Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AndreaDM_DISSERT.pdf: 1136289 bytes, checksum: 4971fd9b2aab3f08935061c736892689 (MD5) Previous issue date: 2010-03-31 / Toxoplasmosis is one zoonosis caused by Toxoplasma gondii protozoan. Goats, amongst the production animals, are one of the species most susceptible to this parasite, being one them main involved agents in ovine and goat abortions, determining great economic losses and implications for public health, since the presence it parasite in the products of goat origin, consist in one of the main sources of infection for the man. In this study 244 blood samples in 8 farms situated in 4 cities from the Sert?o do Cabugi region, Rio Grande do Norte State, northeast of Brazil and, tested by ELISA assay. The results had shown a prevalence of 47.13% for anti- T. gondii antibodies and a significant association between positivity and variable evaluated as age, locality and property. The IgG avidity assay evaluated in 115 positive samples was carried to discriminate acute and chronic infection. Twelve samples (10.4%) had presented antibodies of low avidity while 103 (89.6%) presented high avidity antibodies; indicating that most of the animals was precocious exposure to the parasite. Significant difference was verified only for the variable sex. We also evaluate the capacity of recombinant adenoviruses codifying SAG1, SAG2, SAG3 and CMV in inducing activation of specific immune response in goat. These 109 animals received 109 pfu of the AdSAG1, AdSAG2, AdSAG3, AdCMV or PBS in vaccine protocol with 3 immunizations. Serum samples of the each animal, before and after mmunization, had been submitted to the ELISA. The results demonstrate that the immunizations had induced the production of IgG antibodies specific against T. gondii proteins / A toxoplasmose ? uma zoonose causada pelo protozo?rio Toxoplasma gondii. Os caprinos, dentre os animais de produ??o, s?o uma das esp?cies mais suscet?veis a este parasito, sendo um dos principais agentes envolvidos no abortamento de ovinos e caprinos, determinando grandes perdas econ?micas e tendo implica??es para sa?de p?blica, j? que a presen?a do parasita nos produtos de origem caprina, constituem-se em uma das principais fontes de infec??o para o homem. Neste estudo foram coletadas 244 amostras de sangue em 8 fazendas situadas em 4 munic?pios da regi?o do Sert?o do Cabugi, Estado do Rio Grande do Norte, regi?o Nordeste do Brasil e testadas atrav?s do Ensaio Imunoenzim?tico (ELISA). Os resultados obtidos mostraram uma preval?ncia de 47,13% para anticorpos anti-T. gondii e uma associa??o significativa entre positividade e as vari?veis avaliadas tais como idade, localidade e propriedade. Foi realizado o ensaio IgG de avidez em 115 amostras positivas com o intuito de discriminar infec??o aguda e cr?nica. Doze amostras (10,4%) apresentaram anticorpos de baixa avidez enquanto 103 (89,6%) anticorpos de alta avidez; indicando que a maior parte dos animais foi exposto ao parasita precocemente. Foi verificada diferen?a estat?stica significativa apenas para a vari?vel sexo. Avaliamos tamb?m a capacidade de adenov?rus recombinantes codificando SAG1, SAG2, SAG3 e CMV em induzir ativa??o de resposta imune em caprinos. Estes animais receberam 109 pfu de AdSAG1, AdSAG2, AdSAG3, AdCMV ou PBS em protocolo vacinal com 3 imuniza??es. Amostras de soro obtidas dos animais, antes e ap?s cada imuniza??o, foram submetidas ao ELISA. Os resultados demonstram que as imuniza??es induziram a produ??o anticorpos IgG espec?ficos contra as prote?nas de T. gondii

Orientador: Mary Marcondes / Banca: Wagner Luís Ferreira / Banca: Raimundo Souza Lopes / Resumo: O objetivo do presente estudo foi determinar em uma população de 302 gatos provenientes de área endêmica para leishmaniose visceral, a prevalência da infecção por Leishmania spp. e a presença de coinfecção pelo Toxoplasma gondii, vírus da imunodeficiência felina (FIV) e vírus da leucemia felina (FeLV). Foram evidenciadas formas amastigotas de Leishmania spp. em 9,93% (30/302) dos animais. A prevalência da leishmaniose observada por meio dos métodos de ELISA-proteína A, ELISA-IgG ou exame parasitológico direto foi de 21,85% (66/302), sendo 13,64% (9/66) positivos no exame parasitológico direto e sororeagentes nas técnicas de ELISA indireto. Doze animais (70,59%) foram sororeagentes para o FIV e a Leishmania spp., enquanto 17 (25,76%) apresentaram anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Leishmania spp. e cinco (71,43%) apresentavam infecção pelos três agentes. Não foi observada coinfecção entre Leishmania spp. e o FeLV. Houve associação estatisticamente significante entre a coinfecção por Leishmania spp. e pelo vírus da imunodeficiência felina, bem como entre a presença de Leishmania spp., do vírus da imunodeficiência felina e do Toxoplasma gondii. A sensibilidade e a especificidade dos métodos de ELISA-proteína A, ELISA-IgG e reação de imunofluorescência indireta para o diagnóstico de leishmaniose felina foram de 56,6% e 89,47%, 55,55% e 90,96% e 54,55% e 96,80%, respectivamente. As concordâncias entre a RIFI e as técnicas de ELISA-proteína A e ELISA-IgG foram fracas. No entanto, houve boa concordância entre as duas últimas técnicas. O presente estudo verificou que gatos residentes em área endêmica para leishmaniose visceral são predispostos à coinfecção por Leishmania spp. e vírus da imunodeficiência felina, e que parte deles desenvolvem sintomas inespecíficos e devem ser investigados em um diagnóstico diferencial / Abstract:The aim of this study was to determine, in a population of 302 cats from an endemic area for visceral leishmaniasis, the prevalence of the infection by Leishmania spp. and the presence of co-infection by Toxoplasma gondii, feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV). Amastigote forms of Leishmania spp were evidenced in 9.93% (30/302) of the animals. Prevalence of leishmaniasis by ELISA-prot A, ELISA-IgG or direct parasitological examination was 21.85% (66/302), being 13.64% (9/66) positive in both direct parasitological examination and ELISA. Twelve animals (70.59%) were seroreagent for FIV and Leishmania spp., while 17 (25.76%) showed antibodies against Toxoplasma gondii and Leishmania spp. and five (71.43%) showed antibodies against those three agents. Co-infection was not observed between Leishmania spp. and FeLV. There was statistically significant correlation between the co-infection by Leishmania spp. and by the immunodeficiency virus, as well as among the present of Leishmania spp, feline immunodeficiency virus and Toxoplasma gondii. The susceptibility and the specificities of (the methods) ELISA-prot A, ELISA-IgG and reaction of indirect immunofluorescence for the diagnosis of feline leishmaniasis were 56.6% and 89.47%, 55.55% and 90.96% and 54.55% and 96.80%, respectively. The agreements between RIFI and ELISA-prot A and ELISA-IgG techniques were weak. However, there was a good agreement between the last two techniques. This study verified that cats from endemic areas for visceral leishmaniasis are predisposed to co-infection by Leishmania spp. and feline immunodeficiency virus, and that part of them developed nonspecific symptoms and should be investigated in a differential diagnosis / Mestre

Submitted by Simone Souza (simonecgsouza@hotmail.com) on 2018-05-15T15:58:32Z No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Deise Cristine Schroder.pdf: 1269604 bytes, checksum: b4aaf38792fb2d963d422ec5bfeabadf (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2018-05-24T16:46:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Deise Cristine Schroder.pdf: 1269604 bytes, checksum: b4aaf38792fb2d963d422ec5bfeabadf (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-24T16:46:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Deise Cristine Schroder.pdf: 1269604 bytes, checksum: b4aaf38792fb2d963d422ec5bfeabadf (MD5) Previous issue date: 2015-03-13 / CAPES / Objetivou-se avaliar a eficácia do firocoxib em impedir a quebra da barreira hematoaquosa em gatos saudáveis e naqueles com sorologia positiva para toxoplasmose. Avaliaram-se trinta e dois gatos divididos em quatro grupos (n=8). Os grupos saudável controle (SC) e toxoplasmose controle (TC) foram compostos respectivamente por gatos saudáveis e com sorologia positiva para toxoplasmose, enquanto os grupos saudável firocoxib (SF) e toxoplasmose firocoxib (TF) foram compostos respectivamente por gatos saudáveis e com sorologia positiva para toxoplasmose que receberam tratamento prévio com firocoxib (5 mg/kg), por via oral, 24 e uma hora antes da indução da uveíte experimental, através da paracentese da câmara anterior. Após indução anestésica colheu-se 0,2 mL de humor aquoso basal. Decorrido uma hora, realizou-se nova paracentese para colheita de 0,2 mL de humor aquoso inflamado. As amostras de humor aquoso foram acondicionadas a -80°C para posterior mensuração dos níveis de prostaglandina E2 (PGE2) e proteínas totais. No humor aquoso dos grupos TC e TF, realizou-se ainda, titulação para anticorpos IgG anti-Toxoplasma gondii. Mediante análise das amostras, observou-se aumento significativo dos níveis de PGE2 e proteína total do humor aquoso basal para o inflamado (p<0,05). No humor aquoso basal, os níveis de PGE2 no grupo TC, assim como os níveis de proteína total nos grupos SF e TF foram significativamente superiores aos demais (p<0,05). Os grupos TC e TF não apresentaram títulos IgG anti-Toxoplasma gondii no humor aquoso basal. No humor aquoso inflamado, os níveis de PGE2 e proteína total, bem como os títulos IgG anti-Toxoplasma gondii, não diferiram significativamente entre os grupos (p>0,05). Admite-se que gatos com títulos de anticorpos IgG anti-Toxoplasma gondii possuem níveis de PGE2 no humor aquoso basal superiores aos apresentados por indivíduos saudáveis. Entretanto, a concentração de PGE2 no humor aquoso destes indivíduos não é suficiente para ensejar a quebra da barreira hematoaquosa e causar uveíte anterior. O firocoxib não é capaz de evitar a quebra da barreira hematoaquosa em gatos saudáveis e naqueles soropositivos para toxoplasmose. / The objective was to evaluate the efficacy of firocoxib in preventing the blood-aqueous barrier breakdown in healthy cats and those with positive serology for toxoplasmosis. Thirty-two cats divided into four groups (n=8/each). The healthy control (HC) and toxoplasmosis control (TC) groups, were composed respectively of healthy cats and cats with positive serology for toxoplasmosis, while healthy firocoxib (HF) and toxoplasmosis firocoxib (TF) groups, were composed respectively of healthy cats and cats with positive serology for toxoplasmosis who had received previous treatment with orally firocoxib (5 mg/kg), twenty-four and one hour before the experimental induction of uveitis. Under anesthesia 0.2 mL of baseline aqueous humor was collected via aqueocentesis. One hour later, the same procedure was repeated and inflamed aqueous samples were collected. Aqueous samples were conditioned at -80°C for subsequent measurement of the levels of prostaglandin E2 (PGE2) and total proteins. In the aqueous samples of TC and TF groups, anti-Toxoplasma gondii IgG specific antibodies were titrated. PGE2 and total protein levels increased significantly in inflamed aqueous humor in comparison to baseline aqueous samples (p<0.05). At baseline aqueous humor, levels of PGE2 in TC group and total protein in HF and TF groups were increased significantly, in comparison with the other groups (p<0.05). Anti-Toxoplasma gondii IgG specific antibodies were found only in inflamed aqueous humor, and aqueous titers did not change significantly between TC and TF (p=0.1051). Although we have observed that aqueous humor PGE2 levels were significantly higher in seropositive cats in baseline aqueous humor, such increase was not able to break the blood-aqueous barrier and cause anterior uveitis. Firocoxib did not prevent intraocular inflammation after aqueocentesis, in healthy and toxoplasmosis-seropositive cats.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:37:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 YwllianeRSM_DISSERT_noPW.pdf: 1856202 bytes, checksum: 7b03b226d479c14a9f1c59d7a70f7f2a (MD5) Previous issue date: 2012-04-26 / The protozoan parasite Toxoplasma gondii transforms the innate aversion of rats for cat urine into a fatal attraction, that increases the likelihood of the parasite completing its life cycle in the cat s intestine. The neural circuits implicated in innate fear, anxiety, and learned fear all overlap considerably, raising the possibility, that T. gondii may disrupt all of these nonspecifically. In this study, we evaluated immunoreactivity for tyrosine hydroxylase (TH) in areas associated with innate fear of infected male swiss mice. The latent Toxoplasma infection converted the aversion of mice to feline odors into attraction. This loss of fear is remarkably specific, as demonstrated by Vyas et al (2007), because infection did not diminish learned fear, anxiety-like behavior, olfaction, or nonaversive learning. However, the neurochemical mechanism related to alterations in innate fear due to T. gondii infection remains poorly studied. 20 mice were inoculated with bradyzoites (25 cysts) from a Toxoplasma gondii (Me-49 strain). The brains were removed after 60 days, sectioned and processed for TH immunohistochemistry. The correlation between the amount of cysts per area and the densitometric analysis of neurotransmitter reactivity was low in the areas implicated in innate fear of infected animals, when comparated with noninfected controls / O protozo?rio Toxoplasma gondii transforma a avers?o inata de ratos ? urina de gato em atra??o. Essa mudan?a pode aumentar a probabilidade de transmiss?o do parasito para o seu hospedeiro definitivo, os felinos, onde pode se reproduzir sexualmente. Os circuitos neurais envolvidos no medo inato, ansiedade ou medo aprendido se sobrep?em consideravelmente, aumentando a possibilidade de que o T. gondii possa interferir com todos de maneira n?o-espec?fica. Neste estudo, foi avaliada a imunorreatividade para tirosina hidroxilase (TH) em ?reas dopamin?rgicas relacionadas com o medo inato em camundongos sui?os machos infectados. A infec??o latente pelo parasita inverteu a avers?o aos odores de felinos. Esta modifica??o pode estar relacionada com a presen?a dos cistos na am?gdala, pois a infec??o n?o diminui medo aprendido, a ansiedade, o olfato, ou a aprendizagem n?o-aversiva. No entanto, o mecanismo neuroqu?mico relacionado a estas altera??es no medo inato durante a infec??o permanece pouco estudado. Os animais foram infectados com bradizo?tos (25 cistos) da cepa ME-49 de T. gondii. Os c?rebros foram removidos ap?s 60 dias, seccionados e processados para revelar a reatividade da enzima TH. Os cistos foram contados nas ?reas associadas ao circuito dopamin?rgico, bem como em regi?es relacionadas ao medo inato. A contagem por ?rea e a an?lise densitom?trica mostrou baixa rela??o entre a presen?a de cistos e a reatividade para TH regi?es de interesse nos animais infectados, quando comparados aos controles n?o-infectados

Nous avons sélectionné des patients atteints d’une TO biologiquement confirmée et avons exploré les différences cliniques et biologiques de deux groupes de patients, l’un en France, l’autre en Colombie. Dans notre hypothèse de départ, les souches sud-américaines, seraient plus virulentes et elles pourraient jouer un rôle crucial dans la sévérité et l’évolution de la TO. Nous avons constaté, chez les patients colombiens, de plus grandes lésions de la rétine et une plus grande proportion de lésions maculaires, dans un contexte inflammatoire vitréen plus sévère. Le cytoquinome oculaire confirme une forte réponse inflammatoire chez les patients européens centrée sur l’IL-17, mais cette réponse Th17 est absente chez les sujets colombiens. L’IL-6 et l’IL-13 sont au contraire fortement augmentées chez ces derniers. Nous avons également démontré que certaines cytokines étaient associées à certaines caractéristiques cliniques comme la sévérité de l’inflammation ou la récurrence. Des travaux préliminaires nous ont permis de débuter une modélisation de ces affactions oculaires en employant une souche de type II et une souche atypique de T. gondii. Nous avons aussi évalué la possibilité d’effectuer des traitements ciblés en intraoculaires par transfection in vivo. Conclusion: Nous avons constaté des différences cliniques et biologiques entre les patients colombien et français. Il semble y avoir une régulation souche dépendante de la production d’IFN-y et d’IL-17. Ces différences pourraient contribuer à expliquer la plus grande sévérité des toxoplasmoses oculaires en Colombie. En se basant sur nos résultats nous pouvons envisager d’explorer des traitements immunomodulateurs plus ciblés. / Ocular involvement, mainly retinochoroiditis, is one of the most severe sequelae of Toxoplasma gondii infection. However, the pathophysiological mechanisms of retinal destruction are poorly understood. Several studies suggested a more frequent and more severe ocular involvement in South American infections compared with European infections, probably due to different T. gondii strains (Type I/III, and atypical vs. Type II). To compare the clinical characteristics and biological and immunological responses in a single study and using the same parameters, in Colombian and French patients with active ocular toxoplasmosis (OT), as well as to study the local cytokinome in aqueous humor of these patients and correlate it with the clinical features. We prospectively collected and compared the clinical features of patients with active OT, evaluated at the Department of Ophthalmology of Strasbourg University Hospital and of Quindio University Health-Center. Results of biological tests in the collected aqueous humor samples were compared between Colombian and French patients: the pattern of protein recognition by immunoblotting (IB); the relative diagnostic sensitivities of IB and Polymerase Chain Reaction (PCR); and the cytokine and chemokine profiles. We found that Colombian and French OT patients presented not only different clinical characteristics but also biological characteristics, and that more virulent South American strains might be responsible for these differences, due to a disruption of the protective effects of interferon gamma (IFN-γ). Retinal lesions were 50% greater in Colombian patients. Macular localization leading to visual impairment was observed in 56% of Colombian cases, compared with 13% of French patients. Moreover, more vitreous inflammation and vasculitis were observed in Colombian patients. However, cytokine assays of the aqueous humor showed upregulation of inflammatory responses in European patients, notably IL-17, which we did not observe in Colombian patients. In a mouse model, intraocular tachyzoite injection of type II and atypical T. gondii strains resulted in differences in parasite multiplication and pathology similar to those observed in human infections. Production of IL-17 and other inflammatory markers, like IL-6, MCP-1, and the Th17 transcription factor ROR-γt was observed upon infection with the type II PRU strain, but was much less with the atypical LEF strain. In a previous work, the cytokine and mRNA patterns showed an upregulation of Th1 responses, notably IFN-γ production, in French patients, and anti-IL-17A antibody markedly diminished clinical damage and retinal inflammation, and also diminished parasite proliferation. In contrast to these previous findings in French patients, the cytokinome of aqueous humor of OT Colombian patients showed a downregulation of Th1 and Th17 responses and an upregulation of the Th2 response. Correlation between the clinical characteristics of Colombian patients with active OT and the levels of cytokines in aqueous humor (AH) showed that local production of cytokines differed between patients with OT, and particular cytokine levels were related to more severe clinical characteristics. Some cytokines were related to a higher number of recurrences.There are clinical and biological differences between Colombian and French patients with OT. There seem to be strain-specific differences in IL-17 and IFN-γ induction, which play an important role in the pathogenesis of this disease. These differences should be considered when thinking in perspectives of any possible immune-modulatory treatment in OT.

A manipulação comportamental é uma das principais correntes teóricas utilizadas para explicar as alterações comportamentais presentes em roedores parasitados pelo Toxoplasma gondii. Vários estudos propõem que o parasitismo pelo protozoário provoca mudanças metabólicas, imunológicas e neuropatológicas que possibilitam o desenvolvimento de mudanças no comportamento dos indivíduos infectados. Contudo, alguns fatores relacionados ao desenvolvimento da manipulação comportamental, ainda, não estão bem elucidados, entre eles, destaca-se o possível efeito do genótipo da cepa infectante nas modificações comportamentais. Neste trabalho, avaliamos o efeito da infecção crônica por cepas cistogênicas geneticamente distintas de T. gondii no comportamento de camundongos. Foram desenvolvidos modelos de infecção experimental com as cepas ME-49 (tipo II) e VEG (tipo III) em camundongos isogênicos BALB/c para avaliação da resposta imune humoral por ELISA, quantificação de parasitas em cistos cerebrais por PCR em tempo real e testes comportamentais como Esquiva Inibitória, Labirinto de Barnes, Labirinto em Cruz Elevado, Campo Aberto e Labirinto em Y visando, respectivamente, a avaliação da aprendizagem - memória, ansiedade, atividade locomotora e aversão ao odor do felino. Nossos dados mostram que camundongos infectados pela cepa VEG apresentaram redução mais acentuada da capacidade de recuperação de memória de longo prazo e alterações motoras mais proeminentes do que os animais infectados pela cepa ME-49. Na avaliação da aversão ao odor do felino, verificamos que a infecção pela cepa VEG induziu uma alteração comportamental mais acentuada no hospedeiro, nas fases iniciais da infecção, do que a infecção pela cepa ME-49, sendo este efeito observado tanto na presença de urina pura de gato como do aminoácido L-felinina. Nossos resultados sugerem que o genótipo da cepa infectante pode influenciar o desenvolvimento de alterações comportamentais em animais infectados pelo T. gondii, tornando o hospedeiro mais suscetível e exposto ao predador, sobretudo em infecções causadas por cepas do tipo III. / The behavioral manipulation is the main theoretical current used to explain the behavioral changes present in rodents parasitized by Toxoplasma gondii. Several studies suggest that protozoan parasitism causes metabolic, immunological and neuropathological changes that allow the development of changes in the behavior of infected individuals. However, some factors related to the development of behavioral manipulation are still not well understood, among them, the possible effect of the genotype of the infecting strain on behavioral modifications is highlighted. In this study, we evaluated the effect of chronic infection by genetically distinct cystogenic strains of T. gondii on the behavior of mice. Experimental models were developed with the ME-49 (type II) and VEG (type III) strains in isogenic BALB / c mice to evaluate the humoral immune response by ELISA, quantification of parasites in brain cysts by real-time PCR and behavioral tests as Passive Avoidance, Barnes Maze, Elevated Plus Maze, Open Field and Y - Maze aiming, respectively, evaluation of learning - memory, anxiety, locomotor activity and aversion to feline odor. Our data showed that mice infected with the VEG strain showed a more pronounced reduction in long-term memory retrieval capacity and more prominent motor alterations than the animals infected with the ME-49 strain. In the evaluation of feline odor aversion, we observed that infection by the VEG strain induced a more marked behavioral change in the host in the early stages of infection than the infection by the ME-49 strain, and this effect was observed both in the presence of urine pure cat as the amino acid L-felinine. Our results suggest that the genotype of the infecting strain may influence the development of behavioral changes in T. gondii infected animals, making the host more susceptible and exposed to the predator, especially in infections caused by type III strains.

A maioria dos estudos da interação parasito-hospedeiro tem focado na interação de um único patógeno. Porém, o hospedeiro em um ambiente natural é comumente exposto a múltiplos patógenos sequencialmente ou mesmo simultaneamente. Diversos estudos têm utilizado o modelo de Ligadura e perfuração do Ceco (CLP) para estudar a sepse, mas nenhum deles apresentou modelo de coinfecção ou estudo avaliando o papel de infecções prévias no desfecho da sepse polimicrobiana experimental. Neste contexto, nossa hipótese é de que a infecção crônica por parasitos poderia alterar o curso da resposta durante a sepse polimicrobiana. Para testar essa hipótese, animais C57BL/6 ou BALB/c foram infectados com 5 ou 20 cistos da cepa ME 49 de Toxoplasma gondii e 40 dias após a infecção os animais foram induzidos à sepse polimicrobiana. Em nosso estudo, 100% dos animais cronicamente infectados por T. gondii morreram num período de 24 horas após CLP. O mesmo não foi observado quando animais foram infectados cronicamente com os parasitos Leishmania major e Trypanosoma cruzi ou com o fungo Paracoccidioides brasiliensis. Um dado interessante em nosso estudo foi que, nos animais previamente infectados com T. gondii, constatamos melhora na eliminação de bactérias liberadas pela CLP e aumento do recrutamento celular para o sítio da infecção. Apesar de esses animais apresentarem melhora na resposta contra as bactérias, verificamos a presença de lesão intestinal e maior infiltrado inflamatório neste órgão, associado a um aumento da produção de citocinas pró-inflamatórias (IFN-, TNF-, IL-6 e IL-1) e consequente aumento de óxido nítrico (NO), num período de 24 horas depois da CLP. Verificamos que as células TCD4+ e TCD8+ são responsáveis pela produção de IFN- e TNF- nesse modelo de coinfecção, e em modelo in vitro, que macrófagos podem ser responsáveis pela produção de IL-1 dependente de ativação do inflamassoma NLRP3/ASC/Caspase 1. Neste estudo, observamos que a rápida resposta contra a CLP acontece em função da presença de células de memória de padrão Th1, induzidas na infecção por T. gondii. Dessa forma, esse trabalho mostra que a infecção crônica por T. gondii agrava a sepse polimicrobiana subletal, por aumentar a produção de citocinas pró-inflamatórias IL-6, TNF- e IL-1, com a indução de hipotensão, predispondo ao choque séptico. / Most studies of parasite-host interaction have focused on the interaction of a single pathogen with cells or organism of the host. However, in a natural enviroment, the host is commonly exposed to multiple pathogens sequentially or even simultaneously. Several studies have used the model of cecal ligation and puncture (CLP) to study sepsis, but none of them evaluated the effect of the presence of previous infections to the outcome of polymicrobial sepsis. In this context, we hypothesized that chronic infection with Toxoplasma gondii could alter the course of host response against polymicrobial sepsis. To test this hypothesis, C57BL/6 or BALB/c mice were orally infected with 5 or 20 cysts of ME-49 strain of T. gondii and 40 days post infection, they were subjected to CLP. When mice were chronically infected with T. gondii, 100% of the animals died within 24 hours after CLP. The same phenomenons were not observed in animals previously infected with other parasites, such as Leishmania major and Trypanosoma cruzi or the fungus Paracoccidioides brasiliensis. Interestingly, when we evaluated the response against the CLP in animals that were infected with T. gondii, we found an improvement in the killing of bacteria released by CLP and an increase in recruitment of inflammatory cells to the site of infection. However, despite the fact that these animals have improved response against the bacterial infection, they presented intestinal damage and increased inflammatory infiltrate in this organ. The animals also had increased pro-inflammatory cytokines (IFN-, TNF-, IL-6 and IL-1), and nitric oxide (NO) detected within 24 hours after CLP. We also found that the TCD4+ and TCD8+ cells were responsible to produce IFN- and TNF-, and, using an in vitro model, we verified that macrophages are primarily responsible for the production of IL-1 in a pathway dependent on the activation of NLRP3/ASC/Caspase 1 inflamassoma. In this study, we found that early response against CLP happens due to the presence of mainly Th1 memory cells, induced by T. gondii infection. Finally, we found that chronic infection with T. gondii aggravates sublethal polymicrobial sepsis by increasing the cytokines IL-6, TNF- and IL-1, with induction of hypotension that predispose to septic shock.

Para avaliar se a dinâmica da infecção toxoplásmica em gatos infectados pelo VIF é diferente daquela que ocorre em gatos não infectados por esse retrovírus, gatos adultos infectados pelo Vírus da Imunodeficiência Felina (VIF) clade B assintomáticos (n=7) (Grupo I: VIF+TOXO+), e gatos sem a infecção viral (n=7) (Grupo III: VIF-TOXO+) foram inoculados pela via oral com cistos de Toxoplasma gondii cepa P. Os animais foram avaliados por meio do exame clínico, mensuração de anticorpos IgM e IgG anti-T. gondii pela Reação de Imunofluorescência Indireta, eliminação e quantificação de oocistos pela técnica de flutuação em solução de sacarose, leucograma, e as subpopulações de linfócitos T CD4+ e CD8+ foram mensuradas por meio da citometria de fluxo. Outros dois grupos de gatos, um apenas infectado com o VIF (n=7) (Grupo II: VIF+TOXO-) e outro não infectado com nenhum dos agentes (n=3) (Grupo IV: VIF-TOXO-), constituíram os grupos controle. O período de eliminação de oocistos e a quantidade de oocistos eliminados foram semelhantes entre os Grupos I e III, respectivamente p=1,00 e p=0,201. O período de soroconversão e a duração dos títulos de IgM e IgG também foram semelhantes, respectivamente p=0,535; p=0,789 e p=0,674; p=0,123. No entanto, os episódios febris e de apatia foram mais freqüentes entre os gatos co-infectados (Grupo I) do que entre os animais do grupo não infectado com o vírus (Grupo III), embora estes últimos tenham apresentado diarréia mais freqüente e intensa do que os primeiros. Apenas no grupo co-infectado (Grupo I) um animal desenvolveu uveíte anterior unilateral autolimitante. Exclusivamente no grupo de gatos co-infectados (Grupo I), durante todo o período experimental foi observado aumento do número de leucócitos (p=0,047), linfócitos (p=0,029) e linfócitos T CD8+ (p=0,047) em relação aos gatos do grupo infectado apenas com o T. gondii (Grupo III). O grupo de gatos infectados somente com o VIF (Grupo II) apresentou diminuição quantitativa de linfócitos T CD4+ (p=0,031) em comparação ao grupo controle não infectado com nenhum dos agentes (Grupo IV), evidenciando a ação do vírus em destruir progressivamente essa subpopulação de linfócitos. A relação de linfócitos CD4/CD8 entre os Grupos I e II, infectados pelo VIF, e os Grupos III e IV, não infectados pelo vírus, foi alterada (p<0,001 e p=0,002 respectivamente), observando-se que a infecção toxoplásmica não teve influência sobre esse parâmetro. O aumento dos linfócitos T CD8+ nos gatos co-infectados e a diminuição de linfócitos T CD4+ causada pela infecção pelo VIF podem contribuir para o desenvolvimento de manifestações clínicas mais graves nos gatos infectados por ambos os agentes infecciosos. / Asymptomatic adult cats (n=7) infected with Feline Immunodeficiency Virus (FIV) clade B (Group I: FIV+TOXO+) and normal non-infected cats (n=7) (Group III: FIV-TOXO+) were inoculated, orally with cysts of Toxoplasma gondii strain P, in order to evaluate if there is a difference in dynamics of toxoplasmic infection between cats infected with FIV and naive-FIV cats. The animals were assessed by means of physical exam, T. gondii IgM and IgG antibodies by indirect immunofluorescent reaction, shedding and quantification of oocysts using sugar centrifugation, leucogram and CD4+ and CD8+ T-lymphocytes subsets using cytometry. Others two groups of cats, one of them only infected with FIV (n=7) (Group II: FIV+TOXO-) and other non-infected (n=3) (Group IV: FIV-TOXO-) composed the control groups. The shedding and quantification of oocysts were not different between the Groups I and III, respectively p=1,00 and p=0,201. The serum convertion and the period that during of values of IgM and IgG antibodies were not different, respectively p=0,535; p=0,789 and p=0,674; p=0,123. However, fever and letargy were more frequent between cats co-infected (Group I) than the group not infected with FIV (Group III), although the latter one had presented more frequently intense diarrhea than formers. Just one cat dually infected (Group I) presented autolimitant unilateral anterior uveitis. Only cats co-infected (Group I), during all period of the experiment, presented increase in number of leukocytes (p=0,047), lymphocytes (p=0,029) and CD8+ T lymphocytes subset (p=0,047) comparing to the cats only infected with T. gondii (Group III). Only in the group FIV-infected (Group II) was observed decrease in numbers of CD4+ T lymphocytes subset (p=0,031) compared to the not infected any microrganism (Group IV), showing the virus action to destroy this lymphocyte subset slowly. The CD4/CD8 lymphocyte ratio was different between the Groups I and II, FIV-infected, from Groups III and IV, FIV-naive cats, (p<0,001 e p=0,002 respectively) showing that toxoplasmic infection did not alter this parameter. The increase number of CD8+ T lymphocyte, in dually infected cats, associated with loss of CD4+ T lymphocyte caused by FIV, can contribute for the development of more severe clinical signs in cats dually infected.

Neospora caninum é um parasito intracelular obrigatório, formador de cistos, que acomete vários animais domésticos e silvestres, tendo maior importância nas espécies canina e bovina, nas quais causa problemas nervosos e reprodutivos. Os canídeos do gênero Canis são os únicos reconhecidos como hospedeiros definitivos do N. caninum até o momento, nos quais ocorre a fase sexuada de multiplicação, resultando na eliminação de oocistos pelas fezes. Toxoplasma gondii também é um coccídio responsável por uma das zoonoses de maior importância e ocorrência em todo o mundo. A fase assexuada de desenvolvimento do T. gondii ocorre nos mamíferos e aves (hospedeiros intermediários) com formação de cistos teciduais e a fase sexuada de desenvolvimento ocorre no intestino delgado dos hospedeiros definitivos, que são os membros da família Felidae. Este estudo teve por objetivo determinar a soroprevalência de anticorpos contra Neospora spp. e T. gondii em equídeos de diferentes regiões do Brasil e o isolamento e caracterização genética destes coccídios em amostras de tecidos de equídeos. A sorologia para T. gondii e Neospora spp. foi realizada em 453 amostras de soros por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta com ponto de corte de 50 para Neospora spp e 64 para T. gondii. Deste total, oito (1,75%) amostras (sete de jumentos e um de cavalo) foram positivas para Neospora spp. e 129 (28,47%) amostras (82 jumentos, 32 cavalos e 15 mulas) para T. gondii. Para o isolamento do T. gondii foram realizados 29 bioensaios em camundongos, sendo 19 de animais soropositivos e 10 de pools de tecidos de cavalos soronegativos. Por meio dessa prova biológica, foi possível o isolamento em uma amostra de jumento (Equus asinus) de Mossoró, RN, ocorrendo a morte dos dois únicos camundongos infectados, no 16o e 17o dia pós-inoculação. A caracterização genotípica do isolado foi realizada pela PCR-RFLP utilizando 12 marcadores genotípicos. A genotipagem dessa amostra evidenciou o genótipo #60 TgCkBr220, já isolado em galinha do Arquipélago de Fernando de Noronha, PE, Brasil. O isolamento de Neospora spp em gerbilos não pode ser feito uma vez que não foi possível a obtenção de tecidos dos equídeos soropositivos. / Neospora caninum is an obligate intracellular parasite, forming cysts that affect many domestic and wild animals, having greater importance in canine and bovine species due neurological and reproductive problems. Canids of the genus Canis are recognized as the only definitive hosts of N. caninum until the moment in which sexual phase occurs multiplication, resulting in the elimination of oocysts in the feces. Toxoplasma gondii is also a coccidian parasite responsible for a zoonotic disease of great importance and occurrence around the world. The asexual developmental stage of T. gondii occurs in mammals and birds, the intermediate hosts, resulting in the formation of cysts and the sexual stage occurs in the small intestine of definitive hosts, which are the felids, occurring oocysts formation. This study aimed to determine the seroprevalence of antibodies against Neospora spp. and Toxoplasma gondii in equids from different regions of Brazil and the isolation and genetic characterization of these parasites from equids tissue. Serology for T. gondii and Neospora spp. was performed in 453 serum samples by Immunofluorescence Antibody Test (IFAT). Of this total, eight (1.75%) samples (seven of donkeys and one of horse) were positive to Neospora spp. antibodies and 129 (28.47%) samples (82 donkeys, 32 horses, 15 mules) were T. gondii seropositive. For the isolation of T. gondii, bioassay was performed in mice. A sample of one donkey (Equus asinus) from Mossoró, RN, was obtained with two of the 20 inoculated mouse infected. The mouse died at day 16th and 17th post inoculation. The genotypic characterization of the isolate was performed by PCR-RFLP using 12 genotypic markers. Genotyping showed the genotype #60 TgCkBr220, already described in chickens from Fernando de Noronha, PE, Brazil. Due the impossibility of acquisition of tissue from Neospora spp seropositive equids, isolation of this coccidian by gerbil bioassay was not possible to be done.

A toxoplasmose afeta 1/3 da população humana e só existe uma vacina para uso veterinária. A radiação gama altera as proteínas tornando-as mais imunogênicas, por oxidação e melhor apresentação de antígenos na ausência de adjuvantes. Irradiamos extrato solúvel de taquizoítos da cepa RH de T. gondii (AgTg), e avaliamos seu uso como vacina em camundongos BALB/c. Doses abaixo de 500Gy não afetavam e doses acima de 2000Gy destruíam o extrato, sendo que animais imunizados com extrato irradiado a 1000, 1500 e 2000Gy tinham mais IgG especifica de maior avidez, comparado ao AgTg nativo (p<0.05). Animais imunizados pelo AgTg 1500Gy tiveram aumento da proliferação de esplenócitos, fenotipados como CD3+CD4+, CD3+CD8+ e de linfócitos B, comparados com animais imunizados pelo AgTg nativo. Animais imunizados pelo AgTg 1500Gy após desafio com cepa ME-49 cistogênica apresentaram menor numero de cistos cerebrais e maior sobrevida pós-desafio com cepa virulenta RH. A radiação ionizante em extratos de T.gondii aumenta a resposta imune e a memória imunológica na ausência de adjuvantes. / Toxoplasmosis affects 1/3 of the human population and only a vaccine for veterinary use. Gamma radiation alters the proteins making them more immunogenic by oxidation and better antigen presentation in the absence of adjuvants. Radiate soluble extract of RH strain tachyzoites of T. gondii (AgTg ) , and evaluate its use as a vaccine in BALB/c . Doses below 500Gy not affected and destroyed 2000Gy doses above extract, whereas animals immunized with irradiated extract at 1000, 1500 and 2000Gy had more of specific IgG avidity, compared to native AgTg (p < 0, 05). AgTg 1500GY the immunized animals had increased proliferation of splenocytes, phenotyped as CD3+CD4+,CD3+CD8+ and B-lymphocytes immunized animals compared to the native AgTg . Animals immunized by AgTg 1500GY after challenge with strain ME- 49 cystogenic showed lower number of brain cysts and greater survival after challenge with virulent RH. Ionizing radiation in extracts of T. gondii increases the immune response and immune memory in the absence of adjuvants.