Os tecidos pulpar e periodontal são frequentemente agredidos por fatores ambientais como calor, trauma mecânico e micro-organismos, sendo estes considerados o fator etiológico principal das periodontopatias e periapicopatias. Dentre as células residentes desses tecidos, especial atenção tem sido dada ao papel dos fibroblastos no desenvolvimento da resposta imune. Fibroblastos são células que respondem à estímulos microbianos e existem evidências do papel de receptores do tipo Toll (TLR) no reconhecimento desses estímulos. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo principal avaliar o reconhecimento de Candida albicans por fibroblastos gengivais e pulpares. Para tal, fibroblastos isolados a partir de tecido gengival e pulpar de camundongos do grupo controle e deficientes de TLR2, CD14 e MyD88 foram avaliados quanto à expressão de TLRs e moléculas de superfície, resposta proliferativa e produção de citocinas (TGF-β, IL-1β, TNF-α, IL-13 e IL-6), após a estimulação com agonistas de TLR2, TLR4 e C. albicans. Fibroblastos gengivais e pulpares, apesar de provenientes de tecidos diferentes, apresentaram características morfológicas semelhantes. Contudo, a cinética de crescimento dos fibroblastos gengivais deficientes de MyD88 foi mais lenta, e fibroblastos pulpares demoraram mais tempo para surgir a partir dos fragmentos de tecido. A ausência de TLR2 e da molécula adaptadora MyD88 não afetaram a produção de colágeno Tipo I pelos fibroblastos gengivais. Entretanto, fibroblastos deficientes de CD14 apresentaram baixa produção de colágeno. Ademais, os fibroblastos gengivais expressaram TLR2, TLR3, TLR4, assim como as moléculas de adesão ICAM-1 e CD44. A ausência de TLR2 e CD14 interferiu na resposta proliferativa de fibroblastos gengivais e pulpares, respectivamente. O reconhecimento de C. albicans por fibroblastos gengivais e pulpares modulou a produção das citocinas. A produção de TNF-α foi dependente da sinalização via MyD88, CD14 e TLR2, enquanto que a produção de IL-1β e IL-13 foi dependente de TLR2. / Pulpal and periapical tissue are frequently injured by heat, mechanical trauma and microorganisms, which are considered the main etiological factor of periodontal and endodontic diseases. Among these tissue resident cells, special attention has been given to fibroblasts in the immune response. Fibroblasts are cells that recognize pathogens through Toll like receptors (TLR). The aim of this study was to evaluate the recognition of Candida albicans by pulpal and gingival fibroblasts from TLR2, CD14, MyD88 knockout mice and control group mice. The results were analyzed concerning the expression of TLR(s) and surface molecules, proliferative response and citokynes production (TGF-β, IL-1β, TNF-α, IL-13 e IL-6) after the cells stimulation with TLR2, TLR4 and C.albicans agonists. Gingival and Pulpal fibroblasts, even isolated from different tissue, showed morphological similarities; however, gingival fibroblast deficient of MyD88 show lower proliferative response and pulpa l fibroblasts needed more time to detach from tissue fragments. The production of Type I collagen was affected in gingival cells deficient of CD14. Gingival fibroblasts expressed TLR2, TLR3, TLR4, and the adhesion molecules (ICAM-1 and CD44). The absence of TLR2 and CD14 interfered with the proliferative response of pulpal and gingival fibroblasts, respectively. The recognition of C. albicans by gingival and pulpal fibroblasts modulated the citokynes production. TNF-α production after the recognition of C. albicans was dependent from MyD88, CD14 and TLR2 molecules, whereas the production of IL-1β and IL-13 was dependent of TLR2.

A incidência de infecções por fungos oportunistas na população de pacientes imunocomprometidos tem aumentado nos últimos anos, e estas são, principalmente, causadas por Candida albicans. Este patógeno oportunista pode crescer em diferentes formas, variando de levedura, pseudohifa e hifa e essa transição morfológica está associada com a virulência. Na transição de levedura para hifa, genes hifa-específicos são expressos e muitos deles codificam proteínas que possuem uma molécula de GPI (glicosilfosfatilinositol), mas a maioria (66%) das proteínas preditas ancoradas por GPI (PGAs), ainda possuem função desconhecida. Portanto, o objetivo deste trabalho, foi iniciar a caracterização funcional dos genes PGA13 e PGA58 através de análises in silico, da expressão diferencial dos RNAm sob condições ambientais diversas, e nos mutantes nulos TUP1 e EFG1, e a obtenção e caracterização fenotípica dos mutantes de PGA13: homozigoto nulo e de superexpressão. Os estudos realizados in silico indicam que PGA13 e PGA58 são reguladas pelos fatores transcricionais Efg1, Tec1 e Nrg1 e que possuem sítios potenciais de glicosilação. A análise transcricional desses genes mostra que ambos são regulados por Tup1 e que respondem aos estímulos NaCl (Cloreto de sódio), H2O2 (Peróxido de hidrogênio), etanol, cafeína, HCl (Ácido Clorídrico) e às condições hipo e hiperosmótica. Os mutantes nulos e de superexpressão de PGA13 e PGA58 foram obtidos e as linhagens que perderam o gene PGA13 tiveram um padrão de crescimento da colônia diferente da linhagem CAI-4 e foram mais sensíveis aos compostos SDS, Higromicina B e pH ácido, enquanto o mutante que superexpressava foi mais resistente. Estes resultados sugerem que Pga13 deve ter papel importante na parede celular, visto que a falta dela ocasionou maior sensibilidade a compostos que agridem a parede celular. / The incidence of opportunistic fungal infections in immunocompromised patients has increased in the last years. Candida albicans is the most commonly isolate in immunocompromised patients. C. albicans may grow in distinct morphologies: yeast, pseudohyphal and true hyphal. The switch between yeast and filamentous forms is strongly associated with virulence. During the transition, hyphal-specific genes are expressed and many of these genes encode glycophosphatidylinositol (GPI)- anchored proteins. The majority (66%) of predited GPI proteins has unknown functions. The purpose of this work was to functionally characterize the novel PGA13 and PGA58 genes. To accomplish this task, we have made in silico promoter analysis, mRNA differential expression analysis under some environmental conditions. We have also verified whether those genes are regulated by Tup1 and Efg1 transcriptional regulators. We have knocked out PGA13 and have done phenotypic analysis of the resulting PGA13 null mutant strain and a Pga13 overexpressing strain. The in silico promoter analysis indicates that PGA13 and PGA58 may be regulated by the transcriptional factors Efg1, Tec1 and Nrg1. PGA13 and PGA58 aminoacid sequence analysis revealed that they have potential glycosylation sites. The transcriptional analysis has shown that both genes are regulated by the morphogenesis negative regulator Tup1. PGA13 and PGA58 genes have differential expression in response to salt, hydrogen peroxide, ethanol, caffein, and acid stresses, and also to hypo and hyperosmotic shocks. The phenotypic analysis shows that the pga13/pga13 mutant was more sensitive to SDS, Hygromycin B and acid pH in a plate dilution sensitivity test. Interestingly, the overexpressing mutant strain was more resistant to the same compounds. Taken together these results suggest that PGA13 may have an important role in the cell wall since its absence leads to higher sensitivity to compounds that affect this organelle.

Os neutrófilos são as primeiras células a migrar para sítios de infecção e desempenham importante papel na defesa contra vários patógenos, especialmente Candida albicans. A função dos neutrófilos envolve fagocitose e destruição de leveduras e formas filamentosas do fungo, além de produção de citocinas e quimiocinas, capazes de ativar outras células envolvidas na eliminação de C. albicans. Recentemente, tem sido mostrado que estas células apresentam prejuízos com o avanço da idade e estes fenômenos fazem parte de uma área da Imunologia conhecida como Imunossenescência. A estomatite protética é a lesão oral mais verificada em idosos e a sua persistência é diretamente relacionada com a presença de espécies de Candida, principalmente C. albicans, nas lesões e na superfície interna de próteses, especialmente totais superiores (PTS). Com o objetivo de avaliar possíveis alterações em neutrófilos que poderiam predispor usuários de prótese total superior à estomatite protética, foram analisados neutrófilos de sangue e de saliva de idosos e jovens com estomatite protética associada à Candida (EPC), bem como de indivíduos controles. No primeiro capítulo foi avaliada a positividade de Candida e as diferentes espécies deste patógeno em lesões de estomatite protética e superfície interna de PTS. C. albicans foi a espécie mais detectada em lesões de EP e na PTS. No segundo capítulo, os neutrófilos do sangue dos indivíduos da pesquisa foram caracterizados quanto ao fenótipo ex vivo, função fagocítica e produção de citocinas e quimiocinas após desafio com C. albicans. Neutrófilos do sangue de indivíduos com EPC, bem como de idosos sem EPC, apresentaram características relacionadas com suscetibilidade às doenças causadas por C. albicans. No terceiro capítulo, os neutrófilos salivares dos indivíduos foram caracterizados quanto ao fenótipo ex vivo e função fagocítica após desafio com C. albicans. Além disso, níveis de citocinas e quimiocinas relacionadas com resposta imune de proteção ou suscetibilidade à infecções por C. albicans foram detectadas nas amostras de saliva. Os resultados indicaram diferenças nos neutrófilos salivares e componentes solúveis da saliva de pacientes com EPC. Também, alterações observadas nos neutrófilos resultantes da imunossenescência podem tornar os idosos mais suscetíveis a infecções por Candida e doenças associadas com a presença deste fungo. / Neutrophils are the first line of immune cells to migrate into infection sites, playing an important role against pathogens, especially Candida albicans. These cells phagocytose and destroy yeasts or filamentous forms of this fungus, beyond secrete cytokines and chemokines that activate other immune cells to eliminate C. albicans. Nowadays, it has been shown that the ageing damages neutrophil function and such events are described as part of Imunosenescence. Denture stomatitis is the most oral lesion present in elderly, and its persistence is related to Candida species, especially C. albicans, in the lesions and prosthesis fitting surface, particularly maxillary prosthesis (MP). In order to evaluate possible neutrophil alterations predisposing denture wearers to Candida- related denture stomatitis (DS), blood and salivary neutrophils from elderly and younger individuals with DS, as well control ones, were analyzed. Thus, the first chapter addresses the presence of Candida species on the denture stomatitis lesions and MP fitting surface. C. albicans was the most species detected in DS lesions and MP. On the second chapter, blood neutrophils from the individuals were characterized about ex vivo phenotype, phagocytic function, and cytokines and chemokines production after challenged with C. albicans. Blood neutrophils from DS individuals, as well elderly without DS, presented characteristics of susceptibility to C. albicans diseases. On the third chapter, salivary neutrophils from the individuals were characterized about ex vivo phenotype and phagocytic function against C. albicans. In addition, salivary cytokines and chemokines involved with resistance or susceptibility to C. albicans infection were detected. Results indicated differences in salivary neutrophils and soluble components from patients with DS. In addition, alterations observed in neutrophils by immunosenescence could facilitate Candida infections and diseases related to the presence of this pathogen in elderly.

O amplo espectro da candidíase e respectiva importância clínica da infecção impulsionam as pesquisas que visam esclarecer os mecanismos de patogenicidade e identificação dos fatores de virulência de Candida sp. Portanto, o objetivo deste estudo foi verificar através de testes fenotípicos e moleculares a capacidade de adesão, atividade de proteases e variabilidade genética de isolados clínicos de C. albicans e C. tropicalis. A capacidade de adesão às glicoproteínas de matriz extracelular laminina e fibronectina foi avaliada utilizando-se a técnica de ELISA (Enzyme-linked imunosorbent assay). A pesquisa de proteases foi realizada pelos métodos semiquantitativo, em placa de ágar com albumina bovina, e quantitativo, em solução-tampão com hemoglobina. A presença dos genes ALS2, ALS3, SAP1, SAP3 e PLB1 foi verificada pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e os polimorfismos intra e interespécies pela técnica do DNA Polimórfico Amplificado ao Acaso (RAPD). Todos os isolados de C. albicans e C. tropicalis apresentaram ligação a laminina e a fibronectina imobilizadas. Os isolados Ca33 e Ct13 apresentaram índice de adesão relativa significativamente maiores em relação aos demais isolados para as duas glicoproteínas (p < 0,001). A atividade de proteases foi observada em todos os isolados de C. albicans tanto pelo método semiquantitativo quanto pelo método quantitativo. A atividade de proteases dos isolados de C. tropicalis foi melhor evidenciada através do método quantitativo. A amplificação de fragmentos dos genes relacionados à adesão (ALS2 e ALS3), atividade de proteases (SAP1 e SAP3) e fosfolipase (PLB1) foi observada em todos os isolados de C. albicans. Os isolados de C. tropicalis não apresentaram produtos de amplificação para os genes pesquisados. A variabilidade genética avaliada pela técnica do RAPD revelou uma população heterogênea em ambas as espécies. No entanto, C. tropicalis apresentou maior diversidade genética que C. albicans. / The wide spectrum of candidiasis and its clinical importance encourage the research with the purpose of clarifying the mecanisms of pathogenicity and identification of virulence factors of Candida sp. Therefore, the aim of this study was to verify through phenotypic and molecular assays the adhesion, enzymatic activity e genetic variability of clinical C. albicans and C. tropicalis isolates. The adhesion ability to the extracellular matrix glycoproteins laminin and fibronectin was evaluated using the ELISA technique (Enzyme-linked imunosorbent assay). The research of proteases was carried out in agar plate containing bovine albumin and through a quantitative method in buffer solution containing hemoglobin. The presence of ALS2, ALS3, SAP1, SAP3 and PLB1 was verified using polimerase chain reaction (PCR) and intra and interespecies polimorphisms through Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) technique. All C. albicans and C. tropicalis isolates binded to immobilized laminin and fibronectin. Ca33 and Ct13 isolates had relative adhesion index significantly higher than the other isolates for both glycoproteins (p < 0,001). Protease activity was observed in all isolates of C. albicans using either the semi-quantitative or quantitative assay. The protease activity of C. tropicalis was better detected through the quantitative assay. The amplification of genes related to adhesion (ALS2 and ALS3), proteases (SAP1 and SAP3) and phospholipase (PLB1) activity using PCR was observed in all C. albicans strains. PCR amplification products were not observed in C. tropicalis isolates for the researched genes. The genetic variability by RAPD revealed an heterogeneous population in both species. Nevertheless, C. tropicalis presented higher genetic variability than C. albicans strains.

Espécies de Candida com relevância clínica diferem entre si com relação a aspectos como prevalência clínica, virulência e perfil de resistência a antifúngicos. Formulamos a hipótese de que estas diferenças podem ocorrer devidas em parte à capacidade relativa distinta destas espécies de resistirem ao estresse oxidativo que é imposto por fagócitos durante a patogênese da candidíase. Nesse contexto, poucos são os estudos de resposta ao estresse oxidativo (REO) em espécies que não Candida albicans. Assim, esse trabalho teve por objetivo investigar a REO in vitro em isolados de referência e clínicos de 8 espécies de Candida – C. albicans, C. dubliniensis, C. famata, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. parapsilosis e C. tropicalis. Para tal, foi avaliado o grau de resistência a oxidantes, a capacidade de adaptação, a indução de enzimas antioxidantes, os níveis de glutationa total, a capacidade antioxidante total e a indução de dano oxidativo a proteínas e lipídios através de metodologias atuais. C. albicans, C. glabrata e C. krusei apresentaram maior resistência ao estresse oxidativo nas condições testadas, C. parapsilosis e C. tropicalis resistência média e C. dubliniensis, C. famata e C. guilliermondii foram mais sensíveis. Todas as espécies demonstraram capacidade adaptativa e indução de enzimas antioxidantes. Os níveis de glutationa total mostraram redução intracelular frente ao estresse oxidativo. A capacidade antioxidante total foi variável entre espécies. Outros testes (efeito de meio condicionado e de moléculas quorum-sensing – tirosol e farnesol - no crescimento, capacidade de proteção cruzada e oxidante total) foram empregados sem sucesso. Ainda, verificamos em isolados de C. albicans a relação entre capacidade de resistirem a oxidantes e produção de fosfolipase e protease. Os resultados indicaram ausência de correlação entre estes fatores. Espécies com sistema antioxidante mais frágil são também as que ocorrem com menor frequência em infecções sistêmicas ou resistem menos ao efeito dos antifúngicos. É interessante investigar se C. albicans, C. glabrata e C. krusei tiram vantagem efetiva de um sistema antioxidante mais potente para causarem candidíase disseminada ou resistirem a drogas. A caracterização detalhada da REO pode proporcionar a descoberta de novos alvos para a ação de antifúngicos no futuro. / Candida species with clinical relevance differ in therms of clinical prevalence, virulence and profile of resistance to antifungal agents. We hypothesized that these differences may be due in part to the relative ability of these species to resist oxidative stress that is imposed by phagocytes in the pathogenesis of candidiasis. In this context, there are few studies of the oxidative stress response (OSR) in different species than C. albicans. Thus, this study aimed to investigate the in vitro OSR considering isolates of eight Candida species – C. albicans, C. dubliniensis, C. famata, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. parapsilosis and C. tropicalis. To this purpose, we evaluated the resistance degree to oxidants, the adaptability, the induction of antioxidant enzymes, levels of total glutathione, total antioxidant status and induction of oxidative damage to proteins and lipids by current methodologies. C. albicans, C. glabrata and C. krusei showed greater resistance to oxidative stress in the conditions tested; C. parapsilosis and C. tropicalis showed an intermediate resistance and C. dubliniensis, C. famata and C. guilliermondii were more sensitive to oxidative stress. All species showed adaptive capacity and induction of antioxidant enzymes. The levels of total glutathione showed intracellular reduction against oxidative stress. The total antioxidant capacity was variable between species. Other tests (effect of conditioned medium and quorum-sensing molecules - farnesol and tirosol – on growth, ability of cross-protection and total oxidant status) were tested without success. Still, we found in isolates of C. albicans the relationship between ability to resist oxidation and production of phospholipase and protease. The results indicated no correlation between these factors. Species with weaker antioxidant system are also those that occur less frequently in systemic infections or are less resistant to the effect of antifungal agents. It is interesting to investigate if C. albicans, C. glabrata and C. krusei take effective advantage of a more powerful antioxidant system to cause disseminated candidiasis or resist drugs. The detailed characterization of the OSR can provide the discovery of new targets for the action of antifungals in the future.

A própolis é um material resinoso coletado pelas abelhas de diversas partes das plantas como brotos, folhas jovens e exsudatos. É utilizado para embalsamar animais que tenham morrido dentro da colmeia, vedar as paredes e conferir proteção frente a doenças. O emprego desse produto natural com finalidade medicinal remonta a antiguidade, tendo iniciado junto com antigas civilizações como a Egípcia, Grega e Romana e perduram até os dias atuais com ampla utilização em múltiplas finalidades terapêuticas médicas e veterinárias. O objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial antifúngico, a capacidade de remover e inibir biofilmes de espécies de Candida não-albicans de diferentes tipos de própolis e analisar a composição química da própolis obtida do Rio Grande do Sul (RS). Foram realizadas macerações e extrações sequenciais com solventes em ordem crescente de polaridade a fim de purificar os extratos. Em seguida foi feita a determinação da atividade antifúngica pelo método da microdiluição em caldo e o ensaio de remoção e inibição de biofilmes através de teste em corpo de prova (utilizando cateter como material teste). Após, foi realizada a análise química da fração diclorometano de própolis obtida do RS. De modo geral, os extratos e frações de própolis vermelha e própolis nativa do RS demonstraram forte atividade anti-Candida frente às leveduras testadas e significativa capacidade de remoção de seu biofilme aderido em cateteres, como corpo de prova. A própolis verde apresentou baixo espectro de ação antifúngica. A análise química da fração diclorometano de própolis obtida do RS levou ao isolamento dos flavonoides pinocembrina, pinostrobina e pinostrobina chalcona. Os resultados evidenciam o potencial da própolis nativa do RS e da própolis vermelha para o desenvolvimento de novos agentes antifúngicos e desinfetantes contra Candida não-albicans. / Propolis is a resinous material collected by bees from various plant parts such as buds, young leaves and exudates. It is used to embalm animals that have died inside the hive, seal the walls and confer protection against the disease. The use of this natural product with medicinal purposes dates back to antiquity, having started with ancient civilizations as the Egyptian, Greek and Roman, and lasted to the present day with extensive use in multiple medical and veterinary therapeutic purposes. The aim of this study was to evaluate the antifungal potential, the ability to remove and inhibit biofilms of Candida non-albicans of different types of propolis and analyze the chemical composition of propolis obtained from Rio Grande do Sul (RS). Maceration and sequential extractions with solvents in order of increasing polarity were performed to purify the extracts. Then the antifungal activity was determined by the method of broth microdilution testing and removal and inhibition of biofilms through test of body of proof (catheter using as test material). After, the chemical analysis of the dichloromethane fraction of propolis obtained in RS was performed. In general, the extracts and fractions of propolis of RS demonstrated strong anti-Candida activity across the tested yeasts and significant capacity removal of biofilm attached in catheter, as test body. The green propolis had low action spectrum antifungal. Chemical analysis of the dichloromethane fraction of propolis native to RS led to the isolation of the flavonoids pinocembrin, chalcone pinostrobin and pinostrobin. The results show the potential of the RS native propolis and red propolis for the development of new antifungal agents and disinfectants against non-albicans Candida.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-20T13:02:48Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Candidemia em neonatos....pdf: 1628589 bytes, checksum: 5b0ac1e6a9d71e1864e058583212fc7a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-20T13:02:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Candidemia em neonatos....pdf: 1628589 bytes, checksum: 5b0ac1e6a9d71e1864e058583212fc7a (MD5) Previous issue date: 2015-02-19 / CAPEs / Infecções fúngicas hematológicas em neonatos ocorrem comumente associadas a diversos fatores. Dentre estas infecções destaca-se candidemia, a qual tem se tornado cada vez mais frequente. Os fatores relacionados incluem prematuridade e uso de dispositivos terapêuticos invasivos, determinando altos indíces de morbi-mortalidade. Neste contexto, medidas preventivas às infecções fúngicas e instituição do tratamento adequado podem melhorar o cenário atual. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi diagnosticar infecções fúngicas em neonatos, definir o perfil epidemiológico e caracterizar os agentes etiológicos quanto a virulência e susceptibilidade antifúngica. Assim, amostras de sangue foram coletadas e processadas para exame direto e cultura. A virulência das leveduras foi avaliada através da capacidade de adesão dos agentes às células HeLA e produção de biofilme. Os testes de susceptibilidade antifúngica foram procedidos de acordo com o Clinical Laboratory and Standards Institute (CLSI) utilizando anfotericina B, voriconazol, fluconazol e as equinocandinas. Também foram incluídas nos testes cepas controle (ATCC) de Candida tropicalis e C. parapsilosis. No diagnóstico, foram verificadas estruturas fúngicas em parasitismo compatíveis com leveduras, sendo isoladas C. parapsilosis, C. albicans, C. haemulonii, C. guilliermondii, C. famata e C. glabrata. A espécie mais isolada foi C. parapsilosis superando a ocorrência de C. albicans. Os dados epidemiológicos indicam como fatores associados aos casos de candidemia a prematuridade, baixo peso ao nascer, uso de dispositivos médico-invasivos e maior acometimento do sexo masculino. Com relação à virulência, isolados de C. albicans e C. glabrata foram os que apresentam maior capacidade de adesão às células HeLa e cepas de C. albicans e C. parapsilosis produziram biofilmes fortes. Também foi possível detectar raros casos de resistência aos antifúngicos testados. Os resultados obtidos ressaltam a importância do acompanhamento micológico em neonatos para minimizar o índice de morbi-mortalidades por infecções fúngicas, particularmente, candidemia. / Hematologic fungal infections in newborns occur commonly associated with many factors. Among these infections stands out candidemia, which has become increasingly common. Related factors including prematurity and use of invasive therapeutic devices, determining high levels of morbidity and mortality. In this context, preventive measures to fungal infections and institution of appropriate treatment can improve the current situation. Thus, the objective of this study was to diagnose fungal infections in neonates, set the epidemiological profile and characterize the etiologic agents in virulence and antifungal susceptibility. Blood samples were collected and processed for direct examination and culture. The virulence of yeast was assessed by the ability of agents adhere to HeLa cells and biofilm production. The antifungal susceptibility testing was proceeded according to the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) using amphotericin B, voriconazole, fluconazole and echinocandins. Also were included in the test control strains (ATCC) of Candida tropicalis and C. parapsilosis. At diagnosis, fungal structures were observed in parasitism compatible with yeast, being isolated C. parapsilosis, C. albicans, C. haemulonii, C. guilliermondii, C. famata and C. glabrata. The most frequent species was C. parapsilosis surpassing the occurrence of C. albicans. Epidemiological data indicate some factors associated with cases of candidemia as prematurity, low birth weight, use of invasive medical devices and greater prevalence of males. Regarding the virulence isolates of C. albicans and C. glabrata were those with greater ability to adhere to HeLa cells and strains of C. albicans and C. parapsilosis produced strong biofilms. It was possible to detect rare cases of antifungal resistance. The results highlight the importance of mycological monitoring in neonates to minimize the morbidity and mortality rate due to fungal infections, particularly candidemia.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-28T14:36:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO FINAL PDF DIGITAL.pdf: 1241777 bytes, checksum: 0031dd125d40fe083cb1ec9da8552635 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-28T14:36:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO FINAL PDF DIGITAL.pdf: 1241777 bytes, checksum: 0031dd125d40fe083cb1ec9da8552635 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / CNPq / Pacientes acometidos por neoplasias hematológicas realizam tratamento quimioterápico intenso e têm alto risco de desenvolver infecções invasivas por espécies de Candida spp. devido à baixa resposta imune, neutropenia e outros fatores de risco, contribuindo para uma elevada morbimortalidade. Entretanto, devido a peculiaridades da imunossupressão a que são submetidos, a distinção entre os processos infecciosos ainda não é uma tarefa fácil podendo levar o paciente a óbito. O presente estudo teve como objetivo diagnosticar candidemias e avaliar o perfil epidemiológico e sensibilidade antifúngica em pacientes acometidos por neoplasias hematológicas. O diagnóstico micológico foi realizado através da taxonomia clássica e automatizada e confirmado pela técnica molecular (PCR-Reação em Cadeia da Polimerase) e identificação proteômica (MALDI-TOF MS). O teste de sensibilidade antifúngica seguiu as recomendações M27-A3 do Clinical & Laboratory Standards Institute (2008). A análise estatística descritiva foi realizada no programa GraphPad Prism6 através do teste exato de Fisher e cálculo do Odds ratio (intervalo de confiança de 95% para p < 0,05). Foram analisadas 105 amostras sanguíneas de 62 pacientes internados no serviço de Onco-hematologia do Hospital de Câncer de Pernambuco (HCP) no período de janeiro de 2015 a setembro de 2015. Dentre estas, foram isoladas nove (8,57%) leveduras do gênero Candida, sendo seis (66,66%) C. tropicalis e três (33,34%) C. albicans. O óbito ocorreu em 66,6% dos casos de candidemia demonstrando haver associação estatística significativa (p = 0,03, Odds Ratio = 5,53). O internamento em UTI, como fator de risco, foi associado à candidemia (p = 0,0008 Odds ratio = 24,8) e o choque séptico ao óbito (p= 0,0476 Odds ratio= 25,67). Ao teste de sensibilidade antifúngica, os isolados mostraram sensibilidade aos antimicóticos anfotericina B, caspofungina, micafungina, anidulafungina e fluconazol. Com base nos resultados obtidos, conclui-se que candidemia é uma infecção invasiva frequente causada por espécies de Candida não-albicans, em pacientes com neoplasias hematológicas, como a espécie C. tropicalis. / Patients affected by neoplasia hematological which require intense chemotherapy treatment have high risk of developing invasive infections by Candida spp species due to low immune response, neutropenia and other risk factors contributing to high morbimortality. However, due to peculiarities of the immunosuppression that are submitted, the distinction between the infectious processes is still not an easy task and may progress rapidly and take the patient to death. The study aimed to identify the candidemia and epidemiological profile in patients with hematologic neoplasia. The mycological diagnosis was performed by classical taxonomy and automated and confirmed to molecular technique (PCR-polymerase chain reaction) and proteomics (MALDI-TOF MS). The antifungal susceptibility testing followed the M27 -A3 & recommendations of the Clinical Laboratory Standards Institute (2008). The descriptive statistical analysis was performed using GraphPad Prism6 program through the Fisher exact test and calculation of Odds ratio (95% confidence interval for p < 0.05) .Blood samples (105) were analysed of 62 patients admitted in the oncohematology service of the Hospital of Pernambuco (HCP) from January 2015 to September 2015. Among samples studied, nine (8,57%) were found positive for yeasts of the genus Candida in which identified six (66,66%) species C. tropicalis and three (33,34%) C. albicans. The death occurred in 66.6 % of cases of candidemia demonstrated significant statistical association (p = 0,03, Odds ratio = 5,53). The admission to the ICU, as a risk factor was associated with candidemia (p = 0.0008 Odds ratio = 24.8) and septic shock with death (p = 0.0476 Odds ratio = 25.67). The antifungal susceptibility testing, isolates were presented, in its entirety, sensitive to antifungal agents amphotericin B, caspofungin, micafungin, anidulafungin and fluconazole. Among the patients with candidemia 66,6% evolved to death. Based on these results, one can conclude that candidemia is a common invasive infection caused by Candida non-albicans species in patients with hematological malignancies, such as C. tropicalis species.

Made available in DSpace on 2018-06-27T18:56:26Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Marcia Ebling de Souza.pdf: 2695265 bytes, checksum: a2e937aea21007fe96d911a8926690fc (MD5) Marcia Ebling de Souza.pdf.txt: 137369 bytes, checksum: 1823ab125cb3d2d640b4054a50610fcf (MD5) Marcia Ebling de Souza.pdf.jpg: 3457 bytes, checksum: 86b6a5529e61dfd18d87fbf869cbc570 (MD5) Previous issue date: 2014-08-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Infections caused by Candida species are an important cause of morbidity and mortality in immunocompromised patients. This growing trend has been linked to resistance to antimicrobial therapy and the ability of the organism to form biofilms. Melaleuca alternifolia oil is traditionally used as an herbal antimicrobial that shows activity in biofilms formed by Candida species. The present study aimed to evaluate the antimicrobial and antibiofilm activity nanoparticles and the essential oil of M. alternifolia. Oil and characterization of nanoparticles M. alternifolia. Antimicrobial activity was determined by the microdilution technique was performed. The ability to form biofilms at different glucose concentrations and measured the levels of exopolysaccharides and proteins in the biofilms was verified. The qualitative analysis of biofilms was performed by staining of Calcofluor White. The cytotoxicity of nanoparticles and the oil was assessed. The chromatographic profile showed that M. alternifolia oil conforms with ISO 4730 with the main constituents, 41.9% of Terpinen-4-ol, 20.1% of &#947;-terpinene, 9.8% of &#945;-terpinene and 6.0% of 1.8-Cineol. Nanoparticles M. alternifolia oil had a pH of 6.3, particle diameter of 158.2 ± 2 nm, polydispersity 0.213 ± 0.017 and zeta potential of -8.69 ± 0.80 mV. The oil and nanoparticles M. alternifolia showed antimicrobial activity against most microorganisms evaluated. Microorganisms that showed an increased capacity to form biofilms were C. albicans, C. tropicalis, C. membranafaciens, C. parapsilosis and C. glabrata at a concentration of 1% glucose. Administration of oil or nanoparticles of M. alternifolia oil represented a significant reduction of biofilm formed by all Candida species used, as well as a reduction in protein levels and exopolysaccharide biofilms. Was possible to visualize the reduction of biofilm in the presence of nanoparticles of M. alternifolia with Calcofluor White staining. The oil and nanoparticles M. alternifolia showed cytotoxic character at all concentrations evaluated. With the increase in the concentration of fetal calf serum medium, an inhibition of the toxic effect of the nanoparticles occurs. There are probably involved in protein-corona effect on the cytotoxicity of nanoparticles / As infecções causadas por espécies de Candida são importante causa de morbi-mortalidade em pacientes imunodeprimidos. Esta tendência crescente tem sido associada a resistência a terapia antimicrobiana e a capacidade do microrganismo em formar biofilmes. O óleo de Melaleuca alternifolia é um fitoterápico tradicionalmente utilizado como antimicrobiano, que apresenta atividade em biofilmes formados por espécies de Candida. O presente estudo teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana e antibiofilme de nanopartículas e do óleo essencial de M. alternifolia. Foi realizada a caracterização do óleo e das nanopartículas de M. alternifólia A atividade antimicrobiana foi determinada através da técnica de microdiluição. Foi verificada a capacidade de formação de biofilmes em diferentes concentrações de glicose e mensurados os níveis de exopolissacarídeos e proteínas nos biofilmes formados. A análise qualitativa dos biofilmes foi realizada através da coloração de Calcoflúor Branco. Foi avaliada a citotoxicidade do óleo e das nanopartículas. O perfil cromatográfico demonstrou que óleo de M. alternifolia está de acordo com a ISO 4730 com os constituintes majoritários, 41,9% de Terpinen-4-ol, 20,1% de &#947;-Terpineno, 9,8% de &#945;-Terpineno e 6,0% de 1,8-Cineol. As nanopartículas de óleo de M. alternifolia apresentaram pH de 6,3, diâmetro de partícula de 158,2 ± 2 nm, índice de polidispersão de 0,213 ± 0,017 e potencial zeta de -8,69 ± 0,80 mV. O óleo e as nanopartículas de M. alternifolia apresentaram atividade antimicrobiana frente a maioria dos microrganismos avalidados. Os microrganismos que apresentaram uma maior capacidade na formação de biofilmes foram C. albicans, C. tropicalis, C. membranafaciens, C. parapsilosis e C. glabrata na concentração de 1% de glicose. A administração de óleo ou as nanopartículas de óleo de M. alternifolia representou uma redução significativa do biofilme formado por todas as espécies de Candida utilizadas, bem como uma redução nos níveis de proteínas e exopolissacarídeos dos biofilmes. Foi possível visualizar a redução do biofilme na presença das nanopartículas de M. alternifolia com a coloração Calcofluor Branco. O óleo e as nanopartículas de M. alternifolia apresentaram caráter citotóxicos em todas as concentrações avaliadas. Com o aumento na concentração de soro fetal bovino do meio, ocorre uma inibição do efeito tóxico das nanopartículas. Provavelmente há o envolvimento do efeito proteína-corona na citotoxicidade das nanopartículas

Orientadores: Rafael Leonardo Xediek Consani, Janaína Sardi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-17T12:33:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Macedo_AnaPatriciaFernandesde_M.pdf: 1264842 bytes, checksum: 40d361272850e04ae60d9a96e01e285b (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O objetivo neste estudo in vitro foi avaliar o efeito da desinfecção por microondas em biofilmes de Candida sp formados em resinas acrílicas Clássico, Onda-Cryl e QC-20. Para isso foram confeccionados 30 corpos-de-prova (20mm de diâmetro por 2mm de altura), de cada resina, esterilizados com óxido de etileno. Após a obtenção do inóculo da levedura (Candida albicans, Candida tropicalis e Candida dubliniensis), os corpos-de-prova foram contaminados individualmente com 200 ?L de uma cultura ajustada a 108 unidades formadoras de colônias (UFC/mL). Os espécimes foram colocados em meio de cultura específicos e incubados por 24 horas a 37ºC em aerobiose para a formação do biofilme. Para cada resina e cada microorganismo avaliados, 03 corpos-de-prova foram irradiados por microondas com potência de 650 W durante 3 minutos, 01 corpo-de-prova controle não foi irradiado e outro corpo-de-prova controle sem microorganismos. Após esse processo, os corpos-de-prova foram lavados em solução salina e plaqueados em meio de cultura (Sabouraud dextrose Ágar) para análise do número de UFC/mL. Para análise estatística foi empregado o método de Kruskal-Wallis, seguido pelo teste de Student-Newman-Keuls. O grupo controle (não irradiados) apresentou crescimento microbiano após 48 horas de incubação a 37ºC. O grupo experimental apresentou diminuição significativa no número de colônias viáveis para todos os biofilmes formados pelas espécies de Candida analisadas. Os resultados demonstraram efetiva esterilização do biofilme de Candida após irradiação a 650 W por 3 minutos, para a maioria dos corpos-de-prova. O procedimento demonstrou ser um método capaz de diminuir consideravelmente a quantidade destes microrganismos / Abstract: The objective of this in vitro study was to evaluate the effect of microwave disinfection in biofilms of Candida sp. immersed in acrylic resin specimens (Clássico, Onda-Cryl and QC-20). For the study, 30 specimens (20mm X 2mm) were fabricated, for each resin, and subjected to ethylene oxide sterilization. After obtaining the inoculum of yeast (Candida albicans, Candida tropicalis and Candida dubliniensis), the specimens were infected individually with 200?L of a culture adjusted to 108 CFU / mL, placed in specific media and incubated for 24 hours to 37ºC aerobically for biofilm formation. For each resin and microorganism, 03 specimens were irradiated by microwave for 3 minutes at 650 W, and a control non-irradiated and a control without microorganisms. After this process, the specimens were washed with saline and then plated in Sabouraud dextrose agar for analysis of the number of colony forming units (CFU / mL). For statistical analysis was used the method of Kruskal-Wallis test followed by Student-Newman-Keuls. The control group (not irradiated) showed microbial growth after 48 hours incubation at 37ºC. The experimental group showed a significant decrease in the number of viable colonies for all the biofilms formed by Candida species analyzed. Thus, the results demonstrated an effective sterilization of Candida biofilm after 3 minutes of irradiation at 650W for most of the specimens. The procedure proved to be able to significantly decrease the amount of microorganisms / Mestrado / Protese Dental / Mestre em Clínica Odontológica