Submitted by Luciene Weber (lucieneweber@gmail.com) on 2014-07-25T17:22:52Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Jane Rosado.pdf: 2140291 bytes, checksum: fb2956ebddf8c48850800f4695e6dbb7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-25T17:22:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Jane Rosado.pdf: 2140291 bytes, checksum: fb2956ebddf8c48850800f4695e6dbb7 (MD5) / As enzimas são ferramentas importantes no estabelecimento de processos tecnologicamente limpos. As hidrolases constituem um dos mais importantes grupos de enzimas com aplicações em diferentes setores industriais. Os micro-organismos, principal fonte de enzimas industriais, apresentam limitações quanto à produtividade. Dessa forma, a identificação de novas fontes para obtenção em larga escala de enzimas torna-se relevante. Objetivou-se, nesse trabalho, investigar a possibilidade de obtenção de enzimas amilolíticas a partir de resíduos agrícolas das lavouras cacaueira e dendenzeira. A restrição de substrato no meio de cultivo foi utilizada para a triagem inicial de microrganismos produtores de amilase, lipase e celulase. Entre as cepas isoladas, quatro delas apresentaram atividade amilolítica relevante com Índice Enzimático (IE) superior a 2.0. A extração, sequenciamento e análise filogenética do gene ribossomal bacteriano 16S permitiu a identificação das seguintes cepas com atividade amilolítica: Paenibacillus tundrae, Xanthomonas cordiaei, Bacillus subtilis, Acinetobacter baumannii. P. tundrae (cepa dende1c) e X. cordiaei (cepa cacau1a) foram as mais promissoras apresentando IE 9,0 e 14,0 respectivamente. Essas cepas foram cultivadas em meio líquido e tiveram a atividade amilolitica monitorada em solução. Esses dados demonstram que os micro-organismos selecionados são promissores para obtenção de enzimas com potencial para aplicação na indústria.

Orientador: Célia Maria Landi Franco / Banca: Thaís de Souza Rocha / Banca: Ivo Mottin Demiate / Banca: Eleni Gomes / Banca: Ana Carolina Conti e Silva / Resumo: Amido desramificado e retrogradado é resistente à ação das enzimas digestivas, sendo denominado amido resistente tipo 3 (AR3), enquanto amido lentamente digerido (ALD) é a fração digerida lentamente no intestino delgado resultando na liberação prolongada de glicose na corrente sanguínea. Ambos apresentam inúmeros benefícios à saúde, os quais têm sido amplamente relatados. O uso de diferentes técnicas que potencializem a formação do amido retrogradado conduz a diferentes características estruturais e físico-químicas do amido, bem como à sua digestibilidade. O presente trabalho teve como objetivo avaliar e comparar o efeito de diferentes tratamentos (enzimáticos e físico) precedendo a desramificação de amidos na formação de AR3 e ALD, bem como em suas características moleculares, cristalinas e físico-químicas. Para isso, amidos de batata-doce (SPS), mandioca (CAS) e milho com alto teor de amilose (HAS) foram submetidos à ação da α-amilase fúngica, α-amilase maltogênica, ou ultrassom em diferentes condições de tratamento. A cinética das hidrólises enzimáticas dos amidos foi estudada. Após tratamentos, os amidos foram desramificados com pululanase, autoclavados (121oC/30 min) e resfriados (4°C /24h) para potencializar a retrogradação. Os amidos modificados foram analisados quanto a digestibilidade in vitro e caracterizados estrutural e físico-quimicamente a partir de cromatografia de exclusão por tamanho de alta performance, difracção de raios-X, ressonância magnética do 13C, e... / Abstract: Debranched and retrograded starch is resistant to the action of digestive enzymes, being called resistant starch type 3 (RS3), while slowly digested starch (SDS) is the slowly digested fraction in the small intestine resulting in prolonged glucose release into the bloodstream. Both starches present numerous health benefits, which have been widely reported. The use of different techniques that enhance the formation of retrograded starch leads to different structural and physicochemical characteristics of starch, as well as its digestibility. The objective of the present work was to evaluate and compare the effect of different treatments (enzymatic and physical) preceding starch debranching on the formation of RS3 and SDS, as well as their molecular, crystalline and physicochemical characteristics. For this purpose, sweet potato (SPS), cassava (CAS), and high amylose maize (HAS) starches were subjected to the action of fungal α-amylase, maltogenic α-amylase, or ultrasound, under different treatment conditions. The enzymatic hydrolysis kinetic of the starches was studied. After the treatments, these starches were debranched with pullulanase, autoclaved (122°C/30 min), and cooled (4°C/24 h) in order to enhance the retrogradation. Modified starches were analysed regarding to in vitro digestibility and structurally characterized by high performance size exclusion chromatography, X-ray diffraction, 13C magnetic resonance, and differential scanning calorimetry. Hydrolysis kinetic d... / Doutor

A α-amilase é uma enzima chave na produção das cervejas por ser responsável pela clivagem do amido em açúcares fermentáveis. Durante o processo de preparação do mosto que ocorre de 40 a 80°C, essa enzima pode ser afetada por polifenóis presentes na mistura. O objetivo foi avaliar a cinética e o equilíbrio da interação de α-amilase com polifenóis usualmente presentes em cerveja e nas faixas de temperatura empregadas no processo. Para tanto, polifenóis comumente encontrados em cerveja (ácido clorogênico, ácido cafeico, ácido ferúlico e quercetina) foram incubados com α-amilase em 298, 313 e 323K, a atividade da enzima foi determinada por absorção molecular pelo método de triiodina, e os resultados tratados pela equação integrada de Michaelis-Menten. O equilíbrio químico da interação foi abordado por titulação espectrofluorimétrica em 293, 303, 313, 323 e 333 K. Os resultados apresentaram valores dos parâmetros cinéticos de α-amilase a 323K de Km 1,37 ±0,19 mg.mL-¹ e Vmax 0,66 ±0,08 mg.mL-¹.min-¹, e um modelo de inibição competitiva apresentando Ki entre 2,00x10-5 ±4,50x10-7 mol.L-¹ e 4,52x10-5 ±2,24x10-6 mol.L-¹. Foram encontrados valores de energia de ativação da enzima para ácido clorogênico > ácido ferúlico > ácido cafeico > quercetina. O ácido clorogênico foi o que apresentou maior estabilidade na formação dos complexos, com menor valor de Ki, maior sensibilidade com a temperatura e maior inibição na temperatura ótima da enzima (323K), antagonicamente aos valores apresentados para a quercetina. Os resultados da interação ligante-enzima revelaram valores de Kb crescente com a temperatura, sugerindo maior estabilidade na formação do complexo próximo a 323 K, e coincidentes com os resultados de inibição enzimática. Os valores para ∆H e ∆S sugerem um mecanismo entropicamente dirigido da associação. Estudo da relação estrutura-atividade demonstrou uma correlação positiva entre a atividade biológica (ligação e catálise) da α-amilase com os descritores de natureza polar dos polifenóis (número total de doadores e aceptores de ligações de hidrogênio, polarizabilidade, TPSA, Pka). Ensaios de interação da enzima com ácido clorogênico em diferentes valores de pH e força iônica apoiam os dados de estrutura-atividade, e sugerem a participação do íon carboxilato do ligante na interação com grupos básicos na vizinhança do sítio catalítico da enzima. / α-amylase is a key enzyme in the production of beer due to the hydrolysis of starch into fermentable sugars. During the preparation of its brewing mash (40 to 80 °C), this enzyme can be affected by polyphenols present in the mixture. Our aim was to evaluate the kinetics and equilibrium of the interaction of α-amylase with polyphenols usually present in beer at common temperature range employed in the process. Hence, polyphenols commonly found in beer (chlorogenic acid, caffeic acid, ferulic acid and quercetin) were incubated with α-amylase at 298, 313, 323K, enzyme activities were followed by molecular absorption using the triiodine method, and the results treated by the integrated Michaelis-Menten equation. The chemical equilibrium of the interaction was addressed by spectrofluorometric titration at 298, 303, 313, 323, 333K. The results showed values of the kinetic parameters of α-amylase at 323 K of Km 1.37 ±0.19 mg.mL-¹ and Vmax 0.66 ± 0.08 mg.mL-¹.min-¹, and a competitive inhibition model exhibiting inhibition constants (Ki) between 2.00 x 10 -5 ±4.50 x 10-7 mol.L-¹ and 4.52 x 10-5 ±2.24x10-6 mol.L-¹. Enzyme activation energy values were in order of chlorogenic acid > ferulic acid > caffeic acid > quercetin. Chlorogenic acid showed the highest stability in the complex formation, exhibiting the lowest Ki value, the more pronounced temperature sensitivity and the highest inhibition at optimum temperature (323K), in contrast to the values presented for quercetin. The results of the ligand-enzyme interaction revealed increasing values of the binding constant of the protein with the ligands (Kb) with temperature, suggesting a greater complex stability near 323 K, similar to that found from the enzyme inhibition data. The values for ∆H and ∆S suggest an entropy-driven force present in the association mechanism. The results for structure-activity relationship demonstrated a positive correlation between the biological activity (both binding and catalysis) of the α-amylase with the polar nature descriptors of the polyphenols (total number of hydrogen donors and acceptors of, polarizability, TPSA, pKa). Binding assays of the enzyme with chlorogenic acid at different pH values and ionic strength support the structure-activity results and suggest a plausible interaction of the carboxylate ion of the ligand with basic groups in the vicinity of the catalytic site of the enzyme.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-29Bitstream added on 2014-06-13T20:56:15Z : No. of bitstreams: 1 ferreira_oe_me_jabo.pdf: 412993 bytes, checksum: aae1d57cd30b58d78f8d841727177cc0 (MD5) / A utilização de fermentação em estado sólido a partir de subprodutos agroindustriais possibilita a obtenção de várias biomoléculas de interesse industrial. As amilases são enzimas com grande aplicação nas indústrias têxtil, farmacêuticas, alimentícias e sucroalcooleira, representando aproximadamente 25% do mercado mundial. Neste trabalho foram isoladas três linhagens fúngicas (Rhizopus oryzae, Malbranchea pulchella e Chrysosporium zonatum), que apresentaram potencial amilolítico, quando cultivadas em três resíduos agroindustriais (quirera de arroz e de milho e farelo de trigo). Para a cepa que apresentou maior atividade enzimática, avaliou-se melhor substrato, tempo de cultivo, teores de umidade, fontes suplementares de nitrogênio, pH e temperatura de incubação, objetivando otimizar as condições de cultivo. Observou-se que a maior atividade enzimática foi obtida com a cepa de R. oryzae em 24 horas de fermentação, em meio de cultura contendo farelo de trigo como substrato, em temperatura de 35°C, utilizando solução de sais composta de NH4NO3 a 0,1% e MgSO4.7H2O a 0,1% como fonte de nitrogênio. Alterações de pH entre 4,0 e 6,0 não afetaram significativamente a síntese da enzima. A condições ótimas de atuação foram temperatura de 75°C e pH de 4,5. As enzima manteve-se estável a 75°C na ausência de substrato por 25 minutos / The use of fermentation in a solid state from agroindustrial byproducts permits the obtaining of several biomolecules of interest the industry, like the enzymes. The amylases are enzymes with great application on the textile, pharmaceutical and food industries, representing around 25% of the worldwide market. In this work three ungal strains (Rhizopus oryzae, Malbranchea pulchella and Chrysosporium zonatum) were isolated. They presented amylolytic potential when cultivated in three agroindustrial by products (brewers rice, corn grits and wheat bran). To the strain that presented the greatest enzyme activity, it was evaluated the best substrate, cultivation time, moisture content, additional sources of nitrogen, pH and incubation temperature, aiming the optimization of cultivation conditions. I was observed that the greatest enzyme’s activity was obtained with 24 hours of fermentation, in R. orizae in a culture medium that contained wheat bran as the substrate, at 35°C, using salt solution made with NH4NO3 0.1%, MgSO4.7h2O 0.1% and (NH4)2SO4 0.1% as nitrogen source. pH alterations between 4.0 and 6.0 didn’t change significantly the enzyme’s activity. The optimum conditions of performance of the enzyme were temperature of 75°C and pH 4.5. The enzyme kept stable in the lack of substrate for 25 minutes in 75°C

Submitted by Geyciane Santos (geyciane_thamires@hotmail.com) on 2015-07-03T14:46:16Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Lanna Lôbo de Araújo.pdf: 1424509 bytes, checksum: e22f493ad51c66d665b74c545edb8568 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-13T15:41:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Lanna Lôbo de Araújo.pdf: 1424509 bytes, checksum: e22f493ad51c66d665b74c545edb8568 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-13T15:45:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Lanna Lôbo de Araújo.pdf: 1424509 bytes, checksum: e22f493ad51c66d665b74c545edb8568 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-13T15:45:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Lanna Lôbo de Araújo.pdf: 1424509 bytes, checksum: e22f493ad51c66d665b74c545edb8568 (MD5) Previous issue date: 2012-09-03 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / There some decades the search for alternative energetic sources is mundialy on the focus. For environmental reasons economic and geopolitical this search has been strained and one of the sources of alternative energy that awakens the trend to replace fossil fuels, is the ethanol that is a cleaner fuel. Even more, companies, governments and researchers has been focused their reachers to it. The obtained alcohol by biomass fermentation is called "bioethanol". Brazil's position about the full use of biomass is very privileged because of its greatest world’s biodiversity, an intense solar radiation, abundance water, climate’s diversity and biomass from biomass products on a large scale, Brazil presents itself as the most advanced country in this technology once it is the currently largest bioethanol producer in the world. In this context the goal of this study is presenting the ethanol’s production viability from a efficiently hydrolyzate of cassava starch Manhiot esculenta Crantz which was obtained with the recombinant amylases (α-amylase and glucoamylase), resulting from the previous work developed in the research group by OLIVEIRA (2009) and CARMO (2010). The hydrolyzate was fermented by the yeast Saccharomyces cerevisiae commercial yeast on systems known as fermentometers. The hydrolyzate resulted in a 20 gL-1 ethanol concentration in 6 h, with hydrolysis efficiency of exceeding 57% volumetric productivity 3.33 g/L-1h-1 and yield factor of substrate consumption of 0.29 gg-1. / Há algumas décadas a busca por fontes energéticas alternativas está em foco no circuito mundial. Por questões ambientais, econômicas e geopolíticas essa procura tem se acirrado, e uma das fontes alternativas de energia, que desperta essa tendência em substituir os combustíveis fósseis é o etanol; que é um combustível menos poluente. E cada vez mais empresas, governos e pesquisadores têm voltado seu foco de pesquisa para ele. O álcool obtido por fermentação de biomassas é denominado “bioetanol”. A posição do Brasil em relação ao aproveitamento integral das biomassas é bastante privilegiada pelo fato do mesmo possuir a maior biodiversidade do planeta; uma intensa radiação solar; água em abundância; diversidade de clima e pioneirismo na produção de bicombustíveis da biomassa em larga escala, o Brasil apresenta-se como o país mais avançado nessa tecnologia já que atualmente é o maior produtor de bioetanol do mundo. Neste contexto, o estudo em questão teve como objetivo apresentar a viabilidade da produção de etanol a partir de um hidrolisado eficiente de fécula de mandioca Manihot esculenta Crantz que foi obtido com a utilização de amilases recombinantes, sendo uma α-amilase clonada de Bacillus licheniformis e expressa em Bacillus subtilis e uma glucoamilase clonada de Aspergillus awamori e expressa em Pichia pastoris, advindas de trabalhos anteriormente desenvolvidos em nosso grupo de pesquisa. O hidrolisado obtido foi fermentado pela levedura Saccharomyces cerevisiae comercial em sistemas conhecidos como fermentômetros. O hidrolisado resultou em uma concentração de 20 gL-1 de etanol em 6 h, com eficiência de hidrólise igual a 57%, produtividade volumétrica 3,33 gL-1h-1 e fator de rendimento em substrato consumido de 0,29 gg-1.

Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-02-19T13:03:28Z No. of bitstreams: 5 isadora.pdf: 1113191 bytes, checksum: d7fa6c19b7906bcd17915b6d1233d2e6 (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) license.txt: 2110 bytes, checksum: b4c884761e4c6c296ab2179d378436d4 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-02-20T09:25:04Z (GMT) No. of bitstreams: 5 isadora.pdf: 1113191 bytes, checksum: d7fa6c19b7906bcd17915b6d1233d2e6 (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) license.txt: 2110 bytes, checksum: b4c884761e4c6c296ab2179d378436d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-20T09:25:04Z (GMT). No. of bitstreams: 5 isadora.pdf: 1113191 bytes, checksum: d7fa6c19b7906bcd17915b6d1233d2e6 (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) license.txt: 2110 bytes, checksum: b4c884761e4c6c296ab2179d378436d4 (MD5) Previous issue date: 2013-02-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / Amilases s?o enzimas que atuam no rompimento das liga??es glicos?dicas presentes nas cadeias de amilose e amilopectina. As amilases possuem aplica??es em diversas ?reas tais como: ind?stria de papel e celulose, ind?stria t?xtil, ind?stria de detergentes e produtos de limpeza, ind?stria qu?mica e farmac?utica, na produ??o de vitaminas e antibi?ticos. Embora as amilases sejam encontradas em plantas, animais e micro-organismos, as enzimas microbianas geralmente atendem de maneira satisfat?ria ? demanda industrial. As enzimas microbianas podem ser obtidas por meio de processos fermentativos, podendo ser obtidas tanto por cultivo superficial como por cultivos submersos. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a produ??o de enzimas amilol?ticas por fermenta??o submersa utilizando Bacillus amyloliquefaciens ATCC 23350 e coprodutos da cadeia produtiva do biodiesel como substrato. A capacidade da produ??o das enzimas amilol?ticas foi testada utilizando como substratos diferentes coprodutos, sendo esses: torta de maca?ba, torta de dend?, farinha de pupunha, torta de mamona e torta de tremo?o. A torta de maca?ba e farinha de pupunha foram os substratos que demonstraram maior capacidade de produ??o das enzimas amilol?ticas, sendo os coprodutos selecionados para a etapa de otimiza??o da produ??o das enzimas. Diferentes condi??es de processo foram otimizadas com intuito de obter o m?ximo rendimento da produ??o de amilases, atrav?s do emprego de delineamentos experimentais aplicados ? Metodologia de Superf?cie de Resposta. Os processos fermentativos deste trabalho foram realizados ? temperatura de 37?C, 120 rpm de agita??o, utilizando solu??o de sais para suplementa??o do meio. As vari?veis pH, raz?o s?lido-l?quido (S/L) (% m/v) e concentra??o de NH4NO3 (gL-1) foram estudadas. As dosagens das atividades enzim?ticas foram realizadas em tempos de fermenta??o de 12, 24, 36, 48 e 72 horas. A m?xima produ??o das amilases foi alcan?ada com 24 horas de fermenta??o, S/L de 12% e pH 7,0, obtendo valores de 3.393 U.mL-1 com a farinha de pupunha e 196 U.mL-1 com a torta de maca?ba como substratos. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2012. / ABSTRACT Amylases are enzymes that act in the rupture of glycosidic bonds present in the chains of amylose and amylopectin. Amylases have applications in diverse areas such as pulp and paper industry, textiles, laundry detergents and cleaning products, chemical and pharmaceutical industry, production of vitamins and antibiotics. Although the amylases are found in plants, animals and micro-organisms, microbial enzymes generally meet satisfactorily the industrial demand. The microbial enzymes can be obtained by fermentative procedures, which may be obtained by cultivation both surface and submerged cultivation of micro-organisms. This study aimed to evaluate the production of amylolytic enzymes by submerged fermentation using Bacillus amyloliquefaciens ATCC 23350, and co-products from biodiesel production chain as substrates. The capacity of the production of amylolytic enzymes was tested using different substrates such as co-products, these being: macauba cake, palm kernel cake, peach palm flour, castor bean and lupine cake. The peach palm flour and macauba cake were the substrates which show greater production capacity of amylolytic enzymes, and co-products selected for the optimization step of enzyme production. Different process conditions were optimized with the aim of obtaining the maximum yield of amylases, through the use of experimental designs applied to the Response Surface Methodology. The fermentation process of this work was performed at 37?C, 120 rpm agitation, using salt solution for supplementation of the medium. The pH, liquid-solid ratio (S/L) (% w/v) and concentration of NH4NO3 (gl-1) were studied. The measurements of enzyme activities were carried out in fermentation times of 12, 24, 36, 48 and 72 hours. Maximum production of amylase was achieved with 24 hours of fermentation, S/L of 12% and pH 7.0 to obtain values of 3.393 U.mL-1 with peach palm flour and 196 U.mL-1 with maca?ba cake as substrate.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:55:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cassiane Minelli.pdf: 1637307 bytes, checksum: b5227c9445b1a0b3f8dcc8fcef9bcfd3 (MD5) Previous issue date: 2013-06-24 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / One of the biggest successes of Brazilian agriculture is the Pro-Alcohol, whose base of support is the culture of sugar cane, which leaves a lapse of activity in the offseason. In view of this, several alchool industries have been investing in other cultures, where the starch is the primary source for the alcohol production. The pursuit of amylase in thermotolerant Bacillus sp. And rhizobia from Amazonian soils is a strategy to be used for the bio-industries to reduce or stop importing them. Mutation was made from two Bacillus sp. containing amylases by exposure to ultraviolet light. Also tested were 40 strains of rhizobia for the presence of thermophilic amylases. Enzyme assays were performed to check for amylase activity at different temperatures, times, pHs, thermal shock and thermal stability. The Bacillus sp. ITAAM 023M mutant showed higher amylolyse than mutant ITAAM 010M. The amylases of the two Bacillus sp mutants and rhizobias proved quite diverse as their characteristics, indicating they are different from each other. The temperature with higher amylase activity of the mutants ITAAM 010M and ITAAM 023M was 100 ˚C. Amylase from the mutant ITAAM 010M showed greater activity in pH 4.5, and from the ITAAM 023M at pH 7.5. Their amylases showed high sensitivity to thermal shock. Amylase from mutant ITAAM 010M showed high thermostability at temperature of 90 ˚C. The amylase from ITAAM 023M, at a temperature of 80˚C. The highest activity shown by ITAAM 010M amylase was 1.6 U / ml and the ITAAM 023M, 1.5 U / mL. From the 40 rhizobia, 17 grew well in culture medium containing starch, 19 produced amylolytic halo, and 11 proved to be thermophiles. Rhizobia INPA INPA R001 and INPA R020 showed the highest rates of amylolyse. Their amylase showed greater activity at 90˚C. Amylase of INPA R001 showed higher activity at 100˚C, and from INPA R020, 30˚C. Amylase from INPA R001 showed greater activity at pH 4.5 and from INPA R020, at pH 7.5. Their amylases showed high sensitivity to thermal shock. Amylase from INPA R020 showed higher thermostability at 90 °C and from INPA R001 at 100˚C. The higher activity shown by amylase of rhizobia INPA R001 was 1.6 U/mL, and from INPA R020, 7.5 U/mL / Um dos maiores sucessos da agricultura brasileira é o Pró-Álcool, cuja base de sustentação é a cultura da cana-de-açúcar, que deixa um lapso de atividade na entressafra. Em vista disso, diversas usinas vêm investindo em outras culturas, onde o amido é a fonte primária para a produção do álcool. A busca de amilases termotolerantes em Bacillus sp. e em rizóbios de solos da Amazônia é uma estratégia a ser usada para que as bioindústrias reduzam ou parem de importá-las. Foi feita a mutação de dois Bacillus sp. contendo amilases com exposição à luz ultravioleta. Foram testadas também, 40 estirpes de rizóbio quanto à presença de amilases termotolerantes. Foram feitos ensaios enzimáticos para a verificação de atividade amilolítica em diferentes temperaturas, tempos, pHs, choque térmico e termoestabilidade. O mutante de Bacillus sp. ITAAM 023M mostrou maior índice de amilolise do que o ITAAM 010M. As amilases dos dois mutantes de Bacillus sp e dos rizóbios mostraram-se bem diversificadas quanto às suas características, indicando serem diferentes umas das outras. A temperatura com maior atividade das amilases dos mutantes ITAAM 010M e ITAAM 023M foi 100˚C. A amilase do mutante ITAAM 010M mostrou maior atividade em 4,5, e a do ITAAM 023M em pH 7,5. Suas amilases mostraram alta sensibilidade ao choque térmico. A amilase do mutante ITAAM 010M mostrou maior termoestabilidade na temperatura de 90˚C. A do ITAAM 023M, na temperatura de 80˚C. A maior atividade mostrada pela amilase do ITAAM 010M foi de 1,6 U/mL e a do ITAAM 023M, 1,5 U/mL. Dos 40 rizóbios, 17 cresceram bem em meio de cultura contendo amido, 19 produziram halo amilolítico e 11 se mostraram termofílicos. Os rizóbios INPA R001 e INPA R020 mostraram os maiores índices de amilolise. Suas amilases mostraram maior atividade a 90˚C. A amilase do INPA R001 mostrou maior atividade a 100˚C, e a do INPA R020 a 30˚C. A amilase do INPA R001 mostrou maior atividade no pH 4,5 e a do INPA R020 no pH 7,5. Suas amilases mostraram alta sensibilidade ao choque térmico. A amilase do INPA R020 mostrou maior termoestabilidade a 90ºC e a do INPA R001 a 100˚C. A maior atividade amilolítica mostrada pela amilase do rizóbio INPA R001 foi de 1,6 U/mL e a do rizóbio INPA R020, 7,5 U/mL

Este trabalho objetivou coletar e isolar fungos filamentosos de diferentes regiões do estado de São Paulo com potenciais para produção de enzimas amilolíticas com características físico-químicas desejáveis para aplicação industrial. Foram coletados 19 fungos nas três coletas realizadas e estes juntamente com outros cinco fungos, isolados anteriormente durante o projeto Biota/FAPESP, foram submetidos a uma seleção para a escolha do melhor produtor de amilases. Aspergillus niveus foi o que melhor produziu amilases nas condições avaliadas e foi tomado para dar continuidade ao trabalho. A etapa seguinte consistiu em avaliar as melhores condições de cultivo para a produção das amilases. Os maiores níveis de atividade enzimática foram detectados em meio Khanna, em cultivos estáticos, pH inicial 6,0, a 40°C, com 72 horas de crescimento. Milho moído, farinha de aveia, palha de arroz, maisena, amido solúvel, casca de mandioca, maltose, farelo de trigo, penetrose, amilopectina e rafinose foram as fontes de carbono que melhor induziram a síntese de amilases. Extratos enzimáticos de A. niveus obtidos sob condições ótimas de cultivo, foram submetidos a eluição em diferentes colunas cromatográficas (DEAE-Fragtogel e Sephacryl S-200) e três amilases foram purificadas (uma glucoamilase e 2 a-glucosidases- I e II), cujas massas moleculares determinadas por SDS-PAGE corresponderam à 77, 59 e 55 kDa. Os pontos isoelétricos e o conteúdo de carboidrato corresponderam respectivamente a de 3,8 e 15% para glucoamilase, 6,6 e 4% para a-glucosidase I e 6,8 e 29% para a- glucosidase II. O pH ótimo para atividade de glucoamilase foi de 5,0-5,5 e pH 6,0 para a atividade de a-glucosidase I e II. A temperatura ótima para as três enzimas foi de 65°C e as mesmas apresentaram boa estabilidade a 60 e 65°C. A glucoamilase apresentou alta afinidade para o amido, já a a-glucosidase I apresentou alta afinidade para amido, glicogênio e maltose. A maior eficiência catalítica foi verificada na presença de VII glicogênio, seguido de amido e maltose. A a-glucosidase II apresentou atividade sobre vários substratos e os valores de Kcat/Km obtidos mostraram maior preferência dessa enzima pelo glicogênio, seguido de amido, amilopectina, maltose e -NPG. A análise de Dicroísmo Circular demonstrou que as três amilases são ricas em a-hélices nas suas estruturas secundárias e o sequenciamento de aminoácidos revelou similaridade da glucoamilase de A. niveus com glucoamilases de A. terreus, A. niger, A. ficcum, A. awamori, A. kawachi e A. shirousami. O sequenciamento das a-glucosidases I e II revelaram homologia destas com a-glucosidase de A. fumigatus. Estudos do efeito de N-glicanas nas propriedades das enzimas foram avaliados mediante tratamento do meio de cultivo com tunicamicina. A glucoamilase e a a-glucosidase I perderam significativamente a especificidade pelo substrato, já a a-glucosidase II perdeu termoestabilidade com a remoção das N-glicanas. Glucoamilase e a-glucosidase II foram imobilizadas em suportes com interação iônica e por ligação covalente. Os suportes trocadores iônicos usados foram Glioxil-PEI, Glioxil-MANAE, DEAESephacel e Sepharose Q. Os suportes utilizados para interação covalente foram agarose ativada com brometo de cianogênio (BrCN) e Glioxil-Agarose, pH 10,5. A estabilidade apresentada com os derivados formados por ligações covalentes foi maior que aquela apresentada para os derivados formados a partir de ligações iônicas. O uso da trealose como aditivo aumentou significativamente a estabilidade de todos os derivados / This study aimed to collect and isolate filamentous fungi from different regions of São Paulo state with potential for amylases production with desirable physical and chemical characteristics for industrial application. It was collected 19 fungi during three different expeditions. These fungi with other five microorganisms previously isolated during the Biota project were submitted to screening tests to select a good amylases producer. Aspergillus niveus was one of the best amylase producers under experimental conditions and was chosen to continue this work. The next step was to determine the best growth conditions for the amylases production. The highest levels of enzymatic synthesis were detected in Khanna medium under static conditions, initial pH 6.0, at 40°C during 72 hours. Corn, oatmeal, rice straw, corn starch, soluble starch, cassava peel, maltose, wheat bran, penetrose, amylopectin and raffinose were the best carbon sources for amylase production. Enzymatic extracts from A. niveus obtained under the optimal culture conditions, were loaded in different chromatography columns (DEAE-Fragtogel and Sephacryl S200) where three amylases were purified (a glucoamylase and two a-glucosidases, named I and II), whose molecular weights determined by SDS-PAGE corresponded to 77, 59 and 55 kDa. The isoelectric points and carbohydrate content were 3.8 and 15% for glucoamylase, 6.6 and 4% for -glucosidase I and 6.8 and 29% for -glucosidase II, respectively. The glucoamylase optimum pH was 5.0-5.5 and 6.0 for -glucosidases I and II. The optimum reaction temperatures were 65° C for all studied enzymes and all of them showed stability at 60 and 65°C. The glucoamylase presented high affinity for starch and -glucosidase I presented high affinity for starch, glycogen and maltose. The highest catalytic efficiency was observed using glycogen, starch and maltose as substrates. The -glucosidase II hydrolyzed several substrates and the kcat/Km values showed greater performance under glycogen, followed by starch, amylopectin, maltose and -NPG hydrolysis. The Circular Dichroism (CD) analyses showed that all the studied amylases were predominantly constituted by -helices in its secondary structure. The amino acid sequencing revealed similarity among the glucoamylase from A. niveus, A. terreus, A. niger, A. ficcum, A. awamori, A. kawachi and A. shirousami. Comparing the sequencing of a-glucosidases I and II from A. niveus, both showed homology with other a-glucosidases from A. fumigatus. Studies about the effect of N-glycans under enzymatic properties were done by addition of tunicamycin in the culture medium. Glucoamylase and a-glucosidase I lost significantly their substrate specificity, and a- glucosidase II lost its thermostability after the N-glycans removal. Glucoamylase and a- glucosidase II were immobilized in ionic interaction supporters and by covalent bonds. The ion exchangers supporters used were glyoxylic-PEI, glyoxylic-MANA, DEAESephacel and Sepharose Q. The supporters used for covalent interaction were agarose activated with cyanogen bromide (BRCN) and glyoxylic-Agarose, pH 10.5. The stability presented with derivatives formed by covalent bonds was higher than those reported for the derivatives formed from ionic bonds. The use of trehalose as an additive really improved the stability of all derivatives.

Orientador: Taís de Souza Barbosa / Texto em inglês e português / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-25T06:55:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amato_JulianaNeide_M.pdf: 1027609 bytes, checksum: 3cbd740a1aa393a89f3a3c9d7e1a944a (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Objetivo: Este estudo objetivou avaliar a presença de bruxismo do sono, maloclusões e disfunções orofaciais bem como os níveis salivares de cortisol e alfa-amilase em crianças asmáticas. Material e Métodos: A amostra consistiu de 108 crianças, de ambos os gêneros, com idade entre sete e nove anos, selecionados da Policlínica Santa Teresinha Doutor Antonio Haddad Dib (grupo com asma, n=53) e das escolas públicas (grupo controle, n=55), ambos do município de Piracicaba, SP, Brasil. O diagnóstico de bruxismo do sono foi confirmado pelo relato dos pais sobre ranger os dentes (pelo menos três vezes por semana) e pela presença de facetas de desgaste em incisivos e/ou molares permanentes. O Índice de Necessidade de Tratamento Ortodôntico ¿ Componente Dentário (IOTN-DHC) foi utilizado para avaliar a oclusão. As disfunções orofaciais foram avaliadas pela versão Brasileira do Nordic Orofacial Test-Screening (NOT-S). O cortisol salivar (?g/dl) e a alfa-amilase (U/ml) foram analisador por kit enzimaimunoensaio. Os dados foram expressos em "resposta ao acordar" (RA), calculada pela diferença entre os valores imediatamente ao acordar e 30 minutos após acordar, e "declínio diurno" (DD), calculado pela diferença entre os valores 30 minutos após acordar e antes de dormir. Os dados foram analisados utilizando os testes Shapiro Wilk/Kolmogorov-Smirnov, Qui-quadrado, teste t não pareado/Mann-Whitney e teste t pareado/Wilcoxon. Resultados: O bruxismo foi mais prevalente em crianças com asma do que controles (47,2% vs. 27,3%, p<0.05). Mais de metade das crianças com asma apresentaram gravidade intermitente (50,9%, p<0.001). O grupo com asma apresentou maiores escores do NOT-S total e entrevista do que o grupo controle (p<0.05). Sintomas de disfunções orais relacionados a (I) Função Sensorial e (IV) Mastigação e Deglutição foram mais frequentes em crianças com asma do que controles (p<0.05). A RA de cortisol salivar no final de semana foi significativamente maior no grupo com asma do que controles (p<0.05). No grupo controle, o DD de cortisol salivar foi significativamente maior em dia de semana do que no final de semana (p<0.05). Conclusões: A presença de asma em crianças esteve associada com sinais e sintomas de bruxismo do sono, percepção negativa das funções sensoriais, mastigação e deglutição e maior concentração de cortisol salivar no final de semana / Abstract: Objective: This study aimed to evaluate the presence sleep bruxism, malocclusions and orofacial dysfunctions as well as the salivary levels of cortisol and alpha-amylase in asthmatic children. Material and Methods: The sample consisted of 108 children of both genders in the age-range from seven to nine years, selected from Policlinic Santa Teresinha Doutor Antonio Haddad Dib (asthma group, n=53) and from public schools (control group, n=55), both of Piracicaba, SP, Brazil. Sleep bruxism diagnosis was confirmed by parental report of grinding sounds (at least three times a week) and the presence of shiny and polish facets on incisors and/or first permanent molars. The Index of Orthodontic Treatment Need ¿ Dental Health Component (IOTN-DHC) was used for occlusion evaluation. Orofacial dysfunctions were evaluated using the Brazilian Portuguese version of the Nordic Orofacial Test-Screening (NOT-S). Salivary cortisol (?g/dl) and alpha-amylase (U/ml) were assayed using enzyme immunoassay kit. These data were expressed as ``awakening response¿¿ (AR), calculated as the difference between levels immediately after awakening and 30 min after waking, and "diurnal decline" (DD), calculated as the difference between levels at 30 min after waking and at bedtime. Data were analyzed using Shapiro-Wilk/Kolmogorov-Smirnov, Chi-square, unpaired t test/Mann-Whitney and paired t/Wilcoxon tests. Results: Sleep bruxism was more prevalent in children with asthma than controls (47.2% vs. 27.3%, p<0.05). More than half of the asthmatic children had intermittent severity (50.9%, p<0.001). The asthma group had higher scores of NOT-S total and interview than control group (p<0.05). Symptoms of oral dysfunctions related to (I) Sensory Function and (IV) Chewing and Swallowing were more frequent in children with asthma than controls (p<0.05). Salivary cortisol AR on weekend was significantly higher for asthma group than controls (p<0.05). In control group, salivary cortisol DD was significantly higher on weekday than weekend (p<0.05). There were no significant differences in alpha-amylase values in and between groups. Conclusions: The presence of asthma in children was associated with signs and symptoms of sleep bruxism, negative perception of sensory, chewing and swallowing functions, and higher concentrations of salivary cortisol on weekend / Mestrado / Odontopediatria / Mestra em Odontologia

Orientador: Luiz Eduardo Barreto Martins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Educação Física / Made available in DSpace on 2018-08-20T15:06:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Talmasky_DalilaVictoriaAyala_M.pdf: 904029 bytes, checksum: b02bca6f04727d6674fc54c7db774815 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Este trabalho investigou o instrumento de perfil de humor psicológico BRAMS e traçou o perfil humoral de uma população de jovens fisicamente ativos. Analisou também as respostas das amostras da alfa-amilase salivar e verificou a possível correlação entre os dois marcadores de estresse. Na primeira parte do trabalho foi verificado se a Escala de Humor Brasileira (BRAMS) pode ser utilizada para aferir alterações de humor em resposta a diferentes cargas de treinamento e elaborada a folha de perfil de humor para a população em questão. Realizamos, inicialmente, a análise da concordância do instrumento BRAMS frente aos seis perfis de humor que ele pretende definir. Observamos ótima concordância estatística com os fatores vigor, raiva, fadiga, tensão e confusão mental. Já o fator depressão não apresentou concordância para a população estudada. Construímos, então, uma folha de perfil de humor, oriunda de 228 testes respondidos por 123 indivíduos com idade de 18±1anos (média ± desvio padrão), praticantes de 3 horas de exercício físico diário periodizado. As respostas de um subgrupo de sujeitos (n=105) foram avaliadas em dois momentos: após quatro meses de treinamento físico sistematizado diário, e após quatro dias do término de um treino intensificado de uma semana, quando foi aplicada uma sobrecarga maior em termos físicos e psíquicos. Os dados apresentados mostraram que o instrumento BRAMS foi capaz de discriminar perfis de humor alterados em função da intensificação do treino e a construção da folha de perfil de humor para uma população fisicamente ativa permite monitoramento mais acurado das variações do estado de humor em resposta ao treinamento. Na segunda parte, foram também analisadas as respostas da alfa-amilase salivar nos dois momentos e verificado se existe correlação entre o instrumento de humor e a enzima salivar. Observou-se que os fatores dos testes de humor BRAMS apresentaram na primeira aplicação, valores para os aspectos humorais considerados negativos mais baixos e apenas o fator vigor, único estado de humor considerado positivo, foi mais elevado. Nos resultados da segunda aplicação, todos os fatores negativos foram mais elevados, e apenas o fator vigor manteve-se mais baixo que na primeira aplicação. A enzima salivar alfa-amilase também teve seus valores aumentados na segunda coleta em relação à primeira, mas foi constatado que esses valores estavam dentro do valor de referência para o horário de coleta. Baseado nos resultados deste estudo foi verificado que tanto o teste psicológico, quanto a concentração da enzima salivar alfa-amilase reproduziram variações sofridas nos dois momentos, mas não possuem correlação entre si / Abstract: This study investigated the instrument profile of psychological mood BRAMS and traced the profile of mood state of a population of physically active young. Also examined the responses of samples of salivary alpha-amylase and investigated a possible correlation between the two markers of stress. In the first part of this work it was verified that the Brazilian Mood Scale (BRAMS) can be used to assess mood changes in response to different training loads and a profile sheet of humor was constructed to the population of this study. We have initially performed the analysis of the agreement of the instrument BRAMS front of six profiles of humor that it intends to set. We observed excellent agreement with the statistical factors vigor, anger, fatigue, tension and mental confusion. But the depression factor had no correlation to the population studied. Then, We built a profile sheet of humor, coming from 228 tests administered to 123 subjects aged 18 ± 1 years (mean ± standard deviation), practicing three hours of daily physical exercise periodized. The responses of a subgroup of subjects (n = 105) were evaluated in two moments: after four months of systematic daily physical training, and after four days of the end of an intensified workout a week, when it was applied to a larger overhead in terms of physical and psychic. Our data showed that the instrument was able to discriminate BRAMS profiles altered mood due to the intensification of training and construction of the profile sheet mood for a physically active population allows more accurate monitoring of changes in mood in response to training. In the second part, we also analyzed the responses of salivary alpha-amylase in two times and checked if there is a correlation between the instrument of humor and salivary enzyme. It was observed that the humoral factors of BRAMS showed at the first application, values for the humoral aspects considered negatives lower and only the factor force, the single mood considered positive was higher. The results of the second application showed that all the negative factors were higher, and only the factor force remained lower than the first application. The enzyme salivary alpha-amylase also had its values increased in the second collection from the first one, but it was found that these values were within the reference value for the time of the collection. Based on the results of this study, it was found that both the psychological test and the concentration of salivary alpha-amylase enzyme reproduced variations suffered on both occasions, but have no correlation / Mestrado / Biodinamica do Movimento Humano / Mestre em Educação Física