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3C-like protease inhibitors against coronavirusesPerera, Krishani January 1900 (has links)
Master of Science in Biomedical Sciences / Department of Diagnostic Medicine/Pathobiology / Yunjeong Kim / Coronaviruses are pathogens that cause diverse diseases in humans and animals. The studies in this dissertation are focused on feline coronavirus (FCoV), ferret coronavirus (FRCoV) and mink coronavirus (MCoV). FCoV and FRCoV infections typically cause enteritis in cats and ferrets, respectively. However, a 100% fatal systemic disease called feline infectious peritonitis (FIP) can develop in some FCoV infected cats and a fatal systemic disease resembling FIP can develop in some FRCoV infected ferrets. MCoV causes enteritis which results in significant economic loss to mink farmers. No effective vaccine or treatment is available despite the increasing importance of these viral diseases. We have previously reported the synthesis of inhibitors against 3C-like protease (3CLpro) of FCoV and demonstrated the antiviral efficacy of a 3CLpro inhibitor for treating FIP. FRCoV and MCoV 3CLpro are closely related to FCoV 3CLpro. Therefore, we investigated the structure-function relationships of our 3CLpro inhibitors to identify the struc-tural requirements of inhibitors for FRCoV and MCoV. This is the first report of antiviral com-pounds against FRCoV and MCoV. We have previously conducted a field trial with a potent 3CLpro inhibitor, GC376, in cats with naturally occurring FIP. Comparison of the FCoV 3CLpro amino acid sequences from the pre- and post-treatment samples in one cat showed amino acid changes in 3CLpro. Hence, we generated recombinant 3CLpros carrying the amino acid changes and characterized the effects of these amino acid changes in FCoV 3CLpro on its susceptibility to GC376. We observed that these amino acid changes did not markedly affect the activity of GC376 in fluorescence resonance energy transfer (FRET) assay, explaining the absence of clinical drug resistance in this cat during the field trial.
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Comparação da esplenectomia laparoscópica usando pneumoperitônio e técnica de elevação da parede abdominal (lift laparoscopy) em cadáveres de gatosD'Avila, Gabriela Friedrich Lobo January 2018 (has links)
A esplenectomia laparoscópica, na medicina, foi introduzida em 1992. Desde então, diversos estudos tem demonstrado que a esplenectomia laparoscópica leva a menor tempo de hospitalização, menor perda sanguínea e recuperação mais rápida quando comparada a esplenectomia convencional. A laparoscopia convencional é realizada através do pneumoperitônio adquirido por meio do CO2, o que aumenta a pressão intraabdominal (PIA) e pode causar complicações cardiorrespiratórias. Em humanos, estas alterações foram reduzidas ou eliminadas com a laparoscopia com elevação da parede abdominal (gasless ou lift laparoscopy). Os felinos apresentam uma parede abdominal delgada e maleável, podendo esta espécie ser favorecida pela técnica de elevação da parede abdominal. O presente estudo teve como objetivo comparar a técnica cirúrgica de esplenectomia laparoscópica convencional com a mesma cirurgia utilizando o dispositivo de elevação da parede abdominal (gancho) em cadáveres de gatos, avaliando o tempo cirúrgico, curva de aprendizado e espaço de trabalho Foram utilizados 40 cadáveres de gatos, distribuídos em dois grupos (G1 – pneumoperitônio, G2 – elevação da parede abdominal) e realizada a técnica de esplenectomia laparoscópica com três portais. Na análise dos tempos cirúrgicos não foram encontradas diferenças significativas entre os dois grupos, mas a esplenectomia com elevação da parede abdominal mostrou menor espaço de trabalho. Em relação a curva de aprendizado, em ambos os grupos observou-se tempo cirúrgico total decrescente. O estudo demonstrou que a esplenectomia laparoscópica com três portais com elevação da parede abdominal é factível em cadáveres de gatos, apresentando tempo cirúrgico semelhante ao mesmo procedimento com o uso do pneumoperitônio. / In medicine, laparoscopic splenectomy was introduced in 1992. Since then, several studies have demonstrated that laparoscopic splenectomy leads to shorter hospitalization time, lower blood loss and faster recovery when compared to conventional splenectomy. Conventional laparoscopy is performed through the pneumoperitoneum acquired through CO2, this technique increases the intraabdominal pressure (IAP), which can cause cardiorespiratory complications. In humans, these changes have been reduced or eliminated with gasless or lift laparoscopy. The felines present a thin and malleable abdominal wall and can be favored by lift laparoscopy. The present study aimed to compare the surgical technique of conventional laparoscopic splenectomy with the same surgery using lift laparoscopy in cat cadavers, evaluating surgical time, learning curve and working space. A total of 40 cat cadavers were used, distributed in two groups (G1 - pneumoperitoneum, G2 – lift laparoscopy) and laparoscopic splenectomy with three portals was performed. In the analysis of surgical times, no significant differences were found between the two groups, but splenectomy with lift laparoscopy showed a smaller working space. In relation to the learning curve, in both groups, a total decreasing surgical time was observed. The study demonstrated that laparoscopic splenectomy with three portals with lift laparoscopy is feasible in cat cadavers, presenting similar surgical time with the same procedure using pneumoperitoneum.
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Využití felinoterapie v pobytovém zařízení pro seniory / The use of feline assisted therapy at residential home for seniorsŠPERLOVÁ, Zuzana January 2014 (has links)
This thesis, which is titled "Application of feline therapy in retirement homes", deals with the application of therapy with the help of a cat in clients of retirement homes and the impact of this therapy on the quality of their lives. The aim of this thesis is to find out how much the clients' quality of life changed over the period of one year of regular feline therapy. The thesis consists of two parts; a theoretical and a practical one. The theoretical part is divided into four sections. The first one is focused on zootherapy. It offers basic information on zootherapy such as its division, forms and application. A sole focus on feline therapy follows. The first half of the section on feline therapy concentrates on general information on feline therapy and its impact on people. The second half deals with its practical aspects. Here It explains what kind of cats are suitable for feline therapy and give basic information on breeds most often used for feline therapy. Then follows an introduction of programmes and organizations of feline therapy in the Czech Republic. Some foreign organizations working in feline therapy are presented at the end of this section. The second section deals with the issue of age and ageing. It explains changes occurring during the ageing process of the human organism at all levels of personality followed by the description of seniors' needs. It also studies seniors' quality of life and the possibilities of research into it. The final part is focused on housing service for seniors. First the history of housing services and their current division in the Czech Republic are described. As the research was carried out in a retirement home, this institution is described more thoroughly. Since quality is an important element of a well-functioning facility, inspection of quality of these facilities is mentioned in this section too. Housing services are obliged to create an individual plan for each client and since feline therapy is often used as part of such plans the final part examines this issue in greater detail too. The qualitative research was chosen as a tool for this thesis. The research focuses on the quality of life of senior housing clients. The main tools of the research were a semi-structured interview and observation of the clients. A semi-structured interview with the staff of Pisek Retirement Home who are often in contact with these clients was used as an additional research. Feline therapy does not only help the clients of the facility but it also affects the staff and other members of the team. That is why It asked a few questions about the effect of feline therapy on the employees of the facility. The results of the research showed that feline therapy improves mainly the clients' mental state. Positive changes in mood as well as a positive view of the clients' future were noticeable. Feline therapy also improves the clients' physical state although not as significantly as the mental state. It is used as an element of support during physiotherapy or to motivate clients' exercise. The results are noticeable mainly in fine motor skills of hands. The research between the employees shows that feline therapy does not significantly improve the atmosphere in the workplace and is beneficial to individuals rather than the whole team. On the other hand the therapy helps the staff in working with the clients who are in a better mood, communicate better and thus cooperate more willingly. This thesis can be used as a methodical aid for beginners among professionals interested in feline therapy. The results of this thesis can be used to improve therapeutic activities with cats and the overall progress of feline therapy in the Czech Republic.
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Clonagem e expressão de fragmentos de anticorpos (scFV) contra o vírus da leucemia felina (FeLV) por phage displayFigueiredo, Andreza Soriano [UNESP] 13 December 2010 (has links) (PDF)
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figueiredo_as_dr_botfmvz.pdf: 1094123 bytes, checksum: 04a46005f550990f7c07cdcb751f14b5 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O vírus da leucemia felina (FeLV) é um retrovírus que infecta principalmente gatos jovens. Em aglomerados de animais, a infecção pelo FeLV é a que mais contribui para a mortalidade. O emprego de técnicas moleculares de detecção viral permitiu avanços no que diz respeito à caracterização da patogenia e resposta à vacinação. Baseando-se nesses novos resultados, o diagnóstico da infecção deve ser realizado, primeiramente, com um teste de triagem de detecção da proteína de capsídeo p27, e, posteriormente, a confirmação com teste de detecção de DNA proviral. O diagnóstico e separação de animais positivos constituem o mecanismo primordial para conter a disseminação do FeLV. Diante disso, é de grande importância facilitar o acesso e baratear o diagnóstico. A construção de um teste de detecção da p27 baseia-se na produção de anticorpos monoclonais. A técnica de hibridomas é menos prática e demanda mais tempo para a obtenção de resultados satisfatórios quando comparada à técnica de Phage Display. Esta está em franco desenvolvimento e tem ganhado grande aplicabilidade na medicina veterinária. Empregamos o sistema de Phage Display desenvolvido por Krebber e colaboradores (1997). Primeiramente, foi construída uma biblioteca imune em camundongos, em seguida, foram amplificadas as regiões gênicas variáveis das cadeias leve (VL) e pesada (VH) e ligadas com um Linker de (Gli4Ser)4. Esses fragmentos geneticamente construídos derivados de anticorpos são denominados de single chain variable fragment ou scFv. Os scFvs foram fusionados à pIII e apresentados na superfície de fagos filamentos. Após três ciclos de seleção e enriquecimento contra a p27 recombinante produzida no laboratório, onze scFvs foram selecionados e caracterizados com relação à constituição nucleotídica e de aminoácidos. Dentre eles, o scFv 9 e scFv 70 foram escolhidos... / The feline leukemia virus (FeLV) is a retrovirus that infects primarily young cats. In animal clusters, FeLV infection is the largest contributor to mortality. The use of molecular techniques for viral detection has allowed advances with regard to the pathogenicity and response to vaccination. Based on these new findings, the diagnosis of infection should be performed first, with a screening test for detection of p27 capsid protein, and subsequently confirmed with testing for proviral DNA. The diagnosis and segregation of positive animals is the primary mechanism to contain the FeLV spread. Therefore, it is of great importance to facilitate access and lower the diagnosis. The construction of a test for p27 detection relies on monoclonal antibody development. The hybridoma technique is less practical and more time consuming to obtain satisfactory results when compared to Phage Display technology. The latter has been improved rapidly and has gained wide application in veterinary medicine. We employed the Phage Display system developed by Krebber et al. (1997). First, an immune library was built in mice and the variable region of the light and the heavy genes were amplified and connected by a linker of (Gly4Ser)4. This genetically engineered antibody fragments are called single chain variable fragments or scFv. The scFvs were fused to the pIII protein and displayed on the surface of filamentous phages. After three rounds of selection and enrichment against recombinant p27 (produced in the laboratory), eleven scFvs were selected and characterized with respect to nucleotide and aminoacid composition. Among them, scFv 9 and scFv 70 were chosen for subcloning and expression in prokaryotic system for production of heterologous proteins. The scFvs in soluble forms were evaluated for their binding capacity to p27. The scFvs will be employed to the development of an immunoassay for FeLV detect... (Complete abstract click electronic access below)
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Comparação de enxerto ósseo cortical autógeno e implante ósseo cortical alógeno liofilizado, congelado a -70ºC ou conservado no mel na substituição de segmento diafisário do fêmur de gatos domésticos.Ferreira, Márcio Poletto January 2008 (has links)
Os felinos domésticos há muito tempo são utilizados como animais de companhia, tornando freqüentes os atendimentos veterinários a esta espécie. As afecções ortopédicas em gatos ocupam papel de destaque na rotina do traumatologista veterinário, que pode deparar-se com fraturas cominutivas de ossos longos, neoplasias ósseas, não-uniões ou uniões-viciosas de fraturas. Uma das opções para o tratamento dessas afecções é a utilização de enxerto ou implante ósseo. O objetivo deste trabalho foi avaliar implantes ósseos corticais alógenos conservados em mel, congelados a -70°C ou liofilizados na substituição de segmento diafisário do fêmur de felinos domésticos. Foi confeccionada uma falha óssea de três centímetros na região diáfisária do fêmur de 24 felinos adultos. Em seis felinos (grupo controle), a falha foi preenchida com o próprio osso removido após a retirada do periósteo, endósteo e medula óssea, e em outros 18 animais, foi preenchida com implantes ósseos corticais alógenos conservados em mel (seis animais), congelado (seis animais) e liofilizado (seis animais). Os animais foram avaliados clínica, radiográfica e histologicamente até completarem 180 dias de pós-operatório. A porcentagem de incorporação foi de 91,6% no grupo controle, com tempo médio necessário para consolidação de 83,1 dias; no grupo mel foi de 75%, com tempo médio de 105 dias; no grupo congelado foi de 83,3% com tempo médio de 78 dias e no grupo liofilizado foi de 25%, com tempo médio de 120 dias. Foi encontrada diferença estatisticamente significativa entre as porcentagens de consolidação do grupo liofilizado em relação aos grupos congelado e controle. Não houve diferença estatística entre os grupos com relação ao tempo de consolidação. Foi identificada a bactéria Brevibacterium spp. em um dos implantes conservados no mel. Foi possível concluir que os implantes ósseos autógenos e os conservados no mel e a -70°C foram eficazes no preenchimento de defeito cortical em fêmur de felinos adultos, enquanto que os implantes liofilizados necessitam de maior avaliação da resistência e imunogenicidade para tornarem-se uma opção viável em felinos. / Cats with orthopedic conditions are a prominent part of the clinical work of veterinary traumatologists. Conditions such as comminuted fractures of the long bones, bone cancers and non-unions or unions that repeatedly fracture are often difficult to repair surgically and may require the use of bone grafts or implants for successful treatment. This study evaluated cortical bone allografts preserved in honey, frozen at -70°C or lyophilized for correcting 3 cm long bone defects created in the diaphysis of the right femur of adult domestic cats (n=24). In the control group (n=6), the defect was repaired using the autologous bone following removal of the periosteum, endosteum and bone marrow. In the remaining animals (n=6/group), the defect was repaired with cortical bone allografts preserved in honey, frozen or lyophilized. Success of implant incorporation and length of time for consolidation were assessed through clinical, radiographic and histological evaluations performed up to 180 days after surgery. In the control, frozen, honey and lyophylized groups, respectively, success of implant incorporation was 91.6%, 83.3%, 75%, and 25%, with corresponding mean length of time for consolidation of 83.1, 78, 105 and 120 days. Consolidation percentage in the lyophilized group was significantly lower than in the frozen and control groups. Length of time for consolidation was not different between the groups. Brevibacterium spp. was isolated from one of the implants preserved in honey. In conclusion, bone grafts preserved in honey or frozen at -70°C were effective for repairing cortical defects in the femurs of adult cats as compared to autologous bone. Lyophilized implants require more evaluation of resistance and immunogenicity before they can be considered a viable option for bone repair in cats.
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Infecção por hemoplasmas em felinos domésticos na região de Porto Alegre, RS, Brasil. / Haemoplasma infection in domestic cats from Porto Alegre, RS, BrazilSantos, Andrea Pires dos January 2008 (has links)
O termo hemoplasma refere-se ao grupo de micoplasmas que parasitam os eritrócitos do hospedeiro e podem causar anemia. O uso das técnicas baseadas na reação em cadeia da polimerase (PCR) tem sido utilizadas para a melhor compreensão da doença. No Brasil os hemoplasmas Mycoplasma. haemofelis e ‘Candidatus Mycoplasma. haemonminutum já foram identificados, porém dados de prevalência e fatores de risco não foram avaliados até o momento. A espécie ‘Candidatus Mycoplasma turicensis’ já foi descrita em diferentes países, porém a técnica de diagnóstico utilizando PCR em tempo real limita seu estudo no Brasil devido ao custo e necessidade de pessoal especializado. O presente trabalho desenvolveu uma técnica por PCR convencional para a detecção da espécie ‘Candidatus M. turicensis’ e descreve pela primeira vez sua presença infectando gatos domésticos no Brasil e a prevalência, fatores de risco e achados hematológicos da infecção por hemoplasmas foi avaliada. No total de 371 gatos, 79 (21.3%) foram positivos para pelo menos uma espécie de hemoplasma. A infecção por ‘Candidatus M. haemominutum’ foi detectada em 50 (13,48%) dos animais, ‘Candidatus M. turicensis’ e M. haemofelis foram detectados em 10/371 (2.69%) e 8/371 (2.16%) dos animais respectivamente. Coinfecção com M. haemofelis- ‘Candidatus-M. haemominutum’ foi detectada em 4/371 (1.08%), ‘Candidatus M. haemominutum’-‘Candidatus M. turicensis’ em 5/371 (1.35%) e infecção tripla em 2/371 (0.54%). Gatos machos, jovens e com acesso a rua são mais susceptíveis a infecção por hemoplasmas. Anemia é associada à infecção por M. haemofelis e ‘Candidatus M. haemominutum’. O presente trabalho também descreve a infecção por micoplasma hemotrófico similar ao M. haemofelis em um paciente humano HIV positivo e alerta para seu potencial zoonótico. Em conclusão, espécies de hemoplasmas são comuns e importantes agentes de infecções em gatos domésticos no sul do Brasil. Estudos futuros devem ser conduzidos para melhor entender seu impacto em animais de companhia e determinar o seu papel como agentes zoonóticos, particularmente em pessoas imunocomprometidas. / The term haemoplasma refers to the mycoplasmas that parasitize the red blood cells of the host and can cause anemia. Molecular approaches based on the polymerase chain reaction (PCR) have been used to better understand the disease. In Brazil, The species Mycoplasma haemofelis and ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’ were identified, whereas prevalence and risk factor were not evaluated to date. The specie ‘Candidatus Mycoplasma turicensis’ was described in many countries, however the use of real time-PCR for the diagnostic of the infection had limited its use in Brazil and other countries since it is expensive and requires specialized technicians. The current study developed a conventional PCR assay to the diagnosis of ‘Candidatus M. turicensis’ and report for the first time the infection in domestic cats in Brazil. We also evaluated the prevalence, risk factors and hematological findings for the hemoplasma infections. In a total of 371 cat samples, 79 (21.3%) were PCR-positive for at least one species of haemoplasma. ‘Candidatus M. haemominutum’ infection was found in 50 out of 371 (13.48%) positive cats, ‘Candidatus M. turicensis’ and M. haemofelis DNA were found in 10/371 (2.69%) and 8/371 (2.16%) of the cats respectively. Coinfection with M. haemofelis-‘Candidatus M. haemominutum’ was found in 4/371 (1.08%), ‘Candidatus M. haemominutum’-‘Candidatus M. turicensis’ in 5/371 (1.35%) and infection with all 3 haemoplasmas in 2/371 (0.54%). Male cats, younger age and outdoor access were risk factors for haemoplasma infection. Anemia was associated with M. haemofelis and ‘Candidatus M. haemominutum’ infection. The present study also reports a case of a Mycoplasma haemofelis-like organism infection in a HIV positive patient and warns the zoonotic potential of the haemoplasmas. In conclusion, the haemoplasmas are common infectious agent in domestic cats in southern Brazil. Further studies are needed to better understand their impact on companion animals, as well as their role as zoonotic agents, particularly in immunocompromised people.
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Leishmaniose felina e sua associação com imunodeficiência viral e toxoplasmose em gatos provenientes de área endêmica para leishmaniose visceralVicente Sobrinho, Ludmila Silva [UNESP] 20 August 2010 (has links) (PDF)
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sobrinho_lsv_me_araca.pdf: 921356 bytes, checksum: 29d3e58899a35e5de14b32e263c2fe77 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do presente estudo foi determinar em uma população de 302 gatos provenientes de área endêmica para leishmaniose visceral, a prevalência da infecção por Leishmania spp. e a presença de coinfecção pelo Toxoplasma gondii, vírus da imunodeficiência felina (FIV) e vírus da leucemia felina (FeLV). Foram evidenciadas formas amastigotas de Leishmania spp. em 9,93% (30/302) dos animais. A prevalência da leishmaniose observada por meio dos métodos de ELISA-proteína A, ELISA-IgG ou exame parasitológico direto foi de 21,85% (66/302), sendo 13,64% (9/66) positivos no exame parasitológico direto e sororeagentes nas técnicas de ELISA indireto. Doze animais (70,59%) foram sororeagentes para o FIV e a Leishmania spp., enquanto 17 (25,76%) apresentaram anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Leishmania spp. e cinco (71,43%) apresentavam infecção pelos três agentes. Não foi observada coinfecção entre Leishmania spp. e o FeLV. Houve associação estatisticamente significante entre a coinfecção por Leishmania spp. e pelo vírus da imunodeficiência felina, bem como entre a presença de Leishmania spp., do vírus da imunodeficiência felina e do Toxoplasma gondii. A sensibilidade e a especificidade dos métodos de ELISA-proteína A, ELISA-IgG e reação de imunofluorescência indireta para o diagnóstico de leishmaniose felina foram de 56,6% e 89,47%, 55,55% e 90,96% e 54,55% e 96,80%, respectivamente. As concordâncias entre a RIFI e as técnicas de ELISA-proteína A e ELISA-IgG foram fracas. No entanto, houve boa concordância entre as duas últimas técnicas. O presente estudo verificou que gatos residentes em área endêmica para leishmaniose visceral são predispostos à coinfecção por Leishmania spp. e vírus da imunodeficiência felina, e que parte deles desenvolvem sintomas inespecíficos e devem ser investigados em um diagnóstico diferencial / The aim of this study was to determine, in a population of 302 cats from an endemic area for visceral leishmaniasis, the prevalence of the infection by Leishmania spp. and the presence of co-infection by Toxoplasma gondii, feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV). Amastigote forms of Leishmania spp were evidenced in 9.93% (30/302) of the animals. Prevalence of leishmaniasis by ELISA-prot A, ELISA-IgG or direct parasitological examination was 21.85% (66/302), being 13.64% (9/66) positive in both direct parasitological examination and ELISA. Twelve animals (70.59%) were seroreagent for FIV and Leishmania spp., while 17 (25.76%) showed antibodies against Toxoplasma gondii and Leishmania spp. and five (71.43%) showed antibodies against those three agents. Co-infection was not observed between Leishmania spp. and FeLV. There was statistically significant correlation between the co-infection by Leishmania spp. and by the immunodeficiency virus, as well as among the present of Leishmania spp, feline immunodeficiency virus and Toxoplasma gondii. The susceptibility and the specificities of (the methods) ELISA-prot A, ELISA-IgG and reaction of indirect immunofluorescence for the diagnosis of feline leishmaniasis were 56.6% and 89.47%, 55.55% and 90.96% and 54.55% and 96.80%, respectively. The agreements between RIFI and ELISA-prot A and ELISA-IgG techniques were weak. However, there was a good agreement between the last two techniques. This study verified that cats from endemic areas for visceral leishmaniasis are predisposed to co-infection by Leishmania spp. and feline immunodeficiency virus, and that part of them developed nonspecific symptoms and should be investigated in a differential diagnosis
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Detecção de tripanosomatídeos em gatos domésticos de região endêmica para leishmaniose visceral por técnicas parasitológicas, sorológicas e moleculares / Detection of trypanosomatids in domestic cats of endemic region for visceral leishmaniasis by parasitological, serological and molecular techniquesAlves-Martin, Maria Fernanda [UNESP] 26 June 2017 (has links)
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Alves-Martin_MF_Tese de Doutorado 2017.pdf: 2835852 bytes, checksum: 41eddab14a2ccc5b0f3ac1898bbde518 (MD5) / Approved for entry into archive by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com) on 2017-07-13T18:56:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1
alves_martin_mf_dr_bot.pdf: 2835852 bytes, checksum: 41eddab14a2ccc5b0f3ac1898bbde518 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-13T18:56:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2017-06-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A família Trypanosomatidae inclui protozoários flagelados com dois gêneros de importância médica e veterinária: Leishmania, causador das leishmanioses e Trypanosoma, responsáveis pelas tripanossomíases de relevância epidemiológica, ambos com o envolvimento de hospedeiros mamíferos e vetores em seu ciclo de vida. O gato doméstico passou a ser considerado um hospedeiro reservatório de Leishmanias, após comprovação por xenodiagnóstico, da transmissibilidade de formas promastigotas de Leishmania infantum para o vetor flebotomíneo. Devido a inespecificidade dos achados clínicos na Leishmaniose Felina (LF), à semelhança dos aspectos clínicos dessa enfermidade com outras comuns em gatos, e à provável resistência felina a infecção, é possível que, dentro de uma área endêmica para leishmaniose ocorra um percentual elevado de indivíduos infectados, mas sem apresentarem sinais clínicos, e a falta de diagnóstico precoce da LF nessas áreas pode implicar com que o animal continue a representar risco potencial de transmissão de leishmanias aos vetores. Assim sendo, pretendeu-se investigar possíveis associações entre sorologia positiva para L. infantum, com o parasitismo tecidual em sangue, órgãos e células conjuntivais de gatos de região endêmica para LV. Foram incluídos neste estudo 36 gatos adultos, cedidos pelo Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Bauru - São Paulo, com 31 animais apresentando pelo menos um tipo de alteração clínica. A partir dos diagnósticos sorológicos, verificou-se a positividade em 26 animais, sendo que (66,7%) (24/36) foram reagentes à Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), (61,1%) (22/36) animais reagentes ao ELISA e 10 animais não foram reagentes (K=0,64). A observação de formas sugestivas de amastigotas se deu em 12 animais (33,3%), quatro animais (11,1%) e 12 animais (33,3%), a partir das técnicas parasitológicas de esfregaço sanguíneo, imprint de órgãos e histoquímica, respectivamente. O diagnóstico molecular foi realizado com a utilização dos primers ITS-1, ITS-2 e HSP70, cuja detecção molecular pela PCR de sangue se deu em 15 animais (41,6%), pela PCR de tecidos em oito animais (22,2%) e pela PCR de suabes em quatro animais (11,1%). A quantificação da carga parasitária pela qPCR de sangue se deu em nove animais (25%) e pela qPCR de tecidos em dois animais (5,5%). Após o sequenciamento genético, foram identificadas três amostras com Trypanosoma theileri, cinco com Leishmania donovani e uma amostra com Leishmania braziliensis. Dessa forma, verificamos que os gatos avaliados, sorologicamente negativos e positivos apresentaram sinais clínicos, presença do parasito em células e DNA parasitário em sangue e/ou tecidos, atuando como reservatórios de Leishmanias na região estudada. A detecção de tripanosomatídeos em amostras biológicas dos gatos do estudo sugere sua participação na manutenção do parasito no ambiente urbano. / Trypanosomatidae family includes flagellate protozoa of two genera of medical and veterinary importance: Leishmania, the causative agent of leishmaniasis and Trypanosoma, responsible for trypanosomiasis of epidemiological relevance, with the involvement of mammalian hosts and vectors in their life cycle. Nowadays, the domestic cat is considered a host reservoir of leishmanias, after proving by xenodiagnosis, the transmissibility of promastigotes of Leishmania infantum to the phlebotomine vector. Due to the lack of specificity of the clinical findings in Feline Leishmaniasis (FL), similar to the clinical aspects of this disease with other common ones in cats, and to the probable feline resistance to infection, it is possible that, within an endemic area for leishmaniasis, a high percentage of individuals with no clinical signs, and lack of early diagnosis of FL in these areas may imply that the animal continues to pose a potential risk of transmission of leishmaniasis to the vectors. Thus, it was intended to investigate possible associations between positive serology for L.infantum, with tissue parasitism in blood, organs and conjunctival cells of cats from endemic region to visceral leishmaniasis. Thirty-six adult cats, assigned by the Zoonoses Control Center (ZCC) of Bauru-SP, with 31 animals presenting at least one type of clinical alteration, were included in this study. From the serological diagnoses, the positivity was verified in 26 animals, and (66.7%) (24/36) were reactive to the Immunofluorescence Antibody Test (IFAT), (61.1%) (22/36) animals reactives to ELISA test and 10 animals were non-reactive (K = 0.64). The observation of suggestive forms of amastigotes occurred in 12 animals (33.3%), four animals (11.1%) and 12 animals (33.3%), by the parasitological techniques of blood smear, imprint of organs and histochemistry, respectively. Molecular diagnosis was performed using the ITS-1, ITS-2 and HSP70 primers, whose molecular detection by blood PCR was done in 15 animals (41.6%), by tissue PCR in eight animals (22.2 %) and by PCR of conjunctival swabs in four animals (11.1%). Quantification of the parasitic load by blood qPCR occurred in nine animals (25%) and in the qPCR of tissues in two animals (5.5%). After the genetic sequencing, three samples were identified as Trypanosoma theileri, five as Leishmania donovani and one as Leishmania braziliensis. In this way, we verified that the evaluated cats, serologically negative and positive, presented clinical signs, presence of the parasite in cells and parasitic DNA in blood and / or tissues, possibly acting as reservoirs of leishmaniasis in the studied region. The detection of trypanosomatids in biological samples of the studied cats suggests their participation in the maintenance of the parasite in the urban environment. / FAPESP: 2014/15807-0
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Quantificação e seqüênciamento do gene da transcriptase reversa em gatos naturalmente infectados com vírus da imunodeficiência felina tratado com AZTFigueiredo, Andreza Soriano [UNESP] 22 June 2007 (has links) (PDF)
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figueiredo_as_me_botfmvz.pdf: 290159 bytes, checksum: 38ae46f390705b8d387a7ef9c78d6040 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV) é um lentivírus que causa uma síndrome de imunodeficiência em gatos domésticos. O FIV tem sido particularmente utilizado em estudos de resistência viral aos análogos de nucleosídeos devido a Transcriptase Reversa (TR) apresentar propriedades físicas, catalíticas e sensibilidade às drogas semelhantes à TR do HIV. Os objetivos desse trabalho foram tratar com AZT gatos naturalmente infectados com o FIV, fazer o monitoramento da carga viral e DNA proviral por PCR em tempo real e monitoramento genético por seqüenciamento. Dos 12 animais infectados, 6 receberam o AZT na dose de 10mg/kg/dia e 6 receberam placebo. Durante 96 dias de tratamento, o plasma e sangue destes animais foram analisado com relação à carga viral e concentração relativa de DNA proviral utilizando-se a técnica de quantificação relativa por PCR em tempo real com SYBR Green, desenvolvida por nossa equipe. Além disso, foi realizado o sequenciamento genético da região que codifica a TR de 3 dos animais. Foi realizada com sucesso a padronização da PCR em tempo real para quantificação relativa do FIV. Não houve diferença estatisticamente significativa da carga viral ou do DNA proviral entre os grupos tratado e controle. O seqüenciamento genético revelou a presença de lisina na posição 41 do sítio ativo da TR. A presença deste aminoácido confere até 4 vezes menor sensibilidade ao AZT em mutantes do HIV. Por possuir alta estabilidade genética, supomos que os vírus dos demais animais não sequenciados possuem também a 41-lisina A presença da 41-lisina pode ser uma das possíveis explicações para a falha do tratamento com AZT. Outra hipótese é a de que a dose fornecida não foi adequada. / Feline Immunodeficiency Virus (FIV) is a lentivirus which causes a progressive disruption of the host's immune functions. FIV has been particularly used as a model for studies in retroviral resistance to nucleoside analogs because its similarities in physical properties, catalytic and sensitivity in comparison with HIV/RT. The aims of this work were to treat cats naturally infected with FIV, quantify viral load and proviral DNA by real time quantitative PCR with SYBR Green and analyze the viral nucleotide sequence. From 12 animals naturally infected, 6 received AZT at a dose of 10mg/kg/day and 6 received placebo. During 96 days of treatment, viral load and concentration of proviral DNA were measured by relative quantitative real time PCR developed by our staff. The nucleotide sequence of the RT encoding region was also achieved for 3 animals. The real time PCR relative quantification was successfully standardized for FIV. There was no significant statistical difference between treated and control groups. The nucleotide sequence revealed a lysine at position 41 on the enzyme active site. This lysine confers 4-fold decreased sensitivity to AZT in HIV RT-mutants. FIV subtype B has high genetic stability and we purposed that the other virus not sequenced have the same amino acid and hypothesized that this mutations can be one of the reasons determining the failure of the treatment. The other hypothesis is that the dose was not adequate.
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Patógenos bacterianos isolados de fezes de felinos domésticos, sem sinais entéricos, de ambiente urbano e ruralPaula, Carolina Lechinski de. January 2016 (has links)
Orientador: Márcio Garcia Ribeiro / Resumo: Os patógenos entéricos são um grupo complexo de micro-organismos que causam doenças em animais e humanos. Os gatos domésticos podem ser considerados carreadores de patógenos entéricos com potencial zoonótico devido ao hábito de auto-limpeza, estabelecer amplo território, pelo instinto de caça e eliminar subclinicamente patógenos. O presente estudo investigou a ocorrência de Escherichia coli, Salmonella sp., Clostridium spp. e Rhodococcus equi nas fezes de 200 gatos domésticos sem sinais entéricos, dos quais 100 pertenciam ao ambiente urbano e 100 à áreas rurais. Marcadores de virulência de E. coli, Clostridium spp. e R. equi também foram investigados. Do total de 200 amostras fecais avaliadas foram identificadas 175 (88%) linhagens de E. coli das quais 93 (93%) de gatos de ambiente urbano e 82 (82%) de gatos de área rural. Houve diferença significante (p=0,03) entre os grupos para frequência mais alta de isolamento de E. coli em gatos de ambiente urbano. Dentre os marcadores de virulência de E. coli foram identificados os genes eae (13%), escN (13%), stx1 (1%), stx2 (0,6%), aatA (0,6%) e ipaH (0,6%). Foram isoladas 86 (43%) linhagens de C. perfringens A, das quais em 21 (24%) foi detectado o gene cpb2, que codifica a toxina beta 2 e em uma (1%) linhagem foi identificado o gene cpe, responsável pela codificação da enterotoxina. Também foram identificados cinco (2%) isolados de C. difficile, dos quais um (20%) apresentou os genes tcdA e tcdB, codificadores das toxinas A e B, re... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Enteric pathogens are a complex group of microorganisms associated to diseases in animals and humans. Domestic cats may be considered carriers of enteric pathogens with zoonotic potential, due to habit of self-cleaning, to establish wide territory of life, by hunting behavior, and subclinical elimination of pathogens through feces. The aim of present study was investigate the occurrence of Escherichia coli, Salmonella sp., Clostridium spp., and Rhodococcus equi in 200 fecal samples of cats without enteric signs, of which 100 cats belonging to urban area and 100 to farm environment. Virulence markers from E. coli, Clostridium spp. and R. equi were also tested. Among 200 fecal samples were identified 175 (88%) E. coli strains, from these, 93 (93%) were from feces of cats breeding in urban areas, whereas 82 (82%) were from animals from farms. Statistical difference was observed (p=0.03) to higher identification of E. coli from cats breeding in urban area. Genes eae (13%), escN (13%), stx1 (1%), stx2 (0,6%), aatA (0,6%) e ipaH (0,6%) were indentified from virulent markers in E. coli strains. Eighty-six (43%) C. perfringens A were isolated. From these, cpb2 gene (which encodes beta 2 toxin) was detected in 21 (24%) isolates, and cpe gene (which encodes enterotoxin) was identified in another (1%) isolate. Five (2%) strains of C. difficile were also identified. From these, only one (20%) presented tcdA e tcdB genes, which encodes A and B toxins, respectively. Were isolated also unco... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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