Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivos: (i) avaliar a diversidade genética de amostras de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA) no complexo UNIFESP/HSP isolados de hemocultura; (ii) avaliar possíveis fatores de risco associados à bacteremia e mortalidade causada pelo Clone Epidêmico Brasileiro (CEB) e por outros clones de MRSA. Material e Métodos: Estudo retrospectivo de isolados de MRSA do período de 2002 a 2005. Coletou-se dados epidemiológicos nos prontuários dos pacientes e os tipos de SCCmec foram caracterizados pela reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex. Caso fosse pertinente, foi realizada a detecção de produção de leucocidina PantonValentine (PVL). A presença de possíveis clones foi investigada por PFGE (pulsed field gel eletrophoresis). Resultados: Foram avaliados 148 episódios de bacteremia por MRSA. A maioria das infecções foi considerada relacionada à assistência à saúde (92,6%); 77% dos pacientes receberam antibioticoterapia prévia e 74,3% fizeram uso de catater venoso central. O SCCmec tipo III foi encontrado em 87% das amostras e 19 amostras carreavam SCCmec I, II ou IV. Dentre as 10 amostras portadoras de SCCmec IV apenas uma foi produtora de PVL, e quatro foram detectadas em pacientes pediátricos. O dendograma obtido pelo perfil de bandas de PFGE identificou quatro principais clusters dentre as amostras. CEB (SCCmec III) foi relacionado a 128 amostras, e o clone pediátrico (SCCmec IV). Além disso, duas amostras foram relacionadas ao USA300 e USA400. Antibioticoterapia prévia foi considerado fator de risco para aquisição de bacteremia por MRSA SCCmec III. Não houve diferença entre as taxas de sobrevida de acordo com o tipo de SCCmec. Conclusões: O SCCmec tipo III foi o tipo predominante de MRSA causador de bacteremias no HSP. CEB continua a ser o clone predominante apesar da emergência de novas linhagens. Antibioticoterapia prévia foi o único fator de risco relacionado à aquisição de MRSA portador de SCCmec tipo III em nosso meio. / Objectives: (i) to evaluate the genetic diversity among methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) isolates from bloodstream infections (BSIs) from UNIFESP/HSP complex; (ii) to evaluate risk factors and mortality associated with bacteremia caused by Brazilian Epidemic Clone (BEC) and other MRSA lineages. Methods: Retrospective study selecting with MRSA causing BSIs during 2002 to 2005. Patient demographic information was obtained, and SCCmec types were performed by polymerase chain reaction (PCR) multiplex. Detection of Panton Valentine Leukocidin (PVL) was performed when necessary. Genetic relatedness among clinical isolates was assessed by PFGE (pulsed field gel eletrophoresis). Results: A total of 148 MRSA bacteremia episodes were investigated. Most infections were considered nosocomial (92.6%); 77.0% of patients have previously used antimicrobial therapy and 74.3% had a central venous line. SCCmec type III was found in 87.0% (n=129) of isolates and 19 carried either SCCmec I, II, IV. Only one out of 10 samples harboring SCCmec type IV carried PVL, and 4 samples were isolated from pediatric patients. The dendogram based PFGE analysis identified four major MRSA clusters. Most SCCmec III isolates were related to the BEC, (n=128), and seven SCCmec IV isolates were associated to the pediatric clone. Two isolates SCCmec IV were related to USA300 and USA400 clones. Previous antimicrobial therapy was considered a risk factor for SCCmec III MRSA bacteremia. No difference between survival rates was observed according to SCCmec types. Conclusions: SCCmec III was the predominant lineage associated to MRSA bacteremia in HSP. Although BEC continues to be the predominant clone in our nosocomial environment, new lineages of SCCmec were observed in the study period. Previous antimicrobial therapy was the only risk factor associated with acquisition of type III MRSA bacteremia. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 72.pdf: 596399 bytes, checksum: 73031b2896fa6d41d8df381fdbbbe46d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Diversos relatos indicam que queijos Minas Frescal comercializados no Brasil são amplamente contaminados, sendo o gênero Staphylococcus spp. incriminado em diversos surtos de toxinfecção alimentar. Os objetivos deste estudo são a pesquisa de características fenotípicas e genotípicas de resistência a antimicrobianos de Staphylococcus spp. isolados a partir de queijo Minas Frescal, verificando a presença dos genes mecA e qacA/B através da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Estes isolados, caracterizadas como estafilococos coagulase positiva e estafilococos coagulase negativa por Freitas (2005), neste estudo passaram por verificação de sua pureza, através de características macroscópicas das colônias em crescimento em Triptic Soy Agar, coloração de Gram, prova da catalase e da coagulase. Após a seleção de culturas puras de estafilococos foi realizado teste de suscetibilidade a antimicrobianos (mupirocina, ampicilina, tetraciclina, clindamicina, sulfazotrim, norfloxacina, cefotaxima, piperacilina+tazobactam, meropenem, penicilina G, cefepima, cloranfenicol, gentamicina, eritromicina, oxacilina e cefoxitina), extração de DNA e pesquisa dos genes mecA e qacA/B através da reação em cadeia da polimerase. Os resultados foram que apenas 14 (14,7por cento) dos isolados analisados pelo antibiograma se mostraram sensíveis a todos os antibióticos testados. Encontrou-se 27 (28,4por cento) dos isolados multiresistentes e suscetíveis à meticilina e 15 (15,8por cento) eram multiresistentes e resistentes à meticilina. O gene mecA foi detectado em 21 (22,1por cento) dos 95 isolados pesquisados, e dentre estes, 9 (9,5por cento) apresentaram-se como resistentes pelo teste de suscetibilidade a antimicrobianos (incluindo dois isolados coagulase negativos). Dentre os isolados 74 (77,9por cento) não apresentaram o gene mecA e 6 (6,3por cento) apresentaram-se resistentes à meticilina pelo antibiograma...

Submitted by PAULA FERNANDA KRELING DOMINGUES null (pfkreling@yahoo.com.br) on 2016-10-24T11:38:23Z No. of bitstreams: 1 tese paula final versão defesa.pdf: 1294870 bytes, checksum: 4d22aa7bfdd639ed01df314565834ea9 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-10-31T13:00:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 domingues_pfk_dr_arafo.pdf: 1294870 bytes, checksum: 4d22aa7bfdd639ed01df314565834ea9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-31T13:00:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 domingues_pfk_dr_arafo.pdf: 1294870 bytes, checksum: 4d22aa7bfdd639ed01df314565834ea9 (MD5) Previous issue date: 2016-09-05 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O sistema imune tem diversas formas de defesa contra microrganismos patogênicos. As membranas da mucosa são uma fonte de peptídeos catiônicos antimicrobianos contra uma ampla variedade de bactérias, fungos e vírus encapsulados. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade e atividade antimicrobiana em condições planctônicas e de biofilme de fragmentos derivados de peptídeos catiônicos (PC): LL-37 (originário de hCAP-18), D6-17 e D1-23 (originários de ortólogo da β-defensina-3 humana) contra bactérias cariogênicas. Para análise citotóxica, duas linhagens de células epiteliais foram expostas a diluições seriadas de fragmentos de PC. Ensaios de MTT e coloração de DAPI foram realizados para avaliar o metabolismo e a morfologia celular, respectivamente. A concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) foram determinadas para fragmentos de PC e controle (digluconato de clorexidina - CHX) contra Streptococcus mutans (Sm), S. mitis, S. oralis, S. salivarius, S. sanguinis, Lactobacillus acidophilus, L. casei, L. rhamnosus, L. brevis, L. fermentum e Actinomyces israelii. A concentração inibitória fracionada (FIC) foi obtida pelas combinações de fragmentos de CP para S. mutans. O ensaio de biofilme foi conduzido com CHX e o melhor fragmento de CP contra cepas de S. mutans. Microscopia confocal a laser foi realizada para avaliar a quantidade de células mortas em relação as células vivas e também a espessura do biofilme. Os resultados indicaram que D6-17 não afetou o metabolismo de nenhuma das linhagens celulares. D1-23, LL-37 e CHX não foram tóxicos para ambas as células utilizadas, quando de concentrações abaixo de 0,2, 0,02 e 0,01mM, respectivamente. Combinações dos PC não mostraram efeito sinérgico contra S. mutans. A coloração DAPI demonstrou fragmentação nucleica para LL-37 e CHX, e aspecto semelhante ao controle (meio de cultura) para D1-23 e D6-17. D1-23 apresentou a melhor atividade bactericida contra S. mutans, S. mitis e S. salivarius. LL-37 apresentou melhor efeito contra espécies de Lactobacillus e Actinomyces. D6-17 mostrou atividade bactericida apenas contra S. mutans, L. brevis e L. fermentum. Combinações de fragmentos de PC não mostraram efeito sinérgico contra S. mutans. D1-23 (10x CBM) apresentou atividade contra biofilme de S. mutans superior a CHX. A microscopia confocal mostrou alta taxa de células mortas em relação a células vivas para D1-23 e CHX quando comparado ao grupo controle (meio de cultura). D1-23 também diminuiu a espessura do biofilme em relação ao grupo controle. Conclui-se que D1-23 mostrou relevante atividade antimicrobiana/antibiofilme contra bactérias cariogênicas e baixa toxicidade em células epiteliais. / The immune system has several forms of defense against pathogenic microorganisms. The mucous membranes are a source of potent antimicrobial cationic peptides against a broad range of bacteria, fungi and enveloped viruses. The aim of study was evaluated the cytotoxicity and antimicrobial activity under planktonic and biofilm conditions of fragments derived from cationic peptides (CP): LL-37 (from hCAP-18), D6-17 and D1-23 (from β-defensin-3 derivative) against cariogenic bacteria. For cytotoxicity analysis, two lines of epithelial cells were exposed to serial dilutions of the CP fragments. MTT assays and DAPI staining were performed to evaluate cell metabolism and morphology, respectively. Minimum inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) were determined for the CP fragments and control (Chlorhexidine digluconate-CHX) against Streptococcus mutans (Sm), S. mitis, S. oralis, S. salivarius, S. sanguinis, Lactobacillus acidophilus, L. casei, L. rhamnosus, L. brevis, L. fermentum and Actinomyces israelii. Fractional inhibitory concentration (FIC) was obtained for the combinations of CP fragments on S. mutans. Biofilm assays were conducted with CHX and the best antimicrobial CP fragment against S. mutans strains. Confocal Laser Scanning Microscopy (CLSM) was used to analyze the Live/Dead cells and biofilm thickness. The results indicated that D6-17 did not affect the metabolism of either cell line. D1-23, LL-37 and CHX were not toxic for both cells, in concentrations below 0.2, 0.02 and 0.01mM, respectively. DAPI-staining cells demonstrated nuclei fragmentation for LL-37 group and cells with the aspect of apoptosis in the CHX group. Cells treated with D1-23 and D6-17 presented morphology similar to the control group (culture medium). D1-23 presented the best bactericidal activity against S. mutans, S. mitis and S. salivarius. LL-37 had a better effect against Lactobacillus and Actinomyces species. D6-17 showed bactericidal activity only against S. mutans, L. brevis and L. fermentum. Combinations of CP fragments did not show a synergic effect against S. mutans. D1-23 (10x MBC) presented a higher effect against S. mutans biofilm compared to CHX. CLSM analysis showed that D1-23 and CHX groups presented higher quantification of dead cells when compared to control (culture medium). The biofilm thickness were lower in the D1-23 group compared to CHX and control groups. We concluded that D1-23 showed a remarkable antimicrobial/anti-biofilm effect against cariogenic bacteria and low toxicity for epithelial cells. / FAPESP: 2013/12285-0

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-08T18:47:28Z No. of bitstreams: 2 TESE Isabelle da Silva Luz.pdf: 2533844 bytes, checksum: ef1a1e69d6d1ea40a549974b8e76af50 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T18:47:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Isabelle da Silva Luz.pdf: 2533844 bytes, checksum: ef1a1e69d6d1ea40a549974b8e76af50 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-02-12 / CNPq; FACEPE / A crescente demanda por alimentos saudáveis isentos de conservantes químicos tem estimulado a pesquisa de tecnologias alternativas para a produção de alimentos seguros. Neste cenário, os óleos essenciais surgem como possíveis agentes antimicrobianos para uso em alimentos, em especial aqueles obtidos da espécie Origanum vulgare L. (OEOV). A ação antimicrobiana do OEOV tem sido atribuída aos compostos fenólicos naturalmente presentes em sua constituição, sendo o carvacrol (CAR) frequentemente citado como seu constituinte majoritário. Considerando estes aspectos, este estudo foi desenvolvido com objetivo de investigar a capacidade de adaptação e de desenvolvimento de tolerância ao OEOV e CAR em algumas cepas de bactérias contaminantes de alimentos (Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella Typhimurium) e avaliar a ocorrência de injúria e alterações na composição de ácidos graxos da membrana citoplasmática de S. Typhimurium quando exposta a concentrações subletais destes agentes. A determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi realizada por macrodiluição em caldo. Para os ensaios de tolerância direta e cruzada (45oC; pH 5.2; NaCl 5-15 g/100 mL), as cepas foram expostas a concentrações subletais (1/2 CIM e 1/4 CIM) do OEOV ou do CAR em caldo base carne (18 h) e em modelo base carne (72 h). Para os ensaios de verificação de injúria subletal, S. Typhimurium foi exposta a concentrações subletais do OEOV ou CAR e semeadas em meios adicionados de agentes seletivos. O perfil de ácidos graxos da membrana citoplasmática foi determinado por meio de cromatografia gasosa. Os valores da CIM frente às bactérias testadas variaram entre 0.62 μL/mL e 5.0 μL/mL para OEOV e entre 0.62 μL/mL e 2.5 μL/mL para CAR. Ensaios de indução de tolerância direta e cruzada em caldo base carne revelaram ausência do desenvolvimento de tolerância em todas as cepas bacterianas ensaiadas. Resultados semelhantes foram observados para P. aeruginosa em modelo base carne. Ensaios adicionais de indução de tolerância direta nas cepas bacterianas quando em caldo base carne adicionado de concentrações crescentes (1/16 CIM - 2 CIM) dos compostos também não evidenciaram desenvolvimento de tolerância bacteriana. A exposição de S. Typhimurium a concentrações subletais de OEOV ou CAR revelou injúria à membrana citoplasmática e à membrana externa, bem como alterações em sua composição de ácidos graxos, especialmente relacionadas ao aumento da razão ácidos graxos insaturados:ácidos graxos saturados. Os resultados obtidos neste estudo demonstram que a exposição das cepas bacterianas a concentrações subletais do OEOV ou CAR não induziu o desenvolvimento de tolerância bacteriana direta e cruzada quando cultivadas em meio base carne. Ainda, sugeriram que estes compostos podem induzir uma resposta adaptativa em S. Typhimurium, relacionada à mudanças no perfil de ácidos graxos de membrana. Estes achados revelam o potencial antimicrobiano do OEOV e do CAR em sistemas de conservação de alimentos, quando considerada a sua destacável capacidade de inibição do crescimento das cepas utilizadas no estudo, concomitante ao não desenvolvimento de tolerância bacteriana direta e cruzada, considerando avaliações de uso em concentrações subletais.

Infecções fúngicas invasivas estão associadas a altos índices de morbidade e mortalidade, sendo causadas principalmente por leveduras do gênero Candida. A formação de biofilmes tem sido considerada um dos principais fatores associados à virulência destas leveduras, devido, principalmente, à maior resistência às terapias antimicrobianas apresentada pelas células sésseis em comparação às células planctônicas. Torna-se necessária a seleção de antifúngicos eficazes na terapêutica das infecções associadas a biofilme. O presente estudo tem por objetivo avaliar e comparar o efeito de antifúngicos sintéticos (Fluconazol e Anfotericina B) e bioativos vegetais (Guttiferona A e 7-Epiclusianona) em biofilmes e suspensões celulares de Candida spp. isoladas de ambiente hospitalar. Foram coletadas 180 amostras, havendo uma frequência de distribuição de 17,8% de isolados de Candida spp., provenientes principalmente das mãos de profissionais (28% das amostras), locais de preparo e armazenamento de medicamentos (16%) e leitos de pacientes (16%). As espécies mais isoladas foram do complexo C. parapsilosis (59%), C. tropicalis (19%), consideradas as espécies mais associadas à candidemia na América Latina, e C. guilliermondii (13%), associada a fenômenos de resistência cruzada e multirrestistência, não sendo isolada amostra de C. albicans. Todas as amostras isoladas foram capazes de produzir biofilme, com biofilmes metabolicamente ativos. Biofilmes do complexo C. parapsilosis e C. tropicalis apresentaram menor atividade metabólica em relação aos isolados de C. famata, C. glabrata e C. guilliermondii. Os isolados não apresentaram resistência a Fluconazol e Anfotericina B e os bioativos demonstraram atividade. Os resultados dos testes de sensibilidade em biofilmes demonstram um grande aumento dos valores de IC quando comparados aos valores obtidos para células planctônicas, variando de 256 a >2.048 vezes no caso do Fluconazol e de 16 a 256 vezes para Anfotericina B. Os bioativos vegetais estudados apresentaram boa atividade sobre biofilmes, especialmente a Guttiferona-A. Os resultados demonstram a importância da implementação de técnicas padronizadas de ensaio de sensibilidade antifúngica em biofilmes e a importância da pesquisa de contaminação ambiental, auxiliando no estabelecimento da cadeia epidemiológica de infecções em ambientes hospitalares. / Invasive fungal infections are associated with high morbidity and mortality, mainly caused by Candida. The formation of biofilms has been considered one of the main factors associated with the virulence of these strains, primarily due to increased resistance to antimicrobial therapies presented by sessile cells compared to planktonic cells. It is necessary to select the effective antifungal therapy for infections associated with biofilm. The present study aims to evaluate and compare the effect of synthetic antifungals (Fluconazole and Amphotericin B) and plant bioactives (Guttiferone-A and 7-Epiclusianone) in biofilms and cell suspensions of Candida spp. isolated from the hospital environment. 180 samples were collected, with an incidence of 17.8% of isolates of Candida spp., isolated mainly from the hands of professionals (28% of samples), drug storage and preparation places (16%) and beds of patients (16%). The isolated Candida species were mainly Candida parapsilosis complex (59%) and C. tropicalis (19%), the species considered most associated with candidemia in Latin America, and C. guilliermondii (13%), associated with cross-resistance, not being isolated any sample of C. albicans. All isolates were able to produce biofilm, with metabolically active biofilms. The biofilms of C. parapsilosis complex and C. tropicalis showed lower metabolic activity in relation to isolates of C. famata, C. glabrata and C. guilliermondii. The isolates showed no resistance to Fluconazole and Amphotericin B and bioactives demonstrated activity. Results of Susceptibility Tests in biofilms showed a large increase in IC in biofilms for all tested substances. The plant bioactives studied showed good activity against biofilms, especially Guttiferone-A. The results demonstrate the importance of implementing standardized techniques for antifungal susceptibility testing in biofilms and of environmental contamination research, helping to establish the epidemiological chain of infections in hospital environments.

O uso indiscriminado de antimicrobianos pode estar associado ao fenômeno da resistência microbiana, levando ao insucesso no tratamento das infecções e impulsionando a busca por novas alternativas terapêuticas, dentre elas, os bioativos obtidos a partir de fontes vegetais. Foi avaliada a atividade antimicrobiana de extratos hidroetanólicos de plantas sobre bactérias Gram positiva, Gram negativa, leveduras, Mycobacterium tuberculosis H37 e Mycobacterium bovis pela técnica de difusão em agar e microdiluição em caldo. Dentre os extratos avaliados pelo método de difusão em agar, o extrato de Bidens pilosa folha apresentou a mais expressiva média de halos de inibição de crescimento frente aos microrganismos utilizados, seguido por Bidens pilosa flor, E. pyriformis folha, M. cauliflora folha e E. pyriformis semente que apresentaram estatisticamente a mesma média de formação de halos inibitórios sobre bactérias Gram positivas, Gram negativas e leveduras. Os extratos de Heliconia rostrata não apresentaram atividade. Mycobacterium tuberculosis H37 e Mycobacterium bovis mostraram-se resistentes a todos os extratos. Dos microrganismos avaliados, as bactérias Gram positivas M. luteus e S. aureus apresentaram o mesmo perfil de sensibilidade (p>0.05). As bactérias Gram negativas E. coli, E. cloacae, S. marcescens e P. aeruginosa também apresentaram o mesmo perfil de sensibilidade frente aos extratos (p>0.05). O perfil de senbilidade dos fungos C. albicans e S. cerevisiae foram comparáveis entre si e entre as bactérias Gram positivas B. subtilis, E. faecalis e Gram negativa S. typhimurium (p>0.05). Os extratos que apresentaram ação inibitória através do ensaio de microdiluição em caldo foram os mesmos extratos ativos no teste de difusão em agar. A avaliação da citotoxicidade foi realizada sobre células C6-36 de larvas de mosquito Aedes albopictus. Os extratos de caule e flor de Heliconia rostrata, folha e caule de Plinia cauliflora, semente de Anonna crassiflora e caule, flor e raiz de Bidens pilosa não apresentaram toxicidade nas concentrações avaliadas. Os maiores índices de seletividade foram apresentados pelos extratos de A. crassiflora caule e B. pilosa flor para S. aureus, apresentando potencial para estudos como futuros candidatos a fármacos. Dos microrganismos avaliados, as bactérias Gram positivas M. luteus e S. aureus apresentaram o mesmo perfil de sensibilidade (p>0.05). Dos microrganismos que apresentaram alguma sensibilidade a qualquer um dos extratos, M. bovis, P. aeruginosa, S. marcescens, E. cloacae e E. coli foram estatisticamente, igualmente os menos sensíveis. Apenas os extratos de B. pilosa folha apresentou igualdade, estatisticamente significativa, da média de efetividade inibitória quando comparado ao controle positivo, a clorexidina / The indiscriminate use of antibiotics may be associated with the phenomenon of microbial resistance, leading to infections treatment failure and boosting the search for new therapeutic alternatives, among them, the bioactive obtained from plant sources. We evaluated the antimicrobial activity of hydroethanolic extracts of plants on Gram positive, Gram negative bacteria, yeasts, Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium bovis H37 through agar diffusion and broth microdilution techniques. Among the extracts evaluated through agar diffusion method, the leaf extract of Bidens pilosa showed the most significant average halos of growth inhibition against microorganisms used, followed by flower of Bidens pilosa leaf E. pyriformis, sheet M. cauliflora seed and E. pyriformis showed that statistically the same average formation of inhibitory halos on Gram positive bacteria, Gram negative bacteria and yeast. Extracts of Heliconia rostrata showed no activity. Mycobacterium bovis and Mycobacterium tuberculosis H37 were resistant to all extracts. Of the tested microorganisms, Gram positive bacteria M. luteus and S. aureus showed the same sensitivity profile (p> 0.05). Gram negative bacteria E. coli, E. cloacae, S. marcescens and P. aeruginosa also showed the same sensitivity profile compared to extracts (p> 0.05). The sensitivity profile of the fungi C. albicans and S. cerevisiae and were comparable between the Gram-positive B. subtilis, E. faecalis and Gram negative bacteria S. typhimurium (p> 0.05). The extracts which showed inhibitory action by microdilution sample test were the same active extracts as in agar diffusion test. The Cytotoxicity assessment was performed on cell C6-36 larvae of Aedes albopictus. The extracts of Heliconia rostrata’s stem and flower, Plinia cauliflora’s leaf and stem, crassiflora Annona’s seed and stem, Bidens pilosa's root and flower showed no toxicity at the evaluated concentrations. The highest selectivity were presented by stem extracts of A. crassiflora and Bloom B. pilosa as for S. aureus there is potential for studies on future drug candidates. Of the tested microorganisms, Gram positive bacteria M. luteus and S. aureus showed the same sensitivity profile (p> 0.05). The sensitivity profile of the fungi C. albicans and S. cerevisiae and were compared one another and to B. subtilis, E. faecalis Gram positive and S. typhimurium Gram negative bacteria (p> 0.05). Among the microorganisms which showed some sensitivity to any of the extracts, M. bovis, P. aeruginosa, S. marcescens, E. and E. cloacae coli were statistically also less sensitive. Only the leaf extracts of B. pilosa showed statistically significant equality of the average inhibitory effectiveness when compared to the positive control and chlorhexidine

Atualmente, S. aureus meticilina resistente (MRSA) é o mais importante patógeno nosocomial, devido à sua multirresistência aos antimicrobianos disponíveis, o que direciona esforços na busca de novas alternativas terapêuticas. Neste estudo foi avaliada a ação antimicrobiana de extratos vegetais contra isolados MRSA do ambiente aéreo, identificados previamente. Os extratos de Annona crassiflora, Bidens pilosa, Eugenia pyriformis, Heliconia rostrata e Plinia cauliflora foram obtidos por maceração em álcool etílico a 70%, submetidos à rota evaporador e liofilizados. Estes foram testados quanto à ação antimicrobiana pela técnica de difusão em ágar. Posteriormente, realizou-se a concentração inibitória mínima (CIM) pela técnica de microdiluição em caldo. Testes de toxicidade em cultura celular e análise fitoquímica dos extratos complementaram a análise, onde a maioria dos extratos apresentou baixa toxicidade, presença de alcalóides, flavonóides, taninos e saponinas. Os extratos da folha, casca do fruto e caule de Plinia cauliflora, caule e folha de Eugenia pyriformis, caule, polpa, casca do fruto e folha de Annona crassiflora e flor, caule e folha de Bidens pilosa foram efetivos contra as amostras multirresistentes analisadas, sendo que o extrato de Bidens pilosa folha apresentou a melhor atividade antibacteriana in vitro por ambos os métodos avaliados. / Currently S. aureus methicillin resistant (MRSA) is the most important nosocomial pathogen due to multidrug resistance to available antimicrobials, which directs efforts in the search for new therapies. In this study we evaluated the in vitro antimicrobial activity of plant extracts against ambient aerial isolates of MRSA previously identified. The hydroethanolic extracts of Annona crassiflora, Bidens pilosa, Eugenia pyriformis, Heliconia rostrata and Plinia cauliflora were obtained by steeping in ethyl alcohol, 70%, evaporated and lyophilized. The antimicrobial activity was evaluated by agar diffusion and determination of minimum inhibitory concentration (MIC) by microdilution broth. Toxicity testing in cell culture and phytochemical analysis complemented the analysis where most of the extracts showed low toxicity, presence of alkaloids, flavonoids, tannins and saponins. The extracts of leaf, stem and fruit rind of Plinia cauliflora, stem and leaf of Eugenia pyriformis, stem, pulp, fruit rind and leaf of Annona crassiflora and flower, stem and leaf of Bidens pilosa were effective against multidrug-resistant samples analyzed being that the leaf extract of Bidens pilosa showed the best in vitro anti-MRSA activity by both methods evaluated. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

Atualmente, fungos endófitos são alvos de estudo para descoberta de substâncias bioativas com interesse na agricultura, no controle de pragas, na descoberta de novos ativos para uso na terapêutica, entre outros. Assim como toda planta, o Theobroma cacao L. serve de habitat para diversos fungos endófitos que vivem no interior dos tecidos das plantas numa relação de simbiose, mutualismo ou parasitária. No total de 37 linhagens de fungos endófitos isolados do Theobroma cacao L. foram cultivados in vitro e seus extratos brutos foram analisados, sendo que um fungo foi selecionado para investigação das atividades antimicrobiana, antioxidante e antiproliferativa. O fungo endófito Microsphaeropsis sp. CML 1765 apresentou um crescimento e estabilidade satisfatória além de boa atividade antimicrobiana contra S. aureus. Os resultados da concentração inibitória mínima (CIM) do extrato da fermentação de Microsphaeropsis sp ficou entre 62,5 e 125 µg/mL. A análise em CG/EM identificou a composição química do extrato de Microsphaeropsis sp mostrando ser, essencialmente, constituído de ácidos graxos e esteróides. A atividade antioxidante foi determinada através do teste de DPPH e não foi expressiva, possivelmente por não conter compostos fenólicos em sua composição química. A atividade antiproliferativa foi testada frente a nove linhagens de células tumorais e o extrato de Microsphaeropsis sp apresentou seletividade contra células de melanoma (UACC-62) atingindo o TGI (inibição total do crescimento), na concentração de 4 µg/mL. Todas as linhagens atingiram o GI50 (atividade citostática) e LC50 (atividade citocida) nas concentrações de 25 µg/mL e 250 µg/mL, respectivamente. A biodiversidade da natureza abre caminhos para muitos estudos sobre fungos endófitos que são fontes naturais pouco exploradas de metabólitos bioativos, com potencial terapêutico desconhecido. / Nowadays, there is an increasing interest in endophytics fungi research as a source oh bioactive substances that could be applied in agriculture for pest control, and even for the discovery of new drugs. Like any plant, Theobroma cacao L. serves as habitat for diverse fungal endophytes that live within plant tissues in a symbiotic, mutualistic or parasitic. A total of 37 strains of fungal endophytes isolated in Theobroma cacao L. were cultured in vitro and their extracts were analyzed, and a fungus was selected for investigation of the antimicrobial, antioxidant and antiproliferative activities. The fungus endophyte Microsphaeropsis sp. CML 1765 presented a satisfactory growth and stability in addition to good antimicrobial activity against S. aureus. The results of minimum inhibitory concentration (MIC) of the extract from fermented Microsphaeropsis sp were between 62.5 and 125 µg/mL. The chemical composition analysis of the extracts was carried by CG/MS and allowed the identification of fatty acids and steroids as main components. The antioxidant activity was determined using the DPPH test and was not significant, possibly because it contains phenolic compounds in their chemical composition. The antiproliferative activity was tested against nine cancer cell lines and extract Microsphaeropsis sp. showed selectivity against melanoma cells (UACC-62) reaching the TGI (total growth inhibition) at a concentration of 4 µg/mL. The extracts was cytostatic and cytocide for all cell lines at concentration of 25 µg/mL and 250 µg/mL, respectively. The diversity of nature opens the way for studies on fungal endophytes that are natural sources of unexplored bioactive metabolites with therapeutic potential unknown.

A resistência bacteriana emergiu como importante problema de saúde pública no mundo. Nesta pesquisa, a distribuição das espécies e a evolução da sensibilidade aos antibióticos entre isolados clínicos obtidos em um hospital terciário foram analisadas no período de 2007 a 2012. As bactérias isoladas foram identificadas por análises bioquímicas convencionais. Segundo as recomendações do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) compatíveis ao ano do processamento microbiológico, o perfil de sensibilidade foi determinado pelo método de disco difusão, entretanto para a sensibilidade a vancomicina utilizou-se a concentração inibitória mínima (CIM). Durante o período da pesquisa totalizou-se 4.464 resultados de culturas distribuídos em 2007 (865), 2008 (981), 2009 (485), 2010 (539), 2011 (704) e 2012 (890). Com relação aos cocos Gram-positivos e as enterobactérias, Staphylococcus aureus e Eschericia coli foram as bactérias mais frequentemente isoladas, respectivamente. Dos antibióticos da classe dos beta-lactâmicos, piperacilina + tazobactam e aztreonam mostraram os melhores resultados de atividade antibacteriana. Todas as cepas isoladas de enterobactérias foram sensíveis aos carbapenêmicos. As cepas de Pseudomonas aeruginosa foram mais sensíveis ao imipenem do que ao meropenen, no entanto a redução dos perfis de sensibilidade foi evidenciada para ambos os antibióticos: imipenem (69,6% para 41,7%) e meropenem (63,3% para 25,0%). Todas Burkloderoderia cepacea e Acinetobacter baumanii demonstraram resistência ao meropenem, entretanto as cepas de Acinetobacter iuwoffi foram sensíveis aos carbapenêmicos. Aumentos semelhantes nos perfis de sensibilidade das cepas de Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e Klebsiella oxytoca (70% para 86,7%) foram observados para ciprofloxacina e levofloxacina. Da classe dos aminoglicosídeos, a amicacina mostrou melhor atividade antibacteriana do que a gentamicina. Nas amostras analisadas deste hospital não houve ocorrência de Enterococcus spp. resistente a vancomicina (VRE). Ainda, todas as cepas de cocos Gram-positivos foram sensíveis a vancomicina e teicoplamina. No geral os antibióticos apresentaram resultados preocupantes, uma vez que para as bactérias reconhecidas nos cenários das infecções hospitalares nenhuma foi sensível 100% a todas as classes de antibióticos. A situação da sensibilidade microbiana aos antibióticos é caótica tendo cada vez mais limitada a sua utilização na terapêutica / Bacterial resistance has emerged as an important public health problem in the world. In this study, the distribution of species and the evolution of antibiotic susceptibility among clinical isolates in a tertiary hospital were analyzed in the period from 2007 to 2012. Bacterial isolates were identified by conventional biochemical analyzes. According to the recommendations of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) supported a year of microbiological processing, the sensitivity was determined by the disk diffusion method, however for sensitivity to vancomycin was used the minimum inhibitory concentration (MIC). During the research period, 4,464 culture results were obtained and distributed in 2007 (865), 2008 (981), 2009 (485), 2010 (539), 2011 (704) and 2012 (890). With respect to Gram-positive cocci and Enterobacteriaceae, Staphylococcus aureus and Escherichia coli were the most frequently isolated bacteria, respectively. From beta-lactams class, piperacillin + tazobactam and aztreonam showed the best results of antibacterial activity. All isolated strains of Enterobacteriaceae were susceptible to carbapenems. Pseudomonas aeruginosa strains were more sensitive to imipenem than the meropenen, however reducing the sensitivity profile was observed for both antibiotics imipenem (69.6% to 41.7%) and meropenem (63.3% for 25.0%). All Burkloderoderia cepacia and Acinetobacter baumannii were resistant to meropenem, however Acinetobacter iuwoffi strains were susceptible to carbapenems. Similar increases in the susceptibility of Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae and Klebsiella oxytoca strains (70% to 86.7%) were observed for ciprofloxacin and levofloxacin. From aminoglycosides class, amikacin showed better antibacterial activity than gentamicin. In the samples analyzed in this hospital there was no occurrence of Enterococcus spp. resistant to vancomycin (VRE). Furthermore, all strains of Gram-positive cocci were susceptible to vancomycin and teicoplanin. Overall antibiotics showed worrying results, since none was recognized for bacteria in the nosocomial infection scenarios 100% sensitive to all classes of antibiotics. The situation of microbial sensitivity to antibiotics is becoming chaotic having limited their use in therapy

Introdução: Pneumonias causadas por Staphylococcus aureus meticilina resistentes (Methicillin resistant Staphylococcus aureus - MRSA) estão associadas com uma alta mortalidade em pacientes internados em Centros de Terapia Intensiva (CTI). Não é incomum que ocorra falha no tratamento de pneumonia por MRSA com vancomicina. Alguns estudos têm mostrado que há uma relação entre mortalidade em infecções por MRSA e concentrações inibitórias mínimas (CIM) elevadas para vancomicina por Etest®, apesar dos isolados serem sensíveis à vancomicina (CIM ≤2μg/mL), conforme o Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Objetivos: O objetivo deste estudo foi avaliar as CIMs para vancomicina em pacientes com diagnóstico de pneumonia por MRSA, descrever a relação entre a CIM da vancomicina obtido por Etest® e microdiluição em caldo com mortalidade em 30 dias em pacientes com pneumonia por MRSA internados em um hospital terciário, acadêmico, no sul do Brasil. Métodos: Estudo prospectivo de coorte. Foram incluídos todos os pacientes com pneumonia adquirida no hospital (hospital adquired pneumonia - HAP) e pneumonia associada à ventilação (ventilator associated pneumonia - VAP) por MRSA entre Junho de 2009 e Dezembro de 2011. A CIM da vancomicina do primeiro isolado do trato respiratório foi determinado por Etest® e microdiluição em caldo. As variáveis selecionadas para serem analisadas incluíram idade, sexo, comorbidades, dosagem sérica de vancomicina, escore APACHE II (Acute Physiological and Chronic Health Evaluation II) e a presença do accessory gene regulator II (agr II). O desfecho principal foi morte em 30 dias. Resultados: Foram incluídos 85 pacientes. A mortalidade em 30 dias foi de 42,4%. Em sessenta e oito pacientes (80,1%) as CIMs da vancomicina obtidos por Etest® foram menores ou iguais a 1,0μg/mL, enquanto todas as CIMs (N=85) obtidas por microdiluição em caldo foram ≤1,0μg/mL. Não houve correlação entre as CIMs por Etest® e microdiluição em caldo com morte em 30 dias. Quarenta e seis isolados de MRSA (54,1%) foram positivos para o locus agr II. A média da vancomicina sérica foi 20,7μg/mL (12,0 – 29,0) e a média do escore APACHE II foi 23,0 (17,5 – 29,0). O escore APACHE II foi relacionado com mortalidade em 30 dias. Conclusões: As CIMs da vancomicina obtidas por Etest® e microdiluição em caldo não foram associadas com altos níveis de mortalidade em pacientes com pneumonia grave por MRSA. / Background: Pneumonias due to methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) are associated with significant mortality in Intensive Care Units (ICU) patients. Vancomycin treatment failure in MRSA pneumonia patients is not uncommon. Some reports found a link between high mortality in MRSA infections and higher vancomycin minimum inhibitory concentrations (MICs) by Etest®, despite the susceptibility of the isolates (MIC ≤2,0μg/mL), according to the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Objectives: The purpose of this study was evaluate vancomycin MICs in patients with MRSA pneumonia, describe the relationship between vancomycin MIC generated by Etest® and broth microdilution with 30-day mortality in MRSA pneumonia patients. Methods: We conducted a prospective cohort study. All patients with MRSA hospital acquired pneumonia (HAP) and ventilator-associated pneumonia (VAP) admitted in ICU between June 2009 and December 2011 were included. Vancomycin MIC for the first isolate of the respiratory tract was determined by Etest® and broth microdilution. The variables selected for the analysis included age, sex, comorbid conditions, vancomycin serum trough concentration, APACHE II (Acute Physiological and Chronic Health Evaluation II) score and the presence of the accessory gene regulator II (agr II). The primary outcome was mortality at 30-day. Results: Eithy five patients were included. All case mortality at the 30-day was 42.4%. Sixty eight of the patients (80.1%) of the vancomycin MICs generated by Etest® were equal or below 1.0μg/mL. While all MICs generated by broth microdilution were ≤1.0μg/mL. MICs generated by Etest® and broth microdilution were not associated with 30-day mortality. Forty six isolates of MRSA (54.1%) from patients were positive for agr II. The median serum vancomycin was 20.7μg/mL (12.0 – 29.0) and the median APACHE II score was 23.0 (17.5 – 29.0). The APACHE II score was related to 30-day mortality. Conclusions: Vancomycin MICs by Etest® and broth microdilution were not associated with higher mortality leves in patients with severe MRSA pneumonia.