Estudos prévios mostram que tanto a melatonina (MEL) como a Dehidroepiandrosterona (DHEA) aumentaram a resposta imune contra distintos parasitas. O presente estudo investigou a atividade in vitro da MEL e DHEA associados em um período de 24 horas e in vivo durante o curso da infecção por T. cruzi. A atividade in vitro da MEL e DHEA sozinhos, bem como juntos foram testados sobre formas tripomastigotas (doses variando de 0.5, 8, 20, 32, 40 to 128 µM). In vitro, tanto MEL como DHEA sozinhos não mostraram qualquer atividade contras formas tripomastigotas, embora quando utilizadas em concentrações mais elevadas, a associação de MEL e DHEA mostrou-se ativa contra formas tripomastigotas do parasita. Entretanto, para estas altas concentrações, verificou-se alta toxicidade sobre os macrófagos peritoneais. Para avaliação in vivo, ratos machos Wistar foram infectados com a cepa Y de T. cruzi. Os animais foram oralmente tratados com 5 mg/kg peso corpóreo/dia de MEL e de forma subcutânea com 40mg/kg peso corpóreo/dia de DHEA. Tratamento com MEL, DHEA e associado mostrou uma redução significante no número de tripomastigotas sangüíneos durante a fase aguda da infecção quando comparado aos animais não trados (P<0.05). Um significante aumento no número de macrófagos e concentração de óxido nítrico (NO) foram observados durante o pico da parasitemia apenas com MEL ou combinado com DHEA. Entretanto, observou-se que o DHEA sozinho aumentou a concentração de NO (P<0.05), bem como os níveis de TNF-alfa durante a infecção (P<0.05). Estes resultados mostram que a MEL, DHEA ou a associação de ambos reduz a parasitemia durante a fase aguda de infecção. A ação combinada de ambos os hormônios não exerceu uma ação sinérgica sobre a magnitude da resposta imune do hospedeiro, ficando o DHEA como a substância que induziu a resposta imune mais eficiente. / Previous studies show that melatonin (MEL) and dehydroepiandrosterone (DHEA) enhances the immune response against parasitic pathogens. The present study investigated the in vitro activity of MEL and DHEA association in a period of 24 hours and in vivo during the course of T. cruzi infection. The in vitro activity of MEL and DHEA alone, as well as together, were tested for the trypomastigote forms (doses ranging from 0.5, 8, 20, 32, 40 to 128µM). In vitro, nor MEL nor DHEA alone did not show any activity against trypomastigote forms, although when the highest concentration of MEL and DHEA association was used, it was active against the trypomastigote forms of the parasite. However, for this concentration, a quite toxicity on peritoneal macrophages was observed. For in vivo evaluation, male Wistar rats were infected with the Y strain of T. cruzi. They were orally treated with 5mg/kg body weight/day of MEL and subcutaneously with 40mg/kg body weight/day of DHEA. Treatment with MEL, DHEA and the association showed a significant reduction in the number of blood trypomastigotes during the acute phase of infection as compared to untreated animals (P<0.05). A significant increase in the number of macrophages and nitric oxide (NO) concentrations were observed during the peak of parasitemia with MEL alone or combined with DHEA. However, with DHEA alone, the highest concentration of NO was observed (P<0.05). Moreover, DHEA treatment increased TNF-alpha levels during infection (P<0.05). These results show that MEL, DHEA or the association of both reduces parasitemia during the acute phase of infection. The combined action of both hormones did not exert a synergic action on the hosts ability to fight infection, and it seems that among all treatments DHEA induces a more efficient immune response.

Orientador: João Aristeu da Rosa / Coorientador: Sergio de Albuquerque / Banca: Mara Cristina Pinto / Banca: Carlos Eugenio Cavasini / Banca: Ana Amélia Carraro Abrahão / Banca: Maria Tercilia Vilela Azeredo de Oliveira / Resumo: A atividade de 92 extratos etanólicos de espécies de Annonaceae, Apiaceae, Cucurbitaceae, Lauraceae, Moraceae, Nyctaginaceae, e Verbenaceae foi avaliada sobre formas epimastigotas das cepas Y e Bolívia de Trypanosoma cruzi, nas concentrações de 500, 350, 250 e 100 µg/ml. Quinze extratos de Lippia salviaefolia, L. sidoides, L. laciocalycina, L. lupulina, L. balansae, L. velutina e suas frações hexânicas, de acetato de etila, n-butanólicas e aquosas foram avaliados sobre formas epimastigotas do clone B5 da cepa CL Brener de T. cruzi, nas concentrações de 32, 8, 2 e 0,5 µg/ml. Adicionalmente, as amostras mais promissoras de Lippia sp foram avaliadas, in vitro, sobre as formas tripomastigotas e amastigotas de T. cruzi e, in vivo, em camundongos BALB/c. A citotoxicidade foi avaliada em fibroblastos da linhagem LLCMK2 e o benzonidazol foi utilizado como controle positivo. Todos os 92 extratos etanólicos, testados sobre as formas epimastigotas da cepa Y de T. cruzi, foram inativos. Os melhores resultados entre as 92 amostras avaliadas foram obtidos com o extrato etanólico de Ocotea paranapiacabensis, por apresentar atividade tripanocida sobre as formas epimastigotas da cepa Bolívia e toxicidade moderada, e com o extrato de Aegiphilla lhotzkyana, que demonstrou atividade tripanocida moderada sobre a cepa Bolívia e moderada citotoxicidade. Dentre os extratos etanólicos de Lippia sp avaliados, o de folhas de L. velutina apresentou a maior atividade tripanocida sobre as formas epimastigotas e toxicidade moderada, mas foi inativo contra as formas tripomastigotas e amastigotas de T. cruzi. Os melhores resultados foram obtidos da sua fração de acetato de etila que apresentou atividade, sobre formas epimastigotas, 42 vezes maior do que o benzonidazol, com Índice de Seletividade (IS) de 371,0, além de atividade moderada sobre as formas tripomastigotas. Esta amostra foi inativa contra... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Trypanocidal activity of 92 ethanol extracts of species of Annonaceae, Apiaceae, Cucurbitaceae, Lauraceae, Moraceae, Nyctaginaceae, and Verbenaceae was evaluated using the epimastigote forms of the Y and Bolivia strains of Trypanosoma cruzi at a concentration of 500, 350, 250, and 100 µg/ml. Fifteen extracts of Lippia salviaefolia, L. sidoides, L. laciocalycina, L. lupulina, L. balansae, L. velutina, their liquid-liquid extraction fractions of hexane, ethyl acetate, n-butanol and water were evaluated using the epimastigote forms of B5 clone of CL Brener strain of T. cruzi at a concentration of 32, 8, 2, 0.5 µg/ml. Additionally, samples of the most promising of Lippia sp were evaluated, in vitro, using trypomastigote and amastigote forms of T. cruzi and, in vivo, in BALB/c. The cytotoxic activity was evaluated on fibroblasts of lineage LLCMK2 and benznidazole was used as positive control. All the 92 ethanol extracts tested against epimastigote forms of the Y strain of T. cruzi are inactive. The best results among the 92 samples evaluated were obtained with ethanol extracts of Ocotea paranapiacabensis, for showing trypanocidal activity against epimastigote forms of the Bolivia strain and being moderately toxic, and the extracts of Aegiphilla lhotzkyana, which showed moderate trypanocidal activity against the Bolivia strain and moderate toxicity. Among the 15 ethanol extracts of Lippia sp assayed, the one from of leaves of L. velutina showed the highest trypanocidal activity on epimastigote forms and moderate toxicity, but was inactive against trypomastigote and amastigote forms of T. cruzi. Best results were obtained for its ethyl acetate fraction, which showed activity in epimastigote forms, 42 times more than benznidazole, with Selectivity Index (SI) of 371.0 and moderate activity on trypomastigote forms. This sample was inactive against the amastigote forms of the parasite... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-11-06T19:03:45Z No. of bitstreams: 1 Daniel Huber Pessina Análise imuno fenotípica de animais nod estudo da proteção ao diabetes..pdf: 2399319 bytes, checksum: 3fc4e57719b71c97883626a074b31ce3 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-06T19:03:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniel Huber Pessina Análise imuno fenotípica de animais nod estudo da proteção ao diabetes..pdf: 2399319 bytes, checksum: 3fc4e57719b71c97883626a074b31ce3 (MD5) Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Os animais NOD representam o principal modelo experimental de estudo do diabetes autoimune. Apesar do progressivo número de estudos realizados, muitos aspectos imunes da promoção e regulação desta doença continuam obscuros. Utilizando o modelo (pela primeira vez aqui descrito) de proteção induzida pelo T. cruzi, bem como o modelo de aceleração pela ciclofosfamida, fizemos um estudo imuno-fenotípico em animais NOD com o objetivo de elucidar mecanismos imunes responsáveis pela regulação do diabetes tipo I. Demonstramos que a infecção de camundongos NOD com o T. cruzi os protege do desenvolvimento do diabetes. Estes animais desenvolvem uma resposta ao parasita caracterizada por uma pobre expansão de células T CD8 efetoras, bem como uma menor migração destas para os sítios parasitários. Estudo do perfil de citocinas mostraram ainda uma reduzida produção inicial de IFN no baço, mas elevada produção tardia nos tecidos inflamados, comparado a animais BALB/c. Estes dados, associados a uma maior produção inicial de IL-10 por esplenócitos, justificam a maior susceptibilidade à infecção observada nos animais NOD. O estudo de populações celulares com atividade regulatória mostrou que há aumento de Treg no início da infecção. Contudo a proteção ao diabetes desencadeada pelo T. cruzi não se correlaciona ao número de células Treg, pois há uma redução destas ao longo da infecção. Este fato, associado à observação de que a ciclofosfamida é incapaz de induzir diabetes nos animais infectados, apontaram para um papel limitado destas células na proteção ao diabetes pelo T. cruzi. Entretanto, houve aumento de células Gr1+, e a depleção destas reverte a proteção ao diabetes causada pela infecção, além de induzir a expansão de células T CD8+ efetoras e sua produção de IFN. Verificamos ainda, que níveis aumentados da expressão de PD-L1 relacionaram-se com a proteção ao diabetes proporcionado pelo T. cruzi, enquanto níveis reduzidos se relacionaram ao seu desenvolvimento espontâneo. Contudo, o tratamento com ciclofosfamida não reduz a expressão de PD-L1 em linfócitos, mas induz rapidamente o diabetes em animais NOD não infectados e leva a uma drástica diminuição de células Tregs CD25+ esplênicas. Os resultados, aqui tomados em conjunto, apontam para um complexo mecanismo de controle do diabetes, que envolve diferentes populações celulares que atuam de maneira variada com o modelo estudado. / The NOD mice are the most used experimental model for the study of autoimmune diabetes. Despite progressive number of studies, many aspects about the immune regulation and disease onset remains unclear. Using our model (described here for the first time) of diabetes protection induced by T. cruzi, as well as cyclophosphamide acceleration, we performed a immunophenotypic analysis of NOD animals, aiming to elucidate the immune mechanisms responsible for regulation of type I diabetes. We demonstrated that infection of NOD mice with T. cruzi protects them from diabetes onset. These mice develop a poor expansion of effector CD8 T cells in response to parasite, and have lower percentage of those lymphocytes in inflammatory sites, when compared to BALB/c mice. Cytokine profile's analysis also revealed a reduced initial production of IFN in spleen, but high late production in inflamed tissues. Those data associated to an elevated production of IL-10 by spleen cells could explain the increased susceptibility observed in infected NOD mice. Further analysis showed an increased Treg cells rates early after infection, followed by a progressive reduction thereof along infection. This fact, coupled with the observation that cyclophosphamide is unable to induce diabetes in infected mice, indicates a limited role for these cells in diabetes protection by T. cruzi. However, increased Gr1 + cells numbers was also found in infected mice, and its depletion reverses the protection of diabetes related to infection. That reversion was associated to an expansion of effector CD8 + T cells and their production of IFN. We also found that increased expression of PD-L1 were also related to diabetes protection provided by T. cruzi infection, while low levels were related to spontaneous diabetes development. Treatment with cyclophosphamide however did not reduce PD-L1 expression on lymphocytes, despites rapidly set diabetes in NOD uninfected animals. On the other hand, cyclophosphamide leads to a drastic decrease of CD25 + Treg cells in the spleen of NOD mice. These results, taken together, point to a complex mechanism of diabetes control, which involves different cell populations acting variously with the model.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-11-27T18:57:05Z No. of bitstreams: 2 Edson Luiz Paes Camandaroba Analise fenotipica... - 2005.pdf: 74751980 bytes, checksum: 1112ab65fa142319f7431dbedeb97651 (MD5) Edson Luiz Paes Camandaroba Analise fenotipica... - 2005.pdf: 74751980 bytes, checksum: 1112ab65fa142319f7431dbedeb97651 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-27T18:57:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Edson Luiz Paes Camandaroba Analise fenotipica... - 2005.pdf: 74751980 bytes, checksum: 1112ab65fa142319f7431dbedeb97651 (MD5) Edson Luiz Paes Camandaroba Analise fenotipica... - 2005.pdf: 74751980 bytes, checksum: 1112ab65fa142319f7431dbedeb97651 (MD5) Previous issue date: 2005 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / As cepas do Trypanosoma cruzi são constituídas por populações multiclonais, heterogêneas, diplóides e apresentam polimorfismo nos fragmentos de restrição no minicirculo do kDNA e nos cromossomos do nDNA. Esta variabilidade genética intraespecífica das cepas é correlacionada ao seu comportamento biológico, tropismo tissular e à resposta aos quimioterápicos. A cepa Colombiana do T. cruzi, protótipo do Biodema Tipo III, Zimodema Z1, classificada como T. cruzi I é altamente resistente ao benzonidazol e ao nifurtimox, No presente estudo, investigou-se a composição clonal desta cepa. Foram estudadas em camundongos o comportamento biológico, o histotropismo, caracteres bioquímicos e genéticos e a resposta ao benzonidazol de 12 clones. Foram isolados sete clones no 30° dia de infecção, no pico da parasitemia (fase aguda avançada) e cinco clones no 10° dia de infecção (fase aguda precoce). Os clones isolados foram submetidos a passagens sucessivas em camundongos albinos Suíços para a obtenção do inóculo de 1x10® tripomastigotas, para infecção dos animais dos grupos experimentais. O comportamento biológico foi avaliado pela parasitemia, estudo morfológico dos parasitos e mortalidade dos animais infectados. Os padrões isoenzimáticos para os diversos clones foram obtidos pelas enzimas ALAT, ASAT, PGM e GPI. Os animais infectados com cada clone e com a cepa parental foram submetidos ao tratamento com benzonidazol durante 90 dias na dose de 100 mg/kg/dia. O estudo genéíco foi realizado pela amplificação por POR de fragmentos de 330 pares de bases das porções variáveis do minicirculo do kDNA e por RFLP. Os fragmentos foram digeridos com as enzimas de restrição Rsa I, Eco RI e Hinfl No geral o estudo biológico mostrou homogeneidade entre os clones e entre os clones e a cepa parental. Houve variação na parasitemia sendo que foi mais elevada em quatro dos sete clones isolados no 30° dia da infecção e em três dos cinco clones isolados no 10° dia. A caracterização isoenzimática incluiu os clones no mesmo Zimodema Z1, idêntico á cepa Colombiana parental. O estudo genético mostrou que os clones e a cepa parental apresentaram idêntico padrão de bandas nos fragmentos de restrição gerados pelas enzimas de restrição. O histotropismo dos clones foi ubiquitário e não restritivo, foram mais encontrados no músculo esquelético e miocárdio, seguido pela presença de parasitos na parede intestinal, células de Kupffer e macrófagos do baço, plexo de Auerbach e adipócitos, Todos os clones apresentaram-se altamente resistente ao benzonidazol com índices de cura de 0% a 16, 7% (para os clones isolados no 30° dia) e de 0% a 36,3% (para os clones isolados no 10° dia). A cepa Colombiana do T. cruzi apresenta uma grande homogeneidade populacional, sugerindo a predominância de um clone principal responsável pelas características da cepa. / Strains of T. cruzi are heterogeneous multiclonal, diploid populations, presenting high polymorphic restriction fragments of the kDNA minicircles and nDNA chromosomes. This intra-specific genetic variability is correlated with the biological behavior, tissue tropism and responses to chemotherapy. The Colombian strain of T. cruzi, prototype of Type III biodeme and Z1 zimodeme , classified as T. cruzi I. is highly esistant to benznidazole and nifurtimox. In the present study it was investigated the clonal composition of this strain to identify whether there are an homogeneity or heterogeneity of the isolated clones, considering different aspects: biological, biochemical and genetic, and the clonal histotropism, as well as the susceptibility to chemotherapy with benznidazole. The Clones have been isolated in two different phases of the acute infection in mice; seven clones on the 30‘^ day of infection, corresponding to the parasitemic peaks (advanced acute phase) and five clones on the 10**^ day of infection (early acute phase) and inoculated into newborn mice. Successive passages into Swiss albino mice were done, to obtain the inoculum of 1 x 10® trypomastigotes for the infection of the experimental groups of mice. Biological behavior was evaluated by the parasitemic profiles, morphology of parasites in the blood and mortality indices. Isoenzymic profiles of ALAT, ASAT, PGM and GPI were established for the several clones. Treatment with Benznidazole was performed in experimental groups infected with each clone and the parental strain, in the dose of 250mg/kg/day, during 90 days. Genetic characterization was performed by the analyses of the kinetoplast DNA (kDNA) of parental strain and the clones. Schizodeme was established by comparative study of the 330-bp fragments amplified by polymerase chain reaction (PCR) from the variable regions of the minicircles and by RFLP. Fragments have been digested by restriction endonucleases Rsa I, Hinf I and Eco Rl. In general, bological characterization showed an homogeneity of the several clones and amongst the clones and the parental strain, although with variations in the parasitemia that was higher for four of the seven clones isolated in the 30*^ day and for three of five clones isolated in the 10*^ day. Isoenzymic characterization, confirms the clones into the zymodeme Z1, identical to the Colombian parental strain. Genetic characterization demonstrated an homology of the bands profiles of the restriction fragments from the minicircles of kDNA (RFLP) between the parental strain and the 12 clones. Histotropism of the several clones was ubiquitous and not restrictive, predominant for the skeletal muscles and myocardium also present in the intestinal wall, Kupffer cells, macrophages of the spleen, cells of the Auerbach' plexus and adipocytes. All the clones were highly resistant to chemotherapy with benznidazole with cure indices of 0% to 16% (for the isolated in the 30*^ day) and 0% to 36,3% (for the isolated in the 10*^ day) .The overall analyses of the several parameters (genetic, biological, biochemical and response to chemotherapy) have shown phenotypic and genotypic homogeneity, of the Colombian strain and its clones, suggesting the predominance of a “principal clone” responsible for these characteristics.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-06-16T14:16:03Z No. of bitstreams: 1 Daniele Oliveira dos Anjos. Avaliação... 2014.pdf: 3009181 bytes, checksum: 49f7e0a87a33c50bdde2fa65c23f8c9f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-06-16T14:16:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Daniele Oliveira dos Anjos. Avaliação... 2014.pdf: 3009181 bytes, checksum: 49f7e0a87a33c50bdde2fa65c23f8c9f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-16T14:16:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniele Oliveira dos Anjos. Avaliação... 2014.pdf: 3009181 bytes, checksum: 49f7e0a87a33c50bdde2fa65c23f8c9f (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A tripanossomíase americana também conhecida como doença de Chagas é um importante problema de saúde pública, uma doença de origem parasitária que afeta 8 milhões de pessoas na América Latina (OMS, 2013). Atualmente existem apenas dois fármacos utilizados na prática clínica: o benzonidazol e o nifurtimox. Esse último não é usado no Brasil. Esses fármacos apresentam efeitos colaterais e são confrontados com cepas resistentes (FILARDI e BRENER, 1987; MEJIA et al., 2012). Desta forma, torna-se necessária a busca de compostos que apresentem maior eficácia e menor toxicidade. No presente trabalho foi avaliado o efeito do composto derivado de β–lapachona, R72, em formas tripomastigotas de T. cruzi e em macrófagos infectados in vitro. Observamos que a R72 reduziu, significativamente (p<0,05), o número de parasitos viáveis, produzindo IC50 de 15 μM. A análise ultraestrutural revelou que a R72 causou danos na bolsa flagelar, cinetoplasto e mitocôndrias. Além disso, encontramos a presença de corpúsculos lipídicos e figuras de mielina no citoplasma do protozoário, indicando processos de autofagia, a qual foi confirmada pela sonda MDC. A análise por citometria de fluxo indicou morte por apoptose, necrose e produção de espécies reativas de oxigênio. Além disso, o composto não apresentou toxicidade para células de mamíferos em concentrações inferiores a 200 μM. A R72 reduziu, significativamente, a percentagem de macrófagos infectados pelo T. cruzi e o número de parasitos por macrófagos. Verificamos inibição da internalização de parasitos quando os macrófagos foram tratados previamente com o composto R72. Análise ultra-estrutural evidenciou um processo de autofagia caracterizado pela presença de vacúolo autofágico e formação de corpúsculos lipídicos. O mecanismo envolvido na formação de vacúolos autofágicos e corpúsculos lipídicos é independente da produção de óxido nítrico. Esses resultados ajudam a elucidar os mecanismos de ação de fármacos potenciais para a quimioterapia da doença de Chagas. / The American trypanosomiasis also known as Chagas disease is a major public health problem, a parasitic disease caused that affects 8 million people in Latin America (OMS, 2013). Currently there are only two drugs used in clinical practice: the benznidazole and the nifurtimox. The latter is not used in Brazil. These drugs are faced with considerable side effects and resistant strains (FILARDI e BRENER, 1987; MEJIA et al., 2012). Thus the search for drugs effective in the chronic phase of the disease and lower toxicity is required. In this study the effect of the β-lapachone derivative R72 in trypomastigote forms of T. cruzi and upon the infection of macrophage by T. cruzi in vitro. We observed that the R72 significantly inhibited (p<0,05) the number of viable parasites, producing IC50 of 15 μM. The ultrastructural analysis by transmission electron microscopy revealed that the R72 has caused damage to the flagellar pocket, kinetoplast and mitochondria. Furthermore, we found the presence of lipid bodies and myelin figures in the cytoplasm of the protozoan indicating autophagic process, which was confirmed by the MDC probe. Analysis by flow cytometry indicated death by apoptosis and necrosis and production of reactive of reactive oxygen species. Furthermore, the compound did not show toxicity to mammalian cells at concentrations below 200 μM. The R72 significantly reduced the percentage of infected macrophages and the number of number of T. cruzi parasites per macrophage. We observed inhibition of internalization of parasites when macrophage were pretreated with the compound R72. Ultrastructural analysis revealed a process of autophagy characterized by the presence of autophagic vacuoles and lipid body formation. The mechanism involved in the formation of autophagic vacuoles and lipid body is independent of nitric oxide. These results help elucidating the mechanisms action of potential drugs and provide new tools for chemotherapy of Chagas disease.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-28Bitstream added on 2014-06-13T21:05:59Z : No. of bitstreams: 1 alves_rt_dr_arafcf.pdf: 451225 bytes, checksum: 5c66643bb27a768c6a425806c3aabdb0 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A atividade de 92 extratos etanólicos de espécies de Annonaceae, Apiaceae, Cucurbitaceae, Lauraceae, Moraceae, Nyctaginaceae, e Verbenaceae foi avaliada sobre formas epimastigotas das cepas Y e Bolívia de Trypanosoma cruzi, nas concentrações de 500, 350, 250 e 100 µg/ml. Quinze extratos de Lippia salviaefolia, L. sidoides, L. laciocalycina, L. lupulina, L. balansae, L. velutina e suas frações hexânicas, de acetato de etila, n-butanólicas e aquosas foram avaliados sobre formas epimastigotas do clone B5 da cepa CL Brener de T. cruzi, nas concentrações de 32, 8, 2 e 0,5 µg/ml. Adicionalmente, as amostras mais promissoras de Lippia sp foram avaliadas, in vitro, sobre as formas tripomastigotas e amastigotas de T. cruzi e, in vivo, em camundongos BALB/c. A citotoxicidade foi avaliada em fibroblastos da linhagem LLCMK2 e o benzonidazol foi utilizado como controle positivo. Todos os 92 extratos etanólicos, testados sobre as formas epimastigotas da cepa Y de T. cruzi, foram inativos. Os melhores resultados entre as 92 amostras avaliadas foram obtidos com o extrato etanólico de Ocotea paranapiacabensis, por apresentar atividade tripanocida sobre as formas epimastigotas da cepa Bolívia e toxicidade moderada, e com o extrato de Aegiphilla lhotzkyana, que demonstrou atividade tripanocida moderada sobre a cepa Bolívia e moderada citotoxicidade. Dentre os extratos etanólicos de Lippia sp avaliados, o de folhas de L. velutina apresentou a maior atividade tripanocida sobre as formas epimastigotas e toxicidade moderada, mas foi inativo contra as formas tripomastigotas e amastigotas de T. cruzi. Os melhores resultados foram obtidos da sua fração de acetato de etila que apresentou atividade, sobre formas epimastigotas, 42 vezes maior do que o benzonidazol, com Índice de Seletividade (IS) de 371,0, além de atividade moderada sobre as formas tripomastigotas. Esta amostra foi inativa contra... / Trypanocidal activity of 92 ethanol extracts of species of Annonaceae, Apiaceae, Cucurbitaceae, Lauraceae, Moraceae, Nyctaginaceae, and Verbenaceae was evaluated using the epimastigote forms of the Y and Bolivia strains of Trypanosoma cruzi at a concentration of 500, 350, 250, and 100 µg/ml. Fifteen extracts of Lippia salviaefolia, L. sidoides, L. laciocalycina, L. lupulina, L. balansae, L. velutina, their liquid-liquid extraction fractions of hexane, ethyl acetate, n-butanol and water were evaluated using the epimastigote forms of B5 clone of CL Brener strain of T. cruzi at a concentration of 32, 8, 2, 0.5 µg/ml. Additionally, samples of the most promising of Lippia sp were evaluated, in vitro, using trypomastigote and amastigote forms of T. cruzi and, in vivo, in BALB/c. The cytotoxic activity was evaluated on fibroblasts of lineage LLCMK2 and benznidazole was used as positive control. All the 92 ethanol extracts tested against epimastigote forms of the Y strain of T. cruzi are inactive. The best results among the 92 samples evaluated were obtained with ethanol extracts of Ocotea paranapiacabensis, for showing trypanocidal activity against epimastigote forms of the Bolivia strain and being moderately toxic, and the extracts of Aegiphilla lhotzkyana, which showed moderate trypanocidal activity against the Bolivia strain and moderate toxicity. Among the 15 ethanol extracts of Lippia sp assayed, the one from of leaves of L. velutina showed the highest trypanocidal activity on epimastigote forms and moderate toxicity, but was inactive against trypomastigote and amastigote forms of T. cruzi. Best results were obtained for its ethyl acetate fraction, which showed activity in epimastigote forms, 42 times more than benznidazole, with Selectivity Index (SI) of 371.0 and moderate activity on trypomastigote forms. This sample was inactive against the amastigote forms of the parasite... (Complete abstract click electronic access below)

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2016. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-10-10T18:21:06Z No. of bitstreams: 1 2016_PaulaBeatrizSantiago.pdf: 14571538 bytes, checksum: e6692f71f1b3e972f9f5a7e93a8a6ea1 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-10-10T18:22:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_PaulaBeatrizSantiago.pdf: 14571538 bytes, checksum: e6692f71f1b3e972f9f5a7e93a8a6ea1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-10T18:22:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_PaulaBeatrizSantiago.pdf: 14571538 bytes, checksum: e6692f71f1b3e972f9f5a7e93a8a6ea1 (MD5) Previous issue date: 2017-10-10 / Programa de apoio a Núcleos de excelência (PRONEX); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP-DF); Financiadora de Estudos e Projetos (FINEP). / A doença de Chagas é causada pelo tripanossomatídeo Trypanosoma cruzi, geralmente transmitido ao hospedeiro vertebrado através do contato com as fezes do inseto vetor infectado durante o repasto sanguíneo. A lesão vascular ocasionada pela picada do triatomíneo hematófago desencadeia no hospedeiro manifestações que poderiam interferir na alimentação, tais como resposta imune, inflamação e hemostasia. No entanto, os insetos hematófagos são capazes de neutralizar essas defesas através de um complexo repertório de moléculas salivares, fundamentais para a manutenção do fluxo sanguíneo e o sucesso do repasto. No intuito de conhecer a complexidade molecular da saliva dos triatomíneos Rhodnius neglectus e Triatoma dimidiata, esta tese descreve os transcritomas de suas glândulas salivares utilizando sequenciamento de próxima geração. Foram obtidos 5.704 transcritos a partir da biblioteca de cDNA das glândulas salivares de T. dimidiata e 5.705 da biblioteca de R. neglectus, dos quais 662 e 636, respectivamente, codificam proteínas secretadas. A análise revelou a expressão de famílias gênicas já descritas na saliva de outros hematófagos, como lipocalinas, grupo abundante, antígeno-5 e apirases. Além disso, inibidores de proteases do tipo Kazal e proteases também foram encontrados. Adicionalmente, o conteúdo salivar foi submetido à análise proteômica, sendo identificadas 111 e 73 proteínas nos proteomas de T. dimidiata e R. neglectus, respectivamente. Os resultados obtidos validaram alguns transcritos putativamente secretados. Este estudo evidenciou que a saliva dos triatomíneos investigados tem característica multifuncional diretamente relacionada a diferentes atividades anti-inflamatórias, anti-hemostáticas e imunomoduladoras. O estudo dos compostos salivares auxilia a compreensão acerca da biologia dos vetores e transmissão de doenças, da evolução dos hematófagos, além de estimular a busca por novos fármacos. / Chagas disease is caused by Trypanosoma cruzi trypanosomatid, usually transmitted to vertebrate host through contact with faeces of infected vector insects during a blood meal. The vascular injury caused by the bite triggers symptoms capable to preventing an association with the host, such as immune response, inflammation and haemostasis. However, hematophagous arthropods are able to neutralize these defenses through a complex repertoire of salivary proteins acting as vasodilators, antiplatelets and anticoagulants. These molecules are essential for the blood flow maintenance and the success of the blood meal. In order to understand the salivary molecular complexity of Rhodnius neglectus and Triatoma dimidiata, this work describes their salivary glands (SG) transcriptome using next-generation sequencing. It was possible to obtain 5,704 transcripts from T. dimidiata and 5,705 from R. neglectus SGs, of which 662 and 636 encoded putatively secreted proteins respectively. The analysis revealed the expression of gene families already described in the saliva of other hematophagous insects, such as lipocalin, abundant protein family, antigen-5 and apyrases. Besides, Kazal type protease inhibitors and proteases were also found. In addition, the salivary content was submitted to proteomic analysis, being possible to identify 111 and 73 proteins in T. dimidiata and R. neglectus proteomes respectively. The results validated some putatively secreted transcripts. This work showed that saliva of the triatomines investigated here possess multi-functional feature directly related to different anti-inflammatory, anti-hemostatic and immunomodulatory activities. Salivary research helps the understanding of vector biology and disease transmission, hematophagous evolution, in addition to stimulating the search for new drugs.

Uma nova e promissora alternativa quimioterápica para o tratamento da doença de Chagas usando tetraaminas de rutênio (II) como transportadoras de óxido nítrico (NO) ou Benznidazol (Bz) são apresentados aqui. Os resultados mostraram que os complexos do tipo trans-[Ru(NO)(NH3)4L]n+ e cis-[Ru(NO)(bpy)2L] n+ são mais eficientes para tratar casos agudos da doença (modelo murino) que o Bz livre. Os nitrosilos trans-[Ru(NO)(NH3)4isn](BF4)3, trans-[Ru(NO)(NH3)4imN](BF4)3, cis-[Ru(NO)(bpy) 2imN](PF6)3 e cis-[Ru(NO)(bpy) 2SO3]PF6 são capazes de eliminar in vivo as formas extracelulares e intracelulares do T. cruzi tanto na corrente sanguínea quanto no tecido miocárdio, assegurando a sobrevida de 60-100% dos animais infectados em doses de 900 (400 nmol kg-1) até 3.850 vezes menores (100 nmol kg-1) que a dose considerada ótima para o Bz (385 µmol kg-1 = 100 mg kg-1). Além disso, uma concentração de trans-[Ru(NO)(NH3)4imN](BF4)3 ou cis-[Ru(NO)(bpy) 2imN](PF6)3 dez vezes menor que a recomendada pela Organização Mundial de Saúde (OMS) para tratar sangue infectado com o violeta de genciana (Vg) é capaz de eliminar 100% dos parasitos após 1 hora de incubação a 37 oC. Os experimentos conduzidos in vitro demonstraram que o NO liberado após redução ou reativos intermediários do NO são os responsáveis pelo efeito anti-proliferativo ou tripanocida. O nitrosilo trans-[Ru(NO)(NH3)4isn](BF4)3 (IC50epi = 67 &micro;mol L-1) foi mais ativo que o nitroprussiato de sódio (SNP) (IC50epi = 244 &micro;mol L-1) e o trans-[Ru(NO)(NH3)4imN](BF4)3 e o cis-[Ru(NO)(bpy) 2imN](PF6)3 (IC50tri = 52 e 58 &micro;mol L-1, respectivamente) foram mais eficientes que o Vg (IC50tri = 536 &micro;mol L-1). O transportador do Bz, trans-[Ru(Bz)(NH3)4S(IV)]n+, S(IV) = SO2, HSO3- ou SO32- (RuBz), é mais hidrosolúvel e mais ativo (IC50tri/1h = 79 &plusmn; 3 &micro;mol L-1) que o Bz livre (IC50tri/1h = 4,800 &plusmn; 70 &micro;mol L-1). Este complexo exibiu baixa citotoxicidade in vitro (IC50esplenócitos > 1 mmol L-1) e in vivo (400 &micro;mol kg-1 &lt; LD50 &lt; 600 &micro;mol kg-1) e a formação do derivado hidroxilamínico é mais favorável no RuBz que no Bz em 9,6 Kcal mol-1. Em diversos modelos murinos de infecção aguda, o RuBz também foi mais ativo que o Bz ainda quando somente uma dose foi administrada. Analogamente, o RuBz a uma dose 1.000 vezes que a dose ótima para o Bz provou ser suficiente para proteger todos os animais infectados, eliminando os ninhos de amastigotas nos seus corações, fígados e músculos esqueléticos. Em experimentos conduzidos com células Vero, os nitrosilos trans-[Ru(NO)(NH3)4imN](BF4)3, cis-[Ru(NO)(bpy)2imN](PF6)3 e o RuBz foram capazes de eliminar as formas intracelulares do T. cruzi e reduzir a porcentagem de células infectadas. Portanto, todos os dados observados sugerem a maior solubilidade em água somada à acessibilidade do potencial de redução do par NO2/NO3.- no RuBz são os responsáveis pela maiores atividades anti-proliferativa e tripanocida com respeito ao Bz ou Vg. Adicionalmente, cis-[Ru(NO)(bpy)2imN](PF6)3, cis-[Ru(NO)(bpy) 21-miN](PF6)3 e cis-[Ru(NO)(bpy) 2SO3]PF6 provaram ser capazes de inibir a atividade catalítica da gGAPDH de 89-97% a uma concentração de 260 &micro;mol L-1, enquanto os complexos da série trans-[Ru(NO)(NH3)4L]n+, os precursores cis-[Ru(bpy) 2L(NO2)]n+, cis-[Ru(H2O)(bpy) 2L]n+ bem como os complexos RuBz, cis-[Ru(NO)(NH3)4 (NO2)]Cl2 não exibiram atividade inibitória significativa. / A novel and promising chemotherapeutic alternatives for the treatment of Chagas\' disease by use of ruthenium tetraammnine complexes as a carrier of nitric oxide (NO) or Benznidazole (Bz) are presented herein. The results showed that the trans- [Ru(NO)(NH3)4L]n+ and cis-[Ru(NO)(bpy) 2L] n+ compounds are more efficient in the treatment of acute cases of the disease (mouse model) than free Bz. The trans- [Ru(NO)(NH3)4isn](BF4)3, trans-[Ru(NO)(NH3)4imN](BF4)3, cis- [Ru(NO)(bpy) 2imN](PF6)3, and cis-[Ru(NO)(bpy) 2SO3]PF6 are able to eliminate, in vivo, extracelullar as well as intracellular forms of T. cruzi in the bloodstream and myocardium tissue and to assure the survival of 60-100% of infected mice at doses of 900 (400 nmol kg-1) up to 3,850 fold smaller (100 nmol kg-1) than that considered the optimal dose for Bz (385 &micro;mol kg-1 = 100 mg kg-1). Furthermore, a dose of trans-[Ru(NO)(NH3)4imN](BF4)3 or cis-[Ru(NO)(bpy) 2imN](PF6)3 ten-fold smaller than that recommended by World Health Organization (WHO) for gentian violet, Vg, a phenyl methane currently recommended by WHO in the treatment of blood banks in endemic and non-endemic areas to prevent the transmission of Chagas\' disease by blood transfusion, is able to lyses 100% of the parasites after 1 hour of incubation. The tests conducted in vitro demonstrated that the NO liberated upon reduction of these nitrosyls is responsible for the observed antiproliferative and trypanocidal activities. The trans-[Ru(NO)(NH3)4isn](BF4)3 (IC50epi = 67 &micro;mol L-1) was found to be more efficient than the classic NO-donor, sodium nitroprusside (SNP) (IC50epi = 244 &micro;mol L-1) and trans-[Ru(NO)(NH3)4imN](BF4)3 and cis-[Ru(NO)(bpy) 2imN](PF6)3 (IC50try = 52 and 58 &micro;mol L-1, respectively) were more efficient than the gentian violet (IC50try = 536 &micro;mol L-1). The Bz carrier, trans-[Ru(Bz)(NH3)4S(IV)] n+, S(IV) = SO2, HSO3 - or SO3 -2 (RuBz), is more hydrosoluble and more active (IC50try/1h = 79 &plusmn;?3 &micro;mol L-1) than free Bz (IC50try/1h = 4,800 &plusmn;?70 &micro;mol L-1). This complex exhibits low acute citotoxicity in vitro (IC50trysplenocytes &gt; 1 mmol L-1) and in vivo (400 &micro;mol kg-1 &lt; LD50try &lt; 600 &micro;mol kg-1) and the formation of hydroxylamine is more favorable in RuBz than in Bz by 9.6 Kcal mol-1. In murine acute models of Chagas\' disease, RuBz also was more active than Bz even when only one dose was administrated. Moreover, RuBz at a thousand-fold smaller concentration than the considered optimal dose for Bz proved to be sufficient to protect all infected mice, eliminating the amastigotes nests in their hearts, livers, and skeletal muscles as observed in H?E micrographics. Experiments conduced with infected Vero cells, the trans- [Ru(NO)(NH3)4imN](BF4)3, cis-[Ru(NO)(bpy) 2imN](PF6)3, and RuBz are able to eliminate the intracellular forms of T. cruzi and to reduce the percentage of infected cells. In all, the observed data strongly suggest that the higher solubility in water and accessibility for reduction of NO2/NO2 .- couple in RuBz are responsible for higher antriproliferative and trypanocidal activities regarding to Bz or Vg. Additionally, the cis- [Ru(NO)(bpy) 2imN](PF6)3, cis-[Ru(NO)(bpy) 21-miN](PF6)3, and cis- [Ru(NO)(bpy) 2SO3]PF6 proved to be able to inhibit the catalytic activity of gGAPDH of 89-97% at a concentration of 260 &micro;mol L-1, whereas their precursors cis- [Ru(bpy) 2L(NO2)]n+ and cis-[Ru(H2O)(bpy) 2L]n+ and the trans-[Ru(NO)(NH3)4L] 3+ and cis-[Ru(NO)(NH3)4 (NO2)]Cl2 nitrosyls and RuBz complex do not exhibited significative inhibition.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-11-26Bitstream added on 2014-06-13T19:36:15Z : No. of bitstreams: 1 rossi_lrl_me_arafcf.pdf: 682047 bytes, checksum: 215bd6a830c595069af77cb75cbaee6d (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Este estudo visou mensurar formas tripomastigotas e epimastigotas de Trypanosoma cruzi das cepas Bolívia, QM2, S.I.9 e Y por meio de microscópio óptico acoplado a um analisador de imagens e programa Leica QWin. Para tanto utilizou-se os parâmetros definidos por DIAS, FREITAS FILHO (1943) e BARRETO (1965): distâncias da extremidade posterior ao meio do núcleo (PN), do meio do núcleo à extremidade anterior do corpo (NA), comprimento do flagelo (FL), comprimento total (T), largura (L), Área do Cinetoplasto (AC), Área do Núcleo (NA) e Índice Nuclear (IN). Mensurou-se 360 formas tripomastigotas sanguíneas, 120 formas epimastigotas de meio de cultura LIT e 120 formas epimastigotas de fezes de triatomíneo de T. cruzi de cada uma das cepas Bolívia, QM2, S.I.9 e Y. Os oito parâmetros definidos para caracterização das formas tripomastigotas sanguíneas foram mensurados anteriormente ao pico de parasitemia, durante o pico e posteriormente ao pico de parasitemia para as formas tripomastigotas sanguíneas. As quatro cepas de T. cruzi mostraram percentual distinto de formas finas, intermediárias e largas das formas tripomastigotas sanguíneas. De acordo com os parâmetros morfométricos as formas foram classificadas em fina, intermediária e larga no que se refere à largura e curta, intermediária e longa com relação ao comprimento. As mensurações das formas tripomastigotas sanguíneas de T. cruzi das cepas Bolívia, QM2, S.I.9 e Y quanto a largura mostraram os seguintes resultados: as formas finas variaram entre 0,6 e 1,3μm; intermediárias entre 1,4 e 2,1μm; largas entre 2,2 e 5,5μm. Quanto ao comprimento total obtevese para a forma curta variação entre 13,5 e 19,5μm; para a forma intermediária entre 19,6 e 24,7μm; para a forma longa entre 24,8 e 43,8μm. As formas epimastigotas de meio de cultura LIT apresentaram... / This study aimed the measurement of trypomastigotes and epimastigote of Trypanosoma cruzi from Bolivia strains, QM2, S.I.9 and Y by means of an optical microscope coupled to an image analyses program called Leica QWin. The following parameters defined for DIAS, FREITAS FILHO (1943) & BARRETO (1965) were used for these measurements: distance from the posterior extremity to the middle of the nucleus (PN), from the middle of the nucleus to the anterior extremity of the body (NA), flagellum length (FL), total length (T), width (L), kinetoplast area (AC), nucleus area (NA) and nuclear index (IN). 360 blood-stream forms were measured, 120 epimastigote forms in the LIT culture mean and 120 epimastigote forms from triatomine feces of T. cruzi for each of the Bolivia strains, QM2, S.I.9 and Y. All eight defined parameters for trypomastigote forms characterization were measured before the parasitemia peak, during the peak and after the parasitemia peak. The four T. cruzi strains showed to be distinct when comparing the percentage in the thin, intermediary and large forms of trypomastigotes. According the morphometric parameters the forms were classified as thin, intermediary and wide regarding width, and short, intermediary and long regarding length. The measurements of trypomastigote blood stream forms of T. cruzi from Bolivia strains QM2, S.I.9 and Y regarding width showed the following results: the thin form varied from 0.6 to 1.3μm; the intermediary from 1.4 to 2.1μm; wide from 2.2 to 5.5μm. Now the total length obtained for the short form varied from 13.5 to 19.5μm; for the intermediary form from 19.6 to 24.7μm; for the long form from 24.8 to 43.8μm. The epimastigote forms in the LIT culture mean presented the following measurements related to width: thin forms between 1.1 and 1.7μm, intermediary forms between 1.8 and 2.8μm.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-15Bitstream added on 2014-06-13T20:10:37Z : No. of bitstreams: 1 passerini_gd_me_araiq.pdf: 4904889 bytes, checksum: a03820e82034febca766f16641869554 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O protozoário hemoflagelado, Trypanosoma cruzi, transmitido principalmente pelo inseto triatomíneo, por infecção congênita ou por transfusão sanguínea, causa a tripanossomíase americana ou doença de Chagas, como é mais conhecida. Essa é uma séria doença parasitária que ocorre na América Latina, com considerável impacto social e econômico. Dois medicamentos, nifurtimox e benzonidazol, são indicados no tratamento de pessoas infectadas, mas são pouco eficientes na fase aguda e praticamente ineficientes na fase crônica. Devido a esses fatores, é de extrema importância que se encontre um novo e eficiente agente quimioterápico e/ou quimiopreventivo. Neste trabalho, foi investigada a atividade de extratos, frações, substâncias puras e semi-sintéticas de diferentes espécies da Família Piperaceae na presença das formas epimastigotas da cepa Y do T. cruzi; as substâncias que se apresentaram ativas, também foram analisadas nas cepas NCS e Bolívia. Além disso, observaram-se as possíveis modificações morfológicas que essas substâncias poderiam causar nos parasitos, bem como um possível local de sua atuação e uma análise preliminar de sua citotoxicidade, quando na presença de macrófagos de camundongos isogênicos. A eficácia dessas substâncias foi avaliada pelo método colorimétrico utilizando a redução do MTT [3-(4,5-dimethylthiazol- 2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] em formazan, produzido pela atividade da enzima succinato desidrogenase da mitocôndria. Os cristais de formazan formados, depois de dissolvidos, foram determinados espectrofotometricamente. Os resultados encontrados foram proporcionais às atividades metabólicas das células (parasitos e/ou macrófagos), sendo o IC50 (metade da concentração inibitória máxima) calculado por regressão linear para cada substância. Intensas modificações morfológicas foram observadas nos parasitos... / The hemoflagellate protozoan, Trypanosoma cruzi, transmitted by triatominae bugs, congenital route or blood transfusion, causes American trypanosomiasis or Chagas’ disease, as it is more known. This is a serious parasitic disease which occurs in Latin America, as a considerable social and economic impact. Two drugs, nifurtimox and benznidazol, had been evaluated in the treatment of infected people, but they have low tolerance in the acute phase and practically inefficient in the chronic phase. Because of these considerations, it is important to search for new more efficient chemopreventive and chemotherapeutic agents. In this work, we have been investigating the activity of crude extracts, fractions, pure and halfsynthetic substances from different species of the Piperaceae Family in the presence of the epimastigote forms from T. cruzi Y strain; the samples which presented some activity also were analyzed in NCS and Bolívia strains. Moreover, we observed morphological modifications that some samples can make in the parasites, as well as a possible action site and a preliminary analysis of their citotoxicity, when in the presence of isogenic mice macrophages (Balb/c and C57/Black). The efficacy of these samples was also measured using the reduction of MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] into a stained formazan product by the mitochondrial enzyme succinate dehydrogenises activity. The crystals of formazan formed, after dissolved, had been determined spectrophotometrically. The results were proportional to the metabolic activity of the cells (parasites and/or macrophages), being the IC50 (half of the maximum inhibitory concentration) calculated by linear regression for each sample. Intense morphological modifications were observed in the parasites after a determined time of incubation, confirming the toxic activity of some substances. However, it seems... (Complete abstract click electronic access below)