Introdução e objetivos: O adenocarcinoma de esôfago (AE) é um tumor agressivo, com o aumento da incidência em países ocidentais. Vários marcadores prognósticos têm sido propostos, incluindo o Receptor do Fator de Crescimento Epitelial (EGFR). O objetivo deste estudo foi avaliar se a expressão do EGFR está relacionada com o estadiamento tumoral e com a sobrevida. Métodos: Trata-se de uma coorte histórica na qual 70 pacientes consecutivos com AE atendidos entre 2000 a 2009 foram considerados elegíveis para o estudo. As peças cirúrgicas dos pacientes submetidos a esofagectomia transhiatal foram avaliadas para estabelecer a expressão do EGFR e analisadas em relação às variáveis dos pacientes. A sobrevida foi determinada de acordo com os registros nos prontuários médicos dos pacientes ou por contato telefônico com familiares. Resultados: Dos 70 pacientes, 37 (53%) preencheram os critérios para inclusão no estudo. A expressão do EGFR foi positiva em 16 pacientes (43%) e foi mais freqüente nos estágios tumorais mais avançados, TNM (I e II = 0% vs III = 47% vs IV = 100%, P <0,001). A sobrevida média em meses, foi significativamente menor no grupo de pacientes com expressão do EGFR (10,5 vs 21,7, P = 0,001) em comparação com pacientes sem expressão do EGFR. Houve maior expressão do EGFR em neoplasias com pobre diferenciação tumoral em relação aos bem diferenciados e moderadamente diferenciados. Conclusão: Em pacientes com adenocarcinoma de esôfago tratados com esofagectomia, a expressão de EGFR está relacionada com maior estádio TNM e menor sobrevida. A expressão do EGFR pode ser assumida como um marcador de prognóstico para o adenocarcinoma de esôfago. / Background and aims: Esophageal adenocarcinoma (EA) is an aggressive tumor with increasing incidence in occidental countries. Several prognostic biomarkers have been proposed, including epidermal growth factor receptor (EGFR). The aim of this study was to assess whether EGFR expression predicts tumor staging and survival. Methods: In this historical cohort, 70 consecutive patients with EA managed between 2000 and 2009 were considered eligible for the study. Surgical specimens from those treated with esophagectomy were evaluated to establish EGFR expression and tumor differentiation. Survival was determined according to medical register or patient contact. Results: Among 70 patients, 37 (53%) underwent esophagectomy without pre-surgical chemotherapy and composed the study population. Of these, EGFR expression was found in 16 patients (43%). EGFR expression was more frequent as higher was TNM staging (I and II = 0% vs. III = 47% vs. IV = 100%; P < 0.001). Average survival in months was significantly shorter in the group of patients with EGFR expression (10.5 vs. 21.7; P = 0.001). Conclusions: In patients with esophageal adenocarcinoma treated with esophagectomy, EGFR expression was related with higher TNM staging and shorter survival. EGFR expression can be assumed as a prognostic marker for esophageal adenocarcinoma.

Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-04T19:33:58Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-JulianaVasconcelos.pdf: 1176748 bytes, checksum: bb96bcabc13f8fef386568e90cfdc033 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-04T19:33:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-JulianaVasconcelos.pdf: 1176748 bytes, checksum: bb96bcabc13f8fef386568e90cfdc033 (MD5) Previous issue date: 2012 / Câncer é um conjunto de alterações celulares, que leva a uma divisão celular sem controle, podendo invadir tecidos adjacentes através da circulação sanguínea e do sistema linfático. O Câncer de Próstata (CP) é o segundo tumor mais comum entre a população masculina, e é considerado o câncer da terceira idade. A carcinogênese é um mecanismo complexo no qual ocorre mudanças na expressão de proteínas e glicoconjugados. Glicosilação é mediada por glicosiltransferases, enzimas que tem função de inserir resíduos de carboidratos específicos, e é um dos mais importantes processos biológicos pós-tradução de modificações na estrutura final e função de lipídios e proteínas. As fucosiltransferases (FUT) participam da transferência de resíduos de L-fucose, um sacarídeo associado ao câncer e a processos inflamatórios, da GDP-L-fucose. Neste estudo objetivou-se avaliar a expressão dos genes FUT3 e FUT6 através da Imunohistoquímica em Adenocarcinoma Prostático e Hiperplasia Prostática Benigna correlacionando com o padrão de expressão de L-fucose empregando a histoquímica com as lectinas UEA-I (Ulex europaeus) e LTA (Lotus tetragonolobus). As enzimas FUT3 e FUT6 apresentaram-se com uma alta expressão tanto no Adenocarcinoma Prostático como na Hiperplasia Benigna Prostática, principalmente a FUT 6. Os resultados da histoquímica com lectinas mostraram uma baixa distribuição/accessibilidade de L-fucose. Sugere-se que, as enzimas FUT3 e FUT6 possam representar potenciais biomarcadores para avaliar alterações benignas e malignas prostáticas refletindo uma variação no perfil de L-fucose nestes tumores que podem estar associados às suas características biológicas. / Cancer is a set of cellular changes, leading to uncontrolled cell division that may invade surrounding tissues via bloodstream and lymphatic system. Prostate Cancer (PC) is the second most common tumor in men and is considered the cancer of the elderly. Carcinogenesis is a complex mechanism in which changes occur in the expression of proteins and glycoconjugates where glycosylation plays key roles since modulates the carbohydrate moieties in glycoconjugates being one of the most important biological processes of posttranslational modifications in the final structure and function of lipids and proteins. Fucosyltransferases (FUTs) are enzymes that catalyze the transfer of the L-fucose residues, a saccharide which has been linked to cancer and inflammation features, from GDP-Fuc. This study the objective to evaluate the expression of genes FUT 3 and FUT 6 by immunohistochemistry in Prostatic Adenocarcinoma and Benign Prostatic Hyperplasia and to correlates with the expression pattern of L-fucose using lectin histochemistry with UEA-I (Ulex europaeus) and LTA (Lotus tetragonolobus). FUT3 and FUT6 showed a high expression in both prostatic tissues, especially FUT6. The results of lectin histochemistry showed a low distribution/accessibility of L-fucose residues. It is suggested that FUT3 and FUT6 may represent potential biomarkers to evaluate benign and malignant alterations in prostate reflecting a variation in the profile of L-fucose residues in these tumors which can be associated to their biological features.

Orientador: Ubirajara Ferreira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T11:07:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_ElcioDias_M.pdf: 1742572 bytes, checksum: db8e0fccf7f5b7dd66a71b32ca51cacc (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Introdução: margem cirúrgica comprometida ou positiva é definida como tumor estendendo-se na superfície de corte do cirurgião. A porcentagem deste evento, resultante de incisão capsular, varia de 1,3 a 71 % (EPSTEIN, 2001). O objetivo deste estudo é comparar o comprometimento das margens cirúrgicas nas prostatectomias radicais realizadas por via retropúbica e laparoscópica, em dois serviços de referência no Brasil. Pacientes e Métodos: foram analisados os exames anátomo-patológjcos de 179 pacientes submetidos a prostatecomia radical por adenocarcinoma de próstata, 89 por via retropúbica e 90 por via laparoscópica. Critérios de inclusão: pacientes com PSA (antígeno específico da próstata) igual ou menor que 15 ng/ml (nanogramas por mililitro) e Gleason igual ou menor que 7 na biópsia prostática, estádio clínico máximo T2. Resultados: houve comprometimento de margem cirúrgica em 41,57 % dos pacientes submetidos à PRR (prostatectomia radical retropúbica), distribuídos da seguinte maneira: 34,21 % nos estádios pT2 (7,69 % no pT2a, zero no pT2b e 40,98 % no pT2c) e 84,61% nos estádios pT3 (77,77 % no pT3a e 100 % no pT3b). Nos pacientes submetidos a PRL (prostatectomia radical laparoscópica) houve margens cirúrgicas positivas em 24,44 % dos pacientes, distribuídos da seguinte maneira: 20,98 % nos estádios pT2 (11,11 % no pT2a, 27,27 % no pT2b e 21,31 % no pT2c) e 55,55 % nos estádios pT3 (zero % no pT3a e 62,50 % no pT3b). Conclusão: nas amostras analisadas, a proporção de margem cirúrgica positiva foi maior nas prostatectomias radicais realizadas pela via retropúbica do que pela laparoscópica (p= 0,023), em dois serviços de referência nas respectivas técnicas, no Brasil. No entanto, o fato das cirurgias retropúbicas serem realizadas por médicos residentes, em instituição de ensino, e as laparoscópicas realizadas por um único cirurgião experiente, e os exames anátomo-patológicos realizados por técnicas e patologistas distintos, não permite a generalização dos resultados. Maior número de pacientes em estudo prospectivo e randomizado seria necessário para uma melhor comparação entre os grupos / Abstract: Introduction: Compromised or positive surgical margin is defined as a tumor extending at the surgeon cutting surface. A percentage from this event, resulted from capsular incision, varies from 1.3 to 71% (EPSTEIN, 2001). The goal of this study is to compare the compromising of surgical margins at the radical prostatectomies performed through both retropubic and laparoscopic way, in two reference medical services in Brazil. Patients and Methods: pathological examinations were analyzed from 179 patients who underwent to radical prostatectomy by prostate adenocarcinoma, 89 patients by retropubic and 90 patients by laparoscopic way. Inclusion criteria: patients with PSA (prostate specific antigen) equal or less than 15 ng/ml (nanograms by miiiliter) and Gleason score equal or less than 7 at the prostate biopsy, maximum clinical T2 stage. Results: There has been compromising of the surgical margin in 41,57% of the patients who underwent to RRP (radical retropubic prostatectomy), distributed in the following way: 34,21% at pT2 stage (7,69% at pT2a, 0% at pT2b and 40,98% at pT2c) and 84,61% at pT3 (77,77% at pT3a and 100% at pT3b) stage. In the patients who had undergone to LRP (Laparoscopic Radical Prostatectomy), there have been positive surgical margins in 24,44% of the patients as following: 20,98% at pT2 stage (11,11% at pT2a. 27,27% at pT2b and 21,31% at pT2c stage) and 55,55% at pT3 stage (0% at pT3a and 62,50% at pT3b) Conclusion: At the analyzed samples, the proportion of positive surgical margin was greater at the radical prostatectomy performed by retropubic route than by laparocospic one (p=0,023), in two reference medical services using the respective techniques in Brazil. However, the fact that the retropubic surgeries were performed by resident doctors, in teaching school-hospital institution, while the laparoscopic ones were performed by a single expert surgeon and that the pathological examinations were performed by both distinct techniques and pathologists, the result generalization is not allowed. A greater number of patients in a randomized and prospective study would be necessary for a better comparison between the groups / Mestrado / Cirurgia / Mestre em Cirurgia

A mitocôndria é a organela citoplasmática responsável pelo maior sistema produtor de energia, a fosforilação oxidativa (OXPHOS). Foi proposto que em células tumorais a hiper-regulação da glicólise em condições normais de oxigênio (Efeito Warburg), está associada a defeitos na OXPHOS e pode regular o fenótipo tumoral, por exemplo, o potencial metastático da célula por meio da indução de vias pseudohipóxicas durante a normóxia. Estudos recentes mostraram que vários tipos de tumores possuem mutações somáticas em seu genoma mitocondrial, o que pode alterar as funções da OXPHOS levando a troca de metabolismo energético nas células tumorais e induzindo a tumorigênese. Diante disto, o presente trabalho avaliou a instabilidade do genoma mitocondrial em etapas bem definidas da progressão do câncer colorretal. O DNA genômico foi extraído de amostras de adenoma, adenocarcinoma, tecido adjacente e sangue periférico de nove pacientes diagnosticados com Câncer colorretal. O genoma mitocondrial foi amplificado e sequenciado para que fossem feitas as buscas por mutações nas amostras de sangue periférico, adenomas e adenocarcinoma. Foi também medido o número de cópias relativas do mtDNA. Foram encontradas um total de 233 mutações, das quais 162 foram em comum entre os três tecidos avaliados. As amostras de adenocarcinoma foram as que apresentaram uma maior média de mutações por amostra (44,6), seguidas dos adenoma (40,2) e do sangue periférico (34). As amostras de adenocarcinoma apresentaram uma maior instabilidade do mtDNA refletidas a partir de um maior número de mutações somáticas (tanto do tipo InDel como mutações de uma única base), mutações não sinônimas com maior patogenicidade, maior número de mutações em heteroplasmia e com taxa de heteroplasmia elevada. Já as amostras de adenoma apresentaram instabilidade dos seus mtDNA intermediários entre o tecido não tumoral e tumoral, refletindo bem a etapa de modificação celular no qual esses tecidos se encontram. Na análise do número de cópias relativas, as amostras de adenocarcinoma tiveram diminuição no número de cópias relativas quando comparadas com tecido adjacente (p= 0,01) e com adenomas (p= 0,04). Em síntese, o presente trabalho sugere que a instabilidade do genoma mitocondrial parece ter um papel importante no desenvolvimento de tumores colorretais. / The mitochondrion is a cytoplasmic organelle responsible for the major energy producing system, which is the oxidative phosphorylation enzyme pathway (OXPHOS). It was proposed that glycolysis up-regulation during normal oxygen conditions (Warburg effect) may induce defects in the mitochondrial respiration and regulate tumoral phenotypes, for example, metastatic potential through the induction of pseudohipoxic pathways during normoxia. Recent studies have shown that many kinds of tumors have mtDNA somatic mutations, which could alter the OXPHOS functions, leading to changes in glucose metabolismo and improvind tumorigenesis. This study analyzed the mitochondrial genome instability of well defined stages of colorectal cancer. Genomic DNA was extracted from adenoma, adenocarcinoma, adjacente tissue and peripheral blood of patients diagnosed with Colorectal cancer. The mitochondrial genome was amplified and sequenced for mutations screening in adenoma, adenocarcinoma e blood samples. It was also analyzed the relative mtDNA copy number. It was find a total of 233 mutations, which 162 were in common among the three analyzed tissues. The adenocarcinoma samples presented a greater mutation mean per sample (44.6) followed by adenomas samples (40.2) and blood samples (34). The adenocarcinoma samples also shown a greater mitochondrial genome instability refleted by increased of somatic mutations (InDels and single nucleotide variation), non sinonimous mutations with higher patogenicity, increased number of heteroplasmatic mutations and higher heteroplasmatic levels. The adenoma samples showed intermadiate instability of its mtDNA, which well reflects the intermediate stage of cellular modifications of this tissue. The mtDN copy number analysis shown that the adenocarcinoma samples presented decreased number of mtDNA content when compared with adjacente tissue (p= 0.01) and adenoma samples (p= 0.04). In summary the presente study suggests that the mitochondrial genomic instability seems to play an importante role in colorectal tumorigenesis.

O câncer colorretal está entre as principais neoplasias malignas sendo a quarta causa de morte por câncer no mundo e a terceira no Brasil. Mutações nos genes APC, DCC, K-RAS e TP53 foram originalmente associadas com a progressão do câncer colorretal (CCR) esporádico. Entretanto, estudos de genoma completo e exoma têm revelado outros genes relacionados com o CCR. Como consequência dessas mutações, um conjunto de genes alteram sua expressão modulando vias gênicas em cada estágio da progressão tumoral. Nesse sentido, há um grande esforço para definir assinaturas gênicas que auxiliem na classificação dos tumores quanto ao diagnóstico e prognóstico dos pacientes. Portanto, o objetivo deste projeto foi analisar a expressão gênica em escala genômica de amostras de adenoma e adenocarcinoma colorretal visando identificar novos marcadores genéticos ligados a transição adenoma-adenocarcinoma. Para isso, dez amostras pareadas de adenoma e adenocarcinoma do mesmo paciente foram submetidas à análise de expressão gênica pela técnica de microarranjos. Análises de bioinformática, revelaram uma assinatura de 689 genes diferencialmente expressos (fold-change>2, p<0.05), que permitiram a classificação genética entre o adenoma e o adenocarcinoma. Oitos genes (IL6, IL8, OSM, SFRP4, ETV4, ESM1, SIM2 e RETNLB) foram escolhidos para validação com base na sua função e valor de expressão no tecido tumoral. A análise in silico dos genes hiperexpressos realizada no programa MetaCore (análise de dados e vias gênicas) destacou diversas vias gênicas ligadas à tumorigênese, incluindo as de adesão celular e Transição Epitélio-Mesenquimal (TEM), importantes na fase avaçada da progressão tumoral. O gene ETV4 foi selecionado para realização dos ensaios funcionais em virtude de seus altos níveis de expressão nas dez amostras de adenocarcinoma e participação nos mecanismos de proliferação celular e no TEM. Ensaios in vitro de siRNA para o gene ETV4 resultou na diminuição da proliferação celular e no potencial clonogênico da linhagem HT29. Adicionalmente, foram investigadas mutações nos genes APC, K-RAS e TP53, nas amostras pareadas de adenoma, adenocarcinoma, tecido normal e sangue periférico dos dez pacientes. Todos os pacientes apresentaram mutação germinativas nos três genes. No entanto, apenas os genes K-RAS (40%) e TP53 (30%) apresentaram mutações somáticas e patogênicas, exclusivamente nos adenocarcinomas. Esses resultados demonstraram que, na nossa coorte, mutações nos genes TP53 e K-RAS podem estar contribuindo para a progressão em uma parcela do câncer colorretal do tipo esporádico. Em resumo, o presente estudo aponta que o gene ETV4 pode contribuir para ativar o mecanismo de proliferação celular em adenocarcinoma colorretal. Além disso, o estudo demonstra a importância da combinação da análise de mutação com o perfil de expressão para melhor compreensão da base molecular do câncer colorretal. / Colorectal cancer is among the main malignant neoplasia, it is the fourth leading cause of death in the world and the third in Brazil. Mutations in APC, DCC, KRAS and TP53 genes have been originally associated with the progression of sporadic colorectal cancer (CRC). However genome wide and exome studies have revealed other genes related to CRC. As a consequence of these mutations, a set of genes alters their expression modulating gene pathways in every stage of tumor progression. In this regard, there is great effort to define gene signatures that help to classify tumors in relation to patients diagnosis and prognosis. Therefore, the objective of this project was to analyze gene expression in genomic scale of colorectal adenoma and adenocarcinoma samples aiming to identify new genetic markers linked to adenoma- adenocarcinoma transition. For this purpose, ten paired adenoma and adenocarcinoma samples of the same patient were subjected to gene expression analysis by microarrays technique. Bioinformatics analyses revealed a signature of 689 genes differentially expressed (fold-change>2, p<0.05), which allowed the genetic classification between adenoma and adenocarcinoma. Eight genes (IL6, IL8, OSM, SFRP4, ETV4, ESM1, SIM2 and RETNLB) were chosen for validation based on their function and expression value in tumor tissue. In silico analysis of hyperexpressed genes, done in the program MetaCore (data analysis and gene pathways), highlighted diverse gene pathways linked to tumorigenesis, including the ones of cell adhesion and Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT), important in the advanced phase of tumor progression. ETV4 gene was selected for functional assays due to its high expression levels in the ten samples of adenocarcinoma and due to its participation in cell proliferation mechanisms and in EMT. In vitro siRNA assays for ETV4 gene resulted in the decrease of cell proliferation and in the clonogenic potential of HT29 line. In addition, mutations in APC, KRAS and TP53 genes were investigated in paired samples of adenoma, adenocarcinoma, normal tissue, and peripheral blood from ten patients. All patients showed germline mutations in the three genes. However, only KRAS (40%) and TP53 (30%) genes showed somatic and pathogenic mutations, exclusively in adenocarcinomas. These results demonstrated that, in our cohort, mutations in TP53 and KRAS genes might be contributing to progression in a portion of sporadic-type colorectal cancer. In summary, the present study points out that ETV4 gene might contribute to activate cell proliferation mechanism in colorectal adenocarcinoma. Moreover, the study demonstrates the importance of combining the mutation analysis with expression profile in order to better understanding the molecular basis of colorectal cancer.

INTRODUÇÃO: Os adenocarcinomas da ampola de Vater (AAV) são classificados conforme a diferenciação histológica em tipos pancreatobliliar e intestinal, com comportamento biológico e prognóstico diferentes. O objetivo deste estudo foi determinar um painel imuno-histoquímico para a diferenciação do tipo histológico dos AAVs e analisar os fatores relacionados com a sobrevivência desses tumores em uma série de pacientes submetidos à ressecção do tumor com intenção curativa. MÉTODO: Variáveis clínicas e histopatológicas foram analisadas para os tipos intestinal e pancreatobiliar em 97 doentes submetidos à ressecção pancreática por AAV. A expressão de mucinas (MUC1, MUC2, MUC5AC, MUC6), citoqueratinas (CK7, CK17, CK20), CD10, CDX2, p53, p16, Ki67, CEA, CA19-9, hMLH1, hMLH2 e hMSH6 foi avaliada usando técnica de imunoistoquímica. RESULTADOS: Quarenta e três casos foram histologicamente classificados como tipo intestinal, 47 como tipo pancreatobiliar e 7 em outros tipos, de acordo com a classificação de Albores-Saavedra. O tipo intestinal apresentou expressão significativamente maior de MUC2 (74,4% vs 23,4%; p<0,001), CK20 (76,7% vs 29,8%; p <0,001), CDX2 (86% vs 21,3%; p<0,001) e CD10 (81,4% vs 51,1%; p=0,002); enquanto MUC1 (53,5% vs 82,9%; p=0,001) e CK7 (79,1% vs 95,7%; p=0,041) foram mais expressos nos adenocarcinomas pancreatobiliares. Os marcadores imunoistoquímicos com maior acurácia para determinação do tipo histológico foram CDX2, MUC2 e CK20 (82,2%, 75,5% e 73,3% respectivamente). A positividade para p53, p16, Ki67, CEA e CA19-9 foram 36,1%, 30,9%, 37,1%, 79,4% e 88,6%, respectivamente, sem qualquer diferença significativa entre os tipos intestinal e pancreatobiliar. A perda de expressão de pelo menos uma das proteínas hMLH1, hMLH2 e hMSH6 ocorreu em 13,4%, sem diferença entre os tipos histológicos. Em análise univarida, a sobrevivência foi significativamente menor para o tipo histológico pancreaticobiliar (p = 0,021), estadiamentos TNM mais avançados (p <0,001), neoplasias com acometimento linfonodal (p <0,001) e invasão linfática (p=0,004). Em análise multivariada, o acometimento linfonodal (p <0,001) e a invasão linfática (0,013) foram fatores independentes de risco. CONCLUSÃO: A expressão imunoistoquímica de MUC1, MUC2 e CDX2 são úteis para a classificação dos AAVs em tipo intestinal e pancreatobiliar. O tipo intestinal esteve associado a um melhor prognóstico, mas apenas o acometimento linfonodal e a invasão linfática foram fatores independentes de risco / The intestinal and pancreatobliliary types of histological Vaters ampulla adenocarcinoma present different biologic behavior and prognosis. The aim of the present study was to determine the best immunohistochemical panel for tumor classification and analyze the survival of these histological types in a series of patients. Clinical and histopathologal variables were analyzed for each pancreatobiliary and intestinal type differentiation in 97 resected ampullary adenocarcinomas. The expression of mucins (MUC1, MUC2, MUC5AC, MUC6), cytokeratins (CK7, CK17, CK20), CD10, CDX2, p53, p16, Ki67, CEA, CA19-9, hMLH1, hMLH2 and hMSH6 was evaluated by using immunohistochemistry. Forty three Vaters ampulla carcinomas were histologically classified into intestinal type, 47 into pancreatobiliary type and 7 into other types, according to Albores-Saavedra classification. The intestinal type had a significantly higher expression of MUC2 (74.4%vs23.4%. p<0.001), CK20 (76.7%vs29.8%p<0.001), CDX2 (86%vs21. 3%. p<0.001) and CD10 (81.4%vs51.1%. p=0.002); while MUC1 (53.5%vs82.9%. p=0.001) and CK7 (79.1%vs95.7%. p=0.041) were higher in pancreatobiliary adenocarcinomas. The most accurate markers for the immunohistochemical classification were CDX2, MUC2 and CK20 (82.2%. 75.5% and 73.3% respectively). The positivity of p53, p16, Ki67, CEA and CA19-9 were 36.1%, 30.6%, 37.1%, 79% and 88%, respectively without any significant difference between intestinal and pancreatobiliary types. Loss of hMLH1, hMLH2 and hMSH6 proteins expression occurred in 13.4% of Vaters adenocarcinoma, without difference between intestinal and pancreaticobiliary types. Survival was significantly affected by pancreaticobiliary type (p=0.021), tumor grade (p<0.001), nodal status (p<0.001) and lymphatic invasion (p=0.004). Only regional lymph node involvement (p<0.001) and lymphatic invasion (p=0.013) was independent risk factors for survival in a multivariate analysis. In conclusion, the immunohistochemical expression of apomucins MUC1, MUC2 and CDX2 are useful for the classification of ampullary adenocarcinoma in intestinal and pancreaticobiliary types. Intestinal type was associated with a better prognosis, but only lymph node status and lymphatic invasion were independent risk factors

Orientador: Carmen Silvia Passos Lima, Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T11:53:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nascimento_Helvia_D.pdf: 1845231 bytes, checksum: 16f227072d706aacb01f06165bd8a553 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Os mecanismos moleculares envolvidos na origem do adenocarcinoma de cólon esporádico (ACE) ainda não estão completamente elucidados. Recentemente, o método da análise seriada da expressão gênica (SAGE) foi descrito como eficaz para identificar a expressão total de genes de tipos celulares diversos, mas esta análise não foi realizada em células epiteliais purificadas do ACE moderadamente diferenciado. Nós caracterizamos pelo método SAGE a expressão gênica total de células epiteliais neoplásicas do cólon de um paciente com ACE moderadamente diferenciado (SAGE CC) e de células epiteliais normais do cólon de um paciente com megacólon chagásico (SAGE CN). Foram geradas, após o seqüenciamento automático, 44.004 e 43.570 tags totais das bibliotecas SAGE CC e SAGE CN, representando 16.484 e 13.479 tags únicas, respectivamente. Na comparação entre as bibliotecas, 171 transcritos diferencialmente expressos foram identificados (P< 0,001; expressão diferencial = 5), incluindo 10% de transcritos que podem representar genes não descritos. As expressões de 10 genes diferencialmente expressos foram quantificadas pela reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) na amostra de células epiteliais neoplásicas (SAGE CC), com o intuito de validar os resultados obtidos pelo SAGE, e, posteriormente, em amostras de células epiteliais de outros cinco pacientes com o mesmo tipo de doença. As expressões foram concordantes em 80% dos genes (CEACAM6, KLK6, LYZ, PFN1, S100A8, S100A9, VIL2 e ZFHX1B) e discordantes nos demais 20% (PLA1A e ZNF277). As expressões dos genes de interesse, quantificadas pelos dois métodos, foram similares na amostra SAGE CC e nas amostras dos demais pacientes com a doença. Foram observadas expressões anormais de genes envolvidos com a proliferação e diferenciação celular e com a resposta ao stress em células epiteliais neoplásicas. Foram também visualizadas expressões anormais de genes não relacionados com a doença e de genes ainda não identificados. Em conjunto, os nossos resultados podem contribuir para a identificação de genes relacionados com a origem ou a progressão do ACE moderadamente diferenciado e, ainda, para a descoberta de agentes terapêuticos específicos que controlem a proliferação anormal das células neoplásicas. / Abstract: The molecular mechanisms involved in sporadic colon adenocarcinoma (SCA) are still not completely elucidated. Recently, the serial analysis of gene expression (SAGE) method has allowed the global analysis of genes expressed in diverse cellular types but there are no studies in purified epithelial cells of SCA moderately differenciated. We have characterized through SAGE the global gene expression of neoplastic epithelial cells from a SCA moderately differenciated patient (SAGE CC) and normal epithelial cells from a megacolon patient (SAGE CN). After automatic sequencing, a total of 44.004 tags from SAGE CC and 43.570 tags from SAGE CN profiles were generated, representing 16.484 and 13.479 unique tags, respectively. Comparing both profiles, 171 differentially expressed transcripts were identified (P< 0.001; fold = 5), including 10.0% that may represent novel transcripts. The expression of 10 selected genes was further investigated by realtime polymerase chain reaction (qPCR) in the SCA moderately differenciated epithelial cells sample (SAGE CC), with the purpose of to validate the results obtained by the SAGE method, and also in five epithelial cells samples from the same type of SCA patients. Similar expressions were seen in 80% (CEACAM6, KLK6, LYZ, PFN1, S100A8, S100A9, VIL2 e ZFHX1B) and discordant expressions were seen in 20% (PLA1A e ZNF277) of analysed genes. On SAGE CC sample and samples of the SCA patients, all genes presented similar expressions measured by both methods. We observed abnormal expression of genes involved with cell proliferation and differentiation, and with response to stress in neoplastic epithelial cells. Also, were found abnormal expressions of genes not related with the disease and not identified genes. Together, our results may contribute for the identification of genes involved in the origin or progression of SCA moderately differenciated, as well as for the discovery of new therapeutical agents, with specific action on abnormal proliferation of the neoplastic cells. / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientadores: Albina Messias de Almeida Milani Altemani, Fernanda Viviane Mariano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T17:05:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_HarimTavaresdos_M.pdf: 2437979 bytes, checksum: 15b0ad672ced32a375d9670dcdeb69ad (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Introdução: Gotas lipídicas (GL) são organelas altamente reguladas envolvidas na ativação e metabolismo celular assim como em processos inflamatórios e neoplásicos. O aumento da lipogênese levando a um aumento no número de GL é um fenótipo comum a numerosos carcinomas humanos e tem sido associado com: diferenciação, proliferação e agressividade tumoral. Objetivo: Avaliarem carcinomas salivares: a) a frequência e quantidade das GLs citoplasmáticas, correlacionando-as com a morfologia tumoral, grau de diferenciação e proliferação celular e b) a expressão de proteínas relacionadas ao processo secretório celular (STAT5a e mamoglobina). Material e métodos:em 79 casos de carcinomas de glândulas salivares foram utilizados os anticorpos Ki-67, adipophilin, STAT 5a e mamoglobina. A quantificação da imunoreatividade ao adipophilin, STAT 5a e mamoglobina foi através de uma escala semi-quantitativa. A intensidade de marcação do STAT 5a e mamoglobina foi subjetivamente avaliada como fraca/moderada ou intensa. A positividade ao Ki-67 foi calculada através da relação entre o número de células positivas e o número total de células tumorais em três áreas selecionadas da amostra. Resultados:os subtipos histopatológicos que apresentaram positividade ao adipophilin em 50% ou mais das células, foram os casos: MASC (100%), CCA (85,64%), CM (83%), CDS (75%) e CSeb (50%). Índice de proliferação maior que 10% das células tumorais foi observado no CSeb (Ki-67 = 29%), seguido do CDS (Ki-67 = 23,11%) e do CM (Ki-67 = 12,15%). Nos casos de CAC com transformação para alto grau a área transformadaapresentou maior proliferação e lipogênese quando comparada à área convencional. Somente os casos de MASC apresentaram imunorreatividade acentuada para STAT5a e mamoglobina. Conclusões: Embora exista correlação entre o acúmulo de gotas lipídicas e o índice proliferativo do tumor, em alguns tipos de carcinomas salivares tal depósito está possivelmente relacionado à diferenciação celular (CSeb e MASC) ou alteração metabólica (CCA). O acúmulo de Gl refletindo diferenciação celular se apresenta como gotas maiores em contraste com as microgotas frequentemente detectadas nos carcinomas com alto índice proliferativo. No MASC a forte expressão de STAT5a e mamoglobina sugere que a que o acúmulo de GL possivelmente reflete diferenciação do tipo lactacional.Mais estudos são necessários para entender o papel das gotas lipídicas citoplasmáticas em carcinomas de glândulas salivares. (Apoio FAPESP: 2012/18104-4 e 2012/18086-6) / Abstract: Introduction: Lipid droplets (LD) are highly regulated organelles involved in cell activation and metabolism as well as in inflammatory and neoplastic processes Upregulated lipogenesis leading to an increased number of cytoplasmic LD is a common phenotype to numerous human carcinomas and has been associated with: differentiation, proliferation and aggressiveness of the tumor. Objective: to evaluate in salivary carcinomas: a) the frequency and quantity of cytoplasmics LDs, correlating it with tumoral morphology, differentiation grade e cellular proliferation and b) the expression of proteins associated with cellular secretor process (STAT5a and mammaglobin). Material and Methods:in 79 cases of salivary gland carcinomas, an immunohistochemical study was performed with the antibodies Ki-67, adipophilin, STAT 5a and mammaglobin. The positive neoplastic cells were assessed regarding quantity using a semi-quantitative scale. The intensity of expression for each antibody was subjectively evaluated as weak/ moderate or intense.The positivity for Ki-67 was calculated based on the relation between the number of positive cells and the total number of the tumoral cells in three selected areas. Results: the histopatologic subtypes that presented positivity for adipophilin in 50% or more of cells were: AciCC (85,64%), MASC (100%), MC (83%), SDC (75%), SebC (50%). Proliferation index higher than 10% of tumoral cells was observed in SebC (Ki-67 = 29%), SDC (Ki-67 = 23,11%) and MC (Ki-67 = 12,15%). In ACC with high grade transformation the, the transformed area presented both higher proliferation and lipogenesis when compared to the convencional area. Only the cases of MASC presented accentuated immunoreactivity for STAT5a and mammaglobin. Conclusions: Although in salivary carcinomas there is correlation between the accumulation of lipid droplets and the proliferative index of the tumor, in some types of carcinomas such deposit is possibly related to cellular differentiation (SebC and MASC) or metabolic alteration (AciCC). The accumulation of LD that reflects cellular differentiationpresents features of macro droplets in contrast to micro-droplets frequently detected in carcinomas with high proliferative index. In MASC, the strong expression of STAT5a and mammaglobin suggests that LD accumulation is probably due to lactational-like differentiation. More studies are necessary to understand the role of cytoplasmic lipid droplets in salivary gland carcinomas (Supported by FAPESP: 2012/18104-4and2012/18086-6) / Mestrado / Patologia / Mestre em Estomatopatologia

Orientador: Valéria Helena Alves Cagnon Quitete / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T14:16:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Montico_Fabio_D.pdf: 8683742 bytes, checksum: b24bef7642e19dd250ce77f07cca65c4 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A senescência está associada a modificações hormonais na próstata, resultando em microambiente favorável ao desenvolvimento de lesões neoplásicas. A angiogênese é fundamental para o crescimento tumoral e, na próstata, está sujeita à regulação por andrógenos, sendo sua estimulação um importante evento no estroma reativo associado ao câncer. Assim, a inibição da angiogênese representa terapia promissora no tratamento de neoplasias da próstata. O objetivo deste estudo foi caracterizar aspectos do estroma prostático na senescência e frente a terapias antiangiogênicas e de ablação hormonal, comparando-os com a reação estromal associada a lesões glandulares no modelo TRAMP. Camundongos FVB machos senis (52 semanas) foram submetidos a tratamentos antiangiogênicos com SU5416 (6 mg/kg; i.p.) e/ou TNP-470 (15 mg/kg; s.c.). O bloqueio hormonal foi obtido com finasterida (20 mg/kg; s.c.), isoladamente ou associada a ambos os inibidores. Após 21 dias de tratamento, amostras da próstata dorsolateral foram coletadas para análises morfológicas, imunohistoquímicas e de Western Blotting. A senescência levou à ocorrência de inflamação e de lesões proliferativas na próstata, bem como à maior frequência de células positivas para CD34/VIM e CD34/?SMA e ao aumento de MMP-9, IGFR-1, VEGF, HIF-1?, FGF-2, CD31, VIM e ?SMA, caracterizando semelhança com o microambiente prostático de camundongos TRAMP. Por outro lado, a endostatina e o TGF-? apresentaram-se elevados somente na senescência, mas não ao longo da progressão tumoral no modelo TRAMP. O tratamento com inibidores angiogênicos levou à recuperação e/ou interrupção das alterações glandulares associadas à senescência, mas efeitos diferenciais foram registrados para as drogas. Enquanto o SU5416 atuou principalmente sobre a remodelação tecidual prostática, reduzindo os níveis de MMP-9, VIM e ?SMA bem como a frequência de células positivas para CD34/VIM e CD34/?SMA, o TNP-470 influenciou sobretudo o IGFR-1, o VEGF e o HIF-1?, promovendo inibição de maior amplitude sobre esses fatores. A associação destes inibidores levou à combinação de tais efeitos diferenciais. A finasterida, isoladamente ou associada aos agentes antiangiogênicos, resultou em diminuição dos níveis de MMP-9, IGFR-1, VEGF, HIF-1? e FGF-2 em relação aos controles, embora tenha demonstrado tendência em regular positivamente a expressão de fatores pró-angiogênicos. Todavia, ao contrário da inibição da angiogênese, a ablação hormonal não resultou em diminuição do TGF-?. Assim, concluiu-se que a senescência gerou um microambiente de estroma reativo similar ao do modelo TRAMP, com estímulo aos à proliferação celular, remodelação tecidual, angiogênese e transição endotélio-mesenquimal, certamente propiciando condições favoráveis para o desenvolvimento de lesões prostáticas pré-malignas e malignas. Entretanto, a ausência de adenocarcinoma pouco diferenciado e a menor distribuição das lesões neoplásicas em relação a camundongos TRAMP sugeriram um possível papel protetor da endostatina sobre a próstata na senescência. A terapia antiangiogênica foi eficaz em promover efeitos antitumorais e a inibição da neovascularização, sobretudo frente à combinação dos inibidores, sugerindo que a ação diferencial desses agentes nos processos tumorigênicos resulta em espectro de ação mais amplo para o tratamento. Por fim, ressalta-se que os efeitos benéficos do tratamento com finasterida merecem especial atenção, considerando o potencial desta droga em promover o estroma reativo facilitador do desenvolvimento de desordens glandulares / Abstract: Senescence is associated with hormonal changes in the prostate, leading to a permissive microenvironment for the development of neoplastic lesions. Prostatic angiogenesis is an androgen-regulated process which is fundamental for tumor growth and represents an important event in cancer-associated reactive stroma. Thus, angiogenesis inhibition emerges as a promising therapy in the treatment of prostate neoplasms. The aim herewith was to characterize prostatic stroma during senescence and following antiangiogenic and hormonal ablation therapies, comparing the findings with the reactive stroma phenotype associated to TRAMP model glandular lesions. Elderly male FVB mice (52 week-old) were submitted to antiangiogenic treatments with SU5416 (6 mg/kg; i.p.) and/or TNP-470 (15 mg/kg; s.c.). Hormonal blockage was achieved with finasteride administration (20mg/kg; s.c.), either alone or combined to both inhibitors. After 21 days of treatment, dorsolateral prostate samples were collected for morphological, immunohistochemical and Western Blotting analysis. Senescence led to the occurrence of inflammatory foci and proliferative lesions in the prostate, apart from increased frequency of CD34/VIM and CD34/?SMA positive cells and raised levels of MMP-9, IGFR-1, VEGF, HIF-1?, FGF-2, CD31, VIM and ?SMA, resembling TRAMP mice prostatic microenvironment. On the other hand, endostatin and TGF-? showed higher expression in senescence but not during tumor progression in the TRAMP model. Antiangiogenic treatment resulted in recovery and/or interruption of the senescence-associated glandular changes, showing differential effects for each drug. SU5416 acted mainly on prostatic tissue remodeling, reducing MMP-9, VIM and ?SMA levels as well as the frequency of CD34/VIM and CD34/?SMA positive cells, whereas TNP-470 influenced specially IGFR-1, VEGF and HIF-1?, promoting greater inhibition over these factors. The association between the inhibitors led to synergistic differential effects. Despite presenting a trend to regulate positively pro-angiogenic factor expression, finasteride resulted in decreased MMP-9, IGFR-1, VEGF, HIF-1? and FGF-2 levels relatively to controls, either in isolation or combined to antiangiogenic agents. However, unlike angiogenesis inhibition, hormonal ablation did not lead to decreased TGF-? expression. Thus, it was concluded that senescence created a reactive stroma microenvironment which resembles that verified in the TRAMP model and is characterized by stimulated cell proliferation, tissue remodeling, angiogenesis and endothelial-to-mesenchymal transition. This scenario certainly provided favorable conditions for the development of pre-malignant and malignant prostatic lesions. However, the absence of poor-differentiated adenocarcinoma and the lesser distribution of neoplastic lesions in relation to TRAMP mice suggested a possible protective role of endostatin on the prostate during aging. Antiangiogenic therapy was efficient in promoting antitumor effects and neovascularization inhibition, especially following the combination of inhibitors, suggesting that the differential action of these agents on tumorigenic processes results in a broader spectrum of effects for the treatment. Finally, it is noteworthy that beneficial effects from finasteride treatment must be looked carefully, considering the capacity of this drug to promote a reactive stroma microenvironment favorable to the development of glandular disorders / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Nelson Adami Andreollo, Luiz Roberto Lopes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-22T11:50:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TerciotiJunior_Valdir_D.pdf: 8760646 bytes, checksum: 44ae251b3c9acf8bc92ac6fcb6d6ef71 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Nos últimos anos a literatura médica tem registrado aumento progressivo da prevalência do adenocarcinoma da junção esôfago-gástrica. O tratamento cirúrgico é a melhor opção, entretanto, vários fatores podem interferir na morbimortalidade. O objetivo do presente estudo é avaliar retrospectivamente a sobrevida e os fatores prognósticos dos pacientes operados por adenocarcinoma da junção esôfago-gástrica submetidos ou não a radioterapia e quimioterapia adjuvantes. Foram revistos os prontuários médicos dos pacientes tratados no Hospital de Clínicas da Universidade Estadual de Campinas no período de 1986 a 2009, para obtenção de informações referentes ao pré e pós-operatório. Assim, os pacientes foram divididos: a) um grupo submetido a tratamento cirúrgico exclusivo; e b) um grupo submetido a cirurgia seguida por radioterapia e quimioterapia adjuvantes. Foram analisados os fatores de morbimortalidade e da sobrevida entre os grupos. Análises de regressão univariada e multivariada de Cox dos fatores de risco para o prognóstico destes pacientes foram realizadas. O nível de significância estatística adotado foi de 5 %. No estudo foram incluídos 103 (N) pacientes assim distribuídos: 1) 78 (75,7%) submetidos a tratamento cirúrgico exclusivo e 2) 25 (24,3%) submetidos a tratamento cirúrgico com radioquimioterapia adjuvante. Todos os pacientes foram submetidos a ressecção cirúrgica com intenção curativa. xxvi Os grupos foram comparáveis quanto a cor, sexo, idade, procedência, classificação de Siewert, tipo histológico, T patológico, N patológico, estadiamento patológico, recidiva tumoral, sintomas pré-operatórios (exceto dor retroesternal), complicações pós-operatórias, técnica de ressecção cirúrgica e técnica de reconstrução do trânsito alimentar. Os resultados mostraram que os grupos foram diferentes quanto ao grau de diferenciação tumoral e ao número de linfonodos. O estudo não mostrou aumento da sobrevida no grupo submetido a tratamento adjuvante em comparação ao grupo submetido a tratamento cirúrgico exclusivo. A análise multivariada de regressão de Cox de toda a casuística concluiu que a recidiva tumoral, a presença de metástase linfonodal e a presença de broncopneumonia no pós-operatório foram fatores de piora no prognóstico / Abstract: In recent years the medical literature has reported a progressive increase in the prevalence of adenocarcinoma of the esophagogastric junction. Surgical treatment is the best option, however, several factors can affect the morbidity and mortality. The aim of this study is to evaluate retrospectively survival and prognosis of patients operated for adenocarcinoma of the esophagogastric junction, undergoing or not postoperative radiotherapy and chemotherapy. We reviewed the medical records of patients treated at Hospital de Clinicas of State University of Campinas from 1986 to 2009, to obtain data about pre- and post-operative treatment. The patients were divided into: a) patients undergoing surgical treatment alone; and b) patients undergoing surgery followed by adjuvant radiotherapy and chemotherapy. We analysed morbidity, mortality and survival between groups. Univariate and multivariate Cox regression analyzes of risk factors for prognosis of these patients were performed. The level of significance was 5%. The study included 103 (N) patients as follows: 1) 78 (75.7%) undergo surgical treatment only; and 2) 25 (24.3%) underwent surgical and adjuvant treatment. All patients underwent surgical resection with curative intent. The groups were comparable in terms of color, sex, age, origin, Siewert classification, histological type, pathological T, pathological N, pathological stage, tumor recurrence, preoperative symptoms (except retrosternal pain), xxviii postoperative complications, technique of surgical resection and technique of reconstruction of the alimentary tract. The groups differed in the degree of tumor differentiation and the number of lymph nodes. The study did not show increase in survival in the group undergoing adjuvant treatment compared to the group treated with surgery alone. Multivariate Cox regression of the whole sample found that tumor recurrence, lymph node metastasis and the presence of postoperative pneumonia were factors worsened prognosis / Doutorado / Fisiopatologia Cirúrgica / Doutor em Ciências