Os isópodos terrestres possuem uma cutícula protetora que mantém a forma corporal, permite locomoção e comunicação com o ambiente e protege contra dessecação, infecção e predação. Assim como nos demais crustáceos, a cutícula é composta por uma matriz orgânica que é mineralizada com cálcio. A cutícula é uma estrutura versátil que reflete adaptações ambientais e a ampla distribuição geográfica do grupo. Dessa forma, a ultraestrutura e a composição da cutícula variam entre espécies. Isópodos terrestres fazem mudas frequentes ao longo da vida para crescer e/ou renovar receptores de superfície, o que resulta em reabsorção e deposição cuticular constante. Esse grupo apresenta muda bifásica e deposição de placas de cálcio nos esternitos anteriores antes da ecdise como estratégia para reciclar o cálcio corporal. Estudos relacionados à cutícula nesse grupo contemplam a ultraestrutura, a composição e a deposição bem como o efeito de alguns fatores ambientais na muda. No entanto, poucos estudos exploram as ligações entre ecomorfologia e história de vida. Essa tese visa explorar diversos aspectos relacionados à cutícula e a muda de duas espécies neotropicais de isópodos terrestres. Atlantoscia floridana e Balloniscus glaber foram usados como modelo uma vez que são frequentemente encontrados nas mesmas localidades e diferem em tipo ecomorfológico e estratégias ambientais. No Capítulo I, foram exploradas as estruturas de superfície e a ultraestrutura da cutícula das duas espécies a fim de ver como as diferenças encontradas podem ser relacionadas à história de vida de cada espécie, utilizando técnicas de microscopia. As espécies diferiram em tipo e disposição das estruturas de superfície bem como em espessura e proporção de camadas da cutícula. De maneira geral, as diferenças das estruturas de superfície estão relacionadas à seleção de microhabitat e nicho ecológico. Características cuticulares ajudam a explicar o hábito endógeno de B. glaber e epígeo de A. floridana enquanto que as diferenças em ultraestrutura são relacionadas a estratégias comportamentais e tolerância ambiental. No Capítulo II, o efeito do cálcio alimentar no ciclo de muda das espécies foi testado. Para isso, dieta experimental e análise estrutural da cutícula foram realizadas a fim de entender como diferentes concentrações de cálcio alimentar interferem na duração do ciclo de muda. Peculiaridades na ecdise em A. floridana refletem morfologia específica do animal. A duração da intramuda foi maior em B. glaber assim como a sobrevivência média nos tratamentos. A duração do ciclo de muda foi influenciada pela concentração de cálcio; uma tendência a menor duração do ciclo com o aumento da concentração de cálcio foi observada em B. glaber, enquanto em A. floridana a diferença encontrada foi apenas entre o controle sem cálcio e os demais tratamentos. Não houve efeito da dieta no grau de mineralização ou na ultraestrutura em B. glaber. Independentemente do tratamento, a maior taxa de mortalidade em laboratório parece estar relacionada com o próprio processo de ecdise, com mortalidade acumulada de 20% do início da ecdise até o início da pós-muda para ambas as espécies. No Capítulo III, a secreção da cutícula durante a pré- e pós-muda muda foi observada utilizando microscopia de transmissão. A deposição seguiu o padrão observado para outros isópodos. Entretanto, grânulos eletrondensos presentes no espaço ecdisial durante a pré-muda são provavelmente constituídos de cálcio, sugerindo a reciclagem de cálcio diretamente da cutícula velha para a nova no mesmo segmento. Esses grânulos são depositados nas escamas na nova epicutícula antes da ecdise, sugerindo a presença de cálcio na superfície cuticular das espécies. Além disso, regiões sem a ultraestrutura típica encontrada na pós-muda indicam que há modificação na exocutícula após a ecdise uma vez que a expansão e endurecimento da nova cutícula apenas após a ecdise. De maneira geral, esse trabalho não apenas trouxe novas informações sobre a estrutura cuticular de duas espécies neotropicias, mas também contribuiu para esclarecer conexões entre ecomorfologia e requerimentos biológicos de isópodos terrestres. / Terrestrial isopods have a protective cuticle that maintains body shape, allows locomotion, enables communication with the environment and protects them against desiccation, infection and predation. As in all crustaceans, their cuticle is composed of an organic matrix that is mineralized with calcium. The cuticle is highly versatile reflecting adaptations to environmental conditions and large geographical distribution of this group. Therefore, cuticle ultrastructure and composition vary among species. Terrestrial isopods molt frequently throughout their lives in order to grow and/or renew surface receptors, resulting in constant cuticular resorption and deposition. In this group, this dynamics of cuticle formation is affected by the biphasic molt and by the calcium deposition on sternal deposits prior ecdysis, strategies to recycle body calcium. Studies related to cuticle on this group include ultrastructure, composition and deposition as well as effect of some environmental factors on molting. However, few studies explore connections of ecomorphology and life history of animals. This thesis aimed to explore various aspects of cuticle structure and molting using two Neotropical species of terrestrial isopods. Atlantoscia floridana and Balloniscus glaber were used as models since they are found in the same locations while differing in ecomorphology and behavioral strategies. In Chapter I, I explored the cuticle surface structures and ultrastructure of both species to see how their differences can be related to each species life history traits, using microscopy techniques. Species differed in surface structures type and disposition, as well as cuticle thickness and layer proportion. Overall, differences in surface structure are related to microhabitat selection and ecological niche. Cuticular features further explain the endogeic habit of B. glaber and epigeic habit of A. floridana, while differences in cuticle ultrastructure relate to behavioral strategies and environmental tolerance. Next, differences on molting cycle and environmental requirements were analyzed. In Chapter II, I tested the effects of dietary calcium on the molting cycle of both species. For that, artificial diet and structural analysis of the cuticle were used to understand how different concentrations of dietary calcium interfere with molt cycle duration. Peculiarities were observed during ecdysis in A. floridana and reflect to specific morphology of the species. Intramolt duration was longer for B. glaber as well as overall survivorship in treatments. Cycle duration was influenced by calcium concentration; a trend of shorter molt cycle length with increasing calcium concentration was observed for B. glaber, while in A. floridana, only difference between control without calcium and other treatments was observed. Degree of mineralization and cuticle ultrastructure of B. glaber showed no difference between treatments. Regardless of treatment or species, higher mortality rate under lab conditions seems to be related to the process of ecdysis itself, with cumulative mortality of 20% from the beginning of ecdysis until the beginning of postmolt. In Chapter III, I used transmission electron microscopy to analyze cuticle secretion in both species during pre- and postmolt stages. Cuticle deposition during premolt followed the same pattern as other terrestrial isopods. Nonetheless, electron dense granules present on the ecdysial space during premolt are likely calcium granules, suggesting the recycling of calcium within the same segment. These granules are deposited on the scales of the new epicuticle prior ecdysis, suggesting the presence of calcium on the cuticular surface of both species. Moreover, regions without typical lamellate ultrastructure during postmolt indicate modification of the exocuticle after ecdysis since expansion and hardening must occur after ecdysis. Overall, this work not only added information on cuticular structure of two Neotropical species but also clarified connections between ecomorphology and biological requirements of terrestrial isopods.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Desordens do sistema renal podem ser as causas da hipertensão arterial, a qual pode, por sua vez, causar doenças renais. A pressão sanguínea elevada é muito comum também nas doenças crônicas dos rins, e é, além disso, um conhecido fator de risco para uma mais rápida progressão da falha renal. A incidência de doenças renais crônicas está aumentando no mundo, e há uma grande necessidade de identificar as terapias capazes de deter ou reduzir a progressão da doença. Há crescente evidência de que as estatinas poderiam desempenhar um papel terapêutico. Além disso, tem sido demonstrado que a atividade física melhora a função renal em pacientes. Estudos ultra-estruturais em humanos e em ratos demonstraram a presença de junções gap dentro de todas as células do glomérulo e os podócitos demonstraram conter principalmente conexina-43 (Cx-43). O presente estudo tem como objetivo observar os efeitos da rosuvastatina e da atividade física de baixa intensidade na estrutura e ultra-estrutura renal e na expressão glomerular de Cx-43 em ratos normotensos (WKY) e em ratos espontaneamente hipertensos (SHR). Os ratos foram divididos aleatoriamente em oito grupos: WKY-C: animais normotensos que não receberam rosuvastatina; WKY-ROS: animais normotensos que receberam rosuvastatina 20mg/kg/dia por gavagem orogástrica; SHR-C: animais hipertensos que não receberam rosuvastatina; SHR-ROS: animais hipertensos que receberam rosuvastatina, como descrito no grupo WKY-ROS; SED-WKY: animais normotensos sedentários; EX-WKY: animais normotensos exercitados; SED-SHR: animais hipertensos sedentários; e, EX-SHR: animais hipertensos exercitados. Os animais dos grupos SHR-C, SHR-ROS e SED-SHR apresentaram níveis de pressão arterial maiores que os animais dos grupos WKY-C, WKY-ROS, SED-WKY, EX-WKY e EX-SHR. A massa corporal dos grupos de animais não diferiram significativamente durante o experimento. Não houve diferença nos níveis sanguíneos de uréia, creatinina, ácido úrico e creatinafosfoquinase entre os animas dos grupos estudados. No entanto, houve um aumento da excreção de proteína de 24 horas nos animais do grupo SHR-C. Houve um aumento na área capsular nos animais do grupo SHR-C. Por microscopia eletrônica de transmissão observou-se que nos animais SHR-C e SED-SHR a barreira de filtração glomerular, o diafragma de fenda e os podócitos estão alterados exibindo os vacúolos nos podócitos e pedicelos mais curtos e mais espessos. Por microscopia eletrônica de varredura, os animais SHR-C e SED-SHR exibiram pedicelos mais afilados, curtos e tortuosos. Um aumento da imunofluorescência para Cx-43 foi observada em células epiteliais viscerais dos glomérulos dos animais do grupo WKY-ROS e nas células parietais e viscerais dos glomérulos dos animais do grupo SHR-ROS, se comparado com os grupos WKY-C e SHR-C. Por outro lado, os animais dos grupos SED-SHR e EX-SHR exibiram diminuição da expressão de Cx-43, comparados aos animais SED-WKY e EX-WKY. Em conclusão, podemos supor que os efeitos renais da rosuvastatina e da atividade física de baixa intensidade podem ser ferramentas terapêuticas para melhorar a estrutura e conseqüentemente a função renal em indivíduos hipertensos / Disorders of the renal system may be the cause of hypertension, which can in turn cause kidney disease. The high blood pressure is also very common in chronic kidney diseases, and is also a known risk factor for faster progression of renal failure. The incidence of chronic kidney disease is increasing worldwide, and there is a great need to identify therapies to stop or slow the progression of the disease. There is growing evidence that statins could play a therapeutic role. Moreover, it has been shown that physical activity improves renal function in patients. Ultrastructural studies in humans and rats have shown the presence of gap junctions in all cells of the glomerular podocytes and also to contain mainly connexin-43 (Cx-43). This study aims to observe the effects of rosuvastatin and low-intensity physical activity on the structure and ultrastructure of kidney and glomerular expression of Cx-43 in normotensive rats (WKY) and spontaneously hypertensive rats (SHR). The rats were randomly divided into eight groups: WKY-C: normotensive animals not receiving rosuvastatin, WKY-ROS: normotensive animals that received rosuvastatin 20mg/kg/day by orogastric gavage, C-SHR: hypertensive animals not receiving rosuvastatin; SHR -ROS: hypertensive rats that received rosuvastatin, as described in ROS-WKY group, WKY-SED: sedentary normotensive, WKY-EX: normotensive rats exercised, SHR-SED: sedentary hypertensive rats, and EX-SHR: hypertensive rats exercised . The animals in groups C-SHR, SHR-SED and SHR-ROS had blood pressure levels higher than the animals in groups WKY-C, ROS-WKY, WKY-SED, EX-SHR and EX-WKY. The body mass of groups of animals did not differ significantly during the experiment. There was no difference in urea, creatinine, uric acid and creatine phosphokinase blood levels among animals of the studied groups. However, there was an increased excretion of 24 hours protein in SHR-C group. There was an increase in the capsule in group SHR-C. Transmission electron microscopy showed that in SHR-C and SED-SHR glomerular filtration barrier, the slit diaphragm and podocyte were altered. By scanning electron microscopy, the C-SHR and SED-SHR animals exhibited thinner, shorter and more tortuous pedicels. An increase in immunofluorescence for Cx-43 was observed in visceral epithelial cells of the glomeruli of group and in WKY-ROS and in visceral and parietal cells of the glomeruli of SHR-ROS group, compared with WKY-C and SHR- C. On the other hand, SHR-SED and EX-SHR animals exhibited decreased expression of Cx-43 compared with WKY-SED and EX-WKY animals. In conclusion, we can assume that the renal effects of rosuvastatin and low-intensity physical activity can be therapeutic tools to improve the structure and consequently renal function in hypertensive subjects

Submitted by Fernando Cesar Silva Junior null (ju_fcsj@hotmail.com) on 2016-03-11T04:12:41Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Fernando_Online.pdf: 4129284 bytes, checksum: 6fbd44eda2ee6b9b62753d8e00cd09a5 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-03-14T17:46:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silvajunior_fc_me_sjrp.pdf: 4129284 bytes, checksum: 6fbd44eda2ee6b9b62753d8e00cd09a5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-14T17:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silvajunior_fc_me_sjrp.pdf: 4129284 bytes, checksum: 6fbd44eda2ee6b9b62753d8e00cd09a5 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Heteroptera é uma Subordem da Ordem Hemiptera, que possui cerca de 40 mil espécies distribuídas em oitenta famílias, dentre elas está a família Pentatomidae que se destaca por ser uma das maiores famílias com cerca de 4.100 espécies, representando, aproximadamente, 11% do total de espécies de Heteroptera. As espécies de Pentatomidae Chinavia impicticornis, Edessa meditabunda, E. collaris e Thyanta perditor foram estudadas nesse trabalho devido ao sua importância econômica, tendo em vista que são espécies fitófagas que causam grandes perdas em diversas culturas. Os machos das espécies foram coletados na região de São José do Rio Preto, os testículos foram fixados e posteriormente processados para analise em microscopia eletrônica de transmissão, os blocos obtidos foram trimados, cortados, contrastados e analisados com microscópio eletrônico de transmissão Leo – Zeiss, do Centro de Microscopia e Microanálise (IBILCE-UNESP, São José do Rio Preto, SP) e com o microscópio eletrônico de transmissão Jeol JEM - 100 CXII da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP-USP). As eletromicrografias das espécies estudadas apresentaram características ultraestruturais semelhantes às encontradas para diversos indivíduos de diferentes ordens, dentre essas características estão a formação do acrossomo, a partir de uma grande vesícula secretada pelo complexo de Golgi e que se localiza na região apical/lateral do núcleo. O núcleo, também, sofre transformações semelhantes às relatadas para grande parte dos insetos passando de um estado grande e esférico com a cromatina dispersa para um estado pequeno e fusiforme e com a cromatina extremamente condensada. Outra estrutura observada foi o adjunto do centríolo que se mostrou uma estrutura eletrondensa na região basal do núcleo. Também foi observada a migração das mitocôndrias para um polo celular e sua posterior fusão formando o complexo mitocondrial ou “Nebenkern”, que, posteriormente, se divide formando os dois derivados mitocondriais simétricos, com a presença de estruturas paracristalinas em seu interior. O padrão de microtúbulos encontrado no axonema, para todas as espécies, foi de 9+9+2, típico de insetos, sendo formado entre os derivados mitocondriais e acompanhado por estes ao longo de quase toda sua extensão. Morfologicamente, os derivados mitocondriais são diferentes entre C. impicticornis, E. meditabunda, E. collaris e T. perditor onde foi possível notar que os derivados de C. impicticornis se apresentaram grandes e arredondados, E. meditabunda pequenos e arredondados, E. collaris alongados e com extremidades arredondadas e T. perditor pequenos com uma extremidade arredondada e a outra angular podendo estas diferenças morfológicas serem características interessantes para futuros estudos filogenéticos ou sistemáticos para o grupo. Portanto, podemos concluir que a maioria das características analisadas é semelhante entre os insetos, com exceção da morfologia dos derivados mitocondriais que são diferentes, até mesmo, entre as espécies da família Pentatomidae. / Heteroptera is a suborder of the Hemiptera order, which has approximately 40,000 species distributed in eighty families, among them is the Pentatomidae family that stands out for being one of the largest families with approximately 4,100, representing approximately 11% of the total species of Heteroptera. The species of Pentatomidae Chinavia impicticornis, Edessa meditabunda, E. collaris and Thyanta perditor were studied in this work because of their economic importance, given that they are phytophagous species that cause great losses in several crops. Males of the species were collected in the region of São José do Rio Preto, the testes were fixed and then processed for analysis by transmission electron microscopy, the obtained blocks were trimmed, cut, contrasted and analyzed with transmission electron microscope Leo - Zeiss, of the Centro de Microscopia e Microanálise (IBILCE-UNESP, São José do Rio Preto, SP) and the transmission electron microscope Jeol JEM - 100 CXII of Faculdade de Medicina of Ribeirão Preto (FMRP-USP). The species have similar ultrastructural characteristics to those found in many individuals of different orders, among these features is the acrosome formation from a large vesicle secreted by Golgi apparatus and located in the apical/lateral area of the nucleus. The nucleus also undergoes changes similar to those reported for most insects, passing of a great and spherical state with chromatin dispersed to a small and fusiform state and highly condensed chromatin. Another structure was observed the centriolar adjunct that showed electrodense structure in the basal region of the nucleus. We also observe the migration of mitochondria for the cell and its subsequent fusion was observed forming the mitochondrial complex or “Nebenkern”, which later splits to form two symmetrical mitochondrial derivatives, with the presence of paracrystalline structures inside. The pattern of microtubules found on the axonema, for all species was 9+9+2, typical of insects, being formed between the mitochondrial derivatives and accompanied by such over almost its entire length. Morphologically, the mitochondrial derivatives are different between C. impicticornis, E. meditabunda, E. collaris and T. perditor where it was possible to note that C. impicticornis derivatives showed large and rounded, E. meditabunda small and rounded, E. collaris elongated and rounded ends and T. perditor smaller with one rounded end and the other angled being able these morphological differences are interesting features for future phylogenetic or systematic studies for the group. Therefore, we can conclude that the analyzed characteristics are most similar among the insects, with the exception of the morphology of the mitochondrial derivatives which are different even among the species of the Pentatomidae family.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-11Bitstream added on 2014-06-13T19:05:28Z : No. of bitstreams: 1 motheo_tf_dr_jabo.pdf: 1420704 bytes, checksum: de5c6be1107a0e6fcda8a993e1569d8c (MD5) / Relativamente ao uso de técnicas de reprodução assistida em canídeos, a maturação e a fertilização in vitro (MIV) e (FIV), tem como principal objetivo a preservação do genoma dos canídeos ameaçados de extinção. Entretanto, os meios de cultivo empregados para maturação são adaptações de metodologias adotadas para outras espécies. Inúmeros estudos avaliaram a suplementação dos meios com gonadotrofinas, estrógeno, progesterona, antioxidantes, proteínas e entre outros, porém, nenhum deles releva a ação seriada de hormônios sobre a maturação de oócitos caninos. Deste modo, o objetivo do presente estudo foi o de avaliar os efeitos da suplementação seriada do meio de maturação com gonadotrofina coriônica humana (hCG) e progesterona (P4), em diferentes momentos do processo de MIV de oócitos caninos. Vinte e três cadelas, com idades entre 1 a 7 foram selecionadas por meio de citologia vaginal, dosagem de progesterona e agrupadas em dois grupos: Fase Folicular (n=12) e Fase Não FolicularDiestro (n=11). Os ovários foram obtidos durante o procedimento de ovariohisterectomia (OH) e somente complexos cumulus-oócito (COCs) grau 1 e diâmetro superior a 120 μm foram selecionados. A avaliação foi feita por meio de microscopia eletrônica de varredura (MEV) e transmissão (MET), antes e após o período de cultivo in vitro por 96h em 5 meios: I (hCG + P4 durante 96 h), II (hCG nas primeiras 48 h de MIV), III (hCG nas primeiras 48h e P4 após 48h), IV (P4 após 48h de MIV) e V (sem suplementação durante 96h de MIV). Os resultados revelaram que a morfologia, assim como a ultraestrutura oocitárias não são afetadas pela fase do ciclo estral. Entretanto, oócitos da fase folicular quando submetidos ao processo de MIV em meios suplementados com hormônios são mais sensíveis e responsivos a sua ação, quando comparados... / On the use of assisted reproduction techniques in dogs, in vitro, maturation (IVM) and fertilization (IVF) has the main goal to preserve the genome of endangered canids. However, the culture media used for maturation are adapted from those used in other species. Numerous studies evaluated the supplementation with gonadotropins, estrogens, progesterone, antioxidants and proteins on the IVM media, however none of them assessed the effects of a bi-phasic human chorionic gonadotropin (hCG) and progesterone (P4) supplementation on in vitro maturation media of canine oocytes. Thus, the aim of the present study was to evaluate the effects of a bi-phasic system using human chorionic gonadotrophin (hCG) and progesterone (P4) on IVM media of canine oocytes. Twenty-three female dogs, including 12 from follicular phase (FF) and 11 from non-folicular phase (FN) aged 1-7 years underwent ovariohysterectomy (OH). After the procedure, the ovaries were sliced and cumulus-oocyte complexes (COCs) released. Only COCs grade 1, with diameter greater than 120 μm were selected. Scanning electron microscopy (SEM) and transmission (TEM) were carried out before and after 96h of in vitro maturation (IVM) in 5 different culture media: I (TCM-199 + hCG + P4 for 96 h), II (TCM -199 + hCG within 48h of IVM), III (TCM-199 + hCG in the first 48h and after 48h P4), IV (TCM-199 + P4 after 48h of IVM) and V (no hormone supplementation during 96h of IVM. The results revealed that the oocyte morphology and ultrastructure are not affected by the phase of the estrous cycle. However, follicular phase oocytes undergoing IVM are more sensitive and responsive to hormonal supplementation of the IVM media when compared to oocytes from the non-follicular phase. The association or the bi-phasic human chorionic gonadotropin (hCG) and... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-25Bitstream added on 2014-06-13T20:49:44Z : No. of bitstreams: 1 remedio_rn_me_rcla.pdf: 6045362 bytes, checksum: b200e2d82d3a5807c249841374c8c9b4 (MD5) / O diabetes mellitus resulta de uma complexa interação entre vários graus de susceptibilidade genética e fatores ambientais. Sua principal característica é a secreção deficiente de insulina (hipoinsulinemia), ou ainda a baixa sensibilidade dos tecidos periféricos a este hormônio, fatos que resultam em uma elevação característica nos níveis de glicose no sangue (hiperglicemia). O diabetes tipo I caracteriza-se pela hipoinsulinemia, sendo acompanhado por alterações metabólicas e bioquímicas, além de prejuízos morfológicos em diversos tecidos, como o fígado e o intestino grosso. A prática regular de exercícios é reconhecida como um fator preventivo muito importante para os casos de diabetes, aumentando a sensibilidade e resposta à insulina e diminuindo sua necessidade em indivíduos diabéticos. A fim de analisar estas alterações, ratos Wistar foram distribuídos em quatro grupos: controle sedentário (CS), controle treinado (CT), diabético sedentário (DS) e diabético treinado (DT). O diabetes foi induzido por aloxana monoidratada Sigma. Amostras de fígado e intestino grosso foram coletadas para a realização de técnicas histoquímicas e ultraestruturais. Desta forma, este estudo teve como objetivo principal investigar os prejuízos provenientes do desenvolvimento do diabetes nos tecidos analisados e, a partir desta análise, avaliar os efeitos do treinamento físico na amenização ou prevenção destas alterações. Resultados histoquímicos bastante expressivos foram encontrados no fígado, principalmente em relação ao acúmulo de glicogênio e de fibras colágenas perisinusoidais nas células hepáticas que, após a realização de treinamento físico moderado, atingiram níveis mais próximos dos considerados normais. Os resultados ultraestruturais demonstraram grandes alterações na presença de mitocôndrias e retículo... / Diabetes mellitus results from a complex interaction between various degrees of genetic susceptibility and environmental factors. Its main feature is a deficient insulin secretion (hypoinsulinemia), or the low sensitivity of peripheral tissues to this hormone, facts that result in a characteristic elevation of blood glucose levels (hyperglycaemia). Type I diabetes is characterized by hypoinsulinemia, and is followed by metabolic and biochemical alterations, besides morphological impairment in various tissues, such as liver and large intestine. Regular exercise is recognized as an important preventative factor in cases of diabetes, increasing sensitivity and response to insulin and decreasing its necessity in diabetic individuals. In order to analyze these changes, Wistar rats were divided into four groups: Sedentary Controls (SC), Trained Controls (TC), Sedentary Diabetics (SD) and Trained Diabetics (TD). Diabetes was induced by monohydrate alloxan Sigma. Liver and large intestine samples were collected for carrying out histochemical and ultrastructural techniques. Thus, this study aimed to investigate the damage proceeding from the development of diabetes in the analyzed tissues and evaluate, from this analysis, the effects of physical training in alleviating or preventing these changes. Very promising histochemical results were found in the liver, especially related to the accumulation of glycogen and perisinusoidal collagen fibers in liver cells that, after performing moderate physical training, reached levels near those considered normal. Ultrastructural results showed important variations in the presence of mitochondria and rough endoplasmic reticulum in the cytosol of diabetic rats’ hepatocytes. Slight recovery was observed as result of exercise. Large intestine, in turn, presented significant histochemical changes in the amount of mucin secreted, besides alterations... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-23Bitstream added on 2014-06-13T18:09:03Z : No. of bitstreams: 1 castellar_a_me_rcla.pdf: 1124344 bytes, checksum: 62076c2e9c364651c065bb6d832e396b (MD5) / O Diabetes mellitus, doença que atinge milhões de pessoas em todo o mundo, é considerado um significante fator de risco para o desenvolvimento de problemas cardiovasculares. Caracterizado principalmente pelo quadro de hiperglicemia, o diabetes pode apresentar ainda um conjunto de características que, associadas, contribuem para o surgimento de complicações vasculares e para o aumento do risco de morte por problemas cardíacos independente de outros fatores. Atualmente, o exercício físico regular, juntamente com a insulinoterapia e o planejamento alimentar, tem sido considerada como uma das principais abordagens no tratamento do diabetes tipo I, com o objetivo de aproximar as condições metabólicas do paciente a um estado fisiológico normal, impedindo ou retardando as complicações crônicas do diabetes. Este estudo tem por objetivo avaliar as alterações morfológicas causadas pelo diabetes na musculatura ventricular esquerda de ratos diabéticos, bem como o efeito do exercício físico na recuperação ou prevenção destas alterações. Para isso, foram utilizados ratos adultos da linhagem Wistar divididos em quatro grupos: diabéticos sedentários (DS), diabéticos treinados (DT), controle sedentário (CS) e controle treinado (CT), sendo que os grupos treinados realizaram um protocolo de exercício físico. O diabetes experimental do tipo I foi induzido por meio da aplicação de aloxana monoidratada Sigma® (35 mg/kg de peso corporal) dissolvida em tampão citrato 0,01M, pH 4,5. O protocolo de treinamento consistiu de natação por 60 minutos diários, 5 dias por semana, durante 8 semanas consecutivas com uma carga de 4,8% (para animais diabéticos) e 5,2% (para os animais saudáveis), correspondente à máxima fase estável de lactato. As análises histológicas e histoquímicas mostraram várias alterações morfológicas em decorrência do diabetes experimental... / Diabetes mellitus, a disease that affects millions of people around the world, is considered a significant risk factor for developing cardiovascular problems. Mainly characterized by hyperglycemia, diabetes can also present a set of characteristics wich when associated contribute to the onset of vascular complications and to the increase of the risk of death from heart disease independent of other factors. Currently, regular exercise, along with insulin therapy and meal planning, has been regarded as one of the main approaches in the treatment of type 1 diabetes, aiming to approximate the metabolic conditions of the patient to a normal physiological state, preventing or delaying the chronic complications of diabetes. This study aims to analyse the morphological changes caused by diabetes in the left ventricular muscle of diabetic rats and the effect of exercise on recovery or prevention of these changes. To do this, were used adult male Wistar rats, wich were divided into four groups: diabetic sedentary (DS), diabetic training (DT), sedentary control (SC) and trained control (TC), and the trained groups conducted a protocol of physical exercise. Experimental diabetes type 1 was induced by the application of alloxan monohydrate Sigma® (35 mg / kg body weight) dissolved in citrate buffer 0.01 M, pH 4.5. Training protocol consisted of swimming for 60 minutes daily, 5 days a week for 8 weeks, with a load of 4.8% (for diabetic animals) and 5.2% (for healthy animals), corresponding to the maximal lactate steady state. Histological and histochemical analisys showed morphological changes due to experimental diabetes. It was evident through the hematoxylin-eosin technique tissue disorganization of the ventricular muscle which occurred in DS. However tissue organization was close to normal in DT animals. The PAS reaction was most intense in DS animals, both in the endomysium as in the cytoplasm... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Eduardo Montanari Razza null (32896431829) on 2017-04-24T13:06:14Z No. of bitstreams: 1 Tese_E_M_Razza.compressed.pdf: 2567237 bytes, checksum: 79286963f030ebbfef3c6033007b2f31 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-25T20:37:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 razza_em_dr_bot.pdf: 2567237 bytes, checksum: 79286963f030ebbfef3c6033007b2f31 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-25T20:37:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 razza_em_dr_bot.pdf: 2567237 bytes, checksum: 79286963f030ebbfef3c6033007b2f31 (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Além de permitir a produção em larga escala de embriões, a maturação in vitro (MIV) não utiliza hormônios superestimulatórios, evitando prejuízos econômicos e efeitos iatrogênicos da superestimulação. Entretanto, a MIV ainda está aquém das expectativas devido à incapacidade em simular eventos fisiológicos que ocorrem in vivo. Um artefato da MIV consiste na retomada espontânea da meiose após a remoção do oócito do ambiente folicular. Sem o aparato molecular que retém a meiose, a maturação nuclear ocorre sem o estímulo hormonal fisiológico, impedindo a reorganização adequada das organelas durante a maturação citoplasmática, o que pode comprometer a competência oocitária in vitro. A temática primordial desta tese foi testar um sistema de pré-maturação oocitária (Pré-MIV), no qual dois fármacos (forskolin e 3-isobutil- metilxantina) são utilizados antes da MIV para retardar a meiose. O desempenho da Pré-MIV foi comparado à MIV convencional, em contexto comercial e de pesquisa. Em um primeiro momento, comparamos os sistemas convencional e Pré-MIV de forma holística, ou seja, testamos os sistemas comerciais completos. Aqui, o critério avaliativo foi a análise ultraestrutural de oócitos e blastocistos, e a análise da expressão de 96 genes relacionados à qualidade embrionária. Na segunda abordagem, adaptamos os fármacos da Pré- MIV em nossa MIV rotineira. Por estes fármacos afetarem o metabolismo lipídico, e, frente a importância deste no metabolismo energético celular, a segunda investigação focou na quantificação lipídica de oócitos e blastocistos, além de avaliar o perfil lipídico de membrana dos blastocistos produzidos, dada sua relação com seu potencial de criopreservação. Coletamos amostras de células do cumulus e blastocistos e, respectivamente, verificamos a expressão de 96 genes associados à competência oocitária e 96 genes relacionados à qualidade embrionária. Resultados indicaram que a Pré-MIV afetou a ultraestrutura de oócitos e que o perfil de expressão gênica de blastocistos foi afetado pelo tratamento, mas com variações quanto ao sistema de produção utilizado. Além disso, a Pré-MIV aumentou o conteúdo lipídico de oócitos, mas diminuiu nos blastocistos, afetando positivamente o perfil lipídico de membranas do embrião. Finalmente, a Pré-MIV também afetou a expressão gênica de células do cumulus (positivamente) e de blastocistos (diferencialmente). / Besides allowing for the large-scale in vitro production of embryos, the in vitro maturation (IVM) dismiss the use of superstimulation hormones, preventing excessive financial expenses and avoiding iatrogenic effects of ovarian overstimulation. However, the outcome of IVM is still below expectations due to the inability in simulating the physiological events occurring in vivo. An artifact of IVM consists on the spontaneous resumption of meiosis after oocyte removal from the follicular environment. In this regard, without the molecular apparatus for arresting meiosis, the nuclear maturation is triggered irrespective of the physiological hormonal stimulation. As a result, the cytoplasmic maturation, i.e., the adequate reorganization of organelles in the oocyte is bypassed, compromising the oocyte competence. The general idea in this thesis was to test the pre-maturation system (Pre-IVM), in which two drugs (forskolin and 3- isobutyl-methylxanthine) are used prior to IVM to sustain meiotic arrest. The Pre-IVM performance was compared to the conventional IVM in the context of either commercial routines or research laboratories. At first, we aimed to compare the conventional IVM and the Pre-IVM in a holistic way, i.e., challenging each other using commercial systems. In this approach, we evaluated the ultrastructural aspects of oocytes and blastocysts, and associated with the expression of 96 genes related to embryo quality. In the second approach, we adapted the Pre-IVM drugs in our own IVM. Those drugs are known to affect the lipid metabolism, which is extremely relevant for the cellular energy metabolism in oocytes and embryo. Hence, we focus on the lipid quantification in oocytes and blastocysts, and, in addition, we assessed the membrane lipid profile of the blastocysts, since it is directly related to embryo cryopreservation potential. We collected cumulus cells and blastocysts and assessed the expression of 96 genes of oocyte competence and 96 genes of embryo quality. Results indicated that the Pre-IVM affected oocyte ultrastructure, the gene expression of blastocysts was differentially affected, but there was variation according to the systems used. Also the Pre- IVM increased the lipid content in oocytes and reduced in blastocysts. The membrane lipid profile of blastocysts was positively modulated by the Pre-IVM. Finally, the Pre-IVM affected the gene expression of cumulus (positively) and blastocysts (differentially). / FAPESP: 2012/23409-9 / FAPESP: 2015/02557-8

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Coorientador: Eliandra Antônia Pires Buttler / Coorientador: Maricy Apparício Ferreira / Banca: Ana Paula Coelho Ribeiro / Banca: Idércio Luiz Sinhorini / Banca: Aracélle Elisane Alves / Banca: Naiara Zoccal Saraiva / Resumo: Relativamente ao uso de técnicas de reprodução assistida em canídeos, a maturação e a fertilização in vitro (MIV) e (FIV), tem como principal objetivo a preservação do genoma dos canídeos ameaçados de extinção. Entretanto, os meios de cultivo empregados para maturação são adaptações de metodologias adotadas para outras espécies. Inúmeros estudos avaliaram a suplementação dos meios com gonadotrofinas, estrógeno, progesterona, antioxidantes, proteínas e entre outros, porém, nenhum deles releva a ação seriada de hormônios sobre a maturação de oócitos caninos. Deste modo, o objetivo do presente estudo foi o de avaliar os efeitos da suplementação seriada do meio de maturação com gonadotrofina coriônica humana (hCG) e progesterona (P4), em diferentes momentos do processo de MIV de oócitos caninos. Vinte e três cadelas, com idades entre 1 a 7 foram selecionadas por meio de citologia vaginal, dosagem de progesterona e agrupadas em dois grupos: Fase Folicular (n=12) e Fase Não FolicularDiestro (n=11). Os ovários foram obtidos durante o procedimento de ovariohisterectomia (OH) e somente complexos cumulus-oócito (COCs) grau 1 e diâmetro superior a 120 μm foram selecionados. A avaliação foi feita por meio de microscopia eletrônica de varredura (MEV) e transmissão (MET), antes e após o período de cultivo in vitro por 96h em 5 meios: I (hCG + P4 durante 96 h), II (hCG nas primeiras 48 h de MIV), III (hCG nas primeiras 48h e P4 após 48h), IV (P4 após 48h de MIV) e V (sem suplementação durante 96h de MIV). Os resultados revelaram que a morfologia, assim como a ultraestrutura oocitárias não são afetadas pela fase do ciclo estral. Entretanto, oócitos da fase folicular quando submetidos ao processo de MIV em meios suplementados com hormônios são mais sensíveis e responsivos a sua ação, quando comparados... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: On the use of assisted reproduction techniques in dogs, in vitro, maturation (IVM) and fertilization (IVF) has the main goal to preserve the genome of endangered canids. However, the culture media used for maturation are adapted from those used in other species. Numerous studies evaluated the supplementation with gonadotropins, estrogens, progesterone, antioxidants and proteins on the IVM media, however none of them assessed the effects of a bi-phasic human chorionic gonadotropin (hCG) and progesterone (P4) supplementation on in vitro maturation media of canine oocytes. Thus, the aim of the present study was to evaluate the effects of a bi-phasic system using human chorionic gonadotrophin (hCG) and progesterone (P4) on IVM media of canine oocytes. Twenty-three female dogs, including 12 from follicular phase (FF) and 11 from non-folicular phase (FN) aged 1-7 years underwent ovariohysterectomy (OH). After the procedure, the ovaries were sliced and cumulus-oocyte complexes (COCs) released. Only COCs grade 1, with diameter greater than 120 μm were selected. Scanning electron microscopy (SEM) and transmission (TEM) were carried out before and after 96h of in vitro maturation (IVM) in 5 different culture media: I (TCM-199 + hCG + P4 for 96 h), II (TCM -199 + hCG within 48h of IVM), III (TCM-199 + hCG in the first 48h and after 48h P4), IV (TCM-199 + P4 after 48h of IVM) and V (no hormone supplementation during 96h of IVM. The results revealed that the oocyte morphology and ultrastructure are not affected by the phase of the estrous cycle. However, follicular phase oocytes undergoing IVM are more sensitive and responsive to hormonal supplementation of the IVM media when compared to oocytes from the non-follicular phase. The association or the bi-phasic human chorionic gonadotropin (hCG) and... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Izabel Souza Camargo / Coorientador: Adriane C. Araújo Braga / Banca: Daniela Carvalho dos Santos / Banca: Aparecida do Carmo Zerbo Tremacoldi / Banca: Karina Ribeiro / Banca: Tatiana da Silva Souza / Resumo: O hepatopâncreas dos crustáceos, também conhecido como glândula digestiva, passa por modificações morfo-funcionais em resposta a fatores como dieta, variações de temperatura, ciclo de muda, estágio reprodutivo e contaminação. Este trabalho objetivou analisar, morfologicamente, através de técnicas de microscopia eletrônica e de luz, o hepatopâncreas de fêmeas adultas do camarão-rosa Farfantepenaeus brasiliensis, em dois diferentes estágios de desenvolvimento gonadal, coletadas em Guarapari, Espírito Santo, Brasil, bem como relacionar esta espécie às condições ambientais, comparativamente ao camarão Xiphopenaeus kroyeri. A microscopia eletrônica de varredura evidenciou hepatopâncreas de tamanhos semelhantes nas fêmeas com gônadas desenvolvidas (DE) e naquelas esgotadas (ES), apresentando-se como um órgão não-lobado e recoberto por tecido conjuntivo com poros. Histologicamente, foram identificados cinco tipos celulares nos túbulos: células E (embrionárias), R (reabsortivas), F (fibrilares), B (vesiculares) e M (basais). Comparado às DE, o epitélio hepatopancreático das fêmeas ES mostrou-se mais escamoso, acidófilo, delimitando um amplo lúmen que contem partes das células B e R; nestas, ainda, as células M estiveram mais evidentes. As células R mostraram escassez em organelas, mitocôndrias apicais, vacúolos marcados para polissacarídeos ácidos, além de gotas lipídicas vistas principalmente nas fêmeas ES. As células F, fortemente marcadas pelo azul de bromofenol, apresentaram vesículas de secreção próximas às microvilosidades, retículo endoplasmático rugoso bem desenvolvido, em arranjo circular ou com cisternas dilatadas. As células B foram marcadas pela presença de grandes corpos digestivos com conteúdo polissacarídico neutro, sendo eliminado, posteriormente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The hepatopancreas of crustaceans, also known as the digestive gland, undergoes morphological and functional changes in response to factors such as diet, temperature variations, moult cycle, reproductive stage and contamination. This study aimed to analyze, morphologically, by means of electron and light microscopies, the hepatopancreas of adult females of the pink shrimp Farfantepenaeus brasiliensis at two different stages of gonadal development, collected in the southern coast of Espirito Santo, Brazil, as well as to relate this species to the environmental conditions, compared to Xiphopenaeus kroyeri shrimp. The scanning electron microscopy revealed similar size in the hepatopancreas of females with developed gonads (DE) and those with exhausted gonads (ES). It presents as a non-lobed organ covered by connective tissue with pores. Histologically, five cell types were identified in tubules: E (embryonic), R (reabsorptive), F (fibrillar), B (vesicular) and M (basal). Compared to those DE females, the hepatopancreas from ES females showed a more flattened epithelium, acidophilus and delimiting a large lumen which contains parts of R and B cells; in these, also, the M cells were more evident. R cells showed shortage in organelles, apical mitochondria, vacuoles marked for acid polysaccharides, and lipid droplets seen mainly in female ES. F cells were strongly marked by bromophenol blue and presented secretory vesicles near the microvilli, well-developed rough endoplasmic reticulum in circular arrangement, or even with dilated cistern. B cells were marked by the presence of large digestive bodies with neutral polysaccharide content, being later eliminated inside the tubular lumen. The observed features also allowed us to infer the possible stages of moult in which the shrimps were. Although some... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Tatiane Maria Rodrigues / Resumo: Espécies de Burseraceae são conhecidas pela produção de resina utilizada na produção de incensos, repelentes, impermeabilizantes, medicamentos e cosméticos, além de conferir às plantas proteção contra herbívoros e patógenos. Protium heptaphyllum é uma espécie arbórea produtora de resina aromática com comprovada ação medicinal no tratamento de doenças respiratórias e do trato digestivo, dentre outras. Apresenta grande plasticidade quanto aos ambientes de ocorrência, estando presente em ecossistemas com características contrastantes em diferentes regiões do Brasil. Espaços secretores de resina ocorrem associados ao floema de raiz, caule e folhas, podendo formar uma rede anastomosada no caule. Esse trabalho teve como objetivo analisar os aspectos subcelulares envolvidos na origem, desenvolvimento e funcionamento dos espaços secretores de resina em P. heptaphyllum, além de avaliar a influência do etileno no desenvolvimento do sistema secretor. Amostras de caule jovem foram processadas para análise convencional e citoquímica em microscopia eletrônica de transmissão. Plantas jovens foram mantidas em casa de vegetação e submetidas a diferentes concentrações de Ethephon: 6g L-1 (T1), 12g L-1 (T2), 18g L-1 (T3) e 24g L-1 (T4); amostras de suas folhas e caule foram processadas segundo técnicas usuais em anatomia vegetal. Os canais secretores se originam por esquizogênese e se desenvolvem por esquizolisogênese. As células epiteliais apresentam população de organelas consistente com secr... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Burseraceae species are known for resin production used in the yield of incense, repellent, waterproofing, drugs and cosmetics, and also protect plants against herbivores and pathogens. Protium heptaphyllum is a tree producer of aromatic resin with medicinal action in respiratory and digestive diseases, among others. It occurs in many environments, being present in ecosystems with contrasting characteristics in different regions of Brazil. Resin secretory spaces (SS) occur associated with phloem in root, stem and leaves, and form an anastomosed network in the stem. We aimed to analyze the subcellular aspects involved in the origin, development and functioning of the resin secretory spaces in P. heptaphyllum, besides to evaluate the influence of ethylene on the development of the secretory system. Young stem samples were processed for conventional analysis and cytochemistry in transmission electron microscopy. Young plants were kept in greenhouse and treated with different concentrations of Ethephon: 6g L-1 (T1), 12g L-1 (T2), 18g L-1 (T3) e 24g L-1 (T4); leaf and stem samples were processed according to usual techniques in plant anatomy. Secretory canals in the phloem originated by schizogenesis and developed by schyzolysigenesis. Epithelial cells presented organelles consistent with lipid, polysaccharides and proteins secretion. Mature canals can elongate, ramify and fuse, resulting in a complex structure. Pectinase and cellulase were detected and are associated with expansi... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre