Proefschrift Rijksuniversiteit Limburg Maastricht. / Met lit. opg., bibliogr. en een samenvatting in het Nederlands.

Orientador : Nilce Correa Meirelles / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T04:08:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_MariaEleonoraFeracinda_M.pdf: 11412891 bytes, checksum: 69a8041bc4aae23eb63e9d7b723e9903 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Citocromos P450 formam uma superfamília de proteínas que metabolizam um grande número de substratos endógenos e xenobióticos. O metabolismo de xenobióticos pelo citocromo P450 é uma importante área da farmacologia molecular e da toxicologia que vem sendo usada nas últimas décadas como ferramenta de biomonitoramento contra os danos causados por poluentes. O objetivo deste trabalho foi estudar o sistema P450 (fase I da biotransformação), Glutationa-S-Transferase (GST - fase 11 da biotranformação) e enzimas antioxidantes (SOO, CATe GPx) no fígado de Curimbatá, um peixe brasileiro, frente à ação de três xenobióticos (Trifluoperazine, Triton X-100 e Tween 80), viabilizando o uso do citocromo P450 como biomarcador de poluição ambienta!. A caracterização espectral do sistema mostrou que Curimbatás têm um componente extra no sistema microssomal que se caracteriza por apresentar um máximo de absorção em 418-420nm e na presença de xenobióticos têm suas concentrações diminuídas sugerindo que seja uma hemeproteína de características espectrais semelhantes ao do P450. A purificação do citocromo P450 através de uma coluna de hidrofobicidade acoplada em HPLC se mostrou eficaz, mas não foi possível identificar as isoformas presentes no sistema. O método enzimático detectou apenas a presença da CYP1A. Todos os xenobióticos levaram à diminuição do conteúdo dos citocromos b5 e P450 dependente do tempo de incubação e da concentração do xenobiótico. As enzimas NAOPH citocromo P450 redutase e EROO (CYP1A) foram ativadas pela TFP e marcadamente inibidas pelo Triton X-100 e Tween 80, sugerindo que os xenobióticos interagem com os componentes da membrana microssomal. A TFP foi o único xenobiótico a ser parcialmente metabolizado e, além das alterações da membrana, também leva à inibição seletiva de algumas isoformas do P450, pois foi possível detectar a ativação da EROO (CYP1A). A causa desta inibição seria a interação de metabólitos da TFP com o citocromo P450. O Triton X-100 também destrói o P450 por alquilação do grupamento heme, sugerindo um efeito inibitório do surfactante ainda que na forma de monômeros. A GST foi induzida pelos três xenobióticos indicando a capacidade de Curimbatá em detoxificar tais compostos. A análise das enzimas antioxidantes e dos níveis de peroxidação lipídica mostraram que seu uso como ferramenta de bíomarcação deve ser sempre associado à atividade de outras enzimas. Portanto, embora o P450 seja um biomarcador em potencial, deve ser analisado conjuntamente com outras enzimas, pois os xenobióticos interagem diferentemente com cada componente do sistema levando à indução de algumas proteínas concomitantemente à inibição de outras / Abstract: Cytochromes P450 constitute a superfamily of hemeproteins that play a vital role in the metabolism of a wide variety of compounds such as steroids, fatty acids, drugs and environmental pollutants. Xenobiotic metabolism and role of cytochrome P450 are important areas of molecular pharmacology and toxicology, and of great interest mainly in the studies on prevention of the damage caused by chemical pollutants. In this work we investigated the interaction of Trifluoperazine, Triton X-100 and Tween 80 with cytochrome P450, phase I and 11 enzymes and antioxidants defenses in Curimbatá, a brazilian teleost fish. Spectral characterization indicated a possible presence of a hemeprotein, with similar characteristics of cytochrome P450, in liver of Curimbatá; a peak at 418-420nm ("P420") decreased in the presence of xenobiotics. Purification of cytochrome P450 had been succeded by HPLC on hydrophobic column (Il-Boundapak - C18). Only one isoform of P450 - CYP1A - could be detected in Curimbatá hepatic microsomes. EROD and NADPH cytochrome P450 redutase were strongly inhibited by Triton X-100 and Tween 80 in a time- and concentration-dependent way. Triton X-100 and Tween 80 inactivated the system by interacting with the membrane. In the case of Triton X-100, that cause the alkylation in the hememoiety, P450 inactivation occurred even in monomers. However these enzymes were activated by Trifluoperazine (TFP) suggesting that only TFP was being metabolized by P450 system and that its metabolites could interact with P450 and inativeted it. Glutathione-S-Transferase, a phase 11 enzyme, was activated by the xenobiotics, suggesting that Curimbatá could metabolize these compounds. Analyses of antioxidant enzymes activities, lipoperoxidation levels and P450 contents showed a non-significative correlation between antioxidant effects and P450 system. Our results suggested that P450 is a potential biomarker of xenobiotic exposure, but its use need to be associated with other enzymes because xenobiotics can distinctly interact with each component of the system leading to the activation of some enzymes and inhibition of others / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:45:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 237897.pdf: 458130 bytes, checksum: 060a4a0f2a67fee33822c23e381a7b72 (MD5)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-22Bitstream added on 2014-06-13T19:15:01Z : No. of bitstreams: 1 000736635.pdf: 2331643 bytes, checksum: 167aba47cf2d8bdfb0a675d7f72c523f (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O cerrado brasileiro contém inúmeras plantas utilizadas no tratamento popular de várias enfermidades onde destacamos as espécies do gênero Byrsonima. Os relatos de seu uso são diversos: tratamento de infecções fúngicas e bacterianas, feridas crônicas, doença de Chagas, contra tuberculose, como diurética, antiemética e etc. Na literatura, há comprovação para atividades: antioxidante, antiprotozoário, depressor no Sistema Nervoso Central (SNC), antihiperglicêmicas e antihiperlipêmica. O perfil fitoquímico demonstra taninos, flavonóides, triterpenos, ésteres aromáticos, entre outros, o que indica o potencial farmacológico deste gênero. Sabe-se que o uso não padronizado de plantas pode ser danoso aos usuários, devido a propriedades desconhecidas ou por conterem contaminantes ambientais. Embora haja diversos estudos abordando o potencial biológico das plantas deste gênero, amplamente utilizadas na medicina popular, ainda há poucos estudos sobre sua segurança Por esta razão, o objetivo deste trabalho foi avaliar as atividades mutagênica, antimutagência e estrogênica de extratos etanólicos padronizados (70%) de folhas de quatro espécies: Byrsonima verbascifolia, Byrsonima coccolobifolia, Byrsonima correifolia e Byrsonima ligustrifolia. A atividade mutagênica foi realizada pelo Teste de Ames, utilizando o ensaio de pré-incubação, na ausência e presença de ativação metabólica (S9). As linhagens utilizadas foram TA98, TA97a, TA100 e TA102 e foram testadas cinco concentrações de cada amostra. A atividade antimutagênica foi testada apenas para as amostras negativas para o teste de Ames (B. verbascifolia e B. correifolia), com a diferença que sempre foi associada a um agente mutagênico conhecido. A atividade estrogênica foi avaliada por dois testes: -Recombinant Yeast Assay (RYA) que utiliza a levedura Saccharomyces cerevisiae (linhagem BY4741) modificada geneticamente, contendo um gene para receptor e... / The Brazilian cerrado contain several native plants used in folk medicine for treating many diseases. Plants of the genus Byrsonima are one of them. There are several reports of its use: the treatment of fungal and bacterial infections, chronic wounds, Chagas disease, tuberculosis, as a diuretic and antiemetic. In literature there is evidence for activities: antioxidant, antiprotozoal, depressing CNS, antihiperglicemic and antihiperlipemic. The phytochemical profile shows tannins, flavonoids, triterpenes, aromatic esters and others, which indicates the pharmacological potential of this genus. It is known that the use of non-standard plant can be harmful to users due to unknown properties or for containing environmental contaminants. Although there are several studies about the biological potential of plants of this genus, widely used in folk medicine, there are few studies about their safety. For this reason, the aim of this study was to investigate the mutagenic, antimutagenic and estrogenic activities of standardized ethanolic extracts (70%) of leaves of four species: Byrsonima verbascifolia, Byrsonima correifolia, Byrsonima coccolobifolia and Byrsonima ligustrifolia. Mutagenic acivity was evaluated by Ames Test, performed according to preincubation assay, in absence and presence of metabolic activation system (S9). TA98, TA97a, TA100 and TA102 strains were used and five concentrations of each sample, in triplicates, were tested. For antimutagenicity assay were used only the samples negative in Ames Test (B. verbascifolia and B. correifolia), with the difference that samples were associated a known mutagenic agent The estrogenic activity was evaluated by two assays: -The Recombinant Yeast Assay (RYA) uses the yeast Saccharomyces cerevisiae (BY4741 strain)genetically modified, containing a gene for human estrogen receptor and a plasmid which expresses the β-galactosidase enzyme of Escherichia coli and - Escreen, a test that evaluates ...

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-07Bitstream added on 2015-03-03T12:06:47Z : No. of bitstreams: 1 000806991_20151107.pdf: 386455 bytes, checksum: b7f03e3b958479285cf406825702427a (MD5) Bitstreams deleted on 2015-11-10T12:03:42Z: 000806991_20151107.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-11-10T12:04:30Z : No. of bitstreams: 1 000806991.pdf: 5266870 bytes, checksum: 4d7e003b068560cb7e9a4216d552fceb (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / As proteínas são macromoléculas complexas de alto peso molecular e que desempenham inúmeras funções nas células. Estas funções podem ser comprometidas caso ocorram modificações nas suas estruturas. Fatores físicos e químicos podem provocar estas alterações, inclusive processos oxidativos mediados por espécies reativas de oxigênio. Entre essas modificações destaca-se a formação de proteínas amiloidais que estão relacionadas a diversas doenças como Parkinson e Alzheimer. O ácido hipocloroso (HOCl) e o ácido hipobromoso (HOBr) são oxidantes gerados pela ativação de leucócitos e há abundantes relatos de seus efeitos deletérios sobre proteínas. Nesse contexto, este trabalho teve como objetivo estudar as alterações estruturais e funcionais na proteína lisozima provocadas por sua oxidação através dos ácidos hipo-halosos, HOCl, HOBr e por suas haloaminas, taurina cloramina (Tau-NHCl), taurina bromamina (Tau-NHBr) e taurina dibromamina (Tau-NBr2). A oxidação de lisozima pela adição de Tau-NHBr ou Tau-NBr2 (excesso molar de quatro vezes) causou depleção completa da sua fluorescência intrínseca, entretanto, os ácidos HOCl e HOBr causaram a redução de apenas 40% e 50% respectivamente. Em contraste com o seu precursor, Tau-NHCl, foi incapaz de oxidar a lisozima. As haloaminas foram cerca de duas vezes mais eficazes como inibidores da atividade enzimática do que os seus precursores HOCl e HOBr. Por outro lado, os ácidos foram mais eficazes na promoção da agregação de lisozima, efeito este, evidenciado pelo aumento da turbidez, espalhamento de luz e anisotropia de fluorescência da proteína. Os agregados apresentaram propriedades espectroscópicas que sugeriram a formação de estruturas amiloidais, como foi observado pelo ensaio de Tioflavina T. Em contraste com os ácidos hipo-halosos, as haloaminas foram inibidores parciais da formação de proteínas amiloides. Em conclusão, estes resultados sugerem ... / Proteins are complex macromolecules of high molecular weight and performing numerous functions in cells. These functions may be compromised if there are any modifications in their structures. Physical and chemical factors may cause these changes, including oxidative processes mediated by reactive oxygen species. Among these changes was the formation of amyloid proteins that are related to various diseases such as Parkinson's and Alzheimer's. The hypochlorous acid (HOCl) and hipobromous acid (HOBr) are oxidants generated by the activation of leukocytes and there are abundant reports of their deleterious effects on proteins. In this context this work aimed to study the structural and functional changes in the protein lysozyme caused by their oxidation through hypohalous acids, HOCl, HOBr, and haloamines taurine Chloramine (Tau-NHCl), taurine monobromamine (Tau-NHBr) and taurine dibromamine (Tau-NBr2). The oxidation of lysozyme by addition of Tau-NHBr or Tau-NBr2 (molar excess of four times) caused complete depletion of its intrinsic fluorescence, however, the acids HOCl and HOBr caused a reduction of only 40% and 50% respectively. In contrast to its precursor, Tau-NHCl was unable to oxidise the lysozyme. The haloamines were about twice as effective inhibitors of enzyme activity than their precursors HOCl and HOBr. On the other hand, the acids were more effective in promoting aggregation of lysozyme, this effect, evidenced by increased turbidity, light scattering and fluorescence anisotropy of the protein. The aggregates presented spectroscopic properties that suggested the formation of amyloid structures, as noted by thioflavin t test. In contrast with hypohalous acids, the haloamines were partial formation of protein inhibitors became. In conclusion, these results suggest that HOBr, like their haloamines Tau-NHBr and Tau-NBr2, are selective with regard to oxidation of tryptophan residues in proteins. This particularity directly affects ...

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3871.pdf: 3349931 bytes, checksum: 699bd6092d3da7218a1550f52bb10cdb (MD5) Previous issue date: 2011-05-27 / Financiadora de Estudos e Projetos / Litopenaeus vannamei is known as Pacific white shrimp and is the main species marketed worldwide. Its geographical distribution includes the Pacific coast, ranging from Mexico to Peru. Due to its outstanding economic importance, this species has been farmed and showing great adapting levels to captivity, having been introduced in several countries, including Brazil. However, despite all the concern to properly manage the farming populations, many countries have not had a renewal of their breeding herds because of the risk of introduction of exogenous pathogens, which has increased the degree of inbreeding of these stocks and decreased levels of genetic diversity. To monitor this loss, microsatellite markers or SSRs (Simple Sequence Repeats), from genome arbitrary and expressed regions have been used. In the specific case of SSRs present in expressed regions of the genome (ESTs, Expressed Sequence Tags) or SSRs-ESTs, they allow the access to the genetic variability of populations, and the ESTs markers devoid of SSRs may be related to genes of interest, subsidizing the development of breeding programs based on Marker Assisted Selection (MAS). Moreover, EST-SSRs loci may show an excellent rate of transferability in taxonomically related species, since they are in more conserved regions of the genome. Within this context, this study aimed (i) the validation population of EST-SSR loci isolated through dataming from L. vannamei ESTs database (www.shrimp.ufscar.br), (ii) the genomic annotation of ESTs and EST-SSRs markers (iii) the determination of EC numbers (Enzyme Codes), aiming respectively, (i) the characterization of polymorphic markers (ii) the description of genes and their protein products and (iii) the establishment of information to describe the possible pathways for the penaeid group. Therefore, we tested 32 EST-SSRs loci in PCR reactions. After establishing the best pattern of reaction and subsequent loci genotyping, nine SSRs-ESTs were polymorphic, with allele number ranging from two to 20, levels of observed heterozygosity from 0.32 to 0.86 and average PIC (Polymorphism Information Content) of 0.78. No pair of loci presented in linkage disequilibrium. However, after Bonferroni correction, we found that one of these showed a significant deficit of heterozygotes. The nine polymorphic loci from L.vannamei showed satisfactory amplification in at least one of the seven native species tested: the marine ones Xiphopenaeus kroyeri, Farfantepenaeus brasiliensis, Farfantepenaeus paulensis, Rimapenaeus constrictus and Litopenaeus schmitti and the freshwater ones Macrobrachium amazonicum and Macrobrachium jeskii, being useful also for genetic studies of these species. The genome annotation performed by access in ShEST website (Litopenaeus vannamei EST Genome Project) showed that only three of nine loci 4 have the gene and its protein product described. The other loci showed no matches with any other genomic database available for research. In this work, gene product could be elucidated for 99% of ESTs, being possible to establish 209 EC numbers, highlighting enzymes responsible for xenobiotics metabolism, immunity, energy production, reproduction, oxidative stress, among others. These codes were used for construction of some metabolic pathways present in the penaeid group, contributing for building a wide database of the genome of this important animal group. These data may be applied in genetic improvement programs as well as gene expression studies, such as realtime PCR and microarrays. / Litopenaeus vannamei é conhecido como camarão branco do Pacífico e é a principal espécie de peneídeo comercializada no mundo. Sua distribuição geográfica compreende a costa do Oceano Pacífico, indo desde o México até o Peru. Devido a sua relevante importância econômica, esta espécie passou a ser cultivada, adaptando-se bem às condições de cativeiro, tendo sido introduzida em diversos países, incluindo o Brasil. Entretanto, apesar de toda preocupação em manejar adequadamente as populações de cultivo, muitos países não têm tido renovação de seus estoques reprodutores ou plantéis, devido ao risco de introdução de patógenos exógenos, o que tem aumentado o grau de endogamia desses estoques e diminuição dos níveis de diversidade genética. Para monitorar esta perda de variabilidade genética, marcadores microssatélites ou SSRs (Simple Sequence Repeats), oriundos de regiões arbitrárias e expressas do genoma desta espécie, vêm sendo utilizados. No caso específico de SSRs presentes em regiões expressas do genoma (ESTs, Expressed Sequence Tags) ou SSRs-ESTs, além destes permitirem acessar a variabilidade genética das populações, as ESTs desprovidas de SSRs podem estar relacionadas a genes de interesse, podendo auxiliar o desenvolvimento de programas de melhoramento genético baseados na Seleção Assistida por Marcadores (MAS). Além disso, locos SSRs-ESTs podem apresentar uma excelente taxa de transferabilidade em espécies taxonomicamente relacionadas, uma vez que se encontram em regiões mais conservadas do genoma. Dentro deste contexto, este trabalho teve como objetivos (i) a validação populacional de locos SSRs-ESTs, isolados via dataming no banco de dados de ESTs de L. vannamei (www.shrimp.ufscar.br); (ii) a anotação genômica de marcas ESTs e locos SSRs-ESTs (iii) e a determinação dos EC numbers (códigos enzimáticos), visando, respectivamente, (i) a caracterização de marcadores polimórficos, (ii) a descrição de genes e seus respectivos produtos protéicos e (iii) o estabelecimento de informações para descrever as possíveis vias metabólicas para o grupo de peneídeos. Para tanto foram testados 32 locos SSRs-ESTs em reações de PCR. Após estabelecimento do melhor perfil de reação e posterior genotipagem dos locos, nove SSRs-ESTs mostraram-se polimórficos, com número de alelos variando de 4 a 20, níveis de heterozigozidade observada de 0,32 a 0,86 e valores médios de PIC (Polymorphism Information Content) de 0,78. Nenhum loco apresentou-se em desequilíbrio de ligação. Entretanto, após correção de Bonferroni, constatou-se que um deles apresentou déficit significativo de heterozigotos. Os nove locos polimórficos para L. vannamei apresentaram amplificação satisfatória em pelo menos uma das sete espécies nativas testadas: as marinhas Xiphopenaeus kroyeri, 2 Farfantepenaeus brasiliensis, Farfantepenaeus paulensis, Rimapenaeus constrictus e Litopenaeus schmitti e as de água doce Macrobrachium amazonicum e Macrobrachium jeskii podendo se constituir em marcas úteis para os estudos genéticos também dessas espécies. A anotação genômica realizada via acesso à página de anotação do Projeto ShEST (Projeto Genoma EST de Litopenaeus vannamei) demonstrou que apenas três dos nove locos polimórficos têm o seu gene e produto protéico já descritos. Os demais locos não apresentaram blasts positivos com nenhuma outra base de dados genômicos disponíveis para pesquisa. No caso das sequências anotadas, o produto gênico pôde ser elucidado para 99% destas, sendo possível estabelecer 209 EC numbers, destacando-se enzimas responsáveis pela degradação de xenobióticos, imunidade, produção de energia, reprodução, estresse oxidativo, dentre outras. Estes códigos enzimáticos foram utilizados para determinação de algumas vias metabólicas presentes no grupo dos peneídeos, contribuindo assim para a construção de uma ampla base de dados do genoma deste importante grupo animal, podendo ser utilizada em estudos de conservação, programas de melhoramento genético e em análises de expressão gênica, como PCR em tempo real e microarrays.

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-05-11Bitstream added on 2014-12-02T11:21:12Z : No. of bitstreams: 1 000792962.pdf: 3515072 bytes, checksum: 9e97af9de80a902b8bcd01386ba9a367 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Atualmente o Brasil possui uma estimativa de produção de bioetanol com a safra de 2013/14 de 27,17 bilhões de litros. Esta produção é derivada de um processo de fermentação das usinas sucroalcooleiras brasileiras e caracteriza-se atualmente como um processo semi-contínuo. A levedura Saccharomyces cerevisiae é a mais abrangente nos processos de fermentação, por ser adaptável aos diferentes ambientes, possuindo uma rica diversidade de perfis fenotípicos e genotípicos, evidenciando que as interações entre fatores ambientais e este organismo influenciam na identificação de características essenciais e específicas nos processos fermentativos. A construção de um banco de organismos relacionados com a produção de etanol é indispensável aos interesses de pesquisadores do programa Bioen da UNESP. Assim, é de fundamental importância a existência de uma coleção de linhagens de leveduras, com potencial fermentativo elevado. Em estudo anterior, desenvolvido por nosso grupo, foram selecionadas de uma usina brasileira duas linhagens (ZFC4 e ZFD4) com características potencialmente diferenciais no processo de produção de etanol. Com base nestes dados o objetivo deste estudo foi primeiramente analisar características genotípicas e fenotípicas das linhagens ZFC4 e ZFD4 para identificação de fatores genéticos funcionais por meio de sequenciamento do DNA e RNA global de nova geração Hiseq Ilumina e posteriormente, as linhagens selecionadas foram rastreadas por combinações com os padrões industriais (PE-2, CAT e SA-I), visando à seleção de associações sinérgicas promissoras no processo de fermentação para o setor sucroalcooleiro. Para tanto as associações destas linhagens foram avaliadas quanto ao crescimento celular, assimilação de açucares, tolerância à temperatura e ao etanol e capacidade fermentativa. Todas as combinações realizadas entre os padrões e as linhagens ZFC4 e ZFD4 foram sinérgicas para ... / Brazil currently has an estimated production of bioethanol with crop 2013/14 from 27.17 billion liters. This production is derived from a fermentation process of Brazilian sugarcane mills and is characterized today as a semi-continuous process. The yeast Saccharomyces cerevisiae is the most comprehensive in fermentation processes, by being adaptable to different environments, having a rich diversity of phenotypic and genotypic profiles, showing that the interactions between environmental factors and influences in this organism identification of essential and specific features in the fermentative process. The construction of a bank of organisms related to ethanol production is vital to the interests of researchers Bioen UNESP program. Thus, it is fundamental to the existence of a collection of yeast strains with high fermentation potential. In a previous study conducted by our group, were selected from a Brazilian plant two strains (ZFC4 and ZFD4) with potentially differential characteristics in the ethanol production process. Based on these data, the aim of this study was first to analyze genotypic and phenotypic characteristics of strains ZFC4 and ZFD4 to identify functional genetic factors through sequencing DNA and RNA global new generation HiSeq Ilumina and subsequently selected strains were screened for combinations with industry standards (PE-2, CAT and SA-I), aiming at selecting promising synergistic associations in the fermentation process for the alcohol sector. For both the associations of these strains were evaluated for cell growth, assimilation of sugars, tolerance to temperature and ethanol and fermentative capacity. All combinations made between the patterns and ZFC4 and ZFD4 strains were synergistic for all parameters analyzed, especially in relation to resistance to high ethanol concentrations and temperature. Importantly, our lines alone were as effective as the fermentation patterns, however these in combination ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-12Bitstream added on 2014-06-13T19:39:55Z : No. of bitstreams: 1 moreira_pr_me_araca.pdf: 315047 bytes, checksum: 1a5a979a465e9cd8dca5be26006d8106 (MD5) / O fígado possui grande importância no organismo animal, pois realiza a biotransformação de substâncias exógenas (xenobióticos) e por esse motivo, o tecido hepático acaba sendo alvo potencial de substâncias tóxicas. A bixina, proveniente das sementes de urucum (Bixa orellana L.) é um antioxidante que pode contribuir para a proteção das células e tecidos contra os efeitos deletérios dos radicais livres e também possui efeitos farmacológicos como antiinflamatório, antibacteriano e antitumoral. No presente trabalho foi avaliado o efeito protetor da bixina sobre os danos hepáticos provocados pelo tetracloreto de carbono (CCl ) em ratos. Os animais foram divididos em quatro 4 grupos de seis animais cada. A dose de CCl4 (0,125 mL/kg de peso corporal) foi injetada por via intraperitoneal (i.p.) e a bixina (5,0 mg/kg de peso corporal) foi administrada por gavagem por 7 dias antes da injeção do CCl . Após a 4 eutanásia, o sangue de cada animal foi colhido e foram analisadas a atividade sérica das enzimas alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotransferase (AST). O fígado foi removido e após a preparação do homogenato foi analisada a atividade da enzima glutationa redutase (GR), os níveis de glutationa reduzida (GSH) e nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato na forma reduzida (NADPH), além da peroxidação dos lipídios de membrana e alterações histopatológicas. A bixina protegeu os danos hepáticos provocados pelo CCl4 conforme observado pela diminuição da liberação das enzimas ALT e AST. A bixina também protegeu o fígado contra os efeitos oxidantes do CCl , uma vez que impediu a diminuição da atividade da enzima 4 GR e dos níveis de GSH e NADPH. A peroxidação dos lipídios de membrana também foi inibida pela bixina. Além disso, o dano histopatológico do fígado foi significativamente reduzido pelo... / The liver has a great importance in the animal body since it is responsible to the biotransformation of exogenous chemicals (xenobiotics), making the liver tissue a potential target for toxic substances. The carotenoid bixin from annatto seeds (Bixa orellana L.) is an antioxidant that can contribute to protecting cells and tissues against the deleterious effects of free radicals and also has pharmacological effects such as anti-inflammatory, antibacterial and antitumoral activities. In the present study we evaluated the protective effect of the bixin on liver damage caused by carbon tetrachloride (CCl ) in rats. 4 The animals were divided in four groups of six rats in each. The dose of CCl4 (0.125 mL kg-1 body wt.) was injected i.p. and bixin (5.0 mg kg-1 body wt.) was given by gavage 7 days before the CCl4 injection. After euthanasia, the blood of each animal was collected and the serum activities of alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) were analyzed. The livers were removed and after preparation of the homogenate the activity of the enzyme glutathione reductase (GR), the levels of reduced glutathione (GSH) and NADPH, as well as the peroxidation of membrane lipids and histopathological changes were determined. Bixin reduced the liver damage caused by CCl4 as noted by the significant decrease of the release of the enzymes ALT and AST. Bixin also protected the liver against the oxidizing effects of CCl , since it 4 prevented the decrease in GR activity and levels of GSH and NADPH. The peroxidation of membrane lipids was also inhibited by bixin. Moreover, the histopathological damage of liver was also significantly reduced by bixin treatment. Therefore, we can conclude that the protective effect of bixin against... (Complete abstract click electronic access below)

Die Ätiologie von entzündlichen Pankreaserkrankungen, insbesondere bei den idiopathischen Pankreatitiden, ist weitgehend noch nicht verstanden. In der folgenden Arbeit sollen immunologische und molekularbiologische Aspekte zu Pankreaserkrankungen unter Berücksichtigung eigener Untersuchungen dargestellt werden. Zu Beginn unserer Arbeit haben wir untersucht inwieweit immunologische Veränderungen an der Entstehung einer chronischen Pankreatitis beteiligt sind. Wir fanden eine systemische Aktivierung des zellulären Immunsystems, ohne dass sich Unterschiede zwischen idiopathischer und alkoholtoxischer Pankreatitis ergaben. Im folgenden haben wir uns mit dem molekularbiologischen Hintergrund von entzündlichen und malignen Pankreaserkrankungen beschäftigt. Eine genetische Modellerkrankung ist die hereditäre Pankreatitis, deren genetische Ursache 1996 mit der Entdeckung zweier Mutationen im kationischen Trypsinogen entschlüsselt wurde. Mit der Identifizierung einer neuen Mutation im kationischen Trypsinogen und deren funktionellen Charakterisierung konnten wir hier zum weiteren Verständnis dieser Erkrankung beitragen. Weitere Untersuchungen beschäftigten sich mit dem genetischen Hintergrund bei Patienten mit idiopathischer Pankreatitis. Bei etwa 30% dieser Patienten fanden wir ein abnormales Allel im Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) Gen und bei einzelnen Patienten einen Polymorphismus im Serine Proteasen Inhibitor (SPINK1) Gen. Das zunehmende Wissen um genetische Veränderungen und deren Folgen setzt auch eine kritische Auseinandersetzung mit ethischen und rechtlichen Fragen voraus. Daher wurden während einer internationalen Konsensus Konferenz Richtlinien zum Umgang mit diesen Fragen erarbeitet. Die Assoziation von UGT1A7*3 Polymorphismus, welches ein Phase II Protein mit niedriger katalytischer Entgiftungsaktivität im Xenobiotika Stoffwechsel kodiert, mit dem Auftreten von Pankreaserkrankungen war Gegenstand weiterer Untersuchungen. Hierzu untersuchten wir Patienten mit alkoholischer chronischer Pankreatitis, Patienten mit einer SPINK1 Mutation und gesunde Kontrollen. Darüberhinaus betrachteten wir ein Kollektiv von Patienten mit einem Pankreaskarzinom. Unsere Ergebnisse belegen einen synergistischen negativen Effekt von exogenen Risikofaktoren (Alkohol, Nikotin) und genetischer Prädisposition. Die Rolle des oxidativen Stresses in der Genese von Pankreaserkrankungen wird damit untermauert. Erste therapeutische Ansätze aus den gewonnenen Erkenntnisses haben wir in einer prospektiven Studie mit einer immunmodulierenden und antioxidativ wirksamen Glutaminsubstitution bei Patienten mit akuter Pankreatitis gezeigt. Die Glutaminsubstitution führte zu einem besseren Krankheitsverlauf. / The etiology of inflammatory and malignat pancreatic disease are poorly understood. This thesis will discuss our results of immunological and genetic investigations in patients with inflammatory and malignat pancreatic diseases. Especially the background of idiopathic pancreatitis will be discussed. We started our investigations with immunological investigations and demonstrated an evidence for a systemic activated cellular immune system in patients with chronic pancreatitis irrespectively of the aetiology of pancreatitis. Further studies deal with the genetic background of pancreatitis. The discovery of the association between a mutation of the cationic trypsinogen gene and the hereditary pancreatitis was a milestone in the modern pancreatology. We contribute to the understanding of this disease by detecting a new mutation (D22G). We were able to functional characterise this mutation. Mutation of the activation peptides (D22G, K23R) are related to an increased release of trypsin in hydrolisation studies in vitro. In addition, our further investigations confirmed and extended the knowledge of the role of mutation in the CFTR gene and the SPINK 1 gene in patients with 'idiopathic' pancreatitis. Cognisant of the ethical and clinical responsibilities guidelines for the genetic testing and managing of patients with genetic diseases of the pancreas were developed. The low detoxification activity UGT1A7*3 polymorphism has been identified as a novel risk factor of pancreatic inflammatory and malignant diseases defining the interaction of genetic predisposition and environmentally induced oxidative injury. Based on this data we conducted a prospective, randomised clinical trial on the supplementation with glutamine in patients with acute pancreatitis shedulded for total parenteral nutrition. The administration of glutamine, which has been shown to have an immune-modulating and antioxidative capacity, was associated with a favourable clinical course of the patiens receiving glutamine.