O leite materno constitui uma rica fonte de nutrientes e peptídeos. O desmame precoce (DP) induz o aumento da proliferação e da diferenciação celular, e pode ser uma condição estressante capaz de elevar a corticosterona (CORT). Neste estudo, investigamos a interação entre padrão alimentar, CORT, TGF<font face=\"Symbol\">a e TGF<font face=\"Symbol\">b na regulação da proliferação celular na mucosa gástrica de ratos em desenvolvimento pós-natal. Utilizamos ratos Wistar em DP a partir do 15ºd, e observamos o aumento de CORT aos 16, 17 e 18d (p<0,05). No 17ºd, encontramos nível alto de TGF<font face=\"Symbol\">a e baixo de TGF<font face=\"Symbol\">b1 na mucosa gástrica (p<0,05). Para avaliarmos a ação da CORT, usamos o RU486, que ao reduzir a ação hormonal, estimulou a proliferação celular nos animais amamentados e DP (p<0,05), sem alterar os níveis de TGF<font face=\"Symbol\">a e TGF<font face=\"Symbol\">b. A sinalização para esses fatores foi estudada, e RU486 reduziu a ativação de ERK1/2 (p<0,05) no DP. Concluímos que a corticosterona circulante possui efeito antiproliferativo sobre a mucosa gástrica de ratos, e sua ação parece direta sem depender da regulação dos níveis de TGF<font face=\"Symbol\">a e TGF<font face=\"Symbol\">b. / Milk is a source of nutrients and active peptides. Early weaning (EW) leads to the increase of cell proliferation and differentiation, and can characterize a stressful condition to induce corticosterone (CORT). In the current study we investigated the interaction among dietary pattern, CORT, TGF<font face=\"Symbol\">a and TGF<font face=\"Symbol\">b on the regulation of cell proliferation in gastric mucosa of developing rats. We used Wistar rats submitted to EW on the 15thd, and we observed higher CORT levels throughout EW (p<0.05). At 17d, we also found higher TGF<font face=\"Symbol\">a and lower TGF<font face=\"Symbol\">b1 in the gastric mucosa (p<0.05). To evaluate CORT action, we used RU486 which antagonized the hormone and increased cell proliferation in both suckling and EW pups (p<0.05), without changing TGF<font face=\"Symbol\">a and TGF<font face=\"Symbol\">b1 levels. The signaling pathways triggered by these factors were studied and RU486 reduced ERK1/2 phosphorylation (p<0.05) in EW. We conclude that CORT is repressive for cell proliferation in the rat gastric mucosa, and its action seems to be direct, i.e. independent of TGF<font face=\"Symbol\">a and TGF<font face=\"Symbol\">b regulation.

Orientador: Daniel Galera Bernabé / Resumo: Estudos sugerem que a supressão de melatonina e disfunção circadiana em trabalhadores noturnos podem estar relacionadas ao desenvolvimento e à progressão do câncer. Pesquisas têm mostrado também que a incidência tumoral pode ser aumentada pela pinealectomia. Entretanto, nenhum estudo avaliou a influência da cirurgia de pinealectomia sobre o desenvolvimento e a progressão do câncer de boca. No presente estudo, nós investigamos os efeitos da supressão de melatonina sobre a ocorrência e a progressão tumoral um modelo pré-clínico de câncer de boca induzido quimicamente. Nós demonstramos, pela primeira vez, que ratos pinealectomizados tiveram maior ocorrência de carcinoma espinocelular de boca, comparado aos animais controle. Ratos pinealectomizados também exibiram volume e espessura tumorais cerca de 3 e 2 vezes maior que animais sham, respectivamente. Além disso, pinealectomia induziu atrofia do epitélio não-tumoral adjacente às lesões bucais. Os ratos pinealectomizados apresentaram maior resposta inflamatória no front de invasão tumoral, caracterizada principalmente pelo aumento do número de eosinófilos e macrófagos associados ao tumor. Tumores de ratos submetidos à pinealectomia exibiram maior imunoexpressão de ERK1/2 e p53 no microambiente tumoral. Estes resultados revelam que a supressão de melatonina acelera o desenvolvimento e a progressão do câncer de boca associado ao aumento de eosinófilos e macrófagos no front de invasão tumoral e maior expressão de ERK1/2 e p53 no mic... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Studies suggest that melatonin suppression and circadian dysfunction in shift workers can be related to cancer risk. Furthermore, investigations have shown that pinealectomy promotes higher tumor incidence in rats. However, no study evaluated the influence of pinealectomy surgery on oral cancer onset and progression. In the current study, we investigated the effects of melatonin suppression on tumor occurrence and progression in a preclinical model of oral cancer. We demonstrated for the first time that pinealectomized rats had higher oral squamous cell carcinoma occurrence than sham animals. Furthermore, pinealectomized animals displayed tumor volume and thickness about 3 times and twice higher than sham-operated rats, respectively. Moreover, pinealectomy induced atrophy of non-tumor epithelium adjacent to the oral lesions. Pinealectomized rats showed higher mean number of tumor-associated macrophages and eosinophils in the carcinoma invasion front. In addition, tumors from pinealectomized rats displayed increased immunoexpression of ERK1/2 and p53 in the tumor microenvironment. These results reveal that melatonin suppression promotes higher oral cancer occurrence and progression associated with increasing of inflammatory cells and ERK1/2 and p53 expressions in the tumor microenvironment. / Mestre

Submitted by Emanuel Varela Cardoso (emanuel.varela@ufcg.edu.br) on 2018-06-12T18:53:47Z No. of bitstreams: 1 ELIZA JULIANA DA COSTA EULÁLIO – TESE (PPGEP) 2016.pdf: 7905425 bytes, checksum: 64905b4c1009f10b95551ddcb731195c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-12T18:53:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ELIZA JULIANA DA COSTA EULÁLIO – TESE (PPGEP) 2016.pdf: 7905425 bytes, checksum: 64905b4c1009f10b95551ddcb731195c (MD5) Previous issue date: 2016 / INTRODUÇÃO A Diabetes Mellitus consiste em uma doença crônica que aumenta entre brasileiros, tendo direta relação com os fatores de risco do mundo moderno. A principal complicação desta patologia são as úlceras, de difícil tratamento, pela cicatrização lentificada e pela ineficácia de alguns curativos. O avanço na área dos Biomateriais tem favorecido o desenvolvimento de produtos com tal finalidade, sendo a quitosana um polímero promissor e de extrema relevância, que pode ter sua ação terapêutica potencializada com a incorporação de fármacos, a exemplo da quercetina, um flavonóide com função anti-inflamatória comprovada. OBJETIVO Desenvolver membranas de quitosana incorporadas com quercetina, para uso em pacientes com ulcerações epiteliais, em especial, para aplicação em feridas diabéticas. METODOLOGIA Esta pesquisa foi desenvolvida no Certbio (UFCG), classificada como experimental, foram produzidas 500 membranas, obtidas nas duas fases do trabalho: Fase Exploratória e Fase Experimental. Os dados foram analisados através da estatística descritiva, após os ensaios de caracterização: MEV, EDS, FTIR, DRX, Termogravimetria (Tg), Análise de Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC) e Ensaio de Citotoxicidade. RESULTADOS Os resultados da Fase Exploratória evidenciaram que, embora houvesse a incorporação da quercetina na matriz polimérica da quitosana, o contato desta com a solução básica (Hidróxido de Sódio e Hidróxido de Amônio) resultou na formação de um sal, confirmado após observação dos outros ensaios, houve também a formação de aglomerados devido a concentração elevada de fármaco, concluindo-se que não apresentaram características potenciais para aplicabilidade do produto em feridas diabéticas Os resultados da Fase Experimental evidenciaram incorporação de quercetina na matriz da quitosana, em ambas as metolodogias (X e Y), contudo na que houve reticulação em TPP (X), o fármaco ficou disperso homogeneamente, os difratogramas revelaram alteração da cristalinidade da membrana com a presença da quercetina, reforçando a interação entre ambos. As análises de TG e de DSC evidenciaram que a reticulação em TPP alterou O comportamento térmico da membrana de quitosana/ quercetina, aumentando a estabilidade do compósito e a quercetina contribuiu, de forma discreta, para as alterações das curvas de calor. O ensaio de citotoxicidade apontou que as membranas com TPP têm viabilidade para serem utilizadas como biomaterial. CONCLUSÕES Concluiu-se, que a metodologia considerada válida e eficaz para a obtenção de membranas de quitosana/ quercetina, foi a X, onde houve a reticulação em TPP, com potencial para ser testada in vivo e contribuir para regeneração tecidual e o combate ao processo inflamatório presente nas feridas diabéticas. Sugere-se que, novos ensaios sejam realizados, a fim de aprimorar algumas das características finais do produto, contudo parâmetros fundamentais das variáveis já foram estabelecidos nesse estudo. / INTRODUCTION to Diabetes Mellitus is a chronic disease which is increasing among the Brazilians; it is directly related to the modern world risk factors. The main complications of this disease are ulcers, hard treatment, slowed healing and the ineffectiveness of some curatives. The advance in the field of biomaterials has favored the development of products for this purpose, chitosan is a promising and very relevant polymer, which may have its enhanced therapeutic action with the incorporation of drugs, such as quercetin, a flavonoid with a proven anti -inflammatory function. OBJECTIVE Developing chitosan membranes incorporated with quercetin, for use in patients with epithelial ulcerations, in particular for use in diabetic wounds. METHODOLOGY The present research was developed in Certbio (UFCG), it was classified as experimental and it was produced 500 membranes obtained in the two work phases: Exploratory and Experimental phases. Data were analyzed using descriptive statistics, after the characterization tests: SEM, EDS, FTIR, XRD, thermogravimetry (Tg), Analysis of Differential Scanning Calorimetry ( DSC) and Cytotoxicity Assay. RESULTS The results of the exploration phase showed that although there was the incorporation of quercetin in the polymer matrix of chitosan, its contact with the basic solution (Sodium Hydroxide and Ammonium Hydroxide) resulted in the formation of a salt, confirmed after observation of other tests , there was also the formation of agglomerates due to the drug high concentration. It was concluded that it showed no potential features for the applicability of the product in diabetic wounds the results from experiment showed quercetin incorporated in the chitosan matrix in both metolodogias (X and Y), but there was the crosslinking of TPP (X), the drug was dispersed homogeneously, the diffraction showed crystallinity change of membrane in the presence of quercetin, strengthening the interaction between them. The analysis of TG and DSC showed that crosslinking in TPP changed the thermal behavior of the membrane of chitosan / quercetin, increasing the stability of the composite and que rcetin contributed discreetly to changes in heat curves. The cytotoxicity assay showed that membranes with TPP have the possibility to be used as a biomaterial. CONCLUSIONS It was concluded that the methodology considered valid and effective for obtaining chitosan membranes / quercetin was X, where there was crosslinking in TPP, with the potential to be tested in vivo and contribute to tissue regeneration and combating inflammatory process present in diabetic wounds. It is suggested that new tests are carried out in order to improve some of the final characteristics of the product, however basic parameters of the variables have already been established in this study.

Para avaliar a capacidade da toxina ExoU de P. aeruginosa de induzir a expressão do fator tissular (FT) por células epiteliais respiratórias da linhagem BEAS-2B, células infectadas pela cepa PA103, produtora da toxina, foram comparadas com outras infectadas por cepa mutante obtida por deleção do gene exoU e com células controles não infectadas quanto a i) expressão do mRNA do FT, por RT-PCR; ii) expressão da proteína FT em lisados celulares, por ensaio imunoenzimático (ELISA), e na superfície celular, por citometria de fluxo; iii) atividade pró-coagulante das células, pela determinação da capacidade de indução de coagulação de plasma humano normal e do lisado celular, através de ensaio colorimétrico; iv) presença de FT solúvel no sobrenadante das culturas, por ELISA; v) liberação de micropartículas expressando FT e fosfatidilserina (FS), por citometria de fluxo. Nossos resultados mostraram que ExoU foi responsável pelo aumento da expressão do mRNA e da concentração da glicoproteína FT tanto nos lisados quanto na superfície celular. Esse aumento foi revertido quando as bactérias foram tratadas com uma droga inibidora de PLA2 (MAFP), comprovando-se a dependência da atividade fosfolipásica A2 de ExoU para a modulação da expressão do FT. Células infectadas pela cepa PA103 induziram uma diminuição no tempo de coagulação do plasma humano normal e o aumento da hidrólise do substrato sintético utilizado no teste colorimétrico em comparação com as células infectadas com a cepa mutante, mostrando que o FT expresso era funcionalmente ativo. Foi também detectado um aumento na concentração de FT solúvel presente nos sobrenadantes de culturas infectadas por PA103 e no número de micropartículas expressando, simultaneamente, FT e FS em relação à cultura infectada pela cepa PA103&#8710;exoU. Os resultados obtidos nos testes in vitro foram validados pela demonstração de que a concentração de FT no parênquima pulmonar de camundongos infectados, por via intratraqueal, com a cepa selvagem foi significativamente superior à detectada nos animais infectados com a cepa mutante. / To evaluate the capacity of the P. aeruginosa toxin ExoU to induce the expression of tissue factor (TF) by epithelial respiratory cells from the BEAS-2B cell line, cells infected with the ExoU-producing PA103 bacterial strain were compared with cells infected with a mutant obtained by deletion of the exoU gene and with control non-infected cells in their i) expression of the TF mRNA, by RT-PCR; ii) expression of the protein TF in cell lisates and surfaces, by enzyme immunoassay (ELISA) and flow cytometry, respectively; iii) procoagulant activity by determining the ability of intact cells to induce the coagulation of normal human plasma and the ability of cell lysates to cleave the synthetic substrate of a chromogenic assay; iv) presence of soluble TF in cell culture supernatants, by ELISA and v) release of microparticles simultaneously expressing TF and phosphatidylserine, by flow cytometry. Cells infected with the wild type bacteria exhibited increased expression of TF mRNA 1 hour after infection and a positive modulation of TF expression in both cell lysates and cell surfaces. The enhancement of TF expression was inhibited when cells were infected with bacteria previously treated with a PLA2 inhibitor (MAFP), confirming that the ability of ExoU to modulate TF expression depended on its phospholipase A2 activity. Newly expressed TF was shown to be functionally active, by both the decrease in the clotting time of human plasma and the enhancement of the hydrolysis of the chromogenic assay substrate. Cells infected with the ExoU-producing bacteria exhibited also higher concentrations of soluble TF and of TF and PS bearing microparticles in the cell culture supernatants. These in vitro results were validated by our finding of increase TF concentrations in the lung parenchyma of mice infected intratracheally with the ExoU producing-bacteria at 24 h post-infection.

Para avaliar a capacidade da toxina ExoU de P. aeruginosa de induzir a expressão do fator tissular (FT) por células epiteliais respiratórias da linhagem BEAS-2B, células infectadas pela cepa PA103, produtora da toxina, foram comparadas com outras infectadas por cepa mutante obtida por deleção do gene exoU e com células controles não infectadas quanto a i) expressão do mRNA do FT, por RT-PCR; ii) expressão da proteína FT em lisados celulares, por ensaio imunoenzimático (ELISA), e na superfície celular, por citometria de fluxo; iii) atividade pró-coagulante das células, pela determinação da capacidade de indução de coagulação de plasma humano normal e do lisado celular, através de ensaio colorimétrico; iv) presença de FT solúvel no sobrenadante das culturas, por ELISA; v) liberação de micropartículas expressando FT e fosfatidilserina (FS), por citometria de fluxo. Nossos resultados mostraram que ExoU foi responsável pelo aumento da expressão do mRNA e da concentração da glicoproteína FT tanto nos lisados quanto na superfície celular. Esse aumento foi revertido quando as bactérias foram tratadas com uma droga inibidora de PLA2 (MAFP), comprovando-se a dependência da atividade fosfolipásica A2 de ExoU para a modulação da expressão do FT. Células infectadas pela cepa PA103 induziram uma diminuição no tempo de coagulação do plasma humano normal e o aumento da hidrólise do substrato sintético utilizado no teste colorimétrico em comparação com as células infectadas com a cepa mutante, mostrando que o FT expresso era funcionalmente ativo. Foi também detectado um aumento na concentração de FT solúvel presente nos sobrenadantes de culturas infectadas por PA103 e no número de micropartículas expressando, simultaneamente, FT e FS em relação à cultura infectada pela cepa PA103&#8710;exoU. Os resultados obtidos nos testes in vitro foram validados pela demonstração de que a concentração de FT no parênquima pulmonar de camundongos infectados, por via intratraqueal, com a cepa selvagem foi significativamente superior à detectada nos animais infectados com a cepa mutante. / To evaluate the capacity of the P. aeruginosa toxin ExoU to induce the expression of tissue factor (TF) by epithelial respiratory cells from the BEAS-2B cell line, cells infected with the ExoU-producing PA103 bacterial strain were compared with cells infected with a mutant obtained by deletion of the exoU gene and with control non-infected cells in their i) expression of the TF mRNA, by RT-PCR; ii) expression of the protein TF in cell lisates and surfaces, by enzyme immunoassay (ELISA) and flow cytometry, respectively; iii) procoagulant activity by determining the ability of intact cells to induce the coagulation of normal human plasma and the ability of cell lysates to cleave the synthetic substrate of a chromogenic assay; iv) presence of soluble TF in cell culture supernatants, by ELISA and v) release of microparticles simultaneously expressing TF and phosphatidylserine, by flow cytometry. Cells infected with the wild type bacteria exhibited increased expression of TF mRNA 1 hour after infection and a positive modulation of TF expression in both cell lysates and cell surfaces. The enhancement of TF expression was inhibited when cells were infected with bacteria previously treated with a PLA2 inhibitor (MAFP), confirming that the ability of ExoU to modulate TF expression depended on its phospholipase A2 activity. Newly expressed TF was shown to be functionally active, by both the decrease in the clotting time of human plasma and the enhancement of the hydrolysis of the chromogenic assay substrate. Cells infected with the ExoU-producing bacteria exhibited also higher concentrations of soluble TF and of TF and PS bearing microparticles in the cell culture supernatants. These in vitro results were validated by our finding of increase TF concentrations in the lung parenchyma of mice infected intratracheally with the ExoU producing-bacteria at 24 h post-infection.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Estreptococos do grupo B (EGB) comumente colonizam adultos saudáveis, sem sintomas, mas sob certas circunstâncias possui a capacidade de invadir tecidos do hospedeiro, evadir da detecção imunológica e causar doenças invasivas graves. Por conseguinte, os EGB continuam sendo uma das principais causas de mortalidade neonatal, pneumonia, sepse e meningite. Contudo, a patogênese desta infecção ainda está pouco elucidada. O sorotipo V é freqüentemente associado à doença invasiva em mulheres adultas não gestantes e o segundo mais prevalente em mulheres grávidas. O principal objetivo deste trabalho foi estudar a aderência, invasão e persistência intracelular de amostras pertencentes ao sorotipo V (88641-vagina/portador e 90186-sangue/paciente) usando as células epiteliais respiratórias A549. As amostras de EGB demonstraram capacidade de aderir e invadir as células epiteliais A549, mas somente a amostra 90186-sangue apresentou maior invasão quando comparada com a de vagina (P <0.001). Ambas as amostras demonstraram persistência intracelular sem replicação no interior das células A549. Apenas o isolado 90186-sangue sobreviveu dentro das células epiteliais até 24h de incubação (P <0,05). A fusão dos lisossomas das células epiteliais com vacúolos contendo bactérias foi observada em células A549 tratadas com Lyso Tracker Grenn DND-26 para todas as amostras testadas. Nossos dados indicam pela primeira vez que as amostras viáveis do sorotipo V permanecem dentro de vacúolos ácidos epiteliais. Curiosamente, a amostra 90186- sangue induziu vacuolização celular e a amostra 88641-vagina promoveu a morte celular após 7h de incubação. Finalmente, nossos resultados aumentam o nosso conhecimento sobre eventos celulares da fagocitose e da patogênese das doenças invasivas promovidas pelos EGB. / Group B Streptococcus (GBS) commonly colonizes healthy asymptomatic adults, yetunder certain circumstances displays the ability to invade host tissues, evade the immune system and cause serious invasive disease. Consequently, GBS remains the major cause of neonatal pneumonia, sepsis and meningitis. However, the pathogenesis of this infection is poorly understood. The serotype V is frequently associated with invasive diseases in non-pregnant adults and the second most prevalent in pregnant women. The aim of this work was to study the adherence; invasion and persistence intracellular of the GBS serotype V (88641-vagina/carriers and 90186-blood/patient) in epithelial cells A549. All GBS strains showed ability to adhere and invade the epithelial A549 cells, but GBS 90186-blood was more invasive than the vagina isolate (P<0,001). Both strains persisted intracellular, but without replicating into the A549 cells. Only 90186-blood strain survived within epithelial cells even after a 24h incubation (P<0,05). Fusion of epithelial lysosomes with bacteria containing phagocytic vacuoles was observed in A549 cells treated with Lysotracker Grenn DND-26 for all strains tested. Our data indicate for the first time that viable strains of serotype V remain within acidic epithelial vacuoles. Interestingly, the 90186-blood strain induced cellular vacuolization and 88641-vagina strain caused cell death after 7h incubation. Lastly, our results increase our knowledge about cellular events of phagocytosis and pathogeneses of GBS diseases.

O leite materno constitui uma rica fonte de nutrientes e peptídeos. O desmame precoce (DP) induz o aumento da proliferação e da diferenciação celular, e pode ser uma condição estressante capaz de elevar a corticosterona (CORT). Neste estudo, investigamos a interação entre padrão alimentar, CORT, TGF<font face=\"Symbol\">a e TGF<font face=\"Symbol\">b na regulação da proliferação celular na mucosa gástrica de ratos em desenvolvimento pós-natal. Utilizamos ratos Wistar em DP a partir do 15ºd, e observamos o aumento de CORT aos 16, 17 e 18d (p<0,05). No 17ºd, encontramos nível alto de TGF<font face=\"Symbol\">a e baixo de TGF<font face=\"Symbol\">b1 na mucosa gástrica (p<0,05). Para avaliarmos a ação da CORT, usamos o RU486, que ao reduzir a ação hormonal, estimulou a proliferação celular nos animais amamentados e DP (p<0,05), sem alterar os níveis de TGF<font face=\"Symbol\">a e TGF<font face=\"Symbol\">b. A sinalização para esses fatores foi estudada, e RU486 reduziu a ativação de ERK1/2 (p<0,05) no DP. Concluímos que a corticosterona circulante possui efeito antiproliferativo sobre a mucosa gástrica de ratos, e sua ação parece direta sem depender da regulação dos níveis de TGF<font face=\"Symbol\">a e TGF<font face=\"Symbol\">b. / Milk is a source of nutrients and active peptides. Early weaning (EW) leads to the increase of cell proliferation and differentiation, and can characterize a stressful condition to induce corticosterone (CORT). In the current study we investigated the interaction among dietary pattern, CORT, TGF<font face=\"Symbol\">a and TGF<font face=\"Symbol\">b on the regulation of cell proliferation in gastric mucosa of developing rats. We used Wistar rats submitted to EW on the 15thd, and we observed higher CORT levels throughout EW (p<0.05). At 17d, we also found higher TGF<font face=\"Symbol\">a and lower TGF<font face=\"Symbol\">b1 in the gastric mucosa (p<0.05). To evaluate CORT action, we used RU486 which antagonized the hormone and increased cell proliferation in both suckling and EW pups (p<0.05), without changing TGF<font face=\"Symbol\">a and TGF<font face=\"Symbol\">b1 levels. The signaling pathways triggered by these factors were studied and RU486 reduced ERK1/2 phosphorylation (p<0.05) in EW. We conclude that CORT is repressive for cell proliferation in the rat gastric mucosa, and its action seems to be direct, i.e. independent of TGF<font face=\"Symbol\">a and TGF<font face=\"Symbol\">b regulation.

O patótipo de Escherichia coli diarreiogênica denominado E. coli enteroagregativa (EAEC) é caracterizado pela expressão do padrão de adesão agregativo (AA) em células epiteliais cultivadas. Amostras de EAEC são classificadas como típicas ou atípicas, dependendo da presença ou não do gene aggR, respectivamente. O padrão AA no teste de adesão em células epiteliais é o diagnóstico padrão para a classificação de EAEC. Técnicas moleculares, como a PCR multiplex, são alternativas a esse teste. No presente estudo foi desenvolvida uma PCR multiplex para o diagnóstico molecular de EAEC típica e atípica, baseada na detecção dos genes aatA, aggR, aaiA e aaiG. A partir de colônias isoladas de E. coli de origem fecal o teste apresentou sensibilidade de 94,8%, especificidade de 94,7%, valor preditivo de teste positivo de 74,3% e valor preditivo de teste negativo de 99,1%. O teste desenvolvido mostrou-se uma alternativa diagnóstica sensível e específica para EAEC e permite um acréscimo significativo na detecção de EAEC atípica. / The diarrheagenic Escherichia coli pathotype known as enteroaggregative E. coli (EAEC) is characterized by the expression of the aggregative adherence pattern (AA) on cultured epithelial cells. EAEC strains are classified as typical or atypical, depending on the presence or absence of the aggR gene, respectively. The AA pattern in the adherence assay with epithelial cells is the gold standard diagnostic for EAEC. Molecular techniques, such as multiplex PCR, are alternatives to this test. In the present study we developed a multiplex PCR for the molecular diagnostic of typical and atypical EAEC, based on the detection of aatA, aggR, aaiA and aaiG genes. The test presented 96.5% of sensitivity, 94.8% of specificity, 74.3% of positive predictive value and 99.1% of negative predictive value, when tested in isolated colonies of E. coli from feces. The test developed is a sensitive and specific diagnostic alternative for EAEC and allows a significant increase in atypical EAEC detection.

Orientador: Juliano Vilaverde Schmitt / Resumo: FUNDAMENTOS: As queratoses actínicas são lesões pré-malignas com risco de transformação para carcinoma espinocelular invasivo. OBJETIVOS: Correlacionar as características clínicas das queratoses actínicas dos antebraços e dorso das mãos com o grau de atipia do exame histológico (Keratinocyte Intraepidermal Neoplasia) e a expressão lesional e perilesional de p53 e Ki-67; desenvolver e validar uma escala de gravidade clínica que possa inferir o grau histológico das queratoses actínicas. MÉTODOS: Estudo transversal em que foram avaliadas clinicamente 162 queratoses actínicas quanto ao diâmetro, eritema, infiltração, hiperqueratose e exulceração e biopsiadas 34 lesões com diferentes padrões. As características clínicas foram correlacionadas com o grau de atipia histológica e expressão de p53 e Ki-67. RESULTADOS: As características clínicas apresentaram baixa consistência entre si (Cronbach=0,24). Apenas o diâmetro das lesões se correlacionou significativamente com o grau de atipia (p=0,04), e apenas o eritema, a hiperqueratose e o diâmetro se correlacionaram com as marcações imuno-histoquímicas. Foi desenvolvido um escore clínico incluindo o diâmetro, a hiperqueratose e a exulceração, o qual se correlacionou significativamente com o grau de atipia (Rho de Spearman=0,43; p=0,01). LIMITAÇÕES DO ESTUDO: O escore obtido não pode ser extrapolado para áreas que não sejam os antebraços e dorso das mãos; não houve seguimento prospectivo dos pacientes; não incluímos pacientes com genoderm... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: BACKGROUND: Actinic keratosis are pre-malignant lesions with risk of transformation for invasive squamous cell carcinoma. OBJECTIVES: To correlate the clinical features of actinic keratosis of the forearms and dorsum of the hands with its histological features (Keratinocyte Intraepidermal Neoplasia) and p53 and Ki-67 staining in the lesion and around the lesion; develop and validate a clinical severity scale that can infer the histological grade of actinic keratosis. METHODS: A cross-sectional study in which 162 actinic keratosis were clinically evalueted for diameter, erythema, infiltration, hyperkeratosis and exulceration, and 34 lesions with different patterns were biopsied. Clinical features were associated with degrees of atypia and p53 and Ki-67 staining. RESULTS: Clinical features were low in consistency (Cronbach=0.24). Only the diameter of the lesions was significantly correlated with the degree of atypia (p=0.04), and only erythema, hyperkeratosis and diameter were correlated with immunohistochemical staining. A clinical score including the diameter, hyperkeratosis and exulceration was developed, with significant correlation with the degree of atypia (Spearman's Rho=0.43; p=0.01). LIMITATIONS: The developed score can not be extrapolated to areas other than the forearms and back of the hands; there was no prospective follow-up of the patients; we did not include patients with genodermatosis or immunosuppressed patients. CONCLUSION: Clinical features of actinic kerato... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Introdução: Pacientes com Polipose Adenomatosa Familiar (PAF) tem maior risco de desenvolvimento de carcinoma duodenal em comparação com a população em geral, sendo a classificação de Spigelman adotada como método de estadiamento da adenomatose duodenal em doentes com PAF. No entanto, a relação entre a gravidade da polipose duodenal e variáveis clínicas não é bem compreendida. Objetivos: 1) Avaliar, através do método endoscópico, a prevalência e a intensidade da adenomatose duodenojejunal em pacientes com PAF em nosso meio. 2) Verificar a associação de variáveis clínicas, com a gravidade fenotípica da adenomatose duodenal e ampular. Metodologia: Foram estudados prospectivamente, 62 pacientes com diagnóstico de PAF, atendidos no Ambulatório de Poliposes Intestinais do Departamento de Gastroenterologia do Hospital das Clínicas da Universidade de São Paulo. Os pacientes foram submetidos à duodenoscopia, classificados segundo Spigelman e a presença ou não de adenomas ampulares. Os pacientes foram distribuídos em dois grupos: Estadio de Spigelman de 0 a II, e Estadio III e IV. Estes grupos foram relacionados com variáveis clínicas, tais quais: sexo, idade, antecedentes familiares positivos de PAF, tipo de cirurgia do cólon, e tipo de polipose colônica. Naqueles pacientes classificados como Spigelman III e IV foi realizada enteroscopia assistida por balão via anterógrada para avaliação do jejuno. Resultados: Quarenta e nove pacientes foram classificados como estadios de Spigelman 0, I ou II, e 13 pacientes como estadios III ou IV. A análise da correlação destes grupos foi estatisticamente significativa com a variável história familiar (p = 0,03). Naquelas famílias que apresentaram vários parentes inclusos neste estudo, observou-se estadio de Spigelman similar entre os diferentes parentes de cada família. Sete pacientes apresentaram adenomas menores da papila duodenal. A associação da presença de adenoma de papila com a variável manifestações extraintestinais (p= 0,009) foi estatisticamente significante na análise multivariável. Enteroscopia assistida por balão foi realizada em 12 pacientes, dos quais 10 apresentaram adenomas tubulares com displasia de baixo grau no jejuno proximal. Conclusões: 1. A prevalência da adenomatose duodenal avançada e de adenomas ampulares é clinicamente significativa na PAF em nosso meio. 2. A prevalência de adenomas jejunais em pacientes com adenomatose duodenal avançada é alta, apesar de não serem lesões clinicamente significativas. No entanto, enteroscopia deve ser indicada de forma individualizada em casos de polipose duodenal avançada na avaliação da extensão do acometimento jejunal. 3. A intensidade da adenomatose duodenal pode ser previsível a partir da gravidade da adenomatose duodenal de algum parente de primeiro grau. 4. A presença de manifestações extracolônicas reforça a necessidade de avaliação da região da papila de Vater, desde que houve associação independente entre a presença de adenomas ampulares e as mesmas / Background: Patients with Familial Adenomatous Polyposis (FAP) have higher risk of duodenal cancer development compared with the general population. Spigelman classification has been adopted as the staging method of duodenal adenomatosis in patients with FAP. However, the relationship between the severity of duodenal polyposis and clinical variables is not well understood. Objectives: 1) To assess endoscopically, the prevalence and intensity of duodenojejunal adenomas in patients with FAP in our population. 2) To correlate clinical variables with the phenotypic severity of duodenal and ampullary adenomatosis. Methods: We prospectively studied 62 patients with FAP, attended at Intestinal polyposis Clinic of the Department of Gastroenterology, Clinics Hospital, University of São Paulo. Patients underwent duodenoscopy and were classified according to Spigelman and the presence or absence of ampullary adenomas. Patients were divided into two groups: Spigelman 0 to II and Stage III and IV. These groups were related to the clinical variables: gender, age, family history for FAP, type of colorectal surgery, and type of polyposis of the colon. Patients classified as Spigelman III and IV were submitted to balloon assisted enteroscopy for evaluation of the jejunum. Results: Forty-nine patients were staged as Spigelman 0, I or II, and 13 as stage III or IV. There was statistic significant correlation between these groups and family history (p = 0,03). Families that had several relatives included in this study showed that there was a similar Spigelman stage in different relatives of each family. Seven patients had minor ampullar adenomas. Association between ampullary adenomas and extraintestinal manifestations (p = 0.009) was statistically significant in multivariavel analysis. Balloon assisted enteroscopy was performed in 12 patients. Ten of those presented tubular adenomas with low grade dysplasia in the proximal jejunum. Conclusions: 1. The prevalence of advanced duodenal adenomatosis and ampullary adenomas is clinically significant in FAP patients of our population. 2. The prevalence of jejunal adenomas in patients with advanced duodenal adenomatosis is high, although lesions were not clinically significant. Indication for enteroscoDpy should be individualized in patients with advanced duodenal disease to evaluate jejunal disease. 3. The intensity of duodenal adenomatosis can be predicted upon the severity of duodenal polyposis of a first-degree relative. 4. The presence of extracolonic manifestations reinforces the importance for avaliation of the Vater Papilla since there was an independent association between ampullary adenomas and extracolonic manifestations