A coleta de sêmen da cauda do epidídimo é a última oportunidade de obter espermatozoides de garanhões valiosos, sendo que durante a criopreservação, a etapa de centrifugação é considerada um ponto crítico. A principal hipótese é que a centrifugação com coloides pode melhorar a qualidade dos espermatozoides coletados da cauda do epidídimo de garanhões. Para avaliação da hipótese foram realizados dois experimentos. O experimento um teve por objetivo avaliar o efeito da centrifugação com cushion e com coloide em camada única (SLC) na motilidade de sêmen do epidídimo de garanhões após a etapa de centrifugação. O experimento dois teve o objetivo de determinar o efeito da SLC prévio ao congelamento e após o descongelamento. Experimento 1) Oito garanhões foram submetidos à orquiectomia bilateral e o sêmen foi coletado da cauda dos epidídimos (n=16). Após a coleta, as amostras foram submetidas a três protocolos de centrifugação: Convencional (20 minutos a 600xg), cushioned (20 minutos a 900xg) e SLC (20 minutos a 300xg). Os pellets foram ressuspendidos e as amostras foram submetidas à avaliação laboratorial de motilidade e morfologia espermática. Experimento 2) Dez garanhões foram submetidos a orquiectomia bilateral e o sêmen foi coletado da cauda dos epidídimos (n=20). Para criopreservação, as amostras foram submetidas a: centrifugação convencional (20 minutos a 600xg), SLC prévio a criopreservação (SLC-Pre) (20 minutos a 300xg) e SLC após a criopreservação (SLC+) (20 minutos a 600xg seguidos de uma segunda centrifugação descrita após descongelamento). Os pellets foram ressuspendidos em diluente de congelamento, submetidos ao processo de congelamento em nitrogênio líquido e descongelamento. Os grupos de 6 centrifugação convencional e SLC-Pre foram avaliados imediatamente após descongelamento. O grupo SLC+ foi descongelado e submetido à SLC (20 minutos a 300xg) e ressupendido em diluente de congelamento (SLC+F) ou resfriamento (SLC+C). A motilidade total e a motilidade progressiva das amostras foram avaliadas com análise computadorizada do movimento espermático. A morfologia foi avaliada com auxílio de microscópio com contraste de fase. Funcionalidade de mitocôndria, integridade de membrana e DNA foram avaliados com auxílio de microscópio de fluorescência. Os dados foram analisados por estatística descritiva, simple one-way ANOVA e Teste de Tukey. Experimento 1) a motilidade de espermatozoide submetidos à SLC (p<0,05) e cushion (p>0,05) foi superior do que os submetidos a centrifugação convencional. Experimento 2) SLC-Pre e SLC+F apresentaram maior motilidade total, enquanto SLC+F apresentou maior motilidade progressiva. O percentual de espermatozoides com morfologia normal foi maior em SLC-Pre e SLC+F. A funcionalidade de mitocôndria foi maior em todos grupos com SLC, enquanto a integridade de membrana foi maior em SLC-Pre. A centrifugação com coloides melhorou a qualidade de espermatozoides coletados da cauda do epidídimo de garanhões, tanto no momento prévio ao congelamento como após o descongelamento. / Epididymis cauda sperm recovery and cryopreservation are last opportunity to obtain spermatozoa from a valuable animal, even though during cryopreservation centrifugation step is considered as a critical point. It is hypothesized that colloidal centrifugation could enhance epididymal stallion sperm parameters. To evaluate this hypothesis two experiments were performed. In experiment one, the objective was to evaluate the effect of cushioned and Single Layer Centrifugation (SLC) on epididymal stallion sperm motility postcentrifugation. In experiment two, the objective was to determine the effect of SLC on epididymal stallion sperm quality pre-freezing and post-thawing. Experiment 1) Eight stallions were submitted to bilateral orchiectomy and the resulting epididymal cauda (n = 16) were flushed with semen extender. After harvesting, samples were submitted to three centrifugation protocols: conventional (20 minutes at 600xg), cushioned (20 minutes at 900xg), and SLC (20 minutes at 300xg). Pellets were resuspended, motility and morphology were evaluated. Experiment 2) Ten stallions were submitted to bilateral orchiectomy and epididymal cauda (n=20) were harvested. For cryopreservation, epididymal sperm were submitted to: conventional centrifugation (20 minutes at 600xg), Single Layer Centrifugation prior cryopreservation (SLC-Pre) (20 minutes at 300xg) and Single Layer Centrifugation after cryopreservation (SLC+) (20 minutes at 600xg followed by a second centrifugation described after thawing). Pellets were resuspended in freezing extender, submitted to cryopreservation process in liquid nitrogen and thawed. Conventional and SLC-Pre were evaluated immediately after thawing. SLC+ samples were thawed, submitted to SLC (20 minutes at 300xg) and the pellets were resuspended with freezing (SLC+F) and cooling extender (SLC+C). Total motility (TM) and progressive 8 motility (PM) were evaluated with computer-assisted semen analyses. Sperm morphology was evaluated under a phase-contrast microscope. Mitochondrial functionality, membrane e DNA integrity were evaluated with an epifluorescence microscope. Data was evaluated by descriptive statistics, simple one-way ANOVA and comparison between means by Tukey test. Significance was assigned to all values p<0.05. Experiment 1) Motility of spermatozoa recovered by SLC (p<0.05) and cushioned centrifugation (p>0.05) were higher than those recovered by conventional centrifugation. Experiment 2) SLC-Pre and SLC+F yielded the highest TM, while SLC+F yielded the highest PM. Higher morphological normal sperm was observed in SLC-Pre and SLC+F. Mitochondrial functionality was significantly higher in all treatments with SLC, while membrane integrity was higher in SLC-Pre. Colloidal centrifugation improved epididymal sperm quality before freezing and after thawing.

Introdução: Em torno de 15% dos casais apresentam o diagnóstico de infertilidade, sendo que 50% se devem a fatores masculinos. Diversos testes de função espermática são propostos para a avaliação da fertilidade, mas o espermograma é o principal exame para o diagnóstico de infertilidade masculina. O valor prognóstico das características seminais como concentração, morfologia e motilidade como marcadores de infertilidade masculina é confundido. A avaliação desses e a classificação quanto à normalidade dos mesmos permanece sendo tema de discussão frequente. Objetivos: Comparar as diferentes classificações de parâmetros seminais (OMS 1999, OMS 2010 e TMSC) e avaliar as características de pacientes em terapia de reprodução humana assistida que se relacionam com esses parâmetros. Métodos: Foi realizado estudo longitudinal, retrospectivo, baseado em revisão de banco de dados para avaliar as características e parâmetros seminais e comparar as mesmas conforme as classificações da OMS de 1999, OMS de 2010 e TMSC de 477 homens submetidos a investigação de infertilidade ou tratamentos de reprodução assistida na clínica Generar – Reprodução Humana, entre 2011 e 2015. Resultados: 401 pacientes tiveram alguma alteração pela OMS 1999, 223 pela OMS 2010 e 200 pela TMSC. O critério que mais alterou a condição de uma amostra seminal de anormal em 1999 para normal em 2010 foi a morfologia. Conclusão: Os parâmetros se tornaram menos rígidos de 1999 para 2010 alterando significativamente a proporção de indivíduos que deixaram de ser classificados como inférteis. A classificação baseada no TMSC pode ser útil na indicação de alguns tratamentos, mas não pode definir um indivíduo como fértil ou infértil em função de não levar em consideração a morfologia espermática. / Background: Approximately 15% of couples presenting the diagnosis of infertility, and 50% of cases are due to male factors. Several sperm function testing is proposed for the evaluation of male fertility, but sperm is the first test for the diagnosis of male infertility causes. The prognostic value of the seminal characteristics as concentration, morphology and motility as male infertility markers is often confused. Evaluation of semen parameters and classification for normality remains frequent topic of discussion. Objectives: Compare the different classifications of seminal parameters (OMS 1999, WHO 2010 and TMSC) and evaluate the characteristics of patients treated in assisted reproduction therapy relating to these parameters. Methods: Retrospective study based on chart review evaluated 477 semen samples from men undergoing investigation or infertility treatments in assisted reproduction between 2011 and 2015. Results: 401 patients were considered abnormal by the WHO 1999, 223 by WHO 2010 and 200 for TMSC. The criteria that most changed the classification was sperm morphology. Conclusion: The parameters have become less rigid 1999 to 2010 significantly changing the proportion of individuals who are no longer classified as infertile. The classification based on TMSC can’t define an individual as fertile or infertile regardless due to not take into account the sperm morphology, but may be helpful when it comes to the indication of the intrauterine insemination.

Dissertação(mestrado)-Universidade Federal do Rio Grande, Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura, Instituto de Oceanografia, 2010. / Submitted by Cristiane Silva (cristiane_gomides@hotmail.com) on 2012-08-10T16:06:33Z No. of bitstreams: 1 dissertao de mestrado miguel arevalo verso final 17 dez.pdf: 420839 bytes, checksum: 64ff3d268feb1d323ccab7c0a2ffa80c (MD5) / Approved for entry into archive by Bruna Vieira(bruninha_vieira@ibest.com.br) on 2012-08-21T17:39:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dissertao de mestrado miguel arevalo verso final 17 dez.pdf: 420839 bytes, checksum: 64ff3d268feb1d323ccab7c0a2ffa80c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-21T17:39:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertao de mestrado miguel arevalo verso final 17 dez.pdf: 420839 bytes, checksum: 64ff3d268feb1d323ccab7c0a2ffa80c (MD5) Previous issue date: 2010 / O camarão-rosa Farfantepenaeus duorarum é um importante recurso pesqueiro que apresenta distribuição no Oceano Atlântico desde o estado de Maryland nos EUA até a Bahia de Ascensión, no estado de Quintana Roo no México. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a qualidade reprodutiva e nutricional de machos mediante a contagem e caracterização de células espermáticas originados de camarões mantidos em sistemas convencionais com água clara e sistema de bioflocos. O experimento foi desenvolvido em uma fase de terminação (60 dias), pré-maturação (30 dias) e de desempenho reprodutivo (45 dias). Os machos foram submetidos a três tratamentos: BF+P bioflocos com ração comercial 35 % PB ; BF+PF biofloco com alimento fresco e ração e CR+PF água clara com alimento fresco e ração. Na fase de desempenho reprodutivo os camarões de todos os tratamentos seguiram para a sala de maturação onde foram alimentados com alimento fresco. Os parâmetros de qualidade de água durante as três fases do experimento não mostraram diferença significativa entre tratamentos (P>0,05) e estiveram nos níveis adequados para o cultivo de camarões. Durante a fase de desempenho reprodutivo, não foram encontradas diferenças significativas (P>0,05) no número de células espermáticas totais entre tratamentos, sendo que o tratamento CR+PF apresentou 8,9±5,83 x106 células e os tratamentos BF+P e BF+PF apresentaram 12,35±10,2 e 12,96±5,2 x106 células respectivamente, com uma percentagem maior que 96% em todos os tratamentos, após um período de 45 dias de desempenho reprodutivo. Não houve diferença significativa (P>0,05) nos dados de Índice Gonodosomático, entre tratamentos, na monstragem inicial nem na amostragem final. Os dados de metabólitos na gônada dos machos não apresentaram diferença significativa (P>0,05) entre tratamentos. Os dados de Triglicerídeos e Colesterol na gônada não apresentaram diferença significativa. Já os dados de proteínas totais no tratamento CR+RF foram diferentes estatisticamente dos tratamentos BF+R e BF+RF. O Tratamento BF+P demonstrou ser uma opção para preparar machos reprodutores de F. duorarum. / The pink shrimp Farfantepenaeus duorarum it is an important fishery resource in Mexican Gulf. Its distribution in the Atlantic Ocean ranges from Maryland state (USA) to the Bay of Ascencion in the Quintana Roo state (Mexico). The objective of this study was to evaluate the reproductive and nutritional quality of males by counting and characterization of sperm cells originating from clear water and biofloc water system. The experiment was conducted in a final period (60 days), pre-maturity (30 days) and reproductive performance (45 days). The males were assigned to tree treatments: BF+P, Bioflocs with commercial feed 35%CP ; BF+PF biofloc with fresh food and commercial feed and CR+PF clear water with fresh food and commercial feed. The water quality parameters during the three phases of the experiment showed no significant differences among treatments (P> 0.05) and were at the levels appropriate for shrimp farming. During the reproductive performance, there were no significant differences (P> 0.05) in the total number of sperm cells between treatments. The CR+FP treatment showed 8.9 ± 5.83 x106 cells and treatments BF+P and BF+PF showed 12.35±12.96 and 10.2±5.2 x106 cells respectively, with a greater percentage to 96% in all treatments even after a period of 45 days of reproductive performance. There was no significant difference (P> 0.05) in the Gonodosomatic Index between treatments in initial sample and final sample. Data of metabolites of male gonad showed no significant difference (P>0.05) between treatments. Levels of Triglycerides and Cholesterol in the gonad showed no difference, since the data of total protein treatment CR+PF was statistically different (P< 0.05) treatments BF+R and BF+R F. The BF+P treatment demonstrated in this work is an option for preparing F. duorarum males.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-01-30T11:04:36Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Arthur Francisco Júnior.pdf: 1488392 bytes, checksum: 48308d252d06dcc28ec7f91907c90eec (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-01-30T13:36:00Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Arthur Francisco Júnior.pdf: 1488392 bytes, checksum: 48308d252d06dcc28ec7f91907c90eec (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-30T13:36:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Arthur Francisco Júnior.pdf: 1488392 bytes, checksum: 48308d252d06dcc28ec7f91907c90eec (MD5) Previous issue date: 2014-08-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / This study was conducted to evaluate the effect of adding L-acetyl-cysteine (CIS) as anti oxidant agent to extender used for sperm cryopreservation of equine Mangalarga Marchador. Three semen samples from seven healthy stallions were obtained by artificial vagina, diluted in commercial extender and distributed into two treatments: control without addition and CIS, containing the antioxidant concentration of 2.5 mM. After the stabilization period, the samples were filled into 0.5 mL straws and subjected to cryopreservation protocol manually. Sixty days after the samples were thawed and evaluated in vitro by means of computerized analysis of sperm kinetics (CASA) and the evaluation of the integrity of plasma and acrosomal membranes by fluorescent probes. Regarding the kinetic variables related to sperm was found that in samples supplemented with CIS percentage of total and progressive motility (TM) (MP) was higher (P <0.01) compared to control samples (23.95±3 , 33 X 11 .38±2.35 and 4.66 ± 0.84 X 2.04 ± 0.36, respectively), but variable for straightness (STR) and linearity (LIN) the percentages were highe r (p ≤ 0.01) for the control samples (86.95 ± 1.02 X 82.28 ± 1.02 and 49.85 ± 1.32 X 45.19 ± 1.17, respectively). As those related to the integrity of the membranes of the sperm variables was superior (P <0.05) in the number of sperm with intact acrosome reaction (ICRA) in the samples compared to those CIS Control (4.7 ± 1.6 x 0.8 ± 0.2, respectively). The results suggest that the addition of acetyl-L-cysteine concentration of 2.5 mM in the diluent medium before cryopreservation can improve both the motility as the integrity of the sperm plasma membrane equine Mangalarga Marcher. More studies should be done to confirm this effect in vivo. / Esse estudo foi conduzido com o objetivo de avaliar o efeito da adição de L-acetilcisteína (CIS) como agente anti oxidante ao meio diluente utilizado para criopreservação de espermatozóides de equinos da raça Mangalarga Marchador. Três amostras seminais de sete garanhões hígidos foram obtidas por meio de vagina artificial, diluídas em meio comercial e distribuídas em dois tratamentos: controle, sem adição e CIS, contendo o antioxidante na concentração de 2,5 mM. Após o período de estabilização as amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL e submetidas ao protocolo de criopreservação manual. Sessenta dias após as amostras foram descongeladas e avaliadas in vitro por meio da análise computadorizada da cinética espermática (CASA) e da avaliação da inte gridade das membranas plasmática e acrosomal por meio de sondas fluorescentes. Em relação às variáveis relacionadas à cinética espermática verificou-se que nas amostras suplementadas com CIS o percentual de motilidade total (MT) e progressiva (MP) foi superior (P<0,01) em relação às amostras controle (23,95±3,33 X 11,38±2,35 e 4,66±0,84 X 2,04±0,36, respectivamente), mas para as variáveis retilinearidade (STR) e linearidade (LIN) os percentuais foram maiores (P≤0,01) para as amostras Controle (86,95±1,02 X 82,28±1,02 e 49,85±1,32 X 45,19±1,17, respectivamente). Quanto às variáveis relacionadas à integridade das membranas do espermatozóide houve superioridade (P<0,05) no número de espermatozóides íntegros com reação acrossomal (ICRA) nas amostras CIS em relação àquelas controle (4,7±1,6 X 0,8±0,2, respectivamente). Os resultados sugerem que a adição de L-acetil-cisteína na concentração de 2,5 mM ao meio diluente antes da criopreservação pode melhorar tanto a motilidade quanto a integridade da membrana plasmática de espermatozóides de equinos da raça Mangalarga Marchador. Mais estudos devem ser feitos para comprovar esse efeito in vivo.

Esse estudo foi realizado de maneira prospectiva e randomizada com o objetivo de comparar duas técnicas de vasectomia. Foram avaliados 644 pacientes. Na técnica sem bisturi foram utilizadas duas pinças específicas. O tempo médio da técnica sem bisturi foi de 20,95 minutos e da convencional 22,95. Infecção de ferida operatória e epididimites foram menores na técnica sem bisturi. Não houve diferença entre as técnicas nas complicações intra-operatórias e pós-operatórias. Dez pacientes apresentaram espermatozóides vivos no espermograma de controle. A técnica sem bisturi apresenta um menor tempo cirúrgico e um menor índice de infecção que a técnica convencional. O índice de falha foi semelhante em ambas as técnicas / This study was carried out with objective of comparison two techiniques of vasectomy. Six hundred and fourteen four patients were assessed. For the no-scalpel technique, two specific clamps were used. The operating time for the no scalpel technique was less than for the conventional technique. There was a smaller percentage of infection of the operative wound and epididymitis in the no scalpel technique. There was no difference between the techniques with respect to complications during the operation and later complications. The no scalpel technique requires less time in surgery and has a lower infection rate than the conventional technique. The failure rate was similar for both techniques

Machos dos opiliões goniosomatíneos Serracutisoma spelaeum e Serracutisoma guaricana, cujas fêmeas copulam com mais de um parceiro em um único período reprodutivo, apresentam uma grande variedade morfológica, especialmente relacionada a caracteres sexuais secundários. Considerando-se que machos menores frequentemente perdem disputas por fêmeas, esta tese objetivou verificar possíveis estratégias reprodutivas alternativas, resultantes de seleção sexual pré e pós-copulatória, adotadas por machos de pequeno porte dessas espécies assim como o papel da fêmea nesses mecanismos. Este trabalho foi, então, dividido em três capítulos, cada um com objetivos específicos. O primeiro deles refere-se à organização do trato reprodutor feminino e caracterização das espermatecas, órgãos de armazenamento de espermatozóides. Imagens de microscopia de luz e de microscopia eletrônica de varredura associadas às obtidas sob estereomicroscópio revelaram a existência de quatro espermatecas inseridas na musculatura da porção distal do ovipositor. Cada uma delas é constituída por quatro sáculos individuais de fundo cego e se comunica com a luz do ovipositor através de um único canal. A complexidade das espermatecas indica que a fêmea pode ser capaz de armazenar separadamente os espermatozóides dos diferentes machos com os quais vier a copular, enquanto a musculatura ao redor dessas estruturas sugere que ela possa determinar a paternidade de sua progênie através de contrações diferenciais. O capítulo 2 abrange observações comportamentais e características morfológicas e morfométricas do trato reprodutor masculino, objetivando identificar possíveis estratégias alternativas utilizadas por machos de pequeno porte na obtenção de sucesso reprodutivo. Para tal, foram efetuados acompanhamento do comportamento sexual e estudos morfométricos de genitália e da gônada. Machos de pequeno porte parecem adotar a estratégia de machos-satélites, copulando com as fêmeas quando machosguardiões estão com a atenção desviada. A ausência de diferenças estatísticas significativas na largura da placa ventral sugere que o pênis de machos grandes e de machos pequenos se ajustam à genitália feminina da mesma maneira e, portanto, sejam vii avaliados pelas fêmeas da mesma forma. Já a semelhança no comprimento da genitália e o menor tamanho corpóreo dos machos pequenos indicam que, durante a cópula, eles poderiam alcançar regiões mais profundas da espermateca, removendo ou deslocando os espermatozóides dos outros machos e, consequentemente, diminuindo o risco de competição espermática. A análise ultraestrutural dos espermatozóides (compostos por núcleo, citoplasma e acrossomo, além de diversas projeções na superfície) mostrou que, provavelmente, todos os machos possuam espermatozóides viáveis, visto que espermatozóides não-férteis, em geral, não possuem acrossomo. As similaridades entre machos de grande e de pequeno porte tanto na morfologia dos gametas como em seu comprimento indicam que tais características possam ter sido objeto de seleção sexual pós-copulatória. O terceiro capítulo propõe uma hipótese para a formação das projeções encontradas nos espermatozóides das duas espécies e que lhes confere uma morfologia peculiar. Para isso foi utilizada a associação de três técnicas de microscopia: microscopia eletrônica de transmissão, de varredura e confocal de varredura a laser. Os resultados obtidos evidenciam que essas estruturas são formadas ao longo do processo de espermatogênese. Uma rede de proteínas situada logo abaixo da membrana plasmática exerceria uma pressão sobre o citoplasma, que extravasaria pelos espaços existentes nessa espécie de malha. Dessa forma, as projeções seriam constituídas de citoplasma envolto por membrana plasmática. Em conclusão, os resultados obtidos na presente tese sugerem que a competição espermática e a escolha críptica da fêmea, componentes da seleção sexual póscopulatória, são pressões seletivas atuantes nessas duas espécies de opilião. / Males of the goniosomatine harvestmen Serracutisoma spelaeum and Serracutisoma guaricana, which females may copulate with more than one partner during the same reproductive season, show a large morphological variation, especially considering secondary sexual features. Since smaller males frequently lose fights against larger males for females, the present thesis aimed at verifying the occurrence of alternative reproductive strategies among these smaller males as a result of pre- and postcopulatory sexual selection, as well as the role of the female in these mechanisms. This study is composed of three chapters, each one with specific objectives, as described as follows. The first chapter describes the general organization of the female reproductive system and the spermathecae, structures for the storage of sperm. Ligth and scanning electronic microscopy images revealed the presence of four spermathecae inserted in the musculature of the distal portion of the ovipositor. Each spermatheca is composed of four individual dead-end sacs and is connected to the ovipositor lumen through a single channel. This complex spermathecae structure indicates that the female is able to store sperm from different males with which she copulates in different places, and that the musculature that involves these structures may be responsible for differential contractions which would result in different paternity for the females descendants. The second chapter includes behavioral observations and morphological and morphometric analysis of the male reproductive system (genitalic and gonadal features), aiming at identifying possible alternative reproductive strategies used by small males to achieve reproductive success. Small males seem to adopt a satellite-male strategy, copulating with females when larger guardian-males are not paying attention. The absence of significant statistic differences in the width of its ventral plate suggests that the penis of both large and small males may adjust to the female genitalia in the same way and, therefore, will be similarly evaluated by the female during copulation. In turn, the smaller length associated to the same sized penis of smaller males in comparison to the larger ones may indicate that they may reach deeper regions of the female genitalia during copulation, possibly removing or displacing the sperm of other males and, in consequence, reducing the risk of sperm competition. The ultrastructure analysis of the spermatozoa (which are composed of a nucleus, cytoplasm and an acrosome, in addition to several surface projections) showed that probably males of different sizes all have viable sperm, since generally non-fertile spermatozoa lack an acrosome. Similarities in the morphology and size of the gametes of both small and large males may indicate that these features have been subjected to postcopulatory sexual selection. The third chapter suggests a new hypothesis for the development of the projections found in the surface of the spermatozoa of the two species here studied. For this study, three microscope techniques were used: transmission electronic microscopy, scanning electronic microscopy, and confocal laser scanning microscopy. The results show that these projections are formed during the spermatogenesis. A net of proteins situated just below the plasmatic membrane restrains the cytoplasm, which flows through the spaces formed in the net, forming the projections, which are externally limited by plasmatic membrane. In conclusion, the results obtained in the present study suggest that sperm competition and female cryptic choice, which are components of the postcopulatory sexual selection process, are selection pressures working on the species studied herein.

Na cascavel Crotalus durissus terrificus ocorre o armazenamento de longo prazo do esperma (LTSS), no trato genital da fêmea, durante o intervalo entre a cópula (outono) e a ovulação (primavera). Peptídeos e peptidases estão entre os principais componentes que influenciam a atividade espermática em mamíferos. O presente estudo objetivou caracterizar a presença de peptidases em C. d. terrificus, com esta função reconhecida em mamíferos e/ou que clivam peptídeos atuantes nesta função, bem como avaliar a hipótese do envolvimento destas peptidases na preservação dos espermatozóides desta serpente. O aspecto morfo-funcional dos espermatozóides foi comparado na presença dos peptídeos angiotensina II (AngII), arginina vasotocina (AVT), bradicinina (BK), peptídeo promotor da fecundação (FPP) e hormônio liberador de tireotrofina (TRH). Caracterizamos os efeitos de agentes quelante, tiol-redutor, cofator e inibidores, bem como dos peptídeos supracitados, sobre as atividades enzimáticas relacionadas, quais sejam: aminopeptidases ácida (APA), básica (APB), alanil sensível (APN-PS) e insensível à puromicina (APN-PI), cistil (CAP), dipeptidil-peptidase IV (DPPIV), piroglutamil tipo 1 (PAP-I) e prolil-imino- (PIP), bem como da prolil endopeptidase (POP), em frações solúvel (FS) e/ou de membrana solubilizada (FM) do sêmen proveniente do ducto deferente, assim como deste próprio tecido e dos tecidos uterino e vaginal de C. d. terrificus, ou seja, tecidos por onde passam ou armazenam-se os espermatozóides. Verificamos a variação sazonal destas mesmas atividades, nestes tecidos, incluindo o sêmen armazenado no útero durante o LTSS. O sêmen coletado do ducto deferente foi fracionado para avaliação da distribuição destas atividades peptidásicas. Nossos dados mostraram características de liquefação do sêmen e movimento dos espermatozóides da cascavel que os diferenciam do padrão humano. FPP com cálcio e BK melhoraram a preservação da viabilidade espermática, similarmente ao que ocorre em mamíferos. Em todos os tecidos e no sêmen as atividades APB, PIP e POP foram detectadas apenas da FS, enquanto as demais estão presentes em FS e FM, seguindo um padrão de distribuição observado na maioria dos tecidos de mamíferos. Amastatina e bestatina inibiram APB e APN, enquanto a diprotina A foi o inibidor mais eficiente para a DPPIV em FM. PAP-I e PIP foram inibidas, respectivamente, por bestatina e puromicina. Este perfil de inibição também é similar ao encontrado para as aminopeptidases em tecidos de mamíferos. Todas as atividades peptidásicas foram influenciadas por algum dos peptídeos estudados, sugerindo que tais peptídeos são substratos potenciais e/ou moduladores destas atividades na cascavel. As atividades APB e APN foram caracterizadas como metalopeptidases. APB, CAP e DPPIV foram inibidas por MnCl2. CAP e PAP-I foram caracterizadas como enzimas sulfidril-dependentes. As atividades APB, APN-PI e APN-PS predominaram, em relação às demais peptidases, em todas as estações e na maioria dos tecidos e no sêmen, sugerindo sua maior relevância na fisiologia reprodutiva da C. d. terrificus. Os níveis de todas as atividades peptidásicas estudadas variaram sazonalmente, sugerindo que sua ação moduladora sobre peptídeos susceptíveis está integrada ao ciclo reprodutivo desta serpente. O fracionamento do sêmen do ducto deferente revelou a presença de fluido seminal e espermatozóides, bem como de uma estrutura prostassoma-símile, até então somente identificada em mamíferos. Em todas estas frações há atividade peptidásica, predominando a APN-PI no prostassoma-símile e no fluido seminal, e APN-PS e APN-PI na FS e FM dos espermatozóides, caracterizando um envolvimento com a redução da motilidade espermática, tal qual ocorre em mamíferos. Concluimos que as atividades peptidásicas estudadas apresentam características sazonais e tecido-específicas que sugerem uma atuação relevante na preservação dos espermatozóides de C.d. terrificus. / In the rattlesnake Crotalus durissus terrificus occurs the long-term sperm storage (LTSS), in the female tract, during the interval between mating (autumn) and ovulation (spring). Peptides and peptidases are among the main components that influence the spermatic activity in mammals. The present study aimed to characterize the presence of peptidases in C. d. terrificus, that are well-recognized to exert this function and/or that have the ability to hydrolyze peptides that exert this function in mammals, as well to evaluate whether these peptidases are related to the preservation of spermatozoids in this snake. The morphological and functional characteristics of spermatozoids were compared in the presence of angiotensin II (AngII), arginine-vasotocin (AVT), bradykinin (BK), fertilization promoting peptide (FPP) and thyrotropin-releasing hormone (TRH). We have checked the effect of chelating and thiol-reducing agents, cofactor and inhibitors, as well the effect of aforementionated peptides on related enzyme activities such as acid (APA), basic (APB), puromycin-sensitive (APN-PS) and puromycin-insensitive alanyl (APN-PI), cystyl (CAP), pyroglutamyl type 1 (PAP-I) and prolyl-imino (PIP) aminopeptidases, and dipeptidyl-peptidase IV (DPPIV), as well as on prolyl endopeptidase (POP), in soluble (FS) and/or solubilized membrane-bound (FM) fractions of semen from vas deferens, of this own tissue, and vagina and uterus tissues of C. d. terrificus, i.e. tissues where spermatozoids pass through or where they are stored. The seasonal variation of these peptidase activities, in all tissues, including the semen stored in uterus during the LTSS, were evaluated. The semen from vas deferens was fractioned in order to know the distribution of these peptidase activities. The features of seminal liquefaction and movement of spermatozoids were different between the rattlesnake and human. Similar to mammals, FPP plus calcium and BK improved the preservation of the viability of spermatozoids from C. d. terrificus. In all tissues and semen, the APB, PIP and POP activities were detected only in FS, while others peptidases were present in FS and FM, following a similar pattern of distribution usually observed in mammalian tissues. Amastatin and bestatin inhibited APB and APN activities, while diprotin A was the most efficient inhibitor of DPPIV in FM. PAP-I and PIP activities were inhibited by bestatin and puromycin, respectively. This inhibition profile was similar to that of mammalian tissues. All peptidase activities were influenced at least by one of the peptides under study, suggesting these peptides as potential substrates and/or modulators for these peptidases of the rattlesnake. The APB and APN activities were characterized as metallopeptidases. APB, CAP and DPPIV were inhibited by MnCl2. CAP and PAP-I were characterized as sulfhydryl-dependent enzymes. The APB, APN-PI and APN-PS activities were predominant, in relation to the other examined peptidases, in all seasons and in most tissues and semen, suggesting their great relevance in the reproductive physiology of the C. d. terrificus. The levels of all studied peptidase activities were seasonally variable, suggesting that their modulator actions on susceptible peptides are integrated to the reproductive cycle of this snake. The fractionation of C. d. terrificus semen revealed the presence of seminal fluid and spermatozoids, as well a prostasome-like structure, until then identified only in mammals. In all of these fractions, there are peptidase activities, predominating the APN-PI in prostasome and seminal fluid, and the APN-PS and APN-PI in FS and FM of spermatozoids, suggesting their involvement in the reduction of the spermatic mobility, such as in mammals. In conclusion, the studied peptidase activities present seasonal and tissue-specific characteristics, which suggest a relevant role in the preservation of the spermatozoids of C. d. terrificus.

Orientadores: Irani Quagio Grassiotto, Daniela Calcagnotto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T14:34:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santana_JulioCesardeOliveira_D.pdf: 22975611 bytes, checksum: d02baacf927c5c48bc5cc9f97db90deb (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A superfamília Erythrinoidea é uma das oito famílias que compõem a ordem Characiformes e foi proposta como um grupo monofilético para abrigar as famílias neotropicais Ctenoluciidae, Erythrinidae e Lebiasinidae, e a família africana Hepsetidae. Após a proposição da superfamília, estudos filogenéticos recentes com base em caracteres morfológicos, como osteologia e morfologia de partes moles, e caracteres moleculares tem refutado a ideia de monofiletismo do grupo. Além disso, diferentes autores divergem quanto às relações suprafamiliares de Erythrinoidea. Além dos caracteres tradicionais, o emprego dos caracteres oriundos da análise da ultraestrutura da ontogenia dos espermatozoides e sua forma final tem sido uma importante fonte na complementação dos estudos filogenéticos. O estudo apresentado teve como objetivo realizar uma análise filogenética para testar a monofiletismo de Erythrinoidea e verificar os padrões de relacionamento suprafamiliares em Characiformes, e testar o posicionamento filogenético da família Crenuchidae, supostamente relacionada à superfamília. As análises filogenéticas foram realizadas com base em dados moleculares e dados morfológicos independentemente, e de maneira conjunta (evidência total) através do método de Parcimônia. A ultraestrutura da espermiogênese e dos espermatozoides dos gêneros incluídos em Erythrinoidea, mais a família Crenuchidae e outras possivelmente relacionadas, foram descritos e codificados em uma matriz de dados. Nas três análises realizadas a superfamília Erythrinoidea não é recuperada como monofilética. A família Crenuchidae posiciona-se na base da subordem Characoidei e não está estreitamente relacionada à Erythrinoidea. As análises com dados moleculares e de evidência total apresentaram uma topologia muito semelhante ao nível mais inclusivo e os valores de suporte dos principais clados apresentaram-se maiores na evidência total, mostrando a influência positiva da inserção dos caracteres da morfologia das células espermáticas nas análises filogenéticas / Abstract: The superfamily Erythrinoidea is one of eight superfamilies within the order Characiformes and was proposed to include a monophyletic group composed of the Neotropical fish families Ctenoluciidae, Erythrinidae and Lebiasinidae, and African family Hepsetidae. Current phylogenetic studies based on morphological data, such as osteology and morphology of soft structures, and molecular data have refuted the hypothesis of monophyly of this group. In addition, the suprafamilial relationships in Erythrinoidea have diverged among the authors. In combination with more traditional characters, the analyses of the ultrastructure of sperm ontogeny and its final shape have become an interesting source of characters to complement phylogenetic studies. The goal of this study was to perform a phylogenetic analysis to test the monophyly of the Erythrinoidea and to assess the phylogenetic position of the family Crenuchidae, a group supposed to be closely related to the superfamily. The phylogenetic analyses were performed using molecular and morphological data separately, and in a combined approach (total evidence) through the Parsimony method. The ultrastructure of the spermiogenesis and the sperm shape of Erythrinoidea genera, plus the family Crenuchidae and other species possibly related to the superfamily were described and coded in a matrix data. In all three analyses Erythrinoidea was not recovered as monophyletic. The family Crenuchidae was placed in a basal position within the suborder Characoidei in molecular and total evidence analysis, and was not closely related to the Erythrinoidea. The analyses using only molecular data and total evidence showed a very similar topology for the more inclusive relationship levels. The support values were higher for the total evidence tree when compared to the one resulting of only molecular data possibly pointing to a positive influence of the combination of the spermatic cell data in phylogenetic analyses / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Mary Anne Heidi Dolder, Frederico Falcão Salles / Texto em português e inglês / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T13:00:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brito_PedroValedeAzevedo_D.pdf: 100648281 bytes, checksum: 084741b621bdeef83fe1e691e02ad06f (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Entre as ordens de insetos alados com representantes vivos, os membros da ordem Ephemeroptera estão entre os mais antigos que existem. Suas ninfas são aquáticas e os adultos, alados, sobrevivem por pouco tempo, morrendo logo após o acasalamento. Ainda existem algumas dúvidas sobre a relação dos Ephemeroptera com os demais Pterygota, bem como algumas famílias dentro da ordem são atualmente consideradas parafiléticas. A morfologia do sistema reprodutivo masculino e dos espermatozoides dos insetos pode fornecer informações úteis para estudos filogenéticos. No entanto, tais estudos envolvendo espécies de Ephemeroptera são escassos. O objetivo deste trabalho foi estudar a morfologia do sistema reprodutivo masculino e dos espermatozoides de espécies de Ephemeroptera existentes no Brasil, analisando a variabilidade morfológica encontrada nessas espécies. No Brasil são encontradas espécies pertencentes a dez famílias de Ephemeroptera e analisamos a morfologia do sistema reprodutor masculino de seis espécies pertencentes a cinco famílias e os espermatozoides de 17 espécies pertencentes a nove famílias. Nas seis espécies a morfologia do sistema reprodutivo foi muito constante sem glândulas acessórias ou órgãos especializados no armazenamento de espermatozoides. No entanto, observamos diferentes padrões de organização da musculatura intrínseca dos ductos espermáticos, provavelmente refletindo diferenças na fisiologia reprodutiva de cada espécie. A morfologia dos espermatozoides se mostrou mais variável. As espécies da família Leptophlebiidae possuem espermatozoides aflagelados e imóveis. Nas demais famílias, os espermatozoides são flagelados e móveis. A organização do axonema se mostrou constante nas diferentes espécies com o padrão 9+9+0 típico para esses insetos. Apenas os microtúbulos acessórios mostraram variação na estrutura, podendo assumir o padrão de subunidades 13+7 ou 13+0. Os flagelos são caracterizados por apenas uma mitocôndria que se alonga por quase todo flagelo. A morfologia dos corpos acessórios dos flagelos varia entre as espécies. Parece haver correlação entre a organização das cristas mitocondriais e os corpos acessórios. A morfologia da vesícula acrossomal é variável podendo estar relacionada com diferenças na espessura do corion dos ovos. No início dos flagelos observamos o adjunto do centríolo, que acreditava-se estar ausente nos espermatozoides dos Ephemeroptera. Em uma espécie estudada o núcleo dos espermatozoides está associado paralelamente ao flagelo. Nossos resultados sugerem que os espermatozoides dos Ephemeroptera possuem variabilidade morfológica suficiente para fornecer dados para futuros estudos filogenéticos. No entanto, é preciso que mais espécies sejam estudadas aumentando a abrangência dentro do grupo. Alem disso, alguns pontos como a origem dos corpos acessórios dos espermatozoides dos Ephemeroptera precisam ser melhor estudados / Abstract: Ephemeroptera species are the oldest living winged insects. Their nymphs are aquatic and the adults are short living, dying just after mating. At the present, there are still some doubts about the phylogenetic relationships between Ephemeroptera and the other Pterygota. The morphology of the male reproductive systems and of the spermatozoa is useful to furnish data for phylogenetic studies. However, there are few studies on this subject for Ephemeroptera. This study analyzes the morphology of the male reproductive system and of the spermatozoa of Brazilian Ephemeroptera species.. Species from ten Ephemeroptera families are found in Brazil. In the present study we analyzed the male reproductive system of six species from five families. We also analyzed the sperm morphology of 17 species from nine families. The male reproductive systems analyzed were very similar in the different species, with no accessory glands or specialized organs for sperm storage. However, the intrinsic musculatures of the sperm ducts have different organization patterns, probably related to differences in the reproductive physiology of each species. Greater morphological variation was observed among the spermatozoa. Species from Leptophlebiidae family have aflagellate and immotile spermatozoa. Species from the other families have mobile and flagellate spermatozoa. The organization of the axoneme was the same in all species, with the 9+9+0 microtubule pattern, typical for this insect group. Only the accessory microtubules vary between the 13+7 and the 13+0 subunit patterns. The flagella are characterized by the presence of only one mitochondrion along the flagellum. The accessory bodies morphology may vary between the species and it seems to be correlated to the organization of the mitochondrial cristae and the accessory bodies morphology. The acrosomal vesicles have morphological variations that must be related to differences in the egg chorion thickness. A centriolar adjunct is observed at the flagellum anterior region of the spermatozoa. This structure was thought to be absent in the Ephemeroptera spermatozoa. One species studied has its nucleus laterally associated to the flagellum. Our results suggest that the spermatozoa of Ephemeroptera have enough morphological variation to furnish useful data for future phylogenetic studies. However, more species, representing different groups of the order must be studied, increasing the scope of these studies. Also some questions, such as the origin of the accessory bodies of Ephemeroptera must be further studied / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / In order to evaluate the performance and seminal characteristics of the White Plymouth Rock roosters, fed with diets containing canthaxanthin and 25-hydroxycholecalciferol (25-OH-D3), an experiment was conducted at the Laboratory of Poultry Department of Animal Science at The Federal University of Santa Maria. 80 White Plymouth Rock roosters from 40 to 59 weeks of age were used in this study. Birds were submitted to four treatments: T1 = control diet, T2 = control diet + Canthaxanthin, T3 = control diet + 25-OH-D3, T4 = control diet + Canthaxanthin + 25-OH-D3. A completely randomized design was used with four treatments with 20 replications of one bird. The experimental phase (140 days) was divided into five periods of 28 days to evaluate the performance of birds. The parameters evaluated were: body weight and food intake (measured at the end of each period), motility, vigor, sperm concentration and morphological anomalies (two times per period, with an interval of 14 days). Data were transformed to adjustment the normality and after they were subjected to analysis of variance. The differences between treatments were compared by Tukey test at 10% significance level. The average feed intake during the experimental period was lower in birds fed 25-OH-D3 than males fed with canthaxanthin and 25-OH-D3 diet, but the body weight was similar. The supplementation of 25-OH-D3 and canthaxanthin in diets improved the sperm concentration significantly. Males fed with diets with 25-OH-D3 and, Canthaxanthin and 25-OH-D3 had the lowest level of morphological anomalies in the semen. Canthaxanthin, 25-OH-D3, and Canthaxanthin and 25-OH-D3 when added to the diet improves the sperm motility and vigor of roosters. / Com o objetivo de avaliar o desempenho e as características seminais de galos da raça White Plymouth Rock, alimentados com dietas contendo Cantaxantina e 25-hidroxicolecalciferol, foi conduzido um experimento no Laboratório de Avicultura do Departamento de Zootecnia da Universidade Federal de Santa Maria. Foram utilizados 80 galos White Plymouth Rock de 40 a 59 semanas de idade. As aves foram submetidas a 4 tratamentos: T1 = dieta controle, T2 = dieta controle + Cantaxantina, T3 = dieta controle + 25-OH-D3, T4 = dieta controle + Cantaxantina + 25-OH-D3. Foi utilizado um delineamento inteiramente casualizado, com quatro tratamentos com 20 repetições cada, onde cada ave foi considerada uma repetição. A fase experimental teve duração de 140 dias, a qual foi dividida em 5 períodos de 28 dias para avaliar o desempenho das aves. Os parâmetros avaliados foram: peso corporal e consumo alimentar (mensurados no final de cada período), motilidade, vigor, alterações morfológicas (mensurados duas vezes por período, com intervalo de 14 dias) e concentração espermática. Os dados obtidos foram transformados para o ajuste da normalidade, após foram submetidos à análise de variância, e as diferenças entre tratamentos foram comparadas pelo teste de Tukey a 10% de significância. O consumo médio de ração durante a fase experimental foi menor em aves que consumiram 25-OH-D3 em relação as que consumiram cantaxantina e 25-OH-D3, mesmo assim não alterou o peso médio das aves nesta fase. A adição de 25-OH-D3 mais Cantaxantina na dieta melhora significativamente a concentração espermática. As alterações morfológicas do sêmen de galos são reduzidas com a utilização de 25-OH-D3, e Cantaxantina e 25-OH-D3. Cantaxantina, 25-OH-D3, e 25-OH-D3 mais Cantaxantina, quando adicionados à dieta melhoram a motilidade e o vigor espermático.