Orientador: Luís Fernando Barbisan / Banca: Noeme Souza Rocha / Banca: Luis Antônio Justulin Junior / Resumo: A atividade física mostra-se eficiente na melhoria da qualidade de vida de pacientes obesos e/ou com câncer, e tem mostrado efeitos benéficos contra a carcinogênese de cólon e mama em modelos de roedores. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito benéfico do treinamento aeróbico sobre a etapa de promoção da hepatocarcinogênese química em ratos Wistar alimentados ou não com dieta hiperlipídica. Os animais receberam dose única i.p. de 200 mg/kg de dietilnitrosamina no início do experimento para iniciação da hepatocarcinogênese. Duas semanas depois, os animais receberam quatro doses orais de 200 mg/Kg de 2-acetilaminofluoreno (2-AAF) e mais duas doses de 75 mg/kg de 2-AAF, dois e quatro dias após hepatectomia parcial de 70%. Na sexta semana do experimento, os animais receberam dieta padrão (DP, Grupos 1 e 2) ou dieta hiperlipídica (HP, Grupos 3 e 4) até o final da 22a semana do experimento. Os animais dos Grupos 2 e 4 foram submetidos a cinco seções semanais de natação (treinados) da 14a a 22a semana do experimento. Ao final da 22a semana, os animais foram eutanasiados e amostras de fígado foram coletadas para análise (histológica, imunoistoquímica, bioquímica e molecular). Ao final do período experimental, os valores médios do peso corporal dos grupos submetidos ao treinamento de natação foram inferiores aos respectivos grupos não treinados alimentados com dieta basal ou hiperlipídica, embora sem diferença significativa. O grupo que recebeu dieta hiperlipídica (G3) apresentou maior teor de gordura corpórea e de colesterol total, mas com redução significativa no grupo treinado (p <0,05). A concentração de hidroperóxido lipídico não diferiu entre os grupos não treinados e alimentados com dieta basal ou hiperlipídica. No entanto, uma redução significativa (p <0,05) nos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Laboratory studies have shown that moderate aerobic exercise inhibit colon and mammary carcinogenesis in rodent bioassays, but no repots exists on their protective action in liver carcinogenesis. Thus, the present study aimed to investigate the beneficial effects of swimming training on the promotion/progression stages of rat liver carcinogenesis. Male Wistar rats were submitted to chemically-induced liver carcinogenesis and allocated into four major groups according their dietary regimen (16-week) and training 5 days/week (8-week): two groups were fed a basal diet (BD) and trained or not and two groups were fed a high-fat diet (HFD) and trained or not. At week 20, the animals were killed and liver samples were processed to histological analyses, immunohistochemical detection of persistent or remodeling preneoplastic lesions (pPNL and rPNL) expressing placental glutathione S-transferase (GST-P) enzyme, proliferating cell nuclear antigen (PCNA), cleaved caspase-3 and bcl-2 protein levels by western blotting or malonaldehyde (MDA) detection by HPLC. Overall analysis indicated that swimming training reduced the body weight and fat body in both BS and HFD groups, normalized total cholesterol levels in the HFD group and decreased the MDA levels and number of GST-P-positive pPNL and adenomas in BD group. Also, a favorable balance in PCNA, cleaved caspase-3 and bcl-2 levels was detected in the liver from BDtrained group in relation to BD-untrained group. The findings this study indicated that a moderate aerobic exercise protocol may attenuate liver carcinogenesis... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luis Fernando Barbisan / Resumo: O presente estudo teve como objetivo avaliar se a ingestão de dietas com deficiência ou suplementação de zinco, durante as fases de gestação, lactação e juvenil, interfere no desenvolvimento das glândulas mamárias e na susceptibilidade ao desenvolvimento de carcinogênese mamária induzida pela 7,12-dimetilbenz(a)antraceno (DMBA) em ratas da linhagem Sprague-Dawley (SD). Duas gerações, mães e prole de fêmeas receberam dietas com níveis adequados (35mg/Kg dieta), deficientes (3mg/Kg dieta) ou com suplementação (180mg/Kg dieta) de zinco durante a gestação e lactação. Após o desmame, as proles de fêmeas receberam as mesmas dietas das mães até o dia pós-natal (DPN) 51 ou 53. No DPN 51 fêmeas SD foram eutanasiadas para remoção das glândulas mamárias abdominais (D e E) ou receberam dose única de DMBA (50mg/kg; i.g.) para iniciação da carcinogênese e eutanasiadas no DPN 53 ou DPN 180. No dia DPN 53 as glândulas foram processadas para análises histológicas e imunoistoquímicas, e avaliação da expressão de genes relacionados a dano e reparo de DNA, apoptose, ciclo celular e sinalização de genes relacionados ao receptor de estrógeno e p53, por RT-qPCR com sistema Taqman Low density array (TLDA). Os tumores coletados ao longo do experimento e no DPN 180 foram processados para avaliação histológica. As fêmeas alimentadas com dieta deficiente de zinco apresentaram redução significativa no peso corpóreo nos DPNs 0, 10, 21 e 51. O número médio de brotos terminais (TEBs), ductos terminais (TEDs... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study was designed to evaluate whether dietary intake with zinc deficiency or supplementation during the pregnancy, lactation and juvenile stages interfere the development of mammary glands and susceptibility to the mammary carcinogenesis induced by 7,12-dimethylbenzanthracene (DMBA) in female rats Sprague-Dawley (SD) rats. Two generations, dams and female offspring received dietary with zinc levels adequate (35 mg/kg diet), deficiency (3 mg/kg diet) or supplementation (180 mg/kg diet) during pregnancy and lactation. After weaning, the females offspring received the same diets as their dams until post natal day (PND) 51 or 53. On PND 51, females SD were euthanized for removal of the mammary glands (right and left) or received a single dose of DMBA (50mg/kg, ig) for initiation of mammary carcinogenesis and euthanized on PND 53 or PND 180. On PND 53, mammary glands were processed for histological and immunohistochemical analyses, as well as evaluation of the expression of genes related to DNA damage and repair, apoptosis, cell cycle and signaling related to estrogen receptor and p53 by RT-qPCR with Taqman Low density array system (TLDA). Tumors collected throughout experiment or on PND 180 were processed for histological evaluation. The females fed with dietary zinc deficiency presented a significant reduction in body weight on PND 0, 10, 21 e 51. The mean number of the terminal buds (TEBs), terminal ducts (TEDs) and alveolar lobe (ABLs) in mammary gland did not di... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luís Fernando Barbisan / Resumo: Zinc is required for a wide range of enzymes and transcription factors involved in DNA repair, antioxidant defense and cell proliferation. Inadequate zinc intake could impair these functions, predisposing to the development of human diseases. This study evaluated whether dietary zinc deficiency or supplementation alter early chemically-induced mouse hepatocarcinogenesis. Male Balb/C mice received a single dose of diethylnitrosamine (DEN, 50 mg/Kg) at postnatal day (PND) 15 as an initiating agent for hepatocarcinogenesis. At PND 28, animals were allocated into three groups (n=13/group) and were fed AIN-93G diet containing different concentrations of zinc: adequate zinc (35 mg/Kg diet), zinc deficiency (3 mg/Kg diet) or zinc supplementation (180 mg/Kg diet). Also, 2-acetylaminefluorene (2-AAF, 0.02%) was incorporated in all experimental diets as a promoting agent for hepatocarcinogenesis. Mice were euthanized at 12 or 24 weeks after introducing the experimental diets. Blood and liver samples were collected to perform Comet Assay. Other liver fragments were sampled for histopathological, morphometrical and immunohistochemical analyses, western blotting and antioxidant profiling. Zinc deficiency decreased Nrf2 expression and reduced glutathione (GSH) levels and increased NFκB, p53 expression and the number of preneoplastic altered hepatocyte foci (AHF) per cm² at week 12. In addition, zinc deficiency decreased GSH levels and increased 2-AAF-induced genotoxicity (peripheral blood ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: O Zinco é um elemento essencial para uma grande diversidade de enzimas e fatores de transcrição envolvidos no reparo ao DNA, defesa antioxidante e proliferação celular. O consumo inadequado desse metal pode prejudicar tais funções e predispor ao desenvolvimento de doenças. Assim, o estudo avaliou se a deficiência ou suplementação de zinco alteram os estágios iniciais da hepatocarcinogênese. Para tanto, camundongos Balb/C receberam dose única intraperitoneal do carcinógeno dietilnitrosamina (50 mg/Kg) no 15º dia pós-natal (DPN), para iniciação da hepatocarcinogênese. Ao 28º DPN, os animais foram randomicamente alocados em três grupos experimentais (n=13/grupo) recebendo dieta AIN-93G contendo níveis adequados (35 mg/Kg), deficiência (3 mg/Kg) ou suplementação (180 mg/Kg) de zinco, além do agente promotor acetilaminofluoreno (0.02% em todas as dietas). Os animais foram eutanasiados após 12 e 24 semanas após a introdução das dietas. Amostras de sangue periférico foram coletadas antes da eutanásia para a avaliação de genotoxicidade pelo Teste do Cometa. Na necropsia, amostras de fígado foram retiradas para o Teste do Cometa, avaliação histopatológica e morfométrica análise imunoistoquímica, determinação do perfil antioxidante e western blot. Na 12ª semana, a deficiência de zinco reduziu a expressão de Nrf2 e os níveis de glutationa reduzida (GSH) e aumentou a expressão de NFκB e p53 e número de lesões pré- neoplásicas por cm². Já na 24ª semana, a deficiência reduziu os níveis de ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luís Fernando Barbisan / Resumo: O ferro heme presente na carne vermelha está associado ao aumento da incidência do câncer colorretal (CCR). O heme pode catalisar a formação de compostos nitrosos e a peroxidação lipídica no lúmen intestinal. No entanto, os efeitos pró-carcinogênicos do heme podem ser inibidos por alguns compostos como os sais de cálcio, clorofila entre outros. Sabe-se que o indol-3-carbinol (I3C), presente nas plantas da família das Brassicas e os simbióticos são compostos promissores na prevenção do câncer de cólon, atuando em via de proliferação, apoptose e modulação da microbiota intestinal. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi o de avaliar os efeitos da ingestão de simbiótico (prebiótico inulina associado ao probiótico Bifidobacterium lactis bb-12) e de I3C, isolados ou em associação sobre o processo de carcinogênese de cólon induzido pela 1,2-dimetilhidrazina (DMH) em ratos Wistar alimentados ou não com dieta suplementada com heme. Os animais foram alocados em 9 grupos, os grupos 1 a 8 (n=12) receberam quatro doses de DMH (40 mg/Kg) nas duas semanas iniciais do experimento. Os grupos 1 e 9 (n=12 e 5) receberam ração basal até o final do experimento e os grupos 2 a 8 receberam ração basal suplementada com heme, heme+I3C, heme+simbiótico, heme+I3C+simbiótico, I3C, simbiótico e I3C+simbiótico, respectivamente. A eutanásia ocorreu ao final da 25ª semana. Neste momento foi realizada a coleta do cólon com os respectivos tumores e amostras de fezes do ceco. Em seguida, procedeu-se a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Colorectal cancer (CRC) is the third most common type of cancer worldwide. Hemin iron, which is found in red meat, catalyzes the formation of carcinogenic N-nitroso compounds and lipid peroxidation end-products in the colon lumen. The procarcinogenic effect of hemin is known to be inhibited by molecules, such as calcium, chlorophyll and others. However, the preventive effect of indole 3-carbinol and synbiotics on colon carcinogenesis remains uninvestigated. The aim of this study was to assess the modifying effects of a synbiotic (inulin+ Bifidobacterium lactis) and/or I3C against dimethylhidrazine (DMH)-induced colon carcinogenesis in hemin-fed male Wistar rats. Nine groups of animals were evaluated. Groups 1–8 received a total of four s.c. DMH injections (40 mg/kg b.w.) over 2 weeks, whereas group 9 was given EDTA solution (vehicle). Two weeks after DMH-initiation, G1 and G9 were fed a basal diet while groups G2, G3, G4, G5, G6, G7 and G8 received a basal diet containing hemin, hemin+I3C, hemin+synbiotic, hemin+I3C+synbiotic, I3C, synbiotic and I3C+synbiotic, respectively, during 23 weeks. At 25 week, all animals were killed and their colons were removed. Cecal contents were collected to determine fecal water cytotoxicity and genotoxicity (DNA damage) in Caco-2 cells. Colon tumors were measured and samples were collected and stored at -800C. The colons were fixed flat in 10% buffered formalin for 24 h and stained with 1.0% methylene blue for classical ACF analysis and qua... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A serotonina (5-HT) é um neuro-hormônio com complexos efeitos em humanos e animais. Embora se acredite que a sinalização serotoninérgica promova o desenvolvimento de tumores de cólon, também tem sido observado que a redução dos níveis de 5-HT aumenta o risco de malignidades neste órgão. Assim, é necessário investigar como a síntese de 5-HT modula a carcinogênese de cólon. Esta hipótese será explorada em experimentos mecanísticos envolvendo a exposição ou não de camundongos a um agente carcinogênico (azoximetano). Estes experimentos revelaram que a exposição carcinogênica aumentou a síntese de 5-HT no cólon, uma vez que os processos de liberação e degradação de 5-HT foram reduzidos, enquanto que a sua síntese e recaptação aumentaram. Após 24 semanas da 1° exposição carcinogênica, a deleção da síntese de 5-HT promoveu a multiplicidade tumoral no cólon, enquanto que ao longo de 12 semanas ocorreu um aumento de lesões preneoplásicas e proliferação celular. É interessante que 72 hrs após a sexta e última exposição carcinogênica o número de criptas aberrantes foram detectadas reduzidas na ausência de 5-HT, o que ocorreu em conjunto com uma redução da atividade proliferativa, aumento de células apoptóticas, e maior dano de DNA. Finalmente, a 5-HT modulou mecanismos de reparo genômico. Concluímos que a síntese serotoninérgica parece ser um fator de proteção do cólon intestinal, que caso inibida facilitaria o desenvolvimento tumoral neste tecido. / Serotonin (5-HT) is a neurohormone with complex effects in humans and animals. Although serotonergic signaling has been suggested to promote the development of colon tumors, the reduction in 5-HT levels was reported to increase the risk of colon cancer. Here, we sought to investigate how 5-HT synthesis modulates colon carcinogenesis. This hypothesis was explored in mechanistic experiments that carcinogenically exposed or not mice to azoxymethane. It revealed that carcinogenic exposure increased the synthesis of 5-HT in the colon since 5-HT release and decay were inhibited, while its synthesis and reuptake are promoted. After 24 weeks from the first carcinogenic exposure, the deletion of 5-HT synthesis increased tumor multiplicity, while following 12 weeks it promoted the development of preneoplastic lesions, and cell proliferation in the colon. Interestingly, 72 hrs after the sixth and last carcinogenic exposures the number of aberrant crypts were detected reduced in the absence of 5-HT, which occurred together with a reduced proliferation, but increased apoptosis and DNA damage. Finally, 5-HT modulated genomic repair mechanisms. We conclude that serotonergic synthesis seems to be a protective factor of the intestinal colon, which inhibited case facilitates tumor development in this tissue.

A flora brasileira possui várias plantas com grande potencial quimiopreventivo contra processos neoplásicos, sendo uma delas o fruto do Pequi (Caryocar brasiliense Camb). Essa fruta da região central do Brasil contêm na sua polpa e principalmente no extrato do óleo da sua polpa, várias substâncias antioxidantes. Relatos científicos recentes indicam que as substâncias no Pequi estão relacionadas com a intensificação do sistema imunológico e a redução do risco de doenças degenerativas como o câncer. Portanto, o presente trabalho avaliou o potencial quimiopreventivo do óleo de Caryocar brasiliense contra lesões hepáticas pré-neoplásicas induzidas quimicamente pela dietilnitrosamina (DEN) em camundongos. O iniciador dietilnitrosamina (DEN) na concentração de 10ug/g foi injetado intraperitonialmente em camundongos de 14 dias de idade. Foram formados cinco grupos experimentais: C (controle sem nenhum tratamento); DEN (Dietilnitrosamina 10ug); OP400 (óleo de Pequi 400mg/kg); DEN+OP100 (DEN+100mg/kg de óleo de Pequi); e DEN+OP400 (DEN+400 mg/kg de óleo de Pequi). Estes três últimos grupos receberam o óleo a partir do 30º dia até o 189° dia de vida. Os parâmetros estereológicos densidade de volume (Vv) e volume total (VTot) das lesões pré-neoplásicas (LPN) foram avaliados juntamente com a expressão das citoqueratinas CK8/18. O óleo de C. brasiliense reduziu o volume total das lesões pré-neoplásicas em 51% no fígado dos camundongos e em 20% no número total de animais acometidos com estas lesões na dose de 400 mg/kg. Redução no número de perfis de focos de hepatócitos alterados (FHA) CK8/18 - positivos foram observados no grupo DEN+OP400. Estes efeitos foram atribuídos às substâncias antioxidantes como os carotenóides (com ou sem atividade pró-vitamina A) e vitamina C que possivelmente atuaram na fase de promoção inibindo a proliferação celular e também pela indução da remodelação dos FHA. Portanto, concluímos que o óleo de C. brasiliense possui efeito hepatoprotetor no desenvolvimento de lesões pré-neoplásicas em fígado de camundongos induzidos por DEN e com potencial para uso na prevenção do câncer hepático / The brazilian flora has several plants with large chemopreventive potential against neoplastic processes, being one of them the Pequi fruit (Caryocar brasiliense Camb). This fruit of the central region of Brazil contains at its pulp and especially in the oil extract of its pulp, various antioxidant substances. Recent scientific reports indicate that the substances in Pequi are related to the intensification of the immune system and the reduction of risk of degenerative diseases, such as cancer. Therefore, this study evaluated the chemopreventive potential of the Caryocar brasiliense oil against pre-neoplastic liver lesions chemically induced by diethylnitrosamine (DEN) in mice. The initiator diethylnitrosamine (DEN) at a concentration of 10ug/g was intraperitoneally injected into14 days of age mice. Five experimental groups were formed: C (control without any treatment); DEN (diethylnitrosamine 10ug); OP400 (oil Pequi 400 mg/kg); DEN+OP100 (DEN + 100 mg/kg of Pequi oil); and DEN+OP400 (DEN + 400 mg/kg of Pequi oil). These last three groups received oil from the 30th day to the 189th day of life. The stereological parameters volume density (Vv) and total volume (VTot) of pre-neoplastic lesions (PNL) were evaluated together with the expression of cytokeratins CK8/18. The oil of C. brasiliense reduced the total volume of pre-neoplastic lesions in the liver in 51% of mice and 20% in the total number of affected animals with these lesions at a dose of 400 mg / kg. Reduction in the number of foci of altered hepatocytes (FAH) CK8/18 profiles-positive were observed in DEN+OP400 group. These effects have been attributed to antioxidants substances such as carotenoids (with or without provitamin A activity) and Vitamin C which possibly acted on the promotion stage inhibitting cell proliferation and also by inducing remodeling of FHA. Therefore, we conclude that the oil of C. brasiliense has hepatoprotective effect on the development of pre-neoplastic lesions in the mice liver induced by DEN and with potential for use in the prevention of liver cancer

Avaliou-se a eventual atividade quimiopreventiva por parte da vitamina A (VA) quando administrada a ratas Sprague-Dawley durante a etapa de pós-iniciação da carcinogênese mamária induzida pelo 7-12 dimetilbenz(a)antraceno (DMBA). Com exceção de 10 animais que constituíram um grupo controle à parte de ratas consideradas normais [grupo normal (N)], e que não foram submetidas a qualquer procedimento experimental durante todo o estudo, 40 ratas com 50 dias de idade receberam o agente carcinogênico DMBA, por meio de entubação gástrica na dose de 60 mg/kg/peso corpóreo. Após 2 semanas, as ratas iniciadas receberam durante 12 semanas consecutivas, por entubação gástrica, 0,25 mL/100 g de peso corpóreo de óleo de milho (grupo OM; controle, n=20) e 2,5 mg/100 g de peso corpóreo de vitamina A (grupo VA, n=20), sendo, então, eutanasiadas. Não houve diferenças (p>0,05) entre os grupos OM e VA quanto à latência de aparecimento da primeira neoplasia mamária, incidência, multiplicidade e peso médio das neoplasias mamárias, todas classificadas como malignas. Em comparação ao grupo OM, o grupo VA apresentou maior concentração (p<0,05) de retinol no tecido mamário neoplásico e hepático, além de maiores concentrações hepáticas (p<0,05) de palmitato de retinila. Não se detectou palmitato de retinila em neoplasias mamárias de ambos os grupos. Não houve diferença (p>0,05) entre neoplasias mamárias do grupo OM e o tecido mamário do grupo N quanto à metilação global do DNA. Em comparação a neoplasias mamárias do grupo OM, neoplasias do grupo VA apresentaram menor (p<0,05) metilação global do DNA. Conclui-se que a VA não apresentou atividades quimiopreventivas e seu metabolismo encontra-se alterado em neoplasias mamárias. / The potential chemopreventive activity of vitamin A (VA) was evaluated when administered to Sprague-Dawley rats during the stage of post-initiation of mammary carcinogenesis induced by 7-12 dimethylbenz(a)anthracene (DMBA). Except for 10 animals that constituted a separate control group of normal rats [normal group (N)], that were not subjected to any experimental procedure throughout the study, 40 rats with 50 days of age received the carcinogen DMBA by gavage at the dose of 60 mg/kg/body weight. After 2 weeks, the rats received for 12 consecutive weeks, by gavage, 0.25 mL/100 g body weight of corn oil (OM group, control, n = 20) or 2.5 mg/100 g body weight of vitamin A (VA group, n = 20), being then euthanized. There were no differences (p> 0.05) between the OM and VA groups regarding the latency of onset of first breast neoplasm, incidence, multiplicity and average weight of breast tumors, all classified as malignant. Compared to the OM group, the VA group had a higher concentration (p <0.05) of retinol in neoplastic breast tissue and liver as well as higher concentrations (p <0.05) of retinyl palmitate in the liver. Retinyl palmitate was not detected in breast tumors of both groups. There was no difference (p> 0.05) between breast tumours of OM group and mammary tissue of N group regarding global DNA methylation. Compared to breast tumors of OM group, breast tumors of VA group had lower (p <0.05) global DNA methylation. VA did not show chemopreventive activity when administered to rats during the stage of post-initiation of mammary carcinogenesis. Furthermore, the metabolism of VA is altered in breast tumors.

Orientador: Daniel Galera Bernabé / Coorientador: Sandra Helena de Oliveira Penha / Coorientador: Roelf Justino Cruz Rizzolo / Banca: Flávia Lombardi Lopes / Banca: Glauco Issamu Miyahara / Resumo: A ocorrência de eventos estressores nas fases iniciais de vida (estresse precoce de vida - EPV) pode afetar negativamente funções fisiológicas e psicológicas na fase adulta. Apesar de investigações pré-clínicas terem mostrado que o estresse crônico pode afetar a progressão do câncer, não há estudos que investigaram os efeitos do EPV na progressão do câncer bucal. No presente estudo, utilizamos um modelo animal de carcinogênese bucal induzida pelo carcinógeno 4-Nitroquinolona-1-Óxido (4NQO) para avaliar o impacto do EPV induzido por separação materna (SM) sobre a incidência e progressão do carcinoma espinocelular (CEC) de boca. As ninhadas submetidas ao protocolo de SM foram separadas de suas mães durante 3 horas por dia, do dia pós-natal 1 ao 21. Após os animais atingirem a idade adulta (90 dias), os grupos SM e controle foram tratados com 4NQO durante 120 dias. Análise histopatológica foi realizada para avaliar a incidência de CEC de boca e grau de malignidade do tumor entre os animais estressados e não estressados. Também foram avaliados o volume e espessura tumoral e o peso do baço e das glândulas adrenais. Os níveis níveis plasmáticos de norepinefrina foram analisados por ELISA e a expressão de RNAm para os genes relacionados à progressão do CEC de boca (IL-6, TNF-alpha, VEGF, p53 e CDKN2A) foram analisados por PCR em tempo real. A SM no período pós-natal aumentou em aproximadamente 60% a ocorrência de CEC de boca na idade adulta. Os ratos submetidos à SM desenvolveram tu... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Early life stress (ELS) may negatively affect the behavior and physiological functions in adulthood. Despite pre-clinical investigation have shown that chronic stress may affect cancer progression, there are no studies which have investigated ELS effects on oral cancer progression. In the present study, we used an oral carcinogenesis animal model induced by carcinogen 4-Nitroquinoline-1-oxide (4NQO) to assess the impact of ELS induced by maternal separation (MS) on the oral squamous cell carcinoma (OSCC) occurrence and progression. The litters underwent MS protocol were separated from their dam for 3 hours daily, during postnatal day 1-21. After animals reach adulthood (90 days), MS and control groups were treated with 4NQO during 120 days. Histopathological analysis was performed to evaluate the OSCC incidence and malignant degree between stressed and non-stressed rats. The volume and tumor thickness and the spleen and adrenal glands weight were also evaluated. Plasma norepinephrine levels were analyzed by ELISA and mRNA expression for OSCC progression-related genes (IL-6, TNF-alpha, VEGF, p53 and CDKN2A) were analyzed by real-time PCR. MS in neonatal period increased in almost 60% chemically induced OSCC occurrence in adulthood. Rats exposed to MS developed thicker (p=0.02) and larger tumors (p=0.03) compared to non-stressed rats. OSCCs from ELS rats showed worst pattern of invasion (p=0.004) and more perineural invasion (p=0.04) ELS also significantly reduced spleen (p=0.003) and adrenal glands (p=0.03) weight in cancer rats. ELS induced overexpression of IL-6 (p=0.04) and attenuated p53 expression (p=0.04) in OSCCs. Our results provides the first evidences that ELS may increase oral cancer onset and progression, and suggest that this effect can be associated with altered expression of IL-6 and p53 / Mestre

Orientador: Júlio Lopes Sequeira / Resumo: O carcinoma mamário em gatas apresenta comportamento clínico agressivo, com fatores biológicos semelhantes aos tipos triplo-negativo e basal do câncer de mama nas mulheres. O aumento na deposição de fibras colágenas com o passar do tempo representa um fator de risco ao seu desenvolvimento. Existe uma interação dinâmica e mútua entre as células neoplásicas e o estroma do microambiente dos tumores glandulares, com alta atividade biológica na periferia em relação ao centro. Este trabalho objetiva identificar a relação entre a densidade estromal das fibras colágenas (tipo I e III) e a agressividade do carcinoma mamário de gatas, nas regiões periférica e central do tecido, e compará-las segundo classificação histopatológica. Grupo controle representa o tecido saudável, e as 31 amostras de carcinoma mamário foram agrupadas segundo tipos histopatológicos (túbulo-papilífero; sólido; cribriforme), graduações (I, II, e III), e baixo e alto grau. As imagens dos cortes histológicos tratados pelo Picrossirius Red, foram avaliadas pelo Image.J® para obter valor médio de curtose, e pelo MatLab®, para entropia. Analisados estatísticamente pelo GraphPad 5 (GraphPad Software Inc®, La Jolla, CA) ANOVA com variância uniderecional, seguida teste de Bonferroni (p < 0,01). As fibras colágenas formam tipificadas e analisadas de forma descritiva. Houve diferença significativa entre os carcinomas e o tecido saudável em ambas regiões, com aumento da forma madura de colágeno III na porção central. Concl... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Feline mammary carcinoma Breast presents aggressive clinical behavior, with biological factors similar to the triple-negative and baseline types of breast cancer in women. The increase in the deposition of collagen fibers over time represents a risk factor for its development. There is a dynamic and mutual interaction between neoplastic cells and the stroma of the microenvironment of glandular tumors, with high biological activity on the periphery in relation to the center. This work aims to identify the relationship between the stromal density of collagen fibers (types I and III) and the aggressiveness of mammary carcinoma in cats, in the peripheral and central regions of the tissue, and to compare them according to histopathological classification. Control group represents healthy tissue, and the 31 breast cancer samples were grouped according to histopathological types (tubule-papillary; solid; cribriform), gradations (I, II, and III), and low and high grade. The images of the histological sections treated by Picrossirius Red, were evaluated by Image.J® to obtain an average kurtosis value, and by MatLab®, for entropy. Statistically analyzed by GraphPad 5 (GraphPad Software Inc®, La Jolla, CA) ANOVA with one-way variance, followed by Bonferroni test (p< 0.01). Collagen fibers are typified and analyzed in a descriptive way. There was a significant difference between carcinomas and healthy tissue in both regions, with an increase in the mature form of collagen III in the cent... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A proteína óxido nítrico sintase induzível (iNOS) é a mais importante proteína da família das óxido nítrico sintases, a qual é capaz de produzir grandes quantidades de óxido nítrico. A indução permanente de iNOS foi levantada como potencialmente mutagênica, apresentando um papel central na biologia tumoral. O objetivo deste estudo é investigar o papel da iNOS no desenvolvimento de carcinomas de células escamosas bucais (CCEB), usando um modelo experimental de carcinogênese lingual em camundongos knockouts para NOS2 e amostras humanas derivadas da mucosa normal, leucoplasia bucal e CCEB. Camundongos selvagens (iNOS+/+) e knockout (iNOS-/-) para iNOS foram desafiados com 4-nitroquinolina-1-óxido (4NQO) diluída em água potável por 16 semanas e sacrificados após 0, 8 e 16 semanas de acompanhamento. As línguas foram removidas e o número de displasias e carcinomas foram contados. Sangue periférico destes camundongos foram analisados, por citometria de fluxo, em busca de células tumorais circulantes. Amostras humanas derivadas da mucosa normal, leucoplasia e CCEB, foram utilizadas para quantificar o RNA mensageiro (mRNA) de NOS2. As amostras humanas também foram imuno-coradas com anticorpos anti-iNOS e anti-nitrotirosina. Em ambos os grupos, foram observadas uma redução no número de displasias e um aumento de carcinomas da 16 semana até a 32 semanas. Camundongos iNOS-/- demonstraram menor número de lesões displásicas e neoplásicas em todos os períodos de avaliação, sendo menores e menos invasivas, quando comparados aos animais selvagens. Aparentemente, há uma tendência em ascensão nos níveis do mRNA e da proteína iNOS durante a carcinogênese bucal humana. Dados similares foram obtidos com a imuno-detecção de nitrotirosina. Além disso, as imuno-marcações de iNOS e nitrotirosina foram associadas a várias características clínicopatológicas dos CCEB (tamanho, presença de metástase, estadiamento e recidiva). Nossos resultados demonstraram que iNOS afeta o processo de carcinogênese bucal experimental e humana, estando associada com a gênese e progressão dos CCEB. Mais estudos devem ser feitos, para nos fornecer, uma compreensão profunda das funções de iNOS no desenvolvimento de câncer bucal. / Inducible nitric oxide synthase (iNOS) is most important protein of nitric oxide synthases family, which is capable to produce huge amounts of nitric oxide. Permanent induction of iNOS has been raised as potentially mutagenic; presenting pivotal roles in tumor biology. The aim of this study is to investigate the role of iNOS in the development of oral squamous cells carcinomas (OSCC), using a mouse model of oral carcinogenesis in NOS2 knockout animals and human samples derived from normal mucosa, leukoplakia and OSCC. Wild-type (iNOS+/+) and NOS2-knockout (iNOS-/-) mices, were challenged with 4- nitroquinoline- 1-oxide (4NQO) in drinking water for 16 weeks and killed after 0, 8 and 16 weeks of after treatment. Tongues were removed and the number of dysplasias and carcinomas was counted. Mice’s peripheral blood were analyzed by flux cytometry in search of circulating tumor cells. Human samples derived from normal mucosa, leukoplakia and OSCC, were utilized to relative quantify the amount of NOS2-mRNA. The human samples were also immune-stained with anti-iNOS and anti- Nitrotyrosine antibodies. In both groups, a reduction of dysplasias and an increase of carcinomas from week 16 to week 32 were observed. iNOS-/- mices had shown a small number of dysplastic and neoplastic lesion in all evaluated periods, moreover these lesions were usually smaller and less invasive when compared to wild type animals. Apparently, there is a rising tendency in the iNOS mRNA and protein levels during human oral carcinogenesis. Similar findings were obtained in the nitrotyrosine staining. Furthermore, iNOS and nitrotyrosine imuno-stained is associated with several clinic-pathological features of OSCC (site, presence of metastasis, staging and recidive). Our results shows that, iNOS affects the process of experimental and human oral carcinogenesis, being associated with OSCC genesis and progression. More studies should be done to provide us a deep understanding of the iNOS functions in oral cancer development. / Tese (Doutorado)