Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O propósito do presente trabalho foi investigar a participação da proliferação celular e da expressão dos componentes da matriz extracelular na cascata de eventos do processo de reparo da fratura óssea, empregando as técnicas histológica, imunohistoquímica e morfométrica, em um modelo experimental padronizado para a indução da lesão na tíbia de ratos a partir do método empregado por Yuehuei e Friedman7. É importante padronizar um modelo de indução da fratura, para posterior investigação da participação das células e dos componentes da matriz extracelular no processo de reparo da fratura, considerando que o tempo de consolidação depende significantemente da natureza e do tipo da lesão produzida. Quarenta (n = 40) ratos Wistar foram submetidos a fratura . Os animais foram avaliados em oito (n = 8) grupos de cinco (n = 5) animais, cada grupo emperimental com 12, 24, 48, 72, 96, 144, 192 e 240 horas após a fratura (12h até 10 dias). As fraturas foram classificadas de acordo com o sistema de classificação internacional de fratura de Muller100, AO (Associação para Osteosíntese). Foram encontradas fraturas simples em 86% do total, sendo 68% de fraturas transversas e 18% de fraturas obliquas, 14% do total de fraturas foram complexas, sendo 8% de fraturas irregulares e 6% de fraturas segmentares. Esses resultados demonstram que o aparelho permite padronizar radiológicamente o tipo de fratura, caracterizado pela linha que separa os fragmentos ósseos. Os resultados qualitativos dos componentes da matriz extracelular para TGF-β, VEGF, colágeno I e II, osteopontina, proteoglicanos, fibras do sistema elástico com a coloração de resorcina funcsina de Weigert, e para proliferação celular pelo PCNA, assim como os resultados morfométricos, sugerem que a modulação da expressão dos componentes da matriz extracelular e a proliferação celular durante o processo de reparo da fratura não é homogênea para todos os componentes teciduais, dependendo significantemente das tensões locais geradas pelo tipo da linha de fratura que pode ser determinante no tempo de regeneração do osso e na qualidade da restauração das propriedades biomecânica. Nossos achados podem contribuir para melhor compreensão da reparo de fratura óssea e para novas abordagens terapêuticas que considerem as propriedades biomecânicas do tecido ósseo em reparo nas suas diferentes etapas / The purpose of this study was to investigate the role of cells proliferation and extracellular matrix components expression in the process of bone fracture repair. To do so it used histological techniques, immunohistochemistry and morphometric analysis as well as a standardized experimental model for the induction of injury to the tibia of rats as proposed by Yuehuei and Friedman7. It is important to standardize a model of fracture induction for further investigation of the involvement of cells and extracellular matrix components in the fracture repair process, whereas the healing time depends significantly on the nature and type of lesion produced. Forty (n = 40) Wistar rats were subjected to fracture. The animals were divided into eight (n = 8) groups of five (n = 5). Each subgroup was observed after 12, 24, 48, 72, 96, 144, 192 and 240 hours of fracture (12 to 10 days). Immediately afterwards, the fractures were classified according to the system of international classification of fracture by Muller100, AO (Association for Osteosynthesis). Simple fractures were found in 86% of the total, among them, 68% were transverse and 18% were oblique. Complex fractures were found in 14% of the cases, among them 8% were irregular and 6% were segmental. These results demonstrated that the device enables researchers to standardize the type of fracture by X-ray, marked by the line separating the bone fragments. The qualitative results of the cells and extracellular matrix components of TGF-β, VEGF, PCNA, collagen I and II, osteopontin, proteoglycans, elastic fibers system with resorcin funcsin of Weigert, as well as the morphometric results suggest that the repair process of the fracture is not homogeneous for all components. Expression of the extracellular matrix components and cell proliferation modulation significantly depends on the local stresses generated by the type of the fracture. Such type can be decisive in determining time duration for bone regeneration and quality of the biomechanical properties restoration. Our findings may contribute to better understanding of bone fracture repair and for new therapeutic approaches that consider the biomechanical properties of bone tissue in repair in its different stages

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:28:25Z : No. of bitstreams: 1 000848960_20171206.pdf: 336411 bytes, checksum: 4b13dac70d2e6e73d387371f9671281f (MD5) Bitstreams deleted on 2017-12-08T12:00:20Z: 000848960_20171206.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-12-08T12:01:09Z : No. of bitstreams: 1 000848960.pdf: 2171545 bytes, checksum: 13c2ff245dc616fb0c0c0561d9291935 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / FAPESP: 2012/25053-5

The renewal rate of stromal and myofibrillar proteins defines muscle growth, and can affect the quality of meat, by affecting collagen turnover and proteolytic rate. There is a lack of information on changes in the muscle protein remodeling process in response to the recovery weight gain rate observed during \"realimentation\" after undernutrition, which may be altered in older animals. Changes in muscle tissue during the recovery period may be indicated by the differential expression profile of genes after RNA sequencing. The objectives of this study were to evaluate transcriptome changes in the muscle of Nellore cull cows subjected to: 1) recovery weight gain under grazing conditions; and 2) recovery from undernutrition at different weight gain rates. In the first experiment, the animals were divided into two groups and subjected to one of two nutritional managements under grazing conditions: maintenance (maintenance of weight and high body condition score under grazing conditions) and recovery gain (recovery from low body condition score with moderate body weight gain of 0.6 kg/day under grazing conditions). In the second experiment, the animals were divided into three groups and subjected to one of three nutritional managements under feedlot conditions: control (slaughtered at low body condition score), moderate recovery gain (MG; 0.6 kg of daily live weight gain) during the dry season, and high recovery gain (HG; 1.2 kg of daily live weight gain) during the dry season. In both experiments, samples of longissimus dorsi muscle were collected after slaughter and immediately frozen until sequencing analysis could be performed. In the first experiment, genes related to inflammatory response, such as semaphorin 4A (SEMA4A), solute carrier family 11 member 1 (SLC11A1), ficolin-2 (FCN2), and placental growth factor (PGF), were expressed at higher levels during recovery gain. In the second experiment, osteonectin (SPARC) and collagen type IV subunits 1 (COL4A1) were expressed at higher levels in both recovery gain and connective tissue remodeling. For MG, structural myofibrillar proteins such as myosin IE (MYO1E), myosin, heavy chain 11 (MYH11), myogenin (MYOG), and actinin, alpha 4 (ACTN4) were identified. In the HG treatment, the B-cell CLL/lymphoma 9 (BCL9), peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARA), diacylglycerol O-Acyltransferase 2 (DGAT2), and phosphatidylinositol 4-Kinase, catalytic, and beta (PI4KB) genes indicated more deposition of adipose tissue. In summary, we observed that muscular deposition during recovery weight gain involved the regulation of expression of several genes related to the extracellular matrix (ECM), corroborating the inflammatory and -like models observed in mature animals. Moreover, in the HG group, genes related to collagen synthesis and fat deposition were also found, indicating the important contribution of connective tissue during muscle growth. These results are important for understanding tissue development as a whole, and will assist in the progress of scientific knowledge on muscle remodeling during recovery weight gain and its influence on protein structures and intracellular routes. / A taxa de renovação do estroma e proteínas miofibrilares define o crescimento muscular, e pode afetar a qualidade da carne, afetando turnover de colágeno e taxa proteolítica. Há uma falta de informação sobre as mudanças no processo de remodelação de proteína muscular em resposta à taxa de recuperação do ganho de peso, observada durante a \"realimentação\" depois de subnutrição, o que pode ser alterado em animais mais velhos. Alterações no tecido muscular durante o período de recuperação pode ser indicada pelo perfil de expressão diferencial de genes, pela técnica de sequenciamento de RNA. Os objetivos deste trabalho foram avaliar as alterações do transcriptoma na musculatura de vacas de descarte Nelore submetidas a: 1) a recuperação do peso em condições de pastejo; e 2) a recuperação da desnutrição em diferentes taxas de ganho de pesos. No primeiro experimento, os animais foram divididos em: grupo de manutenção (manutenção de peso e de alta escore corporal); Recuperação do ganho (recuperação de baixo escore corporal com o ganho de peso corporal moderado em 0,6 kg / dia sob pastejo). No segundo experimento, os animais foram divididos em três grupos em confinamento: Controle (abatidos com baixo escore de condição corporal), ganho moderado (0,6 kg de ganho de peso vivo por dia) durante a estação seca e alta recuperação de ganho (1,2 kg de ganho de peso vivo por dia) durante a estação seca. Nos dois estudos, amostras do Longissimus dorsi foram coletadas após o abate e imediatamente congeladas até à análise de sequenciamento ser realizada. No primeiro experimento, os genes encontrados no tratamento de recuperação do ganho foram relacionados com a resposta inflamatória como: 4A semaphorin (SEMA4A), solute carrier family 11 member 1 (SLC11A1), Ficolin 2 (FCN2) e placental growth factor (PGF). No segundo experimento, o osteonectina (SPARC), colágeno tipo IV subunidades 1 (COL4A1) foram alguns dos genes mais expressos para ambas as taxas de ganho de recuperação de remodelação do tecido conjuntivo. Para ganho moderado, foram identificadas proteínas miofibrilares estruturais como: Myosin IE (MYO1E), Myosin, Heavy Chain 11 (MYH11), (MYOG) and actinin, alpha 4 (ACTN4). No tratamento de alta recuperação de ganho, genes como CLL de célula B / 9 linfoma (BCL9), peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARA), Diacylglycerol O-Acyltransferase 2 (DGAT2) and Phosphatidylinositol 4-Kinase, Catalytic, Beta (PI4KB) indicam maior deposição de tecido adiposo. Em resumo, observou-se que a deposição muscular durante a recuperação do ganho de peso envolve a regulação da expressão de vários genes relacionados com a matriz extracelular (ECM), corroborando com modelos de inflamação e similar a fibrose observada em animais maduros. Além disso, no grupo HG, genes relacionados com a síntese de colágeno e a deposição de gordura, também foram encontrados, indicando contribuição do tecido conjuntivo durante o crescimento muscular. Estes resultados são importantes para a compreensão do desenvolvimento do tecido como um todo, e auxiliam no progresso do conhecimento científico sobre a remodelação muscular durante a recuperação do ganho de peso e sua influência sobre estruturas de proteínas e vias intracelulares.

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-14. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:47Z : No. of bitstreams: 1 000868427.pdf: 2229753 bytes, checksum: 9e6c100a68b4e114a933894c9bd961ed (MD5) / A próstata é uma glândula anexa do sistema genital masculino, encontrada apenas em mamíferos, cuja principal função é produzir parte do fluido seminal. As lesões prostáticas surgem mais comumente em homens de meia idade e o câncer prostático (CaP) é o mais diagnosticado e a segunda causa de mortes por câncer entre os homens na América e nos países da Europa Ocidental. O microambiente extracelular trata-se de uma complexa rede que compreende a matriz extracelular (MEC) e moléculas reguladoras. A MEC possui papel fundamental na regulação de numerosos eventos celulares, tais como adesão, proliferação, diferenciação, entre outros. Um fino equilíbrio é mantido entre a síntese e degeneração de seus componentes, e quando desregulado pode causar dano tecidual e câncer. Na próstata, as interações entre o tecido epitelial e seu estroma são responsáveis em manter a função fisiológica normal, por meio de restrições proliferativas e migratórias. Quando o câncer se desenvolve, células transformadas perdem essas restrições, enquanto o estroma se adapta para sustentar a função do tumor. Sabe-se que as células tumorais com potencial invasivo adquirem fenótipo migratório associado ao aumento na expressão de genes envolvidos na motilidade celular, permitindo a essas células responder a sinais oriundos do microambiente tumoral. Assim, o nosso estudo teve como objetivo estudar a ação da fibronectina, uma molécula de adesão da MEC, sobre a migração de células tumorais prostáticas e a expressão de moléculas envolvidas nesse processo. Para isso, realizamos a exposição das células LNCaP e PC-3 à fibronectina na concentração de 25 μg/mL e analisamos viabilidade celular, morfologia, número total de nucléolos, atividade e localização das metaloproteinases de matriz -2 e -9 e o processo de migração celular. A exposição à fibronectina não alterou viabilidade celular e morfologia, mas aumentou... / The prostate is a gland attached to the male genital system, found only in mammals, whose main function is to produce part of the seminal fluid. Prostatic lesions appear most commonly in middle-aged men and prostate cancer (PCa) is the most commonly cancer diagnosed and the second leading cause of cancer deaths among men in America and in Western European countries. The extracellular microenvironment is a complex network comprising extracellular matrix (ECM) and regulatory molecules. The ECM has a fundamental role in the regulation of many cellular events, such as adhesion, proliferation, differentiation, among others. A fine balance is maintained between the synthesis and degeneration of its components, and when unregulated can cause tissue damage and cancer. In the prostate, the interactions between the epithelial tissue and its stroma are responsible for maintaining normal physiological function through proliferative and migratory restrictions. When cancer develops, transformed cells lose these restrictions, while the stroma is adapted to support the function of the tumor. It is known that tumor cells with invasive potential acquire migratory phenotype associated with increased expression of genes involved in cell motility, allowing these cells to respond to signals from the tumor microenvironment. Thus, our study aimed to study the action of fibronectin, an ECM adhesion molecule, on migration of prostate cancer cells and the expression of molecules involved in this process. To achieve this goal, we performed the exposure of LNCaP and PC-3 cells to fibronectin in the concentration of 25 mg / mL and analyzed cell viability, morphology, total number of nucleoli, location and activity of matrix metalloproteinases -2 and -9 and the process of cell migration. Exposure to fibronectin did not alter cell viability and morphology, but increased the amount of nucleoli, as well as marking and the activity of MMP -2 and -9 and decreased migration...

Orientador: Marilza Vieira Cunha Rudge / Coorientador: Angélica Mércia Pascon Barbosa / Coorientador: Selma Maria Michelin Matheus / Banca: Débora Cristina Damasceno / Banca: Jorge Milhen Haddad / Banca: Rodrigo de Aquino Castro / Banca: Firouz Daneshgari / Resumo: A prevalência de Incontinência Urinária (IU) em gestantes diabéticas é significantemente elevada e permanece alta 2 anos após o parto cesárea. Esses achados evidenciam que o diabete na gestação é fator de risco para o desenvolvimento de IU nas mulheres que não tiveram a influência da via de parto. Os estudos desse binômio diabete e IU na gestação são escassos na literatura. A incontinência pode ser a consequência mais comum da hiperglicemia comparada a outras complicações, assim, identificar os fatores de risco para o desenvolvimento da IU em diabéticas é o maior objetivo na prevenção desta condição tão comum. Pesquisas recentes apontam que não apenas o músculo mas também a matriz extracelular (MEC) uretral desempenham importante papel no mecanismo da continência urinária. Os trabalhos translacionais do nosso grupo de pesquisa evidenciaram que o diabete na prenhez de ratas lesa a matriz extracelular e o músculo estriado uretral, o que pode explicar a alta prevalência de IU e disfunção do assoalho pélvico em mulheres com diabete mellitus gestacional. O diabete exerce efeito na expressão, organização e modificação nos componentes da MEC em diversos órgãos e a remodelação do tecido e a fibrose parecem ser uma consequência direta do diabete. Assim, entendendo o impacto de fatores de risco modificáveis como o diabete, implica que o uso de estratégias preventivas pode reduzir as taxas de IU e melhorar a qualidade de vida das mulheres, especialmente na gestação e no pós-parto / Abstract: Not available / Doutor

Orientador: Flávia Karina Delella / Banca: Elenice Deffune / Banca: Sérgio Luis Felisbino / Resumo: A próstata é uma glândula anexa do sistema genital masculino, encontrada apenas em mamíferos, cuja principal função é produzir parte do fluido seminal. As lesões prostáticas surgem mais comumente em homens de meia idade e o câncer prostático (CaP) é o mais diagnosticado e a segunda causa de mortes por câncer entre os homens na América e nos países da Europa Ocidental. O microambiente extracelular trata-se de uma complexa rede que compreende a matriz extracelular (MEC) e moléculas reguladoras. A MEC possui papel fundamental na regulação de numerosos eventos celulares, tais como adesão, proliferação, diferenciação, entre outros. Um fino equilíbrio é mantido entre a síntese e degeneração de seus componentes, e quando desregulado pode causar dano tecidual e câncer. Na próstata, as interações entre o tecido epitelial e seu estroma são responsáveis em manter a função fisiológica normal, por meio de restrições proliferativas e migratórias. Quando o câncer se desenvolve, células transformadas perdem essas restrições, enquanto o estroma se adapta para sustentar a "função" do tumor. Sabe-se que as células tumorais com potencial invasivo adquirem fenótipo migratório associado ao aumento na expressão de genes envolvidos na motilidade celular, permitindo a essas células responder a sinais oriundos do microambiente tumoral. Assim, o nosso estudo teve como objetivo estudar a ação da fibronectina, uma molécula de adesão da MEC, sobre a migração de células tumorais prostáticas e a expressão de moléculas envolvidas nesse processo. Para isso, realizamos a exposição das células LNCaP e PC-3 à fibronectina na concentração de 25 μg/mL e analisamos viabilidade celular, morfologia, número total de nucléolos, atividade e localização das metaloproteinases de matriz -2 e -9 e o processo de migração celular. A exposição à fibronectina não alterou viabilidade celular e morfologia, mas aumentou... / Abstract: The prostate is a gland attached to the male genital system, found only in mammals, whose main function is to produce part of the seminal fluid. Prostatic lesions appear most commonly in middle-aged men and prostate cancer (PCa) is the most commonly cancer diagnosed and the second leading cause of cancer deaths among men in America and in Western European countries. The extracellular microenvironment is a complex network comprising extracellular matrix (ECM) and regulatory molecules. The ECM has a fundamental role in the regulation of many cellular events, such as adhesion, proliferation, differentiation, among others. A fine balance is maintained between the synthesis and degeneration of its components, and when unregulated can cause tissue damage and cancer. In the prostate, the interactions between the epithelial tissue and its stroma are responsible for maintaining normal physiological function through proliferative and migratory restrictions. When cancer develops, transformed cells lose these restrictions, while the stroma is adapted to support the "function" of the tumor. It is known that tumor cells with invasive potential acquire migratory phenotype associated with increased expression of genes involved in cell motility, allowing these cells to respond to signals from the tumor microenvironment. Thus, our study aimed to study the action of fibronectin, an ECM adhesion molecule, on migration of prostate cancer cells and the expression of molecules involved in this process. To achieve this goal, we performed the exposure of LNCaP and PC-3 cells to fibronectin in the concentration of 25 mg / mL and analyzed cell viability, morphology, total number of nucleoli, location and activity of matrix metalloproteinases -2 and -9 and the process of cell migration. Exposure to fibronectin did not alter cell viability and morphology, but increased the amount of nucleoli, as well as marking and the activity of MMP -2 and -9 and decreased migration... / Mestre

Lesões na inervação do trato urinário inferior ocasionado por traumatismo raquimedular afetam geralmente o músculo detrusor e o esfíncteres uretrais. Estas alterações acarretam problemas basicamente de incontinência urinária e aumento da pressão intravesical, decorrente deste traumatismo, trazendo consequências para o funcionamento do sistema urinário superior. Quantificar os elementos fibrosos da matriz extracelular e fibras musculares das bexigas neurogênicas hiper-reflexas comparando-as com bexigas normais. Foram utilizadas 6 amostras de bexigas neurogênicas de indivíduos que foram submetidos a cirurgia de reparação por cistoenteroplastia realizados pelo serviço de urologia do Hospital Municipal Souza Aguiar, estas amostras foram fixadas imediatamente em solução tamponada de formalina a 10%. O controle com amostras iguais as do estudo extraída de cadáveres cuja causa morte não relacionava-se ao sistema urogenital macroscópicamente. O material foi submetido as seguintes técnicas histoquímicas: H&E, van Gieson e Resorcina Fucsina resorcina de Weigert com prévia oxidação pela oxona. Imunohistoquímica: anti-elastina. A observação dos cortes corados pelo van Gieson demonstrou uma diminuição significativa do músculo liso de 13% e aumento do colágeno em 72% e as fibras do sistema elástico um aumento de 101%. Conclusão. Nas bexigas neurogênicas hiper-reflexas o músculo detrusor e os elementos fibrosos da matriz foram profundamente modificados. As fibras do sistema elástico foram as mais afetadas. / Lesions on lower urinary tract innervations caused by spinal cord injuries usually affect the detrusor muscle and urethral sphincter. Beside the smooth muscle fibers, the collagen fibers and elastic system fibers, fibrous components of the extracellular matrix of the bladder wall, are strongly related to vesicle bladder compliance. For this reason the aim of this work is to quantify the fibrous elements of the extracellular matrix and muscle fibers of the neurogenic bladder hyperreflexia. Samples of neurogenic bladder were obtained from six men who had previously undergone surgical repair. The control group samples (n=6) were similarly obtained from patients whose deaths were not related to the urogenital system. The samples were stained using the following histochemical techniques: H&E, Van Gieson, Weigert and Sirius Red. Sections stained with Sirius Red were observed under polarization light microscopy to characterize possible different kinds of collagen. Immunohistochemical technique was used to characterize and quantify the elastic system fibers. Quantification analysis was performed by stereological methods. An increase of 72% of the collagen was observed. Nevertheless, the most significant difference observed was the raising of 101% of the elastic system fibers. Contrary the smooth muscle fibers showed a decrease of 13%. In the neurogenic bladder with detrusor hyperreflexia the fibrous elements of the extracellular matrix and smooth muscle fibers were greatly modified. The elastic system fibers seem to be the most affected in this disease.

Além das funções mecânicas, sabe-se que o colágeno do tipo I é um dos componentes mais ativos na modulação das atividades biológicas que ocorrem na matriz extracelular (MEC) tais como a adesão celular, a coagulação e a mineralização do osso. Estes eventos ocorrem nos limites do período D, que é provavelmente o domínio funcional que mais prevalece em relação à transferência da informação extracelular para o interior da célula. O objetivo deste trabalho foi estudar as correlações existentes entre as atividades biológicas da MEC e as características estruturais do colágeno do tipo I, principalmente em relação à distribuição topográfica dos aminoácidos (aa) ácidos, básicos e hidrofóbicos. A metodologia empregada foi baseada em informações já existentes sobre a estrutura colágeno do tipo I e suas atividades relacionadas com a MEC. Os resultados mostraram que aa ácidos, básicos e hidrofóbicos formam duas regiões distintas. Em uma delas, aa ácidos e básicos se alojam em áreas delimitadas por aa hidrofóbicos; na outra, aa básicos, ácidos e hidrofóbicos formam aglomerados localizados principalmente nas proximidades dos limites Overlap:Gap. Exceto para os eventos de natureza estrutural são as regiões do colágeno do tipo I mais envolvidas na modulação das atividades da MEC, com a interface Overlap:Gap funcionando como um divisor do controle destas atividades. Enquanto 83,2% das atividades de adesão estão localizadas na zona do Overlap, 93,3% das atividades de natureza estruturais ocorrem a partir da zona limite Overlap:Gap e em direção à zona Gap. Embora nenhuma correlação possa ter sido estabelecida para a resultante de carga, sugere-se que a participação do colágeno do tipo I nas atividades da MEC, possa estar associada a diferenças de interações dos ligantes (carga, massa molecular e hidrofobicidade) com gradientes eletrostático e hidrofóbico existentes ao longo do período D. / Besides mechanical function, it is known today that type I collagen plays a major role in the modulation of many of the activities occurring in the extra-cellular matrix (ECM) such as cell adhesion, coagulation cascade and mineral deposition during bone formation. All these events occur by interaction of cells and ligands within the D-period of collagen microfibrill assembly, which is perhaps the most prevalent module of ECM information in the body. The purpose of this work was the study of correlations between the biological activities of ECM and the structural features of collagen associated with the distribution of acidic, basic and hydrophobic amino acids (aa) within the D period. The methodology used was based on existing information with respect to the structure of type I collagen and its function with respect to ECM activities. The results showed that acidic, basic and hydrophobic aa are found in two major distinct regions: one in which acidic and basic aa are located in areas defined by hydrophobic aa barriers; the other in which acidic, basic and hydrophobic aa forming clusters located preferentially in the boundaries of the Overlap:Gap zones. Except for the structural event, these clusters are the major sites for the interaction involving cell adhesion. The results also suggest that the Overlap:Gap interface function as a borderline for collagen interactions with ECM since 83,2% of the activities related to cell adhesion are located in the Overlap region while 93,3% of the activities of structural nature are enclosed within the limiting zone of Overlap:Gap to the direction of the Gap zone. Although no correlation could be established for net charge along the D period it is suggested that type I collagen participation in the activities of the ECM may also be associated to differences in ligand interactions (charge, molecular mass and hydrophobicity) with the electrostatic and the hydrophobic gradients that exists within the D period.

Diversos estudos, in vivo e in vitro, demonstraram a atividade antitumoral da Crotoxina (CTX), toxina majoritária do veneno de serpente Crotalus durissus terrificus, porém, não foi demonstrada, até o momento, a ação desta toxina sobre eventos envolvidos com a neovascularização, essenciais para o crescimento e sobrevivência do tumor. Assim, neste estudo foi investigado o efeito in vitro da CTX sobre os eventos envolvidos com a angiogênese. A CTX inibiu, principalmente na concentração de 1,2µg/mL, a proliferação, adesão e a morfologia das células endoteliais murinas derivados do hemangioma do timo (t.End.1) sobre as matrizes de laminina, colágeno tipo I e fibronectina, bem como a migração por meio dos modelos de cicatrização (Wound Healing), quimiotaxia (transwell) e a formação de tubos no matrigel 3-D, tanto na presença de meio de cultura como no meio condicionado de célula tumoral. Ainda, a CTX inibiu a distribuição das subunidades v e 2 de integrinas e a polimerização do citoesqueleto de actina, evidenciados em microscopia confocal. Os resultados demonstram, pela primeira vez, que a CTX inibe os principais eventos envolvidos com a angiogênese, podendo contribuir de forma importante para o efeito inibitório da toxina sobre a progressão tumoral. / Several studies, in vivo and in vitro have demonstrated antitumor activity of Crotoxin (CTX), the major toxin of Crotalus durissus terrificus venom. Despite evidence of antitumor action of CTX, was not demonstrated yet the action of this toxin on basic parameters for neovascularization, essential for the growth and survival of the tumor. The formation of new blood vessels is the principal process of angiogenesis and involves adhesion, proliferation and migration of endothelial cells to reach remote targets, assembly of endothelial cells into new capillary tubes. CTX (1.2 µg/mL, for 1 hour incubation), inhibited cell proliferation, adhesion, migration, scratch wound healing and capillary-like tube formation on 3-D matrix of endothelial cells line derived from thymus (t.End.1) evaluated in vitro assay at culture medium or conditioned medium obtained from tumour cells culture. Also, this toxin interfered with the distribution of the integrin subunits 2 and v and with the cytoskeleton rearrangement these cells, evidenced in confocal microscope. Taken together, these results demonstrated for the first time, that CTX inhibits key events involved in the angiogenesis process, and may contribute for inhibitory effect of the toxin on tumor progression.

Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T22:46:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pierucci_Amauri_D.pdf: 4256178 bytes, checksum: fe35fc60e55f7ea9104ff8bf2bc809f5 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A regeneração periférica é um fenômeno intrincado que envolve diferentes tipos celulares, dentre os quais as células de Schwann são os componentes celulares não neurais mais importantes. Após a lesão periférica, as células de Schwann proliferam e, juntamente com os macrófagos, participam na fagocitose dos fragmentos de mielina e dos axônios em degeneração. Essas auxiliam na orientação axonal em direção ao órgão alvo através da formação das bandas de Büngner. Ainda, atuam no rearranjo dos componentes da matriz extracelular do microambiente do nervo lesado, bem como na produção de vários fatores neurotróficos, entre eles, o fator neurotrófico do nervo (NGF), fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), fator neurotrófico de crescimento ciliar (CNTF), visando à manutenção, desenvolvimento e regeneração dos neurônios após a lesão. As lesões nervosas que acometem no nervo periférico podem ser resultado de traumas como esmagamento, transecção parcial ou completa do nervo. Quando ocorre a transecção completa do nervo, há a perda de continuidade e forma-se uma fenda entre o coto proximal e o coto distal. No sentido de reparar-se o nervo lesionado, foram desenvolvidas diversas técnicas, incluindo-se o emprego de autoenxertos, próteses tubulares não absorvíveis e inertes (polietileno) e biorreabsorvíveis (biomateriais). Essas últimas têm a vantagem de sustentarem o inicio do processo regenerativo, orientando o brotamento axonal em direção ao coto distal, além de serem degradadas à medida que o nervo cresce em diâmetro. Podem ainda ser confeccionadas com as dimensões, formatos e porosidade desejados. Devido às características positivas destas próteses reabsorvíveis, a importância das células de Schwann e dos componentes da matriz extracelular, o presente trabalho tem como objetivos estudar a influência dos biomateriais poli L-ácido láctico e poli caprolactona sobre a expressão, pelas células de Schwann, das cadeias a1, a2 e ß1 que compõem as lamininas tipo I e II, bem como a expressão de colágeno tipo IV, através do emprego das técnicas de imunohistoquímica realizadas após a tubulização e imunocitoquímica através da cultura purificada de células de Schwann sobre os diferentes biomateriais. Além disso, avaliamos o comportamento das células de Schwann sobre os biomateriais, através da microscopia eletrônica de varredura. Já o resultado da regeneração axonal foi estudado através de uma análise morfológica pela microscopia de luz, microscopia eletrônica de transmissão e morfometria dos nervos regenerados. Comparando-se estruturalmente os tubos confeccionados pelo método de extrusão e solvente, pôde-se observar que o último apresentava espessura reduzida em comparação às próteses confeccionadas pelo método de extrusão. Ainda, a transparência dos tubos, ora propostos em nossa metodologia, influenciou positivamente durante o processo de implantação da prótese na tubulização. Após a regeneração, observou-se que o número de fibras regeneradas no interior dos tubos derivados das membranas de PCL foi significantemente maior, 30 e 60 dias após tubulização. Ainda, uma intensa marcação com S-100, colágeno tipo IV e laminina foi observada no nervo regenerado no interior das próteses, em cujos grupos utilizaram-se os biomaterias (PCL e PLLA). De fato, a imunomarcação demonstrou que os biomateriais e o microambiente no interior dos tubos foram capazes de estimular positivamente as células de Schwann em resposta à lesão nervosa periférica. Em conjunto, nossos resultados evidenciam que os tubos de PCL e PLLA derivados da membrana podem ser considerados um método alternativo na preparação de próteses tubulares visando o reparo do nervo periférico / Abstract: The present study proposed a new approach to produce tubular conduits designed for peripheral nerve repair. In this sense, membranes of PLLA and PCL were obtained after solvent evaporation and wrapped around a mandrel. The effectiveness of the nerve regeneration was compared with polyethylene and PCL extruded prosthesis 30 and 60 days after surgery. The comparison between extrusion and solvent tubes cleared shown structural differences which were directly proportional to the hardness and transparency. An important factor to be considered is that the fiber counting indicated that solvent PCL tubes provided a significantly greater number of axons 30 days after repair. Sixty days after operation, the greatest regenerative performance was obtained with PCL, regardless the method of construction of the tube. An intense labeling against S-100, type IV collagen and laminin could be observed in the tissue obtained from solvent PCL and PLLA groups, indicating that such constructions are able to positively stimulate Schwann cell responses. Overall, the present results provide evidence that solvent conduits may be regarded as an alternative preparation method for tubular prosthesis aiming peripheral nerve regeneration. In the in vitro study, PCL and PLLA solvent polymers were used for culturing purified of Schwann cells. The imunolabeling revealed an up-regularion of the expression of collagen IV, laminin I, laminin II and S-100 by the Schwann cells, showing that biodegradable polymers enhance the activity of such cells, positively influencing the peripheral nerve regeneration process / Doutorado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural