Tese de doutoramento. Engenharia Metalúrgica e de Materiais. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2007

Submitted by Bruno Martinucci null (martinucci.bruno@ibb.unesp.br) on 2017-03-23T12:44:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação.pdf: 4223949 bytes, checksum: 231b0f2acac0e4ee8296d480b95afa5d (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-03-23T15:00:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 martinucci_b_me_bot.pdf: 4223949 bytes, checksum: 231b0f2acac0e4ee8296d480b95afa5d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T15:00:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 martinucci_b_me_bot.pdf: 4223949 bytes, checksum: 231b0f2acac0e4ee8296d480b95afa5d (MD5) Previous issue date: 2017-02-06 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O câncer de próstata (CaP) continua a ser uma das principais causas de morte entre os homens. Mesmo com suas altas taxas de mortalidade e incidência, pouco ainda se sabe sobre os aspectos moleculares desta doença. Entre os diversos fatores envolvidos na carcinogênese prostática, elementos da matriz extracelular (MEC) desempenham papel fundamental. Na próstata, a fibronectina (FN), proteína multimodular que tem sido relacionada ao desenvolvimento de múltiplos tipos de câncer, a migração e invasão celular, tem sua expressão restrita ao compartimento estromal. Contudo, no desenvolvimento tumoral, o padrão de expressão da FN é alterado, com secreção desregulada e falta de organização da matriz. Desta forma, para investigar o impacto da FN no CaP, as células neoplásicas LNCaP foram expostas somente à FN solúvel (25μg/mL) e em combinação com uma membrana basal. Nossos resultados demonstraram que quando a FN é o elemento predominante, as células tumorais desenvolvem um comportamento invasivo e resistência à apoptose. No entanto, na presença de uma membrana basal, a FN diminuiu o potencial maligno e metastático destas células, que neste novo ambiente exibiam perfil de expressão gênica mais semelhante às células RWPE-1, linhagem celular que ilustra as características do epitélio prostático normal. Consequentemente, sabendo que a relação entre as células tumorais e a MEC é regulada em múltiplos níveis, os microRNAs emergiram como importantes moléculas reguladoras. Portanto, também investigamos o impacto da FN na expressão de miRNAs em células LNCaP e PC-3. Nossos resultados mostraram que cinco miRNAs apresentavam expressão diferencial (miR-21, miR-29b, miR-125b, miR-221 e miR-222) após exposição à FN. Para uma análise mais profunda, analisamos a expressão regular de possíveis mRNAs alvos destes miRNAs em dados de RNAseq disponíveis, construímos redes de interação protéica baseadas no banco de dados STRING e realizamos as análises de enriquecimentos de via e de função gênica para avaliarmos de maneira mais abrangente os possíveis efeitos desta proteína. De maneira geral, nosso estudo mostrou que a FN pode estar envolvido na progressão do CaP através da modulação de vias de sinalização, como PI3K/AKT, resposta a drogas e hipóxia. Desta forma, acreditamos que nossos resultados fornecem a base para estudos futuros, abordando o papel da FN no crescimento tumoral, particularmente no contexto de evolução/progressão do câncer de um tumor primário sólido para um estado circulante transitório. / Prostate cancer (PCa) continues to be a leading cause of death among men. Even with its high mortality and incidence rates, little is known about the molecular aspects of this disease. Among the various factors involved in the carcinogenesis of the prostate, components of the extracellular matrix (ECM) play key roles. In the prostate, fibronectin (FN), a multimodular protein that has been linked to the development of multiple cancers and involved with cell migration and invasion, has its expression restricted to the stromal compartment. However, in tumor development, the pattern of expression of FN becomes altered, with deregulated secretion and a lack of matrix organization. Thus, in order to investigate the impact of FN on PCa, the neoplastic cells LNCaP were exposed only to soluble FN (25μg/mL) or in combination with a basement membrane. Our results demonstrated that when FN is the predominant element, tumor cells develop an invasive behavior and become resistant to apoptosis. However, in the presence of a basement membrane, FN decreases the malignant and metastatic potential of these cells, which in this new environment displayed a gene expression profile more similar to the RWPE- 1 cells, a cell line that illustrates the characteristics of the normal prostate epithelium. Consequently, knowing that the relationship between tumor cells and the ECM is regulated at multiple levels, microRNAs have emerged as important regulatory molecules. Therefore, we also investigated the impact of FN on the expression of miRNAs in LNCaP and PC-3 cells. Our results showed that five miRNAs exhibited differential expression (miR-21, miR-29b, miR- 125b, miR-221 and miR-222) after exposure to FN. For a more in-depth analysis, we analyzed the basal expression of mRNAs possibly targeted by these miRNAs in published RNAseq data, constructed protein interactions networks based on the STRING database, and performed pathway enrichment and gene function analyzes to evaluate more comprehensively the possible effects of this protein. Overall, our study showed that FN may be involved in the progression of PCa through the modulation of signaling pathways, such as PI3K/AKT, drug response and hypoxia. Thus, we believe that our results provide the basis for future studies addressing the role of FN in tumor development, particularly in the context of cancer progression from a solid primary tumor to a transient circulating state. / FAPESP: 2014/25702-0

Tese de mestrado. Engenharia Biomédica. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto, Instituto Nacional de Engenharia Biomédica. Universidade do Porto. 2009

Orientador: Deilson Elgui Oliveira / Resumo: Durante processos patológicos como o câncer, a atividade migratória de células neoplásicas aumenta, sendo um passo crítico para a disseminação dessas células a órgãos distantes. O processo migratório dessas células depende da formação de protrusões citoplasmáticas chamadas invadopódios, através da nucleação e polimerização de actina e degradação da matriz extracelular (MEC). A MEC é uma rede complexa de proteínas que fornece sustentação e moléculas sinalizadoras responsáveis pela homeostase dos tecidos. Dentre essas proteínas, a fibronectina (FN) é uma glicoproteína multiadesiva fundamental no comportamento celular normal e apresenta-se aumentada no tecido tumoral. Esse trabalho teve como objetivo avaliar a influência da FN, isolada ou em associação com componentes da membrana basal, no processo migratório de células tumorais prostáticas, com ênfase no mecanismo de formação dos invadopódios. Para isso, as linhagens celulares LNCaP e PC-3 foram divididas nos seguintes grupos experimentais: Controle, FN solúvel (10µg/mL), FN coating (10µg/mL), FN+Geltrex e Geltrex com exposição aos componentes por 4 dias. Nas células LNCaP, foi possível observar alterações morfológicas dos grupos expostos a FN (solúvel, coating e em associação com Geltrex) com diminuição na área celular em comparação ao grupo controle. A proliferação celular aumentou nos grupos com recobrimento da superfície (FN coating, FN+Geltrex e Geltrex). Também foi possível observar a diminuição na taxa de motilidade dess... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: During pathological processes like cancer, the migratory activity of neoplasic cells increases, being a critical step for the dissemination of these cells to distant organs. The migratory process depends on the formation of cytoplasmic protrusions called invadopodia, through actin polymerization and extracellular matrix degradation (ECM). ECM is a complex protein network that provides support and molecules responsible for tissue homeostasis. Among these proteins, fibronectin (FN) is an essential adhesive glycoprotein in normal conditions however, is unregulated in tumor tissue. The objective of this study was to evaluate the influence of FN, alone or in association with basement membrane (BM) components, within migratory process of prostatic tumor cells, with emphasis on the mechanism of invadopodia. For this, the LNCaP and PC-3 cell lines were divided into the following experimental groups: Control, FN soluble (10μg / mL), FN coating (10μg / mL), FN + Geltrex and Geltrex. Exposure time was established into 4 days. We could observe morphological alterations of the groups exposed to FN in LNCaP cells, with a decrease in the cellular area in comparison to the control group. Cell proliferation was increased in the groups with surface coating (FN coating, FN + Geltrex and Geltrex). It was also possible to observe a decrease in the motility rate of these cells in all the exposed groups. Key proteins expression important to invadopodia formation (Cortactin, Dynamin-2 and Actin-F) w... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-11-06T19:28:31Z No. of bitstreams: 1 dissertação total01.pdf: 714792 bytes, checksum: fdfd3d22be39f9a1cbc64666ef7e68ae (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-01-15T18:14:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dissertação total01.pdf: 714792 bytes, checksum: fdfd3d22be39f9a1cbc64666ef7e68ae (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-15T18:14:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertação total01.pdf: 714792 bytes, checksum: fdfd3d22be39f9a1cbc64666ef7e68ae (MD5) Previous issue date: 2006 / O diclofenaco sódico apresenta efeitos deletérios sobre a cicatrização e em vários estudos foi demonstrada a eficácia do Fator XIII da coagulação sanguínea sobre a cicatrização nas mais variadas situações no pós-operatório. Este estudo foi idealizado no intuito de avaliar se o Fator XIII da coagulação sanguínea poderia bloquear estes efeitos deletérios provocados pelo diclofenaco sódico. Este ensaio experimental randomizado duplo cego foi realizado com a utilização de 96 ratos da linhagem Winstar. Os animais foram distribuídos em quatro grupos de 24 animais de acordo com a utilização da drogas em estudo: DS (diclofenaco sódico), DSF (diclofenaco e Fator XIII da coagulação), SF (solução de NaCl a 0,9%) e F (Fator XIII da coagulação). Estes grupos foram realocados em três novos grupos cada de acordo com o dia de eutanásia (terceiro, sétimo e décimo - quarto) ficando cada grupo então com oito animais. Foi realizada incisão de 04 cm no dorso à esquerda com posterior sutura em pontos separados. A cicatrização foi avaliada quanto aos aspectos microscópicos do processo inflamatório cicatricial assim como a variação da resistência tênsil da ferida operatória no terceiro, sétimo e décimo - quarto dia de pós-operatório. Os resultados foram submetidos à análise estatística, tendo sido utilizado os testes Mann-Whitney Rank Sum Test e o t-test. Foi considerado estatisticamente significante p < 0,05. O Fator XIII da coagulação sanguínea diminuiu o edema no pós-operatório no 3º. dpo em relação ao grupo controle (p=0,015). O grupo do Fator XIII da coagulação sanguínea apresentou no 3º. dpo aumento da resistência tênsil em relação ao grupo do diclofenaco sódico (p=0,024). O grupo do diclofenaco sódico apresentou diferença estatisticamente significante com maior presença de leucócitos polimorfonucleares no sétimo dia de pós-operatório (p=0,04; p=0,01; p=0,04), maior presença de células mononucleares (p=0,021; p=0,021; p=0,021), maior neoformação vascular (p=0,038; p=<0,01; p=0,021) e maior quantidade de tecido de granulação (p=0,03; p=0,001; p=0,03) no décimo quarto dia de pós-operatório em relação aos demais grupos avaliados. O Fator XIII da coagulação sanguínea foi eficaz em bloquear parte dos efeitos deletérios na cicatrização provocados pelo diclofenaco sódico. ____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Diclofenac presents deleterious effects on the healing process and many studies showed effectiveness of Factor XIII in the healing of different kinds of post-operatory situations. The aim of this study was to detect if Factor XIII could block this pernicious effects in the healing process promoted by diclofenac. 96 rats was randomized in four groups: group DS (diclofenac), group DSF (diclofenac + Factor XIII), group SF (NaCl 0,9%) and group F (Factor XIII). Each group was divided again in another three groups of eight animals. Four groups of each initial group were killed in the third, seventh and fourteenth postoperatory day. The microscopic inflammatory healing process and the breaking strength of wound was examined in the third, seventh and fourteenth postoperatory day. The Mann-Whitney Rank Sum Test and the T-test was utilized in the statistical analysis. It was considered statistical significant p < 0,05. In third post-operatory day the Factor XIII decreased edema in relation to the control group (p=0,015) and increased the breaking strength in relation to the diclofenac group (p=0,024). In the seventh post-operatory day diclofenac increased the number of polymorfonuclear cells in relation to the other groups: DSF (p=0,04), SF (p=0,01) and F (p=0,04). In the fourteenth post-operatory day diclofenac increased the number of mononuclear cells in relation to the other groups: DSF (p=0,021), SF (p=0,021) and F (p=0,021). Also diclofenac increased vascular neofomation in relation to the other groups respectively (p=0,038; p=<0,01 and p<0,021) and granulation tissue (p=0,03; p=0,001 and p=0,03). The coagulation Factor XIII was efficient in prevent part of deleterious diclofenac effects in the normal healing process.

Submitted by Natalia de Souza Gonçalves (natalia.goncalves@ufpe.br) on 2015-05-25T14:04:38Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO MESTRADO NEUROPSIQUIATRIA _ RENATA VIRGÍNIA CAVA.pdf: 2499221 bytes, checksum: 893550e43aa42375b333efe85a2ed93c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-25T14:04:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO MESTRADO NEUROPSIQUIATRIA _ RENATA VIRGÍNIA CAVA.pdf: 2499221 bytes, checksum: 893550e43aa42375b333efe85a2ed93c (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / FACEPE / Os astrócitos desenvolvem atividades essenciais para a sobrevivência e diferenciação dos neurônios. Uma dessas funções é produzir e secretar glicoproteínas que vão compor a matriz extracelular (MEC) e as redes perineuronais (PNNs), as quais têm papel fundamental no crescimento e ramificação dendrítica neuronais durante o desenvolvimento do sistema nervoso. Dados recentes do nosso laboratório demonstram que parâmetros morfo-funcionais dos astrócitos do córtex cerebral de ratos neonatos são alterados por um modelo de desnutrição materna multifatorial induzida pela dieta básica regional (DBR). Neste contexto, o principal objetivo deste trabalho foi testar a hipótese de que este tipo de desnutrição é capaz de alterar a expressão de moléculas da MEC em culturas primárias de astrócitos corticais, bem como o crescimento neurítico e a distribuição das PNNs, respectivamente, em co-culturas e culturas mistas de neurônios e células da glia. Ratas adultas receberam a DBR desde 30 dias antes do acasalamento até o final da gestação, enquanto ratas do grupo controle foram alimentadas com dieta comercial balanceada. A prole de ambos os grupos foi utilizada até o terceiro dia pós-natal para obtenção das culturas astrocitárias e mistas. Para o co-cultivo dos neurônios sobre astrócitos, foram utilizados embriões no 16º dia de gestação. As culturas de astrócitos e co-culturas foram mantidas em meio DMEM-F12 com 10% de soro fetal bovino e a cultura mista foi mantida em uma mistura composta por 50% de DMEM-F12 + 10% de soro fetal bovino e 50% de meio Neurobasal + 1% de soro B27. A análise quantitativa da expressão de fibronectina, importante componente da MEC, foi obtida por western blotting. O crescimento e complexidade das ramificações neuríticas, bem como indicadores moleculares de proliferação de astrócitos foram avaliados por imunocitoquímica para β- tubulina 3 e Ki67, respectivamente. A distribuição morfológica das PNNs foi avaliada através de imunocitoquímica para as lectinas Wisteria floribunda e Vicia villosa, bem como para o proteoglicano sulfato de condroitina-4. Os resultados mostraram que a desnutrição não modificou os níveis proteicos da fibronectina nas culturas de astrócitos mantidos in vitro por 20, 30 e 40 dias. No entanto, reduziu a presença das PNNs e do proteoglicano sulfato de condroitina-4 nas culturas mistas. A complexidade da arborização dos neurônios do grupo desnutrido ou normonutrido foi modificada quando os mesmos foram co-cultivados sobre astrócitos de neonatos com diferente condição nutricional. Porém, respostas adaptativas dos neurônios de animais desnutridos foram observadas quando os mesmos foram cultivados sobre astrócitos de grupo similar. Esses dados sugerem que alterações na reatividade fenotípica de neurônios e astrócitos de neonatos, induzidas pela desnutrição materna, envolvem modificações na expressão de componentes da MEC, principalmente de proteoglicanos e PNNs.

Submitted by VANESSA ABREU SANCHES MARQUES null (van.marqs@gmail.com) on 2017-02-23T19:23:43Z No. of bitstreams: 1 Dissertação VANESSA MARQUES - final.pdf: 2551351 bytes, checksum: 08aba962e10de0b5101aa6db2928561f (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-02-24T19:12:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marques_vas_me_araca.pdf: 2551351 bytes, checksum: 08aba962e10de0b5101aa6db2928561f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-24T19:12:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marques_vas_me_araca.pdf: 2551351 bytes, checksum: 08aba962e10de0b5101aa6db2928561f (MD5) Previous issue date: 2017-02-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivo: Avaliar a resposta tecidual e a capacidade de biomineralização dos materiais endodônticos SK Seal Root Canal Sealer (SK Seal), Sealer 26® e AH plus® em tecido subcutâneo de ratos. Material e Métodos: Vinte e quatro ratos Wistar (n=6) receberam implantes subcutâneo contendo os cimentos e um tubo vazio como controle. Após 7, 15, 30 e 60 dias, os animais foram eutanasiados e os tubos de polietileno foram removidos junto com o tecido circunjacente. Em seguida, os espécimes foram processados para análise em Hematoxilina-Eosina, von Kossa, luz polarizada e imunoistoquímica para fibronectina (FN) e tenascina (TN). Os dados foram tabulados e analisados através do teste de Kruskal-Wallis e Dunn (p<0,05). Resultados: Todos os materiais testados induziram uma reação inflamatória moderada aos 7 e 15 dias (p> 0,05). Não foram observadas diferenças entre os grupos após 30 ou 60 dias (p> 0,05). A cápsula fibrosa foi considerada espessa aos 7 dias, tornando-se fina no final do experimento. Todos os grupos apresentaram marcadores positivos para FN e TN em todos os tempos de análise, com maior imunomarcação para os cimentos em comparação ao grupo controle (p <0,05). Os cimentos não apresentaram von Kossa positiva ou estruturas birrefringentes à luz polarizada. Conclusão: Todos os cimentos testados apresentaram biocompatibilidade, porém não estimularam a mineralização. / FAPESP: 2015/08251-8

Objetivos: El objeto de estudio es la membrana basal glomerular (M.B.G.) y la distribución de dos de las moléculas estructurales de las matrices extracelulares del corpúsculo renal, la fibronectina y la laminina. el estudio se ha realizado con cuatro especies aparentemente próximas de un mismo grupo zoológico (Rodentia) dado que experimentalmente, se incorporan nuevas especies como animales de laboratorio, comparando un animal estándar de laboratorio, con especies silvestres, con distintas estrategias tróficas.Material y métodos: Se han utilizado individuos adultos de Mus musculus (cepa isogénica BALB/c), y Mus spretus, Apodemus sylvaticus y Clethrionomys glareolus precedentes de capturas "in vivo" realizadas en el medio natural. El material histológico ha sido procesado mediante M.O. (tinción del PAS-Azul de Alcián/He. y dos técnicas de localización inmunohistoquímica, inmunoperoxidasa e inmunofluorescencia para anticuerpos anti-fibronectina y anti-laminina) y mediante M.E.T. (estándar y de inmunolocalización de anticuerpos anti-fibronectina y anti-laminina mediante oro coloidal).Resultados: La M.E.T. no muestra diferencias morfológicas entre los glomérulos de las diferentes especies utilizadas, excepto para la M.B.G. ya que en todas las especies silvestres utilizadas, el material que conforma toda la M.B.G. aparece con densidad uniforme. Con la inmunolocalización mediante oro coloidal los resultados para la distribución de fibronectina en M. musculus muestran marcaje positivo en la matriz mesangial, y negativo en la M.B.G. y en la membrana basal peritubular. Los resultados para M. spretus y C. glareolus son semejantes a los obtenidos para M. musculus; si bien con un valor de reacción menor al observado para M. musculus.Con la inmunolocalización mediante oro coloidal los resultados para la distribución de laminina, en M. musculus muestran marcaje positivo en la matriz mesangial, en la membrana basal tubular y en la M.B.G., en ésta última con tendencia a localizarse en las dos láminas raras. Los resultados para M. spretus y C. glareolus son semejantes a los obtenidos para M. musculus aunque con un valor de reacción menor al observado para el ratón de laboratorio.Las muestras procedentes de A. sylvaticus, no mostraron reactividad positiva frente a ninguno de los dos anticuerpos, anti-fibronectina y anti-laminina, utilizados.Conclusiones: La ultraestructura trilaminar de la M.B.G. presente en M. musculus no se observa en las otras especies utilizadas; en éstas existe densidad prácticamente uniforme en todo su espesor: Tampoco existe diferencia en el límite entre la M.B.G. pericapilar, la M.B.G. perimesangial y la matriz mesangial.En las especies M. musculus, M. spretus y C. glareolus la fibronectina se localiza única y exclusivamente en la matriz mesangial y en ningún caso en las M.B.G. mientras que la laminina se localiza tanto en las M.B.G. como en la cápsula de Bowman, la membrana basal tubular y la matriz mesangial. Mostrando en la M.B.G. pericapilar una ligera tendencia a localizarse en las láminas raras externa e interna.El marcaje menos intenso en M. spretus y C. glareolus y su ausencia en A. sylvaticus para la fibronectina y la laminina en la M.B.G. y la matriz mesangial puede indicar un carácter de divergencia filogenética.ENGLISH / DISTRIBUTION OF FIBRONECTIN AND LAMININ IN RENAL CORPUSCLE OF DIVERSE SPECIES OF RODENTSPropose: The aim of this study is the glomerular basement membrane (GBM) and the distribution of two of structural molecules of the extracellular matrices of the renal corpuscle: fibronectin and laminin. The study has been performed with four apparently closed species of a same zoological group (Rodentia) since experimentally, new species like laboratory animals are starting being breeded, comparing a standard laboratory animal with wild species with different trophic strategies.Material and methods: Adults exemplars of Mus musculus (isogenic strain BALB/c), Mus spretus, Apodemus sylvaticus and Clethrionomys glareolus proceeding of captures "in vivo" made in natural fields have been used. The histological material has been processed by means of OM (stain PAS-Alcian Blue/H) and two immunohistochemical techniques, immunoperoxidase and immunofluorescence for antibodies anti-fibronectin and anti-laminin and by TEM (standard and immunolocalization of antibodies anti-fibronectin and anti-laminin by colloidal gold).Results: TEM does not show morphological differences between the glomeruli of the different species used, except for the GBM , showing the material that conforms all the GBM a uniform density in all the wild species. With the immunolocalization by colloidal gold, the results for the distribution of fibronectin in M. musculus is positive in the mesangial matrix, and negative in the GBM and the peritubular basement membrane. The results for M. spretus and C. Glareolus are similar to obtained for M. musculus; although with a smaller reaction to that observed for M. musculus. With the immunolocalization by colloidal gold the results for the distribution of laminin, in M. musculus is positive in the mesangial matrix, the tubular basement membrane and the GBM; the latter with tendency to be located in two laminae rara. The results for M. spretus and C. glareolus are similar to obtained for M. musculus although with a smaller reaction to the observed for the laboratory mouse.The samples from A. sylvaticus, did not show positive reactivity again the anti-fibronectin and anti-laminin antibodies used.Conclusions: The trilaminar ultrastructure of the GBM presents in M. musculus is not observed in the other species used; in those a uniform density in all its thickness exists. Differences in the limit among the pericapillary GBM, the perimesangial GBM and the mesangial matrix does not exist either. In M. musculus, M. spretus and C. glareolus species fibronectin are exclusively located in the mesangial matrix and never in the GBM, whereas laminin is located mainly in the GBM and also in the Bowman's capsule, the tubular basement membrane and the mesangial matrix; showing in the pericapillary GBM a slight tendency to be located in external and internal laminae rara. The less intense labelling in M. spretus and C. glareolus and its absence in A. sylvaticus for fibronectin and laminin in the GBM and the mesangial matrix may suggest a philogenetic divergence.

Orientador: Flávia Karina Delella / Resumo: O câncer de próstata (CaP) continua a ser uma das principais causas de morte entre os homens. Mesmo com suas altas taxas de mortalidade e incidência, pouco ainda se sabe sobre os aspectos moleculares desta doença. Entre os diversos fatores envolvidos na carcinogênese prostática, elementos da matriz extracelular (MEC) desempenham papel fundamental. Na próstata, a fibronectina (FN), proteína multimodular que tem sido relacionada ao desenvolvimento de múltiplos tipos de câncer, a migração e invasão celular, tem sua expressão restrita ao compartimento estromal. Contudo, no desenvolvimento tumoral, o padrão de expressão da FN é alterado, com secreção desregulada e falta de organização da matriz. Desta forma, para investigar o impacto da FN no CaP, as células neoplásicas LNCaP foram expostas somente à FN solúvel (25μg/mL) e em combinação com uma membrana basal. Nossos resultados demonstraram que quando a FN é o elemento predominante, as células tumorais desenvolvem um comportamento invasivo e resistência à apoptose. No entanto, na presença de uma membrana basal, a FN diminuiu o potencial maligno e metastático destas células, que neste novo ambiente exibiam perfil de expressão gênica mais semelhante às células RWPE-1, linhagem celular que ilustra as características do epitélio prostático normal. Consequentemente, sabendo que a relação entre as células tumorais e a MEC é regulada em múltiplos níveis, os microRNAs emergiram como importantes moléculas reguladoras. Portanto, também inve... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Prostate cancer (PCa) continues to be a leading cause of death among men. Even with its high mortality and incidence rates, little is known about the molecular aspects of this disease. Among the various factors involved in the carcinogenesis of the prostate, components of the extracellular matrix (ECM) play key roles. In the prostate, fibronectin (FN), a multimodular protein that has been linked to the development of multiple cancers and involved with cell migration and invasion, has its expression restricted to the stromal compartment. However, in tumor development, the pattern of expression of FN becomes altered, with deregulated secretion and a lack of matrix organization. Thus, in order to investigate the impact of FN on PCa, the neoplastic cells LNCaP were exposed only to soluble FN (25μg/mL) or in combination with a basement membrane. Our results demonstrated that when FN is the predominant element, tumor cells develop an invasive behavior and become resistant to apoptosis. However, in the presence of a basement membrane, FN decreases the malignant and metastatic potential of these cells, which in this new environment displayed a gene expression profile more similar to the RWPE- 1 cells, a cell line that illustrates the characteristics of the normal prostate epithelium. Consequently, knowing that the relationship between tumor cells and the ECM is regulated at multiple levels, microRNAs have emerged as important regulatory molecules. Therefore, we also investigated the ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A desnutrição acomete 925 milhões de pessoas em todo o mundo, independentemente da idade e classe social, os mais acometidos são indivíduos hospitalizados, crianças e idosos. A desnutrição causa alterações fisiológicas em diversos tecidos. O tecido hematopoiético é afetado na desnutrição protéica, por ser um tecido de elevada e constante necessidade de proteínas, levando a alterações hematológicas como anemia e leucopenia. Estudos do nosso laboratório têm demonstrado in vivo, alterações do microambiente hematopoiético, em camundongos submetidos à desnutrição protéica, bem como hipoplasia medular, mudanças quantitativas da matriz extracelular (MEC) como o aumento do deposito de fibronectina na região subendosteal (local da fixação das células tronco/ progenitoras hematopoiéticas), alterações do ciclo celular das células tronco/ progenitoras hematopoiéticas e alteração na expressão de VLA5; principal integrina na interação das células a fibronectina. Sendo assim propõe-se neste projeto avaliar possíveis isoformas da molécula de fibronectina, para melhor compreender o seu papel biológico no ciclo celular as células tronco/ progenitoras hematopoiéticas em um modelo de desnutrição protéica. Para isso foram utilizados camundongos C57BLI/6J machos, adultos, mantidos em gaioleiros metabólicos, separados em dois grupos. O grupo controle recebeu uma ração normoproteíca com 12% de proteína e o grupo desnutrido, uma ração hipoprotéica com 2% de proteína, num período de 5 semanas. Após este período os animais foram sacrificados para avaliação hematológica, celularidade da medula óssea, quantificação e pesquisa de isoformas da fibronectina, análise do perfil protéico no estroma medular em culturas de longa duração bem como a análise do estabelecimento do estroma medular em culturas de longa duração. Os animais desnutridos apresentaram uma menor celularidade e uma diminuição significativa de células jovens na medula óssea. O estroma medular estabelecido em culturas de longa duração dos animais do grupo desnutrido apresentaram uma menor confluência em relação ao grupo controle. Também foi observado nas culturas de longa duração um aumento significativo da fibronectina no 28° dia de cultura, mas com uma diminuição da fibronectina no 35° dia, porém com uma menor quantidade de região EDA nos dois períodos analisados (sítio de ligação das integrinas a fibronectina) quando comparados aos animais do grupo controle. A pesquisa de isoformas de fibronectina no estroma medular, por meio de RT-PCR, revelou que tanto os animais do grupo controle quanto os animais do grupo desnutrido apresentaram diferentes isoformas de fibronectina, porém não foi possível fazer uma análise quantitativa das regiões de splicing alternativo. O perfil protéico das culturas de longa duração analisado por meio de eletroforese bidimensional demonstrou que os animais do grupo desnutrido possuem um perfil protéico diferente dos animais do grupo controle, também foi observado uma diferença do perfil protéico entre os 28° e 35° dias de cultura. Portanto a alteração quantitativa da molécula de fibronectina e da região EDA, bem como a presença de diferentes isoformas de fibronectina, juntamente com as alterações do perfil protéico podem ser devido a um aumento e ou degradação das proteínas de matriz extracelular. E estas alterações podem ser responsáveis pela hipoplasia medular e alteração do ciclo celular das células tronco/ progenitoras hematopoiéticas e estromais, talvez pela menor interação com as integrinas, sendo esta interação fundamental para a modulação de diversas funções celulares tais como proliferação e diferenciação e para a regulação do remodelamento da matriz extracelular. Mas ainda se faz necessário a quantificação das regiões de splicing alternativo, seqüênciamento das proteínas da matriz extracelular e a identificação das possíveis metalaproteinases presentes no estroma medular para melhor elucidar as funções da fibronectina e outras proteínas da matriz extracelular na manutenção da hemopoese. / Malnutrition affects 925 million people worldwide, regardless of age and social class, the most affected individuals are hospitalized, children and elderly.Malnutrition causes physiological changes in various tissues.The hematopoietic tissue is affected in protein malnutrition, because it is a tissue of high and constant need of proteins, leading to hematological abnormalities such as anemia and leucopenia. Studies from our laboratory have demonstrated in vivo changes in the hematopoietic microenvironment in mice submitted to protein malnutrition, and bone marrow hypoplasia, quantitative changes of the extracellular matrix (ECM) as the increase in deposit fibronectin in the region subendosteal (site of attachment of the cells stem / progenitor), changes in cell cycle of stem cells / progenitor and changes in the expression of VLA5; main integrin interaction of cells to fibronectin. Therefore this project proposes to evaluate possible isoforms of fibronectin molecule, to better understand its biological role in cell cycle stem cells / progenitor in a model of protein malnutrition. Mice were used for this C57BLI/6J male adults were kept in metabolic gaioleiros, separated into two groups. The control group received a ration normoproteíca with 12% protein and the malnourished group, a low protein diet with 2% protein over a period of 5 weeks. After this period the animals were sacrificed for hematological evaluation, bone marrow cellularity, and quantification of fibronectin isoforms research, analysis of protein profiles in marrow stroma in long-term cultures and analysis of the establishment of bone marrow stroma in long-term cultures. The malnourished animals showed a lower cellularity and a significant decrease of young cells in the bone marrow.The bone marrow stromal cultures established in long-term animal malnourished group had a lower convergence in the control group. It was also observed in cultures long term a significant increase in fibronectin on the 28th day of culture, but with a decrease in fibronectin 35 th day, but with a smaller amount of EDA region in both periods analyzed (binding site of integrins to fibronectin) compared to the control group.The survey of isoforms of fibronectin in bone marrow stroma, by RT-PCR revealed that both control animals and animals in the malnourished group presented different isoforms of fibronectin, but it was not possible to make a quantitative analysis of the regions of alternative splicing.The protein profile of long-term cultures analyzed using two-dimensional electrophoresis showed that animals of the malnourished group have a protein profile different from the control group was also observed a difference in protein profile between 28° and 35° day of culture. Therefore, the quantitative change of the molecule fibronectin and the region of EDA, as well as the presence of different isoforms of fibronectin, together with changes in protein profile may be due to an increase, or degradation of extracellular matrix proteins. And these changes may be responsible for bone marrow hypoplasia and alteration of the cell cycle of stem cells / progenitor and stromal cells; perhaps because of less interaction with integrins, this interaction is essential for the modulation of various cellular functions such as proliferation and differentiation and to regulation of extracellular matrix remodeling. But it is still necessary to quantify the areas of alternative splicing, sequencing of the extracellular matrix proteins and identification of possible metalaproteinases present in bone marrow stroma to better elucidate the roles of fibronectin and other extracellular matrix proteins in maintaining hemopoese.