Orientadores: José Francisco Hofling, Marta Cristina Teixeira Duarte / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T21:24:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Peixoto_IzaTeixeiraAlves_D.pdf: 4732148 bytes, checksum: cd8cbf98531ac28e12f9feba2f8edd34 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O objetivo desse estudo foi avaliar a ação antimicrobiana de óleos essenciais e frações de diferentes acessos de Mentha spp. contra Candida spp., identificando seus compostos e verificando sua citotoxicidade. Os 64 óleos essenciais de diferentes acessos de Mentha spp. foram extraidos utilizando as partes aéreas da planta fresca, por hidrodestilaçãoo em sistema tipo Clevenger. Os óleos foram testados contra isolados clínicos e de referência de Candida albicans (CBS 562) e Candida dubliniensis (CBS 7987). A CIM foi determinada por meio do método de microdiluição (CLSI, 2002). Os melhores acessos testados em células planctônicas foram fracionados em 5 partes em cromatografia de coluna seca e testados posteriormente contra biofilme de C. albicans (SC 5314). Com o inoculo padronizado em meio RPMI-1640, os biofilmes foram produzidos em placas esterilizadas de polietileno de 96 pocos, para testes dos óleos e frações em biofilme maduro e biofilme em formação, sendo quantificados com solução de XTT e analisados através de microscopia óptica e confocal a laser. Os compostos dos melhores óleos e frações foram identificados por cromatografia em camada delgada e cromatografia a gas com detector de massas. A citotoxicidade também foi provada em painel de diferentes linhagens celulares células epiteliais, por meio da avaliação da atividade antiproliferativa, in vitro, utilizando-se o ensaio de sulforrodamina B para avaliação do crescimento celular. O melhor rendimento em óleo essencial (base seca) foi observado para o acesso de M. rotundifolia CM 31 (1,5 %). Quatro óleos se destacaram, apresentando forte atividade com amplo espectro, sendo M. canadensis (CM 05) - (<0,007 a 0,500 mg/mL); M. spicata (CM 30) (0,062 mg/mL a 0,500 mg/mL); M. arvensis CM 36 (<0,007 mg/mL a 1 mg/mL) e M. suaveolens x spicata (CM 52) - (0,062 mg/mL a 0,500 mg/mL). As frações F2 e F3 de M. suaveolens x spicata CM 52 demonstraram a melhor atividade dentre os óleos e frações testadas, apresentando 49 % e 38 % de inibição na concentração de 0,5 mg/mL para biofilme maduro e 70 % de inibição (a 0,062 mg/mL) e 61 % de inibição (a 0,125 mg/mL), respectivamente, para inibição de biofilme em formação. Esses resultados foram confirmados pelas analises microscópicas. Os compostos majoritários do óleo de M. canadensis CM 05 foram carvona (74,84 %) e linalol (4,84 %);de M. spicata CM 30 oxido de piperitenona (28,05 %), beta-E-farneseno (18,58 %) e gama-muuroleno (17,38 %); M. arvensis CM 36 Linalol (33,24 %), acetato de linalol (21,97 %) e alfaterpineol (11,77 %); de M. suaveolens x spicata CM 52 pulegona (52,20 %), piperitenona (29,51 %) e gama-muuroleno (4,44 %). Os óleos essenciais de Mentha spp. apresentam atividade antimicrobiana contra células planctônicas de Candida spp. (de moderada a fraca), exceto os óleos originados dos acessos de M. canadensis CM 05, M. spicata CM 30, M. arvensis CM 36 e M. suaveolens x spicata CM 52. As fracoes F2 e F3 de Mentha suaveolens x spicata CM 52 demonstram efeito antimicrobiano inibitório sobre biofilme em formação e sobre biofilme maduro, alem de ausência de citotoxicidade para células testadas / Abstract: The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of essential oils and fractions of different accessions of Mentha spp. against Candida spp., identifying compounds and verifying its cytotoxicity.The essential oils of 64 different accessions of Mentha spp. were extracted using the fresh aerial parts of the plant by hydrodistillation cleavenger type system Then, The the oils were tested against clinical isolates and reference strains Candida albicans (CBS 562) and Candida dubliniensis (CBS 7987). The minimal inhibitory concentration (MIC) was determined by microdilution method, using the CLSI protocol. The best accessions tested on planktonic cells were separated into 5 parts by dry column, and oils and fractions were subsequently tested against biofilms of C. albicans (SC 5314). With standardized inoculum in RPMI-1640, the biofilms were produced in sterile polyethylene plates with 96 wells, for to evaluate the oils and fractions in preformed biofilm and inhibition biofilm formation. After the biofilm was quantified with XTT solution and analyzed by optical and confocal microscopy. The compounds were further identified by thin layer chromatography (TLC) and gas chromatography mass spectrometry (GC-MS). The cytotoxicity was also tested in epithelial cells as well as antitumor activity, by evaluating the antiproliferative activity in different cell lines using the test sulforrodamina B (SBR) for evaluation of cell growth.The best yield in essential oil (dry basis) was observed for the accessions M. rotundifolia CM 31 (1.5% dry basis). Among the 64 oils, four stood out, showed strong activity with broad spectrum, inhibiting all strains tested, and these, M. canadensis (CM 05) - (<0.007 to 0.187 mg/mLto 0.500 mg/ml), M. spicata (CM 30) - (0.062 mg/mL to 0.500 mg/ml), M. arvensis CM 36 (<0.007 mg/mL to 1 mg/mL) and M. spicata x suaveolens (CM 52) - (0.062 mg/mL to 0.500 mg/mL). Fractions F2, F3 M. spicata x suaveolens CM 52 showed the best activity among the tested oils and fractions, showing 49% and 38% inhibition at 0.5 mg/mL for preformed biofilm and 70% inhibition (at 0.062 mg/mL) and 61% inhibition (at 0.125 mg/mL), respectively, for inhibitory biofilm formation. These results were confirmed by microscopic analysis. The mainly oil M. canadensis 05 CM were carvone (74.84%), linalool (4.84 %); M. spicata CM piperitenone oxide were 30 (28.05%), beta-E-farnesene (18.58%) and gamma-muuroleno (17.38%); M. arvensis CM 36 were Linalool (33.24%), acetate, linalool (21.97%) and alphaterpineol (11.77%); M. spicata x suaveolens CM 52 were pulegone (52.20 %), piperitenone (29.51 %) and gamma-muurolene (4.44 %). Fractions F2 and F3 showed antiproliferative activity for most strains, showing lack of cytotoxicity in epithelial cells tested.The essential oils of Mentha spp. exhibit antimicrobial activity against planktonic cells of Candida spp. (moderate to weak), except oils originating from accessions of M. canadensis CM 05, M. spicata CM 30, M. arvensis CM 36 and M. suaveolens x spicata CM 52. The fractions F2 and F3 of Mentha spicata x suaveolens CM 52 shows antimicrobial effect on preformed biofilm and inhibition biofilm, and absence of cytotoxicity to mammalian cells / Doutorado / Microbiologia e Imunologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Orientadores: Altair Antoninha Del Bel Cury, Alfredo Julio Fernandes Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-15T07:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Straioto_FabianaGouveia_D.pdf: 1136819 bytes, checksum: 94255ae316940aec09bc64b1ad3b35c2 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Resinas acrílicas são materiais amplamente empregados na Odontologia, especialmente os polímeros a base de polimetilmetacrilato (PMMA) para confecção de próteses. Dentre as vantagens deste material estão à estabilidade de cor, propriedades ópticas, estética satisfatória, estabilidade dimensional, fácil manipulação e propriedades físicas adequadas para aplicações odontológicas. Entretanto, como desvantagem deste material, está à susceptibilidade à aderência e desenvolvimento de biofilme por microrganismos presentes na cavidade bucal, como fungos e bactérias. A aderência de microrganismo é o primeiro evento para o desenvolvimento do biofilme o qual está relacionado ao estabelecimento de quadros clínicos patológicos como estomatite protética. Recentemente, a adição de modificadores na composição da resina acrílica tem sido proposta com o objetivo de melhorar as características de superfície, e conseqüentemente controlar a aderência de microrganismos. Entretanto, a mudança na composição da resina acrílica não deverá comprometer as propriedades físicas. Politetrafluoretileno (PTFE) tem sido usado como modificador para confecção de stents e cateteres devido a biocompatibilidade, alta resistência a agentes químicos e baixa energia de superfície. Assim, o objetivo neste estudo foi avaliar as propriedades físicas, características de superfície, aderência de microrganismos e formação de biofilme de suas resinas acrílicas, uma polimerizada em água quente com ciclo longo e a outra polimerizada pelo ciclo curto, contendo 2% de PTFE em sua composição e comparar com as mesmas resinas sem adição de PTFE. Para isto, três estudos foram realizados: 1- Propriedades físicas da resina acrílica - espécimes das resinas foram confeccionados de acordo com a norma ISO 1567:1999 (n=10) para cada teste mecânico: dureza de superfície, resistência ao impacto, resistência a flexão e o módulo de elasticidade e carga máxima foram calculados; 2 - Características de superfície da resina acrílica e aderência de Candida albicans: espécimes retangulares (n=10) para cada resina foram confeccionados e avaliados quanto à rugosidade, ângulo de contato, energia livre de superfície e aderência de Candida albicans. As células aderidas foram expressas por unidade formadora de colônia por área da superfície; 3- Biofilme formado na resina acrílica e sua composição: discos de resina acrílica (n=6) foram usados para formação de biofilme de Streptococcus mutans UA159, Streptococcus sanguinis ATCC 10556 e Actinomyces naeslundii ATCC 12104. A composição de polissacarídeos e unidades formadoras de colônia foram comparadas. Em todos os estudos, os resultados foram submetidos à análise variância a dois fatores e comparados pelo teste de Tukey (p=0,05). Os resultados não mostraram diferença estatisticamente significante para os valores de dureza de superfície (p>0,05). Entretanto, para os valores de resistência ao impacto e flexão para os grupos experimentais, contendo PTFE, apresentaram resultados significantemente menores (p<0,05) quando comparados aos grupos não adicionados de PTFE. Os valores de módulo de elasticidade da resina acrílica adicionada com 2% de PTFE polimerizada com o ciclo longo apresentaram os maiores valores comparados aos demais grupos (p<0,05). Não houve diferenças significativas para rugosidade, ângulo de contato e energia livre de superfície (p>0,05); houve uma tendência de redução de células de C. albicans no grupo com PTFE, mas não foi estatisticamente significante. Em relação, a formação e composição de polissacarídeo os resultados não apresentaram diferenças entre os grupos de resina acrílica (p>0,05). Os resultados sugerem que 2% de PTFE adicionada à resina acrílica não foi suficiente para promover mudanças nas propriedades mecânicas, aderência e composição do biofilme. / Abstract: Acrylic resins have been widely used in Dentistry, especially polymers of poly (methyl methacrylate) for fabricating dentures. This material has as advantages stable color and optical properties, satisfactory esthetic and dimensional stability, it is easy to be processed, and its physical properties have been proven adequate for dental applications. However, as disadvantage acrylic resins surface is susceptible to adherence and biofilm development of oral microorganism, such as fungi and bacteria. Microorganism's adherence is the first step to biofilm development, and it is related to pathogenic condition, leading to denture stomatitis. Recently, it had been proposed addition of modifiers to acrylic resin composition that could be able to improve its surface properties, and consequently controlling microorganisms' adherence. However, this change in composition of acrylic resin should not compromise its physical properties. Polytetrafluorethylene has been used as modifiers to fabricate medical devices such as stents and catheters because it is a biocompatible material, high resistance to chemical reagents and low surface energy. Thus, the aim of this study was to evaluate the physical properties, surface characteristics, adherence of microorganisms and biofilm formation of two acrylic resins, one polymerized by long and other polymerized by short cycle, with 2% (w/w) of PTFE added and to compare with the same resins with no PTFE added. For this, three studies were conducted: 1 - Physical properties of acrylic resins - specimens were prepared for each acrylic resin according to the ISO standard 1567:1999 (n=10) for each mechanical test: surface hardness, impact strength, flexural strength and flexural modulus and peak load were calculated; 2 - Characteristics of acrylic resin surface and adherence of Candida albicans: rectangular specimens (n=10) of each resin were prepared and evaluated for surface roughness, contact angle, surface free energy and C.albicans adherence. Adhered cells were expressed in colony forming units per surface area; 3- Biofilm formed on acrylic resins and its composition: acrylic resin discs (n=6) were used to Streptococcus mutans UA 159, Streptococcus sanguinis ATCC 10556 and Actinomyces naeslundii ATCC 12104 biofilm formation. Polysaccharide composition and colony forming units were compared. For both three studies the results of were analyzed by Two-Way ANOVA and Tukey test (P<.05). The results showed no statistical significant differences for surface hardness (P>0.05). However, impact and flexural strengths values for experimental groups, with PTFE added were significantly lower (P<.05) when compared to the groups with no PTFE added. The flexural modulus values of acrylic resin containing 2% PTFE polymerized by long cycle was higher than other resins (P<0.05). No statistical differences were found for roughness, contact angle, surface free energy (P>.05); there was a reduction trend in C. albicans adherence in acrylic resin with PTFE added, but it was not statistically significant. Regarding, the formation and composition of polysaccharide matrix the results showed no differences among the acrylic resin groups (P>0.05). The results showed that the 2% of PTFEE incorporated to acrylic resins was not enough to affect the mechanical properties, adherence and composition of biofilm. / Doutorado / Protese Dental / Doutor em Clínica Odontológica

A candidíase é a mais freqüente infecção fúngica oportunista, causada por leveduras do gênero Candida, de ocorrência comum na cavidade bucal. O aumento da incidência está relacionado, em grande parte, ao surgimento das terapias e patologias imunossupressoras, embora ela possa ocorrer em indivíduos considerados saudáveis. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a microbiota leveduriforme de pacientes com lesão bucal suspeita de candidíase e compará-la com a de indivíduos saudáveis através da quantificação, produção de enzimas fosfolipase, proteinase e determinação da CIM dos antifúngicos: anfotericina B, itraconazol e fluconazol pelo método de microdiluição em caldo. As leveduras foram isoladas a partir de amostras de saliva não estimulada no meio CHROMagar® Candida, que permitiu a observação de colonização mista e uma identificação presuntiva. Posteriormente os isolados foram identificados pela metodologia clássica, através das provas: formação de tubo germinativo em soro humano, estudo da micromorfologia, crescimento a 37°C e 42°C, provas de assimilação e fermentação de carboidratos. Das 100 amostras de saliva dos pacientes com lesão, 70 apresentaram crescimento de leveduras e foram identificadas 63 C. albicans e 16 C. tropicalis. Entre as 50 amostras de salivas do grupo controle, 16 apresentaram crescimento e foram identificadas 14 C. albicans e 3 C. tropicalis. Quanto à capacidade de síntese das exoenzimas observou-se que 100% das C. albicans de ambos os grupos avaliados produziram as enzimas fosfolipase e proteinase em diferentes níveis de atividade. Os isolados de C. tropicalis não apresentaram produção da fosfolipase, com relação à proteinase 43,8% dos isolados de pacientes com lesão bucal foram positivos. Em relação aos testes de sensibilidade, a faixa da CIM para anfotericina B foi de 0,125 ? 4µg/mL para os isolados de C. albicans e de 2 ? 4 µg/mL para os de C. tropicalis, com o itraconazol o intervalo da CIM foi de 0,03 ? 16µg/mL para as duas espécies e para o fluconazol a faixa da CIM foi de 0,125 - ?64µg/mL para os isolados de C. albicans e de 0,25 - ?64µg/mL para os de C. tropicalis. Com base nos resultados obtidos conclui-se que: a análise de saliva é sensível para detecção de leveduras tanto em pacientes com sinais clínicos de candidíase quanto em indivíduos saudáveis portadores da levedura; C. albicans foi à espécie mais isolada em ambos os grupos; todas os isolados de C. albicans foram produtores das enzimas fosfolipase e proteinase; nenhum isolado de C. tropicalis apresentou atividade da enzima fosfolipase. A maioria dos isolados de C. albicans e C. tropicalis foram sensíveis in vitro aos antifúngicos testados / Candidiasis is the most frequent oportunistic fungal infection. It is caused by Candida yeasts, commonly seen in the oral cavity. Newer therapies and immunosupressive pathologies are related to the increase of oral candidiasis incidence, although it may occur in healthy subjects. Therefore, the aim of this work was to evaluate yeasts frequency in the oral cavity from patients with clinical signs of oral candidiasis and compare it with frequency observed in healthy subjects through quantification, phospholipase and proteinase activity tests and antifungal susceptibility (amphotericin B, itraconazole, fluconazole) by broth microdilution test. The yeasts were isolated from unstimulated whole saliva samples in CHROMagar® Candida medium, which allowed association between two or more species observation and presumptive identification. Latter, strains identification were confirmed by classical methodology. Of 100 candidiasis patients samples, yeast growth was observed in 70 samples and 63 C. albicans and 16 C. tropicalis strains were identified. Of 50 healthy subjects samples, yeast growth was observed in 16 samples and 14 C. albicans e 3 C. tropicalis strains were identified. Differential activity of phospholipase and proteinase enzymes was detected in 100% C. albicans strains in both groups. Phospholipase activity was not detected in C. tropicalis strains, and proteinase activity was detected in 43,8% strains from oral candidiasis group. Susceptibility tests showed amphotericin B MIC range from 0,125 ? 4 µg/mL for C. albicans strains and 2 ? 4 µg/mL for C. tropicalis strains; itraconazole MIC range from 0,03 ? 16 µg/mL for both species; fluconazole MIC range from 0,125 - ? 64 µg/mL for C. albicans strains and 0,25 - ? 64 µg/mL for C. tropicalis strains. In conclusion, our study demonstrates that saliva analysis is sensitive to detect yeasts from patients with clinical signs of oral candidiasis and from yeasts carriers; C. albicans was prevalent in both groups; all C. albicans strains showed phospholipase and proteinase activity; None C. tropicalis strains showed phospholipase activity. The majority of C. albicans and C. tropicalis strains were inhibited in vitro by antifungals evaluated

O gênero Candida abriga várias espécies de importância médica e embora algumas venham adquirindo interesse crescente, Candida albicans continua sendo a mais importante e responsável pelo maior número de infecções. Encontrada na microbiota de seres humanos saudáveis, é responsável pela infecção oral fúngica mais comum, em relação bastante estreita com a estomatite sob prótese (EP). Esta é um processo inflamatório da mucosa oral, comum em portadores de próteses dentárias, parciais ou totais subjacentes a uma prótese, onde também podem estar outros microrganismos, interagindo com diversos fatores, ligados ao hospedeiro e aos próprios microrganismos presentes no biofilme da superfície interna da prótese. A maioria dos casos é assintomática e alguns pacientes relatam dor, prurido ou sensação de ardência. O diagnóstico é clínico, complementado por exames tais como o citológico e o micológico direto. O tratamento é quase sempre empírico, sem a clara certeza se o indivíduo é portador da levedura e se outras espécies, estão envolvidas. Os meios cromogênicos possibilitaram avanço no diagnóstico das candidíases orais. Sua utilização facilita a identificação destas leveduras, com resultados em menor tempo que os dos métodos já padronizados para outras espécies de Candida. O CHROMagar Candida (CC) é a referência, fornecendo resultados em 48 horas após semeadura direta do material coletado. O meio denominado Candida Chromogenic Agar (CCA), foi recentemente lançado em nosso mercado e tendo em vista o seu baixo custo parece ser mais uma ferramenta para o diagnóstico da candidíase, embora não haja, ainda, literatura disponível sobre o seu emprego. O objetivo do presente trabalho, foi comparar esse novo meio ao CHROMagar Candida, quanto à sensibilidade e especificidade no isolamento de espécies do gênero Candida da mucosa oral de portadores de próteses totais superiores, com ou sem sintomas de EP. Participaram do estudo, 61 pacientes, de ambos os gêneros, portadores de próteses totais (45,9%) ou uni maxilares superiores (54,1%). Dentre as 61 amostras coletadas, 45 (73,77%) foram positivas para leveduras em CC, sendo C. Albicans (38 amostras, 24 únicas e e 14 (36,84%) mistas. Destas, 8 de C. Albicans + C. Tropicalis (21,05%); 3 de C. Albicans + C. glabrata (7,89%); 3 de C. albicans + C. tropicalis + C. glabrata (7,89%). Outras espécies presentes foram, 15 C. tropicalis (33,33%). Duas únicas (13,33%), duas mistas, C. tropicalis + C. glabrata (13,33%) e uma C. tropicalis + C. parapsilosis (6,66%). Em CCA, das 45 amostras, 39 foram positivas (86,6%). C. albicans, foi a mais frequente, com 33 isolados (84,6%), sendo, 25 únicas (75,75%) e 8 mistas (24,25%). Assim, C. albicans + C. tropicalis (5 12,82%); C. albicans + C. glabrata (2 5,13%); C. albicans + C. tropicalis + C. glabrata (uma 2,56%). Outras espécies isoladas foram: C. tropicalis (3 7,7%), e C. glabrata, C. krusei e C. parapsilosis (uma de cada 2,56%). Foi possível concluir que o CHROMagar Candida foi mais sensível (100% x 65%) e mais específico para albicans (84,4% x 73,3%); tropicalis (33,3% x 20,0%) e glabrata (17,7 % x 8,8%). Ambos apresentaram a mesma especificidade (2,2%), para krusei e parapsilosis. / The genus Candida includes several species of medical importance and although some will acquire increasing interest, Candida albicans remains the most important and responsible for more infections. Found in the microbiota of healthy humans, is responsible for the most common oral fungal infection in very close relation with denture stomatitis (EP). This is a frequent inflammation of the oral mucosa in complete or partial dentures wearers, where may also be present other microorganisms, interacting with several factors linked to the host and the microorganisms present themselves, in the inner surface of the biofilm of the prostheses. Most cases are asymptomatic and some patients report pain, itching or burning sensation. The diagnosis is clinical, supplemented by tests such as cytological and mycological. Treatment is often empiric, with no clear certainty whether the individual is only a carrier of yeast and if other species are involved. The chromogenic media enabled advances in the diagnosis of oral candidiasis. Its use facilitates the identification of these yeasts, resulting in less time than those of already standardized methods for other species of Candida. The CHROMagar Candida (CC) is the reference, providing results in 48 hours from the material collection. The medium called Chromogenic Candida Agar (CCA) was recently launched in our market and in view of its low cost seems to be one more tool for the diagnosis of candidiasis, although there is a lack of literature available on it. The objective of this study was to compare this new medium to CHROMagar Candida for sensitivity and specificity in the isolation of species of genus Candida from the oral mucosa of patients with upper dentures with or without symptoms of EP. Sixty one patients of both genders were recruited wearing complete dentures (45.9%) or uni upper jaw (54.1%) prostheses. Among the 61 samples, 45 (73.77%) were positive for yeasts in CC, and C. albicans (38 samples, 24 unique and 14 (36.84%) mixed. From these, 8 of C. albicans + C. tropicalis (21.05%), 3 of C. albicans + C. glabrata (7.89%), 3 of C. tropicalis + C. albicans + C. glabrata (7.89%). Other species were present, being 15 C. tropicalis (33.33%). Two unique isolates (13.33%), two mixed: C. tropicalis + C. glabrata (13.33%) and C. tropicalis + C. parapsilosis (6.66%). In CCA, from the 45 samples, 39 were positive (86.6%). C. albicans was the most frequent, with 33 isolates (84.6%), being unique in 25 (75.75%) and eight in mixed cultures (24.25%). Thus, C. albicans + C. tropicalis (5 - 12.82%); C. albicans + C. glabrata (2 - 5.13%), C. tropicalis + C. albicans + C. glabrata (1- 2.56%). Other species isolated were C. tropicalis (3 7.7%) and C. glabrata, C. krusei and C. parapsilosis (one of each - 2.56%). It was possible to conclude that CHROMagar Candida was more sensitive (100% vs. 65%) and more specific for C. albicans (84.4% vs. 73.3%), C. tropicalis (33.3% vs. 20.0%) and C. glabrata (17.7% vs. 8.8%). Both media showed the same specificity (2.2%), for C. krusei and C. parapsilosis.

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Thus, this study aims to identify the species of the C. parapsilosis complex, obtained from mycology collection of the Mycology Laboratory of the Institute of Tropical Pathology and Public Health, Federal University of Goiás, using molecular methods, as well as the characterization of factors virulence and in vitro susceptibility to different antifungal agents. For the distinction between the species, was performed a polymerase chain reaction followed by digestion with restriction enzyme BanI. After the identification of 87 isolates from blood (54) and nails (33), the determination of virulence factors such as proteases, esterase, phospholipase, hemolysins, adhesion, biofilm formation and switching phenomenon were performed. The profile of in vitro susceptibility to amphotericin B, fluconazole, itraconazole, voriconazole, posaconazole and caspofungin were performed using the Etest® method. The results showed that C. parapsilosis sensu stricto is the most common in our region (78), followed by C.orthopsilosis (5) C. metapsilosis (4). There was no difference between the behavior of virulence by the three species, but noted that there is divergence in the susceptibility to antifungal agents. Isolates of C. parapsilosis sensu stricto were less susceptible to amphotericin B, itraconazole and caspofungin compared with the susceptibility patterns of C. orthopsilosis and C. metapsilosis. A percentage of 10.2% of the isolates of C. parapsilosis sensu stricto no were susceptible to caspofungin. This paper reports the first identification of species of the C. parapsilosis complex in the state of Goiás, Brazil, and shows the importance of determining antifungal susceptibility to appropriate therapy. / As espécies do gênero Candida estão relacionadas com manifestações clínicas que podem caracterizar desde infecções superficiais até um acometimento sistêmico. Espécies não-albicans, são consideradas emergentes, sendo que Candida parapsilosis é o principal agente etiológico em várias casuísticas. A amplificação do gene Secondary Alcohol Dehydrogenase (SADH) e a análise dos fragmentos de restrição pela enzima de digestão BanI, permite a diferenciação de C. parapsilosis em um complexo de espécies formado pela C. parapsilosis sensu stricto, C. orthopsilosis e C. metapsilosis, que podem apresentar comportamentos diferentes de virulência e resposta aos antifúngicos. Deste modo, este trabalho se propõe a identificar as espécies pertencentes ao complexo C. parapsilosis, obtidas da micoteca do Laboratório de Micologia do Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública da Universidade Federal de Goiás, usando métodos moleculares, bem como a caracterização dos fatores de virulência, e perfil de suscetibilidade in vitro a diferentes agentes antifúngicos. Para a distinção entre as espécies foi realizado a reação em cadeia da polimerase (PCR) seguido de digestão pela enzima de restrição BanI. Após a identificação de 87 isolados obtidos de sangue (54) e de unhas (33), foi realizada a determinação dos fatores de virulência como proteinases, esterase, fosfolipase, hemolisinas, aderência, formação de biofilme e fenômeno switching. O perfil de suscetibilidade a anfotericina B, fluconazol, itraconazol, voriconazol, posaconazol e caspofungina foi realizado usando-se o método de Etest®. Os resultados mostraram que C. parapsilosis sensu stricto é a mais frequente na nossa região (78), seguido de C. orthopsilosis (5) e C. metapsilosis (4). Não se verificou diferença entre o comportamento de virulência pelas três espécies, mas foi observado que há divergência na suscetibilidade aos agentes antifúngicos. Isolados de C. parapsilosis sensu stricto foram menos suscetíveis a anfotericina B, itraconazol e caspofungina quando comparados com os padrões de suscetibilidade de C. orthopsilosis e C. metapsilosis. Um percentual de 10,2% dos isolados de C. parapsilosis sensu stricto apresentaram-se não suscetíveis a caspofungina. Este trabalho relata pela primeira vez a identificação de espécies do complexo C. parapsilosis no estado de Goiás, Brasil, e mostra a importância de determinação de suscetibilidade antifúngica para uma terapia adequada.

Este trabalho teve como objetivo estudar a permeabilização celular de Candida guilliermondii FTI 20037 empregando processos químicos (agentes tensoativos) e físicos (congelamento-descongelamento) e verificar o potencial uso das células permeabilizadas na redução de xilose em xilitol. Os ensaios de permeabilização empregaram suspensão celular de 2 g/L, temperatura de 30ºC e pH 7. Para os processos químicos foram avaliados CTAB (Brometo de cetiltrimetilamônio) e Triton X-100 e os ensaios foram realizados empregando metodologia do planejamento experimental. O monitoramento da permeabilidade celular foi realizado através da dosagem in situ e no sobrenadante da enzima glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD), selecionada como marcador do tratamento. As enzimas xilose redutase (XR) e xilitol desidrogenase (XD) também foram dosadas. A permeabilização de C. guilliermondii com CTAB permitiu a dosagem in situ de G6PD e XD, mas não de XR. As três enzimas avaliadas não foram detectadas no sobrenadante. As condições que promoveram máxima permeabilidade celular (0,41 mM de CTAB, 200 rpm de agitação e 50 min de tempo de contato) resultaram em níveis in situ de G6PD de 283,4 ± 60,7 U/L e 122,4 ± 15,7 U/gcélulas. Nestas condições de tratamento, o CTAB influenciou negativamente a atividade catalítica de G6PD, XR e XD presentes no homogenato das células rompidas (não tratadas). O estudo de permeabilização celular com Triton X-100 mostrou que o tensoativo foi pouco efetivo, permitindo a dosagem in situ apenas da G6PD. As condições que promoveram máxima permeabilidade celular, ou seja, 2,78 mM de Triton X-100, 200 rpm de agitação e 50 min de tempo de contato, resultaram em níveis in situ de G6PD de 44,7 ± 0,0 U/L e 16,9 ± 0,0 U/gcélulas. Nestas condições, Triton X-100 não afetou a atividade catalítica de G6PD, XR e XD presentes no homogenato das células rompidas (não tratadas). O processo físico de permeabilização consistiu no congelamento da suspensão celular (-18ºC) por período de 48h, seguido do descongelamento em banho-maria (30ºC). Este tratamento permitiu a dosagem in situ das enzimas G6PD (108,7 ± 3,8 U/L e 54,3 ± 1,9 U/ gcélulas) e XR (26,4 ± 0,1U/L e 13,2 ± 0,1 U/gcélulas), mas não da XD. O tratamento não foi suficiente para liberar G6PD, no entanto, cerca de 60% da atividade total de XR foi detectada no sobrenadante (47,1 ± 0,4 U/L e 23,6 ± 0,2 U/gcélulas). Os ensaios de biotransformação mostraram que, nas condições avaliadas, a conversão de xilose em xilitol foi dependente do tipo de tratamento de permeabilização do biocatalisador. Os ensaios de cultivo mostraram que o tratamento das células com Triton X-100 não foi suficiente para causar perda de viabilidade e atividade metabólica de C. guilliermondii, enquanto o congelamento-descongelamento promoveu perda parcial da viabilidade celular. O tratamento das células com CTAB foi mais agressivo, causando a perda total de viabilidade celular. Foi também verificado que resting cells (células em estado de repouso) de C. guilliermondii sem tratamento e permeabilizadas com Triton X-100 foram capazes de converter xilose em xilitol com rendimento de ~60%, após 10 h de reação. Com o presente trabalho pode se concluir que os métodos estudados podem ser especialmente úteis para a determinação in situ de G6PD. Além disto, a utilização de células permeabilizadas pode ajudar a superar os problemas/custos associados com a extração e purificação das enzimas e conseqüentemente contribuírem para o desenvolvimento de uma tecnologia de baixo custo para a produção de xilitol. / This work describes the effect of the surfactants (CTAB and Triton X-100) and freezing-thawing treatment on the permeabilization of C. guilliermondii cells. The potential use of these cells (unpermeabilized and permeabilized by CTAB, Triton X-100 and freezing-thawing treatment) was also evaluated. Response surface methodology was used to investigate the effect of different parameters (detergent concentration, agitation and treatment time) on the permeabilization of C. guilliermondii cells. The experimentation was aimed to find the values of process variables to achieve maximal glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) activity in situ. The intracellular G6PD of the C. guilliermondii could not be detected in intact (unpermeabilized) whole cells. However, on treatment of C.guilliermondii with detergents (CTAB and Triton X-100) and freeze-thawing, the G6PD activity could be measured.The effectiveness of detergent permeabilization of C.guilliermondii cells was dependent on its concentration and exposure time. Maximum permeabilization, measured in terms of assayable G6PD activity in situ, was obtained when the cells were treated with CTAB. Triton X-100 and freeze-thawing were also found to permeabilize the cells, but to a lesser degree than CTAB. The optimum operating conditions for permeabilization process were 0.41 mM (CTAB) or 2.78 mM (Triton X-100) under agitation of 200 rpm at 30ºC temperature and process duration of 50 min and pH 7. At these conditions of process variables, the maximum value of enzyme activity was found to be 283.4 ± 60.7 U/L (122.4 ± 15.7 U/gcells) and 44.7 ± 0.0 U/L (16.9 ± 0.0 U/gcells) for permeabilized cells with CTAB and Triton X-100, respectively. The Triton X-100 was not enough to cause loss of viability and metabolic activity of C. guilliermondii. Freezing-thawing treatment promoted partial loss of cell viability. On the other hand the cells treated with CTAB were totally affected. The biotransformation of xylose to xylitol was studied by employing C. gulliermondii FTI 20037 in two different forms namely unpermeabilized cells and permeabilized cells. The maximum xylitol yield of about 60% was observed with unpermeabilized yeast cells and Triton X-100 permeabilized cells after 10 h of reaction time. In conclusion, surfactants and freezing-thawing treatment provides a simple and mild procedure for C.guilliermondii permeabilization. The method may be especially useful for the in situ determination of G6PD. Response surface methodology was found effective in optimizing and determining the interactions among process variables for the permeabilization process. The use of permeabilized cells can help to overcome the problems/costs associated with enzyme extraction and purification from yeast cells and in the development of a low-cost technology for xylitol production.

A utilização de soluções químicas para desinfecção de próteses totais constitui atualmente uma das opções para a manutenção da limpeza e saúde na cavidade oral de pacientes portadores de dentaduras. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de duas soluções desinfetantes (Hipoclorito de sódio 1% e Gluconato de clorexidina 4%), na hidrofobicidade superficial e adesão de Candida albicans ATTC 90028 sobre resina acrílica termopolimerizável, inicialmente e após 1, 7, 15 e 30 ciclos de desinfecção química, além de verificar o efeito da formação da película adquirida salivar sobre as duas variáveis avaliadas através de mensuração de ângulo de contato e microscopia de fluorescência. Para a mensuração da hidrofobicidade superficial 18 espécimes (10 x 25 x 2 mm) foram confeccionados em resina acrílica termopolimerizável e desinfetados, simulando a implementação de um protocolo de desinfecção diária durante 30 dias. Após completar o número de desinfecções de cada um dos períodos avaliados, mensurações de ângulo de contato foram feitas antes e depois da formação da película adquirida salivar. Para os testes de adesão de C. albicans à resina acrílica termopolimerizável, 180 espécimes (5 x 5 x 1 mm) foram confeccionados em resina acrílica termopolimerizável e desinfetados e divididos em vários períodos (Inicial-1-7-15-30 ciclos de desinfecção). Após completar o número de desinfecções de cada um dos períodos avaliados, foram feitos ensaios de adesão de C. albicans utilizando o fluorocromo laranja de acridina para posterior visualização mediante o uso de microscópio de fluorescência. Os dados de hidrofobicidade superficial foram analisados através do teste paramétrico ANOVA medidas repetidas e T-Student. Para os resultados de adesão de C. albicans foi utilizado o teste não paramétrico Kruskall Wallis e teste de Dunn. Para correlacionar as variáveis foi utilizado o teste de Pearson. Os resultados obtidos demonstraram que a imersão da resina acrílica em soluções desinfetantes diminui a adesão de C. albicans e os valores de hidrofobicidade superficial em todos os grupos após 30 desinfecções químicas. A formação da película adquirida salivar diminui a adesão de C. albicans e hidrofobicidade Resumo superficial, em todos os grupos após 30 desinfecções químicas. Não existe correlação entre os valores de adesão de C. albicans e hidrofobicidade superficial da resina acrílica termopolimerizável após desinfecção química, exceto para os grupos controle e Gluconato de clorexidina 4% prévio a formação da película adquirida salivar. / The use of chemical solutions for dentures disinfection currently constitutes one of the options for the maintenance of the cleanness and oral health of dentures users. The objective of this study was to evaluate the effect of two disinfecting solutions (Sodium Hypochlorite 1% and Gluconate chlorhexidine 4%), on the acrylic resin surface hydrophobicity and adhesion of Candida albicans ATTC 90028 on the heat-cure acrylic resin before and after 1, 7, 15 and 30 chemical disinfectant cycles. Furthermore to verify the effect of the formation of the acquired salivary pellicle on the variables, evaluated through contact angle measurements and fluorescence microscopy. For the surface hydrophobicity assay, 18 specimens (10 x 25 x 2 mm) had been confectioned in heat cure acrylic resin and disinfected, simulating the implementation of a daily dentures chemical disinfection protocol, during 30 days. After each disinfection period, contact angle measurements were made before and after the acquired salivary pellicle formation. For C. albicans adhesion assay, 180 specimens (5 x 5 x 1 mm) had been confectioned in heat cure acrylic resin, chemically disinfected and divided in: Initial, 1, 7, 15 and 30 disinfection cycles. After completed each period of chemical disinfection C. albicans adhesion analysis had been made using, fluorocrome acridine orange for posterior visualization by the use of fluorescence microscope. The data of acrylic resin surface hydrophobicity had been analyzed through parametric test ANOVA repeated measures and T-Student. For the C. albicans adherence results, Kruskall Wallis no parametric test and Dunns test were used. To correlate the variables Pearson test were used. The results had demonstrated that the immersion of the heat cure acrylic resin in disinfecting solutions diminishes the adhesion of C. albicans and the values of acrylic resin surface hydrophobicity, in all the groups, in a period of 30 cycles. The formation of the acquired salivary pellicle diminishes the adhesion of C. albicans and acrylic surface hydrophobicity in all the groups in a period of 30 cycles. Correlation does not exist Abstract between the values of C. albicans adhesion and acrylic surface hydrophobicity after chemical disinfection, except for the Control group and Gluconate chlorhexidine 4% group before the formation of the acquired salivary pellicle.

Apesar das evidências sobre o efeito de bactérias probióticas sobre Candida albicans, os mecanismos envolvidos nesta interação não estão totalmente esclarecidos. Visando contribuir com o entendimento sobre os mecanismos pelos quais bactérias probióticas interferem na colonização por C. albicans, o presente estudo testou a hipótese de que Lactobacillus probióticos interferem na resposta de macrófagos humanos induzida por C. albicans e inibem o desenvolvimento do biofilme de C. albicans. Macrófagos humanos THP-1 foram pré-tratados com Lactobacillus rhamnosus LR32, Lactobacillus casei L324m e Lactobacillus acidophilus NCFM, e desafiados com C. albicans e/ou lipopolissacarídeos (LPS) de Escherichia coli, em ensaio de co-cultura. Após incubação, foram determinados o perfil de citocinas por ELISA, a transcrição relativa do gene clec7a por RT-qPCR. Biofilmes de C. albicans ATCC SC5314 e 75 (isolado clínico) em fase de adesão inicial, colonização inicial e maturação foram tratados com suspensão de Lactobacillus probióticos. Além disso, os biofilmes de C. albicans foram tratados com meio condicionado com L. rhamnosus após diferentes períodos experimentais. O efeito dos probióticos foi avaliado por contagem de células de C. albicans viáveis e avaliação da morfologia celular por microscopia confocal e eletrônica de varredura. O pré-tratamento com bactérias probióticas promoveu alteração no perfil de citocinas produzidas por macrófagos desafiados com LPS e C. albicans, induzindo um aumento nos níveis de IL-10 e redução de IL-12 (p<0,05). Além disso, o pré-tratamento com probióticos provocou redução do nível de transcritos de clec7a, que codifica o receptor Dectina-1 (p<0,05), indicando a redução da expressão de Dectina-1 nestas células. A interação entre cepas de Lactobacillus e C. albicans promoveu significativa redução (p<0,05) no número de células de C. albicans no biofilme (25,5-61,8%), na dependência da cepa probiótica e da fase do biofilme de C. albicans. Todos os Lactobacillus testados impactaram negativamente na diferenciação levedura-hifa de C. albicans e na formação do biofilme. Análises microscópicas revelaram que as suspensões de L. rhamnosus reduziram a diferenciação de Candida em hifas, levando a uma predominância de crescimento em levedura. O meio condicionado com L. rhamnosus não exerceu efeito significante sobre biofilme maduro (p>0,05), mas promoveu redução significativa do número de UFC de C. albicans quando utilizado nos estágios iniciais da formação do biofilme (p<0,01). Os resultados sugerem que Lactobacillus probióticos são capazes de interferir na expressão de receptores de macrófagos para o reconhecimento de C. albicans e reduzir a resposta de citocinas pró-inflamatórias. Além disso, os resultados indicam que Lactobacillus probióticos são capazes de inibir a diferenciação de C. albicans de leveduras para hifas, e o desenvolvimento de biofilme de C. albicans, particularmente na fase de colonização inicial da levedura, por interações célula-célula e secreção de exometabólitos. O conjunto de dados deste estudo contribui para elucidar os mecanismos pelos quais Lactobacillus atuam como probióticos, dando suporte para o seu uso como terapia suplementar contra infecções de mucosas por C. albicans. / The infection rates of Candida albicans in human may be reduced by probiotics. However, the mechanisms involved in the interaction between C. albicans and probiotic bacteria are largely unknown. The present study comprised two parts. The first aimed to test the hypothesis that probiotics may impair the signaling induced by C. albicans in human macrophages, thus lowering the inflammatory challenge. The second aimed to evaluate the inhibitory effects of Lactobacillus on different phases of C. albicans biofilm development. In the first part, macrophages were pretreated with a probiotic strain (Lactobacillus rhamnosus LR32, Lactobacillus casei L324m and Lactobacillus acidophilus NCFM) and challenged with C. albicans and/or lipopolysaccharide (LPS) of Escherichia coli in a co-culture assay. After incubation, cytokine profile of macrophage\'s supernatant was assessed by ELISA and the expression of clec7a gene was determined by RT-qPCR. Probiotic strains altered the cytokine profile of macrophages stimulated with LPS and C. albicans, leading to increased levels of IL-10 and reduced levels of IL-12 (p<0.05), and reducing the relative expression of clec7a gene encoding Dectin-1 receptor (p < 0.05). In the second part, quantification of biofilm growth and microscopic analyses were performed on C. albicans biofilms treated with Lactobacillus cell suspensions and their supernatants. Lactobacilli induced a significant reduction (p<0,05) in the number of biofilm cells (25.5-61.8%) dependent on the probiotic strain and the biofilm phase. L. rhamnosus supernatants had no significant effect on the mature biofilm (p>0.05), but significantly reduced the early stages of Candida biofilm formation (p<0.01). Microscopic analyses revealed that L. rhamnosus suspensions reduced Candida hyphal differentiation, leading to a predominance of budding growth. All lactobacilli negatively impacted C. albicans yeast-to-hyphae differentiation and biofilm formation. The inhibitory effects of Lactobacillus on C. albicans involved both cell-cell interactions and secretion of exometabolites. To conclude, the probiotic lactobacilli reduce inflammation by impairing the recognition of C. albicans by macrophages and altering the production of proinflammatory cytokines. It was also clarified, for the first time, the mechanics of how the Lactobacillus species antagonize C. albicans colonization, particularly in the critical, early colonization phase of the yeast. Taken all together, our data elucidated the inhibitory mechanisms of lactobacilli that define their probiotic candicidal activity, supporting the use of these probiotics as a supplemental therapy against mucosal infections by C. albicans.

Probióticos são microrganismos vivos que conferem benefícios à saúde dos indivíduos, quando administrados em quantidades adequadas. Além de promoverem uma melhora no sistema gastrointestinal, os probióticos são conhecidos por sua capacidade de inibirem o crescimento de microrganismos patogênicos. O presente trabalho objetivou avaliar a influência dos probióticos na redução da prevalência de Candida oral de indivíduos usuários de próteses totais. Para realização deste estudo foi elaborado o bioproduto contendo probióticos, Lactobacillus rhamnosus e Lactobacillus acidophilus. O protocolo do estudo foi duplo-cego randomizado, sendo que os sujeitos da pesquisa foram divididos aleatoriamente em dois grupos: experimental (probióticos) e controle (placebo). Os participantes utilizaram o produto durante cinco semanas e o resultado foi avaliado segundo a contagem de leveduras isoladas em unidades formadoras de colônias (UFC/mL), antes e após a intervenção. Paralelamente, a esta fase clínica da pesquisa, foram testadas in vitro a ação de outras cepas de Lactobacillus com a finalidade de verificar a associação entre a cepa de Lactobacillus com a redução das espécies de Candida isoladas do palato e das próteses, bem como, com a sensibilidade aos antifúngicos, miconazol e nistatina. Também foi pesquisado um dos principais mecanismos de ação contra patógenos, por Lactobacillus spp, a produção de bacteriocinas. Os resultados inferem que as cepas de probióticos testadas: foram eficazes na redução da prevalência de Candida oral de usuários de próteses totais; in vitro, inibiram o crescimento de Candida sp, sendo L. rhamnosus Lr-32 a cepa com melhor resultado e não produzem bacteriocinas quando em contato com a levedura. / Probiotics are live microorganisms that confer benefits to the health of an individual when administered in adequate amounts. In addition to promoting an improvement in a gastrointestinal system, the probiotics are known for their ability to inhibit the growth of pathogenic microorganisms. The present study sought to evaluate the capacity of probiotics strains in reducing the prevalence of oral Candida in denture wearers. For this study, the by-product was elaborated containing probiotics, such as Lactobacillus rhamnosus and Lactobacillus acidophilus. The study protocol was randomized, double-blind, being that the subjects of the research were randomly sorted into two groups: experimental (probiotics) and control (placebo). The participants utilized the product daily for five weeks and the result was evaluated according to the amount of yeasts isolated in colony-forming units (CFU), before and after the intervention. In parallel to this clinical phase, the action of other Lactobacillus strains were tested in vitro, with the purpose of verifying the relation between the strain of Lactobacillus and the reduction of Candida species isolated from the palate and the prostheses, as well as, with the sensitivity to antifungal agents, miconazole and nystatin. The production of bacteriocins is one of the main mechanisms of action by Lactobacillus spp. against pathogens, and was analised. The results imply that the strains of tested probiotics: in vivo, were effective in reducing the prevalence of oral Candida for denture wearers; in vitro, inhibited the growth of Candida sp, being that L. rhamnosus Lr-32 was the best resulting strain, and the strains did not produce bacteriocins when in contact with yeast.

A estomatite sob prótese é uma inflamação causada pela Candida spp associada ao uso de próteses totais e que também pode ser encontrada em pacientes usuários de outros tipos de próteses. Uma das principais preocupações é promover uma condição de saúde adequada a esses usuários. Assim, tem-se pesquisado muitos métodos de higienização das próteses totais e tratamentos para eliminação da Candida. Nos pacientes com sistema imunológico debilitado, desnutridos, idosos e recém-nascidos, a ocorrência de candidíase é alta, em suas variadas formas clínicas. Para o tratamento convencional da doença utiliza-se a nistatina ou miconazol. A terapia fotodinâmica (PDT, do inglês Photodynamic Therapy) é uma técnica que pode potencialmente atingir células prejudiciais sem afetar os tecidos normais do hospedeiro. A efetividade da terapia combina dois princípios: o acúmulo preferencial de fotossensibilizador nas células alvo e a irradiação precisa da luz, o que possibilita a ação seletiva e localizada da terapia fotodinâmica. A terapia apresenta como vantagens ser um método não invasivo; que não apresenta evidência de promover resistência bacteriana; de baixo custo quando comparado ao laser de alta potência; sem efeitos colaterais, além de agir seletivamente na área de aplicação. O presente estudo teve por objetivo avaliar a ação da PDT no tratamento da estomatite sob prótese em usuários de próteses totais. Após triagem, 22 pacientes foram selecionados (seguindo os critérios de inclusão e exclusão) e divididos em dois grupos: controle (05 mL de nistatina, 06 vezes ao dia, durante 14 dias) e experimental, submetidos à PDT, cujo protocolo foi: irradiação, por meio da técnica pontual em contato, de 120J/cm² de densidade de energia, 40mW de potência, 2min por ponto. A PDT2 foi realizada 07 dias após a PDT1. Para ambos os grupos foi realizada uma coleta 30 dias após a terapia proposta. Todo material coletado passou por diluições seriadas, semeado em meios de cultura e incubados para posterior contagem do número de unidades formadoras de colônias (UFC). Nos grupos em que houve isolamento da levedura, todos os tratamentos com a PDT reduziram significativamente (p<0.05) a carga da levedura na mucosa dos pacientes em todos os tempos de tratamento, comparado a fase pré tratamento. Houve uma redução significante (p<0.05) no grupo tratado, por 7 dias, quando comparado ao grupo tratado, após os 30 dias. Nos pacientes em que houve isolamento da levedura a redução no isolamento foi significativamente maior (p<0.05) em todos os tempos de tratamentos quando comparado ao grupo de pacientes na fase pré tratamento, não houve diferença significante (p<0.05) no isolamento da levedura em nenhum tempo do tratamento, (Figura 16). A redução no isolamento de Candida foi significativamente maior (p<0.05) no grupo tratado com a terapia fotodinâmica (PDT) por 7 e 14 dias quando comparado ao grupo tratado com nistatina pelo mesmo período. Com isso foi possível concluir que, dentro das condições clínicas desde trabalho, o tratamento com terapia fotodinâmica foi uma alternativa eficaz no tratamento da estomatite sob prótese / Denture stomatitis is pathological condition in complete or partial denture wearers caused by Candida spp. In the present, the major concern is to promote a proper health condition. Thus, many hygiene methods and treatments for elimination of Candida have been studied. The incidence of candidiasis is high in patients with low immune system, elderly and infants. For the conventional treatment, nystatin or miconazole are used. Photodynamic Therapy is a technique that can potentially reach harmful cells without damaging effects to normal tissue. The effectiveness of the therapy combines two principles: the preferential accumulation of the sensitizer in the target cells and light irradiation, which enables the selective and localized photodynamic therapy. PDT has the advantage of be a noninvasive treatment, shows no evidence promoting bacterial resistance, has low cost when compared to hight power lasers, has no side effects and act selectively in the area of application. The aim of this study was to evaluate the PDT effectiveness on denture stomatitis treatment in complete denture wearers. 22 patients were selected (by inclusion and exclusion criteria) and located in two groups: control (05 mL of nystatin, 06 times a day, 2 weeks) and experimental group, treated by PDT which protocol was: irradiation by laser with wavelength of 660nm, output power of 40mW, energy density of 120 J/cm², 02 minutes per point. The PDT2 was performed 07 days after PDT1. For both groups samples were collected 30 days after the proposed therapy. Sample were collected from the palatal mucosa and underwent serial dilution, were spread into culture media and incubated for subsequent colony forming units counting (CFU). All treatments with PDT significantly reduced (p <0.05) the number of yeast counting in patients mucosa at all treatment times compared to before treatment (initial). There were significant decrease (p <0.05) in the group after one week of treatment when compared to the group 30 day after treatment. The reduction in the isolation of Candida was significantly higher (p <0.05) in the group treated by the photodynamic therapy (PDT) on day 7 and 14 when compared with group treated by nystatin for the same period. Thus, we conclude that under the conditions provided by this clinical study, photodynamic therapy can be an effective alternative treatment of denture stomatitis in complete denture wearers.