Autism är en neuropsykiatrisk funktionsnedsättning som i olika utsträckning påverkar individens sätt att tänka, vara och kommunicera. Arv har visat sig vara en betydande faktor till varför vissa får autism, och forskning tyder på att det finns ett samband mellan autism och en obalans i metyleringsmönstret i vissa gener. Målet med arbetet var därav att för tre olika promotorer i genen CREBBP undersöka huruvida ett gemensamt metyleringsmönster för personer med autism kunde urskiljas. Därefter jämföra detta med metyleringsmönster i samma promotorregioner hos individer utan autism för att kunna dra slutsatser om ett tydligt samband mellan metyleringsmönster och autism finns. Avdelningen för sällsynta diagnoser på SciLifeLab försedde arbetet med helgenomsekvenseringsdata där flertalet individer hade avvikelser i gener som tros kan kopplas till autism. För att kartlägga metyleringsmönster utvecklades två Matlab-program. Det ena för att visualisera metyleringen i en gens promotorregion och den andra för att numeriskt jämföra två individers metyleringsmönster med varandra. Resultatet påvisade inget tydligt samband mellan autism och metyleringsmönster i de tre aktuella promotorerna i CREBBP och om ett liknande projekt skulle genomföras i framtiden finns det möjlighet för vidare utveckling. / Autism is a neuropsychiatric disability which in various extent affects the individual's way of thinking, being and communicate. It has been shown that heritage contributes to the development of autism, and science suggests there is a connection between autism and an imbalance in the methylation-pattern in specific genes in the DNA. The purpose of this study was to examine if a methylation pattern could be distinguished for individuals who had abnormalities in genes that are believed to be correlated with autism. This was examined in three promoter regions in the gene CREBBP. The result was then compared with the methylation pattern in the same region for individuals without autism to assess whether there is a difference between the two groups.  The department of rare diseases on SciLifeLab provided this project with sequencing data from the individuals. To find a methylation pattern, two Matlab programs were developed. One to visualize the methylation in a gene’s promotor region and the other to numerically compare two individuals' methylation patterns. The result did not show any clear connection between autism and the methylation in the different promotor regions. If a similar project would be carried out in the future, there is a possibility of further development.

Maternell immunisering är ett sjukdomstillstånd där moderns försvarsmekanism förstör fostrets röda blodkroppar och orsakar anemi hos fostret. Den primära behandlingsmetoden är intrauterina blodtransfusioner. Undersökning av foster under graviditeten utförs i stor utsträckning med hjälp av ultraljud. Ultraljudsundersökning begränsas av att fostret rör på sig och har en hög hjärtfrekvens. Målet med arbetet var att undersöka deformationen av myokardiet hos två grupper av foster. Den ena bestod av nio foster som genomgår intrauterina blodtransfusioner, den andra bestod av nio normala foster i motsvarande graviditetsvecka. Mätningar utfördes i programmet EchoPAC med 2D STE metoden, en tvådimensionell metod där speckle från myokardiet markeras och observeras över tid för att studera förändringen i hjärtats segment, hjärtdeformationen. Detta gjordes som en pilotundersökning primärt i syfte att bedöma genomförbarheten samt möjliga svårigheter med undersökningarna samt undersöka om metoden skulle kunna påvisa skillnader i deformationen mellan foster som behandlas med intrauterina blodtransfusioner och normala foster. Metoden visades vara genomförbar. Resultaten visar att deformationen i hjärtat hos foster som genomgår intrauterina blodtransfusioner är en aning högre än hos normala foster. Skillnaden i hjärtdeformationen mellan grupperna har visat sig vara signifikant. / Maternal immunization is a condition in which the mother's defense mechanism destroys the red blood cells in the fetus, which causes anemia. The primary treatment method is intrauterine blood transfusions. Ultrasound is one of the most common tools used to assess fetuses. Examination with ultrasound is limited by the fetal movements and a high fetal heart rate. The aim of this project was to pilot an investigation of myocardial strain within two groups of fetuses. One group consisted of nine fetuses undergoing intrauterine blood transfusions, the other consisted of nine normal fetuses in the corresponding week of pregnancy. Measurements were performed in the program EchoPAC with the 2D STE method, a two-dimensional method where speckles from the myocardium are marked and observed over time to study the change in the heart segment, the strain. This was done primarily to investigate if measurements were feasible and what problems could occur, and secondarily whether the method could show a difference in strain between fetuses treated with intrauterine blood transfusions and normal fetuses. The results show that the measurements were feasible. Results show that the strain of the heart in fetuses undergoing intrauterine blood transfusions is higher than in normal fetuses. The difference in the strain between the groups has shown to be significant

Detta projekt var ett samarbete mellan Aplex Bio AB och Scilifelab. Projektets mål var att utveckla en molekylär diagnostisk panel med förmågan att detektera och diskriminera mellan 14 olika typer av patogener. Projektet innehåller 4 kapitel med fokus på olika mål. I första kapitlet utvecklades en metod för att karakterisera emissioner av fluorescerande nanopartikel kluster. Den första utvärderade metoden utnyttjade klick-kemi för att binda nanopartiklarna till makrostrukturer uppbyggda av amplifierat DNA. Den andra utvärderade metoden skapade aggregerade komplex av nanopartiklar med amplifierat DNA för att utvärdera partiklarnas emissioner. I kapitel 2 av projektet användes azid-funktionaliserade nanopartiklar levererade av Aplex Bio AB för att tvärbinda DBCO modifierade oligonukleotider. Sedan utvecklades en hybridiserings baserad metod för att kvantifiera relativa mängden oligonukleotider på partiklarna. Denna metod användes för att reproducerbart funktionalisera partiklar och utveckla nanopartikel-sonder som kan binda till DNA genom hybridisering. I kapitel 2 utvärderades även hur effektivt och specifikt de utvecklade nanopartikel-sonderna hybridiserar till DNA. I kapitel 3 utvärderades amplifiering av syntetiska ssDNA sekvenser valda från genetiska markörer av 14 patogener, DNA amplifierades med metoden RCA. Målet var att utvärdera specificiteten av amplifieringen. Specifik amplifiering av varje DNA sekvens i panelen var en förutsättning för att möjliggöra detektion och diskriminering av alla patogener i panelen. I kapitel 4 var målet att utveckla en kostnadseffektiv metod för att funktionalisera nanopartiklar med oligonukleotid sekvenser. För att göra detta användes DBCO-NHS-ester reagens och amin-modifierade oligonukleotider. Förverkligande av detta projekt skulle skapa en diagnostisk panel med potentialen att påverka det diagnostiska fältet på en global skala. När detta projekt är fullt utvecklat kan panelen modifieras för detektion av önskade DNA/RNA sekvenser vilket möjliggör ett mångfalt av applikationer, detta skulle göra panelen konkurrerande med dagens diagnostiska metoder då den kan användas i existerande mikroskopiuppsättningar. / This work was a collaboration between Aplex Bio AB and Scilifelab with the aim of developing a molecular assay capable of detecting and discriminating between 14 different pathogenic targets. There are 4 chapters with focus on different goals. In chapter one a method of evaluating emissions of fluorescent nanoparticle clusters was developed. The first approach of evaluating nanoparticle emissions was to utilize click chemistry to bind nanoparticles to macroscale structures of amplified DNA targets. The second evaluated approach was the formation of aggregated complexes of nanoparticles and amplified DNA targets. The second chapter of the thesis used azide functionalized nanoparticles supplied by Aplex Bio AB to utilize azide groups as crosslinkers and use them to functionalize the nanoparticles with DBCO oligos. A hybridization-based method was then developed to quantify relative oligo densities on the nanoparticles, enabling reproducible oligo functionalization of nanoparticles, producing nanoparticle probes that can bind to DNA. The final task of chapter 2 was evaluating the binding efficiency and specificity of the developed nanoparticle probes. The third chapter of the thesis evaluated amplification of synthetic ssDNA sequences corresponding to genetic markers of 14 pathogenic targets using RCA. The goal was to confirm specificity of chosen padlock probes and corresponding synthetic targets for each pathogen. Specific amplification of each target was a prerequisite to enable detecting and discriminating between the 14 pathogenic targets. In chapter 4 the goal was to develop a cost-effective method of oligo functionalization for nanoparticles. This chapter evaluated two main approaches of using DBCO-NHS-ester reagents to perform DBCO modification of amine-oligos. The realization of this work would develop an assay that has the potential to impact the field of diagnostics on a global scale. When fully developed, the molecular assay can be modified to detect any RNA/DNA targets which enables numerous applications, making the assay a competitive diagnostic tool which can be implemented in existing microscopy systems.

Vid positronemissionstomografi (PET) kräver vissa radiofarmaka lösningsmedlen N,N-dimetylformamid (DMF) och dimetylsulfoxid (DMSO) vid syntes. Rester av lösningsmedlen kan därför finnas kvar i produkten som ska injiceras i patienten och därför ska mängden lösningsmedelsrester kontrolleras enligt Europeiska läkemedelsmyndighetens riktlinjer (EMA). Gaskromatografi är standardmetod för att kvantifiera lösningsmedelsrester men är inte optimal för DMF och DMSO, som istället kan analyseras med UHPLC (ultra high performanc liquid chromatography) och UV-detektor. Syftet med projektet var att utföra metodoptimering och validering av en reverse phase UHPLC-UV metod för lösningsmedlen DMF och DMSO, på ett Agilent 1290 instrument. Sex aktuella radiofarmaka (spårmolekyler) användes vid utförandet. För metodoptimering studerades flera instrumentinställningar för analys av DMF och DMSO. Under optimeringen analyserades DMF och DMSO lösta i provmatriser och spårmolekyler med olika koncentration. DMF separerade från provmatriser och spårmolekyler. DMSO co-eluerade med de nämnda ovan och därför utfördes den efterföljande valideringen endast för DMF. Resultaten från valideringen erhöll godkända resultat för fem av sex radiofarmaka. Korrelationskoefficient var 0.9998, noggrannheten bestämdes till 96.8 – 101.5% och för precision som repeterbarhet och reproducerbarhet blev den relativa standardavvikelsen <5%. Detektionsgränsen bestämdes till 0.014 µg/mL och kvantifieringsgränsen till 0.047 µg/mL. Slutsatsen av projektet var att haltbestämning av lösningsmedlet DMF kan utföras. Därmed kan kraven från EMA säkerställas, men för en mer optimal metod kan ändring av pH på mobilfasen, flödeshastighet, kolonntyp och orsak till de breda topparna studeras närmare.

<p>S. 1-40: sammanfattning, s. 41-96: 5 uppsatser</p> / digitalisering@umu.se

Antibodies are Y-shaped proteins. In the human body, antibodies areproduced by plasma cells, mainly T and B cells which are included inthe adaptive immune system. The production of antibodies is stimulatedby antigens. The binding between an antigen-specific antibody and itsantigen can be like the interconnect between a lock and a key.Therefore, antibodies are widely used as diagnostic tools for avariety of diseases but most importantly cancer. Some rapid diagnostictests are completely dependent on the specificity and reactivity ofantibodies such as UBC® Rapid produced by IDL Biotech AB. Therefore,the quality of these antibodies is important. This master thesis at IDL Biotech aimed to validate six anticytokeratinantibodies that are currently used in several rapid cancerdiagnostic tests produced by IDL. Antibody validation is a processwhere specificity, selectivity and reproductivity of an antibody isdemonstrated through specific laboratory investigations. During thisthesis, two laboratory methods were used to validate antibodies,namely, isoelectric focusing electrophoresis and the Attana QuartzCrystal Microbalance based biosensor. Isoelectric focusing electrophoresis (IEF) is a method that determinesproteins pI-values which can then reveal information about posttranslationalmodifications and protein sustainability during storage.IEF revealed changes in pI-values in two antibodies: AB2 and AB4. Attana biosensor analysis on AB1-5 showed that all antibodies havehigh specificity, reactivity and relatively high affinity to theircytokeratin targets. It also revealed that 4 antibodies (AB1 and AB3-5) have lower cross-reactivity with other cytokeratins than theirtarget cytokeratins compared to AB2. Keywords: Antibody validation, Isoelectric focusing, QCM, Attanabiosensor, biosensors, rapid diagnostics, epithelial carcinomas.

4AbstractA pre-filled syringe consists of a number of different components and materials e.g. glass, polymer and silicone oil, which will, in various degrees, interact with the pharmaceutical protein and excipients contained within. In addition to soluble protein loss due to adsorption to silicone droplets, silicone oil (SO) have also been reported to form complexes with pharmaceutical proteins that potentially provoke early and late-stage immune responses. The objective of this project was to investigate the impact of 10 different syringe barrel and plunger combination on the quality on pharmaceutical X and the performance of the syringe (syringeability). This is an explorative study and the purpose of this study was to investigate what options there were rather than to make firm recommendations. pH measurements indicated all chosen combinations were within acceptance criteria. Similarly, subvisible particle with reference standards and USP &lt;788&gt; tests indicated that all chosen combinations were within acceptance criteria. Analysis of visible particles without reference standards indicated that all combinations except 1B and 1C were within acceptance criteria. In terms of syringeability, functional testing revealed that combination 8A was a very poor choice and combination 1B a very good choice. In all of the tests, the currently used combination 1A was within the acceptance criteria. With respect to both the pharmaceutical quality and syringeability, it was considered to be equally preferred as many other combinations. Therefore, there is no real urgency to exchange the currently used syringe. Further investigation of plunger B, and possible other plunger combinations is recommended as they might play a bigger role than the syringe barrel with regard to the syringeability. Additionally, placebo suspension can only be used as a representative alternative for testing pH. / En förfylld spruta består av många olika komponenter och material så som glas, polymer, silikon olja, vilka, till olika grad, kommer reagera med proteiner och hjälpämnen i läkemedlet. Utöver förlust av protein (som följd av adsorption till silikon droppar), har det även rapporterats att silikon olja (SO) bildar komplex med proteinerna i läkemedlet vilka kan framkalla en immunologisk reaktion. Syftet med detta projekt var att undersöka effekten av 10 olika kombinationer av sprut-höljen samt kolvar på kvalitén på läkemedel X samt sprutans prestationsförmåga. Detta är en explorativ studie och syftet var att undersöka vilka alternativ som finns samt få en indikation för hur de uppför sig snarare än att ge tydliga rekommendationer. pH mätningar indikerade att alla valda kombinationer var inom acceptanskriterier. Liknande, både mätning av synliga och mikroskopiska partiklar med hjälp av referenslösningar samt metod USP 788 indikerade att alla valda kombinationer var inom acceptanskriterier. Mätning av synliga och mikroskopiska partiklar utan referenslösningar indikerade att alla kombinationer utom 1B och 1C var inom acceptanskriterier. Gällande sprutkombinationernas funktionalitet (prestationsförmåga) visade det sig att kombination 8A var ett dåligt val och kombination 1B ett attraktivt val. I alla tester, den nuvarande använda kombinationen (1A) var inom acceptanskriterier. Med avseende på både läkemedlets kvalité samt funktionalitet visade sig 1A vara ett likvärdigt alternativ till de andra kombinationerna. Detta innebär att det i dagsläget inte finns ett akut behov av att byta ut det nuvarande sprutkombinationen. Fortsatt utredning av kolv B, samt andra kolvar, är att rekommendera då de kan ha större påverkan funktionaliteten än höljet. Vidare kan placebolösning enbart användas som ett representativt alternativ för att testa pH.

The childhood cancer neuroblastoma mostly affects children under the age of 2 and comprises 6% of all childhood cancers. Neuroblastoma has very diverse phenotypes caused by both inter- and intra-tumour heterogeneities. The phenotypes are classified as being either low- or high-risk. This project focuses on high-risk NB cell lines with various chemotherapy sensitivity. Titration studies with chemotherapy agents cisplatin or doxorubicin showed a proneness of p53 mutated cell lines to arrest in either the S- and/or the G2/M-phase, depending on the drug and the drug dosage, indicating on a dose-dependent cell cycle response. To potentially inhibit the cells from arresting a treatment assay with 3 cell cycle key-components, pATM, Chk1 and Wee1 inhibitors was done. An initial immunocytochemistry staining of the expression levels of pATM and Wee1 showed that pATM was upregulated for 5 out 7 tested cell lines, namely SK-N-SH, SK-N-FI, Kelly, SK-N-DZ and BE(2)-C, upon chemotherapy treatment with doxorubicin. Wee1 was however only upregulated for 3 out 7 cell lines; Kelly, SK-N-DZ and BE(2)-C. The upregulation of pATM and Wee1 showed a potential confirmation of their involvement in CT induced cell cycle arrest. Upon inhibition of pATM, Chk1 and Wee1 diverse effects were observed for each cell line (SK-N-SH, SK-N-AS, SK-N-FI, Kelly, SK-N-DZ and BE(2)-C). Wee1 showed the most promising results were the cell viability decreased for all 5 p53 mutated cell lines and the confluency over time decreased for 4 out 5 p53 mutated cell lines. The p53 wild type cell line SK-N-SH was less sensitive towards Chk1 and Wee1 inhibition indicating that cell lines with functional p53 might not be as dependent on the Chk1 and Wee1 pathways compared to cell lines with non-functional p53. Thus, targeting the cell cycle arrest might be a promising therapeutic target for high-risk neuroblastoma. / Barndomscancern neuroblastom utgör 6% av all barncancer. Majoriteten av de drabbade är under 2 år. Neuroblastom har en stor mångfald av fenotypiska utryck som orsakas av dess inter- och intra-tumör heterogenitet. Fenotyperna klassificeras antigen som låg- eller högrisk. Här har 7 högrisks-neutoblastom cellinjer med varierande grad av känslighet mot kemoterapi analyserats. Titreringsstudier med kemoterapierna cisplatin och doxorubicin påvisade en benägenhet för de p53 muterade cellinjerna att arrestera i S- och/eller i G2/M-fasen, beroende på behandlingen samt behandlingsdosen, vilket indikerar på en dos-beroende cellcykel respons. En behandlingsanalys med de 3 nyckelkomponenterna fosforylerat ATM, Chk1 samt Wee1 gjordes för att potentiellt inhibera cellerna från att arrestera. Efter en initial immunocytokemi infärgning av pATM samt Wee1 visade 5 av 7 cellinjer (SK-N-SH, SK-N-FI, Kelly, SK-N-DZ samt BE(2)-C) en uppreglering av pATM-uttryck till följd av doxorubicin behandling. Däremot var Wee1 endast uppreglerat för 3 av 7 cell linjer (Kelly, SK-N-DZ samt BE(2)-C). Uppregleringen av pATM och Wee1 påvisar ett potentiellt samband mellan kemoterapi-inducerad cellcykelarrest och ökat utryck av pATM och Wee1. Vid inhibering av pATM, Chk1 samt Wee1 gav Wee1 de mest lovande resultaten där cellviabiliteten minskade för samtliga 5 p53-muterade cellinjer och där konfluensen över tid minskade för 4 av 5 p53-muterade cellinjer. SK-N-SH med funktionerande p53 var mindre känslig gentemot Chk1 och Wee1 inhibering, vilket indikerar att cellinjer med funktionerande p53 inte är lika beroende av reaktionsvägarna för Chk1 och Wee1 jämfört med cellinjer som har icke-funktionerande p53. Därmed kan riktad behandling mot cellcykelarrest vara en lovande behandling för högrisks-neuroblastom.

Aggregation of microtubule-associated protein tau is involved in the pathology of several neurodegenerative diseases, including Alzheimer’s disease. The affibody TP4 has been shown to inhibit this aggregation process, and its target-binding positions were previously grafted onto a dimeric affibody scaffold, creating the sequestrin seqTP4. This project constitutes a part of the affinity maturation process of seqTP4, using two different bacterial display methods. An error-prone PCR library was first expressed on Staphylococcus carnosus cells for selection of variants with improved tau-binding properties, resulting in a library of 1.4×107 transformants. Flow cytometric tests indicated difficulties in the setup due to nonspecific interactions, and whereas several different approaches to alleviate the problems were investigated, two cell sorting attempts were ultimately unsuccessful. Subcloning of seqTP4 and the library to an Escherichia coli surface display vector resulted in functional surface expression of seqTP4 on E. coli JK321 and BL21 cells, and a BL21 library size of 1.6×109 transformants. An initial flow cytometric test of this library indicates the presence of improved tau-binding variants, paving the way for future cell sorting. / Aggregering av mikrotubuli-associerat protein tau är involverad i patologin av flera neurodegenerativa sjukdomar, däribland Alzheimers sjukdom. Affibodymolekylen TP4 har visat sig inhibera denna aggregeringsprocess, och överföring av dess målbindande positioner till ett dimeriskt affibodyprotein har tidigare gett upphov till seqTP4, en så kallad sequestrin. Detta projekt utgör ett led i processen att affinitetsmaturera seqTP4, med hjälp av två olika metoder för presentation av proteiner på ytan av bakterieceller. Ett error-prone PCR-bibliotek uttrycktes först på ytan av Staphylococcus carnosus-celler för selektion av varianter med ökad affinitet för tau, vilket resulterade i ett bibliotek av 1.4×107 transformanter. Flödescytometriska tester tydde på svårigheter i detta upplägg på grund av ospecifika interaktioner, och emedan flera olika angreppssätt för att förmildra dessa problem undersöktes, misslyckades slutligen två cellsorteringsförsök. Omkloning av seqTP4 och biblioteket till en vektor för ytpresentation på Escherichia coli resulterade i funktionellt ytuttryck av seqTP4 på E. coli JK321- och BL21-celler, och ett BL21-bibliotek bestående av 1.6×109 transformanter. Ett första flödescytometriskt test av detta bibliotek tyder på närvaron av varianter med förbättrad förmåga att binda tau, och vägen ligger nu relativt öppen för cellsortering.

Hemicelluloses are synthesized by proteins encoded by genes from the cellulose synthasegene superfamily. One subgroup of this gene family is the cellulose synthase-like B, which islargely uncharacterized and unexplored. The common model organism Nicotianabenthamiana has one such gene in its genome, NbCslB, encoding a membrane protein. Theexpression of this gene has previously been studied in vivo, but in order to study the protein invitro a viable solubilization and purification protocol is required. This study evaluated the useof the detergent n-Dodecyl β-D-maltoside (DDM) for solubilization, followed by purificationusing immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC), and thereafter reconstitutionof the protein into proteoliposomes. SDS-PAGE as well as Western blot analyses showed thatthe purification was successful and provided a pure sample of protein. Throughout theanalyses performed, an anti-FLAG antibody was discovered to bind well to the protein, andthereby be especially useful for analysis. An activity assay was performed on the purifiedprotein, to characterize its function and evaluate whether the protein had maintained itsactivity and conformation after the steps of purification and reconstitution. No activity couldbe detected in the enzymatic assay, which indicated that the purification protocol may havebeen too rough on the protein, that the reconstitution was not successful, or that the assayconditions were not optimal. These results can be used as a base for future research, where theprotocols for solubilization, purification, and reconstitution should be further refined in orderto obtain an end result where the purified protein is active. When an active and pure proteinsample is achieved, it will be possible to perform further attempts at characterizing thefunction of the protein using enzymatic activity assays. Additionally, the results showed thatthe choice of antibody can be crucial for proper analysis of this protein. / Hemicellulosa syntetiseras av proteiner vars gener återfinns i genfamiljen cellulosasyntas. Enundergrupp till denna genfamilj är cellulosasyntasliknande B, en grupp som till stor del ärokarakteriserad och outforskad. Den vanliga modellorganismen Nicotiana benthamiana haren sådan gen i sitt genom, NbCslB, som kodar för ett membranprotein. Hur denna genuttrycks har tidigare studerats in vivo, men for att kunna studera proteinet in vitro krävs etthållbart protokoll för solubilisering och rening. Denna studie utvärderade användningen avlösningsmedlet n-Dodecyl β-D-maltoside (DDM) för solubilisering, följt av rening medimmobiliserad metalljon-affinitetskromatografi (IMAC), och efter det rekonstitution avproteinet till proteoliposomer. SDS-PAGE och Western blot analyser visade att reningen varlyckad, och att ett rent proteinprov erhållits. När analyserna genomfördes upptäcktes att enanti-FLAG antikropp band särskilt väl till proteinet, och därmed var mycket användbar vidanalys. En aktivitetsanalys genomfördes med det renade proteinet för att karakterisera dessfunktion och utvärdera huruvida proteinet hade bevarat sin aktivitet och konformation efterrening och rekonstitution. Ingen aktivitet kunde detekteras i den enzymatiskaaktivitetsanalysen, vilket indikerade att reningen eventuellt var för hård mot proteinet,alternativt att rekonstitutionen inte var lyckad, eller att förhållandena för analysen inte varoptimala. Dessa resultat kan användas som en bas för framtida forskning om proteinet, därprotokollen för solubilisering, rening och rekonstitution bör vidareutvecklas för att uppnå ettslutresultat där det renade proteinet är aktivt. När ett aktivt och rent proteinprov uppnåtts ärdet möjligt att genomföra ytterligare försök att karakterisera proteinets funktion medenzymatiska aktivitetsanalyser. Resultaten visade också att valet av antikropp kan varaavgörande för att ordentligt kunna analysera detta protein.