El cáncer de cuello uterino (CCU) es el segundo tipo de cáncer más común en el mundo, en Latinoamérica llega a ser el primer causante de mortalidad en algunos lugares y en el Perú es la principal causa de muerte por cáncer en mujeres de edad reproductiva debilitando el crecimiento de las familias y comunidades. El principal factor que lo provoca es el contagio por virus del papiloma humano (VPH); existe la vacuna contra este virus contribuyendo a la prevención del CCU. Objetivo: determinar el nivel de conocimiento y actitud frente a la vacuna contra el VHP en las adolescentes que pertenecen a las Instituciones Educativas del Centro Materno Infantil de Salud–Chorrillos II. Material y método: estudio de naturaleza cuantitativa, de diseño descriptivo y cohorte trasversal a realizarse en las Instituciones Educativas del Centro Materno infantil de Salud, en una muestra de 111 adolescentes, para recolectar los datos se utilizó la técnica de la encuesta con su instrumento el cuestionario elaborado por la investigadora, el cual fue sometido a juicio de expertos y a prueba piloto para su validez y confiabilidad respectivamente. Para el análisis de los datos se utilizó los estadígrafos para univariables teniendo en cuenta las medidas de tendencia central, asimismo la investigación fue evaluado por el comité de ética correspondiente al área de estudio. Resultados: el nivel de conocimiento frente a la vacuna contra el VPH es medio 60%, así como en sus dimensiones en generalidades del virus del papiloma humano 68% y respecto a la vacuna contra el virus del papiloma humano 59%; además no conocen acerca de las formas de transmisión 50% y síntomas 86%; mientras que conocen respecto a definición del VPH 86%, agente causal 61% y consecuencias 75%. No conocen acerca de la importancia 74% y reacciones adversas 65%; mientras que conocen respecto a edad de inicio de vacunación 86%, dosis 86% y lugar de aplicación 78%. La actitud frente a la vacuna contra el VPH es de indiferencia 60%, también de acuerdo a sus dimensiones cognitiva 68%, afectiva 69% y conductual 70%. Conclusiones: El nivel de conocimiento frente a la vacuna contra el VPH es medio y la actitud frente a la vacuna contra el VPH es de indiferencia.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Los streptococos patógenos para los equinos incluyen S. equi subsp. equi (S. equi), S. equi subsp. zooepidemicus, S. dysgalactiae subsp. equisimilis y S. pneumoniae cápsula Tipo III. S. equi causa gurma, una linfoadenitis purulenta altamente contagiosa que afecta a los miembros de la familia Equidae. Rápidos progresos se han realizado para la identificación de factores de virulencia y proteínas de S. equi. La mayoría de éstas son expresadas en la superficie bacteriana o son secretadas. Se ha demostrado la presencia de una proteína homóloga a la pneumococcal surface adhesin A (PsaA) de S. pneumoniae, en S. zooepidemicus y S. equi. La PsaA de S. pneumoniae, como otras proteínas, es inmunogénica y protege animales de laboratorio ante un desafío con neumococos. El objetivo de esta memoria fue obtener desde un aislado clínico de S. pneumoniae, una PsaA recombinante purificada desde E. coli BL21DE3. La metodología consistió en amplificar el gen PsaA por PCR y ligarlo al plasmidio de clonamiento (pETBlue-1), luego con la mezcla de ligación PsaA/pSTBlue-1 se transformó la cepa E. coli DH5; de las colonias transformadas, se purificó el plasmidio (PsaA/pSTBlue-1) por lisis alcalina, el cual fue sometido a digestión doble y, el fragmento liberado, fue ligado finalmente a un vector de expresión (pET-15b). Con la mezcla de ligación PsaA/pET-15b, se transformó la cepa E. coli BL21DE3, que expresó una proteína fusionada a una cola de histidina; la proteína fusionada, a su vez, se purificó en una columna con afinidad por histidina (Ni-Nta). La presencia de rPsaA fue analizada mediante electroforesis en gel de poliacrilamida y por Western blot, observándose la presencia de una proteína de 37 kDa., con la que reaccionó específicamente el anticuerpo policlonal de conejo anti His-tag. La secuencia nucleotídica del fragmento fue comparada en la base de datos BLAST (www.ncbi.nlm.nih.gov), encontrándose un 98% de identidad con la cepa S. pneumoniae R6. Además se identificaron cuatro regiones, con identidades superiores al 80%, similares a las del gen parcial mba de la proteína ligadora de metal/adhesina de S. equi, homóloga a PsaA de S. pneumoniae. El producto obtenido permitirá realizar estudios de formulación y evaluación, en modelo animal, de un prototipo de vacuna contra el gurma, basado en la proteína PsaA de S. pneumoniae.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La producción porcina en Chile aporta un importante porcentaje al total de toneladas de carne producidas anualmente en el país. Es por esta razón que se debe resguardar la calidad sanitaria de los cerdos y evitar enfermedades como la circovirosis la cual ha mostrado generar un gran impacto en la industria porcina mundial. El agente causal de la enfermedad es Circovirus porcino tipo II (PCV-2), el cual genera un estado de inmunosupresión severo en los animales y consecuentemente, la manifestación de patologías secundarias que terminan por afectar el crecimiento del cerdo. Además de mejorar la gestión y las prácticas de manejo (mejor higiene, menor hacinamiento y mejor ventilación), la disponibilidad de vacunas contra PCV-2 ha representado una opción inmunológica eficaz para paliar el impacto de estas enfermedades. Existen diferentes vacunas contra PCV-2, muchas de ellas probadas en otros países, pero con pocos referentes de su acción y eficacia en Chile. Además, la presencia de variantes genéticas de PCV-2 en el país, sugiere la importancia de evaluar la eficacia de formulaciones importadas actualmente usadas en la industria porcina nacional, con el fin de obtener información de relevancia para mejorar los protocolos de prevención y control de la enfermedad. En el presente estudio y con la finalidad de evaluar el efecto de una vacuna comercial contra PCV-2 en Chile, se midió la carga viral de dicho virus en cerdos de un plantel nacional de producción porcina bajo un programa de vacunación contra PCV-2. Para esto, se implementó y estandarizó un ensayo de PCR tiempo real usando SYBR® Green y se utilizó una cohorte de 30 animales (15 vacunados vs 15 no vacunados) muestreados a distintos periodos de tiempo: 30, 50, 70, 90, 110 y 130 días, como grupo de estudio. Los resultados obtenidos permitieron concluir que en los primeros 90 días de la medición, la carga viral se mantiene en un nivel basal no existiendo diferencias estadísticamente significativas entre el grupo control no vacunado y aquellos animales en los cuales si se administró el producto. Posteriormente, se evidenció una significativa alza de carga viral en ambos grupos en el día 110 del estudio, sin embargo en los animales vacunados, este aumento en el parámetro es ligeramente más tardío (día 130 del muestreo). Por esto se dedujo que la vacuna tiene un factor protectivo sobre los animales al retardar el peak de carga viral en los cerdos vacunados / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 11110135

Describe una propuesta de mejora en el proceso de envasado y sellado de la vacuna antirrábica veterinaria en una empresa estatal de rubro farmacéutico, encargada de producir manualmente diversos productos biológicos destinados para la salud pública, de consumo humano y veterinario, con el objetivo de proporcionar un producto de buena calidad y cumplir con el requerimiento de la demanda, el cual año tras año se ha ido incrementando. Al ser un procedimiento manual, existe un alto porcentaje de productos defectuosos, y a su vez un alto nivel de desgaste físico en los operarios debido a que deben permanecer por más de 5 horas seguidas en una misma posición. Adicionalmente, para llevar a cabo el proceso de envasado y sellado se requiere suspender las demás actividades del laboratorio, ya que en los días que se realiza dicho proceso se utiliza el 90% del personal, los cuales se distribuyen en el envasado, sellado y empacado de la vacuna. Es por ello que se plantea la adquisición de un sistema automatizado de envasado y sellado de vacunas, con el fin de incrementar la productividad, reducir tiempos operativos, mercadería defectuosa y evitar el riesgo de contaminación cruzada debido a la manipulación constante del producto. / Tesis

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Determina la relación entre el nivel de conocimientos y aceptación de la vacuna contra el virus del papiloma humano en padres de familia de escolares de 4to grado de primaria de la I.E. N° 1264 Juan Andrés Vivanco Amorín. Es un estudio de tipo cuantitativo, nivel aplicativo, método correlacional. La muestra estuvo conformada por 50 padres de familia de escolares. La técnica empleada fue la encuesta y los instrumentos fueron un cuestionario y una escala tipo Likert modificada. Para el procesamiento de datos de utilizó Microsoft Excel 2016. La prueba de la hipótesis se hizo mediante el Coeficiente de Correlación de Pearson. Del 100% (50) de padres de familia encuestados, el 52%(26) posee un nivel de conocimientos alto, 28% (14) conocimientos medio y 20%(10) conocimientos bajo. El 42% (21) acepta totalmente la vacuna, 30% (15) acepta parcialmente y el 28% (14) no la acepta. El coeficiente de correlación de Pearson tuvo un valor de r=+0.53. Concluye que el nivel de conocimientos está relacionado de manera positiva media a la aceptación de la vacuna contra el VPH en padres de familia, por lo que se acepta la hipótesis de estudio. El nivel de conocimientos de la vacuna contra el VPH en la mayoría de padres de familia de las escolares es alto y la mayoría de padres acepta totalmente la vacuna. / Tesis

Determina el nivel de conocimientos que tienen los estudiantes de Enfermería de la UNMSM sobre la cadena de frío. El tipo de estudio es cuantitativo, aplicativo, descriptivo de corte transversal. La población estuvo constituida por 160 estudiantes de enfermería del 3ro. al 5to. Año de estudios. La técnica utilizada fue la entrevista teniendo como instrumento un cuestionario, validado por juicio de expertos y coeficiente de correlación R de Pearson, y confiable a través de la prueba piloto y coeficiente Kude Richardson, la escala empleada para la construcción del cuestionario fue la escala de stanones. Concluye que la mayoría de los estudiantes tiene un nivel de conocimientos medio, seguido de un nivel bajo y en un porcentaje mínimo un nivel de conocimientos alto. Con respecto al almacenamiento se evidencia que los estudiantes de enfermería presentan desconocimiento sobre: ubicación de las vacunas, conceptos generales de la cadena de frío, temperatura y tiempo de almacenaje de las vacunas y control de la temperatura de almacenaje. En lo relacionado al transporte, los estudiantes presentan un desconocimiento sobre cuidados al preparar las cajas frías y los termos y a la vez presentan conocimiento sobre preparación de las vacunas para su transporte. Lo referente a la distribución, la mayoría presenta un desconocimiento sobre conservación y manipulación de las vacunas. / Tesis

Los objetivos de la presente tesis doctoral han sido la caracterización de los mecanismos de captación de hierro de Pasteurella multocida, con el fin de contribuir al diseño de una vacuna contra este patógeno basada en la sobreexpresión de proteínas de membrana externa, receptoras de hemoglobina y/o hemina, o en la expresión constitutiva de las proteínas de membrana reguladas por hierro (IROMPs).Se ha identificado el gen fur de P. multocida y se ha estudiado el perfil electroforético de las proteínas de membrana externa de dicho patógeno, descubriéndose un control de la expresión de una proteína mayoritaria de membrana (OmpH) por parte de la proteína Fur. Se ha construido un mutante fur y se ha demostrado que la mutación de este gen no presenta ningún efecto sobre la virulencia de la cepa.Así mismo, se ha caracterizado la región cromosómica de P. multocida que contiene los genes exbB, exbD y tonB, detectándose la existencia de promotores internos en dicha región y por lo tanto la expresión independiente de cada uno de los tres genes del sistema. Se ha estudiado la regulación de la expresión de todos ellos, demostrándose que pertenecen al regulón Fur, y se han construido mutantes en los genes exbB, exbD y tonB. Se ha calculado la dosis letal 50 (DL50) de cada una de las cepas construidas, determinándose que cada uno de estos genes es imprescindible para el desarrollo normal de una infección por P. multocida, ya que en todos los casos se obtuvo un incremento de la DL50 superior a los tres órdenes de magnitud con respecto la cepa salvaje.Por otro lado, se ha analizado el genoma de P. multocida Pm70 y se han estudiado 9 proteínas que, por similitud con los receptores descritos en el banco de datos, podrían actuar como receptores de hemoglobina y/o hemina. Así se ha podido determinar que algunas de ellas son capaces de unir hemoglobina y hemina (PM0040, PM0236, PM0300, PM0741, PM1081 y PM1428), mientras que otras tan sólo interaccionan con la hemoglobina (PM0576) o la hemina (PM1282), y que otra (PM1078) no reconoce ninguna de estas fuentes de hierro.De entre todas estas proteínas se ha elegido la PM0300, que se ha denominado HgbA, para realizar un estudio más detallado de este tipo de receptores de membrana. Así, se ha demostrado que el gen hgbA forma una unidad transcripcional con los genes PM0298 y PM0299. Estos genes presentan similitud con hugX y hugZ de Plesiomonas shigelloides respectivamente, y están implicados en procesos de detoxificación de hierro. Se ha demostrado que, en P. multocida, las proteínas PM0298 y PM0299 son esenciales para la viabilidad de la cepa. Por otro lado, se ha determinado que el gen hgbA se expresa en las primeras dos horas de la infección y que, in vitro, su expresión se induce en ausencia de hierro. Además, se ha construido un mutante deficiente para esta proteína y se ha comprobado que no presenta disminuida ni su capacidad de unir hemoglobina in vitro ni su virulencia. Por otro lado, se ha comprobado la distribución prácticamente universal de este gen en cepas de P. multocida de distintos serotipos y orígenes animales, hecho que propone a esta proteína como candidata para el desarrollo de un método de identificación rápido y específico de este microorganismo.Por último, se ha analizado la capacidad inmunogénica y protectora de los receptores de hemina y/o hemoglobina. Así, se ha demostrado que por lo menos tres de estas proteínas (PM0236, PM0741 y HgbA) son inmunogénicas. Sin embargo, la inoculación en ratones de las proteínas HgbA y PM0741, ya sea de forma individual o conjunta, no induce protección ante un enfrentamiento homólogo. / In the present work, the Pasteurella multocida iron uptake mechanisms have been characterised. These results could be use to the obtention of one vaccine against this pathogen. The P. multocida fur gene has been identified and it has been demonstrated that the porine OmpH is under the control of the Fur protein. On the other hand, a P. multocida Fur mutant was constructed and its LD50 was calculated demonstrating that a mutation in this gene has no effect in the virulence of the strain.Moreover, the region which contains P. multocida exbB, exbD and tonB genes has been characterised. The results obtained demonstrate that these three genes do not constitute a single transcriptional unit, but all these genes possess its own promoter which is under the Fur-Fe(II) regulation. It has been obtained a ExbB, ExbD and TonB mutants and these mutants present a decrease in their virulence to increase their LD50 by more than three orders of magnitude when were inoculated via intraperitoneal. These data demonstrate that exbB, exbD and tonB genes are essential to P. multocida infectious process.Furthermore, the P. multocida Pm70 genome was analysed and nine putative haemin and haemoglobin-binding proteins have been identified by similarity with the same molecules of other bacterial pathogens. Quantitative binding assays have demonstrated that PM0040, PM0236, PM0300, PM0741, PM1081 and PM1428 bind both haemin and haemoglobin, whereas PM0576 and PM1282 only bind either haemoglobin or haemin, respectively. PM1078, despite presents similarity with a Yersinia enterocolitica haemin receptor, does not recognize none of these iron sources.PM0300 was named hgbA and it has been demonstrate that this gene and the PM0298 and PM0299 ORFs, which present similarity with hugX and hugZ of Plesiomonas shigelloides, respectively, constitute a single transcriptional unit. PM0298 and PM0299 are essential to the viability of P. multocida cells. The hgbA gene is expressed in vivo within the two first hours post-inoculation, and in vitro is repressed by iron. Moreover, a HgbA mutant binds haemoglobin to the same extent as the wild-type strain and, in agreement with this, virulence of the P. multocida hgbA cells was no affected. On the other hand, the hgbA gene is present in almost all the strains of P. multocida analysed, independently of their serotype or their animal source. This result propose hgbA as a putative candidate to develop a fast and specific method to identify this pathogen.Finally, the immumogenicity and the ability to induce protection of all these haemin and haemoglobin receptors were analysed. The results obtained have demonstrated that, despite PM0236, PM0741 and HgbA are immunogens, inoculation of mice with any single one of these binding proteins alone is not protective against P. multocida infection.

El virus del distemper canino o CDV es un patógeno que afecta a los miembros de la familia Canidae, causando una enfermedad aguda, sistémica y frecuentemente mortal. Predispone al hospedador a las infecciones bacterianas secundarias y a posibles secuelas de tipo neurológico. La protección contra el CDV se logra a través de la vacunación. La mayoría de las vacunas se elaboran a partir de virus atenuado por pasaje en huevos embrionados o cultivos celulares. Sin embargo, estas vacunas han demostrado no proteger completamente contra la enfermedad y en muchos casos, han generado reacciones adversas que sugieren la necesidad del desarrollo de nuevas metodologías para su producción. Teniendo en consideración los avances en biología molecular en relación con la producción de proteínas obtenidas de forma recombinante, se propuso como objetivo expresar y evaluar algunas de las proteínas virales utilizando un sistema heterólogo. Con esta metodología se eliminarían las desventajas de los métodos tradicionales. Además, ayudaría a disminuir notablemente los costos de producción. Se trabajó sobre dos proteínas virales descriptas como el blanco principal de los anticuerpos neutralizantes producidos luego de la infección: la hemaglutinina y la proteína de fusión. Ambas proteínas se expresaron en la levadura metilotrófica Pichia pastoris, obteniéndose las mismas de forma recombinante y en un alto grado de pureza. Luego, estas proteínas se emplearon para inocular ratones con el fin de comprobar su capacidad de estimular la respuesta inmune y analizar su capacidad neutralizante. Los resultados obtenidos sugieren que ambos polipétidos han conservado los determinantes antigénicos presentes en la partícula viral y generaron una buena respuesta inmune. Por lo tanto podrían ser utilizados para el desarrollo de una vacuna a subunidades.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El uso de micropartículas (MPs) de polímeros naturales ha sido descrito como una innovadora técnica de formulación de adyuvantes para diversas vacunas. Para esta memoria de título se utilizó quitosano (Qo) como polímero natural el cual se funcionalizó con grupos azufrados para preparar quitosano tiolado (QT) y sulfonado (QS). Con estos quitosanos se formularon micropartículas de quitosano tioladas (MPQT) y de quitosano sulfonadas (MPQS) cargadas con el antígeno del circovirus porcino tipo II (PCV2). Las micropartículas de quitosano (MPQ) formuladas y cargadas fueron obtenidas mediante técnicas de gelificación iónica y secado por atomización. Se determinó la presencia de grupos azufrados en las MPQ mediante Espectroscopía infrarroja transformada de Fourier (FTIR) y se caracterizaron en cuanto a morfología, tamaño y cantidad de carga mediante microscopía electrónica de barrido o Scanning Electron Microscope (SEM) y potencial Zeta. Por otro lado, además se evaluaron parámetros de Eficiencia de encapsulación (EE) y Rendimientos de la producción (R), se determinó también la presencia de antígeno mediante Dot Blot y se realizaron estudios in vitro de mucoadhesividad. Los resultados obtenidos por FTIR indicaron la aparición de nuevos picos de absorción que coinciden con los grupos -SH, con enlaces C-O-S y para grupos S=O. Mediante SEM se observó la formación de MPs de Qo con formas más o menos esféricas, bordes definidos, superficie lisa a rugosa, y tamaños que variaron entre 1 y 50 µm. Mediante potencial Zeta las MPQC y MPQT presentaron carga neta positiva mientras que las MPQS presentaron carga neta negativa. Todas las MPs poseen valores de EE superiores a 80%, R sobre 30% para MPs 1X y son positivas a la presencia de antígeno Cap de PCV2 al análisis por Dot Blot. Finalmente, los ensayos de mucoadhesividad mostraron que las MPQT y MPQS presentaron mejor mucoadhesividad respecto a MPQC. En conclusión, se logró preparar y caracterizar Qo funcionalizado con grupos tiol y sulfonato, formular tres tipos de MPs de Qo cargadas con antígeno Cap de PCV2 y caracterizadas en su totalidad. / The use of microparticles (MPs) of natural polymers has been described as an innovative technique of formulating adjuvants for various vaccines. For this title memory chitosan (Qo) was used as the natural polymer which was functionalized with sulfur groups to prepare thiolated (QT) and sulfonated chitosan (QS). With these chitosans, thiolated chitosan microparticles (MPQT) and sulphonated chitosan microparticles (MPQS) loaded with the porcine circovirus type II (PCV2) antigen were formulated. The formulated and loaded chitosan microparticles (MPQ) were obtained by ionic gelation and spray drying techniques. It was determined the presence of sulfur groups in the MPQ by Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) and these MPs were characterized in terms of morphology, size and amount of charge by means of Scanning Electron Microscope (SEM) and Zeta potential, besides evaluating such parameters such as encapsulation efficiency (EE) and yields of production (R), the presence of antigen was also evaluated by Dot Blot and finally in vitro mucoadhesivity studies were performed. The results obtained by FTIR indicate the occurrence of new absorption peaks that coincide with the groups -SH, with C-O-S bonds and for S = O groups. By SEM the formation of MPs of Qo with more or less spherical shapes, defined edges, smooth to rough surface, and sizes varying between 1 and 50 μm are observed. By means of zeta potential the MPQC and MPQT presented positive net load while the MPQS presented negative net load. All MPs have EE values higher than 80%, R about 30% for 1X MPs and are positive for the presence of PCV2 Cap antigen at Dot Blot analysis. Finally, mucoadhesivity assays show that MPQT and MPQS had better mucoadhesivity with respect to MPQC. In conclusion, it is possible to prepare and characterize Qo functionalized with thiol and sulfonate groups, to formulate three types of Qo MPs loaded with PCV2 Cap antigen and to characterize them in their entirety. / Financiamiento: Proyecto Fondef It13120021 & Fondecyt 1140660

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Determina los factores asociados al incumplimiento del calendario de vacunación de niños menores de dos años en un centro de salud. Realiza un estudio de enfoque cuantitativo, nivel aplicativo, método descriptivo y de corte transversal. La muestra está conformada por 75 madres de niños menores de dos años que respondieron a los criterios de inclusión y exclusión. La técnica es la encuesta y el instrumento un cuestionario de 23 preguntas entre abierta y cerradas sobre factores personales e institucionales. Encuentra que del 100% (75) de las madres encuestadas, los factores institucionales están afectando a las madres en un el 93.3% (70) en el cumplimiento del calendario de vacunación lo cual es un dato alarmante, dentro de este factor encontramos el “tiempo de espera” con un total de 70.66% (53), disponibilidad de la vacuna con 65.33% (49) y la distancia que afecta a un 61.33% y solo un 52% (39) está siendo afectada por el factor personal. / Tesis