of genes involved in the maintenance of XCI. As a result, we identified 20 new candidate genes that could potentially be involved in the maintenance of XCI. These candidates should be individually evaluated in order to confirm their role in the epigenetic control of the X chromosome

Made available in DSpace on 2016-03-15T19:39:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Beatriz Tomas da Cruz Filipe.pdf: 472846 bytes, checksum: 4a922eb9ffaba04699908bdb3b7f0a02 (MD5) Previous issue date: 2012-08-27 / Ministério dos Petróleos de Angola / Introduction: Autism is a development disorder with generic designation of Pervasive Developmental Disorders (PDD) according to the criteria of the American Psychiatric Association (DSM-IV). The causes are multiple, which motivates the research in various fields of knowledge. The disorder has its origin in a neurobiological pathogenesis with environmental and genetic causes, or the integration of both. The manifestations are qualitative and quantitative abnormalities that affect the areas of social interaction, communication and behavior. The current literature tends to designate them as Autism Spectrum Disorders (ASD). Among the subjects with intellectual disabilities (ID) the reports on the prevalence of ASD are unclear, ranging from 3 to 50%. This heterogeneity shows the need to determine the possible prevalence in each sample. This determination has practical implications in the care and management of these individuals. Objectives: Adapt the cultural inventory of autistic behavior (ICA) created by Marteleto e Pedremônico (2005) to the population of Angola; evaluate the applicability of the scale for students with special educational needs in Angola; estimate the frequency of symptoms of the autistic behavior by some biological and socio-demographic variables in these students. Methods: The cross-cultural and conceptual adaptation of the ICA, the operational semantics and in relation to the cultural context and lifestyle of the target population of the survey. Results and conclusion: The cultural adaptation of the ICA-BR to the ICA-Angola was easily accomplished with a high rate of general equivalence in the prestest, around 80%; the ICA-Angola applied in the target population proved to be feasible with the training of other professionals in the field; the intellectual disabled students in the sample showed high scores in ICA-Angola; it will be necessary to expand the sample and the confirmation of the diagnosis of the Autism Spectrum Disorders to better evaluate the results took into consideration the evaluation of students with disabilities. / Introdução: O autismo é um distúrbio do desenvolvimento com designação genérica de Transtornos Globais do Desenvolvimento (TGD), de acordo com os critérios da Associação Americana de Psiquiatria (DSM-IV). As causas são múltiplas, o que motiva a investigação em diversas áreas do conhecimento. O transtorno tem em sua origem uma patogênese neurobiológica com causas ambientais, genéticas ou com a integração de ambas. As manifestações são anormalidades qualitativas e quantitativas que afetam as áreas da interação social, comunicacional e comportamental. A literatura atual tende a designá-las como Transtornos do Espectro do Autismo (TEA). No Brasil existem 4 escalas de triagem para TGD traduzidas e validadas, enquanto que em Angola tais instrumentos inexistem. Objetivos: Realizar a adaptação cultural do Inventário de Comportamentos Autísticos (ICA) de Marteleto e Pedremônico (2005) para a população de Angola; avaliar a aplicabilidade da escala adaptada em alunos com necessidades educacionais especiais em Angola; estimar a frequência da sintomalogia dos comportamentos autísticos segundo algumas variáveis biológicas e sociodemográficas nesses alunos. Métodos: A adaptação transcultural levou em consideração a avaliação de equivalência conceitual, a semântica e a operacionalidade em relação ao contexto cultural e estilo de vida da população alvo da pesquisa. Resultados e conclusão: a adaptação cultural do ICA-BR para o ICA-Angola foi facilmente realizada com alta taxa de equivalência geral no pré-teste, de 80%; a aplicação da escala ICA-Angola na população alvo revelou-se factível com possibilidade de treinamento de outros profissionais; os alunos com deficiência intelectual investigados revelaram altas pontuações no ICA-Angola; será necessária a ampliação da amostra e a confirmação do diagnóstico de Transtornos do Espectro do Autismo para melhor avaliação dos resultados.

A triagem psicológica é uma prática geralmente utilizada em instituições públicas de saúde psicológica, a fim de selecionar a parcela da população interessada que pode ser abarcada pelos serviços oferecidos e encaminhar o interessado para um atendimento adequado à sua demanda. Por se tratar de uma avaliação psicológica, embora de caráter inicial e breve, abrange funções e características complexas, que devem ser constantemente estudadas, e não é isenta de referenciais teórico-clínicos. É, entretanto, realizada geralmente de modo breve e apenas como uma coleta de dados pessoais dos clientes, o que pode agravar problemas freqüentes em clínicas, tais como o desperdício do momento precioso para um atendimento imediato (o momento em que o cliente procura ajuda), bem como o abandono precoce de terapia, quando decorrente de encaminhamento pouco adequado à demanda. Modelos de triagens interventivas, cada qual com especificidades teóricas e técnicas, são propostos como uma alternativa para lidar com alguns destes problemas. Realizam avaliação e assistência. O objetivo da presente pesquisa foi o de analisar alguns alcances da experiência da realização de atendimentos em uma modalidade de triagem interventiva. Esta pesquisa deu continuidade a um projeto anterior, 2004, inicialmente denominado Consultas Psicológicas, que estudou um atendimento de recepção com retornos, oferecido a pessoas que não haviam conseguido uma das seis vagas semanais para a triagem de uma clínica-escola universitária paulistana. Em 2006, passou a ser denominado Triagem Estendida. A proposta do atendimento consistia em realizar triagem com até seis encontros, uso entrevistas-clínicas semi-abertas e sob referencial psicanalítico. O atendimento tinha dois objetivos centrais: por um lado realizar de modo mais detalhado a tradicional coleta dos dados do cliente, com elaborações sobre a queixa, necessidade e interesses dos clientes, visando ofertar encaminhamento adequado; por outro, oferecer acolhimento psicológico no momento da procura, promovendo alívio terapêutico se possível, a fim de lidar com algumas das demandas pontuais dos clientes. Tratou-se de uma pesquisa clínico-qualitativa, com o estudo de 10 casos, com a finalidade de avaliar os alcances da modalidade aplicada. Discutiu-se se os objetivos planejados puderam ser atingidos e os benefícios da modalidade para o cliente e para a organização do fluxo institucional da clientela. Em consonância com outros estudos, verificou-se o potencial atingido da triagem como espaço terapêutico significativo ao oferecer acolhimento e aprofundamento da compreensão do conflito. Verificou-se que os encaminhamentos ocorreram após o cliente ter obtido informações sobre psicoterapia e havendo maior participação do mesmo nesta escolha. A opinião dos participantes em relação ao atendimento recebido (obtida através de um follow up) foi positiva para a maioria. Após um ano do término da triagem, alguns haviam seguido o encaminhamento proposto, outros haviam achado o atendimento em Triagem Estendida suficiente. Esta divisão sugeriu existirem os dois tipos de demandas, por atendimento focal e prolongado, cada qual diferentemente contemplado e elaborado em uma recepção estendida. Embora existam dificuldades para a implementação deste tipo de atendimento em função da necessidade da articulação com os outros serviços, uma escuta inicial prolongada mostrou-se efetiva como recurso para lidar com problemas institucionais. / The psychological screening is a practice commonly used in public mental health institutions in order to select the portion of the population interested in psychotherapy that can be encompassed by the services offered and to refer the user (patient) to an appropriate service to their demand. Because it is a psychological evaluation, although initial and brief, comprises functions and complex technical features, which must be studied, and also is not exempt from theoretical-clinical references. It is, however, generally carried out in a brief way (simplistic way), and just as the collection of personal data of the patient, what can aggravate frequent problems in clinics such as the wastefulness of the precious moment for an immediate psychological assistance (the one in which the client seeks help), as well as the premature discontinuation of therapy (dropout), when it is a result from an inadequate referral, with regard to the client\'s request and necessity. Models of psychological interventional trials, each one with its specific technical and theory, are proposed as an alternative to deal with some of these problems. They perform both, evaluation and assistance. The objective of this research was to analyze some of the reaches of an accomplishment experience of consultations in an interventional screening modality. This study gave continuity to a previous project, 2004, initially called the Psychological Consultations, that studied a reception with the returns, offered to those who had not had one of six vacant per week for the psychological screening in a school-clinic of São Paulo. In 2006, came to be called Screening Extended. The proposed service was to perform screening of up to six meetings, with semi-structured clinical interviews and under psychoanalytic point of view. The service had two main objectives: firstly perform on detail the traditional gathering of user data, with specific details of customer\'s needs, requests and interests, in order to offer appropriate referral; secondly, offers care at the moment in which there was a request for help promoting therapeutic relief if possible, in order to deal with specific demands. This was a clinical-qualitative research, with the study of 10 cases, with the aim of assessing the scope of the modality when it is applied. It was discussed if the planned objectives were achieved and what were the benefits of the modality for the patient and for the way of organizing the flow routine of institutional users. In line with other studies, there was a screening as a significant therapeutic space as it hosted the patient and provided a better understanding of the conflict. It was observed that the referral for an therapy occurred after the client have obtained information about psychotherapy and that there was a greater involvement of it at that choice. The participants\' opinions regarding the care received (obtained through a follow up) were positive for most. One year after the completion of the assistance, some had followed the referral to therapy; others thought that the received care was already enough. This bifurcation has suggested that there are two types of demands, for focal and prolonged care, each one differently embraced and elaborated in an extended reception. Although there are difficulties in implementing this type of service due to the need for coordination with other services, an initial prolonged listening proved to be effective as a resource for dealing with some institutional problems.

Com o objetivo de verificar a necessidade de aplicação dos testes de Emissões Otoacústicas Evocadas por Estímulos Transientes (EOAT) e Potencial Evocado auditivo de Tronco Encefálico (PEATEA) combinados e comparar a ocorrência de resultados " Passa" entre os grupos de berçário comum e de UTI-Neonatal, foram avaliados 150 recém-nascidos de berçário comum e 70 recém-nascidos de UTI-Neonatal. Os testes de EOAT e PEATEA apresentaram ocorrência de resposta semelhante quando os grupos foram analisados separadamente, porém na comparação entre os grupos, o grupo de berçário comum apresentou uma ocorrência maior de resposta " Passa" tanto nas EOAT quanto no PEATEA quando comparado com o grupo de UTI-Neonatal / The objective of the study was verify the necessity of the Transient evoked Otoacustic Emission (TEOAE) and Automatic Auditory Brainstem Response (AABR) combined and to compare the "Pass" results between the well baby nursery group and Newborn Intensive Care Unit (NICU). Were tested 150 from well baby nursery and 70 from NICU before they leave the hospital. The results showed that both tests presented similar result when analysed the different groups isolated but when they where compared between the groups, the well baby nursery group presented more "Pass" result than NICU group for TEOAE and AABR

INTRODUÇÃO: O abuso no consumo de drogas constitui um problema social e de saúde pública na maioria dos países, pelas consequências negativas que esse consumo provoca sobre o desenvolvimento emocional e físico das pessoas. O início do uso de substâncias tem-se apresentado na população de adolescentes cada vez mais cedo e, como consequência, uma avaliação para identificar comportamentos de risco é imprescindível para triagem e encaminhamentos adequados. Assim, o objetivo deste estudo foi revisar estudos e descrever três importantes instrumentos validados para o Brasil e utilizados para avaliação do abuso de álcool e outras drogas em adolescentes. MÉTODO: Estudo de revisão de literatura, realizado no período de janeiro de 1998 a agosto de 2010, em publicações nas bases de dados: Adolec, MedLine, Lilacs, PubMed e SciELO. Na seleção dos estudos, foram avaliados: artigos com aplicação dos instrumentos DUSI-R, Teen ASI e CBCL; o detalhamento do instrumento utilizado para diagnóstico; utilização de algum indicador de desempenho do instrumento; qualidade do estudo que permita avaliação do desempenho do instrumento, assim como a sua coerência com a literatura. RESULTADOS: Foram encontrados 767 artigos e, de acordo com os critérios de inclusão, foram avaliados 54, após as exclusões daqueles que não atenderam aos critérios. Os artigos com aplicação do instrumento DUSI-R foram 30, sendo 25 referentes a intervenções, prevalência e outros. Os estudos sobre validação do instrumento foram 5, com taxas de sensibilidade variando de 80 a 85% e especificidade variando de 70 a 90%. Outra medida foi a consistência interna com Alfa de Cronbach de 0,91 a 0,9451, apresentada em dois estudos. Já os artigos com aplicação do Teen ASI foram 12, sendo 8 estudos sobre intervenção, prevalência e outros. Para a validação do instrumento, foram encontrados 4 estudos, com taxa de confiabilidade em 2 estudos com r variando entre 0,69 e 0,90, um estudo com consistência interna com Alfa de Cronbach de 0,54 a 0,88 e outro estudo que avaliou a área sobre a curva de ROC = 0,88. Finalmente, os artigos com aplicação do CBCL foram 12, dos quais 8 foram sobre prevalência e fatores de risco. As medidas de desempenho do instrumento foram apresentadas em 4 estudos, sendo que dois mediram a taxa de sensibilidade do instrumento, variando de 80,4 a 87%. Ainda, um estudo apresentou consistência interna com Alfa de Cronbach entre 0,85 e 0,94 e outro estudou as propriedades psicométricas conforme dados da versão alemã do CBCL. CONCLUSÃO: Os resultados dos estudos apontam que os instrumentos pesquisados avaliam o abuso de álcool e outras drogas em adolescentes, possuindo boas propriedades psicométricas, porém de formas diferentes. O Teen ASI e o DUSI-R identificam e avaliam o uso de substâncias e outras áreas da vida. Por sua vez, o CBCL é voltado para avaliar a saúde mental do adolescente, não sendo específico para avaliar o abuso de álcool e outras drogas. Portanto, na escolha de instrumentos de avaliação, é importante considerar: organização do tempo, investimento na formação de profissionais e consolidação dos resultados que contribua efetivamente na melhora do tratamento / INTRODUCTION: The substance abuse is a major social problem in public health in most countries, due to the negative consequences of this behavior on the physical and emotional development of the people involved. The initiation phase of the substance abuse is beginning at earlier ages, and, as a consequence of that, an assessment to identify risk behaviors is very important for an acurate triage and subsequent steps. The objective of this study was to review studies and to describe 3 important instruments validated for Brazil and applied for the assessment of substance abuse in adolescents. METHOD: A literature review study, in the period from January of 1998 to August of 2010, in the databases of: Adolec, MedLine, Lilacs, PubMed and SciELO. In the selection of the studies the following criteria were evaluated: articles with application of the instruments DUSI-R, Teen ASI, and CBCL; the detailing of the instrument utilized for diagnostics; utilization of a performance indicator; quality of the study that enables the performance assessment of the instrument, and its coherence with the literature. RESULTS: 767 articles were found according to the inclusion criteria, and 54 of them were analysed, after the exclusions of the ones that did not meet the detailed criteria. 30 articles for the DUSI-R instrument were found, 25 of them related to interventions, prevalence and others. 5 studies were related to the validation of the instrument, with sensitivity rates varying from 80 to 85% and specificity variying from 70 to 90%. Another measure was the internal consistency with Cronbachs Alpha varying from 0.91 to 0.9451, presented in two studies. For the Teen ASI, 12 articles were found, and 8 of them were related to intervention, prevalence and others. For the validation of the instrument, 4 studies were found, with the reliability in 2 studies varying from r = 0.69 to 0.90, one study with internal consistency with Cronbachs Alpha varying from 0.54 to 0.88 and another study with the area under the ROC curve = 0.88. For the CBCL, 12 studies were found, and 8 of them were related to the prevalence and risk factors. The performance measures were presented in 4 studies, where 2 instruments measured the sensitivity rate varying from 80.4 to 87%. One study report the Cronbachs Alpha between 0.85 and 0.94, and another study studied the psicometric properties for the German version. CONCLUSION: The results of the studies suggest that the instruments included on the research evaluate the substance abuse in adolescents, with good psychometric properties, although in different ways. The Teen ASI and DUSI-R evaluate the substance abuse and other areas of life. The CBCL is useful to evaluate the mental health, and its not specific to conduct an assessment for substance abuse. So, when choosing assessment instruments, its important to consider: time management, investment in the education of the professionals; and consolidation of the results that contribute effectively to the improvement of the treatment

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-06-22T19:48:18Z No. of bitstreams: 1 marinacastrodeoliveira.pdf: 1782949 bytes, checksum: 16d25dee246b910fc6c356dfc8662d94 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-07-13T15:32:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marinacastrodeoliveira.pdf: 1782949 bytes, checksum: 16d25dee246b910fc6c356dfc8662d94 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T15:32:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marinacastrodeoliveira.pdf: 1782949 bytes, checksum: 16d25dee246b910fc6c356dfc8662d94 (MD5) Previous issue date: 2012-03-28 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introdução O uso indevido de álcool e outras drogas é considerado um relevante problema de saúde pública. Contudo, as ações de prevenção e reabilitação se mostram insuficientes principalmente devido à falta de qualificação profissional e a significativa estigmatização do usuário de substâncias. A disseminação de práticas de prevenção ao uso de álcool e outras drogas baseadas no modelo de Triagem, Intervenção Breve e Encaminhamento para Tratamento (SBIRT) têm sido apresentadas como medidas eficazes e como possibilidade para promover mudanças de atitudes dos profissionais de saúde. O objetivo do presente estudo foi avaliar o impacto de uma disseminação de SBIRT nas atitudes em relação às práticas de prevenção ao consumo de álcool e outras drogas e na estigmatização do uso problemático de substâncias por parte de profissionais da Atenção Primária à Saúde em dois municípios brasileiros. Foram utilizadas duas estratégias de diminuição do estigma no curso da disseminação: a educação e o contato. Métodos Participaram do estudo 96 profissionais, sendo que 54 receberam treinamento e supervisão para realização da SBIRT (Grupo Intervenção) e 41 não receberam nenhuma intervenção (Grupo Controle). O Follow-up foi de 3 meses. Foram aplicadas escalas de crenças e atitudes, uma escala de moralização e vinhetas para avaliar a estigmatização, em ambos os grupos, no baseline e no follow-up. Foram utilizados os testes T, Wilcoxon, Mann-Whitney, Mcnemar e Qui-quadrado. Resultados: Foi verificada uma alta moralização da dependência de substância por parte dos profissionais de saúde. De uma forma geral, não observou-se mudança de atitudes e redução da estigmatização. Conclusões: Aparentemente a intervenção realizada não alterou as atitudes dos profissionais em relação às práticas de prevenção (SBIRT) e a estigmatização dos dependentes por parte dos profissionais. Contudo, ressalta-se a importância de novos estudos que abordem o uso de estratégias de diminuição do estigma e avaliem a mudança de atitude dos profissionais, em um contexto de implementação da SBIRT. / Background: The misuse of alcohol and other drugs is considered an important public health problem. However, prevention and rehabilitation are insufficient mainly due to lack of professional qualification and significant stigmatization of substance user. The dissemination of practices to prevent alcohol and other drugs based on the model of Screening, Brief Intervention and Referral to Treatment (SBIRT) have been shown as effective means to promote changes in attitudes of health professionals. The aim of this study was to evaluate the impact of a spread of SBIRT in attitudes toward prevention practices to alcohol and other drugs and the stigma of substance use by professionals in Primary Health Care in two Brazilian cities. We used two antistigma strategies in the course of dissemination, education and contact. Methods: The study included 96 professionals, and 54 received training and supervision for implementation of SBIRT (intervention group) and 41 received no intervention (control group). The Follow-up was 3 months. Scales were applied to beliefs and attitudes, a range of ethical and vignettes to assess stigma in both groups at baseline and follow-up. T tests, Wilcoxon, Mann-Whitney, McNemar and chi-square test were used. Results: We noticed a strong trend to moralizing substance dependence by health professionals. Overall, there were no significant differences in groups at follow up in terms of attitudes or stigma. Conclusions: Apparently the intervention performed did not change the attitudes of professionals in relation to prevention practices (SBIRT) and stigmatization of addicts by professionals. However, it emphasizes the importance of new studies that address the use of anti-stigma strategies and evaluate the change in attitude of professionals in a context of implementation of SBIRT.

Orientador: Gonçalo Amarante Guimarães Pereira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-24T00:00:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Prause_AndreRichard_D.pdf: 4277553 bytes, checksum: d91469a30bbec7480bb60a683266a0af (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Com o aumento da busca por novas fontes renováveis para a substituição do petróleo fóssil como substrato de derivados petroquímicos, as indústrias de plásticos, atualmente um dos ramos mais dependentes da acessibilidade do petróleo, já alcançaram um nível alto de sustentabilidade em linhas de polímeros verdes. Porém, rotas verdes para a obtenção do produto final ainda não foram implantadas industrialmente, sendo que somente precursores dos monômeros desejados são produzidos. A partir desses precursores, o processo é continuado convencionalmente através de operações químicas até a obtenção do monômero. O desenvolvimento de uma rota enzimática para esses monômeros pode ser uma alternativa para os processos praticados na indústria. Enzimas são amplamente utilizadas para a bio-conversão industrial de compostos químicos e a busca por enzimas capazes de catalisar novas reações tem se intensificado, criando uma demanda maior por processos automatizados com aplicação de protocolos de rastreamento de alto desempenho. Para a realização da produção enzimática de alcenos de cadeia curta, uma enzima nativa, apresentando um mecanismo catalítico similar à reação desejada, foi modificada pela aplicação do conceito de "desenho de proteínas", que reúne técnicas de diversificação, recombinação, clonagem, expressão heteróloga e rastreamento, utilizando a "enzima molde" como ponto de partida. A enzima P450BS?, selecionada por apresentar os melhores pré-requisitos para modificações estruturais, foi submetida ao "desenho de proteínas", gerando 5.271 versões mutantes. O rastreamento de alto desempenho automatizado dessas proteínas alteradas, utilizando uma plataforma robótica, possibilitou a obtenção de uma enzima que apresenta a nova ação catalítica da conversão de 100 ?M de ácido octanóico para 2,6 ?M de 1-hepteno. Essa nova enzima abre o caminho para a produção industrial de "bio-alcenos" em micro-organismos, criando um sistema de fermentação que poderia sustentar uma rota verde para os monômeros necessários para a produção de plásticos. / Abstract: With the increased search for renewable resources for substituting fossil petroleum as the raw material for petrochemical products, the plastics industry, currently being one of the branches with the highest dependency on petroleum availability, already reached a high level of sustainability in their green polymer lines. Still, green routes producing the final product have not been implemented industrially and only precursors of the desired are being produced. Using these precursors, the process is continued conventionally, using chemical operations for the production of the monomers. The development of an enzymatic route toward these monomers could be an alternative for current industrial processes. Enzymes are widely used in industrial bioconversion of chemicals and the search for enzymes with the potential of catalyzing new reactions has intensified, creating a higher demand for automatized processes for the application of high-throughput screening protocols. In order to realize the enzymatic production of short-chained alkenes, a native enzyme, presenting a catalytic mechanism similar to the target reaction, was modified, applying the concept of "protein design", which unites diversification, recombination, cloning, heterologous expression and screening techniques, utilizing the "template enzyme" as a starting point. The enzyme P450BS?, selected for possessing the best prerequisites for structural modifications, was submitted to "protein design", creating 5,271 mutant versions. Automatized high-throughput screening of these altered proteins, utilizing a liquid handling platform, enabled the discovery of an enzyme, which presents a new catalytic action: the conversion of 100 ?M butyric acid to 2.6 ?M 1-heptene. This new enzyme opens the way for the industrial production of "bio-alkenes" in microorganisms, creating a fermentation system, which would be able to sustain a green route toward the necessary monomers for the production of plastics. / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Hemoglobinopathies are genetic alterations of high population frequency. Neonatal screening identified both homozygous cases (patients) and heterozygotes (sound carriers). This study aims to identify the spatial distribution of the HbS carriers (SCT) in Sergipe from universal newborn screening and evaluate knowledge about hemoglobinopathies in heterozygous families for genetic counseling performed in the delivery of the results of neonatal screening. The sample consisted of all individuals born in Sergipe, from October 2011 to October 2012, that have been submitted to neonatal screening by the National Health System. Tests were carried out in basic health units and forwarded to the University Hospital Lab where they were analyzed. The relatives of patients with SCT were called to attend the meeting where the delivery of the examination was made, and answered the questionnaire on knowledge of sickle cell disease and trait, before and after orientation. Analysis of the spatial distribution of individuals heterozygous for hemoglobinopathies was performed using spatial autocorrelation (Moran index). To evaluate the number of total hits questionnaire before and after we used the Wilcoxon test and each question was performed McNemar test. Among the 32,906 examinations, 1,202 showed abnormalities standard hemoglobin. There was a positive correlation with the percentage of blacks and mulattos county and the incidence of SCT and a negative correlation with the percentage of blacks in the cities. In heterozygous distribution analysis of the state of Sergipe conducted by autocorrelation were identifying three regions in the state more frequently to HbS. Of the 1,202 individuals identified with SCT only 290 families attended the genetic counseling. The knowledge of the study population regarding hemoglobinopathies are limited. Even though the need for neonatal screening, the majority of respondents is unaware of what the diseases surveyed by examination. However, they managed to assimilate information with the strategy used. / As hemoglobinopatias são alterações genéticas de alta frequência populacional. Com a triagem neonatal identificamos tanto os casos homozigotos (doentes), quanto os heterozigotos (portador sadio). O presente estudo tem como objetivo identificar a distribuição espacial da presença do portador de Hemoglobina S (HbS) em Sergipe a partir da triagem neonatal universal e avaliar o conhecimento a respeito das hemoglobinopatias, nos familiares dos lactentes heterozigotos identificados na triagem neonatal durante orientação genética realizada na entrega dos resultados do exame. A amostra estudada constituiu-se de todos os indivíduos nascidos em Sergipe, de outubro de 2011 a outubro de 2012, e que tenham sido submetidos à triagem neonatal pelo Sistema Único de Saúde. A coleta dos exames foi realizada nas unidades básicas de saúde e encaminhadas ao Laboratório do Hospital Universitário onde foram analisadas. Os familiares de pacientes com traço falciforme (TF) eram convocados a participar de uma reunião, onde foi realizada a entrega do exame, e aplicado questionário sobre o conhecimento da doença e TF antes e após a orientação. A análise da distribuição espacial dos indivíduos heterozigotos para HbS foi realizada através autocorrelação espacial (Índice de Moran). Para avaliação do conhecimento sobre as hemoglobinopatias, o número de acertos total do questionário antes e após foi utilizado o teste de Wilcoxon e cada questão foi realizado o teste de Mc Nemar. Dentre os 32.906 exames realizados, 1.202 apresentaram alguma alteração do padrão da hemoglobina. Observou-se correlação positiva entre o percentual de negros e pardos dos municípios e a incidência de TF, mas correlação negativa quando apenas o percentual de negros era considerado. Na análise da distribuição de heterozigotos no estado de Sergipe, realizada pela autocorrelação foram identificadas 3 regiões no estado com maior frequência da HbS. Dos 1.202 indivíduos identificados com TF apenas 290 familiares compareceram à orientação genética. O conhecimento da população estudada a respeito das hemoglobinopatias foi limitado. Mesmo sabendo da necessidade de realização da triagem neonatal, grande parte dos entrevistados desconhece quais são as doenças pesquisadas pelo exame. Entretanto, conseguiram assimilar informações com a estratégia utilizada.

A metagenômica trouxe novas perspectivas ao estudo de comunidades microbianas no ambiente, permitindo explorar tanto a diversidade taxonômica de microrganismos ainda não-cultivados, como o acesso direto a genes e vias metabólicas. Neste trabalho, foram construídas bibliotecas metagenômicas a partir de amostras de sedimentos de mangue da Baía de Guanabara (RJ), impactadas com hidrocarbonetos de petróleo e metais pesados. Proteobacteria (33,3%), bactérias afiliadas a redutoras-de-sulfato (29,7%) e Firmicutes (20%) representaram os grupos principais nas amostras ambientais, baseado em análises filogenéticas de rDNA 16S, ao passo que isolamentos seletivos utilizando diesel e naftaleno permitiram a recuperação preferencial de delta-Proteobacteria e actinomicetos. Bibliotecas metagenômicas dos sedimentos enriquecidos com óleo diesel, com insertos entre 25 e 35 Kb clonados em fosmídeos, foram triadas para detecção de genes catabólicos de monoxigenases (alkB1) e expressão de epóxido-hidrolases, esterases, lipases e monoxigenases em ensaios de alto desempenho (HTS, high throughput screening). Clones reativos a alkB1 foram detectados, porém não foram funcionais nas condições de HTS testadas. Nas bibliotecas de fosmídeos triadas, vários clones apresentaram atividade enzimática, sendo que dois apresentaram atividade de lipase-esterase com alta seletividade, elevada taxa de conversão de substratos e excesso enantiomérico (ee >99%). Os resultados de HTS comprovaram a eficiência do uso da clonagem direta de DNA ambiental na expressão de vias metabólicas de interesse com potencial de aplicação biotecnológica. / Metagenomics brought a new perspective to the study of microbial communities in the environment, enabling access to the taxonomic diversity of uncultured microorganisms, as well as direct access to genes and metabolic pathways. In the current study, metagenomic libraries were constructed from mangrove sediment samples of the Guanabara Bay (RJ, Brazil), impacted with oil hydrocarbons and heavy metals. Proteobacteria (33.3%), sulfate-reducing affiliated bacteria (29.7%) and Firmicutes (20%) represented the main groups in the environmental samples based upon 16S rDNA phylogenetic analysis, whereas selective isolation using diesel and naphtalene yielded delta-Proteobacteria and actinomycetes. Metagenomic libraries of diesel-enriched sediment samples, with 25 to 35 Kb fosmid inserts, were screened for detecting monooxigenase genes (alkB1) and expression of epoxide hydrolases, esterases, lipases and monooxigenases in high throughput screening (HTS) assays. Clones reactive to the alkB1 probe were detected, but were not functional under the HTS conditions used. Several functional clones were detected in the clone library, and two showed lipase-esterase activity with high rates of substrate conversion and enantiomeric ratio (ee >99%). The results obtained on HTS showed the efficiency of the direct cloning of environmental DNA for the expression of metabolic pathways with potential biotechnological application.

A pesquisa estabeleceu como objetivo geral, analisar a gestão dos Resíduos Sólidos Urbanos em dois casos distintos; um na cidade de Varginha, MG e outro no Distrito de Jaçanã na cidade de São Paulo. Tem como finalidade, indicar caminhos sustentáveis para um melhor desempenho no processo de triagem, com ganho de tempo e renda para os cooperados. O método empregado foi baseado em revisão bibliográfica e trabalho de campo com entrevistas participativas, para melhor analisar e avaliar a sustentabilidade dos sistemas utilizados nos dois casos. Com o mesmo intuito foram investigadas a geração, coleta, triagem, o processamento e transporte, bem como o destino final dos resíduos gerados em ambos os casos, visando auxiliar a análise comparativa da rentabilidade e produtividade nos processos de triagem de Resíduos Sólidos Urbanos, das cooperativas em estudo. Como resultados, a COOPER-ET do caso Varginha MG, apresentou um índice de sustentabilidade sócio-econômico relativamente mais elevado do que a COOPER-SF do caso Jaçanã SP, onde esta última apresentou relativamente um maior índice no aspecto ambiental. A análise integrada da produtividade dos sistemas demonstrou uma taxa de tratamento com triagem mensal de Resíduos Sólidos Domiciliares de 10 % para o caso Jaçanã e 35% para o caso Varginha, em relação a todos os Resíduos Sólidos Urbanos produzidos pelas duas comunidades. De acordo com o quadro sócio-econômico apresentado pelas cooperativas, a COOPER-ET foi classificada como Cooperativa de Lugar Social, com características de Economia Solidária, segundo os conceitos de Singer (2000). A COOPER-SF foi classificada de acordo com o conceito das cooperativas organizativas, segundo Pinho (1982), uma vez que este conceito justifica como ela foi criada. O processo de triagem no transbordo (caso Varginha) mostrou-se relativamente mais rentável e mais econômico do que a coleta seletiva porta a porta promovida pelas Prefeituras de São Paulo, que mostrou ser relativamente menos rentável para os cooperados e mais dispendiosa para as Prefeituras, além de competir com os coletores autônomos de Resíduos Sólidos Recicláveis. Foram indicadas maneiras sustentáveis no Gerenciamento Integrado de Resíduos Sólidos Urbanos, com propostas de inclusão social não só dos cooperados, mas também dos coletores autônomos de Resíduos Sólidos Recicláveis. / The research has established as a general objective, analyze the management of the Urban Solid Waste in two distinct cases; one in the city of Varginha, Minas Gerais and another one in the District of Jaçanã in the city of São Paulo. It has as purpose to indicate sustainable ways to better performance in the process of screening, with profit of time and income for the cooperated. The employed method was based on bibliographical revision and work of field with participatory interviews, better to analyze and to evaluate the sustainability of the systems used in the two cases. With same to that effect were investigated the generation, it collects, screening, processing and transportation, as well as the final destination of the waste generated in both the cases, aiming at to assist comparative analysis of profitability and productivity in the process of screening of Urban Solid Waste, of the cooperatives in study. As results, the COOPER-ET of the Varginha case - MG, presented an index of socio-economic sustainability relatively higher than the COOPER-SF of the Jaçanã case - SP, where the latter presented relatively index higher in the environmental aspect. The integrated analysis of the productivity of the systems, demonstrated a tax of treatment with monthly screening of Solid Waste Domiciliary of the 10% for the Jaçanã case and 35% for the Varginha case, for all Urban Solid Residue produced by the two communities. In accordance with the partner-economic context presented by the cooperatives, the COOPER-ET was classified as Cooperative of Social Position, with characteristics of Solidarity Economy, according to concepts of Singer (2000). The COOPER-SF, was classified in accordance with the concept of the organizational cooperatives, according to Pinho (1982), a time that this concept justifies as it was created. The process of screening in the transshipment (case Varginha) revealed relatively more profitable and more economic of what the selective collection door the door promoted by the City halls of São Paulo, that it showed to be relatively less profitable for the cooperated ones and expensive to the City halls, beyond competing with the autonomous collectors of Solid Waste Recyclable. Were indicated sustainable ways in the Integrated Management of Urban Solid Waste, with proposals for inclusion social not only of the cooperated, but also of the collectors autonomous of Recyclable Solid Waste.