Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 HenioGL_TESE.pdf: 1861952 bytes, checksum: 59df83a02a682e8397eb8b241531d77b (MD5) Previous issue date: 2011-11-16 / Visceral leishmaniasis (VL) is a disease caused by protozoa of the Leishmania donovani complex, whose infection has clinical spectrum ranging from asymptomatic infection to active disease characterized by fever, cachexia, hepatosplenomegaly, and immunosuppression. The healing or protective immunity require an antigen-specific type 1. The Montenegro skin test (DTH) has been interpreted as a marker of protective immunity. However, there is no known correlation between the DTH response to type 1 and DTH and immunity of type 1 are maintained in the long term. Thus, a longitudinal study of 8 years, nested in a cohort family held in Brazil, documented the status of DTH and cytokine production by peripheral blood mononuclear cells in response to antigen-specific stimulation. This study was the interdisciplinary approach of physicians, biochemists, nutritionists, veterinary medicine, biology and statistics. The results show that 46.2% of subjects were analyzed DTH positive at baseline. The prevalence of positive and DTH induration size increased with age (p = 0.0021). 15.7% of individuals positive DTH "retro-converted" the negative and 50.4% (64) of individuals negative DTH became positive. The size of DTH induration was correlated significantly with the antigen-induced production of IFN-γ (r = 0.6186, p = 0.0001). IL-6 was secreted at higher levels in peripheral blood mononuclear cells of individuals who "retro-converted" DTH positive to negative than individuals who remained stable DTH status (p = 0.005). Thus, IFN-γ produced by peripheral blood mononuclear cells, may be a surrogate marker for protective immunity instead of the DTH response. In addition, differences in innate immune response may determine whether individuals maintain or eliminate the infection by Leishmania infantum chagasi in asymptomatic patients / A leishmaniose visceral (LV) ? uma doen?a ocasionada por protozo?rios do complexo Leishmania donovani, cuja infec??o possui espectro cl?nico variando desde infec??o assintom?tica a doen?a ativa caracterizada por febre, caquexia, hepatoesplenomegalia e imunossupress?o. A cura ou prote??o exigem uma imunidade ant?geno espec?fica do tipo 1. O teste cut?neo de Montenegro (DTH) tem sido interpretado como um marcador de imunidade protetora. No entanto, n?o se sabe a correla??o do DTH com a resposta tipo 1 e se o DTH e a imunidade do tipo 1 s?o mantidos a longo prazo. Assim, um estudo longitudinal de 8 anos, aninhado a uma coorte familiar realizada no Brasil, documentou o status do DTH e a produ??o de citocinas por c?lulas mononucleares do sangue perif?rico em resposta a estimulo ant?geno-espec?fico. Os resultados obtidos mostram que 46,2% dos indiv?duos analisados foram DTH positivos no in?cio do estudo. A preval?ncia do DTH positivo e o tamanho da endura??o aumentaram com a idade (p = 0,0021). 15,7% dos indiv?duos DTH positivos retroconverteram a negativos e 50,4% (64) dos indiv?duos DTH negativos tornaram-se positivos. O tamanho da endura??o do DTH correlacionou-se significativamente com a produ??o ant?geno induzida de IFN-γ (r=0,6186, p=0,0001). IL-6 foi secretado em n?veis mais elevados por c?lulas mononucleares do sangue perif?rico dos indiv?duos que retroconverteram de DTH positivo para negativo do que os indiv?duos que mantiveram o status de DTH est?vel (p=0,005). Assim, o IFN-γ, produzido por c?lulas mononucleares do sangue perif?rico, pode ser um marcador substituto para a imunidade protetora em vez da resposta DTH. Al?m disso, as diferen?as na resposta imune inata podem determinar se os indiv?duos mant?m ou eliminam a infec??o por L. infantum chagasi em assintom?ticos

Infection is the major complication for neutropenic patients, and cause of morbidity and mortality. Clinical signs are nonspecific and fever may be a late marker for the early use of antibiotics, which may complicate the prognosis. The approaches of most protocols focus on adult patients. Thus, to improve safety in the clinical approach in pediatric neutropenic patients, this work was performed in order to evaluate biomarkers involved in the inflammatory response in pediatric patients. In the period 2010 to 2012 were included 70 children with neutropenia with neutrophil count ≤ 1000 cells / mm ³, 35 pediatric patients with visceral leishmaniasis (VL) and 35 patients with onco-hematological disease, ranging in age from 0 to 18, from the oncology service of the Hospital Emergency ward Segipe and Pediatrics Diseases, University Hospital of Sergipe. Serum levels of biomarkers were evaluated following: Interferon gamma (IFN-γ), interleukin-5 (IL-5), interleukin-6 (IL-6), interleukin-10 (IL-10), lactate, ultrasensitive CRP (hsCRP), nprocalcitonina (PCT) and Tumor Necrosis Factor-α (TNF-α). The results showed that the average of the groups was no significant difference with biomarkers IFN-γ, IL-10 and TNF-α with p <0.001, IL-5 and p = 0.020, p = 0.002 with lactate and p = 0.011 PCT The hsCRP and IL-6 did not show statistical significance. Correlating CAN groups with the average of biomarkers, there was no statistical significance. This study suggests that biomarkers biomarkers that IFN-γ, IL-5, IL-10, lactate, procalcitonin and TNF-α, laboratory values showed a significant difference between the group of patients neutropenic patients with LV disease and onco- hematologic, this is not happening with the results presented by biomarkers IL-6 and hsCRP, leading us to observe that although the groups have in common neutropenia, interpretation of these biomarkers should be performed separately for each group. Except for lactate and procalcitonin, all other biomarkers showed increased results when comparing the mean of the two groups, which leads us to conclude that studies with larger numbers of subjects are important to verify the use of IFN-γ biomarkers, IL- 5, IL-6, IL-10 and TNF-α in the diagnosis of infection in neutropenic patients. / A infecção constitui a maior complicação para o paciente neutropênico, sendo causa de morbidade e mortalidade. Sinais clínicos são inespecíficos e febre pode ser um marcador tardio para início do uso de antibióticos, podendo complicar o prognóstico. As abordagens da maioria dos protocolos focam-se em pacientes adultos. Desta forma, para reforçar a segurança na abordagem clínica em pacientes neutropênicos pediátricos, foi realizado este trabalho com o objetivo de avaliar os biomarcadores envolvidos na resposta inflamatória em pacientes pediátricos. No período de 2010 a 2012 foram incluidos 70 crianças portadoras de neutropenia, com contagem de neutrófilos ≤ 1000 cel/mm³, sendo 35 pacientes pediatricos portadores de Leishmaniose visceral(LV) e 35 portadores de doença onco-hematológica , com idade variando de 0 a 18 anos, oriundos do serviço de oncologia do Hospital de Urgência de Sergipe e da enfermaria de Pediatria do Hospital Universitário de Sergipe. Os níveis séricos dos seguintes biomarcadores foram avaliados: Interferon gamma (IFN-γ), Interleucina-5(IL-5), interleucina-6(IL-6), interleucina-10(IL-10), lactato, Proteina C Reativa ultrassensível(PCR-US),procalcitonina(PCT) e Fator de Necrose Tumoral alfa(TNF-α) . Os resultados mostraram que na média dos grupos estudados houve diferença significativa com os biomarcadores IFN-γ, IL-10 e TNF-α com p <0,001, IL-5 com p=0,020, lactato com p=0,002 e PCT com p=0,011 A PCR-US e a IL-6 não apresentaram estatiscamente significância. Correlacionando a CAN dos grupos com a média dos biomarcadores, não foi observado significancia estatística. Este trabalho sugere que os biomarcadores que os biomarcadores IFN-γ, IL-5, IL-10, lactato, procalcitonina e TNF-α, apresentaram valores laboratoriais com diferença significativa entre o grupo de pacientes neutropênicos portadores de LV e doença onco-hematológica, o mesmo não acontecendo com os resultados apresentados pelos biomarcadores IL-6 e a PCR-US, levando-nos a observar que apesar dos grupos terem a neutropenia em comum, a interpretação destes biomarcadores deve ser realizada de forma distinta para cada grupo. Excetuando-se o lactato e a procalcitonina, todos os demais biomarcadores apresentaram resultados aumentados quando comparadas as médias dos dois grupos, fato que nos faz concluir que estudos com um número maior de indivíduos são importantes para verificar o uso dos biomarcadores IFN-γ, IL-5, IL-6, IL-10 e TNF-α no diagnóstico de infecção em pacientes neutropênicos.

Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Renato Andreotti e Silva / Banca: Valéria Marçal Felix de Lima / Resumo: O objetivo deste estudo foi detectar reações cruzadas por Leishmania spp. e Trypanossoma cruzi pelo Ensaio Imunoenzimático Indireto (ELISA), pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Assim, foram colhidas 408 amostras sanguíneas de cães domiciliados no município de Araçatuba,SP, de ambos os sexos, de diversas raças e com idade a partir de seis meses. Em relação à Leishmania spp., pela RIFI, 14,95 % (61/408) foram reagentes. A positividade por meio do ELISA, foi de 20,10% (82/408) e pela PCR, 29,66% (121/408), com diferença significativa para o sexo e a idade destes animais (p<0,05). Para Trypanosoma spp., a ocorrência de anticorpos pelo ELISA foi de 10,54% (43/408) e pela PCR, 2,45% (10/408) cães foram positivos. Pela RIFI, 10,29% (42/408) dos animais foram considerados positivos e somente o sexo apresentou diferença significativa (p<0,05). Neste trabalho, constatou-se que 10,54%(43/408) dos animais foram soropositivos por ELISA para Trypanosoma spp., sendo que 79,07%(34/43) obtiveram resultados positivos no diagnóstico molecular para Leishmania spp. e dos 10,29% (42/408) positivos por RIFI, 95,24% (40/42) dos cães confirmaram a infecção por este parasita. Por meio dos resultados obtidos, pode-se inferir que foram evidenciadas reações cruzadas nos ensaios sorológicos para ambos os protozoários, nos animais analisados neste trabalho / Abstract: The aim of this study was to detect cross-infection by Leishmania spp. and Trypanosoma spp. by indirect immunosorbent assay (ELISA), by Indirect Immunofluorescence (IFA) and by the Polymerase Chain Reaction (PCR). Thus, blood samples were collected from 408 domestic dogs of both sexes, different races and ages from six months. For Leishmania spp. by IFA, 14.95% (61/408) were positive. Positive by ELISA, was 20.10% (82/408), and PCR 29.66% (121/408), with significant difference for sex and age of animals (p <0.05). For Trypanosoma spp., the occurrence of antibodies by ELISA, was 10.54% (43/408), and PCR, 2.45% (10/408) dogs were positive. By IFA, 10.29% (42/408) of the animals were considered positive and only sex was significant difference (p <0.05). In this work it was found that 10.54% (43/408) animals were seropositive by ELISA for Trypanosoma spp., 79.07% (34/43) had positive results in molecular diagnostic for Leishmania spp. and 10.29% (42/408) positive by IFA, 95.24% (40/42) dogs confirmed the infection by this parasite. Through the results obtained can be inferred that cross-infection were observed by both protozoa in animals of this paper / Mestre

A leishmaniose visceral americana (LVA) é uma doença em expansão no Brasil, para a qual se dispõem de poucas, e aparentemente ineficientes, estratégias de controle. Um dos grandes problemas para a contenção da leishmaniose visceral americana é a falta de um método acurado de identificação dos cães infectados, considerados os principais reservatórios da doença no meio urbano. Neste sentido, a caracterização de marcadores clínico-laboratoriais da infecção neste reservatório e a avaliação mais adequada do desempenho de testes para diagnóstico da infecção podem contribuir para aumentar a efetividade das estratégias de controle da LVA. Com isso, o presente estudo tem dois objetivos principais: (1) desenvolver e validar um modelo de predição para o parasitismo por Leishmania chagasi em cães, baseado em resultados de testes sorológicos e sinais clínicos e (2) avaliar a sensibilidade e especificidade de critérios clínicos, sorológicos e parasitológicos para detecção de infecção canina por L. chagasi mediante análise de classe latente. O primeiro objetivo foi desenvolvido a partir de estudo em que foram obtidos dados de exames clínico, sorológico e parasitológico de todos os cães, suspeitos ou não de LVA, atendidos no Hospital Veterinário Universitário da Universidade Federal do Piauí (HVU-UFPI), em Teresina, nos anos de 2003 e 2004, totalizando 1412 animais. Modelos de regressão logística foram construídos com os animais atendidos em 2003 com a finalidade de desenvolver um modelo preditivo para o parasitismo com base nos sinais clínicos e resultados de sorologia por Imunofluorescência Indireta (IFI). Este modelo foi validado nos cães atendidos no hospital em 2004. Para a avaliação da área abaixo da curva ROC (auROC), sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivo (VPP), valores preditivos negativo (VPN) e acurácia global, foram criados três modelos: um somente baseado nas variáveis clínicas, outro considerando somente o resultado sorológico e um último considerando conjuntamente a clínica e a sorologia. Dentre os três, o último modelo apresentou o melhor desempenho (auROC=90,1%, sensibilidade=82,4%, especificidade=81,6%, VPP=73,4%, VPN=88,2% e acurácia global=81,9%). Conclui-se que o uso de modelos preditivos baseados em critérios clínicos e sorológicos para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina pode ser de utilidade no processo de avaliação da infecção canina, promovendo maior agilidade na contenção destes animais com a finalidade de reduzir os níveis de transmissão. O segundo objetivo foi desenvolvido por meio de um estudo transversal com 715 cães de idade entre 1 mês e 13 anos, com raça variada avaliados por clínicos veterinários no HVU-UFPI, no período de janeiro a dezembro de 2003. As sensibilidades e especificidades de critérios clínicos, sorológicos e parasitológicos para detecção de infecção canina por Leishmania chagasi foram estimadas por meio de análise de classe latente, considerando quatro modelos de testes e diferentes pontos de corte. As melhores sensibilidades estimadas para os critérios clínico, sorológico e parasitológico foram de 60%, 95% e 66%, respectivamente. Já as melhores especificidades estimadas para os critérios clínico, sorológico e parasitológico foram de 77%, 90% e 100%, respectivamente. Conclui-se que o uso do exame parasitológico como padrão-ouro para validação de testes diagnósticos não é apropriado e que os indicadores de acurácia dos testes avaliados são insuficientes e não justificam que eles sejam usados isoladamente para diagnóstico da infecção com a finalidade de controle da doença. / American visceral leishmaniasis (AVL) is an expanding disease in Brazil, for which few, and apparently inefficient, control strategies are available. A major problem for the containment of visceral leishmaniasis is the lack of an accurate test for the identification of infected dogs, which are considered the main reservoirs of the disease in urban areas. In this sense, the characterization of clinical and laboratory markers of the infection in this reservoir, as well as, a more appropriate assessment of the performance of tests for the diagnosis of infection, might increase the effectiveness of control strategies for AVL. Thus, this study has two main objectives: (1) to develop and validate a prediction model for parasitism by Leishmania chagasi in dogs, based on the results of serological tests and clinical signs and (2) to evaluate the sensitivity and specificity of a clinical criterion, and of parasitological and serological tests for canine infection by L. chagasi using latent class analysis. The first goal was developed from a study in which clinical, serological and parasitological data were obtained for all dogs, suspicious or not to AVL, admitted at the Veterinary Hospital at the Federal University of Piauí, Teresina, in the years of 2003 and 2004, totaling 1412 animals. Logistic regression models were constructed with the animals admitted in 2003 with the aim of developing a predictive model for parasitism based on clinical signs and results of serology by indirect immunofluorescence (IIF). This model was validated in dogs admitted at the hospital in 2004. To evaluate the area under the ROC curve (AuROC), sensitivity, specificity, positive predictive value (PPV), negative predictive value (NPV) and overall accuracy, three models were developed: one based only on clinical variables, other only with the serological results and a final model based on both the clinical and serological data. Among the three, the last model showed the best performance (AuROC=90.1%, sensitivity 82.4%, specificity=81.6%, PPV=73.4% NPV=88.2% and overall accuracy=81.9%). It is concluded that the use of predictive models based on clinical and serological data for diagnosis of canine visceral leishmaniasis might be useful in the evaluation of canine infection, allowing the anticipation of ontainment of these animals in order to reduce transmission levels. The second goal was developed through a cross-sectional study of 715 dogs aged between 1 month and 13 years, with varied races evaluated by veterinarians at VUH-UFPI in the period January to December 2003. The sensitivities and specificities of clinical, parasitological and serological tests for detection of canine infection by Leishmania chagasi were estimated using latent class analysis, considering four types of models and different cutoffs. The best sensitivity estimates for the clinical, serological and parasitological tests were 60%, 95% and 66% respectively. The best estimates for the specificity of clinical, serological and parasitological tests were 77%, 90% and 100% respectively. It is concluded that the use of parasitological assays as the gold standard for validation of diagnostic tests is not appropriate and that the indicators of accuracy of the tests evaluated are insufficient to justify that they are used alone for diagnosis of infection in order to control the disease.

O acúmulo de tecido adiposo visceral (TAV) está relacionado com a piora da sensibilidade à insulina (SI) e, por isso, tem sido hipotetizado que a retirada de parte deste depósito, lipectomia (L), poderia melhorar este quadro. No entanto, a L pode ocasionar um aumento compensatório ou uma regeneração do tecido retirado. Para investigar se a L e o exercício afetam ou não a SI e a adiposidade, 36 ratos machos Wistar foram submetidos à dieta hiperlipídica e divididos em 4 grupos: LT (treinado), LS (sedentário), FT (falso operado) e FS, sendo submetidos à L e/ou treinamento aeróbio. O peso corporal e consumo de ração foram medidos semanalmente. A glicemia de jejum e tolerância à glicose foram avaliados pré e pós-intervenções. Índice HOMA, adiposidade e expressão gênica (mRNA) PPAR, PPAR e TNF- e expressão protéica do PGC1- foram analisados pós-intervenções. O grupo L apresentou maior consumo de ração após L (p<0,05). Foi verificada pior tolerância à glicose no grupo LS (p<0,03) e diminuída insulina de jejum nos grupos LT e FT (p<0,00). O grupo LT apresentou melhor SI (p<0,04). Não houve diferença na adiposidade dos animais (p>0,1). Os grupos LT e FS apresentaram maior expressão gênica do PPAR no TAV comparados aos LS e FT, já no músculo o LT apresentou menor expressão gênica comparado ao FS (p<0,05). O grupo LS apresentou maior mRNA do TNF- comparado aos demais grupos (p<0,05) e maior expressão protéica de PGC1- que o grupos LT e FS (p<0,05). Nossos resultados demonstram que o treinamento melhorou a ação da insulina e em associação à L melhorou a SI. Além disso, a L ocasionou aumento no consumo de ração que pode ter colaborado com a recuperação da adiposidade neste grupo / Increased visceral adipose tissue (VAT) may account for the impairment in peripheral and hepatic insulin sensitivity (IS). It has been hypothesized that the partial removal of VAT known as lipectomy (L) could result in the improvement, while a re-growth of the excised tissue and/or a compensatory growth of non-excised depots seem to occur. To investigate whether or not VAT removal and exercise affect IS and adiposity 36 male Wistar rats were fed a high-fat diet and assigned to 4 experimental groups: EL (exercised), ES (sham-lipectomized), CL (control-sedentary), and CS; animals were submitted to L and/or exercise training. Body weight and food intake were recorded weekly. Fasting glucose and glucose tolerance were assessed pre and post-interventions. HOMA Index, body fat content, PPAR, PPAR e TNF- mRNA and PGC1- protein expression were assessed post-interventions. L group showed increased food intake post-L (p<0,05). CL group presented worsening on glucose tolerance (p<0,03). ET and ES showed lower fast insulin (p<0,00) and EL group showed better IS (p<0,04). There were no significant difference on body fat (p>0,1). EL and CL groups showed higher PPAR mRNA on VAT compared to CL and ES, EL showed decreased PPAR mRNA on skeletal muscle compared to CS (p<0,05). CL group showed greater TNF- mRNA (p<0,05) and greater PGC1- protein expression compared to EL and CS (p<0,05). Our results showed that short-term swimming training improved insulin action and, in association with L improve IS. Moreover, lipectomy has induced increased food intake which may be related with an increase in adiposity at this group

Pancitopenia é uma manifestação frequente na leishmaniose visceral (LV) cuja patogenia não é esclarecida. Neste estudo, a patogenia foi analisada em cão e camundongo com LV. Cães com LV, naturalmente infectados, sem coinfecção com erliquiose, foram classificados de acordo com as alterações hematimétricas em: pancitopenia, bicitopenia, citopenia e sem alterações hematológicas. O mielograma revelou um aumento na proporção mielóide:eritróide nos cães infectados em relação ao grupo controle. Havia mudanças no padrão morfológico e quantitativo nas células sanguíneas, particularmente na série eritróide em cães pancitopênicos. Na contagem diferencial, notou-se a diminuição da porcentagem de linfócitos, plasmócitos e monócitos que tinham correlação com a gravidade das alterações hematológicas. No exame histopatológico da medula óssea, observaram-se aumento na celularidade, hiperplasia megacariocítica, proliferação macrofágica e degeneração e/ou necrose. No estudo de fatores de crescimento e citocinas, o aumento da expressão de IFN-?, GM-CSF, IL-7 e TNF-? parece assumir um papel importante nos cães bicitopênicos, e IL-3 nos cães com citopenia. A expressão de IGF-I, em contraste, estava diminuída significantemente em cães pancitopênicos em relação aos demais grupos. Os dados sugerem, portanto, a ocorrência de uma dishematopoiese com a diminuição da expressão de IGF-I na doença severa. Em camundongos C57BL/6 infectados por via intravenosa com L. (L.) donovani, as alterações hematológicas foram analisadas com 28 dias pós-infecção quando vimos o desenvolvimento de um quadro pancitopênico. O mielograma revelou displasia celular, aumento na proporção mielóide:eritróide e do índice de maturação mielóide, bem como, uma hipoplasia eritróide. Além disso, observamos um aumento significante na porcentagem de linfócitos e macrófagos nos animais infectados. No exame histopatológico havia um aumento significante da celularidade com infiltrado e/ou proliferação de células mononucleares similares a macrófagos. Na caracterização dessas células por microscopia confocal, estas expressavam F4/80, um marcador típico de macrófagos residentes e/ou estromais. Por citometria de fluxo, constatamos um aumento significante na porcentagem de células F4/80+ em proliferação. Além disso, utilizamos outros marcadores expressos em macrófagos como CD169 e CD11b, e vimos que a população F4/80+CD169+CD11b+ estava diminuída nos camundongos infectados. Com base nesses dados, consideramos o camundongo C57BL/6 infectado por L. (L.) donovani um bom modelo para o estudo da dishematopoiese na LV e que os macrófagos estromais devam ter um papel importante, o que merece estudos futuros mais aprofundados. / Pancytopenia is a common manifestation in visceral leishmaniasis (VL) that may contribute to lethality. We assessed the factors involved in the pathogenesis of pancytopenia in canine and murine VL. We selected dogs with VL but without erlichiosis that were classified according to hematological alterations in: pancytopenia, bicytopenia, cytopenia and dogs infected without hematological changes. The myelogram revealed an increase in the myeloid:erythroid cell ratio in infected dogs compared with healthy dogs and changes in the morphological and quantitative patterns in hematopoietic cells, particularly in erythroid series of the pancytopenic dogs. In differential cell count, decrease in the percentage of lymphocytes, plasma cells and monocytes correlated with the severity of hematological changes. In the histopathological examination of the bone marrow, the main alterations were the increase in cellularity, megakaryocytic hyperplasia, macrophage proliferation and degeneration and/or necrosis. Addressing the growth factors and cytokines, increased expression of IFN-?, GM-CSF, IL-7 and TNF-? seemingly plays an important role in bicytopenic dogs, and the expression fo IL-3 in dogs with cytopenia. In contrast, pancytopenic dogs had a significant decrease in the IGF-I expression compared with other groups. The data suggest a dyshematopoiesis with participation of IGF-I in severe stage of disease. In L. (L.) donovani-intravenously infected C57BL / 6 mice hematological changes were evaluated at 28 days post-infection when pancytopenia was established. The bone marrow examination showed cellular morphological changes, an increase in myeloid:erythroid ratio and myeloid maturation index, and erythroid hypoplasia. Moreover, we observed a significant increase in the percentage of lymphocytes and macrophages in infected animals. In histopathological examination, we observed a significant increase in the cellularity accompanied by infiltration and/or proliferation of mononuclear cells resembling macrophages. We characterized these cells as F4/80+ cells by confocal microscopy, a typical marker of residents and/or stromal macrophages. Using flow cytometry, we found a significant increase in the percentage of F4/80 in proliferation. In addition, we used other macrophage markers such as CD169 and CD11b, when a reduction in F4/80+CD169+CD11b+ population was shown in infected mice. Based on these data, we may consider L. (L.) donovani-infected C57BL/6 mouse a good model for the study of dyshematopoiesis in VL and that stromal macrophage may have important role in the in the hematopoiesis that deserve further studies .

A leishmaniose visceral é uma infecção grave que leva a pancitopenia. Quando se trata de disfunções medulares decorrentes de infecção por Leishmania (Leishmania) infantum há poucas abordagens descrevendo as alterações na mielopoiese e os mecanismos que levam a pancitopenia na LV. Alguns estudos demonstram uma relação importante entre a pancitopenia e o fator de crescimento insulin-like growth fator-I (IGF-I), no entanto, o seu papel endógeno na hematopoiese ainda não está claro. Propomos estudar a influência desse fator na hematopoiese e sua relação com o desenvolvimento da pancitopenia em hamsteres infectados por via intra-peritoneal com 2x107 de amastigotas por L. (L.) infantum. Avaliamos em 90 e 120 dias pós-infecção a LDU (Leishman-Donovan units) no baço e fígado, quando observamos tendência à progressão da infecção. Aos 60 dias pós-infecção, os animais com LV desenvolveram a plaquetopenia como primeira alteração hematológica, e a partir dos 90 dias pós-infecção, a anemia, e a leucopenia com reduções significantes nos leucócitos totais, linfócitos e neutrófilos. Já aos 120 dias de infecção, os leucócitos totais diminuíram significantemente acompanhados por uma redução de linfócitos, monócitos e eosinófilos. A partir desses dados, focamos a análise da medula óssea nos hamsteres com 90 e 120 pós-infecção. No mielograma, vimos alterações somente nos hamsteres com LV aos 90 dias pós-infecção, com um aumento significante na proporção células mielóides imaturas: células mielóides maduras. Na biópsia da tíbia, houve um aumento significante da celularidade quando comparados com seu respectivo controle, apenas no período de 90 dias pós-infecção. Em adição, observamos uma proliferação e/ou infiltrado macrofágico significante nos hamsteres com LV, mas sem diferença estatística nos períodos de 90 e 120 dias pós-infecção. Na avaliação semi-quantitativa de fibras de reticulina, somente aos 90 dias pós-infecção, observamos aumento significante nos infectados comparados aos controles, caracterizando um quadro fibrótico. Foi medida a expressão de mRNA de IGF-I por PCR em tempo real, aos 90 e 120 dias pós-infecção, onde ocorreu um aumento significante da expressão de IGF-I nos animais infectados em relação aos controles aos 90 dias. Como expostos, os hamsteres com LV apresentam alterações hematológicas como anemia, leucopenia e plaquetopenia, e ainda alterações na medula óssea como aumento da celularidade, proliferação macrofágica e fibrose acompanhados por um aumento da expressão de IGF-I. Assim podemos concluir que nossos dados indicam que o hamster se constitui num bom modelo para o estudo da patogênese da pancitopenia e das alterações medulares decorrentes da infecção por L.(L.) infantum. Neste modelo, ocorre alteração da expressão de IGF-I durante a evolução da infecção com possível papel na patogenia da pancitopenia. / Visceral leishmaniasis is a serious infection that leads to pancytopenia. When it comes to spinal cord dysfunction resulting from infection Leishmania (Leishmania) infantum there are few approaches describing the changes in myelopoiesis and mechanisms that lead to pancytopenia in LV. Some studies have shown a significant relationship between pancytopenia and insulin-like growth factor-growth factor I (IGF-I), however, their endogenous role in hematopoiesis is still not clear. We propose to study the influence of this factor in hematopoiesis and its relationship to the development of pancytopenia in hamsters infected intraperitoneally with 2x107 amastigotes by L. (L.) infantum. Evaluated at 90 and 120 days post-infection the LDU (Leishman-Donovan units) in the spleen and liver, when we observed a tendency to progression of the infection. At 60 days post-infection, animals with LV developed thrombocytopenia as the first hematologic changes, and from 90 days post-infection, anemia, and leukopenia with significant reductions in total leukocytes, lymphocytes and neutrophils. Already at 120 days of infection, total leukocytes decreased significantly accompanied by a decrease lymphocytes, monocytes and eosinophils. From these data, we focus on the analysis of the bone marrow in hamsters with 90 and 120 post-infection. The myelogram changes seen only in hamsters with LV at 90 days post-infection, with a significant increase in the proportion immature myeloid cells: mature myeloid cells. Biopsy of the tibia, there was a significant increase in cellularity compared with their respective control, only 90 days post-infection. In addition, we observed a proliferation and / or infiltration significant macrophage in hamsters with LV, but no statistical difference in the periods of 90 and 120 days post-infection. In semi-quantitative assessment of reticulin fibers, only at 90 days post-infection, we observed a significant increase in infected compared to controls, featuring a fibrous framework. MRNA expression of IGF-I was measured by real-time PCR, at 90 and 120 days post-infection, where a significant increase in IGF-I expression in infected animals compared to controls at 90 days occurred. As set out, the present hamsters VL hematological disorders such as anemia, leukopenia and thrombocytopenia, as well as changes in bone marrow cellularity increased, macrophage proliferation and fibrosis accompanied by a reduction in IGF-I expression. Thus we can conclude that our data indicate that the hamster is a good model to study the pathogenesis of pancytopenia and marrow changes resulting from infection by L. (L.) Infantum. In this model, alteration of IGF-I expression during the course of infection with a possible role in the pathogenesis of pancytopenia.

As leishmanioses constituem um grupo de zoonoses causadas por várias espécies do gênero Leishmania. O diagnóstico molecular associado aos exames clínicos, sorológicos e parasitológicos facilitam a investigação epidemiológica e controle das infecções. A PCR convencional (cPCR) e em tempo real (qPCR) são utilizadas para detectar moléculas de DNA do parasita em diferentes amostras biológicas, no entanto, quando a carga parasitária é baixa, resultados falsos-negativos são comuns na rotina diagnóstica. O objetivo deste estudo foi o avaliar a utilidade dos iniciadores para qPCR para substituir ou associar à cPCR no diagnóstico molecular da leishmaniose visceral (LV) e leishmaniose tegumentar americana (LTA). Foram testados iniciadores moleculares pelo sistema TaqMan® com o objetivo de discriminar Leishmania (Viannia) braziliensis e Leishmania (Leishmania) infantum chagasi a partir de sequências da actina de Leishmania. O gênero Leishmania foi identificado pelos iniciadores LEISH18S que amplifica uma região 18S de Leishmania. Os iniciadores ACTLDon amplifica uma região da actina de L. (L.) infantum chagasi. L. (V.) braziliensis foi identificada pelos iniciadores ACTLVian, que amplifica uma região da actina do complexo L. (V.) braziliensis. Foram testadas 581 amostras de DNA, extraídas de sangue, necropsias de órgãos, aspirados de linfonodo ou medula e biópsia de lesão. Para LV foram testadas 361 amostras (243 caninas e 118 humanas). Destas, 214 foram positivas na cPCR, foi o padrão ouro, e a sensibilidade com os iniciadores da qPCR variou de 92,99% (199) a 95,32% (204). A especificidade foi determinada por 147 amostras negativas na cPCR e variou de 95,91% (141) a 98,63% (145). Os índices de concordância variaram de 92,99% (RV1/RV2; LEISH18S e ACTLDon) a 95,32% (RV1-RV2 e LEISH18S). Foram testadas 220 amostras para LTA. A especificidade com os iniciadores foi determinada por 80 amostras negativas e os resultados foram 98,75% e 100% para LEISH18S e ACTLVian respectivamente, e das 140 amostras positivas na cPCR 129 (92.14%) e 124 (88,57%) foram positivas com os iniciadores LEISH18S e ACTLVian respectivamente. Os índices de concordância foram de 88,57% (LB-3C/LU-5A/ACTLVian/LEISH18S) e 92,14% (LB-3C/LU-5A e LEISH18S). Estes resultados mostram que a associação dos iniciadores para qPCR em conjunto com a cPCR pode aumentar a detecção do parasita em amostras clínicas. / Leishmaniasis are a group of zoonosis caused by several species belonging to the genus Leishmania. The molecular diagnostic associated with the clinical, serological and parasitological examination favor the epidemiological investigation and the infection control. The conventional PCR (cPCR) and the real time PCR (qPCR) are used to detect the parasite as from DNA molecules in a number of biological samples, however, when the parasite load is low, false results are common in the diagnostic routine. The ain of the present study was to evaluate the advantage of the primers in qPCR in order to replace or associate with cPCR in the molecular diagnosis of visceral leishmaniasis (VL) and cutaneous leishmaniasis (CL) molecular diagnostic. The primers were tested on TaqMan® system in order to discriminate Leishmania (Viannia) braziliensis and Leshmania (Leishmania) infantum chagasi based on a sequence of Leishmania actin. The genus Leishmania was recognized by the primer LEISH18S, which amplifies an 18S region of Leishmania. The primer ACTLDon amplifies a region of the L. (L.) infantum chagasi actin. The L. (V.) braziliensis was determined by the primer ACTLVian and this primer amplifies a region of the L. (V.) braziliensis complex actin. A total of 581 DNA samples were tested. These samples were extracted from blood, organs necropsy, lymph node and bone marrow aspirate and lesion biopsy. A number of 361 samples (243 canine and 118 human) were tested for VL. From these 361 samples, 241 were positive in cPCR and the sensitivity in the qPCR primers ranged from 92,99% (199) to 95,32 (204). The specificity was determined by 147 negative samples in cPCR and ranged from 95,91% (141) to 98,63 % (145). The agreement indices ranged from 92,99% (RV1/RV2; LEISH18S e ACTLDon) to 95,32% (RV1-RV2 and LEISH18S). A total of 220 samples were tested for CL. The primer\'s specificity was determined by 80 negative samples and the results were 98,75% and 100% for LEISH18S and ACTLVan respectively, and from 140 positive samples in cPCR 129 (92,14%) and 124 (88,57%) were positive for primers LEISH18S and ACTLVian respectively. The agreement indices were 88,57% (LB-3/LU-5A/ACTLVian/LEISH18S) and 92,14% (LB-3C/LU-5A and LEISH18S). These results show that the primers for qPCR are likely to improve the detection of the parasite in clinical samples. These results show that the associate use of qPCR primers with cPCR primers can increase the detection of the parasite in clinical samples.

A definição de caso confirmado de leishmaniose visceral é baseada em aspectos clínicos, epidemiológicos e laboratoriais. As técnicas padrão-ouro para o diagnóstico laboratorial da leishmaniose visceral são as parasitológicas esfregaço e cultura de aspirado de medula óssea, que permitem a identificação do gênero Leishmania por visualização microscópica do parasito em lâmina, e os testes sorológicos, como o imunocromatográfico, que apresenta baixa sensibilidade em indivíduos imunodeprimidos. Em determinadas situações, como na coinfecção Leishmania/HIV, para o tratamento específico ou nos inquéritos epidemiológicos, faz-se necessária a identificação do agente etiológico da leishmaniose visceral, que comumente é a L. (L.) infantum. Desse modo, propusemos um algoritmo para o diagnóstico molecular da leishmaniose visceral, com o emprego da kDNA PCR (K20-K22 E RV1-RV2) do ITS1 PCR (LITSR e L5. 8S), tendo como referência os resultados obtidos nos exames parasitológicos e sorológicos, além de dados clínicos e epidemiológicos dos pacientes. Complementando nossa proposta, a realização da técnica de análise dos polimorfismos dos fragmentos da ITS1 PCR por RFLP, para identificação do agente etiológico, foi avaliada como alternativa à laboriosa técnica de eletroforese de isoenzimas, padrão-ouro para definição de espécies no diagnóstico das leishmanioses. As técnicas moleculares empregadas foram validadas em 82 amostras (ITS 1 PCR e kDNA PCR RV1-RV2) e 48 amostras (kDNA PCR K20-K22) de pacientes com leishmaniose visceral confirmada e em 30 amostras de pacientes saudáveis. Os ensaios obtiveram as seguintes sensibilidades: 97,5% (80/82) na ITS1 PCR, 98% (47/48) na kDNA PCR K20-K22, e 92,7% (76/82) na kDNA PCR RV1-RV2, e 100% de especificidade em todos os testes. Quando comparados os resultados obtidos nos testes moleculares ITS1 PCR, kDNA PCR K20-K22 e kDNA PCR RV1-RV2 ao padrão ouro observou-se uma concordância quase perfeita, com um índice kappa maior que 0,80, e um valor de p < 0,001. No que concerne à realização da ITS1 PCR RFLP nas 80 amostras positivas, 52,5% (42/80) demonstraram perfil semelhante ao de L. (L.) infantum. Três das amostras que não demonstraram perfil na RFLP da ITS1 PCR e na kDNA PCR K20-K22 obtiveram mais de 90% de identidade com a cepa de L. (L.) chagasi, mediante análise das amostras na técnica do sequenciamento. Concluímos o presente estudo com a proposta de um algoritmo de diagnóstico molecular da leishmaniose visceral, que deverá considerar a realização prévia do diagnóstico parasitológico e imunocromatográfico. E sugerimos, quando necessário, a realização da kDNA PCR K20-K22 e a kDNA PCR RV1-RV2 para a determinação do gênero e de subgênero da Leishmania, respectivamente. Por fim, que se complemente com a ITS1 PCR, seguida da ITS1 RFLP para a definição do agente etiológico da leishmaniose visceral. / The definition of visceral leishmaniasis case is based on clinical, epidemiological and laboratory aspects. The gold standard techniques for laboratory diagnosis of visceral leishmaniasis are parasitological, smear and culture of bone marrow aspirate, which allow the identification of Leishmania in microscopic visualization, and the serological tests, like the immunochromatographic, which presents low sensitivity in immunodepressed individuals. In certain situations, such as Leishmania/HIV co-infection, for specific treatment or in epidemiological surveys, it is necessary to identify the etiological agent of visceral leishmaniasis, commonly caused by L. (L.) infantum. In this way, an algorithm for the molecular diagnosis of visceral leishmaniasis by kDNA PCR (K20/K22 and RV1/RV2) and ITS1 PCR (LITSR e L5.8S) was proposed, using as the gold standard, the parasitological and serological results, as well as clinical and epidemiological data of patients. Complementing our proposal, the performance of the Restriction Fragment Length Polymorphism of the ITS1 (ITS1 PCR RFLP) to identify the etiological agent, was evaluated as an alternative to technical laboriously isoenzyme electrophoresis, the gold standard for defining species in the diagnosis of leishmaniasis. The molecular techniques were validated on 82 samples (ITS 1 kDNA PCR and PCR-RV1 RV2) and 48 samples (K20-K22 kDNA PCR) from patients with confirmed visceral leishmaniasis and 30 samples from healthy patients. The following sensitivities were presented by the molecular tests: 97.5% (80/82) for the ITS1 PCR, 98% (47/48) for kDNA PCR K20-K22 and 92.7% (76/82) for kDNA PCR-RV2 RV1, and 100% specificity for all tests. When comparing the results from molecular tests ITS1 PCR, kDNA PCR K20-K22 and kDNA PCR RV1-RV2 with the established gold standard, we see an almost perfect agreement with kappa index higher than 0.80, and p value <0.001 were obtained. As regard to ITS1 PCR RFLP, from 80 positive samples, 52.5% (42/80) showed a similar profile to that of L. (L.) infantum. Three of the samples that did not demonstrate RFLP profile in the ITS1 PCR and PCR kDNA K20-K22 obtained more than 90% of identity with strain L. (L.) chagasi, by analyzing the samples in sequencing. As our conclusion, an algorithm for the molecular diagnosis of visceral leishmaniasis must consider a previous performance of the parasitological and immunochromatographic diagnosis. When necessary kDNA PCR K20-K22 and kDNA RV1-RV2 PCR are suggested to determine the genus and the subgenus Leishmania, respectively. In addition, this molecular diagnosis can be complemented, with the ITS1 PCR, followed by RFLP ITS1, which can define the etiological agent of visceral leishmaniasis.

A presença constante das imagens fotográficas, na contemporaneidade, evidencia-se em um cotidiano marcado pelo intenso uso da imagem fotográfica, levando a um olhar naturalizado e que, em princípio, não impacta a vida dos sujeitos. A partir da aliança entre o smartphone e o acesso à internet banda larga, nasce a fotografia conectada, da qual é difícil evadir, pois, em todos os momentos do cotidiano, podemos nos expor e nos comunicarmos numa fusão de fala e de imagem. Nos atuais estudos sobre comportamento informacional e práticas informacionais, falta compreensão de como os sujeitos fazem uso das imagens. Neste contexto, do ponto de vista do sujeito, cabe a questão - podemos identificar efeitos positivos ou negativos no uso de imagens fotográficas, na perspectiva da Ciência da Informação? O objetivo geral consistiu em analisar estudos sobre o uso da imagem na Ciência da Informação e, com base em critérios da Ontopsicologia, agregar valor aos estudos das práticas e comportamentos informacionais dos sujeitos frente a imagens fotográficas contemporâneas. O objeto de estudo comportou o uso dessas imagens fotográficas. A pesquisa, de abordagem qualitativa e de natureza interpretativa, baseou-se em três fases: a) identificação de distintas formas de uso das imagens fotográficas, resultando em cinco práticas de uso: I. Imagem conectada; II. Imagem híbrida e reapropriada; III. Imagem e autorretrato; IV. Imagem efêmera; V. Imagem e os valores sociais. Uma vez identificados os usos, propomos: b) a identificação de funcionalidades (positivas ou negativas) no uso das imagens fotográficas. Após essas duas fases, com auxílio da Ontopsicologia, entendemos que o uso de imagens fotográficas e a funcionalidade desses usos devem estar associados à percepção visceral (organísmica) e desenvolvemos: c) um experimento. Neste, utilizamos 09 imagens fotográficas, analisadas por 20 adolescentes, em que objetivamos compreender o uso da percepção visceral com atenção voltada às variações emotivas. Ao analisarmos o uso da imagem fotográfica, concluímos que não podemos enfatizar apenas quais usos os sujeitos fazem da imagem, mas, sim, observar também o que a imagem ocasiona aos sujeitos, sugerindo, nesta pesquisa, portanto, que é a imagem que dá a funcionalidade (positiva ou negativa), e não o uso, isto é, a funcionalidade ou não funcionalidade, antes de tudo, dá-se pela imagem. Para conhecermos a funcionalidade, substancialmente, adicionamos o critério organísmico (visceral) ao critério lógico-racional. Por fim, é importante ainda salientar que o uso da imagem fotográfica conectada traz a característica do uso interativo, isto é, o sujeito se crê ativo na interação por meio das imagens fotográficas, mas é passivo diante da ação dos complexos. / The constant presence of photographic images nowadays is seen in a routine marked by an intense use of photographic images, accounting for a naturalized view upon images and giving the impression that they do not cause any impact on subjects. Since the alliance between the smartphone and broadband internet access, the connected photography comes to be, from which it is difficult to escape because at any moment in our daily life, we may expose ourselves and communicate with each other in a fusion between speech and image. In contemporary researches about information behaviour and information practices, such studies lack the comprehension of how subjects make use of images. In this context, from the subject\'s point of view, a question arises: can we identify the positive or negative effects in the use of photographic images according to Information Science? The main objective consisted in analyzing studies about the use of image in Science Information and according to the criteria of Ontopsychology, aggregating value to the studies about information behavior and information practices of subjects before contemporary photographic images. This research is of qualitative approach and of interpretative nature, focusing in three stages: a) identification of distinct ways of photographic image use, resulting in five practices of image use: I. Connected image; II. Hybrid reappropriated image; III. Image and selfie; IV. Ephemeral image; V. Image and social values. Once the uses were identified, carried out the b) identification of functionalities (positive and negative) in the use of photographic images. After these two stages, with the support of Ontopsychology, it was identified that the uses of photographic images and their functionalities must be associated with visceral perception (organismic perception) and developed c) an experiment. In this experiment, we used 09 photographic images were analyzed by 20 adolescents in which the aim was to comprehend the use of visceral perception with a focus on emotive variations. In analyzing the use of photographic image, rather it was concluded that one cannot emphasize only what uses such subjects make use but as well as to observe what the image causes in the subject hence suggesting, in this research, that it is the image that provides the functionality (positive or negative) and not the use itself, that is, the functionality or the non-functionality comes to be through the image. In order to know substantially the functionality, one must add the organismic (visceral) criterium to the logical and rational criterium. Lastly, it is important to highlight that the use of connected photographic image brings the characteristic of interactive use; the subject sees himself in the interaction through photographic images but becomes passive before the action of complexes.